CN114133464A - 一种红藻硫酸低聚糖及其制备方法与应用 - Google Patents

一种红藻硫酸低聚糖及其制备方法与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114133464A
CN114133464A CN202210059934.7A CN202210059934A CN114133464A CN 114133464 A CN114133464 A CN 114133464A CN 202210059934 A CN202210059934 A CN 202210059934A CN 114133464 A CN114133464 A CN 114133464A
Authority
CN
China
Prior art keywords
red algae
fermented material
sulfated oligosaccharide
preparation
collecting
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202210059934.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114133464B (zh
Inventor
刘光明
张军
刘庆梅
刘艳
谷福蝶
唐金稳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jimei University
Original Assignee
Jimei University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jimei University filed Critical Jimei University
Priority to CN202210059934.7A priority Critical patent/CN114133464B/zh
Publication of CN114133464A publication Critical patent/CN114133464A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114133464B publication Critical patent/CN114133464B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/702—Oligosaccharides, i.e. having three to five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种红藻硫酸低聚糖及其制备方法与应用，其包括：将红藻粉末、超纯水与果葡糖浆混合，获得预发酵物料；将预发酵物料灭菌后，接入乳杆菌发酵培养6～36h，获得发酵料；将发酵料灭菌后，离心，收集上清液；向上清液加入2～5倍体积的无水乙醇，过程中不断搅拌，静置过夜，离心，收集沉淀；将沉淀冻干后，复溶，上样于DEAE‑52纤维素柱，利用不同浓度NaCl溶液阶段洗脱，收集630nm下吸光度大于0.5的部分，得到红藻硫酸低聚糖。该方法制得的红藻硫酸低聚糖可以稳定肥大细胞形态抑制Ca2+内流，影响肥大细胞的激活，缓解小鼠被动皮肤过敏症状。

Description

一种红藻硫酸低聚糖及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种红藻硫酸低聚糖及其制备方法与应用。
背景技术
肥大细胞在如食物过敏等机体炎症反应的效应阶段起着至关重要的作用，肥大细胞因表面存在大量FcεRI受体，可以与IgE特异性结合，当肥大细胞受抗原刺激激活后能够迅速释放大量β-氨基己糖苷酶等颗粒物质和组胺等炎症因子，可以在组织内引起速发型过敏反应或炎症。根据肥大细胞脱颗粒特性建立的Anti-DNP-IgE/BSA大鼠嗜碱性粒细胞经典脱颗粒模型被广泛应用于肥大细胞稳定剂的筛选及抗组胺药物活性评价等。被动皮肤过敏反应，也称PCA反应(PCA reaction)，是利用如DNP-BSA/HSA等半抗原刺激IgE敏化小鼠，并利用肥大细胞特异性染料甲苯胺蓝进行现象扩大，通过小鼠耳廓蓝斑反应小鼠被动皮肤过敏症状严重程度，以此来评价天然活性物质在体内对肥大细胞激活的抑制作用。
