CN114075568A - 靶向烟碱乙酰胆碱受体自身抗体的组合物和方法 - Google Patents

Abstract

本公开提供了一种对基于自身抗体的B细胞受体(BCR)具有特异性的嵌合自身抗体受体(CAAR)，其中所述自身抗体对nAChR具有特异性。本公开还提供了包含CAAR的组合物、编码CAAR的多核苷酸、包含编码CAAR的多核苷酸的载体、包含CAAR的工程细胞及其使用方法。

Description

靶向烟碱乙酰胆碱受体自身抗体的组合物和方法

技术领域

本公开大体上涉及包括用免疫抑制药物治疗的疗法。确切地说，本公开涉及用于治疗或预防与抗烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)自身抗体相关的病症的组合物和方法。

背景技术

重症肌无力(MG)是一种神经肌肉疾病，导致骨骼肌无力。它影响到每100,000人口中约14至20人，在美国的发病率约为36,000至60,000例。MG可以在任何年龄发病。该疾病的病程是可变的，但通常是进行性的，在最初发作后的几年内达到最大。与疾病病相关的常见症状包括手臂或腿部肌肉无力，复视，眼睑下垂，面部表情、语言、咀嚼和吞咽困难。控制呼吸的肌肉严重无力，在15～20％的MG患者中至少发生一次，可导致危及生命的肌无力危机，需要机械通气支持。

尽管MG发病背后的主要原因仍然是推测的，但它显然是一种具有明确的自身抗原目标的自身免疫性疾病。在用nAChR免疫的兔子中诱发的实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的发现首次提示了MG的自身免疫性质。随后的研究通过被动转移MG患者血清或纯化的nAChR抗体来诱导EAMG，进一步确定nAChR抗体是MG的主要病理因素。在多达90％的一般病例中，存在抗nAChR自身抗体，并且自身抗体的滴度与疾病的严重程度相关。抗nAChR抗体与nAChR的结合导致补体介导的突触后结构的丧失和受体的内化，从而破坏了神经肌肉传导，导致肌无力。

目前MG尚无明显的治愈；现有的治疗剂如乙酰胆碱酯酶抑制剂和免疫抑制剂是为了管理和控制症状。因此，需要针对MG的更具体和有效的治疗和治愈。

发明内容

在一个方面，本公开提供了一种编码嵌合自身抗体受体(CAAR)的多核苷酸。在一些实施例中，CAAR包含胞外域、跨膜域和胞内信号传导域，所述胞外域包含nAChR的免疫原性片段，其中所述胞外域与B细胞上表达的针对nAChR的B细胞受体(BCR)结合，其中表达CAAR的细胞与B细胞上表达的BCR结合，或诱导杀伤表达BCR或表达针对nAChR的自身抗体的B细胞。

在一些实施例中，nAChR的免疫原性片段包含nAChR的亚基的胞外区或胞外区的片段。在一些实施例中，nAChR的免疫原性片段包含选自表2所列组的序列或与其具有至少90％同一性的序列，或与其具有1、2、3、4或5个氨基酸残基差异的序列。

在一些实施例中，CAAR还包含CD8α的信号肽。在一些实施例中，CD8α的信号肽包含SEQ ID NO:65的序列或与其具有至少90％同一性的序列；或与其具有1、2、3、4、5个氨基酸残基差异的序列。

在一些实施例中，跨膜域包含CD8α的跨膜域。在一些实施例中，CD8α的跨膜域包含SEQ ID NO:66的序列或与其具有至少90％同一性的序列；或与其具有1、2、3、4、5个氨基酸残基差异的序列。

在一些实施例中，胞外域通过铰链区连接至跨膜域。在一些实施例中，铰链区包含CD8α的铰链区或GS连接子。在一些实施例中，CD8α的铰链区包含SEQ ID NO:67的序列或与其具有至少90％同一性的序列；或与其具有1、2、3、4、5个氨基酸残基差异的序列。在一些实施例中，GS连接子包含SEQ ID NO:70的序列或与其具有至少90％同一性的序列；或与其具有1、2、3、4、5个氨基酸残基差异的序列。

在一些实施例中，胞内域包含共刺激域和信号传导域。在一些实施例中，共刺激域包含CD137的胞内域。在一些实施例中，CD137的胞内域包含SEQ ID NO:68的序列或与其具有至少90％同一性的序列；或与其具有1、2、3、4、5个氨基酸残基差异的序列。在一些实施例中，胞内域包含CD3ζ的信号传导域。在一些实施例中，CD3ζ的信号传导域包含SEQ ID NO:69的序列或与其具有至少90％同一性的序列；或与其具有1、2、3、4、5个氨基酸残基差异的序列。

在另一个方面，本公开提供了由本文所述的多核苷酸编码的多肽。

在另一个方面，本公开提供了一种包含本文所述的多核苷酸的载体，其中编码CAAR的多核苷酸可操作地连接于至少一个调节性多核苷酸元件以用于表达CAAR。在一些实施例中，载体是质粒载体、病毒载体、逆转录转座子、定点插入载体或自杀式表达载体。在一些实施例中，载体是慢病毒载体、逆转录病毒载体或AAV载体。

在另一个方面，本公开提供了一种包含本文所述的多核苷酸的工程细胞。在一些实施例中，工程细胞是T细胞或NK细胞。

在另一个方面，本公开提供了一种治疗或预防有需要的受试者的与抗nAChR自身抗体相关的病症的方法。在一些实施例中，所述方法包括施用有效量的本文所述的工程细胞。在一些实施例中，与抗nAChR自身抗体相关的病症是重症肌无力。在一些实施例中，工程细胞是自体细胞。在一些实施例中，工程细胞是同种异体细胞。在一些实施例中，所述方法还包括共同施用增加工程细胞的功效的药剂。在一些实施例中，所述方法还包括共同施用改善与施用工程细胞相关的副作用的药剂。

附图说明

并入本文的附图构成本说明书的一部分。与此书面描述一起，附图进一步用于解释本公开的原理，并使相关领域的技术人员能够制造和使用本公开。

图1示出了在工程T细胞上表达的嵌合自身抗体受体(CAAR)靶向在某些B细胞上表达的B细胞受体(BCR)，这些B细胞产生针对nAChR的自身抗体。

图2示出了示例性CAAR构建体的示意图。

具体实施方式

在更详细地描述本公开之前，应理解，本公开不限于所描述的特定实施例，因此当然可能会有变化。还应理解，本文中使用的术语仅出于描述特定实施例的目的，而无意于为限制性的，因为本公开的范围将仅由所附权利要求书限制。

