CN114146150B - 一种用于治疗大菱鲆盾纤毛虫病的药物组合物及其应用 - Google Patents

一种用于治疗大菱鲆盾纤毛虫病的药物组合物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种用于治疗大菱鲆盾纤毛虫病的药物组合物及其应用，属于药物领域，其活性成分由姜黄提取物和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠组成，所述姜黄提取物为姜黄药材的提取物，所述姜黄药材与脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠的重量比为(100～400)：4，可选地为200：4、100:4或400:4。通过体外杀虫试验和动物感染试验证实添加姜黄和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)可杀灭盾纤毛虫，可使大菱鲆盾纤毛虫感染率、死亡率明显降低，具有较好的抗盾纤毛虫作用。姜黄和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)联用后，杀虫效果有明显提高。首次发现姜黄乙醇提取液和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)联用可以增强杀灭盾纤毛虫的效果。

Description

一种用于治疗大菱鲆盾纤毛虫病的药物组合物及其应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种用于治疗大菱鲆盾纤毛虫病的药物组合物及其应用。
背景技术
大菱鲆(Scophthalmus maximus)，又称多宝鱼，自然分布于大西洋东部至东北部的欧洲海岸，营底栖生活。自引入我国以来，创造了良好的经济效益，其人工养殖已成为我国海水养殖的重要支柱产业之一。然而，随着大菱鲆养殖密度不断增加，以及病害防治研究滞后，导致各种养殖疾病接踵而至。在各种养殖疾病中，由盾纤毛虫、隐核虫、车轮虫及鞭毛虫引起的寄生虫病给大菱鲆养殖业造成较大损失，而其中危害最大的是盾纤毛虫病，属于快速致命的全身性感染。
大菱鲆寄生的盾纤毛虫(Paralembus digitiformis)为蟹栖异阿脑虫，属于嗜污科的寄生虫，以横二分裂进行繁殖，其引起的大菱鲆病害具有传染力强，危害性大的特点，特别是苗种一旦爆发就会给养殖户造成巨大损失。病原主要为蟹栖异阿脑虫，可通过多种途径进入养殖系统而导致发病。盾纤毛虫不仅大量存在于大菱鲆患部、体表、腮，也大量见于肝、脾、肾、脑、心，同时大量见于腹水。感染初期病鱼体表出现白斑、粘液增多，随着病情的发展病灶处组织出现红肿，有柔软浮肿感，严重时鱼的躯干部皮肤也会出现病灶，直至溃烂、出血。患病鱼一般体色变暗，活力减弱，摄食量降低，生长减慢；在养殖池中散群，时常出现打转游动现象。纤毛虫可感染大部分包括脑组织在内的内脏器官。
目前国内治疗盾纤毛虫类病害的有效方法不多，在实际生产中，为了防止疾病的发生，抗生素和化学消毒剂经常被用来治疗鱼体疾病，但由于养殖业者缺乏健康养殖意识，盲目大剂量反复使用抗生素和化学消毒剂，甚至许多违禁药品屡屡使用，导致鱼体大量出现药物残留现象，致使水产品存在严重的安全隐患。针对纤毛虫病危害的频发，国内主要采用甲醛、硫酸铜等来防治该病的发生，甚至有养殖户使用违禁农药进行纤毛虫疾病的治疗。但使用农药极容易造成大菱鲆中毒死亡，而且长期使用农药及化学药物治疗盾纤毛虫病，不仅污染海洋环境，也成为当前水产品出口的绿色贸易壁垒问题，因此寻找新型的、安全、环保的杀虫药物成为当务之急。
脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)为无色、白色或浅黄色粘稠液体，气味为典型皂味的碱性阴离子表面活性剂。易溶于水，具有优良的去污、乳化、发泡性能和抗硬水性能，广泛应用于香波、浴液、餐具洗涤剂、复合皂等洗涤化妆用品；用于纺织工业润湿剂、清洁剂等。
姜黄(拉丁学名：Curcuma longa L.)，性味辛、苦，温。归脾、肝经。破血行气，散结止痛的功能。主治：气滞血瘀，胸腹疼痛，跌扑肿痛，风湿痹痛。目前虽有研究证明姜黄提取物具有一定的杀虫杀菌活性，但姜黄在抗大菱鲆盾纤毛虫的作用尚未见报道。
发明内容
发明目的
本发明的目的在于提供一种对大菱鲆毒性小、对环境友好的用于治疗大菱鲆盾纤毛虫病的药物组合物及其应用，可减少大菱鲆养殖过程因治疗盾纤毛虫病而排放的甲醛、硫酸铜和违禁农药对海洋的污染。
解决方案
为实现本发明目的，本发明采用的技术方案如下：
