CN1141593A - 菠萝蛋白酶的医疗用途 - Google Patents

Abstract

本申请涉及菠萝蛋白酶在速率高胆固醇血症及类似疾病中的用途。菠萝蛋白酶能作为胆汁酸受体拮抗剂并因此阻止通过胃肠道重吸收胆汁酸。

Description

菠萝蛋白酶的医疗用途

本发明涉及被称为菠萝蛋白酶的酶混合物在治疗需将胆汁酸贮库降低或作其它修饰的疾病中的用途。具体地讲，本发明涉及高脂血症，特别是高胆固醇血症的治疗及预防。

在西方，冠心病是死亡的主要原因之一，它源于动脉粥样硬化斑在给心脏供氧和营养的主动脉沉积。动脉粥样硬化发展数十年无临床效果，只是动脉腔逐渐变窄。冠状动脉疾病是指少于75％的动脉腔闭塞，而大于75％闭塞就发展为冠心病。血管完全被阻塞时就会发病：绞痛(胸部剧痛)或心肌栓塞(心脏病发作)或有时会发生猝死。造成冠状动脉疾病和冠心病的若干主要因素有年龄、男性、高血压、吸烟、缺乏锻炼、紧张、饮食习惯、糖尿病、生活方式及血胆固醇升高(高胆固醇血症；特别是胆固醇为LDL-胆固醇时)。

胆固醇是细胞膜、类固醇激素及胆汁酸的主要成分。每天胆固醇需要量的约三分之二由肝脏内源性合成，其余由饮食提供。胆固醇是不溶于水的亲酯性物质，它需要在脂蛋白中包囊才能转运到血液中。脂蛋白的主要类型有乳糜颗粒、极低密度脂蛋白(VLDL)、中等密度脂蛋白(IDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。肝脏将胆固醇以VLDL形式分泌到血液中，然后依次转化为IDL、LDL。LDL约占血胆固醇的三分之二，在HDL的帮助下LDL被转运回到肝脏。很多细胞表面有LDL受体，能为细胞组份的合成而吸收并提取LDL。但是，提取LDL-胆固醇最多的是肝脏，它可能又被分泌至血液或者胆汁中(以胆汁酸或游离胆固醇的形式)。乳糜颗粒是胃肠道细胞用在饮食中吸收的脂类包括胆固醇制成的，它进入淋巴并随后进入体循环，外周组织将其脂类成分降解并利用。其余的乳糜颗粒回到肝脏。

可以通过几种不同的途径降低升高的血LDL浓度并同时降低与动脉硬化有关的进展性紊乱的发病机率。正常血浆胆固醇浓度低于200mg/dl，需通过饮食控制的轻度高胆固醇血症在200-22-mg/dl，中度高胆固醇血症在220-260mg/dl，而需要药物和饮食干预的严重高胆固醇血症超过了260mg/dl。T.Gordon，W P Castelli，M C Hjortland，W B Kannel and T RDawber(1984)，Predicting Coronary Heart Disease in Middle-Aged andOlder Persons(中老年冠心病的预测)。The Framingham Study：Journalof the American Medical ASSociation(1977)；238，497。National Institute ofHealth Consensus Development Conference Statemenr on Lowering BloodCholesterol，December 10-12th(1984)。

当被确诊为高胆固醇血症时，可采取一系列治疗：

(i)饮食对于轻度和中度高胆固醇血症，起初推荐的疗法不是通过药物而是饮食。饮食的改变包括降低富含胆固醇和饱和脂肪的食物如蛋类、乳制品和红肉的摄入。

(ii)药物对于患严重高胆固醇血症或中度高胆固醇血症而又拒绝改变饮食的病人，可采取药物治疗。它们包括：

消胆胺是一种胆汁酸多价螯合剂或结合剂，它破坏了胆固醇以胆汁酸的形式回到肝脏的循环。由胆固醇通过肝脏合成的胆汁酸通常以活化形式保存在肝肠循环中。消胆胺口服后在十二指肠结合胆汁酸形成不溶的复合物，随后通过粪便排出体外。肝肠循环的破坏导致肝脏由胆固醇合成胆汁酸的上调。这种对胆固醇需求的增加，部分通过新合成的肝脏胆固醇，其余通过增加由血液中摄取LDL-胆固醇满足。肝脏对LDL-胆固醇摄取的增加使血液胆固醇的浓度从总体上降低。