除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。尽管类似于或等同于本文描述的那些方法和材料的任何方法和材料也可以用于本公开的实践或测试中，但是现在描述优选的方法和材料。

在本说明书中引用的所有出版物和专利均通过引用并入本文，就如同每个单独的出版物或专利均被具体和单独指示为通过引用并入一般，并且通过引用并入本文以公开和描述与所引用的出版物相关的方法和/或材料。对任何出版物的引用是针对其在申请日之前的公开内容，不应解释为承认本公开无权凭借在先公开而早于此类出版物。此外，提供的出版日期可能与可能需要独立确认的实际出版日期不同。

如对本领域技术人员而言，在阅读本公开后将显而易见的是，本文描述和说明的个别实施例中的每一个具有离散的组件和特征，其可以在不脱离本公开的范围或精神的情况下，容易地与其他若干实施例中的任何一个的特征分离或组合。任何叙述的方法可以按照叙述的事件的顺序或逻辑上可能的任何其他顺序进行。

定义

提供以下定义以帮助读者。除非另有定义，否则本文使用的所有技术术语、符号和其他科学或医学术语或用语旨在具有本领域技术人员通常理解的含义。在某些情况下，为了清楚和/或易于参考，本文定义了具有通常理解的含义的术语，并且在本文中包括此类定义不一定应被解释为表示与本领域通常理解的术语的定义相比具有实质性差异。

如本文所用，除非上下文另外明确规定，否则单数形式“一(a/an)”和“所述”包括复数个指代物。

“抗原”是指引起免疫反应的分子。这种免疫反应可以是体液反应，或细胞介导的反应，或两者兼有。本领域技术人员应理解，任何大分子，包括几乎所有的蛋白质或肽，都可以用作抗原。显而易见，本公开包括用作抗原引发免疫反应的自身抗原。

“抗体”是指与抗原结合的免疫球蛋白(Ig)家族的多肽。例如，天然存在的IgG类型的“抗体”是包含通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链的四聚体。每条重链由重链可变区(本文缩写为VH)和重链恒定区构成。重链恒定区由三个域CH1、CH2和CH3构成。每条轻链由轻链可变区(本文缩写为VL)和轻链恒定区构成。轻链恒定区由一个域(本文缩写为CL)构成。VH和VL区可以进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，其间散布着更保守的区，称为框架区(FR)。每个VH和VL由三个CDR和四个FR构成，从氨基端到羧基端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合域。

“单克隆抗体”是指由相同的免疫细胞制造的抗体，所述免疫细胞是唯一亲本细胞的所有克隆。

“自身抗原”是指被免疫系统识别并刺激细胞介导的或抗体介导的免疫反应的内源性抗原，可能导致自身免疫性疾病的发生。自身抗原的实例包括但不限于nAChR及其免疫原性片段。

“自身抗体”是指针对自身抗原的特异性抗体。

“自身免疫性疾病”是由针对自身抗原的细胞介导或抗体介导的免疫反应导致的病症或病况。在自身免疫性疾病中，可能会不适当地和/或过度地产生针对自身抗原的自身抗体。自身免疫性疾病包括但不限于重症肌无力。

“烟碱乙酰胆碱受体”或“nAChR”是指对神经递质乙酰胆碱有反应的受体。nAChR由围绕中心孔对称排列的五个亚基组成，其中每个亚基包含四个跨膜域，其N端和C端均位于细胞外。对于位于神经肌肉接头并控制肌肉收缩的nAChR，受体通常由α1、β1、γ和δ亚基以2:1:1:1的比例组成，或由α1、β1、δ和ε亚基以2:1:1:1的比例组成。nAChRα1、β1、γ、δ和ε亚基分别由CHRNA1、CHRNB1、CHRNG、CHRND和CHRNE基因编码。如本文所用，nAChR旨在包括野生型和对抗nAChR抗体的识别影响最小的变异体。在一些实施例中，编码nAChR的多核苷酸经过密码子优化。

“自体”细胞是指来源于同一受试者的任何细胞，所述细胞随后将被重新引入。

“同种异体”细胞是指来源于相同物种的不同受试者的任何细胞。

“B细胞受体”或“BCR”是指B细胞表面上识别特定抗原的跨膜免疫球蛋白分子。

“嵌合自身抗体受体”或“CAAR”是指一种工程受体，能够将针对自身抗体或与自身抗体对应的B细胞受体的所需特异性移植到能够进行细胞介导的细胞毒性的免疫细胞中。通常，CAAR是一种融合多肽，其包含胞外域、跨膜域和胞内域，胞外域引入所需特异性，胞内域在免疫细胞与自身抗体或B细胞受体结合时，将信号传递给免疫细胞。

“共刺激配体”是指抗原呈递细胞(例如APC、树突状细胞、B细胞等)上的分子，其与T细胞上的同源共刺激分子特异性结合，从而提供信号，除了由例如TCR/CD3复合物与装载有肽的主要组织相容性复合物(MHC)分子结合而提供的初级信号外，还介导T细胞反应，包括但不限于增殖、激活、分化等。

“共刺激分子”是指T细胞上的同源结合伴侣，其与共刺激配体特异性结合，从而介导T细胞的共刺激反应，例如但不限于增殖。共刺激分子包括但不限于CD28和4-1-BB。

在免疫细胞的上下文中使用的“效应细胞”是指可被激活以响应刺激而执行效应功能的细胞。效应细胞可包括但不限于NK细胞、细胞毒性T细胞和辅助T细胞。

“有效量”或“治疗有效量”是指有效实现所需生物学结果的在此描述的细胞、组合物、制剂或任何材料的量。此类结果可包括但不限于消除表达特定BCR的B细胞和由此产生的抗体。“表位”或“免疫原性片段”或“抗原决定簇”是指抗体或其抗原结合片段所识别的抗原的一部分。表位可以是线性的或构象的。

多肽或多核苷酸上下文中的“同一性”或“序列同一性”的百分比是通过在比较窗口中比较两个最佳比对的序列来确定的，其中多核苷酸或多肽序列在比较窗口中的部分可能包括与参考序列(不包括添加或缺失)相比的添加或缺失(即间隙)，以便对两个序列进行最佳比对。如下计算百分比：确定两个序列中出现相同的核酸碱基或氨基酸残基的位置数，得出匹配的位置数，用匹配的位置数除以比较窗口中的总位置数，并且将结果乘以100，得出序列同一性的百分比。