一方面，本发明提供了一种用于治疗大菱鲆盾纤毛虫病的药物组合物，其活性成分由姜黄提取物和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠组成。
进一步地，所述姜黄提取物为姜黄药材的提取物，所述姜黄药材与脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠的重量比为(100～400)：4，可选地为200:4、100:4或400:4。
进一步地，所述姜黄提取物为姜黄药材的醇提取液，可选地为乙醇提取液。
进一步地，所述姜黄提取液的制备方法为：将姜黄药材粉碎后加食品级95％乙醇，浸渍提取，浓缩获得姜黄醇提取液，可选地，每200g姜黄药材，经粉碎后，加入多倍量的食品级95％乙醇，浸渍提取，浓缩至200mL得姜黄醇提取液，可选地，每200g姜黄药材，经粉碎后，加入10倍量的食品级95％乙醇，浸渍提取，浓缩至200mL得姜黄醇提取液。
另一方面，提供一种所述的用于治疗大菱鲆盾纤毛虫病的药物组合物的制备方法，其特征在于，将脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠加入到姜黄提取物中混合均匀，可选地，所述姜黄提取物为姜黄药材的醇提取液，可选地，所述姜黄提取物为姜黄药材的乙醇提取液，可选地，所述姜黄提取液的制备方法为：将姜黄药材粉碎后加食品级95％乙醇，浸渍提取，浓缩获得姜黄醇提取液，可选地，每200g姜黄药材，经粉碎后，加入多倍量的食品级95％乙醇，浸渍提取，浓缩至200mL得姜黄乙醇提取液，可选地，每200g姜黄药材，经粉碎后，加入10倍量的食品级95％乙醇，浸渍提取，浓缩至200mL得姜黄乙醇提取液。
再一方面，提供一种所述的用于治疗大菱鲆盾纤毛虫病的药物组合物的使用方法，将所述药物组合物泼洒至海水中，对患盾纤毛虫病大菱鲆的进行药浴。
进一步地，药浴方法为：每天药浴30分钟，连续药浴5-7天。
还一方面，提供一种药物组合物在制备抗盾纤毛虫药物或饲料添加剂中的应用，所述药物组合物包括姜黄提取物和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠，所述姜黄提取物为姜黄药材的提取物。
进一步地，所述姜黄提取物为姜黄药材的提取物，所述姜黄药材与脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠的重量比为(100～400)：4，可选地为200：4、100:4或400:4。
进一步地，所述姜黄提取物为姜黄药材的醇提取液；可选地，所述姜黄提取物的制备方法为：将姜黄药材粉碎后加食品级95％乙醇，浸渍提取，浓缩获得姜黄醇提取液，可选地，每200g姜黄药材，经粉碎后，加入多倍量的食品级95％乙醇，浸渍提取，浓缩至200mL得姜黄醇提取液，可选地，每200g姜黄药材，经粉碎后，加入10倍量的食品级95％乙醇，浸渍提取，浓缩至200mL得姜黄乙醇提取液。
进一步地，每8000kg海水中泼洒1L药物组合物，用于治疗患盾纤毛虫病大菱鲆，可选地，治疗方法采用药浴，可选地，每天药浴30分钟，连续药浴5-7天。
发明人通过取姜黄100～400g，经过乙醇提取后，在提取液中加入4g脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)，混合均匀，将混合液泼洒到1000kg水中，进行患病大菱鲆的药浴。
有益效果
通过体外杀虫试验和动物感染试验证实添加姜黄和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)可杀灭盾纤毛虫，可使大菱鲆盾纤毛虫感染率、死亡率明显降低，具有较好的抗盾纤毛虫作用。姜黄和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)联用后，杀虫效果有明显提高。首次发现姜黄乙醇提取液和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)联用可以增强杀灭盾纤毛虫的效果。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
另外，为了更好的说明本发明，在下文的具体实施方式中给出了众多的具体细节。本领域技术人员应当理解，没有某些具体细节，本发明同样可以实施。在一些实施例中，对于本领域技术人员熟知的原料、元件、方法、手段等未作详细描述，以便于凸显本发明的主旨。
除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。
实施例1
脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)液体制剂的制备：取4g的脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)，加入200mL的食品级95％乙醇，混匀，既得。
该实施例1的用法用量：取实施例1提取液1L，泼洒到2000kg海水中，进行患盾纤毛虫病大菱鲆的药浴，每天药浴30分钟，连续药浴5-7天。
实施例2
姜黄提取液的制备：取200g姜黄药材，粉碎，加入10倍量的食品级95％乙醇，摇床摇晃浸渍提取24h-48h，提取液浓缩至200mL。
该实施例2的用法用量：取实施例2提取液1L，泼洒到1000kg海水中，进行患盾纤毛虫病大菱鲆的药浴，每天药浴30分钟，连续药浴5-7天。
实施例3
姜黄提取物和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)制剂的制备：取姜黄200g，粉碎，加入10倍量的食品级95％乙醇提取，摇床摇晃浸渍提取24h-48h，提取液浓缩到200mL，加入4g脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)。
该实施例3的用法用量：取实施例3提取液1L，泼洒到8000kg海水中，进行患盾纤毛虫病大菱鲆的药浴，每天药浴30分钟，连续药浴5-7天。
实施例4
姜黄提取液的制备：取100g姜黄药材，粉碎，加入10倍量的食品级95％乙醇，摇床摇晃浸渍提取24h-48h，提取液浓缩至200mL。
实施例5
姜黄提取液的制备：取400g姜黄药材，粉碎，加入10倍量的食品级95％乙醇，摇床摇晃浸渍提取24h-48h，提取液浓缩至200mL。
实施例6
姜黄提取物和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)制剂的制备：取姜黄100g，粉碎，加入10倍量的食品级95％乙醇提取，摇床摇晃浸渍提取24h-48h，提取液浓缩到200mL，加入4g脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)。
实施例7
姜黄提取物和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)制剂的制备：取姜黄400g，粉碎，加入10倍量的食品级95％乙醇提取，摇床摇晃浸渍提取24h-48h，提取液浓缩到200mL，加入4g脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)。
联合抗虫浓度指数检测方法：参考分级抑制浓度(fractional inhibitoryconcentration，FIC)的计算公式：FIC指数＝MIC(A组联合)/MIC(A组单用)+MIC(B组联合)/MIC(B组单用)。FIC指数判读标准：当FIC指数小于0.5时，两种药为协同作用；当FIC指数为0.5～1时，两种药为相加作用；当FIC指数大于l且小于2时，两种药为无关作用；当FIC指数大于2时，两种药为拮抗作用。
下面结合体外杀虫试验说明实施例1、2、3的杀灭盾纤毛虫效果。
体外杀虫试验：取96深孔板，先在每孔加入0.6mL的海水，再加入0.6mL的实施例1，倍比稀释，稀释至第12孔，药物浓度分别为1/2-1/4096；按照此方法，依次稀释实施例2、3和95％乙醇，将稀释好的样品每个吸取120μL，加入到96孔细胞培养板，然后每个孔内加入120μL的盾纤毛虫虫液，此时各孔的浓度分别为1/4-1/8192，轻摇细胞培养板1分钟，然后静置2小时，倒置显微镜观察纤毛虫是否死亡，判断药物效果。同时设置空白对照组，空白对照组的盾纤毛虫浓度和试验组一样。结果表明：95％乙醇溶剂对照组的最低杀虫浓度为1:8，实施例1的最低体外杀虫浓度为1:2048，实施例2的最低体外杀虫浓度为1:1024，实施例3的最低体外杀虫浓度为1:8192。通过体外杀虫试验，姜黄和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)联用可以明显提升杀虫效果，同样的杀虫效果，姜黄提取物和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)联用后的最低使用浓度是单用姜黄提取物的25％，是单用脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)的12.5％，可以明显降低两个物料的使用量。同时也可得出实施例3的联合杀虫FIC指数为3/8，小于0.5，说明姜黄提取物和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)具有协同作用。
