CN114158667A - 一种北冬虫夏草多糖饮料及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种北冬虫夏草多糖饮料及其制备方法，属于食品加工技术领域。该北冬虫夏草多糖饮料包括以下重量份数的组分：北冬虫夏草多糖提取液100份、复合氨基酸粉5份、木糖醇4份、柠檬酸0.025份、山梨酸钾0.15份、羧甲基纤维素钠0.15份和β﹣环糊精0.2份，其中北冬虫夏草多糖提取液是从人工大米培养基中利用超滤技术提取的，不仅能大幅度降低北虫草多糖饮料的生产成本，而且可减少不必要的环境污染，并且北虫草多糖饮料营养物质丰富，适合各年龄段的人群饮用，制备工艺简单，适合大规模生产。

Description

一种北冬虫夏草多糖饮料及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种北冬虫夏草多糖饮料及其制备方法，属于食品加工技术领域。
背景技术
北冬虫夏草[Cordyceps militaris(Fr)Link.]，又名蛹虫草、北虫草，属子囊菌亚门、核菌纲、球壳目、麦角菌科、虫草属真菌。北冬虫夏草是虫草属真菌的模式种，其宿主主要为鳞翅目的蚕蛾科、舟蛾科、天蚕蛾科等，它是由子实体与菌核(即虫或蛹的尸体部分)两部分组成的复合体。冬季其蛰居土里，菌类寄生其中吸收营养，最后其体内充满菌丝而死。到了夏季，自其尸体之上生出“幼苗”(子实体)，形似草，夏至前后采集而得。北冬虫夏草是一种名贵的中药和高级滋补品,性味甘平，益肺肾，补精髓，止血化痰，用于肺结核、老人虚弱、贫血虚弱等，具有重要的药用价值。因为北冬虫夏草是一味珍贵的药材，目前主要用于泡制药酒或者制作药膳，虽然药酒可以将其有效成分充分利用，但是并不适合所有人群，而药膳的制备工艺复杂，蒸煮工序会破坏其有效成分，滋补效果不尽人意，所以如何发挥北冬虫夏草作用的同时得到一种新型的产品是目前最值得关注的问题。
虫草多糖作为北冬虫夏草的主要活性成分之一，是北冬虫夏草中含量最高的药理活性物质，含量可以达到10％，是一种很有价值的潜在新型药食两用资源。虫草多糖是由甘露糖、半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖、岩藻糖等组成的多聚糖，北冬虫夏草多糖对网状皮系统及巨噬细胞有明显激活作用，能调节免疫细胞间信息的传递与感受和促进淋巴细胞的转化，是一种非特异性免疫增强及调节剂，可激活机体的免疫活性细胞，特别是淋巴细胞及淋巴因子、单核巨噬细胞系统和NK细胞等，从而攻击靶细胞，发挥抗肿瘤作用，同时具有抗衰老、抗氧化、抗病毒、抗凝血、降血糖、降血脂等作用。目前，虫草多糖的提取方法主要有热水浸提法、酸浸提法、碱浸提法、超声波提取法、微波提取法等，上述这些方法由于存在虫草多糖溶出率低、产品杂质多、工艺复杂、生产周期长、生物活性低等缺点，使其工业化生产和大规模临床应用受到限制，难以保证虫草多糖的质量。因此，如何对具有生物活性的虫草多糖进行有效地提取和富集，对控制虫草多糖产品的质量具有十分重要的意义。