“可操作地连接”是指两个或更多个多核苷酸序列之间的功能关系。在编码融合蛋白(如本公开的CAAR的多肽链)的多核苷酸的上下文中，该术语是指两个或更多个多核苷酸序列接合，使得这些片段编码的氨基酸序列保持在读框内。在转录或翻译调节的上下文中，该术语是指调节序列与编码序列的功能关系，例如，启动子在编码序列的正确位置和方向上，以便调节转录。

“免疫原性”或“免疫原性的”是指外来物质如抗原在受试者体内引起免疫反应的能力。免疫原性反应通常包括细胞介导的和抗体介导的免疫反应。如在自身抗原的上下文中所使用，“免疫原性片段”是指引发宿主的免疫反应的自身抗原的区域。这种反应可导致产生针对自身抗原的自身抗体，并引起自身免疫性疾病。

“多核苷酸”或“核酸”是指核苷酸链。如本文所用，多核苷酸包括通过本领域可用的任何手段获得的所有多核苷酸序列，所述手段包括但不限于重组手段和合成手段。

“多肽”和“蛋白质”可互换使用，是指通过肽键共价连接的氨基酸残基链。多肽包括天然肽、重组肽、合成肽或其组合。

“T细胞受体”或“TCR”是指T细胞表面上的蛋白质复合物，其负责识别作为与MHC分子结合的肽的抗原片段。

“载体”是指可操作地插入多核苷酸，以便递送、复制或表达多核苷酸的载体。载体可以含有多种调节元件，包括但不限于复制起点、启动子、转录起始序列、增强子、可选标记基因和报告基因。载体还可以包括帮助其进入宿主细胞的材料，包括但不限于病毒颗粒、脂质体或离子或两亲化合物。

注意，在本公开中，如“包含(comprises/comprised/comprising)”、“含有(contains/containing)”等的术语具有美国专利法中赋予的含义；它们是包容性的或开放式的，并且不排除额外未引用的要素或方法步骤。如“基本上由……组成(consistingessentially of/consists essentially of)”的术语具有美国专利法赋予的含义；它们允许包括不会实质上影响要求保护的发明的基本和新颖特征的额外成分或步骤。术语“由……组成(consists of/consisting of)”具有美国专利法赋予它们的含义；即这些术语是封闭式的。

嵌合自身抗体受体

重症肌无力(MG)是一种自身免疫性的神经肌肉疾病，其引起不同程度的骨骼肌无力。在MG中，多达90％的一般病例中发现了烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)的自身抗体，并且自身抗体的滴度与疾病的严重程度相关。自身抗体与神经肌肉接头处的nAChR结合，导致补体介导的突触后结构的丧失和受体的内化。因此，神经肌肉传递受到损害，肌肉收缩中断。

在一个方面，本公开涉及嵌合自身抗体受体(CAAR)，其与某些B细胞上表达的靶向nAChR的基于自身抗体的B细胞受体(BCR)特异性结合；这些B细胞在激活和自身抗体分泌后可能引起自身抗体介导的病症(图1)。当CAAR在效应细胞(如T细胞)上表达时，CAAR特异性地将效应细胞引导至这些B细胞，从而诱导杀伤表达基于自身抗体的BCR的B细胞和分泌自身抗体的B细胞，但使不表达和显示针对nAChR的基于自身抗体的BCR或不分泌自身抗体的B细胞保持完好。消除致病的B细胞可以治疗和预防与抗nAChR自身抗体相关的病症，如MG。

在一个方面，本公开提供了一种CAAR，其包含胞外域、跨膜域和胞内信号传导域，而胞外域包含nAChR的免疫原性片段。

在另一个方面，本公开提供了编码本文所述的CAAR的多核苷酸。

胞外域

在一些实施例中，本文所述的CAAR的胞外域包含nAChR的免疫原性片段。虽然该免疫原性片段被针对nAChR的自身抗体识别，但该免疫原性片段与表达此类自身抗体的B细胞的BCR特异性结合。

本公开的免疫原性片段可来源于nAChR的任何亚基，例如nAChRα1、α2、α3、α4、α5、α6、α7、α9、α10、β1、β2、β3、β4、δ、γ或ε单元。这些亚基的多肽和多核苷酸序列可以从公共数据库，如Uniprot检索。在某些实施例中，本文公开了这些亚基的多肽和多核苷酸序列，其序列标识符在表1中。

表1.nAChR亚基的序列.

在某些实施例中，nAChR的免疫原性片段包含nAChR亚基的胞外区或其片段。在某些实施例中，免疫原性片段包含nAChR亚基的N端α螺旋域或其片段。在某些实施例中，免疫原性片段包含nAChR亚基的主要免疫原性区(MIR)或MIR的片段。

在某些实施例中，免疫原性片段包含nAChRα1亚基的MIR，其占MG和实验性自身免疫MG(EAMG)中所有自身抗体的一半以上的结合(Tzartos等人,《免疫学评论》(Immunological Reviews.)1998,163:89-120)。在某些实施例中，nAChRα1亚基的MIR具有SEQ ID NO:49的序列，或与其具有1、2或3个氨基酸残基差异的序列。

应注意，当提及nAChR或nAChR的任何免疫原性时，除非上下文另有规定，否则也包括包含最低限度地影响针对nAChR的自身抗体识别的氨基酸变化的同工型或变异体。

表2中示出了nAChR的示例性免疫原性片段。在一些实施例中，CAAR的胞外域包含一个或多个选自表2所列序列组的序列，或一个或多个与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的序列，或一个或多个与其具有1、2、3、4或5个氨基酸残基差异的序列。

表2.nAChR的免疫原性片段.

在一些实施例中，本文所述的CAAR的胞外域还包含信号肽。如本文所用，术语“信号肽”是指存在于多肽的N端，通常具有5-30个氨基酸残基的长度，是分泌途径上跨膜转位和控制多肽进入分泌途径所必需的肽。

在一些实施例中，信号肽包含CD8α的信号肽。在一些实施例中，CD8α的信号肽包含SEQ ID NO:65的序列或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的序列，或与其具有1、2、3、4或5个氨基酸残基差异的序列。在一些实施例中，信号肽包含IgG的信号肽。

