KR20240050562A - 발모 촉진 및 탈모 억제 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도 - Google Patents

발모 촉진 및 탈모 억제 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 발모 촉진 또는 탈모증의 방지 또는 억제 활성을 갖는 펩타이드에 관한 것이다. 본 발명의 펩타이드는 모낭 모유두세포(HFDPC)의 증식을 촉진하고, 인간 모유두 세포에서 세포증식 관련 신호전달 단백질의 활성화, 베타-카테닌의 활성화, 베타-카테닌 하위인자의 발현수준의 향상, 탈모 단백질 DKK-1의 발현수준을 하향조절하며, 외모근초세포(HORSC)에서 케라틴 단백질들의 발현을 증가시키는 활성을 가진다.

Description

발모 촉진 및 탈모 억제 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도{Peptide Having Activity of Promoting Hair Growth and Inhibiting Hair Loss and Uses Thereof}
본 발명은 발모 촉진 및 탈모 억제 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도에 관한 것이다.
탈모증이란 모발 성장 주기에서 정상보다 휴지기가 길어지거나 휴지기에 있는 모낭의 수가 증가하여 모발 탈락이 과도하게 일어나는 현상으로 스트레스, 영양부족, 국소 혈류 장애, 호르몬 및 유전적 요인 등에 의해 모발이 과도하게 탈락되어 복구되지 않는 것을 지칭한다.
탈모 치료제로는 남성호르몬인 테스토스테론을 안드로겐 성호르몬인 디하이드로테스토스테론(DHT)으로 변환시키는 작용을 하는 5α-환원효소(reductase) 억제제, 예를 들어, 피나스테리드(finasteride) 또는 두타스테리드(dutasteride)와 같은 약물이 개발되어 시판이 허가되어 있으며, 모낭을 자극하고 혈류를 증가시켜 발모를 촉진하는 작용을 갖는 약물인 미녹시딜(minoxidil)도 허가되어 사용되고 있다.
그러나, 5α-환원효소 억제제의 경우 성기능 장애, 우울증, 불안, 가슴비대와 같은 부작용이 비교적 빈번하게 발생된다고 보고되어 있고, 미녹시딜의 경우도 심전도 이상, 빈맥, 심내막염과 같은 심혈관계 부작용이 발생되는 것으로 보고되어 있으며, 또한 미녹시딜은 약물 복용을 중단하면 다시 탈모가 시작되는 것으로 알려져 있다.
펩타이드는 생체친화성이 높으며, 약물 또는 화장료에서 단일의 활성성분으로 사용되면 다양한 성분이 함유된 추출물 등에 비해 부작용이 적고, 국소적으로 탈모 억제 작용을 한 이후 체내의 분해 단백질에 의해 쉽게 분해되어 제거될 수 있으므로 기존 치료제와는 달리 부작용에 대한 우려가 적다.
PCT 국제특허 WO2005-082395에는 발모 주기에서 휴지 단계로부터 성장 단계로의 진행을 촉진시켜 모발 성장을 촉진시키는 효과를 가진 펩타이드가 개시되어 있고, 대한민국 등록특허 제10-2387764호에는 모낭세포의 증식을 촉진시키는 작용을 갖는 이합체 형태의 펩타이드 유도체가 개시되어 있다.
WO 2005-082395 대한민국 등록특허 제10-2387764호
본 발명자들은 발모 촉진에 효과적이면서 부작용이 적은 발모 촉진 및 탈모 억제 활성을 갖는 보다 개선된 활성의 펩타이드를 개발하기 위해 연구 노력하였다. 그 결과, 본 발명자들이 개발한 신규 펩타이드가 인간 모유두 세포(HHFDPC)의 증식을 촉진하고, 인간 모유두 세포에서 세포증식 관련 신호전달 단백질의 활성화, 베타-카테닌의 활성화, 베타-카테닌 하위인자 유전자들의 발현수준의 향상, 탈모 단백질 DKK-1의 발현수준을 하향조절하며, 외모근초세포(HORSC)에서 케라틴 단백질의 발현을 증가시키는 활성을 가짐을 실험적으로 증명하여 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 발모 촉진 및 탈모 억제 활성을 갖는 신규 펩타이드를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상술한 활성을 갖는 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 발모 촉진 또는 탈모증의 억제, 예방 또는 개선용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 탈모증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 발모 촉진 또는 탈모증의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
상기의 목적을 달성하기 위하여,
본 발명의 일 측면은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 제공한다.
본 발명의 다른 측면은 상기 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 발모 촉진 또는 탈모증의 억제, 예방 또는 개선용 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 측면은 상기 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 탈모증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 상기 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 발모촉진 또는 탈모증의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
이하에서 본 발명을 상세하게 설명한다.
1. 펩타이드 및 이의 활성
본 발명의 일 측면에 따르면, 서열번호 1에 개시된 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 제공한다.
본 명세서 용어 "펩타이드"는 펩타이드 결합에 의해 아미노산 잔기들이 서로 결합되어 형성된 선형의 분자를 의미한다.
본 발명의 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드는 변형 없이 사용될 수 있으나, 상기 펩타이드가 가지는 본래의 활성, 예컨대 발모 촉진 또는 탈모증의 억제 활성에 영향을 미치지 않는 범위 내에서, 아미노산 잔기의 결실, 삽입, 치환, 또는 이들의 조합에 의해서 상이한 서열을 가지는 아미노산의 변이체 또는 단편을 사용할 수 있다.
본 발명의 펩타이드는 그 활성을 변화시키지 않는 범위내에서 인산화(phosphorylation), 황화(sulfation), 아크릴화(acrylation), 당화(glycosylation), 메틸화(methylation), 파네실화(farnesylation) 등으로 변형될 수 있다.