研究表明硫酸酯基是酸性多糖的主要活性基团，ι-卡拉胶构型多糖的生物活性也明显高于单硫酸基团的κ-卡拉胶构型多糖，因此刺麒麟菜多糖在生物医药领域也有着很大的发展前景。但植物纤维多糖往往存在分子量较大、黏度高、溶解性差等特征，导致加工利用困难，生物利用度低，活性不能达到预期效果。
随着科技的不断进步，目前也开发出了一系列改性多糖的方法，但大多依靠高温高压、强酸强碱、酶解、超声等处理方式。高温高压和超声处理对于多糖的碳环结构以及活性基团尤其是硫酸根具有破坏作用；强酸强碱是制备卡拉胶材料常用的方式，但会造成环境污染和水资源的浪费；酶法反应安全温和，但特异性较强，往往容易过度降解反而降低多糖的溶液稳定性；上述方式对于天然多糖的物理性质均有不同程度的改善但容易对生物活性造成负影响，破坏营养结构。
因此开发一种温和的改性制备方式并以此得到溶解性好、生物利用度高的具有肥大细胞稳定活性的红藻硫酸低聚糖十分有意义。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提出一种红藻硫酸低聚糖及其制备方法与应用，该方法制得的红藻硫酸低聚糖可以通过稳定肥大细胞形态抑制Ca2+内流，影响肥大细胞的激活并进一步缓解小鼠被动皮肤过敏症状。
为了实现上述目的，本发明的实施例在一方面提出了一种红藻硫酸低聚糖的制备方法，其包括：
将红藻粉末、超纯水与果葡糖浆混合，获得预发酵物料；
将所述预发酵物料灭菌后，接入乳杆菌发酵培养6～36h，获得发酵料；
将所述发酵料灭菌后，离心，收集上清液；
向所述上清液加入2～5倍体积的无水乙醇，过程中不断搅拌，静置过夜，离心，收集沉淀；
将所述沉淀冻干后，复溶，上样于DEAE-52纤维素柱，利用不同浓度NaCl溶液阶段洗脱，收集630nm下吸光度大于0.5的部分，得到红藻硫酸低聚糖。
根据本发明实施例的一种红藻硫酸低聚糖的制备方法，该方法利用生物改性制备的红藻硫酸低聚糖分子量在2～50kDa，硫酸根含量在10％～30％，表观粘度在0.6～1.2mPa.s，溶解度在80％～95％；并可以通过稳定肥大细胞形态抑制Ca2+内流，影响肥大细胞的激活并进一步缓解小鼠被动皮肤过敏症状；该方法反应温和、操作简便、绿色安全无污染，可以满足食品加工安全要求。
另外，根据本发明上述实施例提出的一种红藻硫酸低聚糖的制备方法，还可以具有如下附加的技术特征：
可选地，所述乳杆菌为清酒乳杆菌Lactobacillus sakei subsp.Sakei。
可选地，所述乳杆菌的接菌量为0.5％～8.0％的OD600值为1.5～2.2的活化菌液。
可选地，第一次灭菌条件为100～134℃，5～30min；第二次灭菌条件为80～100℃，1～30min。
可选地，离心条件为6000～8000r/min，离心5～10min。
可选地，NaCl溶液的洗脱浓度为0、0.5mol/mL、1mol/mL、2mol/mL。
可选地，红藻粉末与超纯水按照1:50～1:70混合，加入1～5％果葡糖浆。
本发明的实施例在另一方面提出了一种红藻硫酸低聚糖，其采用上述的制备方法制得。
本发明的实施例在又一方面提出了上述红藻硫酸低聚糖在制备肥大细胞稳定剂中的应用。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
图1为根据本发明实施例1的采用DEAE-52纤维素柱进行不同浓度NaCl溶液洗脱的纯化曲线；
图2为根据本发明对比例1的采用DEAE-52纤维素柱进行不同浓度NaCl溶液洗脱的纯化曲线；
图3为根据本发明实施例的F-ESO-3与L-ESP-3的单糖组成测定结果；
图4为根据本发明实施例的L-ESP-3与F-ESO-3的高效凝胶渗透色谱图；
图5为根据本发明实施例的L-ESP-3与F-ESO-3的流变学表观粘度分析结果；
图6为根据本发明实施例的L-ESP-3与F-ESO-3的傅里叶红外光谱图；
图7为根据本发明实施例的L-ESP-3与F-ESO-3对肥大细胞激活抑制作用的脱颗粒效率；
图8为根据本发明实施例的L-ESP-3与F-ESO-3对肥大细胞激活抑制作用的组胺水平；
图9为根据本发明实施例的L-ESP-3与F-ESO-3对胞内Ca2+含量的测定结果；
图10为根据本发明实施例的L-ESP-3与F-ESO-3对小鼠被动皮肤过敏症状的缓解作用。
