CN114112599A - 一种胰岛素样生长因子-i解离液 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种胰岛素样生长因子‑I解离液。涉及生长紊乱检测技术领域。包括以下成分：KCl‑HCl缓冲液、牛血清蛋白、SDS、Tween‑20和ProClin300。本发明可高效从IGFBP‑3和酸性不稳定亚基解离IGF‑I，具有反应时间短，释放彻底，对后续反应影响小等优点。
Description
技术领域
本发明涉及生长紊乱检测技术领域，更具体的说是涉及一种胰岛素样生长因子-I解离液。
背景技术
临床实践中，胰岛素样生长因子-I(IGF-I)检测可对生长紊乱评估起辅助作用。
血清中几乎所有循环的胰岛素样生长因子-I是与IGFBP-3及酸性不稳定亚基结合，使得血清胰岛素样生长因子-I测量变得复杂，准确测量需要解离释放胰岛素样生长因子-I。
因此如何高效、彻底的解离释放胰岛素样生长因子-I且对后续反映影响小是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种胰岛素样生长因子-I解离液。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种胰岛素样生长因子-I解离液，包括以下成分：KCl-HCl缓冲液、牛血清蛋白、SDS、Tween-20和ProClin300。
优选的：解离液中KCl-HCl缓冲液浓度为10～200mM，且KCl与HCl摩尔比为1：1；
以解离液总质量计，牛血清蛋白含0.1～5％；
SDS含0.1～3％；
Tween-20含0.1～5％；
ProClin300含0.05～1％。
优选的：KCl-HCl缓冲液浓度为30～100mM；
牛血清蛋白含0.5％～1.5％；
Tween-20含2％～4％；
ProClin300含0.1％～0.5％；
SDS含0.5％～1.0％。
本发明还提供了一种试剂盒，包括上述的胰岛素样生长因子-I解离液。
有益效果在于：KCl-HCl主要是用来提供缓冲环境，使反应在pH1.5-4.5的缓冲区建进行，该缓冲区间最适宜从IGFBP-3和酸性不稳定亚基解离IGF-I；
牛血清蛋白是一种血清蛋白，可以为解离出的IGF-I提供蛋白保护环境；
SDS是表面活性剂，破坏血清样本中的杂质，便于解离的充分进行；
Tween-20是表面活性剂，可以使解离出的IGF-I进行后续检测时反应更具有特异性；
ProClin300是防腐剂，可以使解离液中的有机成分避免被细菌污染，达到更长的有效期。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种胰岛素样生长因子-I解离液，取得的技术效果为本发明可高效从IGFBP-3和酸性不稳定亚基解离IGF-I，具有反应时间短，释放彻底，对后续反应影响小等优点。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1附图为本发明实施例1提供的胰岛素样生长因子-I解离液对样本进行解离测定浓度后，与西门子测定数据相关线性图。
图2附图为本发明实施例2提供的胰岛素样生长因子-I解离液对样本进行解离测定浓度后，与西门子测定数据相关线性图。
图3附图为本发明实施例3提供的胰岛素样生长因子-I解离液对样本进行解离测定浓度后，与西门子测定数据相关线性图。
图4附图为本发明实施例4提供的胰岛素样生长因子-I解离液对样本进行解离测定浓度后，与西门子测定数据相关线性图。
图5附图为本发明实施例5提供的胰岛素样生长因子-I解离液对样本进行解离测定浓度后，与西门子测定数据相关线性图。
图6附图为本发明实施例6提供的胰岛素样生长因子-I解离液对样本进行解离测定浓度后，与西门子测定数据相关线性图。
图7附图为本发明实施例7提供的胰岛素样生长因子-I解离液对样本进行解离测定浓度后，与西门子测定数据相关线性图。
图8附图为本发明实施例8提供的胰岛素样生长因子-I解离液对样本进行解离测定浓度后，与西门子测定数据相关线性图。
图9附图为本发明对比例1提供的胰岛素样生长因子-I解离液对样本进行解离测定浓度后，与西门子测定数据相关线性图。
图10附图为本发明对比例2提供的胰岛素样生长因子-I解离液对样本进行解离测定浓度后，与西门子测定数据相关线性图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例公开了一种胰岛素样生长因子-I解离液。
实施例1
一种胰岛素样生长因子-I解离液，包括以下成分：KCl-HCl缓冲液、牛血清蛋白、SDS、Tween-20和ProClin300。
解离液中KCl-HCl缓冲液浓度为30mM，且KCl与HCl摩尔比为1：1(30mM：30mM)；
以解离液总质量计，牛血清蛋白含0.5％
SDS含0.1％
Tween-20含0.1％
ProClin300含0.1％。
实施例2
一种胰岛素样生长因子-I解离液，包括以下成分：KCl-HCl缓冲液、牛血清蛋白、SDS、Tween-20和ProClin300。