본 발명의 펩타이드는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드 및 이의 변이체 또는 이의 활성 단편을 포함한다. 상기 실질적으로 동일한 아미노산 서열이란 상기 서열번호 1의 아미노산 서열과 각각 75% 이상, 예컨대 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열을 의미한다. 또한, 상기 펩타이드에는 표적화 서열, 태그(tag), 표지된 잔기, 반감기 또는 펩타이드 안정성을 증가시키기 위한 특정 목적으로 제조된 아미노산 서열을 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 펩타이드는 아미노산 서열의 일부 부위를 선정하고 그 활성을 증가시키기 위해 N-말단 및/또는 C-말단 변형이 유도된 것일 수 있다. 이러한 N-말단 및/또는 C-말단 변형을 통해 본 발명의 펩타이드의 안정성을 현저하게 향상시킬 수 있으며, 예를 들어, 펩타이드의 생체 내 투여 시 반감기를 증가시킬 수 있다. 상기 용어 "안정성"은 생체 내 단백질 절단 효소의 공격으로부터 본 발명의 펩타이드를 보호하는 인 비보에서의 안정성 뿐만 아니라, 저장안정성(예컨대, 상온 저장 안정성)도 포함하는 의미이다.
상기 N-말단 변형은 펩타이드의 N-말단에 아세틸기(acetyl group), 플루오레닐메톡시카르보닐기(fluoreonylmethoxycarbonyl group), 포르밀기(formyl group), 팔미토일기(palmitoyl group), 미리스틸기(myristyl group), 스테아릴기(stearyl group) 및 폴리에틸렌글리콜(polyethylene glycol; PEG)로 이루어진 군으로부터 선택된 보호기가 결합한 것일 수 있다. 상기 C-말단 변형은 펩타이드의 C-말단에 히드록시기(hydroxyl group, -OH), 아미노기(amino group, -NH2), 아자이드(azide, -NHNH2) 등이 결합한 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 폡타이드는 본 발명이 속하는 기술분야에서 널리 알려진 다양한 방법으로 제조할 수 있다. 예컨대, 본 발명의 펩타이드는 당업계에 공지된 화학적 합성 방법, 특히 고상 합성 기술(solid-phasesynthesis techniques; Merrifield, J. Amer. Chem. Soc. 85:2149-54(1963); Stewart, et al., Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd. ed., Pierce Chem. Co.: Rockford, 111(1984)) 또는 액상 합성 기술(US 등록특허 제5,516,891호)에 따라 제조될 수 있다.
본 발명의 펩타이드는 발모 촉진 또는 탈모증의 방지 또는 억제 활성을 갖는다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩타이드는 모낭 모유두세포(hair follicle dermal papilla cell, HFDPC)의 증식을 촉진한다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩타이드는 모낭 모유두세포(HFDPC)에서 신호전달에 관여하는 단백질 Akt 또는 ERK를 활성화시킨다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩타이드는 모낭 모유두세포(HFDPC)에서 베타-카테닌을 활성화시켜 핵으로의 이동을 촉진한다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩타이드는 모낭 모유두세포(HFDPC)에서 베타-카테닌의 하위인자인 LEF-1 및 c-Myc으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 인자의 유전자 발현을 상향조절한다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩타이드는 모낭 모유두세포(HFDPC)에서 탈모 단백질인 DKK-1(Dickkopf-1)의 유전자 발현 수준을 하향 조절한다. 모낭에서 디하이드로테스토스테론(DHT)은 DKK-1(Dickkopf-1)의 발현을 촉진시키고, DHT에 의해 유도되어 생성된 DKK-1은 모낭의 케라티노사이트(keratinocyte)의 증식을 억제하고 이의 세포사멸(apoptosis)를 유도하여 탈모를 촉진하는 것으로 알려져 있다(J of Invest Dermatolo. 2008, Feb., 128(2), pp. 262-269.). 상기 탈모 단백질인 DKK-1은 디하이드로테스토스테론(DHT)에 의해 발현수준이 증가되는 것이고, 본 발명의 펩타이드는 DHT에 의해 증가되는 DKK-1의 발현수준을 하향조절한다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩타이드는 인간외모근초세포(human hair outer root sheath cell, HHORSC)에서 Ha3-II, Keratin 5, Keratin 14, 및 Keratin 19으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 단백질의 유전자의 발현을 증가시킨다.
상술한 본 발명의 펩타이드는 상기와 같은 활성을 가짐으로써 발모 촉진 또는 탈모증의 억제, 예방, 또는 개선하는 효능을 발휘할 수 있다.
2. 발모의 촉진 또는 탈모증의 예방, 치료 또는 개선용 조성물
본 발명의 다른 측면에서, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 발모의 촉진 또는 탈모증의 예방, 치료 또는 개선용 조성물을 제공한다.
본 발명의 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드는 상술한 바와 같이 발모의 촉진 또는 탈모증의 억제 또는 방지 활성을 갖는다.
본 발명의 다른 측면에서, 본 발명의 조성물은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 탈모증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 명세서에서 용어 "탈모" 또는 "탈모증"은 비정상적인 모발의 유실로 인해 정상적으로 모발이 존재해야할 부위에 모발이 존재하지 않거나 정상적인 상태 보다 모발의 수가 감소하는 상태(condition)를 의미한다. 일 구현예에서 본 발명에서의 탈모 또는 탈모의 증상은 두피에서의 탈모를 포함한다.
본 발명에서 탈모는 유전성인 안드로겐성 탈모(남성형 탈모), 여성형 탈모, 휴지기 탈모(telogen effluvium), 성장기 탈모(anagen effluvium), 원형 탈모증(alopecia areata), 곰팡이 감염에 의한 두부 백선, 갑상선 기능 저하증 또는 갑상선 기능 항진에 의한 탈모, 염증(지루성 두피염)에 의한 탈모, 영양실조에 의한 탈모, 당뇨에 의한 탈모, 루푸스에 의한 탈모, 모발 생성 장애 질환에 의한 탈모, 약물(항응고제, 항우울제, 경구 피임약의 중단, 화학요법)에 의한 탈모, 독발성 모낭염, 모공성 편평 태선, 화상 또는 외상에 의한 탈모, 자외선에 의한 탈모 또는 공기 중의 미세먼지 접촉에 의한 탈모을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물은 모낭 모유두세포(hair follicle dermal papilla cell, HFDPC)의 증식을 촉진한다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물은 모낭 모유두세포(HFDPC)에서 신호전달에 관여하는 단백질 Akt 또는 ERK를 활성화시킨다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물은 모낭 모유두세포(HFDPC)에서 베타-카테닌을 활성화시켜 핵으로의 이동을 촉진한다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물은 모낭 모유두세포(HFDPC)에서 베타-카테닌의 하위인자인 LEF-1 및 c-Myc으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 인자의 유전자 발현을 상향조절한다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물은 모낭 모유두세포(HFDPC)에서 탈모 단백질인 DKK-1(Dickkopf-1)의 발현 수준을 하향 조절한다. 상기 탈모 단백질인 DKK-1은 디하이드로테스토스테론(DHT)에 의해 발현수준이 증가되는 것이고, 본 발명의 펩타이드는 DHT에 의해 증가되는 DKK-1의 발현수준을 하향조절한다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물은 인간외모근초세포(human hair outer root sheath cell, HHORSC)에서 Ha3-II, Keratin 5, Keratin 14, 및 Keratin 19으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 단백질의 유전자의 발현을 증가시킨다.
