CN114129729B

CN114129729B - 靶向抑制pitpnm3的小分子抑制剂及其应用

Info

Publication number: CN114129729B
Application number: CN202111008224.3A
Authority: CN
Inventors: 宋尔卫; 龚畅; 姜文国; 刘子豪
Original assignee: Sun Yat Sen Memorial Hospital Sun Yat Sen University
Current assignee: Sun Yat Sen Memorial Hospital Sun Yat Sen University
Priority date: 2021-01-28
Filing date: 2021-08-30
Publication date: 2023-06-06
Anticipated expiration: 2041-08-30
Also published as: CN114129729A; WO2022160365A1

Abstract

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及靶向抑制PITPNM3的小分子抑制剂及其应用。本发明借助计算机辅助药物设计、高通量药物筛选出的11种具有靶向抑制PITPNM3介导细胞粘附的生物学效应和靶向抑制CCL18‑PITPNM3介导的细胞迁移粘附生物学效应的靶向抑制PITPNM3的小分子抑制剂，能够抑制各类由PITPNM3激活介导的肿瘤转移，如乳腺癌、肝细胞癌、胰腺导管癌、肺癌，具有适用范围广、靶向性强的优势。

Description

靶向抑制PITPNM3的小分子抑制剂及其应用

技术领域

本发明属于生物工程及生物医药技术领域，具体涉及靶向抑制PITPNM3的小分子抑制剂及其应用。

背景技术

乳腺癌是我国女性发病率最高的恶性肿瘤，而乳腺癌转移是导致乳腺癌患者死亡的主要原因。尽管针对乳腺癌的诊治手段有了很大的进步，但依然有部分乳腺癌病人会发生癌转移，而乳腺癌远处转移是导致临床预后不佳及临床治疗失败的最主要的原因之一。同其他恶性肿瘤发生远处转移一样，其发生远处转移与肿瘤微环境密切相关。在恶性肿瘤微环境中，各种免疫细胞会发生浸润并产生各种炎症因子，这些炎症因子与周围的恶性肿瘤细胞相互联系异常激活肿瘤细胞表面信号通路，促进了肿瘤细胞的转移。因此，开发针对肿瘤微环境作用的小分子抑制剂抑制乳腺癌转移具有重要的意义。

研究表明，肿瘤微环境中，肿瘤相关巨噬细胞是数量最多的一类细胞之一，并且肿瘤相关巨噬细胞的数量与病人生存预后呈负相关的关系，更深入的研究发现肿瘤相关巨噬细胞具有促进肿瘤细胞增殖、干性并促进肿瘤细胞远处转移的重要作用。肿瘤相关巨噬细胞能够分泌多种细胞因子、生长因子等等。这些细胞因子及生长因子结合于肿瘤细胞表面的受体上，激活这些受体，异常促进下游肿瘤细胞信号转导，并使肿瘤细胞增殖及转移。例如：在肝肺等组织高表达CXCL12，其能够结合于肿瘤细胞表面CXCR4，激活肿瘤细胞下游通路，促进肿瘤细胞远处转移。

在肿瘤微环境中，CCL18能够结合于肿瘤细胞表面的膜受体PITPNM3，并激活其下游通路促进乳腺癌转移。PITPNM3与其配体CCL18结合后，磷酸化其胞内段PYK2结合域(PYK2-binding domain)结合的PYK2，使PYK2转变为p-PYK2，进一步磷酸化的PYK2使下游信号Src、FAK、AKT和ERK磷酸化，促进肿瘤细胞Snail、Vimentin、TWIST、ZEB1等转移相关蛋白和上皮-间质转化相关蛋白的表达，抑制CDH1等上皮表面标记物的表达，从而促进乳腺癌细胞的侵袭、迁移、上皮-间质转化和粘附。此外，前期研究还发现，肿瘤相关巨噬细胞能够分泌CCL18，通过激活幼稚型CD4阳性T细胞表面PITPNM3受体通路并招募其至肿瘤微环境中发挥抑制肿瘤免疫的作用。因此，PITPNM3作为CCL18的受体，在肿瘤转移及肿瘤微环境中具有非常重要的作用，针对PITPNM3设计小分子靶向药物具有抑制肿瘤转移的价值。

