CN114096532A - 抑制酪氨酸激酶2活性的杂环化合物 - Google Patents

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Abstract

通式(I)所示的杂环化合物适于抑制或调控Janus激酶(JAK)的活性，尤其是酪氨酸激酶2(TYK2)的活性。所述化合物可用于预防和/或治疗JAK介导的相关疾病，例如自身免疫性疾病、炎症疾病和癌症。

Description

抑制酪氨酸激酶2活性的杂环化合物
技术领域
本发明涉及适于调节或抑制Janus激酶(JAK)，尤其是酪氨酸激酶2(TYK2)活性的杂环化合物或其可药用的盐。本发明还涉及制备此杂环化合物的方法。本发明进一步涉及用于治疗和/或预防由该激酶介导的疾病，特别是自身免疫性疾病，炎症和癌症的方法。
背景技术
Janus激酶(JAK)是一种非受体酪氨酸蛋白激酶，由四个家族成员，即JAK1、JAK2、JAK3和TYK2所组成。JAK在结构上有7个同源结构域(JAK Homology Domain，JH)，其中JH1为激酶区、JH2为伪激酶区(调节JH1的激酶活性)、JH6和JH7是受体结合区域。当细胞因子受体的细胞表面区域与细胞因子结合，引起与之细胞内区域相结合的JAK被磷酸化，从而为信号转导和转录激活因子蛋白(STATs)创建停泊位点。STAT蛋白进一步被激活的JAK磷酸化，形成二聚体，进入细胞核，调控相关基因的表达和转录，实现信号从细胞膜至细胞核的转导(Lionard et.al，Ann.Rev.Immunol.1998，16，293-322)。因此，JAK通过JAK-STAT通路转导细胞因子介导的信号，在细胞因子依赖性调节的细胞增殖、分化、凋亡以及免疫反应等许多细胞功能中起重要作用，是治疗炎症、自身免疫性疾病和癌症的热门靶点之一(Alicea-Velazquez et.al，Curr.Drug Targets 2011，12，546-55)。已有几个调控JAK的药物被批准上市或已递交上市，包括用于治疗骨髓纤维化的JAK1/JAK2抑制剂ruxolitinib和JAK2抑制剂fedratinib、用于治疗类风湿性关节炎的pan-JAK抑制剂tofacitinib、JAK1/JAK2抑制剂baricitinib、pan-JAK抑制剂peficitinib和JAK 1抑制剂upadacitinib等等。
基因敲除研究显示JAKs和STATs对不同免疫应答的控制起高度的特异作用。一种JAK激酶可以参与多种细胞因子的信号转导过程，一种细胞因子的信号通路也可以激活多个JAK激酶，但细胞因子对激活的STAT蛋白却具有一定的选择性，例如白细胞介素-4(IL-4)激活STAT6，IL-12却特异性激活STAT4。JAK1、JAK2、TYK2广泛存在于各种组织和细胞中，JAK1与IL-6和干扰素(IFN)等炎症因子的激活密切相关，因此JAK1选择性抑制剂被认为对治疗类风湿性关节炎(RA)和银屑病等自身免疫性疾病具有潜在的治疗效果；JAK2可单独介导红细胞生成素(EPO)和血小板生成素(TPO)等细胞因子(Won et.al，BMC Bioinformatics2009，10，S53)，与血液细胞的增殖分化密切相关。JAK3仅存在于骨髓和淋巴系统，介导IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的信号传导。这些细胞因子对诱导T细胞的增殖分化、激活B细胞产生抗体、活化巨噬细胞、增强自然杀伤细胞(NK细胞)的活性和IFN等其它细胞因子的诱导具有重要作用。因此，JAK3选择性抑制剂有望对器官移植、自身免疫性疾病、炎性肺炎等治疗具有重要作用。
JAK/STAT通路可被自分泌和旁分泌细胞因子，以及一些突变过度激活，与多种恶性肿瘤相关，例如乳腺癌、肝癌、前列腺癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、膀胱癌和弥漫性大B细胞淋巴瘤等(Tan et.al，Curr.Drug Targets 2014，15，1341-53；Lam et.al，Blood 2008，111，3701-13)。JAK2的突变体JAK2/V617F发生在JH2伪激酶区域，引起JAK2构象改变，造成了不依赖胞外细胞因子信号的JH1激酶区域的持续激活，进而引起细胞增生和血液癌症，与真性红血球增多症(PV)、原发性血小板增多症(Essential Thrombocythemia)和骨髓纤维化(Myelofibrosis，MF)密切相关(O’Shea et.al，Ann.Rev.Med.2015，66，311-28)。JAK2抑制剂Ruxolitinib可以用于这类血液疾病的治疗，但疗效与是否存在JAK2/V617F突变无关，表明抗肿瘤活性并不单是基于抑制JAK2/V617F参与的信号传递，还可能来自对JAK1-STAT的调控。
TYK2涉及炎症细胞因子如干扰素(IFNs)、IL-12和IL-23等的信号转导，在先天免疫和适应性免疫中发挥着关键作用。TYK2剔除小鼠的红细胞数正常，能够存活。但JAK3缺陷的小鼠有严重的免疫缺陷，JAK1或JAK2剔除的小鼠会胚胎致死，但在人体中尚未发现JAK1/2功能缺失相关的疾病，也许间接表明了JAK1/2生理功能的重要性。1例具有TYK2基因无效突变的病人患有高免疫球蛋白E综合征，但是其他七例TYK2同型结合的无效突变并没有高免疫球蛋白E综合征，而是由于对IL-12和INF-α/β的反应减弱增加了对分枝细菌或病毒感染的敏感度。所以，抑制TYK2并不会引起急性毒性。TYK2表达的缺乏体现在多种促炎细胞因子的减弱的信号传递和T辅助细胞分化的严重的不平衡。此外，来自遗传相关研究的证据支持了TYK2是一种共有的自身免疫性疾病易感基因。TYK2调控的通道在疾病治疗上也被抗体疗法进一步证实，例如用于治疗银屑病的靶向IL-12/IL-23的ustekinumab和针对系统性红斑狼疮在临床试验中有明显疗效的靶向于I型干扰素受体的anifrolumab。因此TYK2作为自身免疫性疾病的靶点也得到了极大的关注，比如TYK2抑制剂用于治疗银屑病、系统性红斑狼疮(SLE)和炎性肠疾病(IBD)等。
TYK2还与一些癌症相关，比如急性淋巴细胞性白血病(T-ALL)细胞的异常生存与TYK2的激活相关。基因敲除实验显示出88％T-ALL细胞系和63％来自病人的T-ALL细胞对TYK2有依赖性，因此，TYK2是T-ALL的致癌基因(Sanda et.al，Cancer Disc.2013，3，564-77)。TYK2选择性抑制剂NDI-031301能够诱导细胞凋亡来抑制人T-ALL细胞系的生长，在带有KOPT-K1T-ALL肿瘤细胞的小鼠模型上也有很好的安全性和疗效(Akahane et.al，British J.Haematol.2017，177，271-82)，显示出TYK2选择性抑制剂在治疗T-ALL方面的前景。
除了众多主要针对JAK1/2/3的抑制剂药物，TYK2特异性抑制剂BMS-986165和JAK1/TYK2双抑制剂PF-06700841已进入临床试验晚期。由于JAK在JAK-STAT中调控不同的免疫应答，不同JAK激酶选择性的抑制剂在临床中表现出不同的毒副作用，具有不同的临床用途。Ruxolitinib用于治疗骨髓纤维化，具有良好的安全性，对非靶器官无毒副作用。然而tofacitinib由于其抑制JAK2的活性，影响血红细胞和淋巴细胞的生成，具有一定的贫血毒副作用，限制了该药在RA临床上的药效。由于JAK抑制剂在治疗炎症、自身免疫性疾病和癌症等所展示的前景，开发选择性JAK抑制剂吸引了制药公司的极大关注。可是由于JAK激酶家族的活性部位的高度序列相似性，研发一个选择性JAK抑制剂是相当困难的。尽管目前已公开了一些TYK2选择性抑制剂的专利申请，其中包括WO2010142752、WO2012062704、WO2013180265、WO2015032423、WO2015131080和WO2017040757等，仍需开发新的化合物，其具有更好成药性，更强的药效及对TYK2激酶或TYK2/JAK1有更高选择性。
发明的详细说明
定义
除非另有相反陈述，否则下列用在本申请中的术语具有下述含义。
“Cx-y”表示碳原子数的范围，其中x和y均为整数，例如C3-8环烷基表示具有3-8个碳原子的环烷基。还应理解，“C3-8”还包含其中的任意亚范围，例如C3-7、C3-6、C4-7、C4-6、C5-6等。
“烷基”指含有1至20个碳原子，例如1至8个碳原子、1至6个碳原子或1至4个碳原子的饱和的直链或支链的烃基基团。烷基的非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1，1-二甲基丙基、1，2-二甲基丙基、2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1，1，2-三甲基丙基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2-乙基丁基等。
“亚烷基”指含有1至20个碳原子，例如1至6个碳原子或1至4个碳原子的直链或支链的饱和烃的二价基团。亚烷基的非限制性实例包括-CH2-、-CH(CH3)-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-(CH3)C(CH3)-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-等。
“环烷基”指含有3至14个碳环原子的饱和环状烃基取代基。环烷基可以是单碳环，通常含有3至8个、3至7个或3至6个碳环原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。环烷基还可以是稠合到一起的双或三环，如十氢萘基。
“杂环基或杂环”指饱和或部分不饱和的单环或多环基团，其包括3至20个环原子，例如可以是3至14个、3至12个、3至10个、3至8个、3至6个或5至6个环原子，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)m(其中m是0至2的整数)，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包括3至12个环原子，更优选3至10个环原子，4至7个环原子，4至6个环原子，其中1～4个是杂原子，更优选1～3个是杂原子，或1～2个是杂原子。单环杂环基的非限制性实例包含吡咯烷基、噁丁环基、哌啶基、哌嗪基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基、吖丁啶基等。多环杂环基包括稠合、桥接或螺多环杂环基，如八氢环戊二烯并[c]吡咯、八氢吡咯并[1，2-a]吡嗪、3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷、5-氮杂螺[2.4]庚烷、2-氧杂-7-氮杂螺[3.5]壬烷等。
“芳基或芳环”指含有6至14个碳原子的芳香族单环或稠合多环基团，优选为6至10元，例如苯基和萘基，最优选为苯基。所述芳环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，非限制性实例包括：
Figure BDA0003440425030000051
Figure BDA0003440425030000061
等。
“杂芳基或杂芳环”指包含5至14个环原子的杂芳族体系，其中1至4个环原子选自氧、硫和氮的杂原子。杂芳基优选为5至10元，更优选为5元或6元，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、吡唑基、咪唑基、四唑基、恶唑基、异恶唑基、噻唑基、异噻唑基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、异吲哚基等。所述杂芳环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，非限制性实例包括：
Figure BDA0003440425030000062
Figure BDA0003440425030000063
等。
“卤素”指氟、氯、溴或碘。
“氰基”指-CN。
“氧代”指＝O。
“羰基”指-C(＝O)-基团。
“磺酰基”指-S(O)2-基团。
“亚硫酰基”指-S(O)-基团。
“任选取代”指基团中的一个或多个氢原子，优选为5个，更优选为1至3个氢原子独立地被相应数目的取代基所取代。不言而喻，取代基仅处在可能的化学位置，并且本领域技术人员不付出过多努力的情况下(通过实验或理论)即可确定可能或不可能的取代。例如，带有活泼氢的氨基或羟基在与带有不饱和键的碳原子(如烯键)结合时可能不稳定。取代基包括但不限于卤素、氰基、硝基、氧代、-SF5、C1-4烷基、C3-7环烷基等。
“异构体”指具有相同分子式但其原子结合的性质或顺序或其原子的空间排列不同的化合物。原子空间排列不同的异构体称为“立体异构体”。立体异构体包括旋光异构体、几何异构体和构象异构体。
本发明的化合物可以旋光异构体的形式存在。旋光异构体包括对映异构体和非对映异构体。对映异构体是不可重叠且互为镜像的两个立体异构体之一。外消旋混合物或外消旋体是具有相等数量左旋和右旋对映异构体的手性分子混合物。非对映异构体是彼此互不镜像且彼此不可重叠的立体异构体。制备和分离旋光异构体的方法是本领域已知的。当化合物为单一异构体并确定其绝对构型时，根据手性碳原子周围取代基的构型，将其称为“R”或“S”异构体。当未确定其绝对构型时，根据其测得的旋光度值将其称为(+)或(-)异构体。
本发明的化合物还可具有由取代基在碳-碳双键，碳-氮双键，环烷基或杂环基周围分布的几何异构体。碳-碳双键或碳-氮键周围的取代基被指定为Z或E构型，而环烷基或杂环周围的取代基被指定为顺式或反式构型。
本发明的化合物还可能显示互变异构现象，例如酮-烯醇互变异构。
本发明包括任何互变异构或立体异构形式及其混合物，并且不仅仅限于化合物的命名或化学结构式中所使用的任何一个互变异构或立体异构形式。
“同位素”包括在本发明的化合物中出现的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序数但不同质量数的原子。适合并入本发明的化合物中的同位素的实例是氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，分别例如但不限于2H(D)、3H、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F和36Cl。本发明的同位素标记化合物通常可通过本领域技术人员已知的传统技术或通过与所附实施例中描述的类似方法使用适当的同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂来制备。这样的化合物具有多种潜在用途，例如可作为测定生物活性中的标样和试剂。就稳定同位素而言，例如氘2H(D)、13C和15N，此类化合物具有潜在地改变生物学、药理或药代动力学特性的潜力。氘2H(D)是本发明的优选同位素。例如，-CH3的氢可以被D取代为-CD3。例如，环丙基的一个或多个氢可以被D所取代。
本发明的化合物可以以前药的形式给予。“前药”是指在体内的生理条件下例如通过氧化、还原、水解等(它们各自利用酶或在没有酶参与下进行)转化成本发明的生物活性化合物的衍生物。前药的实例包括本发明的化合物中的氨基被酰化、烷基化或磷酸化，例如二十烷酰基氨基、丙氨酰氨基、新戊酰氧基甲基氨基，或羟基被酰化、烷基化、磷酸化或转化成硼酸盐，例如乙酰氧基、棕榈酰氧基、新戊酰氧基、琥珀酰氧基、富马酰氧基、丙氨酰氧基，或羧基被酯化或酰胺化，或巯基与选择性地向靶和/或向细胞的胞质溶胶递送药物的载体分子，例如肽形成二硫桥键。前药可以由本发明的化合物根据公知方法制备。
“可药用的盐”指在本发明的化合物含有一个或多个酸性或碱性基团的情况下，由可药用的碱或酸，包括无机碱或酸和有机碱或酸制成的盐。因此，含有酸性基团的本发明的化合物可以以盐形式存在，例如作为碱金属盐、碱土金属盐或作为铵盐。这样的盐的更确切实例包括钠盐、钾盐、钙盐、镁盐或与氨或有机胺，例如乙胺、乙醇胺、三乙醇胺或氨基酸的盐。含有碱性基团的本发明的化合物可以以无机酸或有机酸盐形式存在。合适的酸的实例包括盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、萘二磺酸、草酸、乙酸、酒石酸、乳酸、水杨酸、苯甲酸、甲酸、丙酸、特戊酸、丙二酸、琥珀酸、庚二酸、富马酸、马来酸、苹果酸、氨基磺酸、苯基丙酸、葡糖酸、抗坏血酸、异烟酸、柠檬酸、己二酸和本领域已知的其它酸。如果本发明的化合物在分子中同时含有酸性和碱性基团，本发明除所提到的盐形式外还包括内盐。各盐可通过本领域技术人员已知的常规方法获得，例如通过在溶剂或分散剂中使化合物与有机或无机酸或碱混合或通过与其它盐阴离子或阳离子交换获得。
“药物组合物”指含有一种或多种本发明所述的化合物或其可药用的盐、前药、稳定同位素衍生物、异构体以及其他组分例如可药用的载体和辅料的组合物。
因此，在本申请中当提及“化合物”时，包括所有所述化合物形式，例如其可药用的盐、前药、稳定同位素衍生物、异构体及其混合物。
“自身免疫性疾病或炎症”包括但不限于关节炎、桥本氏甲状腺炎、自身免疫性溶血性贫血、恶性贫血的自身免疫性萎缩性胃炎、自身免疫性脑脊髓炎、自身免疫性睾丸炎、古德帕斯丘病、自身免疫性血小板减少症、交感性眼炎、重症肌无力、格雷夫斯病、原发性胆汁性肝硬化、肝炎、原发性硬化性胆管炎、慢性侵袭性肝炎、非酒精性脂肪性肝病、非酒精性脂肪性肝炎、溃疡性结肠炎、膜性肾小球病、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、干燥综合征、赖特综合征、多肌炎、皮肌炎、I-型干扰素病包括Aicardi-Goutières综合征和其他过度表达I-型干扰素的系统性硬化症、孟德尔疾病、结节性多动脉炎、多发性硬化症、复发缓解型多发性硬化症、原发性进行性多发性硬化症、继发性进展性多发性硬化症、大疱性类天疱疮；另外基于O-细胞(体液)或T-细胞的自身免疫性疾病，包括科根综合征、强直性脊柱炎、韦格纳肉芽肿病、自身免疫性脱发、I-型或青少年型糖尿病、甲状腺炎。
“肠炎症”包括但不限于克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、炎性肠病、乳糜泻、直肠炎、嗜酸性粒细胞胃肠炎、肥大细胞增多症。
“癌症/肿瘤”包括但不限于消化道/胃肠道癌、结肠癌、肝癌、皮肤癌(包括肥大细胞瘤和鳞状细胞癌)、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、淋巴瘤、白血病(包括急性骨髓性白血病和慢性髓细胞性白血病)、肾癌、肺癌、肌肉癌、骨瘤、膀胱癌、脑癌、黑素瘤(包括口腔和转移性黑素瘤)、卡波西肉瘤(包括多发性骨髓瘤的骨髓瘤)、骨髓增殖性疾病、增殖性糖尿病视网膜病变、血管增生相关病症/肿瘤。
“皮肤病”包括但不限于特应性皮炎、湿疹、银屑病、硬皮病、瘙痒症或其他瘙痒症状、白癜风、脱发。
“糖尿病”包括但不限于I-型糖尿病和糖尿病并发症。
“眼病”包括但不限于角膜结膜炎、葡萄膜炎(包括与白塞病有关的葡萄膜炎和晶状体引起的葡萄膜炎)、角膜炎、疱疹性角膜炎、圆锥角膜炎、角膜上皮营养不良、角膜白细胞减少症、眼球前膜炎、Mooren′s溃疡、巩膜炎、格雷夫斯眼病、Vogt-Koyanagi-Harada综合征、干燥性角膜结膜炎(干眼)、小水疱、虹膜睫状体炎、结节病、内分泌性眼病、交感性眼炎、过敏性结膜炎、眼部新生血管。
“神经退行性疾病”包括但不限于运动神经元病、阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿病、脑缺血；由创伤、损伤、谷氨酸神经毒性或缺氧引起的神经变性疾病；在中风、心肌缺血、肾缺血、心脏病发作、心脏肥大、动脉粥样硬化和动脉硬化、器官缺氧或血小板聚集中的缺血/再灌注损伤。
“过敏反应”包括但不限于哺乳动物过敏性皮炎(包括马过敏性疾病，如咬过敏症)、夏季湿疹、马蹄痒、痉挛、炎性气道疾病、气道反复阻塞、气道高反应性、慢性阻塞性肺病。
“哮喘和其它阻塞性气道疾病”包括但不限于慢性或过度哮喘、迟发性哮喘、支气管炎、支气管哮喘、过敏性哮喘、内源性哮喘、外源性哮喘、尘埃性哮喘。
“移植排斥”包括但不限于胰岛移植排斥、骨髓移植排斥、移植物抗宿主病、器官和细胞移植排斥(如骨髓、软骨、角膜、心脏、椎间盘、胰岛、肾、肢体、肝、肺、肌肉、成肌细胞、神经、胰腺、皮肤、小肠或气管)、异种移植。