본 발명의 약학적 조성물은 본 발명의 펩타이드의 치료적 유효량을 포함할 수 있다.
상기 용어 "치료적 유효량(therapeutically effective amount)"은 본 발명의 약학적 조성물의 유효성분인 펩타이드가 그 활성 또는 효능을 달성하는 데 충분한 양을 의미하고, 예컨대, 탈모증의 치료 또는 예방의 효능을 달성하는 데 충분한 양을 의미한다.
본 명세서에서 용어 "예방"은 질환 또는 장애에 걸릴 위험을 감소시키는 것을 의미하며, 질환 또는 이의 하나 이상의 임상적 증후가 진행되지 않도록 하여 질환의 발병을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 명세서에서 용어 "치료"는 질환 또는 장애를 경감시키는 것을 의미하며, 질환 또는 이의 하나 이상의 임상적 증후의 진행을 저지 또는 감소시켜 질환의 증세를 호전시키거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 포함한다.
본 발명에서 탈모의 예방 또는 치료는 탈모의 원인을 제거하거나 탈모의 진행을 억제하는 것일 수 있고, 모발의 탈락을 억제하거나 모발의 형성을 촉진하여 발모를 촉진하는 것일 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다.
상기 약학적으로 허용되는 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
적합한 약학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, (19th ed., 1995, Williams & Wilkins)에 상세히 기재되어 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 탈모증을 치료하기 위한 적합한 모든 경로로 투여될 수 있으며, 예를 들어, 경구 또는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구 투여인 경우에는 정맥내 주입, 피하 주입, 근육내 주입, 복강내 주입, 국소 투여, 경피 투여 등으로 투여할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물이 탈모증의 예방 또는 치료 활성을 갖는 것이므로, 두피에 적용하는 것과 같은 국소 투여로 적용될 수 있다.
상기 약학적 조성물의 투여량은 1일당 0.0001 μg 내지 100 mg, 0.001 μg 내지 100 mg, 0.01 μg 내지 100 mg, 0.1 μg 내지 100 mg, 또는 1.0 μg 내지 1000 mg 일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이 때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 피부외용제일 수 있다. 상기 피부외용제는 피부의 외부에 도포되어 이용될 수 있는 형태의 제제로, 본 발명의 약학적 조성물이 피부외용제로 이용될 경우 이는 두피, 구체적으로 탈모가 발생한 부위의 두피나 발모를 촉진하고자 하는 부위의 두피에 적용되는 것일 수 있다. 상기 피부외용제는 크림, 겔, 연고, 피부 유화제, 피부 현탁액, 경피전달성 패치, 약물 함유 붕대, 로션, 또는 그 조합일 수 있고. 상기 피부외용제는 통상 화장품이나 의약품 등의 피부외용제에 사용되는 성분, 예를 들어 수성성분, 유성성분, 분말성분, 알코올류, 보습제, 중점제, 자외선흡수제, 미백제, 방부제, 산화방지제, 계면활성제, 향료, 색제, 각종 피부 영양제, 또는 이들의 조합과 필요에 따라서 적절하게 배합될 수 있다. 상기 피부외용제는, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제, 카페인, 탄닌, 벨라파밀, 감초추출물, 글라블리딘, 칼린의 과실의 열수추출물, 각종 생약, 아세트산토코페롤, 글리틸리틴산, 트라넥삼산 및 그 유도체 또는 그 염등의 약제, 비타민 C, 아스코르브산 인산 마그네슘, 아스코르브산글루코시드, 알부틴, 코지산, 글루코스, 프룩토스, 트레할로스 등의 당류 등도 적절하게 배합할 수 있다.
본 발명의 다른 측면에서, 본 발명의 조성물은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 발모 촉진 또는 탈모증의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 명세서에서 용어 "개선"은 질환 또는 장애의 증세가 호전되도록 하거나 이롭게 되도록 하는 모든 행위를 의미한다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 모낭 모유두세포(hair follicle dermal papilla cell, HFDPC)의 증식을 촉진한다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 모낭 모유두세포(HFDPC)에서 신호전달에 관여하는 단백질 Akt 또는 ERK를 활성화시킨다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 모낭 모유두세포(HFDPC)에서 베타-카테닌을 활성화시켜 핵으로의 이동을 촉진한다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 모낭 모유두세포(HFDPC)에서 베타-카테닌의 하위인자인 LEF-1 및 c-Myc으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 인자의 유전자 발현을 상향조절한다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 모낭 모유두세포(HFDPC)에서 탈모 단백질인 DKK-1(Dickkopf-1)의 발현 수준을 하향 조절한다. 상기 탈모 단백질인 DKK-1은 디하이드로테스토스테론(DHT)에 의해 발현수준이 증가되는 것이고, 본 발명의 펩타이드는 DHT에 의해 증가되는 DKK-1의 발현수준을 하향조절한다.
일 구현예에서, 본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 인간외모근초세포(human hair outer root sheath cell, HHORSC)에서 Ha3-II, Keratin 5, Keratin 14, 및 Keratin 19으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 단백질의 유전자의 발현을 증가시킨다.
상기 화장료 조성물은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적으로 제조되는 임의의 제형으로 제조될 수 있고, 피부외용제 일 수 있다. 예를 들면, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화 될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 화장료 조성물은 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이, 파우더, 헤어토닉, 헤어크림, 헤어로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어컨디셔너, 헤어스프레이, 헤어 에어졸, 포마드, 젤 등과 같은 용액, 솔젤, 에멀젼, 오일, 왁스, 에어졸 등의 다양한 형태로 제조될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 화장료 조성물은 부형제, 담체 등 기타 첨가제를 포함할 수 있으며 일반 피부 화장료에 배합되는 보통의 성분을 필요한 만큼 적용 배합하는 것이 가능하다.