近年来人们对北冬虫夏草的需求量逐渐增加，导致对野生北冬虫夏草的开采过度，野生资源匮乏，为了满足社会需求，人工培养北冬虫夏草已进入产业化阶段，并取得了一定的经济效益，但是随之而来的问题是大量的培养基废弃物(下脚料)会发散变臭，造成环境污染，如何对北冬虫夏草废弃培养基加工、利用已成为一个迫切需要解决的问题，虽然目前有研究者将其作为动物饲料，但是并没有对其进行综合利用，但是北冬虫夏草人工培养基中充满菌丝，其中富含大量的虫草多糖，但因没有成熟的工艺对其进行有效成分的分离提取，只能作为废物弃掉。如果能从这些废弃物中高效提取有效成分制备虫草多糖，不仅能大幅度降低虫草多糖的生产成本，而且可综合利用资源，增加北冬虫夏草种植收益。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提出了一种北冬虫夏草多糖饮料及其制备方法，将北冬虫夏草人工培养基作为原料，利用超滤膜进行北虫草多糖的分离，并将其与复合氨基酸粉、木糖醇、柠檬酸、山梨酸钾、羧甲基纤维素钠和β﹣环糊精等原辅料进行配制得到一种北冬虫夏草多糖饮料，该制备方法不仅能大幅度降低北虫草多糖产品的生产成本，而且制备得到的北冬虫夏草饮料营养物质含量丰富，能够满足大部分人的需求。
为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
本发明提供了一种北冬虫夏草多糖饮料，包括以下重量份数的组分：北冬虫夏草多糖提取液100份、复合氨基酸粉5份、木糖醇4份、柠檬酸0.025份、山梨酸钾0.15份、羧甲基纤维素钠0.15份和β﹣环糊精0.2份。
进一步地，所述复合氨基酸粉包括甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、丝氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸、谷氨酸和天门冬氨酸。复合氨基酸粉一般都是蛋白质用酶水解制成的，会含有一些非氨基酸成分，各种氨基酸数量之和占复合氨基酸粉的比例在90％以上，富含人体必需的8种氨基酸。
进一步地，所述北冬虫夏草多糖提取液的制备方法包括以下步骤：
(1)菌种活化：将北冬虫夏草母种菌块接种到斜面培养基上培养得到活化斜面菌种；
(2)液体种子培养：将种子培养基灭菌，加入步骤(1)得到的活化斜面菌种培养得到液体菌种；
(3)固体发酵：将步骤(2)得到的液体菌种接种到大米培养基中，先避光培养，后见光培养至北冬虫夏草成熟；
(4)大米培养基预处理：收获北冬虫夏草，将剩下的大米培养基切片、烘干处理；
(5)大米培养基超微粉制备：将步骤(4)烘干后的大米培养基粉碎得到超微粉；
(6)超微粉中粗多糖提取：加入复合酶液对步骤(5)得到的超微粉中粗多糖进行提取，离心后去除残渣，得到超微粉中粗多糖提取液；
(7)多糖浓缩：用超滤膜对步骤(6)得到的粗多糖提取液进行过滤、浓度调节得到所述北冬虫夏草多糖提取液。
进一步地，步骤(1)中所述斜面培养基按质量百分比包括以下成分：蛋白胨0.5％、葡萄糖1％、NaCl 0.5％、CaCO3 0.02％、琼脂1.5％，pH值为7.2～7.4，培养温度为25℃，时间为7天；
进一步地，步骤(2)中所述种子培养基按质量百分比包括以下成分：葡萄糖2.5％、奶粉1％、磷酸二氢钾0.2％和硫酸镁0.2％，还包括微量的维生素B1，培养条件为25℃，180r/min培养5天；
进一步地，步骤(3)中所述大米培养基按质量百分比包括以下成分：发芽糙米80％和蚕蛹粉20％，还包括40毫升营养液，所述大米培养基具体制备步骤包括：将上述成分按配方称量，混匀分装入500毫升罐头瓶中，每瓶装35克，瓶口包扎聚丙烯薄膜，高压121℃灭菌30分钟后，温度降至30℃以下，每瓶接入步骤(2)得到的液体菌种2毫升。
进一步地，步骤(3)中所述避光培养的温度为20℃，湿度为75％，培养时间为5～7天，此时菌丝布满整个瓶面并扎到瓶底，所述见光培养的温度为20～25℃，湿度为80％，培养时间为45～60天。