“治疗有效量”指可以有效抑制JAK，特别是TYK2的功能和/或治疗或预防由该激酶介导的疾病的本发明的化合物的量。
“患者”是指哺乳动物，尤其是人类。
本发明提供了可用作JAK，尤其是TYK2抑制剂的化合物。化合物如通式(I)所示，或其前药、稳定同位素衍生物、可药用的盐及其异构体：
Figure BDA0003440425030000111
其中：
R1是芳基或杂芳基，其中所述芳基和杂芳基的一个或多个氢任选被D、卤素、氰基、-ORb、-NRbRc、-COORb、-C(O)Rb、-NRbC(O)Rc、-C(O)NRbRc、-S(O)2Rb、-S(O)2NRbRc、-S(O)(NRb)Rc、-P(O)(CH3)2、C1-6烷基、C3-6环烷基、3至8元杂环基或5至6元杂芳基所取代；
R2为H、D或-NHRa；
R3为H、D、卤素、氰基、C1-6烷基、C3-6环烷基或-OC1-6烷基，其中所述烷基和环烷基的一个或多个氢任选被D或氟所取代；
R4和R5各自独立地选自H、D、卤素、C1-6烷基或-OC1-6烷基，其中所述烷基的一个或多个氢任选被D或氟所取代；
R6和R7各自独立地选自H、D、氰基或C1-6烷基，其中所述烷基的一个或多个氢任选被D或氟所取代，或者R6和R7一起为氧代；
L为键、C1-6亚烷基、-C(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(Ra)-、-S(O)2-或-S(O)2N(Ra)-；
A为H、C1-6烷基、C3-6环烷基、3-8元杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个氢任选被D、卤素、氰基、-ORd、-NRdRe、C1-6烷基、C3-6环烷基或3至8元杂环基所取代；
Ra为H、C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述烷基和环烷基的一个或多个氢任选被D或F所取代；
Rb和Rc各自独立地选自H、C1-6烷基、C3-6环烷基或含N和/或O的3至8元杂环基，其中所述烷基、环烷基和杂环基的一个或多个氢进一步任选被D、卤素、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基或-OC1-6烷基所取代，且
Rd和Re各自独立地选自H、C1-6烷基、C3-6环烷基或3至8元杂环基，其中所述烷基、环烷基和杂环基的一个或多个氢进一步任选被D或F所取代。
在一个实施方案中，R1为苯基。
在一个实施方案中，R1为5至6元杂芳基，例如，R1为吡啶基、嘧啶基或吡唑基。
在一个实施方案中，R1的苯基和杂芳基的一个或多个氢任选被卤素、-COORb、-C(O)Rb、-C(O)NRbRc、C1-6烷基、C3-6环烷基或含N和/或O的4至6元杂环基所取代，优选被C1-6烷基、4至6元杂环基、-C(O)Rb或-C(O)NRbRc所取代，其中所述烷基、环烷基和杂环基的一个或多个氢进一步任选被D、卤素、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基或-OC1-6烷基所取代，优选被D、F、CN、-OH或C1-6烷基所取代。
在一个实施方案中，Rb和Rc各自独立地选自H、C1-6烷基、C3-6环烷基或含N和/或O的4至6元杂环基，其中所述烷基、环烷基和杂环基的一个或多个氢进一步任选被C1-6烷基所取代。
在一个优选的实施方案中，R2为H。
在一个优选的实施方案中，R3为H、卤素、氰基、C1-6烷基或-OC1-6烷基。
在一个优选的实施方案中，R4和R5各自独立地为H或C1-6烷基。
在一个优选的实施方案中，R6和R7为H，或R6和R7一起为氧代。
在一个优选的实施方案中，L为键、C1-6亚烷基、-C(O)-、-C(O)O-、-C(O)NH-或-S(O)2-。
在一个实施方案中，A为C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述烷基和环烷基的一个或多个氢任选被卤素、氰基、-OH、-OC1-2烷基或C1-2烷基所取代。
在一个实施方案中，A为吡啶基、嘧啶基、5元杂芳基或4至6元杂环基，其中所述杂环基和杂芳基的一个或多个氢任选被卤素、氰基、-OH、-OC1-2烷基或C1-2烷基所取代，优选被C1-2烷基所取代。
在一些实施方案中，通式(I)的化合物如以下通式(II)所示：
Figure BDA0003440425030000131
其中：
R1为苯基、吡啶基或吡唑基，所述苯基、吡啶基和吡唑基的一个或多个氢任选被卤素、C1-6烷基、含N和/或O的4至6元杂环基(例如吗啉、哌嗪、哌啶、吡咯烷和氧杂环丁烷)、-C(O)Rb或-C(O)NRbRc所取代，其中所述烷基和杂环基的一个或多个氢进一步任选被D、F、CN、-OH或C1-6烷基所取代；
Rb和Rc各自独立地选自H、C1-6烷基、C3-6环烷基或含N和/或O的4至6元杂环基(例如吗啉、哌嗪、哌啶、吡咯烷和氧杂环丁烷)，其中所述烷基、环烷基和杂环基的一个或多个氢进一步任选被C1-2烷基所取代；
R3为H、卤素、氰基、C1-6烷基或-OC1-6烷基；
R4和R5各自独立地为H或C1-6烷基；
L为键、C1-6亚烷基、-C(O)-、-C(O)O-、-C(O)NH-或-S(O)2-，且
A为C1-6烷基、C3-6环烷基、含N和/或O的4至6元杂环基(例如吗啉、哌嗪、哌啶、吡咯烷和氧杂环丁烷)、吡啶基、嘧啶基或5元杂芳基(例如异恶唑和吡唑)，其中所述烷基和环烷基的一个或多个氢任选被卤素、氰基、-OH、-OC1-2烷基或C1-2烷基所取代，杂环基和杂芳基的一个或多个氢任选被C1-2烷基所取代。
在一个优选的实施方案中，R1为吡唑基。
在一个优选的实施方案中，R3为H、卤素或C1-6烷基。
在一个优选的实施方案中，R4为H或甲基。
在一个优选的实施方案中，R5为H或甲基。
在一个优选的实施方案中，L为-C(O)-。
在一个优选的实施方案中，A为C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述烷基和环烷基的一个或多个氢任选被卤素、氰基、-OH或-OC1-2烷基所取代。
在一些实施方案中，通式(II)的化合物如以下通式(III)所示：
Figure BDA0003440425030000141
其中
R3为H、卤素、氰基、C1-6烷基或-OC1-6烷基；
R4和R5各自独立地为H或C1-6烷基；
L为键、C1-6亚烷基、-C(O)-、-C(O)O-、-C(O)NH-或-S(O)2-；
A为C1-6烷基、C3-6环烷基、含N和/或O的4至6元杂环基(例如吗啉、哌嗪、哌啶、吡咯烷和氧杂环丁烷)、吡啶基、嘧啶基或5元杂芳基(例如异恶唑和吡唑)，其中所述烷基和环烷基的一个或多个氢任选被D、卤素、氰基、-OH、-OC1-2烷基或C1-2烷基所取代，杂环基和杂芳基的一个或多个氢任选被C1-2烷基所取代，且
R11为H、C1-6烷基或含N和/或O的4至6元杂环基(例如吗啉、哌嗪、哌啶、吡咯烷和氧杂环丁烷)，其中所述烷基和杂环基的一个或多个氢任选被D、F、CN、-OH或C1-6烷基所取代。
通式III中的A优选为C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述烷基和环烷基的一个或多个氢任选被卤素、氰基、-OH或-OC1-2烷基所取代。
R11优选为C1-6烷基(例如甲基)，其中所述烷基的一个或多个氢任选被D、F、CN、-OH或C1-6烷基所取代。
本发明还涉及以下化合物1-100或其可药用的盐、前药、稳定同位素衍生物、异构体及其混合物。
Figure BDA0003440425030000151
Figure BDA0003440425030000161
Figure BDA0003440425030000171
Figure BDA0003440425030000181
Figure BDA0003440425030000191
Figure BDA0003440425030000201
Figure BDA0003440425030000211
Figure BDA0003440425030000221
Figure BDA0003440425030000231
Figure BDA0003440425030000241
Figure BDA0003440425030000251
Figure BDA0003440425030000261
Figure BDA0003440425030000271
Figure BDA0003440425030000281
Figure BDA0003440425030000291
Figure BDA0003440425030000301
Figure BDA0003440425030000311
Figure BDA0003440425030000321
Figure BDA0003440425030000331
Figure BDA0003440425030000341
Figure BDA0003440425030000351
Figure BDA0003440425030000361
Figure BDA0003440425030000371
Figure BDA0003440425030000381
Figure BDA0003440425030000391
Figure BDA0003440425030000401
化合物61、62、63、64、65、68、69、70、71、72、73、74、92和100均为外消旋体或一对非对应异构体。化合物86、87、88、89、90、91、98和99均为单一的旋光异构体。化合物86/87和88/89各自为一对对映异构体。化合物90和91为一对非对映异构体。
本发明的化合物有效地抑制JAK、尤其是TYK2的活性，其IC50优选为10至100nM，更优选小于10nM。本发明的化合物对NK92细胞中IL-2诱导的IFN-γ分泌具有显著抑制效应，其IC50优选小于1000nM。
本发明进一步涉及药物组合物，其包含通式(I)所示的化合物或其可药用的盐、前药、稳定同位素衍生物及其异构体，以及药学上可接受的载体或辅料。药物组合物可用于治疗或预防JAK，尤其是TYK2介导的疾病，包括但不限于自身免疫性疾病，包括肠道疾病在内的炎症、癌症、皮肤病、糖尿病、眼病、神经退行性疾病、过敏反应、哮喘和其它阻塞性气道疾病、移植排斥。
本发明进一步提供一种用于治疗或预防由JAK，尤其是TYK2介导的疾病的方法。该方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的通式(I)所示的化合物或其可药用的盐、前药、稳定同位素衍生物及其异构体。所述疾病包括但不限于自身免疫疾病，包括肠道疾病在内的炎症、癌症、皮肤疾病、糖尿病、眼病、神经退行性疾病、过敏反应、哮喘和其它阻塞性气道疾病如慢性阻塞性肺疾病(COPD)以及移植排斥。本发明化合物特别适用于治疗银屑病、银屑病性关节炎、溃疡性结肠炎、克罗恩病、系统性红斑狼疮(SLE)、狼疮性肾炎、白癜风、斑秃、皮炎、哮喘、特应性湿疹。
根据本发明，所述药物可以是任何剂型，包括但不限于片剂、胶囊剂、溶液剂、冻干制剂、注射剂。
本发明的药物制剂可以以每剂量单位包含预定量活性成分的剂量单位形式给药。这种单位可根据治疗的病症、给药方法和患者的年龄、体重和状况包含例如0.5毫克至1克，优选1毫克至700毫克，特别优选5毫克至300毫克的本发明的化合物。此外，所述药物制剂可以使用药学领域众所周知的方法来制备，例如通过将活性成分与一种或多种辅料或一种或多种佐剂一起配制。
本发明的药物制剂可通过任何所需的合适方法给药，例如通过经口(包括口腔或舌下)、直肠、经鼻、局部(包括口腔、舌下或经皮)、阴道或肠道外(包括皮下、肌内、静脉内或皮内)给药。
本发明还提供制备所述化合物的方法。通式(I)所示的本发明的化合物的制备可通过以下示例性方法和实施例完成，但这些方法和实施例不应以任何方式被认为是对本发明范围的限制。本发明所述的化合物也可通过本领域技术人员所知的合成技术合成，或者综合使用本领域已知方法和本发明所述方法。每步反应所得的产物用本领域已知的分离技术得到，包括但不限于萃取、过滤、蒸馏、结晶、色谱分离等。合成所需的起始物料和化学试剂可以根据文献(可从SciFinder上查询)常规合成或购买。
本发明通式(I)所示的杂环化合物可按照下图所述路线合成：1)起始物料A1与A2在有机碱催化下发生取代反应得到中间体A3；2)A3与一级胺(R1-NH2)进行酸催化取代反应或通过Buchwald-Hartwig偶联反应生成A4；3)A4在酸中(比如PG为Boc)或氢化下(比如PG为Bn)去保护生成A5；4)A5接着被衍生化得到各种目标化合物，比如被酰氯或酸酐酰胺化、与酸发生耦合反应、被磺酰氯磺酰化、与卤化物进行取代反应、与氨耦合生成尿或与(杂)芳基-卤素通过Buchwald-Hartwig偶联等。
Figure BDA0003440425030000421
实施例
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或质谱(MS)来确定的。NMR的测定是用BrukerASCEND-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)、氘代氯仿(CDCl3)、氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基甲硅烷(TMS)，化学位移是以10-6(ppm)作为单位给出。
MS的测定使用Agilent SQD(ESI)质谱仪(安捷伦6120)。
HPLC的测定使用安捷伦1260DAD高压液相色谱仪(色谱柱：Poroshell120 EC-C18，50×3.0mm，2.7μm)或Waters Arc高压液相色谱仪(色谱柱：Sunfire C18，150×4.6mm，5μm)。
薄层色谱法(TLC)采用青岛海洋化工公司的厚度为0.15～0.2mm的GF254硅胶板，薄层层析分离纯化产品采用其厚度为0.4～0.5mm的硅胶板。
柱层析一般使用青岛海洋化工公司的200～300目硅胶。
本发明中已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购自ABCR GmbH&Co.KG、Acros Organics、Aldrich Chemical Company、韶远化学科技(AccelaChemBio Inc.)、北京偶合等。
实施例中如无特殊说明，反应均在由一个约1L容积的气球所提供的氩气或氮气气氛下进行。
氢化反应在氢气气氛下进行，所用反应瓶经3次反复抽真空再充入氢气操作后连接一个约1L容积的氢气气球。
微波反应使用CEM Discover-SP型微波反应器。
实施例中如无特殊说明，反应的温度为室温。
实施例中的反应监测使用安捷伦的液质联用仪(1260/6120)或薄层色谱法。用于柱层析和TLC的溶剂洗脱系统包括：a)二氯甲烷/甲醇，b)石油醚/乙酸乙酯，或其它所述的体系。溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以根据需要加入少量的三乙胺和酸性或碱性试剂等来进一步调节。纯化化合物还可以采用带有质谱检测器(SQD2)的Waters质谱导向自动制备系统(缩写为prep-HPLC)，根据化合物的极性用适当的乙腈/水(含0.1％三氟乙酸或甲酸)或乙腈/水(含0.05％氨水)梯度于20mL/min的流速洗脱反相高压柱(XBridge-C18，19×150mm，5μm)。部分实施例可在使用prep-HPLC纯化后所收集的馏分中加入1N盐酸，然后减压干燥得到其盐酸盐。
实施例1.环丙基((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基-5-(2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)甲酮
Figure BDA0003440425030000441
第一步
3，7-二亚甲基-1，5-二甲苯磺酰-1，5-二氮杂环辛烷(1b)
将对甲苯磺酰胺(17.12g，100mmol)、无水碳酸钾(27.6g，200mmol)和无水乙腈(200mL)混合，然后缓慢(10分钟)加入3-氯-2-氯甲基-1-丙烯1a(12.5g，100mmol)的乙腈(20mL)溶液。该混合物在回流下搅拌18小时后，冷却至室温，加入水(250mL)，然后搅拌30分钟。过滤收集沉淀物，得到20g粗品。将该粗品通过硅胶柱层析(石油醚/二氯甲烷＝100/0至0/100)纯化，得到目标产物1b(10.8g，48％)。
MS m/z(ESI)：447[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.70-7.64(m，4H)，7.31(d，J＝8.0Hz，4H)，5.19(s，4H)，3.82(s，8H)，2.43(s，6H).
第二步
(3ar，6ar)-3a，6a-二甲基八氢吡咯并[3，4-c]吡咯(1c)
将化合物1b(10.8g，24.2mmol)溶于四氢呋喃(400mL)并冷却至0℃，然后分批加入氢化铝锂(9.2g，242mmol)。室温下搅拌4天后，冷却至0℃，缓慢滴加20％氢氧化钠水溶液(18mL)。将该混合物逐渐升温到室温，搅拌1小时后用硅藻土垫过滤，滤饼用四氢呋喃(3×200mL)洗涤。滤液合并后，在减压条件下除去溶剂，得到目标产物1c(2.25g，66％)。该产品未经进一步纯化，直接用于下一步。
MS m/z(ESI)：141[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.90(d，J＝11.0Hz，4H)，2.69(d，J＝11.0Hz，4H)，2.39(brs，2H)，0.98(s，6H).
第三步
(3aR，6aS)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(1d)
将化合物1c(2.25g，16mmol)溶于二氯甲烷(100mL)，冷却到0℃后依次加入三乙胺(4.8g，48mmol)和二碳酸二叔丁酯(3.5g，16mmol)的二氯甲烷溶液(100mL)。逐渐升温到室温后搅拌1小时，然后用水(100mL)淬灭，混合物用二氯甲烷(2×100mL)萃取。有机相合并后用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残余物用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100/1-10/1)纯化，得到目标产物1d(1.37g，36％)。
MS m/z(ESI)：241[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.47(s，2H)，3.20(d，J＝10.2Hz，2H)，3.09(d，J＝11.4Hz，2H)，2.90(d，J＝11.4Hz，2H)，1.45(s，9H)，1.06(s，6H).
第四步
(3aR，6aS)-5-(2-氯嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(1e)
将化合物1d(1.37g，5.7mmol)溶于乙腈(50mL)，然后依次加入2，4-二氯嘧啶(850mg，5.7mmol)和二异丙基乙基胺(2.21g，17.1mmol)。加热回流16小时后冷却至室温，在减压条件下浓缩至干，残余物用水(50mL)稀释，然后用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。有机相合并后经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5/1至1/1)纯化，得到目标产物1e(1.47g，73％)。
MS m/z(ESI)：353[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.03(d，J＝6.0Hz，1H)，6.17(d，J＝5.8Hz，1H)，3.77(d，J＝12.3Hz，1H)，3.57(t，J＝10.9Hz，1H)，3.53-3.39(m，3H)，3.35(d，J＝11.4Hz，1H)，3.32-3.24(m，2H)，1.45(s，9H)，1.15(d，J＝6.5Hz，6H).