상기 화장료 조성물의 제형의 형태가 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀루로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형의 형태가 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토오스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 사용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체가 포함될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 화장료 조성물의 제형의 형태가 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용될 수 있고, 예를 들면 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형의 형태가 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 등과 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형이 헤어샴푸인 경우에는 본 발명의 펩타이드에 증점제, 계면활성제, 점도 조절제, 보습제, pH 조절제, 방부제, 에센셜 오일 등과 같이 샴푸를 조성하기 위한 베이스 성분들이 혼합될 수 있다. 상기 증점제로는 CDE가 사용될 수 있고, 상기 계면활성제로는 음이온 계면활성제인 LES와, 양쪽성 계면활성제인 코코 베타인이 사용될 수 있고, 상기 점도조절제로는 폴리 쿼터가 사용될 수 있으며, 상기 보습제로는 글리세린이 사용될 수 있고, 상기 pH 조절제로는 구연산, 수산화나트륨이 사용될 수 있다. 상기 방부제로는 자몽 추출물 등이 사용될 수 있고, 이 외에도 시더우드, 페퍼민트, 로즈마리 등의 에센셜 오일과 실크 아미노산, 펜타올 또는 비타민 E가 첨가될 수 있다.
상기 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 본 발명의 펩타이드와 담체 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 사용되는 성분들, 예를 들면 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 등을 더 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 펩타이드는 상술한 조성물 내에 0.01 μM 내지 1000 μM의 농도로 포함될 수 있으며, 구체적으로, 본 발명의 펩타이드는 0.01 μM 내지 1000 μM; 0.05 μM 내지 800 μM, 0.05 μM 내지 700 μM, 0.05 μM 내지 600 μM, 0.05 μM 내지 500 μM, 0.05 μM 내지 300 μM, 0.05 μM 내지 200 μM; 0.1 μM 내지 800 μM, 0.1 μM 내지 700 μM, 0.1 μM 내지 600 μM, 0.1 μM 내지 500 μM, 0.1 μM 내지 300 μM, 0.1 μM 내지 200 μM; 0.3 μM 내지 800 μM, 0.3 μM 내지 700 μM, 0.3 μM 내지 600 μM, 0.3 μM 내지 500 μM, 0.3 μM 내지 300 μM, 0.3 μM 내지 200 μM; 0.3 μM 내지 150 μM, 0.3 μM 내지 100 μM, 0.3 μM 내지 90 μM, 0.3 μM 내지 80 μM, 0.3 μM 내지 70μM, 또는 0.3 μM 내지 60μM의 농도로 포함되는 것일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
3. 본 발명의 펩타이드의 용도
본 발명의 다른 측면에서, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 발모 촉진 또는 탈모증의 억제, 예방, 치료 또는 개선하는데 사용하는 용도를 제공한다.
본 발명의 다른 측면에서, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드 또는 상기 펩타이드를 포함하는 조성물을 발모 촉진 또는 탈모증의 억제, 예방, 치료 또는 개선이 필요한 대상체(subject)에 투여하는 것을 포함하는 발모를 촉진하는 방법 또는 탈모증의 예방, 억제, 치료 또는 개선하는 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 측면에서, 발모의 촉진 또는 탈모증의 예방, 치료 또는 개선하기 위한 의약(medicament) 또는 화장품(cosmetics)의 제조를 위한 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 용도를 제공한다.
본 발명의 펩타이드는 발모 촉진 또는 탈모증의 방지, 억제 또는 치료 활성을 갖는다. 본 발명의 펩타이드는 모낭 모유두세포(HFDPC)의 증식을 촉진하고, 인간 모유두 세포에서 세포증식 관련 신호전달 단백질 Akt 또는 ERK의 활성화, 베타-카테닌의 활성화, 베타-카테닌 하위인자 LEF-1 및 c-Myc의 발현수준의 향상, 탈모 단백질 DKK-1의 발현수준을 하향조절하며, 외모근초세포(HORSC)에서 케라틴 단백질들의 발현을 증가시키는 활성을 가진다. 본 발명의 펩타이드는 발모 촉진 또는 탈모증의 방지, 억제, 또는 치료제 및 화장품의 유효성분으로 활용될 수 있다.
다만, 본 발명의 효과는 상기에서 언급한 효과로 제한되지 아니하며, 언급되지 않은 또 다른 효과들은 하기의 기재로부터 당업자에게 명확히 이해될 수 있을 것이다.
도 1은 본 발명의 펩타이드를 HHFDPC 세포에 500nM, 5μM, 50μM로 처리하였을 때 HHFDPC의 증식을 촉진하는 것을 보여주는 실험결과이다.
도 2는 본 발명의 펩타이드를 HHFDPC 세포에 500nM, 5μM, 및 50μM로 처리하였을 때 세포 증식에 관련된 신호전달분자인 Akt 및 ERK(extracellular-regulated kinase)의 인산화가 증가된 것을 보여주는 실험결과이다.
도 3은 본 발명의 펩타이드를 HHFDPC 세포에 500nM, 5μM, 및 50μM로 처리하였을 때 베타-카테닌이 활성화되어 핵으로의 이동이 증가된 것을 보여주는 실험결과이다.
도 4는 본 발명의 펩타이드를 HHFDPC 세포에 500nM, 5μM, 및 50μM로 으로 처리하였을 때 베타-카테닌의 하위인자인 LEF-1 및 c-Myc의 유전자 발현이 증가되는 것을 보여주는 실험결과이다.
도 5는 본 발명의 펩타이드를 HHFDPC 세포에 500nM, 5μM, 및 50μM로 처리하였을 때 DHT 처리에 의해 유도된 탈모 단백질인 DKK-1의 발현이 농도 의존적 방식으로 감소되는 것을 보여주는 실험결과이다.
도 6은 본 발명의 펩타이드를 HHORSC 세포에 500nM, 5μM, 및 50μM으로 처리하였을 때 세포의 활성이 증가하여 사이토케라틴(cytokeratin) 단백질인 Ha3-II, Keratin 5, Keratin 14, 및 Keratin 19들의 유전자 발현이 증가되는 것을 보여주는 실험결과이다.
