CN114107571A - 用于bk病毒lamp检测的试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了基于环介导的等温扩增(LAMP)技术进行BK病毒检测的方法，用于所述方法的引物组及相应试剂盒。利用所述引物组能够特异性的环介导等温扩增BK病毒。本发明方法特异性好、灵敏度高、重复性好、操作简单、方便快捷，可良好地应用于鉴定BK病毒，适用于临床和实验室检测。

Description

用于BK病毒LAMP检测的试剂盒
技术领域
本发明属于分子生物学和核酸检测技术领域，尤其是涉及基于环介导的等温扩增BK病毒引物组、试剂盒及检测方法。
背景技术
人BK病毒(BK virus，BKV)是基因组大约5300bp的无囊膜环状双链DNA病毒，与人JC病毒(JC virus,JCV)、猴SV40病毒同属于多瘤病毒家族(polyomaviruses)。BKV人群感染率超过85％，但有临床症状者常限于免疫功能缺陷的个体。BKV的原发感染多发生在儿童时期，随后在泌尿系统潜伏感染，BKV潜伏感染也见于淋巴组织及肝、肺、眼、脑等处。BKV是机会性病原体，免疫正常的人群无感染症状，当宿主免疫功能降低或受到抑制时BKV可重新活化并致病。器官移植术后长期服用免疫抑制剂导致患者免疫功能低下是BKV活化的主要诱因。大约6％的肾移植患者因BKV感染引发BKV相关性肾病(BKVN)，其中50-70％的BKVN患者最终导致移植肾失去功能。BKVN已成为肾移植术后最严重的并发症及影响肾移植病人长期生存和功能的关键因素之一。BKV的感染还与造血干细胞移植患者的出血性膀胱炎，进行性多灶性脑白质病、肺部疾病、肿瘤、自身免疫性疾病等相关。而目前临床上对BKVN除降低免疫抑制外无有效的抗病毒手段，而免疫抑制强度降低又容易诱发器官排斥。因此，BKV感染的早期诊断对肾移植患者预后具有重要临床意义。
BKVN诊断的金标准是肾组织活检，联合肾小管间质肾炎表现、血清肌酐升高等确诊BKVN。由于BKVN病灶的局限性导致准确取样困难，灵敏度会受到影响。并且肾组织穿刺带有创伤性，不易被病人接受。同时肾组织活检还要排除急性排斥反应，药物毒性和其他潜在疾病的影响。患者BKV激活复制后尿液首先表现为病毒尿症，可通过尿液decoy细胞镜检判断。Decoy细胞为来源于尿道上皮的脱落细胞，显微镜下可见核内病毒包涵体及细胞病变效应。但这种方法受限于尿液病理差异及尿道结构的个体差异，结果判定主观，难以做到标准化。荧光定量PCR检测血液、尿液中BKV的DNA，被认为是目前最适合用于肾移植术后监测病人发生BKVN的无创诊断方法。但由于缺乏统一检测标准，不同检测体系造成了结果差异较大，无法进行横向比较，病毒拷贝数的阈值无法达成共识，给报告解读带来一定困扰。现有用于检测BKV的方法大都检测周期长，速度慢，而且检测准确度不高，所以我们急需能够实现快速、有效且准确检测BKV的产品，以用于BKV的检测。
环介导等温扩增(LAMP)是一种在等温条件下特异性快速扩增DNA的新型技术。不同于PCR，LAMP技术使用2-3对引物和具有链置换活性的Bst DNA聚合酶来识别目标基因中的六个不同区域。目标序列在60–65℃恒温下扩增，60分钟内扩增效率高达109–1010。执行LAMP检测只需要一个恒温模块，避免了PCR的热循环需求。LAMP检测技术具有高灵敏度、特异性、便利性和高效率的特征，已被广泛用于病原体诊断。
综上，开发基于环介导的等温扩增BK病毒的引物组、试剂盒及相应的检测方法在本领域具有重要意义。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供一种用于检测BKV的LAMP引物、探针及试剂盒。该引物组可特异、灵敏扩增BKV，该检测方法操作简单、快速准确、特异性好、灵敏度高。
本发明第一方面提供了用于检测BKV的LAMP引物组；所述检测BK病毒的环介导等温扩增方法的引物组，是由一对外引物、一对内引物和环引物组成，其中所述的外引物由F3和B3、内引物由FIP和BIP、环引物由LB组成。
在某些实施方案中，环引物为两条，LF和LB。
在某些实施方式中，所述引物组选自BK1、BK2、BK3、BK4和BK5任一组。
所述BK1引物组包括：序列如SEQ ID NO:1所示的F3，序列如SEQ ID NO:2所示的B3，序列如SEQ ID NO:3所示的FIP，序列如SEQ ID NO:4所示的BIP，序列如SEQ ID NO:5所示的LB。
所述BK2引物组包括：序列如SEQ ID NO:6所示的F3，序列如SEQ ID NO:7所示的B3，序列如SEQ ID NO:8所示的FIP，序列如SEQ ID NO:9所示的BIP，序列如SEQ ID NO:10所示的LB。