进一步地，步骤(4)中当北冬虫夏草成熟后收获，进行采收即从子座根部剪断，将子座于50℃烘干至水分低于≤5％；将剩下的大米培养基取出后切片、烘干处理，烘干时间为每次3h，所述烘干处理后含水量为≤5％。
进一步地，步骤(5)中采用超音速气流粉碎机和行星球磨粉碎机对步骤(4)烘干后的大米培养基粉进行球磨6h得到超微粉。
进一步地，步骤(6)中采用复合酶水解和微波辅助萃取方法，所述复合酶液与超微粉的料液比为25:1，提取时间为20min，提取温度为70℃。
进一步地，步骤(7)中采用超滤设备进行活性富集，所述超滤膜的截留分子量为8000D～300KD，工作压力为0.2Mpa。将北冬虫夏草粗多糖提取液用泵打出进行膜过滤，工作3h到4h左右，得到分子量分布在8000D～300KD范围的多糖浓缩液。
进一步地，步骤(7)中采用苯酚-硫酸法和二硝基水杨酸法对多糖浓缩后的多糖含量进行测定，浓度调节至北冬虫夏草多糖提取液中多糖含量为500mg/100ml。
本发明还提供了一种上述的北冬虫夏草多糖饮料的制备方法，包括以下步骤：按所述重量份数称取各组分，75℃～85℃混合均匀后得到饮料原浆，将所述饮料原浆均质、杀菌、在无菌条件下灌装，检验合格后贮藏即可得到所述北冬虫夏草多糖饮料。
进一步地，所述均质的温度为65～75℃，压力为20～25Mpa，均质次数为2次。
进一步地，所述杀菌的温度为85～90℃，时间为10min。
进一步地，所述灌装的温度为30℃。
本发明公开了以下技术效果：
1)本发明的饮料所用到的北冬虫夏草多糖提取液是从人工大米培养基中提取的，北冬虫夏草大米培养基中总糖含量为15.2～21.93％，蛋白质含量9.34～14.35％，虫草多糖含量为6.35％～12.86％，营养物质含量丰富，为了避免像药膳或药酒制备过程中有效成分的损坏，将其直接作为有效成分添加到饮料当中，使制备的饮料活性物质含量得以控制，具有调节免疫功能的作用。
2)本发明的北冬虫夏草多糖饮料在制备过程中以北冬虫夏草多糖提取液、复合氨基酸粉、木糖醇、柠檬酸、山梨酸钾、羧甲基纤维素钠和β﹣环糊精为原料，其中北冬虫夏草多糖提取液具有双向免疫调节作用，主要通过器官免疫、细胞免疫和分子免疫来实现。能调节细胞免疫和体液免疫，增强巨噬细胞的吞噬能力，促进抗体的形成，增强血清溶菌酶活力，提高肝红细胞SOD活力，阻止外周白细胞数量的下降；复合氨基酸则可以增强人体免疫功能，改善肝、肾、胃肠功能，强化营养吸收能力，缓解机体疲劳；木糖醇、柠檬酸、山梨酸钾的作用分别作为甜味剂、酸度调节剂、防腐剂。另外，制备得到的北冬虫夏草多糖饮料营养物质丰富，适合各年龄段的人群饮用。
3)本发明中北冬虫夏草多糖提取液是从人工大米培养基中提取的，将超滤膜用于多糖的分离，具有不损害活性、分离效率高、工艺稳定、易控制、能耗低、设备简单、可连续生产、环保、绿色等优点，适合工业化生产，利用人工大米培养基不仅能大幅度降低北虫草多糖饮料的生产成本，而且可综合利用资源，减少不必要的环境污染，并且北虫草多糖饮料的制备工艺简单，适合大规模生产。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为北冬虫夏草人工栽培示意图；
图2为北冬虫夏草多糖饮料对小鼠脾细胞增殖作用影响图；
图3为北冬虫夏草多糖饮料与ConA协同对小鼠脾细胞增殖作用影响图；
图4为北虫草多糖饮料溶液对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红活性的影响图。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