解离液中KCl-HCl缓冲液浓度为20mM，且KCl与HCl摩尔比为1：1(20mM：20mM)；
以解离液总质量计，牛血清蛋白含0.8％
SDS含0.5％
Tween-20含0.5％
ProClin300含0.2％。
实施例3
一种胰岛素样生长因子-I解离液，包括以下成分：KCl-HCl缓冲液、牛血清蛋白、SDS、Tween-20和ProClin300。
解离液中KCl-HCl缓冲液浓度为50mM，且KCl与HCl摩尔比为1：1(50mM：50mM)；
以解离液总质量计，牛血清蛋白含1.0％
SDS含0.8％
Tween-20含3.0％
ProClin300含0.3％。
实施例4
一种胰岛素样生长因子-I解离液，包括以下成分：KCl-HCl缓冲液、牛血清蛋白、SDS、Tween-20和ProClin300。
解离液中KCl-HCl缓冲液浓度为120mM，且KCl与HCl摩尔比为1：1(180mM：180mM)；
以解离液总质量计，牛血清蛋白含0.1％
SDS含1.0％
Tween-20含2.0％
ProClin300含0.4％。
实施例5
一种胰岛素样生长因子-I解离液，包括以下成分：KCl-HCl缓冲液、牛血清蛋白、SDS、Tween-20和ProClin300。
解离液中KCl-HCl缓冲液浓度为100mM，且KCl与HCl摩尔比为1：1(100mM：100mM)；
以解离液总质量计，牛血清蛋白含1.5％
SDS含1.5％
Tween-20含3.0％
ProClin300含0.5％。
实施例6
一种胰岛素样生长因子-I解离液，包括以下成分：KCl-HCl缓冲液、牛血清蛋白、SDS、Tween-20和ProClin300。
解离液中KCl-HCl缓冲液浓度为80mM，且KCl与HCl摩尔比为1：1(80mM：80mM)；
以解离液总质量计，牛血清蛋白含1.2％
SDS含2.0％
Tween-20含4.0％
ProClin300含0.4％。
实施例7
一种胰岛素样生长因子-I解离液，包括以下成分：KCl-HCl缓冲液、牛血清蛋白、SDS、Tween-20和ProClin300。
解离液中KCl-HCl缓冲液浓度为200mM，且KCl与HCl摩尔比为1：1(200mM：200mM)；
以解离液总质量计，牛血清蛋白含0.3％
SDS含2.5％
Tween-20含4.5％
ProClin300含0.2％。
实施例8
一种胰岛素样生长因子-I解离液，包括以下成分：KCl-HCl缓冲液、牛血清蛋白、SDS、Tween-20和ProClin300。
解离液中KCl-HCl缓冲液浓度为150mM，且KCl与HCl摩尔比为1：1(150mM：150mM)；
以解离液总质量计，牛血清蛋白含1.3％
SDS含3.0％
Tween-20含5.0％
ProClin300含0.2％。
对比实验1
对比例1
一种胰岛素样生长因子-I解离液，包括以下成分：KCl-HCl缓冲液、牛血清蛋白、SDS、Tween-20和ProClin300。
解离液中KCl-HCl缓冲液浓度为150mM，且KCl与HCl摩尔比为1：1(5mM：5mM)；
以解离液总质量计，牛血清蛋白含7.0％
SDS含2.0％
Tween-20含3.0％
ProClin300含0.2％。
对比例2
一种胰岛素样生长因子-I解离液，包括以下成分：KCl-HCl缓冲液、牛血清蛋白、SDS、Tween-20和ProClin300。
解离液中KCl-HCl缓冲液浓度为300mM，且KCl与HCl摩尔比为1：1(300mM：300mM)；
以解离液总质量计，牛血清蛋白含1.0％
SDS含5.0％
Tween-20含7.0％
ProClin300含0.3％。
对实施例1～8和对比例1、2进行线性的验证：
采用50个样本，用上述8个实施例及2组对比例对50个样本分别进行解离，并通过化学发光的方法测定胰岛素样生长因子-I(IGF-I)的浓度(ng/mL)；同时获取50个样本的西门子测定值(ng/mL)。然后通过每个实施例与西门子测定值进行线性拟合，获取其相关性参见表1～10。
表1
表2
表3
表4
表5
表6
表7
表8
表9
表10
绘制实施例1～8、对比例1、2制备的解离液对样本进行解离测定浓度后，与西门子测定数据相关线性图参见图1～10。
结合图1至图10，可以看出，实施例1、实施例2、实施例3、实施例5、实施例6、实施例8的线性相关较好，R2值都在0.96以上，表明其相关性较佳。
从图9和图10可以看出，R2值为0.919、0.929，相关性较低，在对比例1中，胰岛素样生长因子-I(IGF-I)解离液中，KCl、HCl和牛血清蛋白超出预定范围，所以其解离效果一般，从而导致最终测定值偏差较大。在对比例2中，KCl、HCl、SDS和Tween-20都超出了预定范围，所以其解离效果一般，从而导致最终测定值偏差也较大。