接受消胆胺的病人一般表现有血浆胆固醇降低13％、LDL-胆固醇降低20％、与冠心病有关的死亡率降低24％。有效的消胆胺治疗有与其服用不可口有关的若干缺点；表现为单位剂量包装含有的4g颗粒药物需与水或果汁混合。在很长的时间内每天可能需要多达9个单位剂量(平均3-6个)以单剂量或多剂量给药，病人对此颇有微辞(一般30％的病人为此停药)。消胆胺颗粒的外观为小塑料珠状，并具有液体砂纸结构。消胆胺治疗会伴发高机率的胃肠道不适，长期治疗出血的机率增加并与洋地黄、抗生素和利尿剂产生药物相互作用。长期治疗需要通过饮食补充维生素A、D及K。消胆胺成本也很高，故其治疗费用也很高。HMGCoA-还原酶抑制剂

HMGCoA还原酶抑制剂的例子包括泼瓦停和西瓦停。这些药物通过抑制胆固醇主要在肝脏中的内源性合成，通过彻底抑制胆固醇合成中限速酶起作用。这种治疗可将血浆胆固醇浓度最多降低至40％。

限制内源性合成胆固醇的供应意味着肝脏只能由血液中得到用来制作细胞成分、分泌及胆汁酸的胆固醇。这导致LDL受体活性的大规模上调，随后引起血浆胆固醇和LDL-胆固醇浓度的降低。血浆LDL-胆固醇浓度的降低与“保护性”血浆HDL-胆固醇浓度增加有关。HMGCoA还原酶抑制剂的最常见的副作用是胃肠道疼痛，其它包括疲劳、疹、肝脏转氨酶高及头痛。最近，大量的研究对HMGCoA还原酶抑制剂在降低死亡率的长期效果产生了疑问。统计分析表明其任何有益的效果都被无法解释的暴死(谋杀、自杀及意外死亡)机率的增加蒙上了阴影。其它药物治疗

用于高胆固醇血症治疗药物的其它例子包括异丁酸衍生物及烟酸衍生物。

异丁酸衍生物包括降脂苯酰、冠心平、降脂异苯酯及二甲苄氧庚酸。这些药物有效降低了血浆甘油三酯及VLDL，增加了HDL，并可最多将LDL-胆固醇降低18％。异丁酸衍生物引起副作用发生率约10％(主要是胃肠道和中枢神经系统)。动物试验表明这些化合物能形成肿瘤及胆结石。

烟酸衍生物降低了甘油三酯及血浆胆固醇的浓度。它们抑制脂肪组织中的脂解，降低肝脏中甘油三酯的酯化作用并增加脂蛋白脂酶的活性。结果导致VLDL浓度降低，并随之以IDL及LDL的降低(可能最多降低20％)，并增加HDL的浓度。烟酸产生强的潮红和头痛，这可通过药物的慢慢消耗而减轻。胃肠道紊乱在这种治疗中也是常见的。

现存的高胆固醇血症治疗中存在的令人不快的强烈副作用、高花费及令人怀疑的效果说明仍需要对此方面的治疗进行改进。理想的治疗应没有或极少有副作用，毒性低，并且因为控制此疾病症状需要长期治疗，故此治疗应方便并易于耐受如一天一次、一周一次。治疗的费用也应降低。