下面结合体外杀虫试验说明实施例1、4、5、6、7的杀灭盾纤毛虫效果。
体外杀虫试验：取实施例1体积1mL加入100mL的量瓶中，加海水至刻度，混合均匀，配制成1:100的溶液，以此浓度为基准，倍比稀释1:200、1:400、1:600、1:800、1:1000、1:1200....至1:10000系列浓度；按照此方法，依次稀释实施例4、5、6、7和95％乙醇，将稀释好的样品每个吸取120μL，加入到96孔细胞培养板，然后每个孔内加入120μL的盾纤毛虫虫液，轻摇细胞培养板1分钟，然后静置2小时，倒置显微镜观察纤毛虫是否死亡，判断药物效果。同时设置空白对照组，空白对照组的盾纤毛虫浓度和试验组一样。结果表明：95％乙醇溶剂对照组对纤毛虫存活无影响，实施例1的最低体外杀虫浓度为1:2000；实施例4的最低体外杀虫浓度为1:600，实施例5的最低体外杀虫浓度为1:2000，实施例6的最低体外杀虫浓度为1:6800；实施例7的最低体外杀虫浓度为1:9400。通过体外杀虫试验，姜黄和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)联用可以明显提升杀虫效果，同样的杀虫效果，姜黄提取物和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)联用后的使用浓度降低，可以明显降低两个物料的使用量。同时也可得出实施例6、7的联合杀虫FIC指数分别为13/34、10/47，均小于0.5，说明姜黄提取物和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)具有协同作用。
观察实施例1、2、3对防治大菱鲆盾纤毛虫病的药效。
下面结合具体的试验说明姜黄的抗盾纤毛虫试验。
大菱鲆攻毒模型构建：取指数生长期的盾纤毛虫幼虫用于攻毒。用铁纱布在大菱鲆(体重约200g)背部肌肉出摩擦2cm×2cm的擦伤面积，按照约50000/L加入虫体，养鱼水体30L,水温12℃，充氧，正常饲喂大菱鲆。每天观察溃疡处变化，从伤口处轻轻刮下粘液或组织在显微镜下观察拍照并计数，感染2天后建立大菱鲆盾纤毛虫疾病。
药效试验：分5组，每组20尾，同时每组设立平行组，第一组为模型对照组：不做任何药物处理的疾病模型组；第二组为实施例1试验组，攻毒并在饲料中添加实施例1，每天饲喂；第三、四组分别为实施例2、3采取药浴的方式进行效果验证，实施例1、2、3使用的药浴剂量都为1L提取液泼洒到1000kg的海水中(见表1)，进行患盾纤毛虫病的大菱鲆药浴，每天药浴30分钟，第五组为健康对照组。试验结果观察通过接种环轻轻刮取试验组和对照组患病部位，在显微镜下观察纤毛虫活力和数量。试验进行7天，感染率＝(感染数+死亡数)/20×100％，死亡率＝死亡数/20×100％。结果见表1。
表1.各实施例抗盾纤毛虫疾病的效果
试验结果表明，实施例3的效果明显好于实施例1、实施例2，说明姜黄的醇提取液和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)联用之后效果显著的增强。姜黄的醇提取液和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)在防治大菱鲆盾纤毛虫疾病方面有显著疗效，可以降低大菱鲆盾纤毛虫疾病的死亡率和感染率，相比甲醛，硫酸铜等化学药品更安全，保障了食品安全，不会对鱼的采食造成明显影响，不影响大菱鲆的生长，可减少养殖户的经济损失。同时，减少了甲醛、硫酸铜等化学药的使用，对海洋的环境保护具有更深远的意义。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (19)

1.一种用于治疗大菱鲆盾纤毛虫病的药物组合物，其特征在于，其活性成分由姜黄提取物和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠组成；
所述姜黄提取物为姜黄药材的提取物，所述姜黄提取物为姜黄药材的乙醇提取液；所述姜黄提取液的制备方法为：将姜黄药材粉碎后加食品级95%乙醇，浸渍提取，浓缩获得姜黄乙醇提取液；
所述姜黄药材与脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠的重量比为（100~400）：4。
2.根据权利要求1所述的用于治疗大菱鲆盾纤毛虫病的药物组合物，其特征在于，所述姜黄药材与脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠的重量比为200：4。