第五步
4-((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(1f)
向30-mL微波反应瓶中加入1e(353mg，1mmol)、1-甲基-1H-吡唑-4-胺(102mg，1.05mmol)、对甲基苯磺酸(4mg，0.02mmol)和异丙醇(25mL)。该混合物在微波反应器中加热到100℃并搅拌1小时，冷却至室温，然后加入氯化氢溶液(33％乙醇溶液，2mL)，所得混合物在微波反应器中在80℃下反应30分钟。使用上面相同的操作步骤重复合成3个批次，然后将总共4个批次的反应混合物冷却至室温，混合过滤收集沉淀物，得到目标产物1f(1g，54％)。
MS m/z(ESI)：314[M+1]
第六步
环丙基((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基-5-(2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)甲酮(1)
将化合物1f(46mg，0.1mmol)和三乙胺(50mg，0.5mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，冷却至0℃，然后加入环丙基甲酰氯(11mg，0.1mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌20分钟后用水(20mL)淬灭，然后用二氯甲烷(2×20mL)萃取。有机相合并后用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物1(23mg，固体，61％)。
MS m/z(ESI)：382[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.85(d，J＝6.3Hz，2H)，7.60(s，1H)，5.92(d，J＝6.0Hz，1H)，3.90(d，J＝10.0Hz，2H)，3.89(s，3H)，3.76(d，J＝10.8Hz，2H)，3.61(d，J＝12.4Hz，2H)，3.48(d，J＝12.3Hz，2H)，1.84-1.78(m，1H)，1.26(s，3H)，1.23(s，3H)，0.96-0.82(m，4H).
实施例2. 4-((4-((3aR，6aS)-5-(环丙羰基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-基)氨基)苯甲酸
Figure BDA0003440425030000471
第一步
(3aR，6aS)-5-(2-((4-(叔-丁氧基羰基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(2a)
向10-mL微波反应瓶中加入1e(100mg，0.283mmol)、4-氨基苯甲酸叔丁酯(55mg，0.283mmol)、对甲基苯磺酸(5mg，0.0283mmol)和异丙醇(4mL)，然后将该混合物在微波反应器于100℃下搅拌1小时。冷却至室温后，减压除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝2/1至1/2)纯化，得到目标产物2a(102mg，71％)。
MS m/z(ESI)：510[M+1]
第二步
4-((4-((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-基)氨基)苯甲酸(2b)
将化合物2a(30mg，0.06mmol)溶于乙醇(2mL)，然后加入HCl溶液(33％乙醇溶液，2mL)。室温下搅拌2小时后，在减压条件下浓缩至干，得到目标产物2b(36mg)。该产品未经进一步纯化，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：354[M+1]
第三步
4-((4-((3aR，6aS)-5-(环丙羰基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-基)氨基)苯甲酸(2)
将化合物2b(36mg，白色固体粗品)和三乙胺(30mg，0.3mmol)溶于二氯甲烷(5mL)，然后加入环丙基甲酰氯(6mg，0.06mmol)。室温下搅拌10分钟后，用水(0.5mL)淬灭，在减压条件下浓缩至干。残余物溶于四氢呋喃(2mL)中，然后加入20％氢氧化钠水溶液(2mL)。室温下搅拌2小时后，用1N盐酸调节至pH＝3-4，然后用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。有机相合并后经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物2(20mg，固体，79％)。
MS m/z(ESI)：422[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.96(dd，J＝10.3，7.5Hz，3H)，7.81(d，J＝8.7Hz，2H)，6.07(d，J＝6.1Hz，1H)，3.92(d，J＝10.9Hz，2H)，3.76(d，J＝10.8Hz，2H)，3.62(d，J＝12.4Hz，2H)，3.49(d，J＝12.4Hz，2H)，1.84-1.77(m，1H)，1.27(s，3H)，1.24(s，3H)，0.95-0.84(m，4H).
实施例3. 4-((4-((3aR，6aS.)-5-(环丙羰基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-基)氨基)-N-乙基苯酰胺
Figure BDA0003440425030000481
将2(56mg，0.133mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，然后依次加入二异丙基乙胺(59mg，0.153mmol)和HATU(58mg，0.153mmol)。室温下搅拌5分钟后，加入3滴乙胺水溶液(65％-70％wt)。将混合物在室温下继续搅拌30分钟，然后在减压条件下除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物3(3.3mg，固体，6％)。
MS m/z(ESI)：449[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.94(d，J＝6.1Hz，1H)，7.84-7.77(m，4H)，6.04(d，J＝6.1Hz，1H)，3.90(d，J＝11.1Hz，2H)，3.76(d，J＝10.9Hz，2H)，3.62(d，J＝12.4Hz，2H)，3.48(d，J＝12.5Hz，2H)，3.43(q，J＝14.5，7.3Hz，2H)，1.85-1.77(m，1H)，1.28-1.19(m，9H)，0.95-0.83(m，4H).
实施例4. 1-((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基-5-(2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-2，2，2-三氟乙烷-1-酮盐酸盐
Figure BDA0003440425030000491
将化合物1f(69mg，0.15mmol)和二异丙基乙胺(116mg，0.9mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，然后加入三氟乙酸酐(32mg，0.15mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液。室温下搅拌20分钟后，在减压条件下除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物4(盐酸盐固体，36.4mg，54％)。
MS m/z(ESI)：410[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.89(s，1H)，7.74(s，1H)，7.65(s，1H)，6.31(dd，J＝7.4，5.0Hz，1H)，4.00-3.73(m，9H)，3.70-3.61(m，2H)，1.27(s，6H).
实施例6参照实施例4的操作方法合成，但在第一步中用氯甲酸乙酯代替三氟乙酸酐，如下所示：
Figure BDA0003440425030000492
实施例5.(2，2-二氟环丙基)((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基-5-(2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)甲酮盐酸盐
Figure BDA0003440425030000501
将化合物1f(69mg，0.15mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，然后依次加入二异丙基乙胺(116mg，0.9mmol)、HATU(57mg，0.15mmol)和2，2-二氟环丙烷-1-羧酸(19mg，0.15mmol)。室温下搅拌20分钟后，在减压条件下除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物5(盐酸盐固体，32.8mg，52％)。
MS m/z(ESI)：418[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.85(t，J＝4.0Hz，2H)，7.59(s，1H)，5.92(d，J＝6.1Hz，1H)，3.90(d，J＝10.9Hz，4H)，3.78(q，J＝11.0Hz，2H)，3.66(d，J＝11.9Hz，3H)，3.52(d，J＝12.5Hz，2H)，2.89-2.79(m，1H)，2.09-2.01(m，1H)，1.85-1.74(m，1H)，1.28-1.19(m，6H).
实施例7. 3-((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基-5-(2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)丙腈
Figure BDA0003440425030000502
将化合物1f(69mg，0.15mmol)溶于乙腈(5mL)中，然后依次加入3-溴丙腈(20mg，0.15mmol)和二异丙基乙胺(116mg，0.9mmol)。室温下搅拌20小时，然后在90℃下再加热24小时，LCMS显示仅有痕量的所需产物产生。将反应混合物转移到15-mL密封管中，并使其在120℃下反应72小时。冷却到室温后，在减压条件下除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物7(3.2mg，固体，4％)。
MS m/z(ESI)：367[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.81(d，J＝5.6Hz，2H)，7.61(s，1H)，5.92(d，J＝6.1Hz，1H)，3.88(s，3H)，3.77(dd，J＝19.3，12.2Hz，2H)，3.48-3.39(m，2H)，2.97(d，J＝9.3Hz，2H)，2.79(t，J＝6.8Hz，2H)，2.61(dd，J＝12.8，8.0Hz，4H)，1.20(s，6H).
实施例8.(3aR，6aS)-N-(氰基甲基)-3a，6a-二甲基-5-(2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-甲酰胺
Figure BDA0003440425030000511
向2-氨基乙腈(14mg，0.24mmol)的DMF(3mL)溶液中加入1，1′-羰基二咪唑(49mg，0.3mmol)，加热至65℃并搅拌2小时，然后加入1f(69mg，0.15mmol)。该混合物在65℃下继续搅拌2小时后，减压除去溶剂，残余物分散在饱和碳酸氢钠溶液(20mL)中，然后用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。有机相合并后，用无水硫酸钠干燥。过滤后滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物8(19.2mg，固体，32％)。
MS m/z(ESI)：396[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.81(d，J＝8.0Hz，2H)，7.57(s，1H)，5.88(d，J＝6.0Hz，1H)，4.09(s，2H)，3.85(s，3H)，3.76(s，1H)，3.59(s，1H)，3.51(d，J＝9.9Hz，3H)，3.37(d，J＝10.3Hz，3H)，1.19(s，6H).
实施例9. 4-((4-((3aR，6aS)-5-(2，2-二氟环丙烷-1-羰基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)-N-乙基苯酰胺
Figure BDA0003440425030000521
第一步
N-乙基-4-硝基苯甲酰胺(9b)
将4-硝基苯甲酸9a(5g，30mm0l)溶解在二氯甲烷(100mL)中，逐滴加入草酰氯(7.6g，60mmol)，然后滴加DMF(0.1mL)。室温下搅拌30分钟后在减压条件下浓缩至干。将残留的固体溶解在无水四氢呋喃(50mL)中，然后滴加乙胺水溶液(60-70％wt，10mL)。室温下搅拌30分钟后，将混合物倒入水(200mL)中，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。有机相合并后用无水硫酸钠干燥，过滤后滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/1至0/100)纯化，得到目标产物9b(5.13g，88％)。
MS m/z(ESI)：195[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.33-8.23(m，2H)，7.98-7.85(m，2H)，6.16(s，1H)，3.54(qd，J＝7.3，5.7Hz，2H)，1.29(t，J＝7.3Hz，3H).
第二步
4-氨基-N-乙基苯酰胺(9c)
向9b(5.13g，26.42mmol)、乙醇(100mL)、水(40mL)、乙酸(4mL)和氯化铵(14.13g，264.2mmol)的混合物中分批加入锌粉(8.64g，132mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时后，再次将锌粉(8.64g，132mmol)分批加入到反应混合物中。将所得混合物在60℃下搅拌1小时，冷却到室温后，通过硅藻土垫过滤。滤液在减压条件下浓缩至干，残余物分散到饱和碳酸氢钠溶液(50mL)中，然后用乙酸乙酯(4×50mL)萃取。有机相合并后用无水硫酸钠干燥，过滤后滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/1至0/100)纯化，得到目标产物4-氨基-N-乙基苯酰胺9c(3.25g，75％)。
MS m/z(ESI)：165[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.94(t，J＝5.2Hz，1H)，7.55(dd，J＝9.0，2.2Hz，2H)，6.52(dd，J＝9.0，2.2Hz，2H)，5.54(s，2H)，3.26-3.16(m，2H)，1.08(t，J＝7.2Hz，3H).
第三步
(3aR，6aS)-5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(9e)
向9d(900mg，4.24mmol)的乙腈(50mL)溶液中加入2，4-二氯-5-氟嘧啶(708mg，4.24mmol)和二异丙基乙胺(1.64g，12.72mmol)。室温下搅拌2小时，然后在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化，得到目标产物9e(1.13g，78％)。
MS m/z(ESI)：343[M+1]
第四步
(3aR，6aS)-5-(2-((4-(乙基氨基甲酰)苯基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(9f)
向10-mL微波小瓶中依次加入9e(68mg，0.2mmol)、4-氨基-N-乙基苯甲酰胺(33mg，0.2mmol)、1，4-二氧六环(3mL)和叔丁醇钾(48mg，0.5mmol)，然后在氮气气氛下加入RuPhos-Pd-G2(7mg，0.01mmol)。该混合物在微波反应器中于120℃下搅拌1小时。冷却至室温后，倒入水(20mL)中，然后用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。有机相合并后用无水硫酸钠干燥，过滤后滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝10/1至5/1)纯化，得到目标产物9f(56mg，63％)。
MS m/z(ESI)：471[M+1]
第五步
N-乙基-4-((5-氟-4-((3aR，6aS)-六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-基)氨基)苯酰胺盐酸盐(9g)
将化合物9f(56mg，0.112mmol)溶于乙醇(2mL)，然后加入氯化氢的乙醇溶液(33％，2mL)。室温下搅拌14小时，在减压条件下浓缩至干，得到目标产物N-乙基-4-((5-氟-4-((3aR，6aS)-六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-基)氨基)苯酰胺盐酸盐9g(57mg)。该产品未经进一步纯化，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：371[M+1]
第六步
4-((4-((3aR，6aS)-5-(2，2-二氟环丙烷-1-羰基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)-N-乙基苯酰胺(9)
将化合物N-乙基-4-((5-氟-4-((3aR，6aS)-六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-基)氨基)苯酰胺盐酸盐9g(57mg，0.112mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，然后依次加入二异丙基乙胺(91mg，0.696mmol)、2，2-二氟环丙烷-1-羧酸(15mg，0.12mmol)和HATU(46mg，0.12mmol)。室温下搅拌1小时后，减压条件下除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物9(21mg，固体，40％)。
MS m/z(ESI)：475[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.84(d，J＝5.8Hz，1H)，7.77-7.70(m，4H)，4.09-3.90(m，3H)，3.82-3.56(m，4H)，3.52-3.43(m，1H)，3.40(q，J＝7.2Hz，2H)，3.22-3.05(m，2H)，2.88-2.77(m，1H)，2.08-1.97(m，1H)，1.83-1.70(m，1H)，1.22(t，J＝7.2Hz，3H).
实施例10参照实施例9的操作方法合成，但在第三步中用1d代替9d，如下所示：
Figure BDA0003440425030000551
实施例11.环丙基((3aR，6aS)-5-(5-氟-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)甲酮
Figure BDA0003440425030000552
第一步
(3aR，6aS)-5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(11a)
将2，4-二氯-5-氟嘧啶(680mg，4mmol)和1d(1.96g，粗品，含量约50％)溶解在乙腈(40mL)中，加入三乙胺(1.55g，12mmol)，加热至90℃并搅拌18小时。冷却至室温，加入饱和氯化铵水溶液(100mL)中，然后用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。有机相合并后，用饱和食盐水(100mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥。过滤后，滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100/0至7/3)纯化，得到目标产物11a(245mg，17％)。
MSm/z(ESI)：371[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.91(d，J＝4.9Hz，1H)，3.83(s，2H)，3.67(s，2H)，3.46(s，2H)，3.33(s，2H)，1.46(s，9H)，1.15(s，6H).
第二步
(3aR，6aS)-5-(5-氟-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(11b)
向30-mL微波小瓶中加入11a(245mg，0.66mmol)、1-甲基-1H-吡唑-4-胺(64mg，0.66mmol)、1，4-二氧六环(8mL)、叔丁醇钠(159mg，1.65mmol)和RuPhos-Pd-G2(24mg，0.033mmol)，然后在氮气气氛下将该混合物在微波反应器中加热到120℃并搅拌1小时。冷却至室温后，通过硅藻土过滤。滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(二氯甲烷/乙酸乙酯＝100/0至0/100)纯化，得到目标产物11b(147mg，52％)。
MS m/z(ESI)：432[M+1]
第三步
4-((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-5-氟-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(11c)
将化合物11b(147mg，0.34mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(2mL)。室温下搅拌18小时后，在减压条件下浓缩至干。将残余物溶于二氯甲烷(10mL)中，加入氯化氢的乙醇溶液(9M，1mL)。将混合物再次浓缩至干，得到目标产物11c(160mg，98％)，产率：。
MS m/z(ESI)：332[M+1]
第四步
环丙基((3aR，6aS)-5-(5-氟-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)甲酮(11)
将化合物11c(160mg，0.34mmol)和三乙胺(243mg，2.4mol)溶于二氯甲烷(10mL)中，冷却至0℃后，然后加入环丙基甲酰氯(42mg，0.4mmol)。在0℃下搅拌30分钟，用二氯甲烷(20mL)稀释，然后用水(20mL)洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥后过滤，滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物11(12.5mg，固体，9％)。
MS m/z(ESI)：400[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.76(d，J＝5.7Hz，1H)，7.61(s，1H)，7.53(s，1H)，6.80(s，1H)，3.87(s，3H)，3.81(dd，J＝20.0，10.7Hz，3H)，3.64(t，J＝11.8Hz，4H)，3.48(d，J＝12.4Hz，1H)，1.60-1.52(m，1H)，1.20(s，3H)，1.16(s，3H)，1.05-0.96(m，2H)，0.83-0.73(m，2H).
实施例13参照实施例11的操作方法合成，但在第二步中用2-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)乙烷-1-醇代替1-甲基-1H-吡唑-4-胺，如下所示：
Figure BDA0003440425030000571
Figure BDA0003440425030000581
实施例15和实施例24均参照实施例11的操作方法合成，但在第一步中用不同的化合物代替2，4-二氯-5-氟嘧啶，如下所示：
Figure BDA0003440425030000582
实施例12.环丙基((3aR，6aS)-5-(5-氯-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)甲酮
Figure BDA0003440425030000591
第一步
(3aR，6aS)-5-(2，5-二氯嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(12a)
将2，4，5-三氯嘧啶(183mg，1mmol)和1d(770mg，粗品，约1mmol)溶解在乙腈(40mL)中，加入二异丙基乙胺(388mg，3mmol)，加热至90℃并搅拌24小时。冷却至室温，加入饱和氯化铵水溶液(50mL)中，然后用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。有机相合并后，用饱和食盐水(50mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥。过滤后，滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100/0至7/3)纯化，得到目标产物12a(90mg，固体，23％)。
MS m/z(ESI)：387[M+1]
第二步
(3aR，6aS)-5-(5-氯-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(12b)
向30-mL微波小瓶中加入12a(90mg，0.23mmol)、1-甲基-1H-吡唑-4-胺(23mg，0.23mmol)、1，4-二氧六环(5mL)、叔丁醇钠(49mg，0.506mmol)和RuPhos-Pd-G2(9mg，0.0115mmol)，然后在氮气气氛下将该混合物在微波反应器中加热到110℃并搅拌1小时。冷却至室温后，通过硅藻土过滤。滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(二氯甲烷/乙酸乙酯＝100/0至0/100)纯化，得到目标产物12b(61mg，59％)。
MS m/z(ESI)：448[M+1]
第三步
5-氯-4-((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(12c)
将化合物12b(61mg，0.136mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(2mL)。室温下搅拌20小时后，在减压条件下浓缩至干。将残余物溶于甲醇(2mL)和水(10mL)的混合溶剂中，加入氯化氢的乙醇溶液(9M，0.2mL)。将混合物再次浓缩至干，得到目标产物12c(67mg，100％)。
MS m/z(ESI)：348[M+1]
第四步
环丙基((3aR，6aS)-5-(5-氯-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)甲酮(12)
将化合物12c(67mg，0.136mmol)和三乙胺(55mg，0.544mol)溶于二氯甲烷(20mL)中，冷却至0℃后，然后加入环丙基甲酰氯(14mg，0.136mmol)。在0℃下搅拌30分钟后用饱和氯化铵溶液(20mL)洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥后过滤，滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物12(1.9mg，固体，3％)。
MS m/z(ESI)：416[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.83(s，1H)，7.75(s，1H)，7.53(s，1H)，3.97(dd，J＝15.1，11.8Hz，2H)，3.90-3.78(m，6H)，3.71(d，J＝10.8Hz，1H)，3.59(d，J＝12.4Hz，1H)，3.42(d，J＝12.4Hz，1H)，1.78(dd，J＝8.7，3.9Hz，1H)，1.21(s，3H)，1.18(s，3H)，0.92-0.87(m，2H)，0.86-0.82(m，2H).