具体实施方式
以下通过特定的具体实例说明本发明的技术方案。应理解，本发明提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可以插入其他方法步骤；还应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。而且，除非另有说明，各方法步骤的编号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非为限制各方法步骤的排列次序或限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容的情况下，当亦视为本发明可实施的范畴。
为了更好的理解上述技术方案，下面更详细地描述本发明的示例性实施例。虽然显示了本发明的示例性实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。
本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
需要说明的是：
其中，大鼠嗜碱性粒细胞白血病细胞RBL-2H3细胞是1978年美国国立牙科研究所的免疫学实验室从Wistar大鼠保持肿瘤状态的嗜碱性细胞中分离和克隆出来的嗜碱性白血病细胞株。RBL-2H3细胞具有高亲和力的IgE受体，通过集聚这些受体或与Ca2+载体协同作用可以激活它们分泌组胺及其他递质。RBL-2H3细胞广泛地用于研究肥大细胞FcεRI结构和分泌的生化途径，包括细胞内钙浓度改变、磷酸脂酶激活、蛋白激酶和小G蛋白的作用并普遍用以评价天然活性物质的肥大细胞激活抑制活性。
下面参考具体实施例，对本发明进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性的，而不以任何方式限制本发明。
实施例1生物改性刺麒麟菜硫酸低聚糖的制备
(1)取自然晾干的刺麒麟菜，洗去泥沙后放入电热鼓风干燥箱55℃烘干，经高速粉碎机粉碎后过百目筛，得到菜粉并装入密封袋，保存于室温干燥条件下。
(2)将刺麒麟菜粉末与超纯水按照1:70(W/V)混合，加入2.5％的果葡糖浆，混合均匀后对预发酵物料进行灭菌处理(121℃，20min)。
(3)待灭菌物料恢复室温后，接入3.5％的清酒乳杆菌Lactobacillus sakeisubsp.Sakei(OD600值2.0±0.1)培养24h。
(4)将发酵完成的物料于100℃灭菌10min，待物料恢复室温后使用高速离心机8000r/min离心10min，分离获得上清液。
(5)加入4倍体积的无水乙醇于上清液中，过程中不断搅拌，并于4℃静置过夜。
(6)将上述物料利用高速离心机6000-8000r/min离心10min，获得沉淀复溶于超纯水后冻干即得到改性刺麒麟菜粗多糖。
(7)将改性刺麒麟菜粗多糖粉末按照10mg/mL复溶于超纯水，上样于DEAE-52纤维素柱，利用不同浓度NaCl溶液阶段洗脱(0mol/mL、0.5mol/mL、1mol/mL、2mol/mL)蒽酮硫酸比色法测定每管收集液的总糖含量，收集630nm下吸光度大于0.5的部分，即为改性刺麒麟菜硫酸低聚糖的三个组分，分别命名为F-ESO-1、F-ESO-2、F-ESO-3)(图1)，以硫酸根含量为选择依据收集F-ESO-3为最终目标样品。
对比例1冻融法制备刺麒麟菜硫酸多糖
根据公开文献报道(陈玉芳,陈鑫,郑华,林捷,张雪佳,叶子.冷冻法提取刺麒麟菜多糖工艺优化及性质分析[J].食品科技,2018,43(12):224-229+238.)，菜粉按照1∶90(W/V)混合，-18℃冷冻2h，55℃解冻，反复3次，4倍体积乙醇沉淀后同实施例1进行纯化，得到L-ESP-3(图2)。
试验例1 F-ESO-3与L-ESP-3的理化性质测定
(1)粗多糖得率计算：将冻干后的粗多糖进行称量。得率＝冻干粗多糖质量/菜粉质量×100％
(2)蒽酮硫酸比色法测定总糖：利用半乳糖为标准品参考Morris DL的蒽酮硫酸比色法测定样品中总糖含量。(Morris DL.Quantitative Determination of CarbohydratesWith Dreywood's Anthrone Reagent[J].Science,1948,107(2775):254-255.)