本发明北冬虫夏草人工栽培示意图见图1。
本发明实施例所用各原料均可通过市售购买得到，均选符合国家标准，且重金属含量、微生物含量(大肠杆菌、致病菌等)等均不超过国家标准。
本发明实施例所用复合氨基酸粉包括甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、丝氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸、谷氨酸和天门冬氨酸。复合氨基酸粉一般都是蛋白质用酶水解制成的，会含有一些非氨基酸成分，各种氨基酸数量之和占复合氨基酸粉的比例在90％以上，富含人体必需的8种氨基酸。
本发明实施例所用北冬虫夏草多糖提取液按照以下步骤进行制备：(1)菌种活化：将北冬虫夏草母种菌块接种到斜面培养基(按质量百分比包括以下成分：蛋白胨0.5％、葡萄糖1％、NaCl 0.5％、CaCO30.02％、琼脂1.5％，pH值为7.2～7.4)上培养7天，培养温度为25℃得到活化斜面菌种；
(2)液体种子培养：将种子培养基(按质量百分比包括以下成分：葡萄糖2.5％、奶粉1％、磷酸二氢钾0.2％和硫酸镁0.2％，还包括微量的维生素B1)灭菌，加入步骤(1)得到的活化斜面菌种25℃，180r/min培养5天得到液体菌种；
(3)固体发酵：将步骤(2)得到的液体菌种接种到大米培养基(按质量百分比包括以下成分：发芽糙米80％和蚕蛹粉20％，还包括40毫升营养液，所述大米培养基具体制备步骤包括：将上述成分按配方称量，混匀分装入500毫升罐头瓶中，每瓶装35克，瓶口包扎聚丙烯薄膜，高压121℃灭菌30分钟后，温度降至30℃以下，每瓶接入步骤(2)得到的液体菌种2毫升)中，先20℃，湿度为75％避光培养5～7天，后20～25℃，湿度为80％，见光培养45～60天至北冬虫夏草成熟；
(4)大米培养基预处理：当北冬虫夏草成熟后收获，进行采收即从子座根部剪断，烘干至水分≤5％，将剩下的大米培养基取出后切片、烘干处理，烘干时间为每次3h，所述烘干处理后含水量为≤5％；
(5)大米培养基超微粉制备：采用超音速气流粉碎机和行星球磨粉碎机对步骤(4)烘干后的大米培养基粉进行球磨6h得到超微粉；
(6)超微粉中粗多糖提取：采用复合酶水解和微波辅助萃取方法，加入复合酶液对步骤(5)得到的超微粉中粗多糖进行提取，复合酶液与超微粉的料液比为25:1，提取时间为20min，提取温度为70℃，离心后去除残渣，得到超微粉中粗多糖提取液；
(7)多糖浓缩：采用超滤设备进行活性富集，用截留分子量为8000D～300KD的超滤膜在0.2Mpa对步骤(6)得到的粗多糖提取液进行浓缩，将北冬虫夏草粗多糖提取液用泵打出进行膜过滤，工作3h到4h，得到分子量分布在8000D～300KD范围的多糖浓缩液，之后过滤，采用苯酚-硫酸法和二硝基水杨酸法对多糖浓缩后的多糖含量进行测定，浓度调节至北冬虫夏草多糖提取液中多糖含量为500mg/100ml得到北冬虫夏草多糖提取液，氨基酸总量≥3.6g/100ml。北冬虫夏草多糖提取液制备过程中多糖提取率为15.86％，而常规提取方法中多糖提取率只达到了12.62％。
以下通过实施例对本发明的技术方案做进一步说明。
实施例1
以重量份数计，称取北冬虫夏草多糖提取液100份、复合氨基酸粉5份、木糖醇4份、柠檬酸0.025份、山梨酸钾0.15份、羧甲基纤维素钠0.15份和β﹣环糊精0.2份，混合均匀后得到饮料原浆，将饮料原浆在70℃，22Mpa下均质2次，均质后的产品在85℃下杀菌10min，杀菌后冷却至30℃，在无菌条件下灌装，对外观、密封性以及对产品的感官、理化、微生物等指标进行检测，检验灌装是否合格，合格后常温下贮藏即可得到北冬虫夏草多糖饮料。