实施例19、34、37、41和96均参照实施例12的操作方法合成，但在第四步中用不同的化合物代替环丙基甲酰氯，如下所示：
Figure BDA0003440425030000601
Figure BDA0003440425030000611
Figure BDA0003440425030000621
实施例23、30和32均参照实施例12的操作方法合成，但在第二步中用不同的化合物代替1-甲基-1H-吡唑-4-胺，如下所示：
Figure BDA0003440425030000622
Figure BDA0003440425030000631
实施例14. 4-((3aR，6aS)-5-(2，2-二氟乙基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-5-氟-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺
Figure BDA0003440425030000641
将化合物11c(135mg，0.255mmol)溶于DMF(2mL)中，然后依次加入二异丙基乙胺(132mg，1.02mmol)和1，1-二氟-2-碘乙烷(49mg，0.255mmol)。将混合物在70℃下搅拌24小时，然后转移到15-mL密封管中，再加入二异丙基乙胺(132mg，1.02mmol)和1，1-二氟-2-碘乙烷(98mg，0.51mmol)。将混合物于80℃下在密封管中搅拌72小时，冷却至室温后用prep-HPLC纯化，得到目标产物14(16.9mg，固体，17％)。
MS m/z(ESI)：396[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.77(s，1H)，7.74(d，J＝6.2Hz，1H)，7.55(s，1H)，5.89(tt，J＝56.1，4.3Hz，1H)，3.96(dd，J＝11.7，1.9Hz，2H)，3.87(s，3H)，3.58(dd，J＝11.6，1.2Hz，2H)，2.99(d，J＝9.5Hz，2H)，2.89(td，J＝15.3，4.3Hz，2H)，2.66(d，J＝9.5Hz，2H)，1.17(s，6H).
实施例16.((3aR，6aS)-5-(5-氯-2-((1-(1-甲基哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)(环丙基)甲酮
Figure BDA0003440425030000642
第一步
1-甲基-4-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)哌啶(16b)
将4-硝基-1H-吡唑16a(1.13g，10mmol)、1-甲基哌啶-4-醇(1.15g，10mmol)和三苯基膦(3.15g，12mmol)溶于四氢呋喃(25mL)中，冷却至0℃后，在氮气气氛中滴加偶氮二甲酸二异丙酯(2.63g，13mmol)。室温下将混合物在氮气气氛下搅拌4小时，用水(100mL)稀释，然后用6N盐酸调节至pH＝1。所得混合物用乙酸乙酯(2×50mL)洗涤，然后用氢氧化锂固体将水层调节至pH＝10，然后用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。有机相合并后用无水硫酸钠干燥，滤液过滤后在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100/0至94/6)纯化，得到目标产物16b(800mg，38％)。
MS m/z(ESI)：211[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.17(s，1H)，8.08(s，1H)，4.19-4.11(m，1H)，3.04-2.96(m，2H)，2.35(s，3H)，2.24-2.12(m，4H)，2.10-2.00(m，2H).
第二步
1-甲基-4-(4-胺-1H-吡唑-1-基)哌啶(16c)
将16b(800mg，3.8mmol)溶于甲醇(10mL)中，加入10％钯碳(400mg)。将混合物在室温下于氢气气氛下搅拌2小时后过滤，滤液在减压条件下除去溶剂，得到目标产物16c(688mg，100％)。该产品未经进一步纯化，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：181[M+1]
第三步
5-氯-4-((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-N-(1-(1-甲基哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(16d)
向10-mL微波小瓶中加入12a(39mg，0.1mmol)、1-甲基-4-(4-胺-1H-吡唑-1-基)哌啶16c(18mg，0.1mmol)、对甲基苯磺酸(38mg，0.2mmol)和异丙醇(2mL)。将混合物在微波反应器中在100℃下搅拌1小时。冷却到室温后，减压除去溶剂，得到目标产物16d(60mg)。该产品未经进一步纯化，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：431[M+1]
第四步
((3aR，6aS)-5-(5-氯-2-((1-(1-甲基哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)(环丙基)甲酮(16)
向16d(60mg，粗品)和三乙胺(51mg，0.5mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入环丙基甲酰氯(11mg，0.1mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液。将混合物在室温下搅拌30分钟，减压除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物16(22.3mg，固体，两步45％)。
MS m/z(ESI)：499[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.92(s，1H)，7.85(s，1H)，7.56(s，1H)，4.19-4.11(m，1H)，4.19-4.11(dd，J＝18.7，11.6Hz，2H)，3.89-3.83(m，3H)，3.73(d，J＝10.8Hz，1H)，3.62(d，J＝12.4Hz，1H)，3.44(d，J＝12.4Hz，1H)，3.03(d，J＝12.5Hz，2H)，2.37(s，3H)，2.29(t，J＝11.7Hz，2H)，2.16(d，J＝11.6Hz，2H)，2.07(dd，J＝16.7，8.0Hz，2H)，1.84-1.76(m，1H)，1.24(s，3H)，1.21(s，3H)，0.94-0.89(m，2H)，0.88-0.82(m，2H).
实施例17.((3aR，6aS)-5-(5-氯-2-((1-((R)-2-羟基丙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)(环丙基)甲酮
Figure BDA0003440425030000661
第一步
(R)-1-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)丙烷-2-醇(17a)
将4-硝基-1H-吡唑16a(2.26g，20mmol)和(R)-2-甲基环氧乙烷(3.48g，60mmol)溶于DMF(15mL)后，加入碳酸铯(13g，40mmol)。将混合物在100℃下于密封管中搅拌4小时。冷却到室温后，倒入水(100mL)中，然后用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。有机相合后用水(3×100mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥。过滤后滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100/0至7/3)纯化，得到的粗品用prep-HPLC纯化，得到目标产物17a(1.2g，35％)。
MS m/z(ESI)：172[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.77(s，1H)，8.26(s，1H)，5.03(d，J＝4.8Hz，1H)，4.17-4.09(m，1H)，4.06-3.97(m，2H)，1.08(d，J＝6.0Hz，3H).
第二步
(R)-1-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)丙烷-2-醇(17b)
将17a(1.2g，7mmol)溶于甲醇(20mL)中，加入10％钯碳(120mg)。将混合物在室温下于氢气气氛下搅拌16小时后过滤。滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100/0至19/1)纯化，得到目标产物17b(848mg，86％)。
MS m/z(ESI)：142[M+1]
第三步
(R)-1-(4-((5-氯-4-((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吡唑-1-基)丙烷-2-醇(17c)
向10-mL微波小瓶中加入12a(39mg，0.1mmol)、17b(15mg，0.1mmol)、对甲苯磺酸(38mg，0.2mmol)和异丙醇(2mL)。将混合物在微波反应器中于100℃下搅拌1小时，冷却到室温后浓缩至干，得到目标产物17c(60mg)。该产品未经进一步纯化，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：392[M+1]
第四步
((3aR，6aS)-5-(5-氯-2-((1-((R)-2-羟基丙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)(环丙基)甲酮(17)
将17c(60mg，粗品)和三乙胺(51mg，0.5mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，然后加入环丙基甲酰氯(11mg，0.1mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液。室温下搅拌30分钟后，减压除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物17(20.1mg，固体，两步44％)。
MS m/z(ESI)：460[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.92(s，1H)，7.84(s，1H)，7.54(s，1H)，4.13-3.97(m，5H)，3.91-3.83(m，3H)，3.72(d，J＝10.8Hz，1H)，3.61(dd，J＝12.4，3.7Hz，1H)，3.44(dd，J＝12.4，1.7Hz，1H)，1.83-1.77(m，1H)，1.23(s，3H)，1.20(s，3H)，1.17(d，J＝6.1Hz，3H)，0.94-0.89(m，2H)，0.88-0.82(m，2H).
实施例18参照实施例17的操作方法合成，但在第一步中用(S)-2-甲基环氧乙烷代替(R)-2-甲基环氧乙烷，如下所示：
Figure BDA0003440425030000681
实施例20. 3-((3aR，6aS)-5-(5-氯-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-3-氧代丙腈
Figure BDA0003440425030000682
将12c(35mg，0.1mmol)、2-氰基乙酸(9mg，0.1mmol)、二异丙基乙胺(39mg，0.3mmol)、二氯甲烷(5mL)和HATU(46mg，0.12mmol)混合。室温下搅拌30分钟后，用水(20mL)淬灭，然后用二氯甲烷(2×100mL)萃取。有机相合并后用无水硫酸钠干燥，过滤后滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物20(10.5mg，固体，25％)。
MS m/z(ESI)：415[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.84(s，1H)，7.77(s，1H)，7.55(s，1H)，3.99(t，J＝10.8Hz，2H)，3.86(s，3H)，3.84(d，J＝11.8Hz，2H)，3.66(dd，J＝18.8，11.6Hz，2H)，3.50(dd，J＝19.0，11.6Hz，2H)，1.21(s，3H)，1.20(s，3H).
实施例21、22、35、36、39、42、43、44、45、46、47、48和52均参照实施例20的操作方法合成，但在第一步中用不同的化合物代替2-氰基乙酸，如下所示：
Figure BDA0003440425030000691
Figure BDA0003440425030000701
Figure BDA0003440425030000711
Figure BDA0003440425030000721
Figure BDA0003440425030000731
实施例25. 5-氯-4-((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基-5-(嘧啶-4-基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺
Figure BDA0003440425030000732
将5-氯-4-((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐12c(100mg，0.26mmol)、4-氯嘧啶盐酸盐(59mg，0.39mmol)、二异丙基乙胺(336mg，2.6mmol)和乙腈(4mL)在室温下混合，然后加热到80℃并搅拌8小时。冷却到室温后，减压除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物5-氯-4-((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基-5-(嘧啶-4-基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺25(65.1mg，固体)，产率：58％。
MS m/z(ESI)：426[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.06(s，1H)，8.46(s，1H)，8.14(d，J＝6.1，1H)，7.89(s，1H)，7.69(s，1H)，7.43(s，1H)，6.46(dd，J＝6.1，1.0，1H)，3.88(s，2H)，3.76(s，3H)，3.74(s，2H)，3.67(s，2H)，3.52(s，2H)，1.15(s，6H).
实施例26. 3-((3aR，6aS)-5-(5-氯-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-3-氧代丙腈
Figure BDA0003440425030000741
第一步
(3aR，6aS)-5-(2，5-二氯嘧啶-4-基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(26b)
向2，4，5-三氯嘧啶(182mg，1mmol)的乙腈(10mL)溶液中加入26a(212mg，1mmol)和碳酸钾(207mg，1.5mmol)。将混合物在80℃下搅拌3小时，减压除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100/0至3/1)纯化，得到目标产物26b(300mg，固体，84％)。
MS m/z(ESI)：359[M+1]
第二步
5-氯-4-((3aR，6aS)-六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(26c)
将26b(300mg，0.84mmol)和1-甲基-1H-吡唑-4-胺盐酸盐(81.3mg，0.84mmol)在异丙醇(50mL)中混合，然后加入对甲基苯磺酸(318mg，1.68mmol)。将混合物用微波反应器加热至100℃并搅拌2小时，冷却到室温后过滤，所得固体即为目标产物26c(200mg，固体，75％)。
MS m/z(ESI)：320[M+1]
第三步
3-((3aR，6aS)-5-(5-氯-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-3-氧代丙腈(26)
将26c(100mg，0.313mmol)、2-氰基乙酸(26.6mg，0.313mmol)、三乙胺(47.5mg，0.47mmol)和DMF(5mL)混合，然后加入HATU(178.6mg，0.47mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，减压除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物26(61.9mg，固体，50％)。
MS m/z(ESI)：387[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.85(s，1H)，7.78(s，1H)，7.54(s，1H)，4.19-4.11(m，2H)，3.93-3.72(m，9H)，3.52-3.45(m，2H)，3.18-3.12(m，1H)，3.09-3.03(m，1H).
实施例27参照实施例26的操作方法合成，但在第三步中用(S)-2，2-二氟环丙烷-1-羧酸代替2-氰基乙酸，如下所示：
Figure BDA0003440425030000751
Figure BDA0003440425030000761
实施例28. 3-((3aR，6aS)-5-(2-((1H-吡唑-4-基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-3-氧代丙腈
Figure BDA0003440425030000762
第一步
5-氯-4-((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-N-(1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(28a)
向30-mL微波小瓶中12a(161mg，0.42mmol)、1H-吡唑-4-胺(35mg，0.42mmol)、对甲苯磺酸(160mg，0.84mmol)和异丙醇(10mL)。将混合物在微波反应器中加热到100℃并搅拌1小时，冷却到室温后，减压除去溶剂，得到目标产物28a(260mg)。该产品未经纯化直接用于下一步骤。
MS m/z(ESI)：334[M+1]
第二步
3-((3aR，6aS)-5-(2-((1H-吡唑-4-基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-3-氧代丙腈(28)
将28a(130mg，粗品，0.21mmol)溶于DMF(5mL)中，然后依次加入2-氰基乙酸(18mg，0.21mmol)、二异丙基乙胺(82mg，0.63mmol)和HATU(80mg，0.21mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时后，直接用prep-HPLC纯化，得到目标产物28(7.6mg，固体，9％)。
MS m/z(ESI)：401[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.85(s，2H)，7.65(s，1H)，4.02(d，J＝11.8Hz，1H)，3.98(d，J＝11.8Hz，1H)，3.85(dd，J＝11.6，2.8Hz，2H)，3.66(t，J＝12.1Hz，2H)，3.53(d，J＝10.7Hz，1H)，3.47(d，J＝12.5Hz，1H)，1.21(s，3H)，1.20(s，3H).
实施例29参照实施例28的操作方法合成，但在第二步中用(S)-2，2-二氟环丙烷-1-羧酸代替2-氰基乙酸，如下所示：
Figure BDA0003440425030000771
实施例31. 3-((3aR，6aS)-5-(5-氯-2-((1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-3-氧代丙腈
Figure BDA0003440425030000781
第一步
2-(4-((5-氯-4-((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吡唑-1-基)乙烷-1-醇(31a)
向30-mL微波小瓶中加入12a(330mg，0.852mmol)、2-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)乙-1-醇(108mg，0.852mmol)、对甲苯磺酸(324mg，1.704mmol)和异丙醇(10mL)。将混合物在微波反应器中加热至100℃并搅拌1小时，冷却到室温后，减压除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物31a(210mg，65％)。
MS m/z(ESI)：378[M+1]
第二步
3-((3aR，6aS)-5-(5-氯-2-((1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-3-氧代丙腈(31)
向31a(100mg，0.26mmol)、二氯甲烷(10mL)、2-氰基乙酸(23mg，0.26mmol)和二异丙基乙胺(101mg，0.87mmol)的混合物中加入HATU(101mg，0.26mmol)。室温下搅拌1小时后，在减压条件下除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物31(18.6mg，固体，16％)。
MS m/z(ESI)：445[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.96(s，1H)，7.84(s，1H)，7.53(s，1H)，4.20(t，J＝5.2Hz，2H)，4.02(d，J＝5.8Hz，1H)，3.99(d，J＝5.7Hz，1H)，3.92-3.81(m，4H)，3.68(d，J＝10.7Hz，1H)，3.63(d，J＝12.5Hz，1H)，3.52(d，J＝10.7Hz，1H)，3.48(d，J＝12.5Hz，1H)，1.21(s，3H)，1.20(s，3H).
实施例33. 2-(4-((5-氯-4-((3aR，6aS)-5-(环丙羰基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吡唑-1-基)乙腈
Figure BDA0003440425030000791
第一步
2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)乙腈(33a)
将4-硝基-1H-吡唑16a(1.13g，10mmol)溶于DMF(12mL)中，加入碳酸铯(9.75g，30mmol)。冷却至0℃后，逐滴加入2-溴乙腈(2.4g，20mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，用水(150mL)稀释，然后用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。将合并的有机相萃取液用水(3×100mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥。过滤后滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100/0至1/1)纯化，得到目标产物33a(960mg，63％)。
MS m/z(ESI)：153[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.36(s，1H)，8.16(s，1H)，5.15(s，2H).
第二步
2-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)乙腈(33b)
将33a(940mg，6.18mmol)溶于乙醇(40mL)中，加入水(10mL)和固体氯化铵(6.6g，123.6mmol)。将混合物加热至60℃，分批加入锌粉(4g，61.8mmol)。将混合物在60℃下搅拌10分钟，冷却至室温，过滤。将滤液用水(80mL)稀释，用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。将合并的萃取物用饱和食盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥后过滤。滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100/0至19/1)纯化，得到目标产物33b(130mg，17％)。
MS m/z(ESI)：123[M+1]
第三步
2-(4-((5-氯-4-((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吡唑-1-基)乙腈(33c)
向10-mL微波小瓶中加入12a(155mg，0.4mmol)、33b(49mg，0.4mmol)、对甲苯磺酸(16mg，0.08mmol)和异丙醇(4mL)。将混合物在微波反应器中于100℃下搅拌1小时。冷却到室温后，减压浓缩至干，得到目标产物33c。该粗品不经纯化直接用于下一步骤。
MS m/z(ESI)：373[M+1]
第四步
2-(4-((5-氯-4-((3aR，6aS)-5-(环丙羰基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吡唑-1-基)乙腈(33)
向33c(粗品，0.4mmol)和二氯甲烷(20mL)的混合物中依次加入三乙胺(121mg，1.2mmol)和环丙基甲酰氯(42mg，0.4mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液。室温下搅拌1小时后，减压除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物33(81mg，固体，两步46％)。
MS m/z(ESI)：441[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.04(s，1H)，7.87(s，1H)，7.63(s，1H)，5.29(s，2H)，4.06-3.96(m，2H)，3.95-3.82(m，3H)，3.72(d，J＝10.8Hz，1H)，3.62(d，J＝12.4Hz，1H)，3.45(d，J＝12.4Hz，1H)，1.83-1.77(m，1H)，1.24(s，3H)，1.20(s，3H)，0.94-0.88(m，2H)，0.88-0.82(m，2H).
实施例38.吖丁啶-3-基((3aR，6aS)-5-(5-氯-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)甲酮
Figure BDA0003440425030000801
第一步
3-((3aR，6aS)-5-(5-氯-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基八氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2-羰基)吖丁啶-1-羧酸叔丁酯(38a)
向12c(35mg，0.1mmol)、二氯甲烷(5mL)、1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-羧酸(21mg，0.1mmol)和二异丙基乙胺(39mg，0.3mmol)的混合物中加入HATU(38mg，0.1mmol)。室温下搅拌30分钟后，用饱和氯化铵溶液(20mL)稀释，然后用二氯甲烷(3×20mL)萃取。将合并的萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤后滤液在减压条件下除去溶剂，得到目标产物38a。该粗品不经纯化直接用于下一步骤。
MS m/z(ESI)：531[M+1]
第二步
吖丁啶-3-基((3aR，6aS)-5-(5-氯-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)甲酮(38)
向38a(粗品，0.1mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入三氟乙酸(2mL)。室温下搅拌30分钟后，减压除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物38(19.9mg，固体，两步46％)。
MS m/z(ESI)：431[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.85(s，1H)，7.76(s，1H)，7.55(s，1H)，4.05-3.93(m，4H)，3.90-3.78(m，8H)，3.63(d，J＝12.5Hz，1H)，3.57(d，J＝10.8Hz，1H)，3.46(d，J＝12.5Hz，1H)，3.41(d，J＝10.8Hz，1H)，1.19(s，6H).
实施例40. 5-氯-4-((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基-5-(2，2，2-三氟乙基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺
Figure BDA0003440425030000811
将12c(50mg，0.14mmol)溶于1，4-二氧六环(4mL)中，然后依次加入二异丙基乙胺(54mg，0.42mmol)和2，2，2-三氟乙基三氟甲磺酸酯(65mg，0.28mmol)。将混合物于100℃下在密封管中搅拌2小时。冷却到室温后，减压除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物40(7.3mg，固体，12％)。
MS m/z(ESI)：430[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.84(s，1H)，7.77(s，1H)，7.56(s，1H)，4.06(d，J＝11.5Hz，2H)，3.86(s，3H)，3.69(d，J＝11.5Hz，2H)，3.22(q，J＝9.8Hz，2H)，3.04(d，J＝9.3Hz，2H)，2.79(d，J＝9.3Hz，2H)，1.16(s，6H).
实施例49. 2-((3aR，6aS)-5-(5-氯-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)乙烷-1-醇
Figure BDA0003440425030000821
将12c(35mg，0.1mmol)、乙腈(5mL)、2-溴乙醇(15mg，0.12mmol)和碳酸钾(42mg，0.3mmol)混合，加热至回流并搅拌20小时。冷却到室温后，减压除去溶剂，残余物溶于二甲基亚砜(5mL)中，加入2-溴乙醇(0.2mL)和碳酸铯(98mg，0.3mmol)，加热到100℃并搅拌2小时。冷却到室温后过滤，滤液用prep-HPLC纯化，得到目标产物49(16.7mg，固体，43％)。
MS m/z(ESI)：392[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.84(s，1H)，7.77(s，1H)，7.56(s，1H)，4.12(d，J＝11.5Hz，2H)，3.87(s，3H)，3.65(dd，J＝8.7，5.1Hz，4H)，2.93(d，J＝9.6Hz，2H)，2.70-2.61(m，4H)，1.17(s，6H).
实施例50. 5-氯-4-((3aR，6aS)-5-(异恶唑-5-基甲基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺
Figure BDA0003440425030000822
第一步
异恶唑-5-基甲基甲磺酸酯(50b)
将异恶唑-5-基甲醇50a(76mg，0.77mmol)溶于二氯甲烷(10mL)，冷却至0℃后依次加入三乙胺(390mg，3.85mmol)和甲基磺酰氯(93mg，0.81mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，将得到的溶液其直接用于下一步骤。
MS m/z(ESI)：178[M+1]
第二步
5-氯-4-((3aR，6aS)-5-(异恶唑-5-基甲基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(50)
将12c(70mg，0.2mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，然后将所得溶液滴加到第一步的反应混合物中。室温下搅拌2小时，减压除去溶剂。残余物溶于二甲基亚砜(2mL)，然后加入碳酸铯(195mg，0.6mmol)。将混合物用油浴加热，但当油温达到50℃时，将油浴移开并将混合物冷却至室温，过滤后滤液用prep-HPLC纯化，得到目标产物50(7.7mg，固体，9％)。
MS m/z(ESI)：429[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.31(d，J＝1.4Hz，1H)，7.84(s，1H)，7.76(s，1H)，7.56(s，1H)，6.32(d，J＝1.1Hz，1H)，4.08(d，J＝11.5Hz，2H)，3.87(s，2H)，3.87(s，3H)，3.62(d，J＝11.4Hz，2H)，2.94(d，J＝9.4Hz，2H)，2.66(d，J＝9.4Hz，2H)，1.15(s，6H).
实施例51. 5-((5-氯-4-((3aR，6aS)-5-(环丙羰基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-基)氨基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003440425030000841
第一步
(3aR，6aS)-5-苯甲基-3a，6a-二甲基四氢-1H-呋喃并[3，4-c]吡咯-1，3(3aH)-二酮(51b)
将3，4-二甲基呋喃-2，5-二酮51a(6g，47.6mmol)溶于二氯甲烷(120mL)中，加入N-苄基-1-甲氧基-N-((三甲基甲硅烷基)甲基)甲胺(14.8g，61.9mmol)。将混合物冷却至0℃，在氮气保护下滴加三氟乙酸(543mg，4.76mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液。将所得混合物在室温下搅拌3小时后，减压除去溶剂，得到目标产物51b(17g)。该产品未经进一步纯化，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：260[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.45-7.18(m，5H)，3.53(s，2H)，3.46(d，J＝10.2Hz，2H)，2.18(d，J＝10.1Hz，2H)，1.28(s，6H).
第二步
(3aR，6aS)-5-苯甲基-3a，6a-二甲基四氢吡咯并[3，4-c]吡咯-1，3(2H，3aH)-二酮(51c)
将51b(17g，粗品，47.6mmol)溶于四氢呋喃(60mL)中，然后加入氨水(60mL)。将混合物在100℃下于密封管中搅拌4小时。冷却到室温后，减压除去溶剂，残余物用水(150mL)稀释，然后用二氯甲烷(3×150mL)萃取。将合并的萃取物经无水硫酸钠干燥，过滤后滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100/0至1/4)纯化，得到目标产物51c(7g，两步57％)。
MS m/z(ESI)：259[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.24(s，1H)，7.35-7.12(m，5H)，3.48(s，2H)，3.12(d，J＝9.7Hz，2H)，2.03(d，J＝9.6Hz，2H)，1.09(s，6H).
第三步
(3aR，6aS)-2-苯甲基-3a，6a-二甲基八氢吡咯并[3，4-c]吡咯(51d)
将51c(2.67g，10.34mmol)溶解在四氢呋喃(30mL)中，然后分批加入氢化铝锂(1.18g，31mmol)。将混合物加热至回流并搅拌2小时，冷却至0℃后，依次加入水(8mL)，20％氢氧化钠水溶液(16mL)和水(8mL)。搅拌10分钟后过滤，滤液在减压条件下除去溶剂，得到目标产物(3aR，6aS)-2-苯甲基-3a，6a-二甲基八氢吡咯并[3，4-c]吡咯51d(2.44g，100％)。
MS m/z(ESI)：231[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.34-7.17(m，5H)，3.45(s，2H)，2.61(d，J＝8.8Hz，2H)，2.46(d，J＝8.7Hz，2H)，2.24(dd，J＝10.6，8.9Hz，4H)，0.97(s，6H).
第四步
((3aR，6aS)-5-苯甲基-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)(环丙基)甲酮(51e)
将51d(2.44g，10.34mm0l)溶于二氯甲烷(40mL)，然后依次加入三乙胺(3.14g，31mmol)和环丙基甲酰氯(1.08g，10.34mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，减压除去溶剂，通过残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100/0至1/4)纯化，得到目标产物51e(1.59g，52％)。
MS m/z(ESI)：299[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.31-7.27(m，4H)，7.25-7.20(m，1H)，3.81(d，J＝10.4Hz，1H)，3.75(d，J＝12.1Hz，1H)，3.59(q，J＝13.3Hz，2H)，3.46(d，J＝10.4Hz，1H)，3.34(d，J＝12.1Hz，1H)，2.81(d，J＝9.3Hz，1H)，2.77(d，J＝9.2Hz，1H)，2.37(d，J＝9.1Hz，2H)，1.59(tt，J＝8.0，4.7Hz，1H)，1.09(s，3H)，1.05(s，3H)，1.03-0.95(m，2H)，0.79-0.68(m，2H).
第五步
环丙基((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)甲酮(51f)
将51e(1.59g，5.38mmol)溶于乙醇(30mL)，然后加入10％钯碳(320mg)。将混合物在室温下于氢气气氛下搅拌18小时，过滤后滤液在减压条件下除去溶剂，得到目标产物51f(1.11g，100％)。
MS m/z(ESI)：209[M+1]
第六步
环丙基((3aR，6aS)-5-(2，5-二氯嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)甲酮(51g)
将51f(1.11g，5.33mmol)溶于乙腈(20mL)，然后加入二异丙基乙胺(2.07g，16mmol)和2，4，5-三氯嘧啶(977mg，5.33mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，减压除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100/0至3/7)纯化，得到目标产物51g(1.59g，86％)。
MS m/z(ESI)：355[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.02(s，1H)，3.96(s，2H)，3.87-3.72(m，3H)，3.62(d，J＝7.0Hz，2H)，3.48(d，J＝12.3Hz，1H)，1.60-1.51(m，1H)，1.19(s，3H)，1.16(s，3H)，1.03-1.00(m，2H)，0.82-0.75(m，2H).
第七步
5-((5-氯-4-((3aR，6aS)-5-(环丙羰基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-2-甲酸甲酯(51h)
将51g(355mg，4.74mmol)、4-氨基吡啶甲酸甲酯(167mg，1.1mmol)、1，4-二氧六环(15mL)、碳酸铯(975mg，3mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(92mg，0.1mmol)和4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽(116mg，0.2mmol)在氮气气氛下混合。将混合物在微波反应器中加热到100℃并搅拌1小时。冷却到室温后过滤，滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100/0至9/1)纯化，得到目标产物51h(88mg，19％)。
MS m/z(ESI)：471[M+1]
第八步
5-((5-氯-4-((3aR，6aS)-5-(环丙羰基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-基)氨基)邻吡啶甲酸(51i)
向51h(88mg，0.19mmol)、四氢呋喃(2mL)和甲醇(2mL)的混合物中加入1N氢氧化钠溶液(4mL)。室温下搅拌2小时后，减压除去溶剂，用水稀释(10mL)，然后用乙酸乙酯(20mL)洗涤。将水层用1N盐酸调节至pH＝3，然后用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤后滤液在减压条件下除去溶剂，得到目标产物51i(30mg，35％)。
MS m/z(ESI)：457[M+1]
第九步
5-((5-氯-4-((3aR，6aS)-5-(环丙羰基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-基)氨基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺(51)
将51i(30mg，0.066mmol)溶解在二氯甲烷(10mL)中，然后依次加入二异丙基乙胺(74mg，0.57mmol)、HATU(72mg，0.19mmol)和甲胺的四氢呋喃溶液(2M，0.05mL，1mmol)。将所得混合物在室温下搅拌1小时，减压除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物51(8.2mg，固体，27％)。
MS m/z(ESI)：470[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.77(d，J＝2.3Hz，1H)，8.17(dd，J＝8.6，2.6Hz，1H)，7.88(d，J＝10.1Hz，2H)，3.91(t，J＝12.2Hz，2H)，3.82-3.73(m，3H)，3.62(d，J＝10.8Hz，1H)，3.50(d，J＝12.5Hz，1H)，3.34(d，J＝12.4Hz，1H)，2.85(s，3H)，1.72-1.66(m，1H)，1.13(s，3H)，1.09(s，3H)，0.82-0.77(m，2H)，0.77-0.71(m，2H).
实施例53.((3aR，6aS)-5-(5-氯-2-((6-(吗啉-4-羰基)吡啶-3-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)(环丙基)甲酮
Figure BDA0003440425030000881
第一步
吗啉代(5-硝基吡啶-2-基)甲酮(53b)
将5-硝基吡啶-2-甲酸53a(505mg，3mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，然后依次加入吗啉(262mg，3mmol)、二异丙基乙胺(1.16g，9mmol)和HATU(1.14g，3mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，减压除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(二氯甲烷/乙酸乙酯＝100/0至1/4)纯化，得到目标产物53b(880mg，产品包含二异丙基乙胺和四甲基脲)。
MS m/z(ESI)：238[M+1]
第二步
(5-氨基吡啶-2-基)(吗啉代)甲酮(53c)
将(5-硝基吡啶-2-基)甲酮53b(880mg，3mmol)溶解在甲醇(20mL)中，加入10％钯碳(200mg)。将混合物在室温下在氢气气氛下搅拌2小时后过滤。滤液在减压条件下除去溶剂，得到目标产物(5-氨基吡啶-2-基)(吗啉代)甲酮53c(740mg，产品包含二异丙基乙胺和四甲基脲)。
MS m/z(ESI)：208[M+1]
第三步
((3aR，6aS)-5-(5-氯-2-((6-(吗啉-4-羰基)吡啶-3-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)(环丙基)甲酮(53)
将51g(71mg，0.2mmol)和53c(42mg，0.2mmol)溶于1，4-二氧六环(2mL)中，然后依次加入乙醇钠(30mg，0.44mmol)和RuPhos-Pd-G2(8mg，0.01mmol)。将混合物在氮气气氛下用微波反应器加热到100℃并搅拌1小时。冷却到室温后过滤，滤液在减压条件下除去溶剂，残余物依次用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100/0至9/1)和prep-HPLC纯化，得到目标产物53(11.4mg，固体，11％)。
MS m/z(ESI)：526[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.92(d，J＝2.4Hz，1H)，8.29(dd，J＝8.6，2.6Hz，1H)，7.99(s，1H)，7.62(d，J＝8.6Hz，1H)，4.02(t，J＝11.0Hz，2H)，3.95-3.58(m，13H)，3.46(d，J＝12.4Hz，1H)，1.81(ddd，J＝12.8，7.9，4.7Hz，1H)，1.24(s，3H)，1.21(s，3H)，0.92(dt，J＝5.4，3.8Hz，2H)，0.89-0.81(m，2H).
实施例59参照实施例53的操作方法合成，但在第一步中用1-甲基哌嗪代替吗啉，如下所示：
Figure BDA0003440425030000891
实施例54. 5-氯-4-((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基-5-(吡啶-2-基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺
Figure BDA0003440425030000901
将12c(100mg，0.26mmol)、2-溴吡啶(62mg，0.39mmol)，DBU(119mg，0.78mmol)和N-甲基吡咯烷酮(4mL)混合，然后加热到140℃并搅拌16小时。冷却到室温后，加入水(4mL)，然后用乙酸乙酯(3×5mL)萃取。有机相合并后，用水(10mL)洗涤，然后减压除去溶剂。残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物54(36.4mg，固体，33％)。
MS m/z(ESI)：425[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.05(s，1H)，8.04(d，J＝3.7Hz，1H)，7.89(s，1H)，7.69(s，1H)，7.47(s，1H)，7.43(s，1H)，6.54(d，J＝1.6Hz，1H)，6.40(d，J＝8.4Hz，1H)，3.89(d，J＝11.4Hz，2H)，3.75(s，3H)，3.75-3.71(m，2H)，3.56(d，J＝10.9Hz，2H)，3.38(d，J＝10.8Hz，2H)，1.15(s，6H).
实施例55. 4-((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基-5-(甲磺酰)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-5-甲基-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺
Figure BDA0003440425030000902
第一步
(3aR，6aS)-2-苯甲基-5-(2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基八氢吡咯并[3，4-c]吡咯(55a)
向51d(2.02g，8.8mmol)的乙腈(20mL)溶液中加入2，4-二氯-5-甲基嘧啶(1.63g，10mmol)和二异丙基乙胺(3.88g，30mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，减压除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100/0至45/55)纯化，得到目标产物55a(1.45g，46％)。
MS m/z(ESI)：357[M+1]
第二步
4-((3aR，6aS)-5-苯甲基-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-5-甲基-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(55b)
将55a(1.45g，4.1mmol)和1-甲基-1H-吡唑-4-胺盐酸盐(4.1g，1mmol)悬浮在异丙醇(40mL)中，加入对甲基苯磺酸(78mg，0.41mmol)。将混合物在100℃下搅拌18小时，冷却至室温，加入甲醇(20mL)，然后加入三乙胺(0.5mL)。搅拌5分钟后，减压除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝19/1)纯化，得到目标产物55b(540mg，32％)。
MS m/z(ESI)：418[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.68(s，2H)，7.51(s，1H)，7.30(dd，J＝6.6，3.5Hz，4H)，7.25-7.20(m，1H)，6.86(s，1H)，3.85(d，J＝10.8Hz，2H)，3.85(s，3H)，3.60(s，2H)，3.48(d，J＝10.8Hz，2H)，2.80(d，J＝9.3Hz，2H)，2.41(d，J＝9.3Hz，2H)，2.20(s，3H)，1.10(s，6H).
第三步
4-((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-5-甲基-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(55c)
将55b(540mg，1.29mmol)溶解在甲醇(30mL)中，加入10％钯碳(300mg)。在氢气气氛下加热至36℃并搅拌16小时后过滤。滤液在减压条件下除去溶剂，得到目标产物55c(340mg，81％)。
MS m/z(ESI)：328[M+1]
第四步
4-((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基-5-(甲磺酰)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-5-甲基-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(55)
将55c(33mg，0.1mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，然后依次加入三乙胺(30mg，0.3mmol)和甲基磺酰氯(12mg，0.1mmol)的二氯甲烷溶液(1mL)。将混合物在室温下搅拌1小时，减压除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物55(18.7mg，固体，46％)。
MS m/z(ESI)：406[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.64(s，1H)，7.50(s，1H)，7.44(s，1H)，3.82(d，J＝11.2Hz，2H)，3.74(s，3H)，3.60(d，J＝11.2Hz，2H)，3.40(d，J＝10.1Hz，2H)，3.23(d，J＝10.1Hz，2H)，2.83(s，3H)，2.15(s，3H)，1.09(s，6H).
实施例56.((S)-2，2-二氟环丙基)((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基-5-(5-甲基-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)甲酮
Figure BDA0003440425030000921
将54c(33mg，0.1mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，然后依次加入(S)-2，2-二氟环丙烷-1-羧酸(13mg，0.1mmol)、二异丙基乙胺(39mg，0.3mmol)和HATU(38mg，0.1mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，减压除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物56(21.3mg，固体，49％)。
MS m/z(ESI)：432[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.76(d，J＝3.1Hz，1H)，7.62(s，1H)，7.54(d，J＝11.0Hz，1H)，3.98-3.88(m，2H)，3.86(d，J＝2.7Hz，3H)，3.82-3.71(m，3H)，3.68-3.56(m，2H)，3.48(dd，J＝12.6，2.7Hz，1H)，2.89-2.79(m，1H)，2.28(d，J＝5.7Hz，3H)，2.08-2.00(m，1H)，1.85-1.73(m，1H)，1.24(d，J＝3.4Hz，2H)，1.21(d，J＝3.9Hz，3H).
实施例57、58和60均参照实施例56的操作方法合成，但在第一步中用不同的化合物代替(S)-2，2-二氟环丙烷-1-羧酸，如下所示：
Figure BDA0003440425030000931
Figure BDA0003440425030000941
实施例61.顺-5-氯-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(3a-甲基-5-(甲磺酰)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-胺
Figure BDA0003440425030000942
第一步
顺-5-苯甲基-3a-甲基四氢-1H-呋喃并[3，4-c]吡咯-1，3(3aH)-二酮(61b)
向3-甲基呋喃-2，5-二酮61b(5.33g，47.6mmol)和N-苄基-1-甲氧基-N-((三甲基甲硅烷基)甲基)甲胺(14.8g，61.9mmol)的二氯甲烷溶液(170mL)中加入三氟乙酸(543mg，4.76mmol)。将混合物在室温下搅拌3小时，减压除去溶剂，得到目标产物61b(11.62g)。该产品未经进一步纯化，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：246[M+1]
第二步
顺-5-苯甲基-3a-甲基四氢吡咯并[3，4-c]吡咯-1，3(2H，3aH)-二酮(61c)
向61b(11.66g，47.6mmol)的四氢呋喃(60mL)溶液中加入氨水(60mL)。将混合物在密封管中加热到100℃并搅拌5小时。冷却到室温后，减压除去溶剂，残余物溶解在二氯甲烷(200mL)中。将有机相用水(20mL)洗涤后，减压除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100/1至1/1)纯化，得到目标产物61c(8g，68％)。
MS m/z(ESI)：245[M+1]
第三步
顺-2-苯甲基-3a-甲基八氢吡咯并[3，4-c]吡咯(61d)
向61c(8g，32.8mmol)的四氢呋喃(100mL)溶液中加入氢化铝锂(3.73g，98.36mmol)。将混合物加热到70℃并搅拌3小时，冷却到0℃，然后依次加入水(10mL)、20％NaOH溶液(20mL)和水(10mL)。搅拌10分钟后过滤，滤液在减压条件下除去溶剂，得到目标产物61d(8g)。该粗品未经进一步纯化，直接用于下一步骤。
MS m/z(ESI)：217[M+1]
第四步
顺-5-苯甲基-3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(61e)
向61d(8g，粗品)和三乙胺(7.48g，74.07mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中加入二碳酸二叔丁酯(8.07g，37.03mmol)。将混合物于室温下搅拌3小时，减压除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100/1至7/3)纯化，得到目标产物61e(10g，两步96％)。
MS m/z(ESI)：317[M+1]
第五步
顺-3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(61f)
向61e(10g，31.64mmol)的甲醇(100mL)溶液中加入10％钯碳(1g)，然后在减压条件下除去氧气并充入氢气。将混合物在室温下搅拌18小时后过滤，减压除去溶剂，得到目标产物61f(7g，97％)。
MS m/z(ESI)：227[M+1]
第六步
顺-5-(2，5-二氯嘧啶-4-基)-3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(61g)
向2，4，5-三氯嘧啶(546mg，3mmol)的乙腈(10mL)溶液中加入61f(678mg，3mmol)和碳酸钾(828mg，6mmol)。将混合物加热到80℃并搅拌3小时。冷却到室温后，减压除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100/0至9/1)纯化，得到目标产物61g(850mg，76％)。
MS m/z(ESI)：373[M+1]
第七步
顺-5-氯-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-胺盐酸盐(61h)
将61g(850mg，2.28mmol)和1-甲基-1H-吡唑-4-胺盐酸盐(221mg，2.28mmol)溶于异丙醇(10mL)，然后加入对甲基苯磺酸(868mg，4.57mmol)。将混合物用微波反应器加热到100℃并搅拌2小时。冷却到室温后过滤，所得固体即为目标产物61h(200mg，75％)。
MS m/z(ESI)：334[M+1]
第八步
顺-5-氯-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(3a-甲基-5-(甲磺酰)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-胺(61)
糊顺-5-氯-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-胺盐酸盐61h(33.3mg，0.1mmol)、三乙胺(20.2mg，0.2mmol)和二氯甲烷(5mL)混合，然后加入甲磺酰氯(11.4mg，0.1mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时后，减压除去溶剂，残余物用反相制备高校液相色谱纯化，得到目标产物顺-5-氯-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(3a-甲基-5-(甲磺酰)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-胺61(15.4mg，固体，37.4％)。
MS m/z(ESI)：412[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.74(s，1H)，7.66(s，1H)，7.43(s，1H)，4.06-4.01(m，1H)，3.88(d，J＝11.5Hz，1H)，3.76-3.64(m，6H)，3.61-3.56(m，1H)，3.35(d，J＝9.9Hz，2H)，2.83(s，3H)，2.56-2.51(m，1H)，1.22(s，3H).
实施例62参照实施例61的操作方法合成，但在第八步中用环丙基甲酰氯代替甲磺酰氯，如下所示：
Figure BDA0003440425030000971
实施例63.顺-3-(5-(5-氯-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-3-氧代丙腈
Figure BDA0003440425030000981
向61h(66.6mg，0.2mmol)、HATU(152mg，0.4mmol)和三乙胺(40.4mg，0.4mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液加入2-氰基乙酸(17mg，0.2mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，减压除去溶剂，残余物用反相制备高校液相色谱纯化，得到目标产物63(12.4mg，固体，16％)。
MS m/z(ESI)：401[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.85(s，1H)，7.78(s，1H)，7.54(s，1H)，4.20-4.15(m，1H)，4.00-3.92(m，1H)，3.88-3.79(m，6H)，3.66-3.61(m，1H)，3.52-3.45(m，2H)，2.71-2.62(m，1H)，1.32(d，J＝4.0Hz，3H).
实施例64、65和68均参照实施例63的操作方法合成，但在第一步中用不同的化合物代替2-氰基乙酸，如下所示：
Figure BDA0003440425030000982
Figure BDA0003440425030000991
实施例66. 5-氯-4-((3aR，6aS)-5-(异恶唑-5-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺
Figure BDA0003440425030000992
第一步
1-((3aR，6aS)-5-(5-氯-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)丙-2-炔-1-酮(66a)
将12c(139mg，0.4mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，然后依次加入丙炔酸(28mg，0.4mmol)、二异丙基乙胺(155mg，1.2mmol)和HATU(152mg，0.4mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，减压除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100/0至19/1)纯化，得到目标产物66a(90mg，56％)。
MS m/z(ESI)：400[M+1]
第二步
5-氯-4-((3aR，6aS)-5-(异恶唑-5-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(66)
将66a(90mg，0.225mmol)溶于四氢呋喃(2mL)中，然后依次加入水(2mL)、氯化铵(60mg，1.125mmol)和叠氮钠(73mg，1.125mmol)。将混合物在室温下搅拌18小时，然后加热至70℃并继续搅拌2小时。冷却到室温后，用水(20mL)稀释，然后用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将合并的萃取物用无水硫酸钠干燥，过滤后滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物66(12.1mg，固体，13％)。
MS m/z(ESI)：415[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.06(d，J＝2.1Hz，1H)，7.85(s，1H)，7.76(s，1H)，7.54(s，1H)，5.00(d，J＝2.1Hz，1H)，4.01(d，J＝11.6Hz，2H)，3.86(d，J＝11.5Hz，2H)，3.85(s，3H)，3.62(d，J＝10.3Hz，2H)，3.47(d，J＝10.3Hz，2H)，1.24(s，6H).
实施例69.顺-4-(5-(异恶唑-5-基甲基)-3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺
Figure BDA0003440425030001001
第一步
顺-5-(2-氯嘧啶-4-基)-3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(69a)
向2，4-二氯嘧啶(444mg，3mmol)的乙腈(10mL)溶液中加入61f(678mg，3mmol)和碳酸钾(621mg，4.5mmol)。将混合物在80℃下搅拌3小时，冷却到室温后过滤，滤液在减压条件下除去溶剂，得到目标产物69a(700mg，69％)。
MS m/z(ESI)：339[M+1]
第二步
顺-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-胺(69b)
将69a(700mg，2.07mmol)和1-甲基-1H-吡唑-4-胺盐酸盐(200mg，2.07mmol)溶于异丙醇(15mL)中，然后加入对甲基苯磺酸(787mg，4.14mmol)。将混合物在100℃下搅拌18小时。冷却到室温后，减压除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100/1至4/1)纯化，得到目标产物69b(300mg，固体，48％)。
MS m/z(ESI)：300[M+1]
第三步
顺-4-(5-(异恶唑-5-基甲基)-3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(69)
本步骤参照实施例50的第二步操作，但在操作中用顺-5-(2-氯嘧啶-4-基)-3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯69a代替5-氯-4-((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐12c。
MS m/z(ESI)：381[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.33(d，J＝1.8Hz，1H)，7.83-7.80(m，2H)，7.58(s，1H)，6.35(d，J＝1.8Hz，1H)，5.92(d，J＝6.1Hz，1H)，3.87(s，5H)，3.82(s，2H)，3.63(s，1H)，3.52(s，1H)，2.98(dd，J＝9.4，7.8Hz，1H)，2.84(d，J＝9.2Hz，1H)，2.69(dd，J＝9.5，4.6Hz，1H)，2.58(d，J＝9.3Hz，1H)，2.55-2.49(m，1H)，1.32(s，3H).
实施例73和74参照实施例50中第二步的操作方法合成，但在操作中用不同的化合物代替5-氯-4-((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐12c，如下所示：
Figure BDA0003440425030001021
Figure BDA0003440425030001031
实施例70.顺-环丙基(3a-甲基-5-(5-甲基-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)甲酮
Figure BDA0003440425030001032
第一步
顺-5-(2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)-3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(70a)
向2，4-二氯-5-甲基嘧啶(324mg，2mmol)的乙腈(10mL)溶液中加入61f(452mg，2mmol)和碳酸钾(552mg，4mmol)。将混合物在80℃下搅拌3小时，冷却到室温后，减压除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100/0至7/3)纯化，得到目标产物70a(600mg，85％)。
MS m/z(ESI)：353[M+1]
第二步
顺-5-甲基-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-胺(70b)
将70a(600mg，1.7mmol)和1-甲基-1H-吡唑-4-胺盐酸盐(165mg，1.7mmol)溶解在异丙醇(15mL)中，加入对甲苯磺酸(646mg，3.4mmol)。将混合物在100℃下在微波中搅拌1小时。冷却到室温后过滤，滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100/1至67/33)纯化，得到目标产物70b(400mg，75％)。
MS m/z(ESI)：314[M+1]
第三步
顺-环丙基(3a-甲基-5-(5-甲基-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)甲酮(70)
将70b(62.6mg，0.2mmol)溶于二氯甲烷(5mL)，然后依次加入三乙胺(30.3mg，0.3mmol)和环丙烷碳酰氯(20.8mg，0.2mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，减压除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物70(7.3mg，固体，10％)。
MS m/z(ESI)：382[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.65(s，1H)，7.49(s，1H)，7.43(s，1H)，4.05-3.92(m，2H)，3.81-3.71(m，4H)，3.69-3.48(m，4H)，3.36-3.29(m，1H)，2.60-2.47(m，1H)，2.17(s，3H)，1.74-1.66(m，1H)，1.22(d，J＝12.1Hz，3H)，0.84-0.66(m，4H).
实施例71.顺-3-(3a-甲基-5-(5-甲基-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-3-氧代丙腈
Figure BDA0003440425030001041
将70b(62.6mg，0.2mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，然后依次加入2-氰基乙酸(17mg，0.2mmol)、三乙胺(40.4mg，0.4mmol)和HATU(114mg，0.3mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，减压除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物71(9.4mg，固体，9.6％)。
MS m/z(ESI)：382[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.64(s，1H)，7.50(s，1H)，7.43(s，1H)，4.01-3.93(m，1H)，3.83-3.56(m，8H)，3.54-3.49(m，1H)，3.43-3.27(m，3H)，2.59-2.49(m，1H)，2.15(d，J＝12.8Hz，3H)，1.22(dd，J＝10.7，3.4Hz，3H).
实施例72参照实施例71的操作方法合成，但在第一步中用(S)-2，2-二氟环丙烷-1-羧酸代替2-氰基乙酸，如下所示：
Figure BDA0003440425030001051
实施例75. 5-氯-4-((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基-5-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺盐酸盐
Figure BDA0003440425030001052
将12c(35mg，0.1mmol)溶于DMF(4mL)中，加入碳酸铯(98mg，0.3mmol)和3-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑(14mg，0.11mmol)。将混合物在室温下搅拌20小时，过滤后滤液直接用prep-HPLC纯化，得到目标产物71(3.4mg，固体，8％)。
MS m/z(ESI)：442[M+1]
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.94(t，J＝31.0Hz，2H)，7.74-7.56(m，2H)，6.56(d，J＝5.3Hz，1H)，4.45(d，J＝6.5Hz，2H)，4.15-3.85(m，6H)，3.81(d，J＝12.8Hz，2H)，3.71(d，J＝11.8Hz，2H)，3.60(d，J＝11.9Hz，2H)，3.54-3.48(m，2H)，1.28(s，3H)，1.22(s，3H).
实施例76、77、78、79、80、81和82均参照实施例75的操作方法合成，但在第一步中用不同的化合物代替3-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑，如下所示：
Figure BDA0003440425030001061
Figure BDA0003440425030001071
Figure BDA0003440425030001081
实施例83. 5-氯-4-((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基-5-(5-甲基-1，3，4-噁二唑-2-基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺
Figure BDA0003440425030001082
向12c(80mg，0.208mmol)的DMF(3mL)中，然后依次加入5-甲基-1，3，4-恶二唑-2(3H)-酮(21mg，0.208mmol)和二异丙基乙胺(161mg，1.25mmol)。室温下搅拌5分钟后，加入苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐(101mg，0.229mmol)，然后加热到50℃并搅拌12小时。冷却到室温后，加入水(5mL)，然后用乙酸乙酯(3×5mL)萃取。有机相合并后，减压除去溶剂，残余物用反相制备高校液相色谱纯化，得到目标产物83(8.5mg，固体，9.5％)。
MS m/z(ESI)：430[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.06(s，1H)，7.89(s，1H)，7.70(s，1H)，7.44(s，1H)，3.92(d，J＝11.6Hz，2H)，3.77(s，3H)，3.73(d，J＝11.3Hz，2H)，3.57(d，J＝10.4Hz，2H)，3.40(d，J＝10.4Hz，2H)，2.31(s，3H)，1.14(s，6H).
实施例84. 5-氯-4-((3aR，6aS)-5-(环丙基甲基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺
Figure BDA0003440425030001091
第一步
(3aR，6aS)-2-苯甲基-5-(2，5-二氯嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基八氢吡咯并[3，4-c]吡咯(84a)
向51d(400mg，1.74mmol)的乙腈(10mL)溶液加入碳酸钾(720mg，5.22mmol)和2，4，5-三氯嘧啶(410mg，2.26mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，减压除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100/0至3/2)纯化，得到目标产物84a(200mg，31％)。
MS m/z(ESI)：377[M+1]
第二步
(3aR，6aS)-2-(2，5-二氯嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基八氢吡咯并[3，4-c]吡咯(84b)
将84a(0.2g，0.53mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，然后加入氯甲酸-1-氯乙酯(226mg，1.59mmol)并加热回流2小时。冷却到室温后，减压除去溶剂，然后加入甲醇(10mL)。再次回流2小时后，减压除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝9/1)纯化，得到目标产物84b(140mg，92％)。
MS m/z(ESI)：287[M+1]
第三步
(3aR，6aS)-2-(环丙基甲基)-5-(2，5-二氯嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基八氢吡咯并[3，4-c]吡咯(84c)
将溴甲基环丙烷(56.3mg，0.42mmol)、84b(60mg，0.21mmol)、碳酸钾(87mg，0.63mmol)和乙腈(4mL)混合，然后加热至50℃并搅拌16小时。冷却到室温后，减压除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100/0至2/3)纯化，得到目标产物84c(50mg，固体，70％)。
MS m/z(ESI)：341[M+1]
第四步
5-氯-4-((3aR，6aS)-5-(环丙基甲基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(84)
将84c(50mg，0.147mmol)、1-甲基-1H-吡唑-4-胺(21mg，0.122mmol)、对甲基苯磺酸(55mg，0.284mmol)和异丙醇(2mL)混合，然后加热到100℃并搅拌4小时。冷却到室温后，减压除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物84(16.4mg，固体，28％)。
MS m/z(ESI)：402[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.06(s，1H)，7.89(s，1H)，7.70(s，1H)，7.45(s，1H)，3.98(d，J＝10.9Hz，2H)，3.77(s，3H)，3.56(d，J＝11.2Hz，2H)，2.82(s，2H)，2.32(d，J＝63.4Hz，4H)，1.07(s，6H)，0.79(s，1H)，0.41(d，J＝6.1Hz，2H)，0.05(s，2H).
实施例85. 2-((3aR，6aS)-5-(5-氯-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)乙腈
Figure BDA0003440425030001111
将12c(42mg，0.115mmol)、2-溴乙腈(30mg，0.23mmol)、三乙胺(50mg，0.46mmol)和四氢呋喃(1mL)混合。室温下搅拌2小时后，减压除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物85(16mg，固体，34％)。
MS m/z(ESI)：402[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.07(s，1H)，7.89(s，1H)，7.71(s，1H)，7.44(s，1H)，4.00(d，J＝11.3Hz，2H)，3.80(s，2H)，3.77(s，3H)，3.56(d，J＝11.3Hz，2H)，2.85(d，J＝9.2Hz，2H)，2.55(d，J＝9.3Hz，2H)，1.09(s，6H).
实施例86.((3aS，6aR)-5-(5-氯-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)(环丙基)甲酮
Figure BDA0003440425030001112
第一步
(S)-1-苯基-N-((三甲基甲硅烷基)甲基)乙烷-1-胺(86b)
将(S)-苯乙胺86a(20g，165mmol)、氯甲基三甲基硅烷(20.24g，165mmol)和三乙胺(20g，165mmol)混合，加热回流16小时。冷却到室温后，加入正庚烷(500mL)，搅拌后过滤。滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/20)纯化，得到目标产物86b(26g，76％)。
MS m/z(ESI)：208[M+1]
第二步
(S)-N-(甲氧基甲基)-1-苯基-N-((三甲基甲硅烷基)甲基)乙烷-1-胺(86c)
在0℃向37％甲醛水溶液(6.6g，81.49mmol)中加入86b(13.0g，62.68mmol)。在0℃下搅拌0.5小时后，然后依次加入甲醇(3.4g，106.56mmol)和碳酸钾(8.7g，62.68mmol)。将混合物在0℃下搅拌2小时后，加入水(50mL)并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后滤液在减压条件下除去溶剂，残余物经蒸馏得到目标产物86c(6.816g，43％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.35-7.30(m，4H)，7.23(s，1H)，4.18(d，J＝9.3Hz，1H)，3.99(d，J＝9.3Hz，1H)，3.90(d，J＝6.8Hz，1H)，3.14(s，3H)，2.06(q，J＝14.4Hz，2H)，1.33(d，J＝6.8Hz，3H)，0.00(s，9H).