이하, 본 발명을 실시예에 의하여 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 구체적으로 예시하는 것이며, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되지 아니한다.
제조예 1: 펩타이드 및 펩타이드 복합체의 제조
자동 펩타이드 합성기(Milligen 9050, Millipore, 미국)를 이용하여 하기의 표 1에 기재된 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드를 합성하고, C18 역상 고성능액체크로마토그래피(HPLC)(Waters Associates, 미국)를 이용하여 이들 합성된 펩타이드를 순수 분리하였다. 컬럼은 ACQUITY UPLC BEH300 C18 (2.1 ㎜ Х 100 ㎜, 1.7 ㎛, Waters Co, 미국)을 이용하였다.
서열번호 펩타이드의 아미노산 서열
1 LKRYKHLV (Leu-Lys-Arg-Tyr-Lys-His-Leu-Val)
상기 제조한 서열번호 1의 펩타이드에 대해 다음의 실험을 통해 그 효능을 평가하였다.
실험예 1: 인간 모유두 세포(HHFDPC)의 증식 촉진
상기 제조예 1에서 제조한 펩타이드가 인간 모낭 모유두 세포(human hair follicle dermal papilla cell, HHFDPC)의 증식에 미치는 영향에 대해 실험하였다.
HHFDPC를 4 x 103 cells/well의 밀도로 96-웰 세포배양 플레이트에 접종(seeding)하여 중간엽줄기세포 완전배지(mesenchymal stem cell complete media)조건에서 24시간 동안 배양하였다. 이어서, 무혈청(serum free)중간엽줄기세포 배지로 교체한 후, 24시간 동안 더 배양하였다. 배양한 세포 배양물에 상기 제조예 1에서 제조한 펩타이드를 각각 500nM, 5μM, 50μM 처리하고, 양성 대조군으로는 VEGF를 1μM 처리하고, 아무것도 처리하지 않은 것을 음성 대조군(con)으로하여, 37 ℃에서 72시간 더 배양하였다. 이어서, 여기에 5 mg/ml MTT 용액 10 μL를 첨가하여, 37℃ CO2 인큐베이터에서 4시간 동안 인큐베이션하고, 배지를 제거한 후, DMSO를 100 μL 처리하여, 10분간 진탕(shaking) 해주었다. 마지막으로 분광기(Spectrophotometer, Molecular Devices (USA, CA), SpectraMax iD3)를 이용하여 540 nm 파장에서의 흡광도를 측정하였다.
실험결과, 도 1에서 보여지는 바와 같이, 제조예 1의 펩타이드를 HHFDPC에 500nM, 5μM, 50μM로 처리하였을 때 음성대조군(con) 대비 HHFDPC의 증식이 촉진됨을 확인하였다.
실험예 2: 인간모유두세포에서 증식 연관 신호전달분자의 활성화
상기 제조예 1에서 제조한 펩타이드가 인간모유두세포(HHFDPC)에서 증식 연관 신호전달 분자의 활성화에 미치는 영향을 웨스턴블롯(Western blot) 방법으로 확인하였다.
HHFDPC를 4 x 105 cells/well의 밀도로 6-웰 세포배양 플레이트에 접종(seeding)하여 중간엽줄기세포 완전배지(mesenchymal stem cell complete media)조건에서 24시간 동안 배양하였다. 이어서, 무혈청(serum free)중간엽줄기세포 배지로 교체한 후, 24시간 동안 더 배양하였다. 배양한 세포 배양물에 상기 제조예 1에서 제조한 펩타이드를 각각 500 nM, 5 μM , 50 μM 처리하고, 양성대조군으로는 1 μM의 미녹시딜(Minoxidil, MNX)과 1 μM의 VEGF를 처리하였으며, 아무것도 처리하지 않은 것을 음성대조군(con)으로 하였다. 상기 물질들을 처리한 세포 배양물을 37℃에서 24시간 더 배양하였다. 배양물을 PBS로 세척한 후, 용해 완충액(lysis buffer)를 처리하여 세포를 용해시켜 세포 용해물을 얻었다. 세포 용해물에 대해 BCA 정량하여 동량의 단백질 샘플을 제조하였다. 제조된 단백질 샘플을 10% SDS-PAGE을 이용하여 전기영동을 수행하였다. SDS-PAGE를 통해 분리한 단백질을 PVDF 멤브레인으로 이동(transfer)시키고, 5% 탈지유(skim milk)를 이용하여 30분 동안 실온에서 블로킹(blocking) 시켰다. phospho-AKT 및 phospho-ERK에 대한 항체(Cell Signaling, USA)를 3% BSA에 1:1000의 비율로 희석한 후 4℃에서 상기 멤브레인과 16시간 동안 반응시켰다. 0.1% PBS-T (0.1% Tween-20 in PBS)로 15분씩 3회 세척하고, 2차 항체를 5% 탈지유에 1:2000의 비율로 희석한 후 상온에서 1시간 반응시켰다. 0.1% PBS-T (0.1% Tween-20 in PBS) 로 15분씩 3회 세척하고, ECL 용액(GE Healthcare, USA)을 처리한 후 필름으로 검출하였다.
실험결과, 도 2에서 보여지는 바와 같이, HHFDPC에 제조예 1의 펩타이드를 500nM, 5μM, 및 50μM로 처리하였을 때 세포 증식에 관련된 신호전달분자인 Akt 및 ERK(extracellular-regulated kinase)의 인산화가 증가된 것을 확인할 수 있었다.
실험예 3: 인간모유두세포에서 베타-카테닌(β-catenin)의 활성화
상기 제조예 1에서 제조한 펩타이드가 인간모유두세포(HHFDPC)에서 베타-카테닌(β-catenin)의 활성화에 미치는 영향을 웨스턴블롯(Western blot) 방법으로 확인하였다.
HHFDPC를 4 x 105 cells/well의 밀도로 6-웰 세포배양 플레이트에 접종(seeding)하여 중간엽줄기세포 완전배지(mesenchymal stem cell complete media)조건에서 24시간 동안 배양하였다. 이어서, 무혈청(serum free)중간엽줄기세포 배지로 교체한 후, 24시간 동안 더 배양하였다. 배양한 세포 배양물에 상기 제조예 1에서 제조한 펩타이드를 각각 500nM, 5μM , 50μM 처리하고, 양성대조군으로는 10 ng/mL의 rhWnt-3a(recombinant human Wnt-3a protein, R&D systems (USA, MN))를 처리하였고, 아무것도 처리하지 않은 것을 음성대조군(con)으로 하였다. 상기 물질들을 처리한 세포 배양물을 37℃에서 24시간 더 배양하였다. 배양물을 PBS로 세척한 후, 핵 단백질 추출 키트(Thermo scientific, USA)를 이용하여 핵 단백질을 분리하고, BCA 정량하여 동량의 단백질 샘플을 제조하였다. 제조된 단백질 샘플을 10% SDS-PAGE을 이용하여 전기영동을 수행하였다. SDS-PAGE를 통해 분리한 단백질을 PVDF 멤브레인으로 이동(transfer)시키고, 5% 탈지유(skim milk)를 이용하여 30분 동안 실온에서 블로킹(blocking) 시켰다. 베타-카테닌에 대한 항체(Cell Signaling, USA)와 HDAC1에 대한 항체(Santa Cruz, USA)를 3% BSA에 1:1000의 비율로 희석한 후 4℃에서 상기 멤브레인과 16시간 동안 반응시켰다. 0.1% PBS-T(0.1% Tween-20 in PBS)로 15분씩 3회 세척하고, 2차 항체를 5% 탈지유에 1:2000의 비율로 희석한 후 상온에서 1시간 반응시켰다. 0.1% PBS-T (0.1% Tween-20 in PBS)로 15분씩 3회 세척하고, ECL 용액(GE Healthcare, USA)을 처리한 후 필름으로 검출하였다.
실험결과, 도 3에서 보여지는 바와 같이, HHFDPC에 제조예 1의 펩타이드를 500nM, 5μM, 및 50μM로 처리하였을 때 세포의 증식과 분화에 영향을 미치는 베타-카테닌이 활성화되어 핵으로의 이동이 증가된 것을 확인할 수 있었다.
실험예 4: 인간 모유두세포에서 베타-카테닌 하위 유전자의 발현 촉진
상기 제조예 1에서 제조한 펩타이드가 인간 모낭 모유두세포(HHFDPC)에서 베타-카테닌의 하위 유전자인 LEF-1(Lymphoid enhancer-binding factor 1), 및 c-Myc 의 발현 수준에 미치는 영향을 RT-PCR 방법으로 확인하였다.
HHFDPC를 4 x 105 cells/well의 밀도로 6-웰 세포배양 플레이트에 접종(seeding)하여 중간엽줄기세포 완전배지(mesenchymal stem cell complete media)조건에서 24시간 동안 배양하였다. 이어서, 무혈청(serum free)중간엽줄기세포 배지로 교체한 후, 24시간 동안 더 배양하였다. 배양한 세포 배양물에 상기 제조예 1에서 제조한 펩타이드를 각각 500nM, 5μM , 50μM로 처리하고, 양성대조군으로는 10 ng/mL의 rhWnt-3a(recombinant human Wnt-3a protein, R&D systems (USA, MN))를 처리하였고, 아무것도 처리하지 않은 것을 음성대조군(con)으로 하여, 각각을 37℃에서 24시간 더 배양하였다. 배양물을 PBS로 세척한 후, eaay blue(Intron, South Korea)를 300 μL 처리하여 RNA를 분리하였다. 분리한 RNA를 Nano drop으로 정량한 후 cDNA synthesis kit (Enzynomics, South Korea)를 사용하여 cDNA 합성을 수행하였다. 이어서, 아래 표 2의 프라이머와 PCR 프리믹스(permix)(Enzynomics, South Korea)를 이용하여 PCR 반응을 진행하였다. PCR 반응 생성물을 1.5% 아가로스겔에 전기영동하고, Bio-Rad Gel Image System으로 밴드를 검출하였다.
유전자 프라이머 서열 (5'->3') 서열번호
LEF-1 F 5'-CCAGCTATTGTAACACCTCA-3' 2
R 5'-TTCAGATGTAGGCAGCTGTC-3' 3
c-Myc F 5'-ACCAGCAGCGACTCTGAGGAGGAAC-3' 4
R 5'-TGACCCTCTTGGCAGCAGGATAGTCC-3' 5
GAPDH F 5'-GGAGCCAAAAGGGTCATCAT-3' 6
R 5'-GTGATGGCATGGACTGTGGT-3' 7
실험결과, 도 4에서 보여지는 바와 같이, HHFDPC에 제조예 1의 펩타이드를 500nM, 5μM, 및 50μM으로 처리하였을 때 세포의 증식과 분화에 영향을 주는 베타-카테닌이 활성화되어 하위인자인 LEF-1 및 c-Myc의 유전자 발현이 증가된 것을 확인할 수 있었다.
실험예 5: 인간모유두세포에서 탈모 단백질 DKK-1의 발현 억제
모낭에서 디하이드로테스토스테론(DHT)은 DKK-1(Dickkopf-1)의 발현을 촉진시키고, DHT에 의해 유도되어 생성된 DKK-1은 모낭의 케라티노사이트(keratinocyte)의 증식을 억제하고 이의 세포사멸(apoptosis)를 유도하여 탈모를 촉진하는 것으로 알려져 있다(J of Invest Dermatolo. 2008, Feb., 128(2), pp. 262-269.). 상기 제조예 1에서 제조한 펩타이드가 인간모유두세포(HHFDPC)에서 탈모 유발 단백질 DKK-1의 발현 수준에 미치는 영향을 웨스턴블롯(Western blot) 방법으로 확인하였다.
HHFDPC를 4 x 105 cells/well의 밀도로 6-웰 세포배양 플레이트에 접종(seeding)하여 중간엽줄기세포 완전배지(mesenchymal stem cell complete media)조건에서 24시간 동안 배양하였다. 이어서, 무혈청(serum free)중간엽줄기세포 배지로 교체한 후, 24시간 동안 더 배양하였다. 배양한 세포 배양물에 상기 제조예 1에서 제조한 펩타이드를 각각 500 nM, 5 μM , 50 μM 처리하고, 양성대조군으로는 5 μM의 피나스테라이드(finasteride)를 처리하였으며, 아무것도 처리하지 않은 것을 음성대조군(con)으로 하였다. 이때 탈모 단백질 DKK-1의 유도 물질인 DHT을 100nM의 농도로 동시에 처리하였다. 상기 물질들을 처리한 세포 배양물을 37℃에서 24시간 더 배양하였다. 배양물을 PBS로 세척한 후, 용해 완충액(lysis buffer)를 처리하여 세포를 용해시켜 세포 용해물을 얻었다. 세포 용해물에 대해 BCA 정량하여 동량의 단백질 샘플을 제조하였다. 제조된 단백질 샘플을 10% SDS-PAGE을 이용하여 전기영동을 수행하였다. SDS-PAGE를 통해 분리한 단백질을 PVDF 멤브레인으로 이동(transfer)시키고, 5% 탈지유(skim milk)를 이용하여 30분 동안 실온에서 블로킹(blocking) 시켰다. DKK-1에 대한 항체(Cell Signaling, USA)를 3% BSA에 1:1000의 비율로 희석한 후 4℃에서 상기 멤브레인과 16시간 동안 반응시켰다. 0.1% PBS-T (0.1% Tween-20 in PBS) 로 15분씩 3회 세척하고, 2차 항체를 5% 탈지유에 1:2000의 비율로 희석한 후 상온에서 1시간 반응시켰다. 0.1% PBS-T (0.1% Tween-20 in PBS) 로 15분씩 3회 세척하고, ECL 용액(GE Healthcare, USA)을 처리한 후 필름으로 검출하였다.
실험결과, 도 5에서 보여지는 바와 같이, HHFDPC에 제조예 1의 펩타이드를 500nM, 5μM, 및 50μM로 처리하였을 때 DHT 처리에 의해 유도된 탈모 단백질인 DKK-1의 발현이 농도 의존적 방식으로 감소되는 것을 확인할 수 있었다.
실험예 6: 인간외모근초세포(HHORSC)의 활성화
상기 제조예 1에서 제조한 펩타이드가 인간외모근초세포(HHORSC)의 활성화에 미치는 영향을 사이토케라틴(cytokeratins) 단백질의 발현을 측정하여 확인하였다.
HHORSC를 4 x 103 cells/well의 밀도로 96-웰 세포배양 플레이트에 접종(seeding)하여 중간엽줄기세포 완전배지(mesenchymal stem cell complete media)조건에서 24시간 동안 배양하였다. 이어서, 무혈청(serum free)중간엽줄기세포 배지로 교체한 후, 24시간 동안 더 배양하였다. 배양한 세포 배양물에 상기 제조예 1에서 제조한 펩타이드를 각각 500 nM, 5 μM, 50 μM로 각각 처리하고, 양성 대조군으로 EGF(epidermal growth factor)를 100 nM 처리하고, 아무것도 처리하지 않은 것을 음성대조군(con)으로 하여, 37℃에서 24시간 더 배양하였다. 배양물을 PBS로 세척한 후, eaay blue(Intron, South Korea)를 300 μL 처리하여 RNA를 분리하였다. 분리한 RNA를 Nano drop으로 정량한 후 cDNA synthesis kit (Enzynomics, South Korea)를 사용하여 cDNA 합성을 수행하였다. 이어서, 아래 표 3의 프라이머와 PCR 프리믹스(permix)(Enzynomics, South Korea)를 이용하여 PCR 반응을 진행하였다. PCR 반응 생성물을 1.5% 아가로스겔에 전기영동하고, Bio-Rad Gel Image System으로 밴드를 검출하였다.
유전자 프라이머 서열 (5'->3') 서열번호
Ha3-II F 5'-GATCATCGAGCTGAGACGCA-3' 8
R 5'-CTGGCCCCAGGGTATCTAGT-3' 9
Keratin 5 F 5'-CCCTCAAGGATGCCAGGAAC-3' 10
R 5'-CACTGCTACCTCCGGCAAG-3' 11
Keratin 14 F 5'-CCAAATCCGCACCAAGGTCA-3' 12
R 5'-GTATTGATTGCCAGGAGGGGG-3' 13
Keratin 19 F 5'-CGCGGCGTATCCGTGTCCTC-3' 14
R 5'-AGCCTGTTCCGTCTCAAACTTGGT-3' 15
GAPDH F 5'-GGAGCCAAAAGGGTCATCAT-3' 6
R 5'-GTGATGGCATGGACTGTGGT-3' 7
실험결과, 도 6에서 보여지는 바와 같이, HHORSC에 제조예 1의 펩타이드를 500nM, 5μM, 및 50μM으로 처리하였을 때 세포의 활성이 증가하여 세포의 골격을 형성하고 모발을 구성하는 작용의 사이토케라틴(cytokeratin) 단백질인 Ha3-II, Keratin 5, Keratin 14, 및 Keratin 19들의 유전자 발현이 모두 증가되는 것을 확인할 수 있었다.
제조예 2: 약학적 조성물의 제조
2-1. 산제의 제조
본 발명의 펩타이드 2 g
유당 1 g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
2-2. 정제의 제조
본 발명의 펩타이드 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조 방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
2-3. 캡슐제의 제조
본 발명의 펩타이드 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
2-4. 환의 제조
본 발명의 펩타이드 1 g
유당 1.5 g
글리세린 1 g
자일리톨 0.5 g
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1환 당 4g이 되도록 제조하였다.
2-5. 과립의 제조
본 발명의 펩타이드 150 mg
대두추출물 50 mg
포도당 200 mg
전분 600 mg
상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 mg을 첨가하여 섭씨 60
Figure pat00001
에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.