实施例2
以重量份数计，称取北冬虫夏草多糖提取液100份、复合氨基酸粉5份、木糖醇4份、柠檬酸0.025份、山梨酸钾0.15份、羧甲基纤维素钠0.15份和β﹣环糊精0.2份，混合均匀后得到饮料原浆，将饮料原浆在65℃，25Mpa下均质2次，均质后的产品在90℃下杀菌10min，杀菌后冷却至30℃，在无菌条件下灌装，对外观、密封性以及对产品的感官、理化、微生物等指标进行检测，检验灌装是否合格，合格后常温下贮藏即可得到北冬虫夏草多糖饮料。
实施例3
以重量份数计，称取北冬虫夏草多糖提取液100份、复合氨基酸粉5份、木糖醇4份、柠檬酸0.025份、山梨酸钾0.15份、羧甲基纤维素钠0.15份和β﹣环糊精0.2份，混合均匀后得到饮料原浆，将饮料原浆在75℃，20Mpa下均质2次，均质后的产品在88℃下杀菌10min，杀菌后冷却至30℃，在无菌条件下灌装，对外观、密封性以及对产品的感官、理化、微生物等指标进行检测，检验灌装是否合格，合格后常温下贮藏即可得到北冬虫夏草多糖饮料。
实施例4
以重量份数计，称取北冬虫夏草多糖提取液100份、复合氨基酸粉5份、木糖醇4份、柠檬酸0.025份、山梨酸钾0.15份、羧甲基纤维素钠0.15份和β﹣环糊精0.2份，混合均匀后得到饮料原浆，将饮料原浆在65℃，24Mpa下均质2次，均质后的产品在86℃下杀菌10min，杀菌后冷却至30℃，在无菌条件下灌装，对外观、密封性以及对产品的感官、理化、微生物等指标进行检测，检验灌装是否合格，合格后常温下贮藏即可得到北冬虫夏草多糖饮料。
对比例1
同实施例1，其区别仅在于，以重量份数计，称取北冬虫夏草多糖提取液80份、复合氨基酸粉5份、木糖醇6份、柠檬酸0.5份、山梨酸钾0.15份、羧甲基纤维素钠0.2份和β﹣环糊精0.4份。
对比例2
同实施例1，其区别仅在于，均质的温度为80℃，压力为30Mpa。
对比例3
同实施例1，其区别仅在于，杀菌的温度为80℃，时间为20min。
对比例4
同实施例1，其区别仅在于，灌装的温度为50℃。
对比例5
同实施例1，其区别仅在于，不加入复合氨基酸。
对比例6
同实施例1，其区别仅在于，北冬虫夏草多糖提取液中多糖含量为200mg/100ml。
对比例7
市售北冬虫夏草饮料。测得其中北冬虫夏草多糖的含量为150mg/100ml。
试验例
感官评价
随机抽取15名男生和15名女生，将实施例1～4与对比例1～7的产品按照每份50ml分发给选取的30个人，并按照表1的评价标准进行打分。
表1评价标准
Figure BDA0003416841040000131
根据30个人对实施例1～4与对比例1～7的产品的打分结果，计算平均值，得到的感官评价结果见表2。
表2感官评价结果
整体风味 酸感 甜感 色泽 总体评价
实施例1 4.5 5 5 5 19.5
实施例2 5 5 5 5 20
实施例3 4.5 5 5 5 19.5
实施例4 4.5 5 5 5 19.5
对比例1 3 1 3 5 12
对比例2 3 5 5 4 17
对比例3 3 5 5 3 16
对比例4 3 4 4 4 15
对比例5 1 3 3 3 10
对比例6 3 5 5 3 16
对比例7 4 3 3 4 14
由表2可以看出，本发明实施例制备的北虫草多糖饮料在整体风味、酸感、甜感和色泽方面均优于对比例1～6和对比例7市售的饮料，说明本发明的方案制备得到的饮料可以被广大消费者接受。