第三步
顺-3a-甲基-5-((R)-1-苯基乙基)四氢-1H-呋喃并[3，4-c]吡咯-1，3(3aH)-二酮(86d)
0℃下向86c(6.62g，26.34mmol)的二氯甲烷(25mL)溶液中加入3-甲基呋喃-2，5-二酮(2.95g，26.34mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液，然后在0℃下滴加三氟乙酸(0.3g，2.63mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液。将得到的混合物在室温下搅拌6小时后，减压除去溶剂，得到目标产物86d(6.83g)。该产品未经进一步纯化，直接用于下一步。
MS m/z(ESI)：260[M+1]
第四步
顺-3a-甲基-5-((R)-1-苯基乙基)四氢吡咯并[3，4-c]吡咯-1，3(2H，3aH)-二酮(86e)
将86d(6.83g，26.34mmol)溶于四氢呋喃(30mL)，然后加入氨水(30mL)。将得到的混合物在密封管中加热至100℃并搅拌3小时。冷却到室温后，减压除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/2)纯化，得到目标产物86e(4.30g，固体，63％)。
MS m/z(ESI)：259[M+1]
第五步
顺-3a-甲基-2-((R)-1-苯基乙基)八氢吡咯并[3，4-c]吡咯(86f)
将86e(4.3g，16.65mmol)溶于四氢呋喃(80mL)，冷却至0℃，然后分批加入氢化铝锂(1.90g，49.95mmol)。将混合物加热至70℃并搅拌2小时。冷却至0℃后，用饱和硫酸钠溶液(20mL)淬灭，滤出所得沉淀物。滤液在减压条件下除去溶剂，得到目标产物86f(3.62g，94％)。
MS m/z(ESI)：231[M+1]
第六步
(3aS，6aR)-3a-甲基-5-((R)-1-苯基乙基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(86g)和(3aR，6aS)-3a-甲基-5-((R)-1-苯基乙基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(86h)
将咯86f(3.62g，15.73mmol)溶于二氯甲烷(40mL)，冷却到0℃后依次加入三乙胺(3.18g，31.46mmol)和二叔丁基二碳酸酯(4.12g，18.88mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液。将混合物在室温下搅拌1小时后，加入水(20mL)然后用二氯甲烷(3×50mL)萃取。有机相合并后，经无水硫酸钠干燥，过滤后滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝20/1)纯化，得到目标产物86g(1.89g)、86h(1.65g)，以及86g和86h的混合物(1.04g)。86g和86h和的总产率为88％。
(3aS，6aR)-3a-甲基-5-((R)-1-苯基乙基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯86g：
MS m/z(ESI)：331[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.29(d，J＝4.5Hz，4H)，7.21(d，J＝4.2Hz，1H)，3.57-3.48(m，1H)，3.25(d，J＝10.8Hz，1H)，3.22-3.14(m，2H)，3.06(d，J＝10.8Hz，1H)，2.54(dd，J＝5.5，3.8Hz，2H)，2.35(d，J＝9.1Hz，1H)，2.18(s，1H)，2.12(d，J＝9.1Hz，1H)，1.40(s，9H)，1.24(d，J＝6.5Hz，3H)，1.08(s，3H).
(3aR，6aS)-3a-甲基-5-((R)-1-苯基乙基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯86h：
MS m/z(ESI)：331[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.29(d，J＝4.4Hz，4H)，7.21(d，J＝4.3Hz，1H)，3.49-3.41(m，1H)，3.34(d，J＝10.9Hz，1H)，3.20(d，J＝6.6Hz，1H)，3.10(dd，J＝11.3，3.5Hz，1H)，3.06(d，J＝11.0Hz，1H)，2.65(s，1H)，2.57(d，J＝8.9Hz，1H)，2.18(d，J＝3.5Hz，1H)，2.16(s，2H)，1.39(s，9H)，1.24(d，J＝6.5Hz，3H)，1.11(s，3H).
第七步
(3aS，6aR)-3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(86i)
将86g(1.89g，5.72mmol)溶于甲醇(50mL)，然后加入10％钯碳(0.19g)。在室温下将混合物在氢气气氛下搅拌12小时后过滤，滤液在减压条件下除去溶剂，得到目标产物86i(1.30g，100％)。
MS m/z(ESI)：227[M+1]
第八步
(3aS，6aR)-5-(2，5-二氯嘧啶-4-基)-3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(86j)
室温下向86i(1.3g，5.73mmol)的乙腈(40mL)溶液中加入二异丙基乙胺(1.48g，11.46mmol)和2，4，5-三氯嘧啶(1.05g，5.73mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时后，在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝7/3)纯化，得到目标产物86j(1.83g，86％)。
MS m/z(ESI)：373[M+1]
第九步
5-氯-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-((3aR，6aS)-3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-胺(86k)
将86j(1.83g，4.91mmol)溶于异丙醇(30mL)，然后加入1-甲基-1H-吡唑-4-胺盐酸盐(656mg，4.91mmol)和对甲基苯磺酸(93mg，0.49mmol)。将混合物加热至100℃并搅拌12小时。冷却到室温后过滤，收集滤饼，得到目标产物86k(1.28g，固体，82％)。
MS m/z(ESI)：334[M+1]
第十步
((3aS，6aR)-5-(5-氯-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)(环丙基)甲酮(86)
将86k(100mg，0.27mmol)溶于二氯甲烷(5mL)，然后依次加入环丙基甲酸(23mg，0.27mmol)和二异丙基乙胺(175mg，1.35mmol)。室温下搅拌10分钟后，加入HATU(205mg，0.54mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，加入水(5mL)然后用乙酸乙酯(3×5mL)萃取。有机相合并后，减压除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物86(64.3mg，固体，59％)。
MS m/z(ESI)：402[M+1]
Figure BDA0003440425030001151
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.06(s，1H)，7.89(s，1H)，7.71(s，1H)，7.44(s，1H)，4.04(s，1H)，3.95(dd，J＝10.7，7.7Hz，1H)，3.88-3.80(m，1H)，3.78(s，3H)，3.75-3.69(m，1H)，3.65(dd，J＝13.6，6.6Hz，1H)，3.58(dd，J＝12.7，8.0Hz，1H)，3.44(d，J＝12.2Hz，1H)，3.28(s，1H)，2.69-2.60(m，1H)，1.73(dd，J＝13.0，6.2Hz，1H)，1.23(d，J＝12.9Hz，3H)，0.77-0.66(m，4H).
实施例87、88、89、90和91均参照实施例86的操作方法合成，但在第七步中可用不同的化合物代替(3aS，6aR)-3a-甲基-5-((R)-1-苯基乙基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯86g，并在第十步中可用不同的化合物代替环丙基甲酸，如下所示：
Figure BDA0003440425030001152
Figure BDA0003440425030001161
实施例87、88、89、90和91的表征数据如下所示：
Figure BDA0003440425030001162
Figure BDA0003440425030001171
Figure BDA0003440425030001181
实施例92.顺-2-(5-(5-氯-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基-1-氧代六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)乙腈
Figure BDA0003440425030001182
第一步
2-((3aR，6aS)-5-苯甲基-3a，6a-二甲基-1，3-二氧代六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)乙腈(92a)
将51b(1.5g，5.4mmol)和氨基乙腈(500mg，5.4mmol)溶于1，2-二氯乙烷(6mL)中，然后加入三乙胺(1.6g，16.2mmol)。将溶液加热至60℃并搅拌12小时。冷却到室温后，减压除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物92a(1g，62％)。
MS m/z(ESI)：298[M+1]
第二步
顺-2-(5-苯甲基-1-羟基-3a，6a-二甲基-3-氧代六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)乙酰胺(92b)
将92a(800mg，2.7mmol)溶于乙醇(10mL)，冷却到0℃后加入硼氢化钠(260mg，6.7mmol)，然后加热回流12小时。冷却至室温后，减压除去溶剂。残余物用二氯甲烷(10mL)稀释后过滤。滤液在减压条件下除去溶剂，得到目标产物92b(900mg)。该产品未经进一步纯化，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：318[M+1]
第三步
顺-2-(5-苯甲基-3a，6a-二甲基-1-氧代六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)乙酰胺(92c)
将92b(900mg，粗品)溶于三氟乙酸(8mL)，然后加入三乙基硅烷(4mL)。将溶液于密封管中加热至120℃并搅拌48小时。冷却至室温后，减压除去溶剂。残余物用反相制备高校液相色谱纯化，得到目标产物92c(130mg，两步16％)。
MS m/z(ESI)：302[M+1]
第四步
顺-2-(3a，6a-二甲基-1-氧代六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)乙酰胺(92d)
将92c(130mg，0.42mmol)溶于甲醇(5mL)，然后加入10％钯碳(50mg)。将混合物在氢气气氛下搅拌3小时后过滤，减压除去溶剂，得到目标产物92d(90mg，100％)。
MS m/z(ESI)：212[M+1]
第五步
顺-2-(5-(2，5-二氯嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基-1-氧代六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)乙酰胺(92e)
将92d(90mg，0.42mmol)、2，4，5-三氯嘧啶(91mg，0.5mmmol)和二异丙基乙胺(0.3mL)溶于乙腈(2mL)，然后加热至50℃并搅拌12小时。将溶液冷却至室温，减压除去溶剂。残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物92e(150mg，固体，99％)。
MS m/z(ESI)：358[M+1]
第六步
顺-2-(5-(5-氯-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基-1-氧代六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)乙酰胺(92f)
将92e(100mg，0.26mmol)、1-甲基-1H-吡唑-4-胺盐酸盐(40mg，0.29mmol)、对甲基苯磺酸(6mg，0.026mmol)和异丙醇(4mL)混合，加热至120℃并搅拌1小时。冷却到室温后，减压除去溶剂，得到92f(150mg)。该产品未经进一步纯化，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：419[M+1]
第七步
顺-2-(5-(5-氯-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基-1-氧代六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)乙腈(92)
将92f(150mg，粗品)溶于三氯氧磷(2mL)，加热到100℃并搅拌12小时。冷却至室温后，减压除去溶剂，残余物用乙腈(5mL)稀释，缓慢加入三乙胺直至pH＝7。减压除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物92(15mg，固体，两步14％)。
MS m/z(ESI)：401[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.11(brs，1H)，7.91(s，1H)，7.70(s，1H)，7.44(s，1H)，4.44(s，2H)，4.15(d，J＝11.4Hz，1H)，3.81(d，J＝11.8Hz，1H)，3.78(s，3H)，3.70(d，J＝11.8Hz，1H)，3.65(d，J＝12.1Hz，1H)，3.43(d，J＝10.0Hz，1H)，3.34(d，J＝4.8Hz，1H)，1.18(s，3H)，1.09(s，3H).
实施例93.((3aR，6aS)-5-(5-氯-2-((5-甲基异恶唑-3-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)(环丙基)甲酮
Figure BDA0003440425030001201
将51g(0.25g，0.71mmol)和5-甲基异恶唑-3-胺(83mg，0.85mmol)溶于异丙醇(6mL)中，加入对甲基苯磺酸(270mg，1.42mmol)。将混合物在100℃下搅拌18小时。冷却至室温后，减压除去溶剂，残余物用prep-HPLC，得到目标产物93(51.3mg，固体，17％)，产率：。
MS m/z(ESI)：417[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.91(s，1H)，7.97(s，1H)，6.65(s，1H)，3.92-3.66(m，5H)，3.59(d，J＝10.7Hz，1H)，3.47(d，J＝12.3Hz，1H)，3.29(d，J＝12.5Hz，1H)，2.36(s，3H)，1.76-1.64(m，1H)，1.10(d，J＝12.9Hz，6H)，0.77-0.65(m，4H).
实施例94和95均参照实施例93的操作方法合成，但在第一步中用不同的化合物代替5-甲基异恶唑-3-胺，如下所示：
Figure BDA0003440425030001211
Figure BDA0003440425030001221
实施例97. 3-((3aR，6aS)-5-(5-甲氧基-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-3-氧代丙腈
Figure BDA0003440425030001222
第一步
(3aR，6aS)-2-苯甲基-5-(2-氯-5-甲氧基嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基八氢吡咯并[3，4-c]吡咯(97a)
向51d(0.26g，1.13mmol)的乙腈(10mL)溶液中加入碳酸钾(0.47g，3.39mmol)和2，4-二氯-5-甲氧基嘧啶(0.263mg，1.47mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，减压除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100/0至0/100)纯化，得到目标产物97a(70mg，20％)。
MS m/z(ESI)：373[M+1]
第二步
4-((3aR，6aS)-5-苯甲基-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-5-甲氧基-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(97b)
将97a(70mg，0.188mmol)和1-甲基-1H-吡唑-4-胺(27.3mg，0.182mmol)于正丁醇(5mL)中混合，然后加入对甲基苯磺酸(71.4mg，0.376mmol)。将混合物在120℃下搅拌8小时，冷却至室温后，减压除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝9/1)纯化，得到目标产物97b(70mg，86％)。
MS m/z(ESI)：434[M+1]
第三步
4-((3aR，6aS)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-5-甲氧基-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(97c)
将10％钯碳(34mg，0.32mmol)加入到97b(70mg，0.16mmol)的甲醇(5mL)溶液中。将混合物于氢气气氛下在室温下搅拌3小时后过滤，滤液在减压条件下除去溶剂，得到目标产物97c(50mg，91％)。
MS m/z(ESI)：344[M+1]
第四步
3-((3aR，6aS)-5-(5-甲氧基-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a，6a-二甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-3-氧代丙腈(97)
将化合物97c(50mg，0.146mmol)、2-氰基乙酸(25mg，0.292mmol)和二异丙基乙胺(38mg，0.292mmol)溶于DMF(1mL)，然后加入HATU(67mg，0.175mmol)。室温下搅拌1小时后，用prep-HPLC纯化，得到目标产物97(31.9mg，固体，53％)。
MS m/z(ESI)：411[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.56(s，1H)，7.70(s，1H)，7.67(s，1H)，7.41(s，1H)，3.91(d，J＝1.1Hz，2H)，3.82-3.71(m，5H)，3.66(s，3H)，3.63-3.52(m，3H)，3.47(d，J＝12.2Hz，1H)，3.39(d，J＝10.5Hz，1H)，3.31(d，J＝5.3Hz，1H)，1.07(t，J＝7.5Hz，6H).
实施例98. 3-((3aS，6aR)-5-(2-(((1H-吡唑-4-基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)-3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-3-氧代丙腈半甲酸盐
Figure BDA0003440425030001231
第一步
5-氯-4-((3aR，6aS)-3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-N-(1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺双盐酸盐(98a)
向86j(4.00g，10.72mmol)的乙醇(50mL)溶液中加入1H-吡唑-4-胺(1.16g，13.94mmol)和对甲苯磺酸一水合物(0.21g，1.07mmol)。将混合物加热到70℃并搅拌16小时。冷却到室温后，减压浓缩，然后加入氯化氢的乙醇溶液(10N，50mL)。该混合物再次加热到50℃并搅拌1小时。冷却到室温后，减压除去溶剂，然后加入甲醇和甲基叔丁基醚的混合物(60mL，1/1v/v)。搅拌30分钟后过滤，收集滤饼并干燥后得到目标产物98a(盐酸盐，3.4g，81％)。
MS m/z(ESI)：320[M+1]
第二步
3-((3aS，6aR)-5-(2-(((1H-吡唑-4-基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)-3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-3-氧代丙腈半甲酸盐
将98a(3.30g，8.40mmol)溶于甲醇(40mL)，然后加入氰基乙酸乙酯(1.90g，16.80mmol)和DBU(5.10g，33.60mmol)。室温下搅拌5小时后，减压除去溶剂，残余物用prep-HPLC纯化，得到目标产物98(甲酸盐固体，1.04g，30％)。
MS m/z(ESI)：387[M+1]
Figure BDA0003440425030001241
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.50(s，1.5H)，9.07(s，1H)，8.13(s，0.5H)，7.89(s，1H)，7.65(s，2H)，4.09-3.99(m，1H)，3.92(d，J＝2.7Hz，2H)，3.84(dd，J＝26.5，11.3Hz，1H)，3.76-3.72(m，1H)，3.69(d，J＝11.1Hz，1H)，3.64(dd，J＝12.5，7.3Hz，1H)，3.49(dd，J＝22.9，11.3Hz，1H)，3.38(dd，J＝15.7，7.9Hz，1H)，3.29(d，J＝12.3Hz，1H)，2.57(d，J＝33.9Hz，1H)，1.21(d，J＝2.7Hz，3H).
实施例99. 3-((3aS，6aR)-5-(5-氯-2-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-3-氧代丙腈
Figure BDA0003440425030001251
第一步
1-(甲基-d3)-4-硝基-1H-吡唑(99b)
室温下向4-硝基-1H-吡唑99a(2.5g，22.11mmol)的乙腈(20mL)溶液中加入氘代碘甲烷(3.85g，26.53mmol)和碳酸钾(4.58g，33.17mmol)。将混合物加热到70℃并搅拌12小时。冷却到室温后，减压除去溶剂。残余物中加入水(50mL)，然后用二氯甲烷(3×50mL)萃取。有机相合并后，用无水硫酸钠干燥。过滤后，滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)纯化，得到目标产物99b(2.50g，87％)。
MS m/z(ESI)：131[M+1]
第二步
1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-胺(99c)
在氮气气氛下，向1-(甲基-d3)-4-硝基-1H-吡唑99b(2.50g，19.2mmol)的甲醇(30mL)溶液中加入10％Pd/C(0.5g)。将混合物在氢气气氛下于室温搅拌16小时，过滤后减压除去溶剂，得到目标产物99c(1.92g，100％)。
MS m/z(ESI)：101[M+1]
第三步
5-氯-N-(1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)-4-((3aR，6aS)-3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-胺双盐酸盐(99d)
向86j(3.00g，8.04mmol)的乙醇(50mL)溶液中加入99c(1.05g，10.45mmol)和对甲基苯磺酸一水合物(0.15g，0.80mmol)。将混合物加热到70℃并搅拌8小时。冷却到室温后，然后加入氯化氢的乙醇溶液(10N，50mL)。该混合物再次加热到50℃并搅拌1小时。冷却到室温后，减压除去溶剂，然后加入甲醇和甲基叔丁基醚的混合物(60mL，1/1v/v)。搅拌30分钟后过滤，收集滤饼并干燥后得到目标产物99d(3.3g，100％)。
MS m/z(ESI)：337[M+1]
第四步
3-((3aS，6aR)-5-(5-氯-2-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-3-氧代丙腈(99)
将99d(3.30g，8.05mmol)溶于乙腈(35mL)，然后加入氰基乙酸乙酯(1.82g，16.10mmol)和DBU(4.90g，32.2mmol)。将混合物加热到30℃然后搅拌4小时。减压除去溶剂，然后加入乙醇(20mL)。室温下搅拌1小时后，过滤并收集滤饼，得到目标产物99(2.60g，固体，80％)。
MS m/z(ESI)：404[M+1]
Figure BDA0003440425030001261
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.07(s，1H)，7.89(s，1H)，7.71(s，1H)，7.44(s，1H)，4.03(dd，J＝11.2，5.9Hz，1H)，3.93(d，J＝3.0Hz，2H)，3.84(dd，J＝18.6，11.5Hz，1H)，3.73(d，J＝10.2Hz，1H)，3.69(s，1H)，3.64(dd，J＝12.1，7.1Hz，1H)，3.49(dd，J＝27.8，11.2Hz，1H)，3.42-3.33(m，1H)，3.33-3.24(m，1H)，2.57(d，J＝31.9Hz，1H)，1.20(t，J＝8.1Hz，3H).