本发明涉及通过胆汁酸贮库的改变控制胆汁酸介导的高胆固醇血症及其它病症。

胆汁酸(或胆汁酸盐-存在的准确的形式及种类的比例将取决于环境的pH，故这些术语可交替使用)是一组天然存在的去垢剂，它是胆汁的主要成分。正如上面简要描述的，胆汁酸在肝脏由胆固醇通过羟基化作用和其它修饰合成并代表了胆固醇代谢的终产物(一种或多种)。作为外分泌腺，肝脏分泌胆汁；胆汁酸的分泌为胆汁的大部分流动提供了渗透驱动力。在一些情况下，胆汁在胆囊中储存并浓缩直至进食，此时在胃肠道激素胆囊细胞分裂素(cholescystokinin)作用下胆囊发生收缩并排空。胆汁酸随后进入十二指肠，在此它们主要发挥表面活性剂的作用；促进食物脂类及脂溶性维生素的消化和吸收。胆汁酸也增加了胰腺脂酶的作用。

在消化中的作用完成后，胆汁酸被身体以亲和方式保存：它们被活性受体调节的过程由末端回肠有效地重吸收并通过肝门静脉返回肝脏，并在重新分泌至胆汁中以前进一步进行受体促进的提取。

局部解剖证明，胆汁酸的连续流动几乎都集中并限制于肝脏、胆管、肠、肠细胞及肝脏门静脉系统，并因此包括肝肠循环。肝肠循环的作用不仅通过让它们多次重复使用保存有用的去垢剂胆汁酸分子，而且使胆汁酸在不同代谢活动中保持连续的平衡控制。胆汁酸在调节细胞、组织和器官内及其间多种脂类的合成及转运方面起主要作用，在肝肠循环中胆汁酸流到其中。

人胆汁酸贮库含有约3g胆汁酸，它们一天一般循环4-12次。每天通过粪便排泄的约为0.2至0.6g，这些量在肝肠通过胆固醇合成补充。消化道中胆汁酸的有效再吸收是主动和被动转运机制的结果；超过95％的胆汁酸通过这些方法转运。

主动转运系统存在于末端回肠中并具有与肝脏主动转运体若干相似之处，肝脏主动转运体是通过肝脏门静脉血液供应转运胆汁酸的。回肠胆汁酸转运体表现出饱和的动力学特性、竞争抑制及对钠离子存在的依赖。促使胆汁酸吸收的所需钠离子梯度是由存在于回肠细胞嗜碱膜的钠/钾-ATP酶提供的。顶膜胆汁酸/钠辅助转运体及胆汁酸-阴离子交换系统参与了嗜碱膜中胆汁酸的吸收。有证据表明胆汁酸吸收是通过一种发现于回肠但空肠中不存在的具有特异的胆汁酸结合位点的蛋白(分子量99kDa)完成的。

或者，通过小肠和结肠通过离子和非离子扩散吸收胆汁酸。虽然看似如此，事实上只有非离子扩散占了总量的大部分(90％)。

胆汁酸吸收路径的主要决定因素是由其结构决定的相对亲水性：疏水性。总之，多数疏水性胆汁酸如脱氧胆酸及鹅脱氧胆酸通过被动扩散吸收的倾向增加而多数亲水性胆汁酸如胆酸易于通过主动转运体吸收。在体内，大多数胆汁酸被甘氨酸或牛黄酸酰胺化，这起到了降低它们pKa(解离常数)的作用并因此增加了它们在胃肠道pH下离子化的趋势，因而需要通过主动胆汁酸转运体吸收。

如上所述，似乎回肠胆汁酸转运体是一种跨膜蛋白，其胆汁酸结合位点伸入胃肠道中。因此设想作用于或灭活受体在腔中的部分的某种试剂能阻止胆汁酸转运的发生。抑制胆汁酸受体结合位点的试剂的一个例子是一种化学修饰的胆汁酸，它不可逆地与胆汁酸受体结合位点结合；或者某种从胃肠道细胞表面除去胆汁酸受体结合位点的试剂(见Wess et al，J.Med.CHem.，37：873-875(1994))。回肠胆汁酸受体的灭活可能产生粪便中排泄的胆汁酸的增加、肝脏胆汁酸合成的增加及伴发的肝LDL受体活性的上调。肝-LDL受体活性的上调会产生血浆LDL-胆固醇的有利的降低作用。