免疫调节功能活性测试
(1)淋巴细胞的增殖转化试验
①北虫草多糖溶液单独对小鼠脾细胞增殖影响
将BALB/c小鼠脾细胞悬液(1×107个/ml)加入到96孔板中，每孔50μl(含细胞为5×105个)，在二氧化碳培养箱中预培养24h。然后，正常对照组(control)每孔加入50μlRPMI1640；阳性对照组每孔加入50μl含2μg/ml伴刀豆素蛋白A(ConA)RPMI1640；三个实验组每孔分别加入50μl不同浓度的北虫草多糖饮料溶液，加入后每孔北虫草多糖终浓度为50、100、200μg/ml。96孔板继续在培养箱中培养72小时，用MTT法测定脾细胞增殖指数。此外，北虫草多糖溶夜作用至68h，在各孔加入MTT(5mg/mL)10μl，继续培养4h后加入10％SDS-0.01NHCl溶液100μl溶解蓝紫色结晶并孵育过夜。在550nm波长条件下，用酶标仪测定各孔的吸光度。测试结果见图2。
细胞增殖刺激指数＝北虫草多糖溶液组的光吸收值/正常对照组的光吸收值
②北虫草多糖溶液与ConA协同对小鼠脾细胞增殖影响
将BALB/c小鼠脾细胞悬液(1×107个/ml)加入到96孔板中，每孔50μl(含细胞为5×105个)，在二氧化碳培养箱中预培养24h。然后，对照组(ConA)每孔加入50μl含2μg/ml伴刀豆素蛋白ARPMI1640；三个实验组每孔分别加入50μl含2μg/ml伴刀豆素蛋白A的不同浓度北虫草多糖饮料溶液，加入后每孔北虫草多糖终浓度为50、100、200μg/ml。96孔板继续在培养箱中培养72小时，用MTT法测定脾细胞增殖指数。此外，北虫草多糖溶夜作用至68h，在各孔加入MTT10μl，继续培养4h后加入10％SDS-0.01N HCl溶液100μl溶解蓝紫色结晶并孵育过夜。在550nm波长条件下，用酶标仪测定各孔的吸光度。测试结果见图3。
细胞增殖刺激指数＝实验组(北虫草多糖溶液+ConA)光吸收值/无北虫草多糖溶液处理的对照组(含2μg/ml ConA)光吸收值
以上结果表明北虫草多糖溶液能够明显调节小鼠脾细胞转化增殖，并呈一定浓度依赖关系，是一种典型的双向免疫调节剂，即其在低浓度时可刺激淋巴细胞增殖，高浓度时则抑制之。
(2)小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红试验
制备小鼠腹腔巨噬细胞并调整细胞密度为2×106个/ml接种于96孔细胞培养板中，细胞经纯化以后加入分别加入实施例1制备得到的北虫草多糖饮料溶液，并使北虫草多糖终浓度为50、100、200μg/ml。于CO2培养箱中培养24h后，弃培养基，细胞用温PBS洗涤两次，然后每孔加入50μl 0.075％中性红溶液继续培养1h。用PBS洗涤2次以除去未被吞噬的染料，最后每孔加入100μl细胞裂解液(1mol/l乙酸：乙醇＝1:1)裂解过夜，用酶标仪于570nm波长条件下测定各孔中性红吸光度值。同样以加入终浓度为10μg/ml的脂多糖(LPS)为阳性对照，以仅加培养基的孔为阴性对照。按下式计算巨噬细胞吞噬指数：
中性红吞噬指数＝Abs样品/Abs对照
结果见图4，试验结果表明北虫草多糖饮料溶液能激活巨噬细胞、提高巨噬细胞对中性红的吞噬能力，具有提高增强机体的免疫力的潜在能力。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (10)

1.一种北冬虫夏草多糖饮料，其特征在于，包括以下重量份数的组分：北冬虫夏草多糖提取液100份、复合氨基酸粉5份、木糖醇4份、柠檬酸0.025份、山梨酸钾0.15份、羧甲基纤维素钠0.15份和β﹣环糊精0.2份。