另外，从实施例1至实施例8可以看出，就线性相关性而言，实施例3＞实施例1＞实施例6＞实施例5＞实施例8＞实施例2＞实施例4＞实施例7。但是在整个8个实施例中，实施例1、3、5、6的R2值相对其他几个实施例而言更佳，而这几个实施例的KCl-HCl体系浓度都在30mM至100mM之间，所以，相对而言，KCl-HCl体系浓度在30mM至100mM之间对R2值相对来说结果更好。
此外，从线性相关性排名来看，实施例4、7是偏低的，且实施例4、7对应的牛血清蛋白浓度偏低，而其余实施例牛血清蛋白浓度较高，由此可见，牛血清蛋白浓度不宜偏低，应在0.5％～1.5％范围内。
对比实验2
解离液在对胰岛素样生长因子-I(IGF-I)进行解离后，为了验证解离后的残留液对后续测定是否有影响，进行如下实验：
取10个胰岛素样生长因子-I(IGF-I)血清样本，用市场上的A产品、对比例1、2(同实施例1)对其进行解离，然后测定化学发光的信号值(信号值越高，测定越准确，信号值越低，说明测定误差越大，也反映了解离后对后续反映影响大)。参见表11、表12。
表11
表12
| 实施例5 | 实施例6 | 实施例7 | 实施例8 | 对比例1 | 对比例2 |
| 发光值 | 发光值 | 发光值 | 发光值 | 发光值 | 发光值 |
| 39520 | 38942 | 35938 | 34423 | 22596 | 24748 |
| 56768 | 55937 | 50680 | 47512 | 33000 | 36751 |
| 103133 | 101624 | 86229 | 87129 | 60423 | 66178 |
| 119497 | 117748 | 89262 | 96761 | 69241 | 75833 |
| 125993 | 124149 | 94128 | 95456 | 75268 | 82437 |
| 156514 | 154229 | 116836 | 118553 | 88843 | 97304 |
| 315250 | 310636 | 235452 | 238836 | 184263 | 201812 |
| 371954 | 366481 | 277738 | 282079 | 215062 | 234457 |
| 406763 | 400810 | 311182 | 308133 | 239217 | 260760 |
| 524211 | 516539 | 345558 | 343124 | 309314 | 324221 |
从表中11～12可以看出，实施例1～8的信号强度相对于A产品而言大约高出30％，所以相对于A产品而言，本发明的解离液对后续反应影响明显小。
Tween-20是表面活性剂，它可以使解离的胰岛素样生长因子-I(IGF-I)后续反应更具有特异性。所以其浓度对信号强度有影响。在实施例中，信号增强效果好的，Tween-20浓度范围都在2％～4％，由此可见，Tween-20浓度在该范围内对胰岛素样生长因子-I(IGF-I)的充分解离有较好的影响。
另外，SDS是表面活性剂，能够破坏血清样本中的杂质，便于解离的充分、快速进行。实施例2、3、4高低值样本发光值区分更明显，所以，SDS的含量最佳浓度为0.5％～1.0％。
ProClin300是防腐剂，可以使解离液中的有机成分避免被细菌污染，达到更长的有效期。ProClin300的含量最佳浓度为0.1％～0.5％。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (4)
1.一种胰岛素样生长因子-I解离液，其特征在于，包括以下成分：KCl-HCl缓冲液、牛血清蛋白、SDS、Tween-20和ProClin300。
2.如权利要求1所述的胰岛素样生长因子-I解离液，其特征在于，所述解离液中KCl-HCl缓冲液浓度为10～200mM，且KCl与HCl摩尔比为1：1；
以解离液总质量计，牛血清蛋白含0.1～5％；
SDS含0.1～3％；
Tween-20含0.1～5％；
ProClin300含0.05～1％。
3.如权利要求1所述的胰岛素样生长因子-I解离液，其特征在于，所述KCl-HCl缓冲液浓度为30～100mM；
牛血清蛋白含0.5％～1.5％；
Tween-20含2％～4％；
ProClin300含0.1％～0.5％；
SDS含0.5％～1.0％。
4.一种试剂盒，包括权利要求1～3任一所述的胰岛素样生长因子-I解离液。
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|---|---|---|---|---|
| CN116087386A (zh) * | 2023-04-11 | 2023-05-09 | 西湖欧米(杭州)生物科技有限公司 | 一种人胰岛素样生长因子检测方法及试剂盒 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114112599B (zh) | 2024-02-13 |
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