3.根据权利要求1所述的用于治疗大菱鲆盾纤毛虫病的药物组合物，其特征在于，所述姜黄药材与脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠的重量比为100:4。
4.根据权利要求1所述的用于治疗大菱鲆盾纤毛虫病的药物组合物，其特征在于，所述姜黄药材与脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠的重量比为400:4。
5.根据权利要求1所述的用于治疗大菱鲆盾纤毛虫病的药物组合物，其特征在于，所述姜黄提取液的制备方法为：每200g姜黄药材，经粉碎后，加入多倍量的食品级95%乙醇，浸渍提取，浓缩至200mL得姜黄醇提取液。
6.根据权利要求1所述的用于治疗大菱鲆盾纤毛虫病的药物组合物，其特征在于，所述姜黄提取液的制备方法为：每200g姜黄药材，经粉碎后，加入10倍量的食品级95%乙醇，浸渍提取，浓缩至200mL得姜黄乙醇提取液。
7.一种权利要求1至6任一所述的用于治疗大菱鲆盾纤毛虫病的药物组合物的制备方法，其特征在于，将脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠加入到姜黄提取物中混合均匀，所述姜黄提取物为姜黄药材的乙醇提取液。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述姜黄提取液的制备方法为：将姜黄药材粉碎后加食品级95%乙醇，浸渍提取，浓缩获得姜黄乙醇提取液。
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述姜黄提取物的制备方法为：每200g姜黄药材，经粉碎后，加入多倍量的食品级95%乙醇，浸渍提取，浓缩至200mL得姜黄乙醇提取液。
10.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述姜黄提取物的制备方法为：每200g姜黄药材，经粉碎后，加入10倍量的食品级95%乙醇，浸渍提取，浓缩至200mL得姜黄乙醇提取液。
11.一种药物组合物在制备抗盾纤毛虫药物或饲料添加剂中的应用，其特征在于，所述药物组合物为姜黄提取物和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠，所述姜黄提取物为姜黄药材的乙醇提取液，所述姜黄提取物的制备方法为：将姜黄药材粉碎后加食品级95%乙醇，浸渍提取，浓缩获得姜黄乙醇提取液；
所述姜黄提取物为姜黄药材的提取物，所述姜黄药材与脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠的重量比为（100~400）：4。
12.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述姜黄提取物为姜黄药材的提取物，所述姜黄药材与脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠的重量比为200：4。
13.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述姜黄提取物为姜黄药材的提取物，所述姜黄药材与脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠的重量比为100:4。
14.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述姜黄提取物为姜黄药材的提取物，所述姜黄药材与脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠的重量比为400:4。
15.根据权利要求11至14任一所述的应用，其特征在于，所述姜黄提取物的制备方法为：每200g姜黄药材，经粉碎后，加入多倍量的食品级95%乙醇，浸渍提取，浓缩至200mL得姜黄醇提取液。
16.根据权利要求11至14任一所述的应用，其特征在于，所述姜黄提取物的制备方法为：每200g姜黄药材，经粉碎后，加入10倍量的食品级95%乙醇，浸渍提取，浓缩至200mL得姜黄乙醇提取液。
17.根据权利要求11至14任一所述的应用，其特征在于，每8000kg海水中泼洒1L药物组合物，用于治疗患盾纤毛虫病大菱鲆。
18.根据权利要求11至14任一所述的应用，其特征在于，所述药物组合物为药浴组合物。
19.根据权利要求11至14任一所述的应用，其特征在于，每天药浴30分钟，连续药浴5-7天。
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