因此，能增加肝LDL受体活性的某种试剂可用于高胆固醇血症病人的治疗，特别是当其它治疗产生副作用时。

我们现在惊奇地发现菠萝蛋白酶能够降低胆汁酸通过胃肠道重吸收的效率。

因此，本发明的第一个方面是提供菠萝蛋白酶在制备用来降低或防止胆汁酸通过胃肠道重吸收的一种试剂中的用途。

作为其作用于通过胃肠道重吸收胆汁酸的结果，菠萝蛋白酶有利于高脂血症特别是高胆固醇血症患者。此外，菠萝蛋白酶能降低胆汁酸的肝肠循环并因此有利于肝胆疾病或肝功能不全的患者。在这些情况下，通过损伤的肝脏的正常胆汁酸贮库的循环可进一步损伤仅存的肝功能。

本发明也可用于治疗患有胆汁酸贮库大小调节的疾病的治疗方法中，此方法包括给患有这种疾病的病人使用有效量的菠萝蛋白酶。

虽然，在本发明中酶的作用不受本理论准确性的影响，但是据信本发明中菠萝蛋白酶的作用机理是拮抗回肠胆汁酸受体。此作用机理也不需要菠萝蛋白酶由胃肠道完整地吸收。

菠萝蛋白酶是发现于凤梨科植物组织中的蛋白水解酶组合物的统称。菠萝蛋白酶是来自菠萝(Ananas comosus)的茎的多种部分的混合物。它含有至少两种蛋白水解酶，也含有非蛋白水解酶，包括一种酸性磷酸酶及过氧化酶；它也可能含有淀粉酶及纤维素酶活性。此外，也存在多种其它组份，特别是有机结合的钙。已知的菠萝蛋白酶及木瓜酶的蛋白水解酶在活性中心区域的氨基酸序列有很高的同一性，此结果表明菠萝蛋白酶和木瓜酶使用相同的催化机理。但是，菠萝蛋白酶与木瓜酶具有不同的裂解特异性。此外，已知的菠萝蛋白酶的蛋白水解酶是糖蛋白，而木瓜酶是单一的蛋白。菠萝蛋白酶由Taussig和Batkin综述(J.Ethnopharmacol.22 191-203(1988))。

早在十五世纪，菠萝蛋白酶已经用于帮助消化，用作改善皮肤结构的清洁剂并用于治疗伤口以加速愈合。最近，对其药理学和生物学作用的了解急剧增加，这使菠萝蛋白酶用于临床。特别是，菠萝蛋白酶用作治疗与外伤及手术有关的软组织炎症及水肿的辅剂。菠萝蛋白酶在很多国家都能得到，其商标为ANANASE FORTE、ANANASE、EXTRANASE、PROTEOLIS、RESOLVIT、ROGORIN、BROMASE及TRAUMANASE。在三十多年来的临床使用中，几乎没有明显的不需要的作用。

讨论菠萝蛋白酶的其它医疗用途的文件包括国际专利申请PCT/GB93/01374，它描述了包括菠萝蛋白酶的蛋白水解酶在专利人腹泻作的用途。但是没有用于治疗除腹泻以外疾病的文献，绝对没有阻断胆汁酸通过胃肠道重吸收或绝对血脂浓度的文献。

UK专利申请9313188涉及菠萝蛋白酶混合物的单一组份的用途。此文献讨论了茎菠萝蛋白酶在调节循环核苷酸路径中的用途。但是它并未建议茎菠萝蛋白酶或菠萝蛋白酶的其它组份可用于防止胆汁酸的重吸收。

虽然可采用任何给药途径，但是菠萝蛋白酶一般口服给药，这是因为它是用来作用与胃肠道。它可以以片剂、糖浆剂、酏剂或硬或软胶囊剂(可以是肠溶包衣的)给药。

本发明的菠萝蛋白酶的优选给药方式应是控释的，以保证至少部分除去位于末端回肠肠细胞中的胆汁酸受体。需要结合有胃保护(防止在胃部菠萝蛋白酶降解)，并且直到达到末端回肠菠萝蛋白酶才延迟释放。菠萝蛋白酶的延迟释放会有助于保证小肠中存在的用来消化和吸收营养的其它受体保持完整。