跨膜域

本文所述的CAAR的跨膜域可来源于任何膜结合蛋白或跨膜蛋白，包括但不限于BAFFR、BLAME(SLAMF8)、CD2、CD3ε、CD4、CD5、CD8、CD9、CD11a(CD18、ITGAL、LFA-l)、CD11b、CD11c、CD11d、CD16、CD19、CD22、CD27、CD28、CD29、CD33、CD37、CD40、CD45、CD49a、CD49d、CD49f、CD64、CD80、CD84、CD86、CD96(Tactile)、CD100(SEMA4D)、CD103、CD134、CD137(4-1BB)、CD150(IPO-3、SLAMF1、SLAM)、CD154、CD160(BY55)、CD162(SELPLG)、CD226(DNAM1)、CD229(Ly9)、CD244(2B4、SLAMF4)、CD278(ICOS)、CEACAM1、CRT AM、GITR、HYEM(LIGHTR)、IA4、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7R a、ITGA1、ITGA4、ITGA6、ITGAD、ITGAE、ITGAM、ITGAX、ITGB1、ITGB2、ITGB7、KIR、LTBR、OX40、NKG2C、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、NKp80(KLRF1)、PAG/Cbp、PSGL1、SLAMF6(NTB-A、Ly108)、SLAMF7、T细胞受体的α、β或ζ链、TNFR2、VLA1和VLA-6。

在一个实施例中，本文所述的CAAR包含CD8α、CD28或ICOS的跨膜域。在某些实施例中，CD8α的跨膜域具有SEQ ID NO:66的序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的序列，或与其具有1、2、3、4或5个氨基酸残基差异的序列。

在某些实施例中，本文所述的CAAR的跨膜域是合成的，例如主要包含疏水性残基，如亮氨酸和缬氨酸。在某些实施例中，本文所述的CAAR的跨膜域被修饰或设计为避免与相同或不同表面膜蛋白的跨膜域结合，以使与受体复合物的其他成员的相互作用最小化。

在一些实施例中，本文所述的CAAR还包含铰链区，其形成CAAR的胞外域和跨膜域之间的连接。铰链和/或跨膜域提供了CAAR的胞外域的细胞表面呈现。

铰链区可来源于任何膜结合蛋白或跨膜蛋白，包括但不限于BAFFR、BLAME(SLAMF8)、CD2、CD3ε、CD4、CD5、CD8、CD9、CD11a(CD18、ITGAL、LFA-l)、CD11b、CD11c、CD11d、CD16、CD19、CD22、CD27、CD28、CD29、CD33、CD37、CD40、CD45、CD49a、CD49d、CD49f、CD64、CD80、CD84、CD86、CD96(Tactile)、CD100(SEMA4D)、CD103、CD134、CD137(4-1BB)、CD150(IPO-3、SLAMF1、SLAM)、CD154、CD160(BY55)、CD162(SELPLG)、CD226(DNAM1)、CD229(Ly9)、CD244(2B4、SLAMF4)、CD278(ICOS)、CEACAM1、CRT AM、GITR、HYEM(LIGHTR)、IA4、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Ra、ITGA1、ITGA4、ITGA6、ITGAD、ITGAE、ITGAM、ITGAX、ITGB1、ITGB2、ITGB7、KIR、LTBR、OX40、NKG2C、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、NKp80(KLRF1)、PAG/Cbp、PSGL1、SLAMF6(NTB-A、Ly108)、SLAMF7、T细胞受体的α、β或ζ链、TNFR2、VLA1和VLA-6。

在一些实施例中，铰链区包含CD8α的铰链区、人类免疫球蛋白(Ig)的铰链区或富含甘氨酸-丝氨酸的序列。

在一些实施例中，CAAR包含CD8α、CD28、ICOS或IgG4m的铰链区。在某些实施例中，铰链区具有SEQ ID NO:67的序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的序列，或与其具有1、2、3、4或5个氨基酸残基差异的序列。

在一些实施例中，铰链区包含GS连接子，其包含长度在2至20个氨基酸残基之间的甘氨酸-丝氨酸(GS)双联体。示例性GS连接子具有SEQ ID NO:70的序列。

胞内域

本文所述的CAAR的胞内域负责激活CAAR所处的免疫细胞的至少一种正常效应功能。在免疫细胞的上下文中使用的术语“效应功能”是指细胞的专门功能，例如T细胞的细胞溶解活性或辅助活性，包括细胞因子的分泌。

众所周知，T细胞的完全激活需要通过T细胞受体(TCR)产生的信号和次级或共刺激信号。因此，T细胞的激活是由两类不同的细胞质信号传导序列介导的：那些通过TCR启动抗原依赖性初级激活的信号传导序列(初级细胞质信号传导序列)和那些以抗原非依赖性方式提供次级或共刺激信号的信号传导序列(次级细胞质信号传导序列)。

CAAR的胞内域可以来源于转导效应功能信号并指导细胞执行效应功能的分子，或此类分子的截短部分，只要其转导信号即可。此类蛋白质分子包括但不限于B7-H3、BAFFR、BLAME(SLAMF8)、CD2、CD3δ、CD3ε、CD3γ、CD3ζ、CD4、CD5、CD7、CD8α、CD8β、CD11a(CD18、LFA-1、ITGAL)、CD11b、CD11c、CD11d、CD19、CD27、CD28、CD29、CD30、CD40、CD49a、CD49d、CD49f、CD69、CD79a、CD79b、CD83、CD84、CD86、CD96(Tactile)、CD100(SEMA4D)、CD103、CD127、CD137(4-1BB)、CD150(SLAM、SLAMF1、IPO-3)、CD160(BY55)、CD162(SELPLG)、CD226(DNAM1)、CD229(Ly9)、CD244(SLAMF4、2B4)、CEACAM1、CRTAM、DAP10、DAP12、常见FcRγ、FcRβ(FcεRib)、FcγRIIa、GADS、GITR、HVEM(LIGHTR)、IA4、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、ITGA6、ITGAD、ITGAE、ITGAM、ITGAX、ITGB1、ITGB2、ITGB7、ICAM-1、ICOS、LIGHT、LTBR、LAT、NKG2C、NKG2D,NKp44、NKp30、NKp46、NKp80(KLRF1)、OX40、PD-1、PAG/Cbp、PSGL1、SLP-76、SLAMF6(NTB-A、Ly108)、SLAMF7、T细胞受体(TCR)、TNFR2、TRANCE/RANKL、VLA1、VLA-6、其任何衍生物、变异体或片段、具有相同功能能力的分子的任何合成序列及其任何组合。

在一些实施例中，胞内域包含共刺激域和信号传导域，其中当CAAR与产生针对nAChR的自身抗体的B细胞上表达的BCR结合时，共刺激域提供共刺激细胞内信号传导而不需要其原始配体，并且信号传导域提供初级激活信号传导。CAAR的共刺激域和信号传导域可以随机或指定的顺序相互连接。