PITPNM3由17号染色体的PITPNM3(也被称为NIP1、ACKR6、CORD5和RDGBA3)基因编码，分子大小约108KD，全长980个氨基酸，是一个跨膜受体，主要有N末端钙离子结合结构域(acidic calcium-binding domian)和C末端PYK2结合结构域(PYK2-binding domian)，在两个结构域间的是跨膜结构和分别位于细胞内/细胞外的蛋白质螺旋；与PITPNM1/2不同的是，PITPNM3不具有磷脂酰肌醇转移结构域，能作为一个细胞趋化因子受体定位于细胞膜表面，PITPNM1/2主要定位在细胞浆以及高尔基体等细胞内结构中。PITPNM3已被证实在多种肿瘤细胞中高表达，包括乳腺癌、肝细胞肝癌、胰腺导管癌、肺癌肿瘤细胞等多种恶性肿瘤。PITPNM3在这些肿瘤的远处转移中发挥了重要的作用。我们前期研究证实肿瘤细胞上的PITPNM3能够结合肿瘤微环境中的CCL18，并激活PITPNM3下游通路，促进乳腺癌浸润和转移。

以PITPNM3为靶点的小分子抑制剂在世界范围内鲜有报道，因此本发明涉及新型靶向PITPNM3的小分子抑制剂，以期获得高效和低毒的抑制肿瘤转移的靶向药物。

发明内容

本发明的目的在于提供靶向抑制PITPNM3的小分子抑制剂及其应用，通过小分子抑制剂靶向PITPNM3受体，从而抑制依赖PITPNM3介导的肿瘤转移。

基于上述目的，本发明采用的技术方案如下：

第一方面，本发明提供了靶向抑制PITPNM3的小分子抑制剂，其结构为下述11种结构中的任一种；所述11种小分子抑制的结构如下：

PITPNM3蛋白质分子大小约108KD，全长980个氨基酸，是一个跨膜受体，主要有N末端钙离子结合结构域(acidic calcium-binding domian)和C末端PYK2结合结构域(PYK2-binding domian)，基于针对PITPNM3的研究(Lev S,Hernandez J,Martinez R,Chen A,Plowman G,&Schlessinger,J.Identification of a novel family of targets of pyk2related to drosophila retinal degeneration b(rdgb)protein.Molecular&CellularBiology,19(3),2278.)，PITPNM3的C末端PYK2结合结构域主要负责了与PYK2结合以及对PYK2的磷酸化。当CCL18与PITPNM3结合后，激活的PITPNM3能够通过C末端PYK2结合结构域磷酸化PYK2(Chen J,Yao Y,Gong C,Yu F,Su S,Chen J,&et al.CCL18 from tumor-associated macrophages promotes breast cancer metastasis via pitpnm3.CancerCell,19(6),814-816.)，从而促进下游转移相关通路的激活并导致肿瘤的远处转移，因此PITPNM3的C末端PYK2结合结构域是调控肿瘤细胞转移最重要的结构域之一。

借助计算机辅助药物设计、高通量药物筛选出100种针对PITPNM3受体的小分子抑制剂，具有靶向抑制PITPNM3介导细胞粘附的生物学效应和靶向抑制CCL18-PITPNM3介导的细胞迁移粘附生物学效应，从而有效抑制PITPNM3或CCL18-PITPNM3介导的癌细胞的转移，因此，由上述筛选出的小分子抑制剂有望作为治疗癌转移的靶向药物。

上述11种小分子抑制剂为由100种小分子抑制剂中优选出的细胞毒性相对较低的小分子抑制剂，所筛选出的11种小分子抑制剂对MDA-MB-231细胞的死亡率均低于10％，并且抑制PITPNM3介导的细胞迁移抑制率高于10％。