(3)明胶氯化钡比浊法测定硫酸根：以K2SO4为标准品，利用Dodgson-Price法(YuG,Zhang QZ,Wang YB,et al.Sulfated polysaccharides from red seaweed Gelidiumamansii:Structural characteristics,anti-oxidant and anti-glycationproperties,and development of bioactive films[J].Food Hydrocolloids,2021,119:106820.)测定样品硫酸根含量。
(4)溶蒸法测定溶解度：分别精确称量200mg干燥的L-ESP-3和F-ESO-3于干燥至恒重的50mL离心管中，加入10mL超纯水室温下震荡30分钟，定容至50mL后用移液枪吹打混匀，取10mL于8000r/min离心10分钟，将上清完全转移至称量瓶中干燥，恢复至室温后称重。溶解度＝(干燥后的称量瓶质量-称量瓶原始重量)/样品质量×100％。
上述F-ESO-3与L-ESP-3的理化性质测定结果见表1。
(5)高效液相色谱法分析单糖组成：按照Zhang等的方法(ZHANG Z S,ZHANG Q B,WANG J,et al.Regioselective syntheses of sulfated porphyrans from Porphyrahaitanensis and their antioxidant and anticoagulant activities in vitro[J].Carbohydrate Polymers,2010,79(4):1124-1129.)，利用高效液相色谱，以鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸为标准品进行单糖组成分析，结果见图3，其中的1-9号峰分别为鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸的标准品峰。
(6)高效凝胶渗透色谱测定分子量：参照龚桂萍等的方法(GONG G P,FAN J B,SUNY J,et al.Isolation,structural characterization,and antioxidativity ofpolysaccharide LBLP5-A from Lycium barbarum leaves[J].Process Biochemistry,2016,51(2):314-324.)，利用高效凝胶渗透法(HPGPC)对两种多糖样品的纯化产物的平均分子量进行测定，结果见图4。
(7)流变仪测定表观粘度：在25℃下用ARES-G2流变仪测量表观粘度，配42mm平板，剪切速率50-1000s-1，结果见图5。
(8)傅里叶红外光谱分析化学结构：将样品与干燥的溴化钾以1∶100比例混合后研磨，经手动压片后利用傅里叶红外光谱仪在400-4000cm-1进行扫描(CHEN R Z,LUO S J,WANG C X,et al.Effects of ultra-high pressure enzyme extraction oncharacteristics and functional properties of red pitaya(Hylocereuspolyrhizus)peel pectic polysaccharides[J].Food Hydrocolloids,2021:107016.)，结果见图6。
表1
Figure BDA0003477825750000061
由表1可知L-ESP-3与F-ESO-3的粗多糖得率分别为33.52％±2.71％和49.11％±2.21％，说明生物改性法制备的粗糖得率更高；二者总糖含量均在98％以上，说明两种方法制备的样品纯度较高，符合后续实验要求；F-ESO-3的溶解度为92.33％±3.06％显著大于L-ESP-3(56.51％±3.80％)说明F-ESO-3具有更好的溶解性。
由图3可知，F-ESO-3与L-ESP-3主要单糖成分均为半乳糖，其他单糖占比较低。
由图4可知，F-ESO-3是分子量较均一的成分，约为28.30kDa，L-ESP-3是一个分子量大于600KD的多糖，说明生物改性制备的F-ESO-3其分子量较冻融法制备的L-ESP-3显著降低。
由图5可知，随着样品浓度的增大，二者的表观粘度均随之增加，但在相同浓度下，F-ESO-3的表观粘度低于L-ESP-3。F-ESO-3的表观粘度随着剪切速率的增大呈现先降低后升高的趋势，说明F-ESO-3具有较短的碳链长度和丰富的支链结构以及更小的分子量，能保证在剪切速率增加的初期迅速在溶液内排列，但随着剪切速率的不断增加，支链逐渐展开，各个链之间开始缠结，溶液内糖分子之间的作用力逐渐起主导作用；而L-ESP-3的表观粘度随剪切速率的增加不断降低，说明较大的分子量以及更长的碳链结构导致分子内和糖分子之间以及糖分子与水分子之间均具有很大作用力，随着剪切速率的改变，糖分子聚合链之间的作用力逐渐减弱，这可能是表观粘度变化起主导作用的原因。
由图6可知，生物改性制备的F-ESO-3与L-ESP-3在3450cm-1、2923cm-1、1641cm-1均有多糖的特征吸收，在指纹区1249cm-1、107cm-11、929cm-1、846cm-1、804cm-1的吸收峰说明二者是一种糖环构型为α构型的硫酸吡喃糖，并且含有3,6内醚半乳糖残基的类ι-卡拉胶多糖，且F-ESO-3的主要官能团均未发生显著缺失或改变，这说明生物改性法主要是通过减少主链重复长度来降低多糖聚合度。
试验例2 F-ESO-3与L-ESP-3的肥大细胞稳定活性评价