共刺激域

在一些实施例中，共刺激域来源于共刺激分子的胞内域。

共刺激分子的实例包括B7-H3、BAFFR、BLAME(SLAMF8)、CD2、CD4、CD8α、CD8β、CD7、CD11a、CD11b、CD11c、CD11d、CD 18、CD 19、CD27、CD28、CD29、CD30、CD40、CD49a、CD49D、CD49f、CD69、CD83、CD84、CD96(Tactile)、CD100(SEMA4D)、CD103、CD 127、CD137(4-1BB)、CD150(SLAM、SLAMF1、IPO-3)、CD160(BY55)、CD162(SELPLG)、CD226(DNAM1)、CD229(Ly9)、CD244(SLAMF4、2B4)、CEACAM1、CRTAM、CDS、OX40、PD-l、ICOS、GADS、GITR、HVEM(LIGHTR)、IA4、ICAM-l、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、TGA6、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAX、ITGB1、ITGB2、ITGB7、LAT、LFA-l、LIGHT、LTBR、NKG2C、NKG2D、NKp44、NKp30、NKp46、NKp80(KLRF1)、PAG/Cbp、PSGL1、SLAMF6(NTB-A、Lyl08)、SLAMF7、SLP-76、TNFR2、TRANCE/RANKL、VLA1、VLA-6、其任何衍生物、变异体或片段、具有相同功能能力的共刺激分子的任何合成序列及其任何组合。

在一些实施例中，CAAR的共刺激域包含共刺激分子CD137(4-1BB)、CD28、OX40或ICOS的胞内域。在一些实施例中，CAAR的共刺激域具有SEQ ID NO:68的序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的序列，或与其具有1、2、3、4或5个氨基酸残基差异的序列。

信号传导域

TCR复合物的初级激活可以由初级细胞质信号传导序列以刺激性方式或抑制性方式调节。以刺激性方式起作用的初级细胞质信号传导序列可以含有称为基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)的信号传导基序。在本公开中特别使用的含有ITAM的初级信号传导序列的实例包括那些来源于CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD5、CD22、CD79a、CD79b、CD66d、FcRγ、FCRβ和TCRζ的初级信号传导序列。

在一些实施例中，本公开的CAAR的信号传导域包含ITAM，其在CAAR与表达针对nAChR的自身抗体的B细胞上表达的BCR结合后提供刺激性胞内信号传导，而不受HLA限制。在一些实施例中，CAAR的信号传导域包含CD3ζ(CD247)的信号传导域。在一些实施例中，CAAR的信号传导域包含SEQ ID NO:69的序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的序列，或与其具有1、2、3、4或5个氨基酸残基差异的序列。

其他区

在一些实施例中，CAAR还包含连接子。如本文所提供的术语“连接子”是连接CAAR的各种组分的多肽。

在一些实施例中，连接子插入跨膜域和胞内域之间。在一些实施例中，连接子在胞内域的信号传导域和共刺激域之间。

在一些实施例中，连接子包含长度在2至20个氨基酸残基之间的甘氨酸-丝氨酸(GS)双联体。示例性GS双联体包括GS连接子：SEQ ID NO:70。在一些实施例中，本文提供的多核苷酸包含编码连接子的核苷酸序列。

在一些实施例中，本文提供的CAAR从N端到C端包含：CD8α的信号肽、nAChR的免疫原性片段(例如，选自表2的序列或其任何组合)、CD8α的铰链区、CD8α的跨膜域、CD137的胞内域和CD3ζ的信号传导域。

在一些实施例中，本文提供的多核苷酸编码CAAR，其从N端到C端包含：CD8α的信号肽、nAChR的免疫原性片段(例如，选自表2的序列或其任何组合)、CD8α的铰链区、CD8α的跨膜域、CD137的胞内域和CD3ζ的信号传导域。

在一些实施例中，CAAR表现出对针对nAChR或其免疫原性片段的自身抗体的高亲和力。如本文所用，术语“亲和力”是指免疫球蛋白分子或其片段与抗原之间的非共价相互作用的强度。结合亲和力可以用Kd值，即解离常数表示，其通过本领域已知的任何方法确定，包括但不限于酶联免疫吸附测定(ELISA)、表面等离子体共振或流式细胞术(如FACS)。在某些实施例中，CAAR对nAChR的自身抗体的结合亲和力小于50nM、25nM、10nM、5nM、4nM、3nM、2nM或1nM。

载体

在另一个方面，本公开提供了一种载体，其包含编码本文所述的CAAR的多核苷酸。编码CAAR的多核苷酸可以插入本领域已知的不同类型的载体中，例如质粒、噬菌粒、噬菌体衍生物、来源于动物病毒的病毒载体、粘粒、转座子、定点插入载体(例如CRISPR、锌指核酸酶、TALEN)或自杀式表达载体。在一些实施例中，载体是DNA或RNA。

在一些实施例中，多核苷酸可操作地连接于载体中的至少一个调节性多核苷酸元件以用于表达CAAR。典型的载体含有各种调节性多核苷酸元件，例如调节插入的多核苷酸表达的元件(例如转录和翻译终止子、起始序列和启动子)，调节载体在宿主细胞中复制的元件(例如复制起点)，以及调节载体整合到宿主基因组中的元件(例如转座子的末端重复序列)。CAAR的表达可以通过将编码CAAR的多核苷酸可操作地连接于启动子，并将该构建体掺入载体中来实现。组成型启动子(如CMV启动子、SV40启动子和MMTV启动子)或诱导型启动子(如金属硫蛋白启动子、糖皮质激素启动子和孕酮启动子)都可考虑用于本公开。在一些实施例中，载体是表达载体。表达载体包含足够的顺式作用元件用于表达；其他表达元件可以由宿主细胞或在体外表达系统中提供。

为了评估CAAR的表达，载体还可以包含可选标记基因或报告基因或两者，以用于鉴定和选择引入载体的细胞。有用的可选标记包括例如抗生素抗性基因，如neo等。有用的报告基因包括例如荧光素酶、β-半乳糖苷酶、氯霉素乙酰转移酶、分泌型碱性磷酸酶或绿色荧光蛋白基因。

在一些实施例中，载体是病毒载体。病毒载体可以来源于例如逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒(AAV)、疱疹病毒和慢病毒。有用的病毒载体一般含有在至少一种生物体内起作用的复制起点、启动子、限制性核酸内切酶位点和一个或多个可选标记。在一些实施例中，载体是逆转录病毒载体，如慢病毒载体。慢病毒载体对于将编码CAAR的多核苷酸长期、稳定地整合到非增殖细胞的基因组中特别有用，从而使CAAR在宿主细胞，如宿主T细胞中稳定表达。