2.根据权利要求1所述的北冬虫夏草多糖饮料，其特征在于，所述复合氨基酸粉包括甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、丝氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸、谷氨酸和天门冬氨酸。
3.根据权利要求1所述的北冬虫夏草多糖饮料，其特征在于，所述北冬虫夏草多糖提取液的制备方法包括以下步骤：
(1)菌种活化：将北冬虫夏草母种菌块接种到斜面培养基上培养得到活化斜面菌种；
(2)液体种子培养：将种子培养基灭菌，加入步骤(1)得到的活化斜面菌种培养得到液体菌种；
(3)固体发酵：将步骤(2)得到的液体菌种接种到大米培养基中，先避光培养，后见光培养至北冬虫夏草成熟；
(4)大米培养基预处理：收获北冬虫夏草，将剩下的大米培养基切片、烘干处理；
(5)大米培养基超微粉制备：将步骤(4)烘干后的大米培养基粉碎得到超微粉；
(6)超微粉中粗多糖提取：加入复合酶液对步骤(5)得到的超微粉中粗多糖进行提取，离心后去除残渣，得到超微粉中粗多糖提取液；
(7)多糖浓缩：用超滤膜对步骤(6)得到的粗多糖提取液进行过滤、浓度调节得到所述北冬虫夏草多糖提取液。
4.根据权利要求3所述的北冬虫夏草多糖饮料，其特征在于，步骤(1)中所述斜面培养基按质量百分比包括以下成分：蛋白胨0.5％、葡萄糖1％、NaCl 0.5％、CaCO3 0.02％、琼脂1.5％，pH值为7.2～7.4，培养温度为25℃，时间为7天；
步骤(2)中所述种子培养基按质量百分比包括以下成分：葡萄糖2.5％、奶粉1％、磷酸二氢钾0.2％和硫酸镁0.2％，培养条件为25℃，180r/min培养5天；
步骤(3)中所述大米培养基按质量百分比包括以下成分：发芽糙米80％和蚕蛹粉20％，所述避光培养的温度为20℃，湿度为75％，培养时间为5～7天，所述见光培养的温度为20～25℃，湿度为80％，培养时间为45～60天。
5.根据权利要求3所述的北冬虫夏草多糖饮料，其特征在于，步骤(4)中所述烘干处理后含水量为≤5％；步骤(6)中所述复合酶液与超微粉的料液比为25:1，提取时间为20min，提取温度为70℃。
6.根据权利要求3所述的北冬虫夏草多糖饮料，其特征在于，步骤(7)中所述超滤膜的截留分子量为8000D～300KD，工作压力为0.2Mpa。
7.根据权利要求3所述的北冬虫夏草多糖饮料，其特征在于，步骤(7)中浓度调节至北冬虫夏草多糖提取液中多糖含量为500mg/100ml。
8.一种权利要求1～7任一项所述的北冬虫夏草多糖饮料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：按所述重量份数称取各组分，混合均匀后得到饮料原浆，将所述饮料原浆均质、杀菌、灌装，检验合格后贮藏即可得到所述北冬虫夏草多糖饮料。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述均质的温度为65～75℃，压力为20～25Mpa，均质次数为2次。
10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述杀菌的温度为85～90℃，时间为10min，所述灌装的温度为30℃。
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