优选地，靶向抑制PITPNM3的小分子抑制剂，其结构为下述4种结构中的任一种；所述的4种小分子抑制的结构如下：

上述4种小分子抑制剂为由前述的11种毒性相对较低的小分子抑制剂中，优选出的靶向抑制PITPNM3介导的细胞侵袭和迁移，且肿瘤细胞迁移抑制率最高的4个化合物。

第二方面，本发明提供了上述靶向抑制PITPNM3的小分子抑制剂在抑制癌转移中的应用。

优选地，上述小分子抑制剂用于抑制PITPNM3或CCL18-PITPNM3介导的肿瘤转移。

优选地，上述肿瘤为乳腺癌、肝细胞癌、胰腺导管癌、肺癌中的任一种。

靶向抑制PITPNM3的小分子能够抑制各类由PITPNM3激活介导的肿瘤转移，由PITPNM3激活介导的不同类型的肿瘤转移，包括：乳腺癌(Chen J,Yao Y,Gong C,Yu F,SuS,Chen J,&et al.CCL18 from tumor-associated macrophages promotes breastcancer metastasis via pitpnm3.Cancer Cell,19(6),814-816.)、肝细胞肝癌(Lin Z,LiW,Zhang H,Wu W,Peng Y,Zeng Y,&et al.CCL18/PITPNM3 enhances migration,invasion,and EMT through the NF-κB signaling pathway in hepatocellularcarcinoma.Tumor Biology,37(3),3461-3468.)、胰腺导管癌(Ye H,Zhou Q,Zheng S,LiG,Lin Q,Wei L,&et al.Tumor-associated macrophages promote progression and theWarburg effect via CCL18/NF-kB/VCAM-1 pathway in pancreatic ductaladenocarcinoma.Cell death&disease,9(5),1-19.)、肺癌肿瘤细胞(Shi L,Zhang B,SunX,Zhang X,Lv S,Li H,&et al.CC chemokine ligand 18(CCL18)promotes migrationand invasion of lung cancer cells by binding to Nir1 through Nir1-ELMO1/DOC180 signaling pathway.Molecular carcinogenesis,55(12),2051-2062.)等。

第三方面，本发明提供了一种用于抑制癌转移的药物，该药物含有靶向抑制PITPNM3的小分子抑制剂。

该用于抑制癌转移的药物以靶向抑制PITPNM3的小分子抑制剂作为主要有效成分，利用该小分子抑制剂靶向作用于PITPNM3受体，对PITPNM3受体进行有效抑制，从而对依赖PITPNM3介导的肿瘤转移起到抑制作用。

优选地，上述抑制癌转移的药物为靶向抑制PITPNM3的小分子抑制剂在其药效上可接受的盐或酯。

优选地，上述抑制癌转移的药物用于抑制PITPNM3或CCL18-PITPNM3介导的肿瘤转移。

由于肿瘤相关巨噬细胞能够分泌CCL18，通过激活幼稚型CD4阳性T细胞表面PITPNM3受体通路，并招募其至肿瘤微环境中发挥抑制肿瘤免疫的作用，上述药物中含有靶向抑制PITPNM3的小分子抑制剂，能够抑制肿瘤相关巨噬细胞或其他能够分泌CCL18的细胞所分泌的CCL18，从而抑制CCL18介导的肿瘤PITPNM3激活及其下游通路激活导致的肿瘤转移，使得上述药物能够作为抗肿瘤小分子靶向药物，用于治疗乳腺癌、干细胞癌、胰腺导管癌、肺癌等远处转移。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

(1)本发明借助计算机辅助药物设计筛选出100种潜在具有靶向抑制PITPNM3的小分子抑制剂；并在该筛选出的100种小分子抑制剂的基础上，进一步通过细胞毒性试验，从中筛选出了11种对细胞毒性相对较低的小分子抑制剂；随后，在筛选出的11种小分子抑制剂的基础上，进一步由transwell试验，筛选出靶向抑制PITPNM3介导的细胞侵袭和迁移，且肿瘤细胞迁移抑制率最高的4个小分子抑制剂；上述筛选出的11种靶向抑制PITPNM3的小分子抑制剂均能够有效抑制PITPNM3或CCL18-PITPNM3介导的癌细胞的转移，有望作为治疗癌转移的靶向药物。

(2)本发明靶向抑制PITPNM3的小分子抑制剂，能够抑制各类由PITPNM3激活介导的肿瘤转移，如乳腺癌、肝细胞癌、胰腺导管癌、肺癌，具有适用范围广的优势。

(3)通过将本发明靶向抑制PITPNM3的小分子抑制剂作为抑制癌转移的药物，该药物以与靶向抑制PITPNM3的小分子抑制剂具有等同药效的靶向抑制PITPNM3的小分子抑制剂盐或酯的形式存在，用于抑制PITPNM3或CCL18-PITPNM3介导的肿瘤转移，从而作为抗肿瘤小分子靶向药物，用于抑制乳腺癌、干细胞癌、胰腺导管癌、肺癌等癌细胞的远处转移。