在一些实施例中，载体是mRNA，其可以被电穿孔到宿主细胞中。由于mRNA会随着细胞分裂而被稀释，所以mRNA的表达不会是永久性的。

在一些实施例中，载体是基于转座子的表达载体。转座子是可以改变其在基因组内位置的DNA序列。在转座子系统中，编码CAAR的多核苷酸侧面是由介导转座子移动的转座酶可识别的末端重复序列。转座酶可以作为蛋白质共递送、与CAAR编码在同一载体上或编码在单独的载体上。转座子系统的非限制性实例包括Sleeping Beauty、Piggyback、FrogPrince和Prince Charming。

载体可以通过本领域已知的任何方法，例如通过物理、化学或生物手段引入宿主细胞，例如哺乳动物细胞中。将多核苷酸引入宿主细胞中的物理方法包括磷酸钙沉淀、脂质转染、粒子轰击、显微注射、电穿孔等。生物方法包括使用病毒载体，特别是逆转录病毒载体，将基因插入哺乳动物，例如人类细胞中。化学方法包括胶体分散系统，如大分子复合物、纳米胶囊、微球、珠粒，以及基于脂质的系统，包括水包油乳剂、胶束、混合胶束和脂质体。

细胞

在一个方面，本公开提供了一种工程细胞，其包含或表达如本文所述的CAAR。在一些实施例中，工程细胞包含编码CAAR的多核苷酸或包含CAAR多核苷酸的载体。在一些实施例中，工程细胞包含多个CAAR，其包含nAChR的不同免疫原性片段。

如本文所述的工程细胞是经基因修饰的免疫细胞，可用于本公开的免疫细胞包括T细胞、自然杀伤(NK)细胞、不变NK细胞或NKT细胞，以及其他效应细胞。在一些实施例中，免疫细胞是原代细胞、来源于原代细胞的扩增细胞或来源于体外分化的干细胞的细胞。

包含或表达CAAR的工程细胞对B细胞表达的基于自身抗体的BCR具有高亲和力是有用的，其中所述自身抗体特异性结合nAChR或其免疫原性片段。因此，工程细胞可以诱导直接杀伤抗nAChR B细胞或间接杀伤表达抗nAChR自身抗体的浆细胞。在一些实施例中，工程细胞对与Fc受体结合的针对nAChR的自身抗体具有低亲和力。

在另一个方面，本公开提供了一种制造表达如本文所述的CAAR的工程细胞的方法。在一些实施例中，所述方法包括选自以下的一个或多个步骤：从来源获得细胞、培养细胞、激活细胞、扩增细胞和用包含CAAR多核苷酸的载体工程改造细胞。

在另一个方面，本公开提供了一种使用工程细胞进行细胞疗法的方法，其中工程细胞被引入受试者体内。在一些实施例中，受试者是获得细胞的同一受试者(自体细胞)。

细胞来源

工程细胞可以来源于从受试者，例如人类受试者分离的免疫细胞。在一些实施例中，免疫细胞是从感兴趣的受试者获得，例如疑似患有特定疾病或病况的受试者，疑似具有特定疾病或病况倾向的受试者，将接受、正在接受或已经接受特定疾病或病况治疗的受试者，作为健康志愿者或健康捐赠者的受试者，或来自血库。因此，细胞对于感兴趣的受试者可以是自体的或同种异体的。同种异体供体细胞可能与人类白细胞抗原(HLA)不相容，因此可以处理同种异体细胞以降低免疫原性。

免疫细胞可以从其在受试者体内驻留的任何位置收集，包括但不限于血液、脐带血、脾脏、胸腺、淋巴结、胸腔积液、脾脏组织和骨髓。分离的免疫细胞可以直接使用，或其可以储存一段时间，如通过冷冻。

在一些实施例中，工程细胞来源于T细胞。T细胞可以通过本领域技术人员已知的许多技术，如单采血液成分术从受试者采集的血液中获得。

在一些实施例中，一个或多个T细胞群被富集或耗尽对特定标志物，如表面标志物呈阳性或阴性的细胞。此类标志物是在某些T细胞群上不存在或以相对较低的水平表达，但在某些其他T细胞群上存在或以相对较高的水平表达的标志物。在一些实施例中，分离出CD4+辅助性和CD8+细胞毒性T细胞。在一些实施例中，CD8+和CD4+T细胞被进一步富集或耗尽初始干细胞、中央记忆干细胞、效应记忆和/或中央记忆干细胞，例如通过基于与各自亚群相关的表面抗原的正向或负向选择。

细胞的激活和扩增

在一些实施例中，免疫细胞在基因修饰之前被激活和扩增。在其他实施例中，免疫细胞在使用前被激活但没有扩增，或者既没有激活也没有扩增。

激活和扩增免疫细胞的方法已经在本领域中描述，并且可以用于本文描述的方法中。例如，T细胞可以通过与附接有刺激CD3/TCR复合体相关信号的药剂和刺激T细胞表面上的共刺激分子的配体的表面接触来激活和扩增。为了刺激CD4+T细胞或CD8+T细胞的增殖，可以使用抗CD3抗体和抗CD28抗体。

治疗方法

在一个方面，本公开提供了一种治疗或预防有需要的受试者的与抗nAChR自身抗体相关的病症的方法，其包括有效量的本文所述的工程细胞。在一些实施例中，与抗nAChR自身抗体相关的病症是神经肌肉接头损伤疾病。在一些实施例中，神经肌肉接头损伤疾病是重症肌无力。

在一些实施例中，包含或表达CAAR的工程细胞来源于从受试者分离的T细胞，其离体扩增，经工程改造以包含表达CAAR的载体，并输入受试者体内。工程细胞(例如T细胞)识别表达和呈现基于自身抗体的BCR或分泌自身抗体的B细胞，其中自身抗体特异性靶向nAChR，并且工程细胞被激活，导致靶向的B细胞被杀伤。在一些实施例中，工程细胞(例如T细胞)是自体细胞。

在某些实施例中，治疗方法还包括施用增加工程细胞功效的药剂。例如，将促进本公开的工程细胞的生长和激活的生长因子与细胞同时或随后施用于受试者。生长因子可以是促进免疫细胞生长和活化的任何合适的生长因子。合适的免疫细胞生长因子的实例包括白细胞介素(IL)-2、IL-7、IL-15和IL-12，它们可以单独使用或以各种组合使用，如IL-2和IL-7，IL-2和IL-15，IL-7和IL-15，IL-2、IL-7和IL-15，IL-12和IL-7、IL-12和IL-15，或IL-12和IL2。

在一些实施例中，治疗方法还包括施用减少或改善与施用工程细胞相关的副作用的药剂。示例性副作用包括细胞因子反应综合征(CRS)和嗜血细胞淋巴组织细胞增生症(HLH，也称为巨噬细胞激活综合征(MAS))。经施用以治疗副作用的药剂可以是中和可溶性因子如IFN-γ、IFN-α、IL-2和IL-6的药剂。此类药剂包括但不限于TNF-α的抑制剂(例如依那西普(entanercept))和IL-6的抑制剂(例如托珠单抗(tocilizumab))。

治疗有效量的工程细胞可以通过多种途径施用，包括肠胃外施用，例如静脉内、腹膜内、肌肉内、胸骨内或关节内注射或输注。

工程细胞可以按照与抗nAChR自身抗体相关的病症的严重程度相符的治疗方案来施用，例如在一天至数天内单次或数次给药，或在较长时间内定期给药。制剂中采用的精确剂量也将取决于施用途径，并且应根据从业者的判断和每个病人的情况来决定。工程细胞的治疗有效量将取决于所治疗的受试者、病痛的严重程度和类型以及施用方式。在一些实施例中，可用于治疗人类受试者的剂量范围为至少3.8×10⁴、至少3.8×10⁵、至少3.8×10⁶、至少3.8×10⁷、至少3.8×10⁸、至少3.8×10⁹或至少3.8×10¹⁰个细胞/m²。在某个实施例中，用于治疗人类受试者的剂量范围为约3.8×10⁹至约3.8×10¹⁰个细胞/m²。在另外的实施例中，工程细胞的治疗有效量可以在每公斤体重约5×10⁶个细胞至每公斤体重约7.5×10⁸个细胞之间，如每公斤体重约2×10⁷个细胞至约5×10⁸个细胞，或每公斤体重约5×10⁷个细胞至约2×10⁸个细胞。本领域技术人员可以根据受试者的年龄、体重、性别和生理状况容易地确定工程细胞的精确量。有效剂量可以从体外或动物模型测试系统得出的剂量反应曲线中推算出来。

在一些实施例中，包含CAAR的工程细胞可以相对于用于治疗或预防的额外药剂在之前、期间、之后或以任何组合施用。

在另一个方面，本公开还提供了一种药物组合物，其包含工程细胞和药学上可接受的稀释剂和/或载体。示例性的稀释剂和/或载体包括缓冲剂，如中性缓冲盐水、磷酸盐缓冲盐水等；碳水化合物，如葡萄糖、甘露糖、蔗糖或葡聚糖、甘露糖醇；蛋白质；多肽或氨基酸，如甘氨酸；抗氧化剂；螯合剂，如EDTA或谷胱甘肽；佐剂(例如氢氧化铝)；和防腐剂。在一个方面，本发明的组合物被配制用于静脉内施用。

表3.CAAR中包含的域的示例性序列

实例

虽然已经参照具体实施例(其中一些是优选实施例)特别显示和描述了本公开，但本领域的技术人员应理解，在不脱离本文所公开的本公开的精神和范围的情况下，可以在其中进行形式上和细节上的各种改变。

实例1.

CAAR在人类原代T细胞中的表达.设计并生成感兴趣的CAAR构建体(图2)。培养、扩增、刺激并用CAAR转导或模拟转导原代人类T细胞。验证CAAR在工程T细胞(CAAR T细胞)中的细胞表面表达。

CAAR T细胞的体外功效测试.将CAAR T细胞(或对照T细胞)与表达抗nAChR BCR的细胞(目标细胞)共同培养。目标细胞，如杂交瘤细胞，在内部产生或从ATCC购买(例如，5A1-2A8细胞，登录号PTA-8513；1H11-2E10细胞，登录号PTA-8512；mAb35细胞，登录号TIB-175)。细胞毒性是根据目标细胞的裂解百分比来计算的。CAAR T细胞特异性杀伤目标细胞，但不杀伤非目标细胞，表明CAAR T细胞杀伤目标细胞的特异性。

CAART细胞的体内功效测试.在用静脉内免疫球蛋白对小鼠进行预处理以使FcyR介导的针对BCR表达细胞的毒性最小化之后，将目标细胞静脉注射到NSG小鼠体内。几天后，静脉内注射CAAR T细胞(或对照T细胞)。对生物发光和/或针对nAChR的血清自身抗体进行定量，以监测CAAR T细胞的功效。CAAR T细胞控制目标细胞的生长，而阴性对照T细胞不控制目标细胞的生长。