(1)肥大细胞脱颗粒：参照Zhang等人(ZHANG Y F,LIU Q M,LIU B,etal.Dihydromyricetin inhibited ovalbumin-induced mice allergic responses bysuppressing the activation of mast cells[J].Food&Function,2019,10(11):7131-7141.)将RBL-2H3细胞按照5×104个/孔铺于6孔培养板，经Anti-DNP-IgE敏化过夜，然后弃去培养上清，样品组加入溶有不同浓度样品的台式液，NC与PC组加等量台式液孵育1小时，然后除NC组外其余组DNP-BSA激发1小时，取细胞上清液和板底细胞裂解液分别与β-氨基己糖苷酶底物孵育30分钟，于酶标仪激发波长360nm，发射波长450nm进行吸光度检测。脱颗粒效率＝OD细胞上清液/(OD细胞上清液+OD板底细胞裂解液)×100％，结果见图7。
(2)组胺含量测定：取(1)中的DNP-BSA刺激15分钟后的细胞上清液用大鼠组胺ELISA检测试剂盒，严格按照说明书进行测定，结果见图8。
(3)胞内Ca2+水平测定：利用Flou-3AM钙离子荧光探针提前孵育RBL-2H3细胞1小时，然后样品组加入溶有100μg/mL样品的HBSS溶液，A23187组用等体积的HBSS代替，Fmax组与Fmin组分别加入等量的2％曲拉通和100mM的EGTA，30分钟后加入A23187激发，立即用酶标仪检测荧光值F(激发波长490nm，发射波长530nm)，每分钟检测一次。结果见图9。胞内钙离子浓度＝(450×(F-Fmin))/Fmax-F×100％
由图7可知，F-ESO-3与L-ESP-3均可以有效降低β-氨基己糖苷酶的释放，在相同浓度下F-ESO-3的抑制效果显著优于L-ESP-3(P<0.01)。由图8可知，L-ESP-3与F-ESO-3对于肥大细胞释放组胺同样具有良好的抑制活性。
由图9可知，PC组胞内钙离子荧光不断增强，说明Ca2+内流现象显著，F-ESO-3组的胞内荧光强度显著低于PC组，说明F-ESO-3可以有效抑制Ca2+内流，L-ESP-3虽然也可以发挥抑制效果，但随着时间的增加，抑制效果逐渐减弱。
综上所述，F-ESO-3可以通过抑制胞外Ca2+的内流，从而有效抑制胞内Ca2+的浓度，稳定肥大细胞并减少β-氨基己糖苷酶和组胺的释放，相同浓度下F-ESO-3活性显著高于L-ESP-3且呈浓度依赖。
试验例3小鼠被动皮肤过敏模型PCA
在Balb/c小鼠单侧耳廓皮下注射500ng Anti-DNP-IgE敏化24h后，样品组分别灌胃100μg/kg、200μg/kg剂量L-ESP-3与F-ESO-3的PBS溶液进行干预，NC组与PC组灌胃等量的PBS，，4h后PC组和样品组利用DNP-BSA的甲苯胺蓝溶液进行激发，NC组仅注射甲苯胺蓝溶液，观察PCA模型小鼠耳朵蓝斑症状的缓解情况并拍照。结果如图10所示，NC组小鼠耳廓无明显蓝斑，耳廓厚度均匀，PC组小鼠耳朵蓝斑明显，在注射IgE补位能看到明显的肿胀情况，血管充血现象明显，而F-ESO-3可以抑制小鼠PCA被动皮肤过敏模型小鼠耳朵蓝斑症状，减缓小鼠耳朵血管屈张程度，从体内进一步证实了F-ESO-3的肥大细胞抑制活性。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不应理解为必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例进行接合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (9)

1.一种红藻硫酸低聚糖的制备方法，其特征在于，包括：
将红藻粉末、超纯水与果葡糖浆混合，获得预发酵物料；
将所述预发酵物料灭菌后，接入乳杆菌发酵培养6～36h，获得发酵料；
将所述发酵料灭菌后，离心，收集上清液；
向所述上清液加入2～5倍体积的无水乙醇，过程中不断搅拌，静置过夜，离心，收集沉淀；
将所述沉淀冻干后，复溶，上样于DEAE-52纤维素柱，利用不同浓度NaCl溶液阶段洗脱，收集630nm下吸光度大于0.5的部分，得到红藻硫酸低聚糖。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述乳杆菌为清酒乳杆菌Lactobacillus sakei subsp.Sakei。
3.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述乳杆菌的接菌量为0.5％～8.0％的OD600值为1.5～2.2的活化菌液。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，第一次灭菌条件为100～134℃，5～30min；第二次灭菌条件为80～100℃，1～30min。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，离心条件为6000～8000r/min，离心5～10min。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，NaCl溶液的洗脱浓度为0、0.5mol/mL、1mol/mL、2mol/mL。
7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，红藻粉末与超纯水按照1:50～1:70混合，加入1～5％果葡糖浆。
8.一种红藻硫酸低聚糖，其特征在于，采用权利要求1-7中任一项所述的红藻硫酸低聚糖的制备方法制得。
9.权利要求8所述的红藻硫酸低聚糖在制备肥大细胞稳定剂中的应用。