附图说明

图1为PITPNM3关键结构域同源建模后的模型图；

图2为120个小分子对接到PITPNM3的C末端蛋白质时的自由能评分结果图；

图3为与PITPNM3的C末端蛋白质对接自由能最低的NO.1化合物与PITPNM3关键结构域同源结合示意图；

图4为具有靶向PITPNM3活性并且对细胞毒性较低的11个小分子抑制剂抑制PITPNM3介导细胞迁移的作用图；

图5为具有靶向PITPNM3活性并且对细胞毒性较低的11个小分子抑制剂对肿瘤细胞MDA-MB-231的抑制率统计图；

图6为具有靶向PITPNM3活性较高的11小分子抑制剂对接评分图。

具体实施方式

为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。以下实施例所涉及各原料如无特别说明，均为市售通用产品。

实施例1PITPNM3关键结构域建模和小分子对接

PITPNM3蛋白质分子大小约108KD，全长980个氨基酸，是一个跨膜受体，主要有N末端钙离子结合结构域(acidic calcium-binding domian)和C末端PYK2结合结构域(PYK2-binding domian)，PITPNM3的C末端关键结构域(C末端PYK2结合结构域)蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。基于针对PITPNM3的研究(Lev S,Hernandez J,Martinez R,ChenA,Plowman G,&Schlessinger,J.Identification of a novel family of targets ofpyk2 related to drosophila retinal degeneration b(rdgb)protein.Molecular&Cellular Biology,19(3),2278.)，PITPNM3的C末端PYK2结合结构域主要负责了与PYK2结合以及对PYK2的磷酸化。当CCL18与PITPNM3结合后，激活的PITPNM3能够通过C末端PYK2结合结构域磷酸化PYK2(Chen J,Yao Y,Gong C,Yu F,Su S,Chen J,&et al.CCL18 fromtumor-associated macrophages promotes breast cancer metastasis viapitpnm3.Cancer Cell,19(6),814-816.)，从而促进下游转移相关通路的激活并导致肿瘤的远处转移，因此PITPNM3的C末端PYK2结合结构域是调控肿瘤细胞转移最重要的结构域之一。下面以乳腺癌为例说明小分子抑制剂对靶向PITPNM3抑制肿瘤转移的影响。

从PDB数据库中获取用于同源建模的模板蛋白晶状体结构，使用Blastn软件、Clustal Omega以及UniProtKB/Swiss-Prot网页比对软件获取PDB数据库中与PITPNM3关键结构域(PITPNM3的C末端PYK2结合结构域)的氨基酸序列相似度最高的蛋白，并且要求氨基酸相似度至少大于等于25％。

根据相似度对比结果，PDB数据库中筛选出两个与PITPNM3关键结构域的氨基酸序列相似度相对较高的蛋白质，第一个蛋白质为AphA，其PDB编号为1Z88，与PITPNM3关键结构域蛋白的相似度为25.44％；第二个蛋白质为Pho2，其PDB编号为4jdp，与PITPNM3关键结构域蛋白的相似度为20％。

根据氨基酸序列相似度大于等于25％的标准，从PDB数据库中选择了与PITPNM3关键结构域同源相似性最高的蛋白质AphA(PDB ID:1Z88)为模板进行同源建模，其中AphA蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

使用ICM-Pro(v3.8 software,Molsoft)进行建模，成功构建了PITPNM3的C末端的蛋白质3D模型，如图1所示。

基于PITPNM3的C末端的蛋白质3D模型，申请人使用MOE软件将ChemDiv小分子抑制剂库中超过50000个小分子，对接到上述PITPNM3的C末端蛋白质3D模型中，依据小分子对接到PITPNM3的C末端蛋白质的自由能对小分子进行对接评分，结果如图2所示，自由能负值越大，结合力越稳定，则越有可能成为靶向PITPNM3的小分子抑制剂。依据上述评分结果，筛选出至少一个疏水中心，对接打分越小越好的小分子抑制剂。按照对接打分越小排名越靠前的原则，我们挑选出对接评分排名前100的小分子化合物，该100个小分子化合物的对接打分(score)小于-7.28。将对接打分最小的NO.1号小分子抑制剂与上述构建的PITPNM3蛋白模型进行结合，形成小分子抑制剂与PITPNM3蛋白的结合模型，如图3所示。

实施例2靶向抑制PITPNM3的小分子抑制剂的筛选

通过下述活性试验、毒性试验以及肿瘤细胞迁移抑制试验对实施例1中初步筛选出的100种小分子抑制剂进行逐步筛选，以期筛选出活性高、毒性低且具有较好抑制肿瘤细胞迁移的靶向抑制PITPNM3的小分子抑制剂。