可通过若干种制剂策略，单一的或结合的，达到菠萝蛋白酶的延迟释放。

可使用的其它制剂策略是用热软化固体(生理温度)将菠萝蛋白酶配成制剂。菠萝蛋白酶的速释或缓释给药可通过使用一种或多种多糖酵解甘油酯或其它生理相合的相转化温度(熔点)高于37℃的化合物实现。适宜的甘油酯包括二及三甘油酯，如多数GELUCIDE化合物，它们是Gattefosse提供的氢化脂肪酸酯(GELUCIDE是商标)。适宜的甘油酯的其它商标包括LABRAFIL和PRECIROL。选择制剂系统时应注意所需加热温度不能超过酶的热分解温度：总之，温度应低于约60℃。示范性GELUCIDE化合物的特别实例及其等同物包括：GELUCIDE 50/02；GELUCIDE 46/07；GELUCIDE 48/09；GELUCIDE 50/13；及GELUCIDE 53/10。

GELUCIDE名称后面的前两位数字表示液体/固体相转化摄氏温度，后两位数字表示亲水/亲酯平衡(HLB)值。应选择所使用的GELUCIDE(或GELUCIDE掺混物)的类型以得到适当的所需释放特性，它可以是速释或缓释或释放特性的结合。

可以存在多种制剂辅剂。例如，速释或缓释制剂可以包含如下面详细讨论的一种或多种表面活性剂。表面活性剂可用来修饰制剂，特别是含有甘油酯的。可以存在的其它辅剂为助流剂和/或增稠剂如硅胶；例如，以商标AEROSIL(如AEROSIL 200)出售的制剂。硅胶可用于修饰菠萝蛋白酶从基于热转化试剂如GELUCIDES的制剂中菠萝蛋白酶的释放速率。

为制备缓释组份(一种或多种)的进一步研究是使用触变性物质。这样的物质承受切应力(如可以通过搅拌或抽吸引起)时为液体但当切应力撤掉时变成不流到的凝胶。与上述热软化载体相同，触变性载体可很好地适用于硬明胶成胶囊技术。适当的触变性载体包括硅胶(如前面提及的AEROSIL 200制剂)及乙基纤维素。可存在的其它组份包括凝胶促进剂及分散辅剂。脂肪族二元醇类如聚乙二醇(如PEG 400)在触变性制剂中用作凝胶促进剂并且也帮助扩散。非离子表面活性剂，如多乙氧基化的，任意氢化的蓖麻油，如HLB为12至14或14至16的是可以使用。凝胶组合物可在很宽的范围内变化，而其表现是可以接受的。将部分活性成分制成缓释的、部分制成非缓释的也是很有利的。这可通过将部分酶掺入在含上述缓释GELUCIDES的骨架中并将部分酶掺入在更快速分散的GELUCIDES达到，例如：GELUCIDE 35/10；GELUCIDE 33/01；GELUCIDE 37/02；和GELUCIDE 44/14。

GELUCIDE 44/14因为在水中的溶解性而显得特别有用。这些物质可填充入硬或软明胶胶囊中。

不必要存在其它任何成分。但是，在一些情况下可加入适当的抗氧剂，它们包括d-α-生育酚、dl-α-生育酚、丁基化羟基甲苯(BHT)及丁基化羟基茴香醚(BHA)。抗氧剂可单独或结合使用。其它任意的组份是表面活性剂，如上所述。适当的表面活性剂为离子的或非离子的，但总之不包括胆汁酸及其盐。优选非离子表面活性剂。表面活性剂(如果存在)的适宜的HLB的范围为0至20，优选6-18并特别是10-18。可单独或结合使用的适当表面活性剂的例子包括聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯(如多乙氧基醚80，多乙氧基醚60，多乙氧基醚40，多乙氧基醚20)，聚氧乙烯硬脂酸酯(如硬脂酸-40-聚烃氧基酯)及聚氧乙烯，任意氢化的蓖麻油衍生物如CREMOPHOR RH40及EL产品。CREMOPHOR一词是商标。一般优选本发明的因为制剂基本无水，即不加入水。在所用成分中可存在水。但是，对所有的应用不需都优选无水制剂。