CN202210059934.7A 2022-01-19 2022-01-19 一种红藻硫酸低聚糖及其制备方法与应用 Active CN114133464B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210059934.7A CN114133464B (zh) 2022-01-19 2022-01-19 一种红藻硫酸低聚糖及其制备方法与应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210059934.7A CN114133464B (zh) 2022-01-19 2022-01-19 一种红藻硫酸低聚糖及其制备方法与应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114133464A true CN114133464A (zh) 2022-03-04
CN114133464B CN114133464B (zh) 2022-11-08

Family

ID=80381783

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210059934.7A Active CN114133464B (zh) 2022-01-19 2022-01-19 一种红藻硫酸低聚糖及其制备方法与应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114133464B (zh)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20170275661A1 (en) * 2014-08-22 2017-09-28 Isothrive Llc Process for the production of isomaltooligosaccharides
CN107868805A (zh) * 2017-11-30 2018-04-03 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所 一种通过乳酸菌发酵降解的龙眼多糖及其制备方法
CN109134682A (zh) * 2018-09-14 2019-01-04 集美大学 一种红藻低聚糖及其制备方法与应用
WO2021196572A1 (zh) * 2020-03-30 2021-10-07 西南大学 富含岩藻糖的胞外多糖及其制备方法和应用
CN113621089A (zh) * 2021-10-11 2021-11-09 山东洁壹选生物科技有限公司 一种海藻多糖提取物及其制备方法和应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20170275661A1 (en) * 2014-08-22 2017-09-28 Isothrive Llc Process for the production of isomaltooligosaccharides
CN107868805A (zh) * 2017-11-30 2018-04-03 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所 一种通过乳酸菌发酵降解的龙眼多糖及其制备方法
CN109134682A (zh) * 2018-09-14 2019-01-04 集美大学 一种红藻低聚糖及其制备方法与应用
WO2021196572A1 (zh) * 2020-03-30 2021-10-07 西南大学 富含岩藻糖的胞外多糖及其制备方法和应用
CN113621089A (zh) * 2021-10-11 2021-11-09 山东洁壹选生物科技有限公司 一种海藻多糖提取物及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SHA-SHA XU等: "Eucheuma cottonii Sulfated Oligosaccharides Decrease Food Allergic Responses in Animal Models by Up-regulating Regulatory T (Treg) Cells", 《JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY》 *
张军等: "益生菌发酵刺麒麟菜制备硫酸多糖工艺优化及性质分析", 《食品工业科技》 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN114133464B (zh) 2022-11-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Liu et al. Rice bran polysaccharides and oligosaccharides modified by Grifola frondosa fermentation: Antioxidant activities and effects on the production of NO
Liu et al. In vitro saliva-gastrointestinal digestion and fecal fermentation of Oudemansiella radicata polysaccharides reveal its digestion profile and effect on the modulation of the gut microbiota
Jia et al. Structural characterization of polysaccharides from three seaweed species and their hypoglycemic and hypolipidemic activities in type 2 diabetic rats
Leung et al. Chemical properties and antioxidant activity of exopolysaccharides from mycelial culture of Cordyceps sinensis fungus Cs-HK1