所述BK3引物组包括：序列如SEQ ID NO:11所示的F3，序列如SEQ ID NO:12所示的B3，序列如SEQ ID NO:13所示的FIP，序列如SEQ ID NO:14所示的BIP，序列如SEQ ID NO:15所示的LF，序列如SEQ ID NO:16所示的LB。
所述BK4引物组包括：序列如SEQ ID NO:17所示的F3，序列如SEQ ID NO:18所示的B3，序列如SEQ ID NO:19所示的FIP，序列如SEQ ID NO:20所示的BIP，序列如SEQ ID NO:21所示的LB。
所述BK5引物组包括：序列如SEQ ID NO:22所示的F3，序列如SEQ ID NO:23所示的B3，序列如SEQ ID NO:24所示的FIP，序列如SEQ ID NO:25所示的BIP，序列如SEQ ID NO:26所示的LB。
所述五组引物组中的环引物探针各自的5’端修饰有荧光淬灭基团，3’端修饰有荧光报告基团；所述的荧光报告基团选自6-羧基荧光素、六氯-6-甲基荧光素、VIC荧光染料、四氯-6-羧基荧光素、羧基-X-罗丹明、6-羧基四甲基罗丹明、2，7-二甲基-4，5-二氯-6-羧基荧光素、磺酰罗丹明、6-羧基-4’，5-二氯-2’，7’-二甲氧基荧光素琥珀酰亚胺酯、花菁3、花菁5或花菁5.5中的至少一种；所述荧光淬灭基团为BHQ1、BHQ2、BHQ3。
本发明第二方面提供了第一方面所述的引物组在制备BK病毒检测试剂或试剂盒中的应用。
本发明第三方面提供了包含第一方面所述引物组的试剂或试剂盒。
在某些实施方式中，所述试剂盒用于样品中BK病毒的检测。
在某些实施方式中，所述试剂盒除引物组外，还可以包括反应缓冲液、DNA聚合酶、无核酸酶水；所述DNA聚合酶可以为Bst DNA聚合酶。
在某些实施方式中，所述试剂盒还包括阳性对照和阴性对照。所述阳性对照为含有BK病毒靶标基因序列的质粒，阴性对照为无核酸酶水。
本发明第四方面提供了第一方面所述的引物组、第二方面所述的试剂或试剂盒在样品中BK病毒检测中的应用；
在某些实施方式中，所述检测为非诊断治疗目的的。
在某些实施方式中，所述应用包括如下步骤：a.将待测样品及对照加入恒温扩增体系进行扩增；b.反应结束，采集被检样本、阳性对照、阴性对照的荧光信号；c.结果判定。
在某些实施方式中，所述反应体系包括待检测样品、10×恒温扩增缓冲液、MgS04、dNTP、引物F3、引物B3、引物FIP、引物BIP、引物LB、Bst聚合酶、无核酸酶水。
在某些实施方式中，所述LAMP检测引物组和LAMP反应液所构建的等温扩增反应体系为，10×恒温扩增缓冲液2.5μL，100mM MgS041μL，10mM dNTP 3.5μL、10μM引物F3 0.5μL、10μM引物B3 0.5μL、80μM引物FIP 0.5μL、80μM引物BIP 0.5μL、40μM引物LF 0.5μL、40μM LB引物0.5μL、8U/μL Bst DNA聚合酶1μL、模板3μL，补加无核酸酶水至25μL。
在某些实施方式中，所述反应体系体积为25μL或50μL。
在某些实施方式中，所述扩增的反应温度为50-65℃，检测的温度可通过水浴提供。
在某些实施方式中，所述扩增的反应时长为10-60min，例如10min,15min、20min、25min、30min、35min、40min、45min、50min、55min、60min；优选40min。
在某些实施方式中，优选地反应温度为63℃，反应时长为40min。
在某些实施方式中，所述步骤c中结果判定的方法为：①阳性对照：有典型的S型扩增曲线出现，终点荧光值高于等于起点荧光值3倍以上，为有效结果；②阴性对照：无扩增曲线出现，或终点荧光值低于起点荧光值的3倍，为有效结果；③被检样本：a.若终点荧光值高于等于起点荧光值3倍以上，判断为阳性；b.若终点荧光值低于起点荧光值的3倍，判断为阴性。
本发明的有益效果是：
1)操作简便、快速：本发明建立的LAMP方法相对于常规的荧光定量PCR等BK病毒检测方法更快速、高效，从提取样品到结果判定可在40min内完成，反应结果判定方法简单。
2)灵敏度高、特异性强：本发明的引物能达到到每微升1拷贝的灵敏度，10copies/反应以上浓度可稳定检出，显著高于现有技术水平；本发明的引物能特异性检测BKV病毒，无法检测到HPV-1、HPV-2、HPV-3、HPV-4、HBV-16、Adhu5、CMV、HIV。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1：BK1、BK2、BK3、BK4、BK5引物组在同等模板浓度下检测灵敏度比较结果。
图2：现有技术文献1的BK病毒引物组荧光定量PCR方法检测阳性样本的结果。
图3：BK2引物组等温扩增方法检测阳性样本的结果
图4：BK2引物组等温扩增方法灵敏度检测结果。
图5：现有技术文献2的BK病毒引物组等温扩增方法灵敏度检测结果。
图6：BK2引物组特异性检测结果。
具体实施方式
下面进一步描述本发明，本描述中介绍的实施案例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成限制。本专业技术人员应该理解的是，在不偏离本发明原理和方法的情况下，对本发明技术方案的细节和形式进行部分修改或替换，但基于此修改或替换均属于本发明的保护范围内。
实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
实施例1 LAMP引物组设计与优选
1.1 LAMP引物设计
根据NCBI上已报道的BK病毒的保守区域VP1基因序列(登录号GenBank:AB365176.1，SEQ ID NO:27)，利用LAMP引物设计软件Primer Explorer V5(http://primerexplorer.jp/lampv5e/index.html)设计了5套特异引物组BK1，BK2，BK3，BK4，BK5，引物及荧光标
记探针序列(5’-3’)如下表1：
表1.BK病毒检测引物组
Figure BDA0003475265640000071
1.2 LAMP引物的筛选
通过灵敏度比较，对实施例1.1中设计出的5个引物组进行优选，具体方法如下：根据实施例1.1中设计出的五组引物，分别用五组引物配置等温扩增体系，将含有目的靶标VP1基因(GenBank:AB365176.1)的质粒pcDNA3.1(+)(生工生物工程公司合成)使用NanoDrop One/OneC微量核酸蛋白浓度测定仪测定浓度并进行梯度稀释，将稀释成103拷贝/ul的模板取3ul加入到五组引物配置的等温扩增体系中进行反应，反应条件为63℃1min/40个循环，在同等条件下比较各引物组之间的扩增效率。LAMP等温扩增反应体系如下表2所示。
表2.LAMP等温扩增反应体系
Figure BDA0003475265640000081
LAMP恒温扩增反应条件：
50-65℃下反应10-60min，最佳反应条件为：63℃反应40min。
5组引物的灵敏度验证结果如附图1，由图1可以看出在同等模板浓度下，相较于其他引物组BK2引物组出现扩增曲线的时间最短，所以BK2为优选的引物组。
实施例2 BK2引物组的功能验证
荧光定量PCR检测血液、尿液BKV的DNA，被认为是目前最适合用于肾移植术后监测病人发生BKVN的无创诊断方法。所以根据现有技术文献1报道(Leung AY等人,Quantification of polyoma BK viruria in hemorrhagic cystitis complicatingbone marrow transplantation,Blood,第98卷，第6期，2001)的荧光定量PCR方法对已知的阳性尿液样本进行进一步验证，用以说明等温扩增方法检测的临床检测有效性。阳性对照为含有BK病毒的靶标基因核糖核酸片段，阴性对照为无核酸酶水。
2.1待检尿液样品DNA的提取：
通过离心柱法提取待检尿液样品的DNA的具体操作如下：
取约1mL待检尿液样品，置于1.5ml灭菌离心管，使用离心机13000rpm离心10min，弃上清保留沉淀；加入500ul裂解液，充分混匀；室温裂解10分钟；使用离心机12000g离心力离心1分钟，取上清液，加入DNA吸附柱；使用离心机8000g离心力进行离心处理，使上清液通过吸附柱，实现病毒DNA被DNA吸附柱吸附；加入500ul体积分数为75％的乙醇洗涤DNA吸附柱；使用离心机8000g离心力对DNA吸附柱进行2次离心洗涤；使用离心机12000g离心力对DNA吸附柱进行离心处理，清除DNA吸附柱中残留的乙醇；加入50ul无核酸酶水，静置5分钟；使用离心机12000g离心力对DNA吸附柱进行离心处理，洗脱DNA吸附柱上的DNA，洗脱液即为病毒DNA溶液。
2.2荧光定量PCR检测
荧光定量PCR扩增反应体系，以20uL体系为例：qPCR master mix(takara)，10uL；上游引物BK-F，浓度为10uM，1uL；下游引物BK-R，浓度为10uM，1uL；探针BK-P，浓度为10uM，0.5uL；模板，3uL；无核酸酶水补足至20uL。根据现有技术文献1合成相应的引物组，提取尿液的核酸，取3ul加入到qPCR的扩增体系中，反应程序为：95℃3分钟，(95℃15秒，60℃1分钟，40个循环)，反应结束后具有扩增的样本CT值＜40定义为阳性样本。结果如图2所示，两例样本均有扩增曲线且CT值＜40，表明这两份尿液样本为阳性样本，分别命名为阳性样本1、2。
2.3 LAMP检测验证
将来自两例阳性样本1、2的3微升含BK病毒DNA提取液加入等温扩增体系如实施例1.2所述，立即检测；反应程序为：63℃1分钟，40个循环，在每个循环的终点处采集Cy5荧光信号(仪器：Bio-Rad CFX96)，40min可完成检测；结果如附图3相比于荧光定量PCR法，等温扩增检测方法耗时更短，具有更大的检测优势。其中，LAMP检测结果判定的方法如下：
①阳性对照：有典型的S型扩增曲线出现，终点荧光值高于等于起点荧光值3倍以上，为有效结果；
②阴性对照：无扩增曲线出现，或终点荧光值低于起点荧光值的3倍，为有效结果；
③被检样本：
a.若终点荧光值高于等于起点荧光值3倍以上，判断为阳性；
b.若终点荧光值低于起点荧光值的3倍，判断为阴性。
结果表明，本实施例建立的BKV荧光法恒温扩增检测试剂盒的检测方法能够对尿液中的BKV进行检测，且相比于荧光定量PCR法耗时更短，操作也更为简便。
实施例3 BK2引物组以及文献报道引物组灵敏度测试对比
筛选完引物之后，使用NanoDrop One/OneC微量核酸蛋白浓度测定仪对BKV基因组标准物质(含目的靶标VP1基因(GenBank:AB365176.1)的质粒pcDNA3.1(+)，生工生物工程公司合成)测定浓度，然后以10倍梯度稀释成10000copies/μL、1000copies/μL、100copies/μL、10copies/μL、1copies/μL的样品，以所有稀释倍数的样品分别为模板，分别采用本申请的LAMP检测试剂盒(等温扩增方法(实验组)如实施例1.2所述)以及现有技术文献2报道(Bipin Raj Bista等人，Development of a Loop-Mediated Isothermal AmplificationAssay for Rapid Detection of BK Virus，JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY，第45卷，第5期，第1581-1587页)的等温扩增检测方法(对照组))进行对比实验。
现有技术文献2文献报道的等温扩增检测方法具体操作如下：
以25μL等温扩增体系为例，10X等温扩增体系缓冲液2.5μL(New EnglandBiolabs,MA)，8U/μL Bst DNA聚合酶(New England Biolabs Inc.,MA)1μL，100mM MgS04 1μL，10mM dNTP 3.5μL、10μM引物F3 0.5μL、10μM引物B3 0.5μL、80μM引物FIP 0.5μL、80μM引物BIP 0.5μL、40μM引物LF 0.5μL、40μM LB引物0.5μL，甜菜碱(Sigma-Aldrich,MO)5μL，各稀释倍数的模板3μL，无核酸酶水补至25μL，反应程序：63℃40min。
检测结果如图4、5所示。阴阳性对照检测结果正常。本申请其余浓度全部检出，1copies/μL概率检出，根据3μL加样体积换算，10copies/反应以上浓度可稳定检出，1copies/反应时受到取样影响概率检出如图4所示，相比于现有技术文献2报道的等温扩增检测方法如图5，根据3μL加样体积换算，30copies/反应检出速度已大大减缓，本申请提供的LAMP检测方法能更快地检测出BK病毒。
实施例4 BK2引物组特异性测试
将临床上收集1例BKV(BK virus，BK)以及HPV-1、HPV-2、HPV-3、HPV-4、HBV-16、Adhu5、CMV、HIV等共九例经恒温扩增验证为对应病毒阳性的样本进行检测，检验试剂盒的特异性。
具体操作如下：
分别取9例样本以及阴、阳性对照进行检测，记录结果。
BK检测结果为阳性，其余检测结果为阴性，阴阳性对照检测结果正常。表明本发明的试剂盒检测结果的特异性。测试引物特异性如下图6。
综上所述，本申请提供的对BK病毒LAMP检测试剂盒和检测方法可在40分钟内完成对BK病毒毒株的检测，检测速度快，操作简便，能够广泛应用于BK病毒株的快速鉴别诊断。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效结构变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。
SEQUENCE LISTING
<110> 复旦大学附属中山医院
<120> 用于BK病毒LAMP检测的试剂盒
<130> 20220111
<160> 27
<170> PatentIn version 3.3
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<400> 13
ctgtcaaagt cccaaaatac ctagtacaaa aacaatgctt atccagt 47
<210> 14
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 14
ggaaaatgtt cccccagtac ttcattttac aaagaggccc cac 43
<210> 15
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 15
actcacgacc taaggactag g 21
<210> 16
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> BHQ2标记
<220>
<221> misc_feature
<222> (20)..(20)
<223> ROX标记
<400> 16
cacagctacc acagtgttgc 20
<210> 17
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 17
ctatttggac aaaaacaatg ctt 23
<210> 18
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 18
gctgaaacat acaggctatc 20
<210> 19
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 19
cctgtcaaag tcccaaaata cctagccagt tgagtgctgg att 43
<210> 20
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 20
ggaaaatgtt cccccagtac ttcattttac aaagaggccc cac 43
<210> 21
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> BHQ1标记
<220>
<221> misc_feature
<222> (20)..(20)
<223> VIC标记
<400> 21
cacagctacc acagtgttgc 20
<210> 22
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 22
gttgagtgct ggattcct 18
<210> 23
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 23
tgttagtaaa caggccacaa 20
<210> 24
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 24
cacatgaagt actgggggaa catgaaaata ctaggtattt tgggactt 48
<210> 25
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 25
acacagctac cacagtgttg cagctgaaac atacaggct 39
<210> 26
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> BHQ3标记
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> Cy5.5
<400> 26
tgtggggcct ctttgtaaag c 21
<210> 27
<211> 745
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 27
agtgatagcc cagagagaaa aatgcttccc tgttacagca cagcaagaat tcccctcccc 60
aatttgaatg aggacctaac ctgtggaaat ctactaatgt gggaggctgt aactgtacaa 120
acagaggtta ttggaataac tagcatgctt aaccttcatg cagggtcaca aaaagtacat 180
gagcatggtg gagggaagcc tattcaaggc agtaatttcc acttctttgc tgttggtgga 240
gaccccttgg aaatgcaggg agtgctaatg aattacagga caaagtaccc agaaggtact 300
ataactccaa aaaacccaac agcccagtcc caggtaatga atactgacca taaggcctat 360
ttggacaaaa acaatgctta tccagttgag tgctggattc ctgatcccag tagaaatgaa 420
aatactaggt attttgggac tttgacagga ggggaaaatg ttcccccagt acttcatgtg 480
accaacacag ctaccacagt gttgctagat gaacagggtg tggggcctct ttgtaaagct 540
gatagcctgt atgtttcagc tgctgatatt tgtggcctgt ttactaacag ctctggaaca 600
caacagtgga gaggccttgc aagatatttt aagattcgcc tgagaaaaag atctgtaaag 660
aatccttacc caatttcctt tttgctcagt gaccttataa acaggagaac ccagagagtg 720
gatgggcagc ctatgtatgg tatgg 745

Claims (10)

1.一种BK病毒环介导等温扩增检测引物组，其特征在于，所述引物组选自BK1、BK2、BK3、BK4或BK5；
所述BK1引物组包括：序列如SEQ ID NO:1所示的F3，序列如SEQ ID NO:2所示的B3，序列如SEQ ID NO:3所示的FIP，序列如SEQ ID NO:4所示的BIP，序列如SEQ ID NO:5所示的LB；或，
所述BK2引物组包括：序列如SEQ ID NO:6所示的F3，序列如SEQ ID NO:7所示的B3，序列如SEQ ID NO:8所示的FIP，序列如SEQ ID NO:9所示的BIP，序列如SEQ ID NO:10所示的LB；或，
所述BK3引物组包括：序列如SEQ ID NO:11所示的F3，序列如SEQ ID NO:12所示的B3，序列如SEQ ID NO:13所示的FIP，序列如SEQ ID NO:14所示的BIP，序列如SEQ ID NO:15所示的LF，序列如SEQ ID NO:16所示的LB；或，
所述BK4引物组包括：序列如SEQ ID NO:17所示的F3，序列如SEQ ID NO:18所示的B3，序列如SEQ ID NO:19所示的FIP，序列如SEQ ID NO:20所示的BIP，序列如SEQ ID NO:21所示的LB；或，所述BK5引物组包括：序列如SEQ ID NO:22所示的F3，序列如SEQ ID NO:23所示的B3，序列如SEQ ID NO:24所示的FIP，序列如SEQ ID NO:25所示的BIP，序列如SEQ ID NO:26所示的LB；
其中，F3、B3为外引物，FIP、BIP为内引物，LF、LB为环引物。
2.权利要求1所述的引物组在制备BK病毒检测试剂或试剂盒中的应用。
3.包含权利要求1所述的引物组的试剂或试剂盒。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进一步包含反应缓冲液，DNA聚合酶，BK病毒阳性对照。
5.权利要求1所述的引物组、权利要求3或4所述的试剂或试剂盒在样品中BK病毒检测中的应用；优选地，所述检测为非诊断治疗目的的。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：a.将待测样品及对照样品加入恒温扩增体系进行扩增；b.反应结束，采集被检样本、阳性对照、阴性对照的荧光信号；c.结果判定。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述步骤a中恒温扩增体系包括待测样品、10×恒温扩增缓冲液、MgS04、dNTP、引物F3、引物B3、引物FIP、引物BIP、引物LB、Bst聚合酶、无核酸酶水。
8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于，所述步骤a中进行扩增反应温度为50-65℃，反应时长为10-60min。
9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述对照包括阳性对照和阴性对照。
10.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述步骤c中结果判定的方法为：①阳性对照：有典型的S型扩增曲线出现，终点荧光值高于等于起点荧光值3倍以上，为有效结果；②阴性对照：无扩增曲线出现，或终点荧光值低于起点荧光值的3倍，为有效结果；③被检样本：a.若终点荧光值高于等于起点荧光值3倍以上，判断为阳性；b.若终点荧光值低于起点荧光值的3倍，判断为阴性。
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