(一)基于细胞毒性试验对100种小分子抑制剂进行筛选

利用MTT法对100个评分最高的抑制PITPNM3活性的小分子抑制剂的细胞毒性进行检测，并依此对上述100个小分子抑制剂进行进一步筛选，MTT法是一种检测细胞存活和生长的方法，其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒，并沉积于细胞中，而死亡的细胞则无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。

具体过程如下：

在37℃、5％CO₂条件下，用含有10％胎牛血清的DMEM培养基传代及培养MDA-MB-231细胞；分别将5000个MDA-MB-231细胞分别接种于96孔板，在96孔板中加入小分子抑制剂，使小分子抑制剂终浓度为5μM，每个浓度设置3个复孔，培养48小时后，加入10μL 5mg/mL的MTT，后将96孔板孵育4小时，吸取上清液每孔再加入100μL的DMSO，使甲瓒晶体完全溶解，使用TECAN spark酶标仪，在吸光度570nm读数，以未加入小分子抑制剂的OD值为阴性对照，计算小分子抑制剂在5μM浓度对MDA-MB-231细胞死亡率。

细胞死亡率的计算公式如下：

对照组吸光度＝未添加小分子抑制剂的平均OD值；

实验组吸光度＝添加小分子抑制剂的平均OD值；

细胞死亡率＝(对照组吸光度-实验组吸光度)*100％/对照组吸光度。

基于上述试验方法，上述100个小分子抑制剂对MDA-MB-231细胞的死亡率的试验结果如表1所示，表1中的MDA-MB-231表示MDA-MB-231细胞的死亡率结果。由表1可知，上述筛选出的100个小分子抑制剂对MDA-MB-231细胞均有不同程度的细胞毒性作用。由于PITPNM3主要介导了肿瘤细胞的侵袭迁移及远处转移，PITPNM3抑制对细胞增殖影响并不明显(Chen J,Yao Y,Gong C,Yu F,Su S,Chen J,&et al.CCL18 from tumor-associatedmacrophages promotes breast cancer metastasis via pitpnm3.Cancer Cell,19(6),814-816.)，因此发明人在前述100个抑制PITPNM3活性较好药物的基础上，依据表1的结果，筛选出在MDA-MB-231细胞死亡率均低于10％的小分子抑制剂，并最终从上述100个小分子抑制剂挑选出53个对细胞毒性较低不易脱靶导致增殖抑制的小分子抑制剂。

表1 100个小分子抑制剂对MDA-MB-231细胞抑制率

依据表1结果所筛选出的53种小分子抑制剂的编号为：NO.1、NO.2、NO.3、NO.4、NO.7、NO.8、NO.9、NO.10、NO.11、NO.12、NO.13、NO.14、NO.15、NO.16、NO.17、NO.18、NO.19、NO.20、NO.22、NO.23、NO.24、NO.25、NO.26、NO.27、NO.28、NO.29、NO.30、NO.31、NO.32、NO.37、NO.38、NO.44、NO.45、NO.52、NO.53、NO.57、NO.60、NO.63、NO.64、NO.69、NO.72、NO.73、NO.77、NO.79、NO.80、NO.81、NO.83、NO.84、NO.88、NO.91、NO.92、NO.96、NO.99、NO.100。

(二)基于transwell迁移实验对上述筛选出的53种对细胞毒性相对较低的小分子抑制剂进行进一步筛选

Transwell侵袭实验是检测细胞侵袭能力的实验方法。其实验原理为：利用一层膜(基质胶)将高营养的培养液和低营养的培养液隔开，细胞放在低营养的培养液里，为了寻找营养，细胞会往高营养的培养液里面迁移，用于模拟细胞分泌金属蛋白酶消化细胞外基质，转移至其他组织的过程。

在37℃、5％CO₂和10％胎牛血清的DMEM培养基条件下使用10μM预先处理MDA-MB-231细胞24h，之后消化细胞，分别使用含有10μM的无血清DMEM重悬预先处理的细胞，并将10⁵个细胞铺于8μm的transwell的上室，在下室中使用含有1％胎牛血清及50ng/mL的CCL18的DMEM培养12小时后，擦去上室细胞，使用4％多聚甲醛固定后，甲紫进行染色并计数，从上室成功迁移的细胞将不会被棉球擦除，通过甲紫染色能够确定迁移到下室的细胞数，以此判断小分子抑制剂靶向PITPNM3抑制细胞的侵袭迁移能力改变，MDA-MB-231细胞transwell迁移代表图如图4所示，由图4细胞迁移代表图可以看出，NO.1，NO.3，NO.13，NO.23，NO.31，NO.53，NO.69，NO.72，NO.81，NO.91和NO.92均有一定程度抑制细胞transwell能力的作用；通过三次独立重复试验，并统计出袭迁移到transwell小室另一侧的细胞的数目，如图5柱状统计图所示，NO.1，NO.53，NO.72和NO.81具有最佳的抑制效果。

基于上述试验结果，对相应的小分子抑制剂对细胞迁移的抑制率进行计算，具体计算公式如下：

对照组迁移细胞数＝未添加小分子抑制剂而仅添加CCL18的细胞迁移数目-未添加小分子抑制剂且未添加CCL18的细胞迁移数目；

实验组迁移细胞数＝添加小分子抑制剂且添加CCL18的细胞迁移数目-未添加小分子抑制剂且未添加CCL18的细胞迁移数目；

细胞迁移抑制率＝(对照组迁移细胞数-实验组迁移细胞数)*100％/对照组迁移细胞数。

基于上述计算公式计算得到的11种小分子抑制剂对应的细胞迁移抑制率结果，以小分子抑制剂的编号作为横坐标，其相应的抑制率为纵坐标，绘制11个小分子抑制剂在10μM浓度下抑制PITPNM3介导细胞迁移的抑制率柱形图，结果如图5所示，这11个小分子抑制剂与PITPNM3对接评分图如图6所示。PITPNM3活性是介导乳腺癌迁移的最关键因素，发明人根据小分子抑制剂靶向抑制PITPNM3介导的细胞迁移，筛选出那些迁移抑制率越高越好的小分子抑制剂，以小分子抑制剂在10μM浓度下抑制率高于35％的标准，筛选出靶向PITPNM3具有更佳活性的小分子抑制剂。图5结果表明在11个细胞毒性较低并且具有靶向PITPNM3活性的小分子抑制剂中，化合物NO.1、NO.53、NO.72和NO.81是抑制PITPNM3激活介导的肿瘤细胞迁移最佳的4个化合物，其中细胞迁移抑制率如下：NO.1(43.9％)、NO.53(43.6％)、NO.72(43.9％)和NO.81(39.8％)。

综上所述，发明人进一步在11个细胞毒性较低并且靶向PITPNM3活性较好的小分子抑制剂中，通过transwell实验进一步筛选能够靶向PITPNM3介导的细胞侵袭和迁移的小分子抑制剂，并最终从11个小分子抑制剂中进一步挑选出了靶向PITPNM3活性最好的4个小分子抑制剂，分别是NO.1、NO.53、NO.72、NO.81，该4个小分子抑制剂的结构如下：

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 中山大学孙逸仙纪念医院

<120> 靶向抑制PITPNM3的小分子抑制剂及其应用

<130> --

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 353

<212> PRT

<213> PYK2-binding domian

<400> 1

Arg Lys Arg Thr Gln Val Lys Leu Arg Asn Val Thr Ala Asn His Arg

1 5 10 15

Ala Asn Asp Val Ile Ala Ala Glu Asp Gly Pro Gln Val Leu Val Gly

20 25 30

Arg Phe Met Tyr Gly Pro Leu Asp Met Val Ala Leu Thr Gly Glu Lys

35 40 45

Val Asp Ile Leu Val Met Ala Glu Pro Ser Ser Gly Arg Trp Val His

50 55 60

Leu Asp Thr Glu Ile Thr Asn Ser Ser Gly Arg Ile Thr Tyr Asn Val

65 70 75 80

Pro Arg Pro Arg Arg Leu Gly Val Gly Val Tyr Pro Val Lys Met Val

85 90 95

Val Arg Gly Asp Gln Thr Cys Ala Met Ser Tyr Leu Thr Val Leu Pro

100 105 110

Arg Gly Met Glu Cys Val Val Phe Ser Ile Asp Gly Ser Phe Ala Ala

115 120 125

Ser Val Ser Ile Met Gly Ser Asp Pro Lys Val Arg Pro Gly Ala Val

130 135 140

Asp Val Val Arg His Trp Gln Asp Leu Gly Tyr Met Ile Leu Tyr Ile

145 150 155 160

Thr Gly Arg Pro Asp Met Gln Lys Gln Arg Val Val Ser Trp Leu Ser

165 170 175

Gln His Asn Phe Pro Gln Gly Met Ile Phe Phe Ser Asp Gly Leu Val

180 185 190

His Asp Pro Leu Arg Gln Lys Ala Ile Phe Leu Arg Asn Leu Met Gln

195 200 205

Glu Cys Phe Ile Lys Ile Ser Ala Ala Tyr Gly Ser Thr Lys Asp Ile

210 215 220

Ser Val Tyr Ser Val Leu Gly Leu Pro Ala Ser Gln Ile Phe Ile Val

225 230 235 240

Gly Arg Pro Thr Lys Lys Tyr Gln Thr Gln Cys Gln Phe Leu Ser Glu

245 250 255

Gly Tyr Ala Ala His Leu Ala Ala Leu Glu Ala Ser His Arg Ser Arg

260 265 270

Pro Lys Lys Asn Asn Ser Arg Met Ile Leu Arg Lys Gly Ser Phe Gly

275 280 285

Leu His Ala Gln Pro Glu Phe Leu Arg Lys Arg Asn His Leu Arg Arg

290 295 300

Thr Met Ser Val Gln Gln Pro Asp Pro Pro Ala Ala Asn Pro Lys Pro

305 310 315 320

Glu Arg Ala Gln Ser Gln Pro Glu Ser Asp Lys Asp His Glu Arg Pro

325 330 335

Leu Pro Ala Leu Ser Trp Ala Arg Gly Pro Pro Lys Phe Glu Ser Val

340 345 350

Pro

<210> 2

<211> 237

<212> PRT

<213> AphA

<400> 2

Met Lys Lys Ile Thr Leu Ala Leu Ser Ala Val Cys Leu Leu Phe Thr

1 5 10 15

Leu Asn His Ser Ala Asn Ala Leu Val Ser Ser Pro Ser Thr Leu Asn

20 25 30

Pro Gly Thr Asn Val Ala Lys Leu Ala Glu Gln Ala Pro Val His Trp

35 40 45

Val Ser Val Ala Gln Ile Glu Asn Ser Leu Thr Gly Arg Pro Pro Met

50 55 60

Ala Val Gly Phe Asp Ile Asp Asp Thr Val Leu Phe Ser Ser Pro Gly

65 70 75 80

Phe Trp Arg Gly Lys Lys Thr Tyr Ser Pro Asp Ser Asp Asp Tyr Leu

85 90 95

Lys Asn Pro Ala Phe Trp Glu Lys Met Asn Asn Gly Trp Asp Glu Phe

100 105 110

Ser Ile Pro Lys Glu Val Ala Arg Gln Leu Ile Asp Met His Val Arg

115 120 125

Arg Gly Asp Ser Ile Tyr Phe Val Thr Gly Arg Ser Gln Thr Lys Thr

130 135 140

Glu Thr Val Ser Lys Thr Leu Ala Asp Asn Phe His Ile Pro Ala Ala

145 150 155 160

Asn Met Asn Pro Val Ile Phe Ala Gly Asp Lys Pro Glu Gln Asn Thr

165 170 175

Lys Val Gln Trp Leu Gln Glu Lys Asn Met Arg Ile Phe Tyr Gly Asp

180 185 190

Ser Asp Asn Asp Ile Thr Ala Ala Arg Asp Cys Gly Ile Arg Gly Ile

195 200 205

Arg Ile Leu Arg Ala Ala Asn Ser Thr Tyr Lys Pro Leu Pro Gln Ala

210 215 220

Gly Ala Phe Gly Glu Glu Val Ile Val Asn Ser Glu Tyr

225 230 235

Claims

1.靶向抑制PITPNM3的小分子抑制剂在制备抑制癌转移的药物中的应用；

所述小分子抑制剂的结构为以下11种结构中的任一种；所述11种结构如下：

所述癌为乳腺癌。

2.根据权利要求1所述靶向抑制PITPNM3的小分子抑制剂在制备抑制癌转移的药物中的应用，其特征在于，所述小分子抑制剂用于抑制PITPNM3或CCL18-PITPNM3介导的肿瘤转移。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述小分子抑制剂的结构为以下4种结构中的任一种；所述4种结构如下：

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