제조예 3: 화장료 조성물의 제조
3-1. 크림의 제조
본 발명의 펩타이드 4.6 중량부
세토스테아릴알코올 2.8 중량부
밀납 2.6 중량부
스테아린산 1.4 중량부
친유형모노스테아린산글리세린 2 중량부
피이지-100 스테아레이트 1 중량부
세스퀴올레인산소르비탈 1.4 중량부
호호바오일 4 중량부
스쿠알란 3.8 중량부
폴리소르베이트 60 1.1 중량부
마카다이아오일 2 중량부
초산토코페롤 0.2 중량부
메칠폴리실록산 0.4 중량부
에칠파라벤 0.1 중량부
프로필파라벤 0.1 중량부
Euxyl K-400 0.1 중량부
1,3-부칠렌글리콜 7 중량부
메칠파라벤 0.05 중량부
글리세린 6 중량부
d-판데놀 0.2 중량부
트리에탄올아민 0.2 중량부
pt 41891 0.2 중량부
p-H2O 46.05 중량부
3-2. 로션의 제조
본 발명의 펩타이드 3.5 중량부
세토스테아릴알코올 1.6 중량부
스테아린산 1.4 중량부
친유형모노스테아린산글리세린 1.8 중량부
피이지-100 스테아레이트 2.6 중량부
세스퀴올레인산소르비탈 0.6 중량부
스쿠알렌 4.8 중량부
마카다이아오일 2 중량부
호호바오일 2 중량부
초산토코페롤 0.4 중량부
메칠폴리실록산 0.2 중량부
에칠파라벤 0.1 중량부
프로필파라벤 0.1 중량부
1,3-부칠렌글리콜 4 중량부
메칠파라벤 0.1 중량부
산탄검 0.1 중량부
글리세린 4 중량부
d-판데놀 0.15 중량부
알란토인 0.1 중량부
카르보내(2% aq. Sol) 4 중량부
트리에탄올아민 0.15 중량부
에탄올 3 중량부
pt 41891 0.1 중량부
p-H20 48.3 중량부
3-3. 유연 화장수의 제조
본 발명의 펩타이드 0.2 중량%
에탄올 10.0 중량%
폴리라우린산폴리옥시에틸렌소르비탄 1.0 중량%
파라옥시안식향산메틸 0.2 중량%
글리세린 5.0 중량%
1,3-부틸글리콜 6.0 중량%
향 적량
색소 적량
정제수 적량
총 100
3-4. 영양 화장수의 제조
본 발명의 펩타이드 0.1 중량%
와셀린 2.0 중량%
세스퀴올레인산소르비탄 0.8 중량%
폴리옥시에틸렌올레일에틸 1.2 중량%
파라옥시안식향산메틸 적량
프로필렌글리콜 5.0 중량%
에탄올 3.2 중량%
카르복시비닐폴리머 18.0 중량%
색소 적량
향 적량
정제수 적량
총 100
3-5. 에센스의 제조
본 발명의 펩타이드 5.0 중량%
프로필렌글리콜 10.0 중량%
글리세린 10.0 중량%
히알루론산나트륨수용액(1%) 5.0 중량%
에탄올 3.2 중량%
폴리옥시에틸렌경화피마자유 1.0 중량%
파라옥시안식향산메틸 0.1 중량%
향 적량
정제수 적량
총 100
3-6. 팩의 제조
본 발명의 펩타이드 0.5 중량%
글리세린 5.0 중량%
프로필렌글리콜 4.0 중량%
폴리비닐알코올 15.0 중량%
에탄올 8.0 중량%
폴리옥시에틸렌올레일에틸 1.0 중량%
파라옥시안식향산메틸 0.2 중량%
향 적량
색소 적량
정제수 적량
총 100
상기 조성비는 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 성분 또는 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
상기에서는 본 출원의 대표적인 실시예를 예시적으로 설명하였으나, 본 출원의 범위는 상기와 같은 특정 실시예만 한정되지 아니하며, 해당 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 출원의 청구범위에 기재된 범주 내에서 적절하게 변경이 가능할 것이다.

Claims (14)

  1. 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드.
  2. 청구항 1의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 발모 촉진 또는 탈모증의 억제, 예방 또는 개선용 조성물.
  3. 청구항 1의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 탈모증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  4. 청구항 3에 있어서,
    상기 펩타이드는 모낭 모유두세포(HFDPC)의 증식을 촉진하는 것인, 탈모증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  5. 청구항 3에 있어서,
    상기 펩타이드는 모낭 모유두세포(HFDPC)에서
    (i) Akt 또는 ERK 신호전달 단백질을 활성화시키거나,
    (ii) 베타-카테닌을 활성화시키거나,
    (iii) 베타-카테닌의 하위인자 LEF-1 및 c-Myc으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 인자의 유전자 발현을 상향조절하거나, 또는
    (iv) 탈모 단백질인 DKK-1(Dickkopf-1)의 발현 수준을 하향조절하는 것인, 탈모증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  6. 청구항 3에 있어서,
    상기 펩타이드는 외모근초세포(HORSC)에서
    Ha3-II, Keratin 5, Keratin 14, 및 Keratin 19으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 단백질의 유전자의 발현을 증가시키는 것인, 탈모증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  7. 청구항 3에 있어서,
    상기 약학적 조성물은 피부 외용제인 것인, 탈모증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  8. 청구항 1의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 발모 촉진 또는 탈모증의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
  9. 청구항 8에 있어서,
    상기 펩타이드는 모낭 모유두세포(HFDPC)의 증식을 촉진하는 것인, 발모 촉진 또는 탈모증의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
  10. 청구항 8에 있어서,
    상기 펩타이드는 모낭 모유두세포(HFDPC)에서
    (i) Akt 또는 ERK 신호전달 단백질을 활성화시키거나,
    (ii) 베타-카테닌을 활성화시키거나,
    (iii) 베타-카테닌의 하위인자 LEF-1 및 c-Myc으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 인자의 유전자 발현을 상향조절하거나, 또는
    (iv) 탈모 단백질인 DKK-1(Dickkopf-1)의 발현 수준을 하향조절하는 것인, 발모 촉진 또는 탈모증의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
  11. 청구항 8에 있어서,
    상기 펩타이드는 외모근초세포(HORSC)에서
    Ha3-II, Keratin 5, Keratin 14, 및 Keratin 19으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 단백질의 유전자 발현을 증가시키는 것인, 발모 촉진 또는 탈모증의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
  12. 청구항 8에 있어서,
    상기 화장료 조성물은 피부 외용제인 것인, 발모 촉진 또는 탈모증의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
  13. 청구항 8에 있어서,
    상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 제형인 것인, 발모 촉진 또는 탈모증의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
  14. 청구항 8에 있어서,
    상기 화장료 조성물은 헤어토닉, 헤어크림, 헤어로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어컨디셔너, 헤어스프레이, 헤어 에어졸, 포마드 및 젤로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 제형인 것인, 발모 촉진 또는 탈모증의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
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