Wu et al. Comparison of different extraction methods of polysaccharides from cup plant (Silphium perfoliatum L.)
You et al. Pulsed counter-current ultrasound-assisted extraction and characterization of polysaccharides from Boletus edulis
Guidara et al. Effect of extraction procedures on the chemical structure, antitumor and anticoagulant properties of ulvan from Ulva lactuca of Tunisia coast
Wei et al. Composition and bioactivity of polysaccharides from tea seeds obtained by water extraction
Gao et al. Preparation, characterization and improvement in intestinal function of polysaccharide fractions from okra
CN111285939B (zh) 一种具有抗氧化和调节肠道菌群功效的海蒿子多糖及其制备方法与应用
Yang et al. Structural characterization, antioxidant and hypolipidemic activity of Grifola frondosa polysaccharides in novel submerged cultivation
US11111317B2 (en) Cordyceps militaris medium polysaccharide, method for separating and purifying same, and use thereof
US20070202570A1 (en) Enzyme composition, low molecular weight hyaluronan and process for preparing the same
US20180193373A1 (en) Method for Preparing Linseed Polysaccharide Having Antiviral Activity and Immunological Activity, and Use of the Linseed Polysaccharide
Chin et al. Effect of drying on crude ganoderic acids and water soluble polysaccharides content in Ganoderma lucidum
Zhu et al. Structure elucidation and bioactivities of a new polysaccharide from Xiaojin Boletus speciosus Frost
CN107198015A (zh) 双菌半干法发酵脱脂米糠获得活性物的方法
Sipping et al. Antioxidant and anti-inflammatory activities of Ganoderma resinaceum (Boud) fruiting bodies extracts
Wu et al. Biological activities of a polysaccharide from the coculture of Ganoderma lucidum and Flammulina velutipes mycelia in submerged fermentation
Fan et al. Mycelial biomass and intracellular polysaccharides production, characterization, and activities in Auricularia auricula-judae cultured with different carbon sources
Shi et al. Primary structure, physicochemical properties, and digestive properties of four sequentially extracted polysaccharides from Tremella fuciformis
CN114133464B (zh) 一种红藻硫酸低聚糖及其制备方法与应用
Zhang et al. Optimization of fermentation of Fomes fomentarius extracellular polysaccharide and antioxidation of derivatized polysaccharides
Song et al. Effects of solution behavior on polysaccharide structure and inhibitory of α-glucosidase activity from Cordyceps militaris
CN115490780B (zh) 马尾藻岩藻多糖粗提物的提取方法及应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant