CN114107153A - 一种生产己二酸的重组菌、构建方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种生产己二酸的重组菌，表达调控细胞不对称分裂的靶点基因和调控己二酸生产的靶点基因，在此基础上，通过RBS序列调控不同基因片段的表达强度，实现定制化微生物群落，并且改善了己二酸生产性能。本发明的重组菌实现了从头合成己二酸，底物为脂肪酸，且该菌株在7.5L发酵罐发酵后，己二酸最高产量为5.2g/L。

Description

一种生产己二酸的重组菌、构建方法和应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种生产己二酸的重组菌、构建方法和应用。
背景技术
己二酸又称肥酸，是一种重要的有机二元酸，能够发生成盐反应、酯化反应、酰胺化反应等，并能与二元胺或二元醇缩聚成高分子聚合物等。己二酸是工业上具有重要意义的二元羧酸，在化工生产、有机合成工业、医药、润滑剂制造等方面都有重要作用，产量居所有二元羧酸中的第二位。己二酸主要用作尼龙66和工程塑料的原料，也用于生产各种酯类产品，还用作聚氨基甲酸酯弹性体的原料，各种食品和饮料的酸化剂，其作用有时胜过柠檬酸和酒石酸，也是医药、酵母提纯、杀虫剂、粘合剂、合成革、合成染料和香料的原料。
目前己二酸的生产方法主要为微生物法，具有无污染，成本低，产品特异型好等优势。如张熙等(酿酒酵母异源合成己二酸,食品与发酵工业,2020,46(7):1-9.DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.023231)以酿酒酵母为底盘生物，将来源于嗜热菌Thermobifidafusca B6中的己二酸逆降解途径基因搭配不同的酿酒酵母组成型启动子和终止子，构建在3个穿梭质粒上，并导入宿主细胞，成功实现了己二酸的异源合成；中国专利CN201710117371.1以大肠杆菌BL21(DE3)或敲除了atoB基因的大肠杆菌BL21(DE3)为宿主，分模块表达来自褐色喜热裂孢菌的异源基因，摇瓶发酵产量为1.64g/L，5L发酵罐产量达4.34g/L。但以上生产己二酸的工程菌有构建过程复杂、安全性较低、生产成本高、己二酸产量低等问题。因此，现有技术当中己二酸的生产还有很大的改进空间。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明通过分子生物学手段，利用细胞不对称分裂基因，调节微生物群落，便于代谢分工。通过引入靶向细胞不对称分裂的调控线路，扩大了细胞的功能，实现己二酸积累。
本发明的第一个目的是提供一种生产己二酸的重组菌，该重组菌表达调控细胞不对称分裂的靶点基因和调控己二酸生产的靶点基因；
调控细胞不对称分裂的靶点基因包括编码细胞骨架蛋白PopZ的基因popZ；调控己二酸生产的靶点基因包括编码降解酶长链脂肪酸转运蛋白FadL的基因fadL、脂酰CoA合成酶FadD的基因fadD、脂酰CoA脱氢酶FadE的基因fadE、脂肪酸氧化酶复合体α亚基FadB的基因fadB、脂肪酸氧化酶复合体β亚基FadA的基因fadA、1,4-二羟基-2-萘甲酰CoA水解酶YdiI的基因ydiI、烷烃-1-单加氧酶AlkB的基因alkB、红素氧还蛋白-1AlkG的基因alkG、红素氧还蛋白-NAD+还原酶AlkT的基因alkT、6-羟基己酸脱氢酶ChnD的基因chnD和醛脱氢酶ChnE的基因chnE。
进一步地，以大肠杆菌ATCC 8739为宿主，该菌株敲除了脂肪酸代谢调控蛋白基因fadR。
进一步地，该重组菌可以通过RBS序列调控细胞不对称分裂的靶点基因或调控己二酸生产的靶点基因的表达强度。其中，不同强度的RBS序列包括RBS34、RBS29、RBS32、RBS30或RBS64，优选为RBS34。本发明可通过不同RBS序列连接基因片段，从而调节该基因的表达强度，在实际应用时，可根据需要连接不同的RBS序列以调控合成途径中相关蛋白的产量从而影响下游蛋白的合成，实现微生物群落的定制化。
进一步地，以pETac-PopZ、pETac-FadL-FadD-FadE-PopZ、pEM-FadB-FadA-YdiI-PopZ和PTET-AlkB-AlkG-AlkT-ChnD-ChnE为表达载体。重组质粒pETac-PopZ以pETac为载体表达popZ基因，重组质粒pETac-FadL-FadD-FadE-PopZ以pETac为载体依次表达fadL、fadD、fadE和popZ基因，重组质粒pEM-FadB-FadA-YdiI-PopZ以pEM为载体依次表达fadB、fadA、ydiI和popZ基因，重组质粒PTET-AlkB-AlkG-AlkT-ChnD-ChnE以PTET为载体依次表达alkB、alkG、alkT、chnD和chnE基因。
pETac-PopZ表达了popZ基因，重组质粒pETac-PopZ的构建方法为：以pETac质粒为基础，采用BamH1和Sal1双酶切，通过同源重组的方法连接细胞骨架蛋白PopZ的popZ基因，获得重组质粒pETac-PopZ。
pETac-FadL-FadD-FadE-PopZ表达了fadL、fadD、fadE和popZ基因，重组质粒pETac-FadL-FadD-FadE-PopZ的构建方法为：以pETac质粒为基础，采用BamH1和Sal1双酶切，将FadL和FadD以RBS34为同源臂融合形成FadL-FadD片段，同样的方法获得带有RBS34的FadE-PopZ片段。然后通过多片段同源重组将FadL-FadD和FadE-PopZ连接到pETac质粒，获得重组质粒pETac-FadL-FadD-FadE-PopZ。
pEM-FadB-FadA-YdiI-PopZ表达了fadB、fadA、ydiI和popZ基因，重组质粒pEM-FadB-FadA-YdiI-PopZ的构建方法为：以pEM质粒为基础，采用AvR11和Sal1双酶切，将FadB和FadA以RBS34为同源臂融合形成FadB-FadA片段，同样的方法获得带有RBS34的YdiI-PopZ片段。然后通过多片段同源重组将FadB-FadA和YdiI-PopZ连接到pEM质粒，获得重组质粒pEM-FadB-FadA-YdiI-PopZ。
pTET-AlkB-AlkG-AlkT-ChnD-ChnE表达了alkB、alkG、alkT、chnD和chnE基因，重组质粒pTET-AlkB-AlkG-AlkT-ChnD-ChnE的构建方法为：以pTET质粒为基础，采用BamH1和Sal1双酶切，将AlkB和AlkG以RBS34为同源臂融合形成AlkB-AlkG片段，同样的方法获得带有RBS34的AlkT-ChnD-ChnE片段。然后通过多片段同源重组将AlkB-AlkG和AlkT-ChnD-ChnE连接到pTET质粒，获得重组质粒pTET-AlkB-AlkG-AlkT-ChnD-ChnE。
进一步地，编码降解酶长链脂肪酸转运蛋白FadL的基因fadL的核苷酸序列如SEQID NO.1所示。
进一步地，编码脂酰CoA合成酶FadD的基因fadD的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
进一步地，编码脂酰CoA脱氢酶FadE的基因fadE的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
进一步地，编码脂肪酸氧化酶复合体α亚基FadB的基因fadB的核苷酸序列如SEQID NO.4所示。
进一步地，编码脂肪酸氧化酶复合体β亚基FadA的基因fadA的核苷酸序列如SEQID NO.5所示。
进一步地，编码1,4-二羟基-2-萘甲酰CoA水解酶YdiI的基因ydiI的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
进一步地，编码烷烃-1-单加氧酶AlkB的基因alkB的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。
进一步地，编码红素氧还蛋白-1AlkG的基因alkG的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。
进一步地，编码红素氧还蛋白-NAD+还原酶AlkT的基因alkT的核苷酸序列如SEQID NO.9所示。
进一步地，编码6-羟基己酸脱氢酶ChnD的基因chnD的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。
进一步地，编码醛脱氢酶ChnE的基因chnE的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示。
进一步地，编码细胞骨架蛋白PopZ的基因popZ的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示。
全生物法合成己二酸主要包括以下四种途径：
(1)α酮酸还原途径，是2011年由Parthasarathy等人提出的一种α还原生物催化生产己二酸的途径，三羧酸循环中间体α酮戊二酸经过α-氨基己二酸途径与乙酰辅酶A缩合，α酮己二酸前体在工程细胞中通过一系列α还原反应酶的催化转化为己二酸；(2)逆β氧化途径，是2014年由Yu等人在大肠杆菌中构建的一条以乙酰辅酶A和琥珀酰辅酶A作为前体的逆β氧化途径来进行己二酸的生物合成，该途径表达了多个外源酶系，由多步酶促反应连续催化，因此蛋白表达负担较大且部分反应存在可逆现象；(3)脂肪酸ω氧化途径，主要是一元羧酸在ω羟化酶、醇脱氢酶和醛脱氢酶的催化下实现二元羧酸的生物合成。在最近的研究中，通过人工设计的生物催化大肠杆菌联合体模块系统，以类似于脂肪酸ω氧化途径的原理发酵获得己二酸，但高度纯化的生物基前体(ε-己内酯)的昂贵成本仍是阻碍其工业化生产的一大难题；(4)逆己二酸降解途径(RADP)，2015年，Deng等人首次发现褐色嗜热裂孢菌突变体(Thermobifidafusca B6)中存在的RADP可以用来生产己二酸。
本发明中，己二酸的合成途径主要包括内源β-氧化路径和外源ω-氧化路径来实现利用脂肪酸生产己二酸，使得己二酸产量达到5.2g/L，是目前报道的以脂肪酸为底物生产己二酸的最高产量。
代谢工程生产己二酸主要通过代谢路径的改造、优化来提高己二酸的产量。而微生物群落生产化学品也是一种有效的策略，基于不对称分裂的定制联合体可以驱动不对称分裂和细胞分化，来有效生产己二酸。
本发明的第二个目的是提供上述重组菌的构建方法，包括以下步骤：
将popZ基因片段插入到质粒pETac中，得到重组质粒pETac-PopZ；
将fadL基因片段、fadD基因片段、fadE基因片段、popZ基因片段依次连接插入到质粒pETac中，得到重组质粒pETac-FadL-FadD-FadE-PopZ；
将fadB基因片段、fadA基因片段、ydiI基因片段、popZ基因片段依次连接插入到质粒pEM中，得到重组质粒pEM-FadB-FadA-YdiI-PopZ；
将alkB基因片段、alkG基因片段、alkT基因片段、chnD基因片段、chnE基因片段依次连接插入到质粒PTET中，得到重组质粒PTET-AlkB-AlkG-AlkT-ChnD-ChnE；
将重组质粒pETac-PopZ、重组质粒pETac-FadL-FadD-FadE-PopZ、重组质粒pEM-FadB-FadA-YdiI-PopZ和重组质粒PTET-AlkB-AlkG-AlkT-ChnD-ChnE转化入大肠杆菌ATCC8739中构建得到生产己二酸的重组菌。
进一步地，不同基因片段连接时，以不同强度的RBS序列为同源臂融合基因片段。
本发明的第三个目的是提供一种生产己二酸的方法，采用上述重组菌发酵生产己二酸。
进一步地，以脂肪酸为底物。
进一步地，发酵的培养基包括M9无机盐培养基。
进一步地，发酵的条件为35-38℃，200-220rpm，菌株发酵初始OD600为0.04-0.1，发酵70-160h；或发酵的条件为35-38℃，480-530rpm，接种量为5-10％，装液量为30-50％，pH为6.0-7.0，菌株发酵初始OD600为0.04-0.1，通气量为1-2vvm，发酵80-160h。
进一步地，调控细胞不对称分裂的靶点基因和调控己二酸生产的靶点基因的表达方式为游离表达。
本发明提供的生产己二酸的重组菌在生物、制药、食品或化工领域内的应用均有巨大潜力，如用于制备己二酸或含有己二酸的产品、制备重组质粒所含基因对应的蛋白或融合蛋白等。
借由上述方案，本发明至少具有以下优点：
本发明构建的重组菌表达调控细胞不对称分裂的靶点基因和调控己二酸生产的靶点基因，能够实现以脂肪酸为底物从头合成己二酸，同时提供了一种定制化微生物群落的方法，该方法简单易操作，对细胞毒性小。通过构建己二酸生产工程菌株和引入定制化微生物群落，己二酸含量高达5.2g/L，具有较好的应用前景。
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合详细附图说明如后。
附图说明
为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明。
图1为定制化微生物群落的设计；
图2为己二酸的生产路径；
图3为摇瓶发酵中己二酸含量的变化；
图4为7.5L发酵罐中己二酸含量的变化。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
下述实施例中所涉及的材料与方法如下：
质粒构建采用经典分子生物手段进行。
细胞形态学参数检测使用荧光显微镜(Nikon microscop,80i)进行测定，控制环境温度30度。
种子培养基：LB培养基，成分包含蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，氯化钠10g/L。
发酵培养基：M9无机盐培养基，成分包含葡萄糖50g/L、CaCl2·2H2O 15mg/L、微量元素液0.667mL/L、灭菌后补加MgSO4·7H2O 0.25g/L，VB1 0.5mg/L，盐酸甜菜碱1mM。微量元素液的配置方法为FeCl3·6H2O 2.4g/L、CoCl2·6H2O 0.3g/L、CuCl2 0.15g/L、ZnCl2·4H2O0.3g/L、NaMnO4 0.3g/L、H3BO3 0.075g/L、MnCl2·4H2O 0.5g/L，溶于0.1M HCl中配制。
发酵样品制备：取发酵液样品，12000rpm离心5min，取上清液稀释后，过0.22μm水系膜过滤，滤液作为用来液相色谱分析。
己二酸含量的测定正己酸和己二酸均采用气相色谱质谱联用仪(GC-MS)，检测条件：初始温度为50℃，保持1min；按照8℃·min-1的速度升高至180℃；按照10℃·min-1的速度升高至240℃，保持5min。载气为氦气，流速为1m L·min-1，进样量为1μL。
实施例1定制化微生物群落的设计
将获得的重组质粒pETac-PopZ分别通过全质粒PCR扩增，添加RBS34、RBS29、RBS32、RBS30和RBS64，进而获得pETac-RBS34-PopZ、pETac-RBS29-PopZ、pETac-RBS32-PopZ、pETac-RBS30-PopZ和pETac-RBS64-PopZ质粒，分别导入感受态细胞E.coli JM109中，获得含有不同RBS强度的pETac-PopZ质粒。
在LB培养基中，使用酶标仪对上述菌株进行荧光强度的评估。结果如图1所示。由图1A、1B可知，pETac-GFP-PopZ质粒含有不同强度RBS，可以有效调控基因表达情况，即调控不同比例的GFP菌株。其中，含有pETac-RBS34-PopZ、pETac-RBS29-GFP-PopZ、pETac-RBS32-GFP-PopZ、pETac-RBS30-GFP-PopZ和pETac-RBS64-GFP-PopZ质粒的E.coli JM109，GFP荧光菌株的占比分别达到53.1％、47.2％、36.9％、29.6％和34.1％。研究结果表明，调节RBS强度能够调控GFP荧光菌株的占比，进而完成定制化微生物群落的设计。
实施例2摇瓶发酵生产己二酸
将已经构建好的表达己二酸合成路径(图2)质粒pETac-FadL-FadD-FadE-PopZ、pEM-FadB-FadA-YdiI-PopZ和pTET-AlkB-AlkG-AlkT-ChnD-ChnE导入大肠杆菌8739感受态细胞中，获得带有pETac-FadL-FadD-FadE-PopZ、pEM-FadB-FadA-YdiI-PopZ和pTET-AlkB-AlkG-AlkT-ChnD-ChnE质粒的己二酸生产菌株G1S1，利用脂肪酸为底物生产己二酸。
己二酸摇瓶发酵条件。将前培养的E.coliAA0306菌液转接至30mL种子培养基中培养12h，取2mL种子液转接至50mL发酵培养基中，培养8h后，温度转变至30℃。通过碳酸钙调控pH。每12h取一次样，分别测定发酵液中的脂肪酸、己二酸含量。
将上述己二酸生产菌株置于M9培养基中培养，发酵的条件为37℃，200-rpm，菌株发酵初始OD600为0.5，发酵120h，对含量进行鉴定。结果如图3所示，随着细菌培养时间的延长，对照菌株CT的己二酸产量达到1.21g/L，其中G1S1菌株的己二酸产量达到1.82g/L，比对照菌株CT提高49.59％。
实施例3发酵罐发酵生产己二酸
在7.5L发酵罐中检测G1S1菌株的发酵性能。装液量为3.5L，pH为7.0，压力为1mpa温度恒定37℃，450rpm，初始接种OD600为0.5，通气量1vvm，发酵周期为140h。
己二酸的放大生产在7.5-L发酵罐中进行。将前培养的E.coliAA0306菌液转接至50mL种子培养基中培养8h，取300mL种子液转接至2L发酵培养基中，培养6h后，温度转变至30℃，通过级联搅拌将溶氧控制在35％饱和度以上，氨水调控pH。每12h取一次样，分别测定发酵液中的脂肪酸、己二酸含量。
如图4所示，发酵结束时，己二酸的浓度达到5.2g/L。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Figure BDA0003377455050000101
Figure BDA0003377455050000111
Figure BDA0003377455050000121
Figure BDA0003377455050000131
Figure BDA0003377455050000141
Figure BDA0003377455050000151
Figure BDA0003377455050000161
序列表
<110> 江南大学
<120> 一种生产己二酸的重组菌、构建方法和应用
<160> 12
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 2
<211> 1341
<212> DNA
<213> （人工序列）
<400> 2
atgagccaga aaaccctgtt tacaaagtct gctctcgcag tcgcagtggc acttatctcc 60
acccaggcct ggtcggcagg ctttcagtta aacgaatttt cttcctctgg cctgggccgg 120
gcttattcag gggaaggcgc aattgccgat gatgcaggta acgtcagccg taaccccgca 180
ttgattacta tgtttgaccg cccgacattt tctgcgggtg cggtttatat tgacccggat 240
gtaaatatca gcggaacgtc tccatctggt cgtagcctga aagccgataa catcgcgcct 300
acggcatggg ttccgaacat gcactttgtt gcaccgatta acgaccaatt tggttggggc 360
gcttctatta cctctaacta tggtctggct acagagttta acgatactta tgcaggcggc 420
tctgtcgggg gtacaaccga ccttgaaacc atgaacctga acttaagcgg tgcgtatcgc 480
ttaaataatg catggagctt tggtcttggt ttcaacgccg tctacgctcg cgcgaaaatt 540
gaacgtttcg caggcgatct ggggcagttg gttgctggcc aaattatgca atctcctgct 600
ggccaaactc agcaagggca agcattggca gctaccgcca acggtattga cagtaatacc 660
aaaatcgctc atctgaacgg taaccagtgg ggctttggct ggaacgccgg aatcctgtat 720
gaactggata aaaataaccg ctatgcactg acctaccgtt ctgaagtgaa aattgacttc 780
aaaggtaact acagcagcga tcttaatcgt gcgtttaata actacggttt gccaattcct 840
accgcgacag gtggcgcaac gcaatcgggt tatctgacgc tgaacctgcc tgaaatgtgg 900
gaagtgtcag gttataaccg tgttgatcca cagtgggcga ttcactatag cctggcttac 960
accagctgga gtcagttcca gcagctgaaa gcgacctcaa ccagtggcga cacgctgttc 1020
cagaaacatg aaggctttaa agatgcttac cgcatcgcgt tgggtaccac ttattactac 1080
gatgataact ggaccttccg taccggtatc gcctttgatg acagcccagt tcctgcacag 1140
aatcgttcta tctccattcc ggaccaggac cgtttctggc tgagtgcagg tacgacttac 1200
gcatttaata aagatgcttc agtcgacgtt ggtgtttctt atatgcacgg tcagagcgtg 1260
aaaattaacg aaggcccata ccagttcgag tctgaaggta aagcctggct gttcggtact 1320
aactttaact acgcgttctg a 1341
<210> 2
<211> 1686
<212> DNA
<213> （人工序列）
<400> 2
atgaagaagg tttggcttaa ccgttatccc gcggacgttc cgacggagat caaccctgac 60
cgttatcaat ctctggtaga tatgtttgag cagtcggtcg cgcgctacgc cgatcaacct 120
gcgtttgtga atatggggga ggtaatgacc ttccgcaagc tggaagaacg cagtcgcgcg 180
tttgccgctt atttgcaaca agggttgggg ctgaagaaag gcgatcgcgt tgcgttgatg 240
atgcctaatt tattgcaata tccggtggcg ctgtttggca ttttgcgtgc cgggatgatc 300
gtcgtaaacg ttaacccgtt gtataccccg cgtgagcttg agcatcagct taacgatagc 360
ggcgcatcgg cgattgttat cgtgtctaac tttgctcaca cactggaaaa agtggttgat 420
aaaaccgccg ttcagcacgt aattctgacc cgtatgggcg atcagctatc tacggcaaaa 480
ggcacggtag tcaatttcgt tgttaaatac atcaagcgtt tggtgccgaa ataccatctg 540
ccagatgcca tttcatttcg tagcgcactg cataacggct accggatgca gtacgtcaaa 600
cccgaactgg tgccggaaga tttagctttt ctgcaataca ccggcggcac cactggtgtg 660
gcgaaaggcg cgatgctgac tcaccgcaat atgctggcga acctggaaca ggttaacgcg 720
acctatggtc cgctgttgca tccgggcaaa gagctggtgg tgacggcgct gccgctgtat 780
cacatttttg ccctgaccat taactgcctg ctgtttatcg aactgggtgg gcagaacctg 840
cttatcacta acccgcgcga tattccaggg ttggtaaaag agttagcgaa atatccgttt 900
accgctatca cgggcgttaa caccttgttc aatgcgttgc tgaacaataa agagttccag 960
cagctggatt tctccagtct gcatctttcc gcaggcggtg ggatgccagt gcagcaagtg 1020
gtggcagagc gttgggtgaa actgaccgga cagtatctgc tggaaggcta tggccttacc 1080
gagtgtgcgc cgctggtcag cgttaaccca tatgatattg attatcatag tggtagcatc 1140
ggtttgccgg tgccgtcgac ggaagccaaa ctggtggatg atgatgataa tgaagtacca 1200
ccaggtcaac cgggtgagct ttgtgtcaaa ggaccgcagg tgatgctggg ttactggcag 1260
cgtcccgatg ctaccgatga aatcatcaaa aatggctggt tacacaccgg cgacatcgcg 1320
gtaatggatg aagaaggatt cctgcgcatt gtcgatcgta aaaaagacat gattctggtt 1380
tccggtttta acgtctatcc caacgagatt gaagatgtcg tcatgcagca tcctggcgta 1440
caggaagtcg cggctgttgg cgtaccttcc ggctccagtg gtgaagcggt gaaaatcttc 1500
gtagtgaaaa aagatccatc gcttaccgaa gagtcactgg tgactttttg ccgccgtcag 1560
ctcacgggat acaaagtacc gaagctggtg gagtttcgtg atgagttacc gaaatctaac 1620
gtcggaaaaa ttttgcgacg agaattacgt gacgaagcgc gcggcaaagt ggacaataaa 1680
gcctga 1686
<210> 3
<211> 2445
<212> DNA
<213> （人工序列）
<400> 3
atgatgattt tgagtattct cgctacggtt gtcctgctcg gcgcgttgtt ctatcaccgc 60
gtgagcttat ttatcagcag tctgattttg ctcgcctgga cagccgccct cggcgttgct 120
ggtctgtggt cggcgtgggt actggtgcct ctggccatta tcctcgtgcc atttaacttt 180
gcgcctatgc gtaagtcgat gatttccgcg ccggtatttc gcggtttccg taaggtgatg 240
ccgccgatgt cgcgcactga gaaagaagcg attgatgcgg gcaccacctg gtgggagggc 300
gacttgttcc agggcaagcc ggactggaaa aagctgcata actatccgca gccgcgcctg 360
accgccgaag agcaagcgtt tctcgacggc ccggtagaag aagcctgccg gatggcgaat 420
gatttccaga tcacccatga gctggcggat ctgccgccgg agttgtgggc gtaccttaaa 480
gagcatcgtt tcttcgcgat gatcatcaaa aaagagtacg gcgggctgga gttctcggct 540
tatgcccagt ctcgcgtgct gcaaaaactc tccggcgtga gcgggatcct ggcgattacc 600
gtcggcgtgc caaactcatt aggcccgggc gaactgttgc aacattacgg cactgacgag 660
cagaaagatc actatctgcc gcgtctggcg cgtggtcagg agatcccctg ctttgcactg 720
accagcccgg aagcgggttc cgatgcgggc gcgattccgg acaccgggat tgtctgcatg 780
ggcgaatggc agggccagca ggtgctgggg atgcgtctga cctggaacaa acgctacatt 840
acgctggcac cgattgcgac cgtgcttggg ctggcgttta aactctccga cccggaaaaa 900
ttactcggcg gtgcagaaga tttaggcatt acctgtgcgc tgatcccaac caccacgccg 960
ggcgtggaaa ttggtcgtcg ccacttcccg ctgaacgtac cgttccagaa cggaccgacg 1020
cgcggtaaag atgtcttcgt gccgatcgat tacatcatcg gcgggccgaa aatggccggg 1080
caaggctggc ggatgctggt ggagtgcctc tcggtaggcc gcggcatcac cctgccttcc 1140
aactcaaccg gcggcgtgaa atcggtagcg ctggcaaccg gcgcgtatgc tcacattcgc 1200
cgtcagttca aaatctctat tggtaagatg gaagggattg aagagccgct ggcgcgtatt 1260
gccggtaatg cctacgtgat ggatgctgcg gcatcgctga ttacctacgg cattatgctc 1320
ggcgaaaaac ctgccgtgct gtcggctatc gttaagtatc actgtaccca ccgcgggcag 1380
cagtcgatta ttgatgcgat ggatattacc ggcggtaaag gcattatgct cgggcaaagc 1440
aacttcctgg cgcgtgctta ccagggcgca ccgattgcca tcaccgttga aggggctaac 1500
attctgaccc gcagcatgat gatcttcgga caaggagcga ttcgttgcca tccgtacgtg 1560
ctggaagaga tggaagcggc gaagaacaat gacgtcaacg cgttcgataa actgttgttc 1620
aaacatatcg gtcacgtcgg tagcaacaaa gttcgcagct tctggctggg cctgacgcgc 1680
ggtttaacca gcagcacgcc aaccggcgat gccactaaac gctactatca gcacctgaac 1740
cgcctgagcg ccaacctcgc cctgctttct gatgtctcga tggcagtgct gggcggcagc 1800
ctgaaacgtc gcgagcgcat ctcggcccgt ctgggggata ttttaagcca gctctacctc 1860
gcctctgccg tgctgaagcg ttatgacgac gaaggccgta atgaagccga cctgccgctg 1920
gtgcactggg gcgtacaaga tgcgctgtat caggctgaac aggcgatgga tgatttactg 1980
caaaacttcc cgaaccgcgt ggttgccggg ctgctgaatg tggtgatctt cccgaccgga 2040
cgtcattatc tggcaccttc tgacaagctg gatcataaag tggcgaagat tttacaagtg 2100
ccgaacgcca cccgttcccg cattggtcgc ggtcagtacc tgacgccgag cgagcataat 2160
ccggttggct tgctggaaga ggcgctggtg gatgtgattg ccgccgaccc aattcatcag 2220
cggatctgta aagagctggg taaaaacctg ccgtttaccc gtctggatga actggcgcac 2280
aacgcgctgg tgaaggggct gattgataaa gatgaagccg ctattctggt gaaagctgaa 2340
gaaagccgtc tgcgcagtat taacgttgat gactttgatc cggaagagct ggcgacgaag 2400
ccggtaaagt tgccggagaa agtgcggaaa gttgaagccg cgtaa 2445
<210> 4
<211> 2190
<212> DNA
<213> （人工序列）
<400> 4
atgctttaca aaggcgacac cctgtacctt gactggctgg aagatggcat tgccgaactg 60
gtatttgatg ccccaggttc agttaataaa ctcgacactg cgaccgtcgc cagcctcggc 120
gaggccatcg gcgtgctgga acagcaatca gatctaaaag ggctgctgct gcgttcgaac 180
aaagcagcct ttatcgtcgg tgctgatatc accgaatttt tgtccctgtt cctcgttcct 240
gaagaacagt taagtcagtg gctgcacttt gccaatagcg tgtttaatcg cctggaagat 300
ctgccggtgc cgaccattgc tgccgtcaat ggctatgcgc tgggcggtgg ctgcgaatgc 360
gtgctggcga ccgattatcg tctggcgacg ccggatctgc gcatcggtct gccggaaacc 420
aaactgggca tcatgcctgg ctttggcggt tctgtacgta tgccacgtat gctgggcgct 480
gacagtgcgc tggaaatcat tgccgccggt aaagatgtcg gcgcggatca ggcgctgaaa 540
atcggtctgg tggatggcgt agtcaaagca gaaaaactgg ttgaaggcgc aaaggcggtt 600
ttacgccagg ccattaacgg cgacctcgac tggaaagcaa aacgtcagcc gaagctggaa 660
ccactaaaac tgagcaagat tgaagccacc atgagcttca ccatcgctaa agggatggtc 720
gcacaaacag cggggaaaca ttatccggcc cccatcaccg cagtaaaaac cattgaagct 780
gcggcccgtt ttggtcgtga agaagcctta aacctggaaa acaaaagttt tgtcccgctg 840
gcgcatacca acgaagcccg cgcactggtc ggcattttcc ttaacgatca atatgtaaaa 900
ggcaaagcga agaaactcac caaagacgtt gaaaccccga aacaggccgc ggtgctgggt 960
gcaggcatta tgggcggcgg catcgcttac cagtctgcgt ggaaaggcgt gccggttgtc 1020
atgaaagata tcaacgacaa gtcgttaacc ctcggcatga ccgaagccgc gaaactgctg 1080
aacaagcagc ttgagcgcgg caagatcgat ggtctgaaac tggctggcgt gatctccaca 1140
atccacccaa cgctcgacta cgccggattt gaccgcgtgg atattgtggt agaagcggtt 1200
gttgaaaacc cgaaagtgaa aaaagccgta ctggcagaaa ccgaacaaaa agtacgccag 1260
gataccgtgc tggcgtctaa cacttcaacc attcctatca gcgaactggc caacgcgctg 1320
gaacgcccgg aaaacttctg cgggatgcac ttctttaacc cggtccaccg aatgccgttg 1380
gtagaaatta ttcgcggcga gaaaagctcc gacgaaacca tcgcgaaagt tgtcgcctgg 1440
gcgagcaaga tgggcaagac gccgattgtg gttaacgact gccccggctt ctttgttaac 1500
cgcgtgctgt tcccgtattt cgccggtttc agccagctgc tgcgcgacgg cgcggatttc 1560
cgcaagatcg acaaagtgat ggaaaaacag tttggctggc cgatgggccc ggcatatctg 1620
ctggacgttg tgggcattga taccgcgcat cacgctcagg ctgtcatggc agcaggcttc 1680
ccgcagcgga tgcagaaaga ttaccgcgat gccatcgacg cgctgtttga tgccaaccgc 1740
tttggtcaga agaacggcct cggtttctgg cgttataaag aagacagcaa aggtaagccg 1800
aagaaagaag aagacgccgc cgttgaagac ctgctggcag aagtgagcca gccgaagcgc 1860
gatttcagcg aagaagagat tatcgcccgc atgatgatcc cgatggtcaa cgaagtggtg 1920
cgctgtctgg aggaaggcat tatcgccact ccggcggaag cggatatggc gctggtctac 1980
ggcctgggct tccctccgtt ccacggcggc gcgttccgct ggctggacac cctcggtagc 2040
gcaaaatacc tcgatatggc acagcaatat cagcacctcg gcccgctgta tgaagtgccg 2100
gaaggtctgc gtaataaagc gcgtcataac gaaccgtact atcctccggt tgagccagcc 2160
cgtccggttg gcgacctgaa aacggcttaa 2190
<210> 5
<211> 1164
<212> DNA
<213> （人工序列）
<400> 5
atggaacagg ttgtcattgt cgatgcaatt cgcaccccga tgggccgttc gaagggcggt 60
gcttttcgta acgtgcgtgc agaagatctc tccgctcatt taatgcgtag cctgctggcg 120
cgtaacccgg cgctggaagc ggcggccctc gacgatattt actggggttg tgtgcagcag 180
acgctggagc agggttttaa tatcgcccgt aacgcggcgc tgctggcaga agtaccacac 240
tctgtcccgg cggttaccgt taatcgcttg tgtggttcat ccatgcaggc actgcatgac 300
gcagcacgaa tgatcatgac tggcgatgcg caggcatgtc tggttggcgg cgtggagcat 360
atgggccatg tgccgatgag tcacggcgtc gattttcacc ccggcctgag ccgcaatgtc 420
gccaaagcgg cgggcatgat gggcttaacg gcagaaatgc tggcgcgtat gcacggtatc 480
agccgtgaaa tgcaggatgc ctttgccgcg cggtcacacg cccgcgcctg ggccgccacg 540
cagtcggccg catttaaaaa tgaaatcatc ccgaccggtg gtcacgatgc cgacggcgtc 600
ctgaagcagt ttaattacga cgaagtgatt cgcccggaaa ccaccgtgga agccctcgcc 660
acgctgcgtc cggcgtttga tccagtaaac ggtatggtaa cggcgggcac atcttctgca 720
ctttccgatg gcgcagctgc catgctggtg atgagtgaaa gccgcgccca tgaattaggt 780
cttaagccgc gcgctcgtgt gcgttcgatg gcggtcgttg gttgtgaccc atcgattatg 840
ggttacggcc cggttccggc ctcgaaactg gcgctgaaaa aagcggggct ttctgccagc 900
gatatcggcg tgtttgaaat gaacgaagcc tttgccgcgc agatcctgcc atgtattaaa 960
gatctgggac taattgagca gattgacgag aagatcaacc tcaacggtgg cgcgatcgcg 1020
ctgggtcatc cgctgggttg ttccggtgcg cgtatcagca ccacgctgct gaatctgatg 1080
gaacgcaaag acgttcagtt tggtctggcg acgatgtgta tcggtctggg tcagggtatt 1140
gcgacggtgt ttgagcgggt ttaa 1164
<210> 6
<211> 411
<212> DNA
<213> （人工序列）
<400> 6
atgatatgga aacggaaaat caccctggaa gcactgaatg ctatgggtga aggaaacatg 60
gtggggttcc tggatattcg ctttgaacat attggtgatg acacccttga agcgacaatg 120
ccagtagact cgcggacaaa gcagcctttc gggttgctgc atggaggagc atccgtggta 180
ctggccgaaa gtatcggttc cgttgccggt tatttatgta ccgaaggtga gcaaaaagtg 240
gttggtctgg aaatcaatgc taaccacgtc cgctcggcac gagaagggcg ggtgcgcggc 300
gtatgcaaac cgttgcatct cggttcgcgt caccaggtct ggcagattga aatcttcgat 360
gagaaagggc gtttgtgctg ttcgtcacga ttgacgaccg ccattttgtg a 411
<210> 7
<211> 1209
<212> DNA
<213> （人工序列）
<400> 7
atgaatggta aaagcagcgt tctggatagc gcgccagagt acgtggataa gaagaagtac 60
ttctggatcc tcagcacctt ctggccagcc acgccaatga tcggtatctg gctggccaat 120
gagacgggtt ggggtatctt ctatggcctc gttctggccg tgtggtacgg cgtgctgcca 180
ctgctcgatg cgatgttcgg tgaggacttc aacaacccac cggaagaggt ggtggagaag 240
ctcgagaaag agcgctatta ccgcgtgctg acctatctga ccgtgccaat gcattatgcc 300
gcgctgatcg tgagtgcgtg gtgggttggc acccagagca tgagctggtt tgaaatcgtt 360
gccctcgcgc tgagtctggg tatcgtgaac ggtctggcgc tgaacacggg ccatgaactc 420
ggccataaga aagaggcctt cgaccgttgg atggcgaaga ttgttctggc ggtggtgggc 480
tacggccact tcttcatcga gcataataag ggccatcatc gcgacgttgc caccccaatg 540
gatccggcga ccagccgcat gggcgaaaac atctacaaat tcagtacccg cgaaatcccg 600
ggcgcgtttc gtcgtgcgtg gggtctggaa gaacagcgtc tgagccgtcg cggccagagt 660
gtttggagct tcgacaacga gattctgcag ccgatggtga tcaccgttgt gctgtacacg 720
ctgctgctcg ccttcttcgg tccaaaaatg ctggtgttcc tcccgatcca gatggccttt 780
ggctggtggc agctgaccag cgcgaattac atcgaacact acggtctgct gcgtgaaaag 840
atggcggatg gccgctatga gcaccagaaa ccgcaccaca gctggaacag caaccacatc 900
gtgagcaatc tggtgctgtt tcatctgcaa cgccatagtg accatcacgc gcacccaacc 960
cgcagctatc agagtctgcg tgatttcccg ggtctgccag ccctcccgac cggttatccg 1020
ggcgcgttcc tcatggcgat gatcccgcag tggtttcgca gcgtgatgga tccgaaggtt 1080
gtgaactggg cgaatggtga tctgagcaag atccagatcg aggatagcat gcgcgccgag 1140
tacatcaaga agttcaccca caacgttggc gccgatgata aacgcggtgc cacggccgtt 1200
gcgagctaa 1209
<210> 8
<211> 528
<212> DNA
<213> （人工序列）
<400> 8
atggcgcgct accagtgccc ggactgccag tacgtgtacg atgagagcaa aggcgaagag 60
catgaaggct ttgccccgaa caccccgtgg atcgttatcc cggaagattg gtgctgtccg 120
gattgcgccg tgcgcgacaa gctggatttt gtgctgatcg agggcagcac cggcgagaag 180
aacatcagca gcaacaacac gctcagcgtg agcgccaaag tgagcagcag cgatgtgaac 240
accgagatca gcaacaccac catgagcgcg gaaatcgcgc tggatgttgc gaccgaaggc 300
cagcatctga atggtcgcaa accacgcgtt accaatctgc agagcggtgc cgcgtttctg 360
aaatggatct gcatcacgtg cggccatatc tacgatgaag cgctgggcga tgaagttgaa 420
ggcttcgcgc cgggcacccg cttcgaagat atcccgaacg actggtgctg cccggattgc 480
ggtgccacga aggaagacta cgtgctgtac caagaaaaac tgggttaa 528
<210> 9
<211> 1158
<212> DNA
<213> （人工序列）
<400> 9
atggccattg ttattgttgg tgccggtacc gccggcgtta atgccgcgtt ctggctgcgc 60
caatacggtt acaaaggcgg catccgtctg ctcagccgcg aaagtgtgac cccgtaccag 120
cgtccaccac tgagtaaagc ctttctgacg agcgaaaccg cggaaagcgc catcccactg 180
aaaccggaaa gcttctacac gaacaataat attagcatca gtctgaacac ccagatcgtg 240
agcatcgacg ttggccgcaa agtggttgcc gccaaagacg gtgaggagta cgcctacgaa 300
aagctcattc tggccaccgg tgccagtgcg cgtcgtctga cgtgcgaagg cagcgaactg 360
agcggtgttt gctatctgcg tagcatggaa gacgcgaaga atctgcgccg caaactggtt 420
gaaagcgcca gcgtggttgt tctgggtggc ggtgttattg gtctggaagt tgccagtgcc 480
gccgtgggta ttggccgtcg tgttaccgtt atcgaagccg cgccacgcgt tatggcgcgt 540
gttgttacgc cggccgccgc gaatctggtt cgtgcgcgcc tcgaagccga aggtgttggc 600
ttcaagctca acgcgaaact gacgagcatc aaaggccgta acggccatgt gaatcagtgc 660
gttctggaaa gcggcgagaa gatccaagcc gatctgatca tcgttggcat cggcgccatt 720
ccagaactgg aactcgcgac ggaagccgcg ctggaagtga gcaacggcgt tgttgtggat 780
gatcagatgc gcacgagcga taccagcatc tacgccatcg gtgactgtgc gctggcgcgt 840
aatctgtttt tcggcaccat ggtgcgtctg gagacgattc acaatgccgt gacgcaagcc 900
caaatcgttg ccagtagcat ctgcggtacg agtaccccag ccccgacgcc accacgtttt 960
tggagcgatc tgaaaggcat gacgctgcaa ggtctgggtg cgctgaaaga ctacgacaaa 1020
ctggtggtgg cgatcaacaa cgagacggtg gaactcgagg tgctcgccta taaacaagaa 1080
cgtctgattg ccacggaaac gatcaatctc ccgaaacgcc aaggtgcgct gggtggcagc 1140
attaagctgc cggattaa 1158
<210> 10
<211> 1059
<212> DNA
<213> （人工序列）
<400> 10
atgcattgct attgcgtgac ccatcatggc cagccgctgg aagacgttga gaaagaaatc 60
ccgcagccga aaggcaccga ggttctgctg catgtgaaag ccgcgggtct gtgtcatacc 120
gatctgcatc tgtgggaagg ctactacgac ctcggcggcg gtaaacgtct gagtctggcg 180
gatcgtggtc tgaaaccgcc gctcacgctg agccacgaaa tcacgggcca agtggttgcg 240
gttggcccgg atgccgaaag cgtgaaagtg ggcatggtta gtctggtgca tccatggatc 300
ggctgcggcg agtgcaacta ctgcaagcgc ggtgaagaga atctgtgcgc caaaccgcag 360
cagctgggca tcgcgaaacc gggtggcttc gccgagtaca ttatcgttcc gcacccacgc 420
tatctggttg atattgccgg cctcgatctg gccgaggcgg ccccgctggc gtgcgccggt 480
gtgacgacct acagcgcgct gaaaaagttc ggcgatctga ttcagagcga accggtggtg 540
atcatcggtg ccggtggtct gggtctgatg gcgctggagc tgctgaaagc catgcaagcg 600
aaaggcgcca tcgtggtgga catcgacgat agcaaactgg aggcggcgcg tgccgccggc 660
gccctcagcg ttatcaatag ccgcagtgaa gatgccgccc agcagctgat tcaagccacg 720
gatggcggtg cccgtctgat tctggatctg gttggcagta atccgaccct cagcctcgcg 780
ctggccagtg cggcccgtgg cggtcatatc gttatttgcg gtctcatggg cggcgagatc 840
aagctcagca ttccggttat cccgatgcgc ccactgacga tccaaggcag ctatgttggt 900
accgttgagg agctgcgcga gctggtggaa ctggtgaagg aaacgcacat gagcgcgatt 960
ccggtgaaga agctcccaat cagccagatc aacagcgcgt tcggcgatct gaaggatggt 1020
aacgtgatcg gtcgcatcgt tctgatgcac gagaattaa 1059
<210> 11
<211> 1431
<212> DNA
<213> （人工序列）
<400> 11
atgaattacc cgaatattcc gctgtacatc aacggtgagt ttctggatca caccaaccgc 60
gacgttaagg aggtgttcaa cccggtgaac cacgaatgca ttggtctgat ggcgtgcgcc 120
agccaagccg atctggacta cgccctcgaa agcagccagc aagccttcct ccgctggaaa 180
aaaacgagcc caatcacgcg cagcgaaatt ctgcgtacgt tcgccaaact ggcccgcgaa 240
aaagcggccg aaatcggccg caacattacg ctggatcaag gcaaaccgct gaaagaagcc 300
atcgcggaag ttacggtgtg cgcggaacac gccgaatggc atgcggaaga atgccgccgt 360
atttacggcc gtgtgatccc accgcgcaac ccaaatgtgc agcagctggt tgttcgtgaa 420
ccgctgggcg tgtgtctggc gttcagtcca tggaacttcc cgttcaacca agccattcgc 480
aaaatcagcg ccgccattgc cgccggttgc accatcattg tgaaaggcag cggcgatacc 540
ccaagcgcgg tgtacgccat cgcccaactg tttcacgaag ccggtctgcc aaatggtgtg 600
ctgaacgtga tctggggcga cagcaacttc atcagcgatt acatgatcaa gagcccgatt 660
attcagaaaa tcagctttac cggcagcacc ccggtgggca aaaagctggc gagccaagcc 720
agtctgtaca tgaaaccatg cacgatggag ctcggtggtc atgcgccggt tatcgtgtgc 780
gatgacgccg atatcgatgc ggcggtggaa catctggtgg gctacaaatt ccgtaacgcg 840
ggccaagttt gcgttagccc gacgcgcttc tatgtgcaag aaggtatcta caaggaattc 900
agcgaaaagg tggttctgcg cgccaaacag atcaaagttg gctgcggtct ggatgcgagc 960
agtgatatgg gtccactggc gcaagcgcgt cgcatgcacg cgatgcagca gattgtggaa 1020
gacgccgtgc acaaaggtag caaactgctg ctgggcggca acaagatcag cgacaagggc 1080
aacttctttg agccgacggt tctgggcgac ctctgcaacg atacgcagtt catgaacgac 1140
gagccattcg gcccgatcat cggcctcatc ccgtttgaca ccatcgatca cgttctggag 1200
gaagccaacc gtctcccgtt cggtctggcg agctacgcgt ttaccacgag cagcaagaat 1260
gcgcaccaga tcagctacgg tctcgaggcc ggtatggtga gcatcaatca tatgggtctg 1320
gcgctggcgg aaacgccatt cggtggcatc aaagacagcg gctttggcag cgaaggtggt 1380
atcgaaacgt ttgacggcta tctgcgcacg aaattcatca cccagctgaa c 1431
<210> 12
<211> 534
<212> DNA
<213> （人工序列）
<400> 12
atgagcgatc agagccagga accgaccatg gaagaaattc tggcgagcat tcgccgcatt 60
atttccgagg acgacgctcc tgccgagccc gcagcagagg ctgctcctcc cccaccccca 120
gaaccagaac cggaaccggt gagctttgat gatgaagtgc tggaactgac cgatccgatt 180
gcaccagagc ctgagctacc accgctggaa accgtgggcg atattgatgt gtatagtcca 240
cctgagcccg aatcggaacc cgcttacaca cctccaccag cggcgccggt gtttgatcgc 300
gatgaggtag ctgagcaact tgtcggtgta tccgccgcga gcgcagcggc gtcagcgttc 360
ggaagcctga gcagcgcgct gctgatgccg aaagatggcc gcaccctgga agatgtggtg 420
cgcgaactgc tgcgcccgct gctgaaagaa tggctggatc agaacctgcc gcgcattgtg 480
gaaaccaaag tggaagaaga agtgcagcgc attagccgcg gccgcggcgc gtaa 534

Claims (10)

1.一种生产己二酸的重组菌，其特征在于：所述重组菌表达调控细胞不对称分裂的靶点基因和调控己二酸生产的靶点基因；
所述调控细胞不对称分裂的靶点基因包括编码细胞骨架蛋白PopZ的基因popZ；所述调控己二酸生产的靶点基因包括编码降解酶长链脂肪酸转运蛋白FadL的基因fadL、脂酰CoA合成酶FadD的基因fadD、脂酰CoA脱氢酶FadE的基因fadE、脂肪酸氧化酶复合体α亚基FadB的基因fadB、脂肪酸氧化酶复合体β亚基FadA的基因fadA、1,4-二羟基-2-萘甲酰CoA水解酶YdiI的基因ydiI、烷烃-1-单加氧酶AlkB的基因alkB、红素氧还蛋白-1AlkG的基因alkG、红素氧还蛋白-NAD+还原酶AlkT的基因alkT、6-羟基己酸脱氢酶ChnD的基因chnD和醛脱氢酶ChnE的基因chnE。
2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于：所述重组菌以大肠杆菌ATCC 8739为宿主。
3.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于：所述重组菌以pETac-PopZ、pETac-FadL-FadD-FadE-PopZ、pEM-FadB-FadA-YdiI-PopZ和PTET-AlkB-AlkG-AlkT-ChnD-ChnE为表达载体；
所述pETac-PopZ以pETac为载体表达popZ基因，所述pETac-FadL-FadD-FadE-PopZ以pETac为载体依次表达fadL、fadD、fadE和popZ基因，所述pEM-FadB-FadA-YdiI-PopZ以pEM为载体依次表达fadB、fadA、ydiI和popZ基因，所述PTET-AlkB-AlkG-AlkT-ChnD-ChnE以PTET为载体依次表达alkB、alkG、alkT、chnD和chnE基因。
4.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于：通过RBS序列调控所述重组菌中调控细胞不对称分裂的靶点基因或调控己二酸生产的靶点基因的表达强度。
5.根据权利要求4所述的重组菌，其特征在于：所述RBS序列包括RBS34、RBS29、RBS32、RBS30或RBS64。
6.权利要求1-5任一项所述的重组菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
将popZ基因片段插入到质粒pETac中，得到重组质粒pETac-PopZ；
将fadL基因片段、fadD基因片段、fadE基因片段、popZ基因片段依次连接插入到质粒pETac中，得到重组质粒pETac-FadL-FadD-FadE-PopZ；
将fadB基因片段、fadA基因片段、ydiI基因片段、popZ基因片段依次连接插入到质粒pEM中，得到重组质粒pEM-FadB-FadA-YdiI-PopZ；
将alkB基因片段、alkG基因片段、alkT基因片段、chnD基因片段、chnE基因片段依次连接插入到质粒PTET中，得到重组质粒PTET-AlkB-AlkG-AlkT-ChnD-ChnE；
将所述重组质粒pETac-PopZ、重组质粒pETac-FadL-FadD-FadE-PopZ、重组质粒pEM-FadB-FadA-YdiI-PopZ和重组质粒PTET-AlkB-AlkG-AlkT-ChnD-ChnE转化入大肠杆菌ATCC8739中构建得到所述重组菌。
7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于：以RBS序列为同源臂融合基因片段。
8.一种生产己二酸的方法，其特征在于：采用权利要求1-5任一项所述的重组菌发酵生产己二酸。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述发酵的条件为35-38℃，200-220rpm，菌株发酵初始OD600为0.04-0.1，发酵70-160h；或35-38℃，480-530rpm，接种量为5-10％，装液量为30-50％，pH为6.0-7.0，菌株发酵初始OD600为0.04-0.1，通气量为1-2vvm，发酵80-160h。
10.权利要求1-5任一项所述的重组菌在制备己二酸、含有己二酸的产品或己二酸合成途径的中间蛋白中的应用。
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