实施例100.反-3-(5-(5-氯-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-3-氧代丙腈
Figure BDA0003440425030001271
第一步
反-1-苄基-3-甲基吡咯烷-3，4-二羧酸二甲酯(100b)
将2-甲基富马酸二甲酯100a(9.63g，60.89mmol)、三氟乙酸(0.69g，6.09mmol)和二氯甲烷(10mL)混合。冷却到0℃后，缓慢加入N-苄基-1-甲氧基-N-((三甲基甲硅烷基)甲基)甲胺(17.35g，73.07mmol)的二氯甲烷(200mL)溶液。滴加过程中反应混合物温度保持在0到5℃。得到的黄色溶液在16小时内逐渐升温到室温，然后加入饱和碳酸氢钠溶液(200mL)和二氯甲烷(200mL)并搅拌15分钟。分出的有机相用饱和食盐水洗涤，然后用无水硫酸钠干燥。过滤后，滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100/3)纯化，得到目标产物100b(17.74g，100％)。
MS m/z(ESI)：292[M+1]
第二步
反-1-(叔丁基)3，4-二甲基3-甲基吡咯烷-1，3，4-三羧酸酯(100c)
将100b(17.74g，60.79mmol)和二碳酸二叔丁酯(14.62g，66.67mmol)溶于甲醇(200mL)，然后加入10％钯炭(1.8g)。所得混合物在氢气气氛下加热到50℃并搅拌20小时。冷却到室温后过滤，滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化，得到目标产物100c(18.00g，98％)。
MS m/z(ESI)：202[M+1-100]
第三步
反-3，4-双(羟甲基)-3-甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(100d)
将100c(18.00g，22.75mmol)溶于四氢呋喃(200mL)，用冰浴冷却到0℃，然后加入硼氢化锂的四氢呋喃溶液(2M，65mL，131.41mmol)。搅拌30分钟后，移去冰浴，反应混合物逐渐升温至室温。搅拌16小时后，冷却到0℃，然后缓慢加入1N盐酸至溶液pH＝1。将所得溶液用二氯甲烷(400mL)萃取，有机相依次用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。过滤后，滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)纯化，得到目标产物100d(14.00g，96％)。
MS m/z(ESI)：190[M+1-56]
第四步
反-3-甲基-3，4-双(((甲磺酰基)氧基)甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(100e)
将反-3，4-双(羟甲基)-3-甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯100d(14.00g，57.07mmol)和N，N-二异丙基乙胺(44.00g，342.41mmol)溶于二氯甲烷(200mL)中，冷却至0℃，然后逐滴加入甲基磺酰氯(20.00g，171.21mmol)。搅拌1小时后，加入饱和氯化铵溶液(100mL)和二氯甲烷(200mL)。搅拌10分钟后静置，分出的有机层依次用饱和食盐水和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥。过滤后，滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化，得到目标产物100e(8.00g，35％)。
MS m/z(ESI)：346[M+1-56]
第五步
反-5-苄基-3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(100f)
将100e(8.00g，19.93mmol)、三乙胺(12.10g，119.55mmol)、苄胺(8.54g，79.72mmol)和甲苯(100mL)混合，然后加热回流16小时。反应混合物冷却到室温后，加入1MNaOH溶液(100mL)和饱和食盐水并搅拌10分钟。分出的有机相经无水硫酸钠干燥，过滤后，滤液在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)纯化，得到目标产物100f(3.00g，48％)。
MS m/z(ESI)：317[M+1]
第六步
反-3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(100g)
向100f(3.00g，9.48mmol)的甲醇(100mL)溶液中加入20％钯碳(0.6g)。将混合物在氢气气氛下加热到50℃并搅拌12小时。冷却到室温后过滤，滤液在减压条件下除去溶剂，得到目标产物100g(2.15g，100％)。
MS m/z(ESI)：227[M+1]
第七步
反-5-(2，5-二氯嘧啶-4-基)-3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(100h)
0℃下向100g(2.15g，9.50mmol)的乙酸乙酯(40mL)溶液中加入二异丙基乙胺(1.47g，11.40mmol)和2，4，5-三氯嘧啶(1.74g，9.50mmol)。将混合物在室温搅拌1小时，在减压条件下除去溶剂，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/3)纯化，得到目标产物100h(3.30g，93％)。
MS m/z(ESI)：373[M+1]
第八步
反-5-氯-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-2-胺双盐酸盐(100i)
将100h(3.30g，8.84mmol)溶于乙醇(40mL)中，然后依次加入1-甲基-1H-吡唑-4-胺盐酸盐(1.54g，11.49mmol)和对甲基苯磺酸一水合物(0.17g，0.88mmol)。将混合物加热至70℃并搅拌16小时。冷却后浓缩，然后加入甲基叔丁基醚和甲醇的混合溶剂(40mL，1/1v/v)，并搅拌30分钟。过滤后收集滤饼，得到目标产物100i(3.15g，88％)。
MS m/z(ESI)：334[M+1]
第九步
反-3-(5-(5-氯-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3a-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-3-氧代丙腈(100)
将100i(2.00g，4.92mmol)和乙腈(40mL)混合，然后加入2-氰基乙酸乙酯(1.11g，9.84mmol)和DBU(3.74g，24.60mmol)。将混合物加热到30℃并搅拌2小时后浓缩，然后加入乙醇(30mL)并在室温搅拌1小时。过滤后，收集滤饼，得到目标产物100(1.15g，固体，58％)。
MS m/z(ESI)：401[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.10(s，1H)，7.90(s，1H)，7.70(s，1H)，7.46(s，1H)，4.00-3.90(m，3H)，3.78(s，3H)，3.69-3.47(m，4H)，3.42-3.33(m，1H)，3.28(dd，J＝11.9，9.3Hz，1H)，3.09(dd，J＝20.0，10.8Hz，1H)，2.40(dd，J＝24.7，17.6Hz，1H)，0.94(d，J＝8.8Hz，3H).
实施例101.生物学实验
JAK2的活性抑制测试
使用HTRF激酶检测试剂盒(Cisbio，62TK0PEC)，通过检测激酶反应中底物的磷酸化水平，来评估本发明的化合物对JAK2活性的影响。
实验方法概述如下：
反应缓冲液包含以下组分：试剂盒自带酶反应缓冲液(1×)、5mM MgCl2、1mM DTT和0.01％Brij35；JAK2激酶溶液含有用反应缓冲液稀释成0.03ng/μL的人源重组JAK2蛋白(Carna Biosciences，08-045)；底物反应溶液包括用反应缓冲液稀释成2.5μM ATP和0.25μM的生物素标记的酪氨酸激酶底物；检测溶液包括用反应缓冲液稀释成0.1ng/μL的Eu3+标记的笼状抗体(Cisbio，61T66KLB)和12.5nM链霉亲和素标记的XL665(Cisbio，610SAXLB)。
将化合物在DMSO中溶解稀释至10μM，然后用DMSO进行4倍的系列稀释至最低浓度为0.061nM，每个浓度点再使用反应缓冲液稀释40倍。
向384孔检测板(Corning，3674)中添加4μL化合物溶液和2μLJAK2激酶溶液，混合均匀后室温孵育15分钟。随后加入4μL底物反应溶液，将反应混合物在室温孵育30分钟。随后加入与反应等体积的10μL检测溶液，混合均匀并在室温条件下静置30分钟后，用Envision读板机(Perkin Elmer)在620nm和665nm波长下检测反应进程。信号值(吸光度665nm/吸光度620nm)与底物的磷酸化程度呈正相关性，从而检测出JAK2激酶的活性。该实验中，未加JAK2激酶蛋白组作为100％抑制组，加JAK2激酶蛋白但是未加化合物组作为％抑制组。化合物对JAK2活性抑制百分比可以用以下公式计算：
抑制百分比＝100-100*(待测化合物特定浓度下信号值-100％抑制组信号值)/(0％抑制组信号值-100％抑制组信号值)
化合物IC50值由8个浓度点用XLfit(ID Business Solutions Ltd.，UK)软件通过以下公式计算：
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((logIC50-X)×slope factor))
其中Y为抑制百分比，X为待测化合物浓度的对数值，Bottom为最大抑制百分比，Top为最小抑制百分比，slope factor为曲线斜率系数。
TYK2的活性抑制测试
使用HTRF激酶检测试剂盒(Cisbio，62TK0PEC)，通过检测激酶反应中底物的磷酸化水平，来评估本发明的化合物对TYK2活性的影响。
实验方法概述如下：
反应缓冲液包含以下组分：试剂盒自带酶反应缓冲液(1×)、5mM MgCl2、1mM DTT和0.01％Brij35；TYK2激酶溶液含有用反应缓冲液稀释成0.25ng/μL的人源重组TYK2蛋白(Cama Biosciences，08-147)；底物反应溶液包括用反应缓冲液稀释成11.25μM ATP和0.5μM的生物素标记的酪氨酸激酶底物；检测溶液包括用反应缓冲液稀释成0.1ng/μL的Eu3+标记的笼状抗体(Cisbio，61T66KLB)和25nM链霉亲和素标记的XL665(Cisbio，610SAXLB)。
将化合物在DMSO中溶解稀释至10μM，然后用DMSO进行4倍的系列稀释至最低浓度为0.061nM，每个浓度点再使用反应缓冲液稀释40倍。
向384孔检测板(Coming，3674)中添加4μL化合物溶液和2μLTYK2激酶溶液，混合均匀后室温孵育15分钟。随后加入4μL底物反应溶液，将反应混合物在室温孵育40分钟。随后加入与反应等体积的10μL检测溶液，混合均匀并在室温条件下静置30分钟后，用Envision读板机(Perkin Elmer)在620nm和665nm波长下检测反应进程。信号值(吸光度665nm/吸光度620nm)与底物的磷酸化程度呈正相关性，从而检测出TYK2激酶的活性。该实验中，未加TYK2激酶蛋白组作为100％抑制组，加TYK2激酶蛋白但是未加化合物组作为0％抑制组。化合物对TYK2活性抑制百分比可以用以下公式计算：
抑制百分比＝100-100*(待测化合物特定浓度下信号值-100％抑制组信号值)/(0％抑制组信号值-100％抑制组信号值)
化合物IC50值由8个浓度点用XLfit(ID Business Solutions Ltd.，UK)软件通过以下公式计算：
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((logIC50-X)×slope factor))
其中Y为抑制百分比，X为待测化合物浓度的对数值，Bottom为最大抑制百分比，Top为最小抑制百分比，slope factor为曲线斜率系数。
Figure BDA0003440425030001321
Figure BDA0003440425030001331
Figure BDA0003440425030001341
Figure BDA0003440425030001351
本发明的化合物对TYK2的活性具有明显抑制效应，其IC50优选为10至100nM，更优选小于10nM。
NK92细胞中IL-12诱导的IFN-γ分泌量抑制的测定
通过酶联免疫吸附(ELISA)方法评估本发明的化合物对IL-12诱导的NK92细胞中IFN-γ分泌量的影响。
IL-12受体主要在活化的T细胞、NK细胞(NK92是一NK细胞株)、DC细胞和B细胞表达，与IL-12结合，激活NK细胞和T淋巴细胞中的JAK2/TYK2信号转导通路，从而诱导INF-γ的分泌。
实验方法概述如下：
将化合物用DMSO溶解稀释至2.5mM，然后用DMSO进行4倍的系列稀释至最低浓度为0.31μM，每个浓度点再使用不含FBS的MEMα培养基(Gibco，12561-056)稀释50倍。
NK92细胞(南京科佰，CBP60980)在含有12.5％FBS(Ausbian，VS500T)、12.5％马血清(Gibco，16050-122)、0.02mM叶酸(Sigma，F8758)、0.2mM肌醇(Sigma，17850)、0.55mMβ-巯基乙醇(Gibco，21985-023)、200U/mL IL-2(R&D Systems，202-1L)和100U/mL青链霉素混合液(Thermofisher，15140122)的MEMα完全培养基中培养。当细胞在培养皿中覆盖率达80-90％时，将细胞吹散后种植于96孔板(Thermofish，167425)，每孔100000细胞(80μL不含IL-2的MEMα完全培养基)，然后将96孔板置于37℃、5％CO2的培养箱中培养过夜。
过夜后每孔加入10μL的化合物，以及10μL50ng/mL的IL-12(R&D Systems，219-1L)，轻轻混匀，然后将96孔板置于37℃、5％CO2的培养箱中继续培养。24小时后取出于室温800rpm离心10分钟，将50μL上清液转移至已包被了抗IFN-γ的抗体的96孔板(Sigma，CLS3695)，按照Human IFN-γDuoSet ELISA检测试剂盒(R&D Systems，DY285B)的方法检测IFN-γ的分泌量。其中，无刺激对照组不加IL-12和测试的化合物，用MEMα培养基替代(100％抑制)；刺激对照组加IL-12和0.2％DMSO(0％抑制)。化合物对NK92细胞中IL-12诱导的IFN-γ分泌量抑制的百分比可以用以下公式计算：
抑制百分比＝100-100*(信号值化合物-信号值无刺激对照)/(信号值刺激对照-信号值无刺激对照)
化合物IC50值由8个浓度点用XLfit(ID Business Solutions Ltd.，UK)软件通过以下公式计算：
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)×slope factor))
其中Y为抑制百分比，Bottom为S型曲线的底部平台值，Top为S型曲线的顶部平台值，X为待测化合物浓度的对数值，slope factor为曲线斜率系数。
Figure BDA0003440425030001361
Figure BDA0003440425030001371
Figure BDA0003440425030001381
本发明的化合物对NK92细胞中IL-12诱导的IFN-γ分泌量具有显著抑制效应，其IC50优选为小于1000nM。

Claims (14)

1.一种通式(I)所示的化合物，或其可药用的盐、稳定同位素衍生物及其立体异构体：
Figure FDA0003440425020000011
其中：
R1是芳基或杂芳基，其中所述芳基和杂芳基的一个或多个氢任选被D、卤素、氰基、-ORb、-NRbRc、-COORb、-C(O)Rb、-NRbC(O)Rc、-C(O)NRbRc、-S(O)2Rb、-S(O)2NRbRc、-S(O)(NRb)Rc、-P(O)(CH3)2、C1-6烷基、C3-6环烷基、3至8元杂环基或5至6元杂芳基所取代；
R2为H、D或-NHRa；
R3为H、D、卤素、氰基、C1-6烷基、C3-6环烷基或-OC1-6烷基，其中所述烷基和环烷基的一个或多个氢任选被D或氟所取代；
R4和R5各自独立地选自H、D、卤素、C1-6烷基或-OC1-6烷基，其中所述烷基的一个或多个氢任选被D或氟所取代；
R6和R7各自独立地选自H、D、氰基或C1-6烷基，其中所述烷基的一个或多个氢任选被D或氟所取代，或者R6和R7一起为氧代；
L为键、C1-6亚烷基、-C(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(Ra)-、-S(O)2-或-S(O)2N(Ra)-；
A为H、C1-6烷基、C3-6环烷基、3-8元杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个氢任选被D、卤素、氰基、-ORd、-NRdRe、C1-6烷基、C3-6环烷基或3至8元杂环基所取代；
Ra为H、C1-6烷基或C3-6环烷基，其中所述烷基和环烷基的一个或多个氢任选被D或F所取代；
Rb和Rc各自独立地选自H、C1-6烷基、C3-6环烷基或含N和/或O的3至8元杂环基，其中所述烷基、环烷基和杂环基的一个或多个氢进一步任选被D、卤素、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基或-OC1-6烷基所取代，且
Rd和Re各自独立地选自H、C1-6烷基、C3-6环烷基或3至8元杂环基，其中所述烷基、环烷基和杂环基的一个或多个氢进一步任选被D或F所取代。
2.根据权利要求1所述的化合物，其为通式(II)所示的化合物或其可药用的盐、稳定同位素衍生物及其立体异构体：
Figure FDA0003440425020000021
其中：
R1为苯基、吡啶基或吡唑基，所述苯基、吡啶基和吡唑基的一个或多个氢任选被卤素、C1-6烷基、含N和/或O的4至6元杂环基、-C(O)Rb或-C(O)NRbRc所取代，其中所述烷基和杂环基的一个或多个氢进一步任选被D、F、CN、-OH或C1-6烷基所取代；
Rb和Rc各自独立地选自H、C1-6烷基、C3-6环烷基或含N和/或O的4至6元杂环基，其中所述烷基、环烷基和杂环基的一个或多个氢进一步任选被C1-2烷基所取代；
R3为H、卤素、氰基、C1-6烷基或-OC1-6烷基；
R4和R5各自独立地为H或C1-6烷基；
L为键、C1-6亚烷基、-C(O)-，-C(O)O-，-C(O)NH-或-S(O)2-，且
A为C1-6烷基、C3-6环烷基、含N和/或O的4至6元杂环基、吡啶基、嘧啶基或5元杂芳基，其中所述烷基和环烷基的一个或多个氢任选被D、卤素、氰基、-OH、-OC1-2烷基或C1-2烷基所取代，杂环基和杂芳基的一个或多个氢任选被C1-2烷基所取代。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中R1为吡唑基。
4.根据权利要求1或2所述的化合物，其中L为-C(O)-。
5.根据权利要求1或2所述的化合物，其中A为C1-6烷基或C3-6环烷基，所述烷基和环烷基的一个或多个氢任选被卤素、氰基、-OH或-OC1-2烷基所取代。
6.根据权利要求2所述的化合物，其为通式(III)所示的化合物或其可药用的盐、稳定同位素衍生物及其立体异构体：
Figure FDA0003440425020000031
其中，
R3为H、卤素、氰基、C1-6烷基或-OC1-6烷基；
R4和R5各自独立地为H或C1-6烷基；
L为键、C1-6亚烷基、-C(O)-、-C(O)O-、-C(O)NH-或-S(O)2-；
A为C1-6烷基、C3-6环烷基、含N和/或O的4至6元杂环基、吡啶基、嘧啶基或5元杂芳基，其中所述烷基和环烷基的一个或多个氢任选被D、卤素、氰基、-OH、-OC1-2烷基或C1-2烷基所取代，杂环基和杂芳基的一个或多个氢任选被C1-2烷基所取代，且
R11为H、C1-6烷基或含N和/或O的4至6元杂环基，其中所述烷基和杂环基的一个或多个氢任选被D、F、CN、-OH或C1-6烷基所取代。
7.根据权利要求6所述的化合物，其中A为C1-6烷基或C3-6环烷基，所述烷基和环烷基的一个或多个氢任选被卤素、氰基、-OH或-OC1-2烷基所取代。
8.根据权利要求6所述的化合物，其中R11为C1-6烷基，所述烷基的一个或多个氢任选被D、F、CN、-OH或C1-6烷基所取代。
9.根据权利要求1所述的化合物或其可药用的盐、稳定同位素衍生物及其立体异构体，其结构如下：
Figure FDA0003440425020000041
Figure FDA0003440425020000051
Figure FDA0003440425020000061
Figure FDA0003440425020000071
Figure FDA0003440425020000081
Figure FDA0003440425020000091
Figure FDA0003440425020000092
(其中带*标记的碳原子，其立体化学构型并未确定)。
10.权利要求9的化合物，其为：
Figure FDA0003440425020000093
Figure FDA0003440425020000101
11.权利要求9的化合物，其为：
Figure FDA0003440425020000102
12.一种药物组合物，其包含权利要求1-11中任一项所述的化合物以及可药用的载体或辅料。
13.一种预防或治疗由酪氨酸激酶2(TYK2)介导的疾病的方法，该方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的权利要求1-11中任一项所述的化合物或其可药用的盐、稳定同位素衍生物及其立体异构体，其中由TYK2介导的疾病为自身免疫性疾病、包括肠道疾病在内的炎症、癌症、皮肤病、糖尿病、眼病、神经退行性疾病、过敏反应、哮喘和其它阻塞性气道疾病、移植排斥等。
14.根据权利要求13的方法，其中所述疾病为银屑病、银屑病性关节炎、溃疡性结肠炎、克罗恩病、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎、白癜风、斑秃、皮炎、特应性湿疹。
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