本发明的制剂可以是肠溶包衣或以其它方式保护以保证通过胃部时药物活性成分更好地存在。可以所用任何方便的肠溶保护方法。含有制剂的胶囊可用肠溶包衣如羟丙基酵解纤维素邻苯二甲酸酯或通过Pharma-VinciA/S的商业包衣方法，它使用存在于适当溶剂中的甲基丙烯酸共聚物。

菠萝蛋白酶的剂量取决于被治疗病人的个体需要。菠萝蛋白酶的剂量以BTU(菠萝蛋白酶酪氨酸单位)、CDU(酪蛋白消化单位)、GDU(明胶消化单位)或MCU(奶凝集单位)常规测量。BTUs、CDUs及GDUs如在文献中定义：BTU

一个菠萝蛋白酶酪氨酸单位是在试验条件下(例如，酸性变性血红蛋白底物在pH5和30℃消化后)每分钟释放一微摩尔的酪氨酸需要的酶量。CDU

在37℃，在pH7.0消化一小时后由标准酪蛋白底物中释放一毫克酪蛋白所需酶量。GDU

在45℃和pH4.5消化20分钟后由标准明胶溶液中释放一毫克(10-3g)氨基氮所需的酶活性。1100BUT/g＝750CDU/mg＝1200GDU/g。

准确的剂量由内科医生控制，每日剂量为50至4000GDU/天并优选100至1000GDU/天是合适的。每日剂量可以在一或多个等分中每天给药，例如，一天一、二、三或四次。或者，对于某种疾病治疗仅需要每周一次或两次。

本发明将以下面的实施例举例说明。实施例1

所用实施例是热软化载体的例子。一般加热熔化这些物质，因此允许使用常规的混合及抽吸技术进行液体填充。物质的量胶囊强度275GDU/胶囊

                 mg/胶囊           w/w(％)菠萝蛋白酶           90.00             27.3GELUCIDE 35/10       225.0             68.2AEROSIL 200          15.0              4.5

                 330.0             100.0

GELUCIRE 35/10通过加热至40℃左右熔化。菠萝蛋白酶和AEROSIL200加入直至完全分散。在热时将总重量330mg的制剂填充入“1”号硬明胶胶囊中并将其冷却固化。胶囊可随后用明胶带封口。肠溶包衣

为防止菠萝蛋白酶由上述延迟释放的制剂中提前释放，可将肠溶包衣用于硬明胶胶囊，例如，使用Pharma Vinci A/S(Denmark)商业方法。在Combi-coata中在水溶性肠溶溶液中通过喷雾包衣将肠溶包衣敷于胶囊上。实施例2菠萝蛋白酶对胆汁酸的粪便排泄的作用

制备两种菠萝蛋白酶制剂，在健康自愿者中试验。制剂如下：

A：一个含有276明胶消化单位的菠萝蛋白酶的1号硬明胶胶囊；

B：一个含有1104明胶消化单位的菠萝蛋白酶的0号硬明胶胶囊。

硬明胶胶囊被肠溶包衣并因此在离开胃部的酸性环境后释放菠萝蛋白酶块。

试验进行了5天。经过开始2天无治疗期间后3天过剂量监控期。整晚戒食用250ml水服用该药物。给药后3小时允许进食。

每24小时收集粪便样品，称重并用无菌搅拌器搅拌均匀。然后取约50g均匀样品并在-70℃冷冻留待分析。

通过下面的方法进行粪便样品的分析。

1.解冻后，将粪便样品冻干过夜并将样品研成均匀的化合物。

2.对500mg冻干粪便用50ml的50％(v/v)氯仿∶甲醇进行索格利特提取过夜(约16小时)。

3.将这样提取物的一个等分(10ml)在50℃在空气流中蒸发至干并在溶解一500μl甲醇中以进行胆汁酸检测。

4.通过特定的酶试验基于3α羟基胆固醇脱氢酶测定样品的胆汁酸含量，Coleman等描述于Biochem.J.，178，201-208(1979)。结果

在所有情况中该药物都能很好地耐受并且未见副作用。表1：菠萝蛋白酶对粪便排泄胆汁酸的作用对象                   给药前     给药后     给药后/给药前的比率剂量：276GDU的菠萝蛋白酶1                      512        788        1.542                      101        199        1.973                      227        396        1.74平均值(±标准差)       280(±122) 461(±266) 1.65剂量：1104GDU的菠萝蛋白酶4                      51         281        5.515                      31         148        4.476                      121        212        1.75平均值(±标准差)       68(±27)   214(±38)  3.15

表中数字表示在给药前及给药后期平均每天粪便中损失的胆汁酸(mg/天)。

计算在给药前及给药后期平均每天胆汁酸的输出并见表1。分别就276GDU及1104 GDU来说，使用165％及315％菠萝蛋白酶给药后观察到平均粪便胆汁酸输出增加。进一步观察发现给药后粪便的颜色发生变化，反映了菠萝蛋白酶的特别的红棕色。这种观察与观察到的粪便中胆汁酸输出增加有很好的相关性。结论

接受菠萝蛋白酶后，在自愿者中观察到的粪便中胆汁酸排泄的增加表明在适当条件下，胃肠胆汁酸受体可能被蛋白水解降解灭活。实施例3在健康自愿者中菠萝蛋白酶对血浆胆固醇及甘油三酯的作用

在观察到菠萝蛋白酶增加胆汁酸在粪便中的排泄后(详见实施例2)，调查了这种现象是否代表了血浆胆固醇浓度的降低、对降低冠状动脉疾病的发展机率是否重要，对此进行了进一步试验。在连续10天内，二十一名健康男性自愿者接受了安慰剂或含有约500明胶消化单位的酶的肠溶包衣菠萝蛋白酶制剂。在开始治疗前及试验后期通过标准医院化验室检验方法测定血浆胆固醇和甘油三酯浓度。结果

本试验结果表明10天的菠萝蛋白酶治疗将血浆胆固醇浓度平均降低了1 7％，将血浆甘油三酯浓度平均降低了31％。而对照组在此期间内观察到的降低不论是血浆胆固醇还是甘油三酯都低于10％(见表2)。表2：菠萝蛋白酶治疗对血浆甘油三酯和胆固醇浓度的作用。

菠萝蛋白酶治疗组		安慰剂治疗组
				治疗前甘油三酯(mg/l)n＝10	治疗后甘油三酯(mg/l)n＝10	治疗前甘油三酯(mg/l)n＝11	治疗后甘油三酯(mg/l)n＝11
270±80	185±38	120±17	110±15
				治疗前胆固醇(mg/l)n＝10	治疗后胆固醇(mg/l)n＝10	治疗前胆固醇(mg/l)n＝11	治疗后胆固醇(mg/l)n＝11
189±9	156±7	166±9	151±6

数值是10或11次观察的平均值±标准差。结论

用肠溶包衣菠萝蛋白酶产品对健康自愿者治疗10天降低了血浆甘油三酯和胆固醇的浓度，它们是冠状动脉疾病发展的重要危险因素。

Claims (7)

1.菠萝蛋白酶在制备降低或防止消化道重吸收胆汁酸的一种试剂中的用途。

2.菠萝蛋白酶在制备治疗或预防胆汁酸贮库调节的疾病的一种试剂中的用途。

3.权利要求2所述的用途，其特征是治疗或预防高脂血症，例如，高胆固醇血症。

4.权利要求2所述的用途，其特征是治疗或预防胆汁阻塞性肝病或肝脏机能不全。

5.权利要求1至4任一项所述的用途，其中菠萝蛋白酶被制成口服给药形式。

6.权利要求1至5任一项所述的用途，其中菠萝蛋白酶存在于延迟释放制剂形式中。

7.权利要求1至6任一项所述的用途，其中菠萝蛋白酶是被肠溶材料保护的。