序列表

<110> 苏州博腾生物制药有限公司

<120> 靶向烟碱乙酰胆碱受体自身抗体的组合物和方法

<130> 077963-8002CN01

<160> 70

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 482

<212> PRT

<213> 人

<400> 1

Met Glu Pro Trp Pro Leu Leu Leu Leu Phe Ser Leu Cys Ser Ala Gly

1 5 10 15

Leu Val Leu Gly Ser Glu His Glu Thr Arg Leu Val Ala Lys Leu Phe

20 25 30

Lys Asp Tyr Ser Ser Val Val Arg Pro Val Glu Asp His Arg Gln Val

35 40 45

Val Glu Val Thr Val Gly Leu Gln Leu Ile Gln Leu Ile Asn Val Asp

50 55 60

Glu Val Asn Gln Ile Val Thr Thr Asn Val Arg Leu Lys Gln Gly Asp

65 70 75 80

Met Val Asp Leu Pro Arg Pro Ser Cys Val Thr Leu Gly Val Pro Leu

85 90 95

Phe Ser His Leu Gln Asn Glu Gln Trp Val Asp Tyr Asn Leu Lys Trp

100 105 110

Asn Pro Asp Asp Tyr Gly Gly Val Lys Lys Ile His Ile Pro Ser Glu

115 120 125

Lys Ile Trp Arg Pro Asp Leu Val Leu Tyr Asn Asn Ala Asp Gly Asp

130 135 140

Phe Ala Ile Val Lys Phe Thr Lys Val Leu Leu Gln Tyr Thr Gly His

145 150 155 160

Ile Thr Trp Thr Pro Pro Ala Ile Phe Lys Ser Tyr Cys Glu Ile Ile

165 170 175

Val Thr His Phe Pro Phe Asp Glu Gln Asn Cys Ser Met Lys Leu Gly

180 185 190

Thr Trp Thr Tyr Asp Gly Ser Val Val Ala Ile Asn Pro Glu Ser Asp

195 200 205

Gln Pro Asp Leu Ser Asn Phe Met Glu Ser Gly Glu Trp Val Ile Lys

210 215 220

Glu Ser Arg Gly Trp Lys His Ser Val Thr Tyr Ser Cys Cys Pro Asp

225 230 235 240

Thr Pro Tyr Leu Asp Ile Thr Tyr His Phe Val Met Gln Arg Leu Pro

245 250 255

Leu Tyr Phe Ile Val Asn Val Ile Ile Pro Cys Leu Leu Phe Ser Phe

260 265 270

Leu Thr Gly Leu Val Phe Tyr Leu Pro Thr Asp Ser Gly Glu Lys Met

275 280 285

Thr Leu Ser Ile Ser Val Leu Leu Ser Leu Thr Val Phe Leu Leu Val

290 295 300

Ile Val Glu Leu Ile Pro Ser Thr Ser Ser Ala Val Pro Leu Ile Gly

305 310 315 320

Lys Tyr Met Leu Phe Thr Met Val Phe Val Ile Ala Ser Ile Ile Ile

325 330 335

Thr Val Ile Val Ile Asn Thr His His Arg Ser Pro Ser Thr His Val

340 345 350

Met Pro Asn Trp Val Arg Lys Val Phe Ile Asp Thr Ile Pro Asn Ile

355 360 365

Met Phe Phe Ser Thr Met Lys Arg Pro Ser Arg Glu Lys Gln Asp Lys

370 375 380

Lys Ile Phe Thr Glu Asp Ile Asp Ile Ser Asp Ile Ser Gly Lys Pro

385 390 395 400

Gly Pro Pro Pro Met Gly Phe His Ser Pro Leu Ile Lys His Pro Glu

405 410 415

Val Lys Ser Ala Ile Glu Gly Ile Lys Tyr Ile Ala Glu Thr Met Lys

420 425 430

Ser Asp Gln Glu Ser Asn Asn Ala Ala Ala Glu Trp Lys Tyr Val Ala

435 440 445

Met Val Met Asp His Ile Leu Leu Gly Val Phe Met Leu Val Cys Ile

450 455 460

Ile Gly Thr Leu Ala Val Phe Ala Gly Arg Leu Ile Glu Leu Asn Gln

465 470 475 480

Gln Gly

<210> 2

<211> 1446

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 2

atggagccct ggcctctcct cctgctcttt agcctttgct cagctggcct cgtcctgggc 60

tccgaacatg agacccgtct ggtggcaaag ctatttaaag actacagcag cgtggtgcgg 120

ccagtggaag accaccgcca ggtcgtggag gtcaccgtgg gcctgcagct gatacagctc 180

atcaatgtgg atgaagtaaa tcagatcgtg acaaccaatg tgcgtctgaa acagggtgac 240

atggtagatc tgccacgccc cagctgcgtg actttgggag ttcctttgtt ttctcatctg 300

cagaatgagc aatgggtgga ttacaaccta aaatggaatc cagatgacta tggcggtgtg 360

aaaaaaattc acattccttc agaaaagatc tggcgcccag accttgttct ctataacaat 420

gcagatggtg actttgctat tgtcaagttc accaaagtgc tcctgcagta cactggccac 480

atcacgtgga cacctccagc catctttaaa agctactgtg agatcatcgt cacccacttt 540

ccctttgatg aacagaactg cagcatgaag ctgggcacct ggacctacga cggctctgtc 600

gtggccatca acccggaaag cgaccagcca gacctgagca acttcatgga gagcggggag 660

tgggtgatca aggagtcccg gggctggaag cactccgtga cctattcctg ctgccccgac 720

accccctacc tggacatcac ctaccacttc gtcatgcagc gcctgcccct ctacttcatc 780

gtcaacgtca tcatcccctg cctgctcttc tccttcttaa ctggcctggt attctacctg 840

cccacagact caggggagaa gatgactctg agcatctctg tcttactgtc tttgactgtg 900

ttccttctgg tcatcgtgga gctgatcccc tccacgtcca gtgctgtgcc cttgattgga 960

aaatacatgc tgttcaccat ggtgttcgtc attgcctcca tcatcatcac tgtcatcgtc 1020

atcaacacac accaccgctc acccagcacc catgtcatgc ccaactgggt gcggaaggtt 1080

tttatcgaca ctatcccaaa tatcatgttt ttctccacaa tgaaaagacc atccagagaa 1140

aagcaagaca aaaagatttt tacagaagac attgatatct ctgacatttc tggaaagcca 1200

gggcctccac ccatgggctt ccactctccc ctgatcaaac accccgaggt gaaaagtgcc 1260

atcgagggca tcaagtacat cgcagagacc atgaagtcag accaggagtc taacaatgcg 1320

gcggcagagt ggaagtacgt tgcaatggtg atggaccaca tactcctcgg agtcttcatg 1380

cttgtttgca tcatcggaac cctagccgtg tttgcaggtc gactcattga attaaatcag 1440

caagga 1446

<210> 3

<211> 529

<212> PRT

<213> 人

<400> 3

Met Gly Pro Ser Cys Pro Val Phe Leu Ser Phe Thr Lys Leu Ser Leu

1 5 10 15

Trp Trp Leu Leu Leu Thr Pro Ala Gly Gly Glu Glu Ala Lys Arg Pro

20 25 30

Pro Pro Arg Ala Pro Gly Asp Pro Leu Ser Ser Pro Ser Pro Thr Ala

35 40 45

Leu Pro Gln Gly Gly Ser His Thr Glu Thr Glu Asp Arg Leu Phe Lys

50 55 60

His Leu Phe Arg Gly Tyr Asn Arg Trp Ala Arg Pro Val Pro Asn Thr

65 70 75 80

Ser Asp Val Val Ile Val Arg Phe Gly Leu Ser Ile Ala Gln Leu Ile

85 90 95

Asp Val Asp Glu Lys Asn Gln Met Met Thr Thr Asn Val Trp Leu Lys

100 105 110

Gln Glu Trp Ser Asp Tyr Lys Leu Arg Trp Asn Pro Thr Asp Phe Gly

115 120 125

Asn Ile Thr Ser Leu Arg Val Pro Ser Glu Met Ile Trp Ile Pro Asp

130 135 140

Ile Val Leu Tyr Asn Asn Ala Asp Gly Glu Phe Ala Val Thr His Met

145 150 155 160

Thr Lys Ala His Leu Phe Ser Thr Gly Thr Val His Trp Val Pro Pro

165 170 175

Ala Ile Tyr Lys Ser Ser Cys Ser Ile Asp Val Thr Phe Phe Pro Phe

180 185 190

Asp Gln Gln Asn Cys Lys Met Lys Phe Gly Ser Trp Thr Tyr Asp Lys

195 200 205

Ala Lys Ile Asp Leu Glu Gln Met Glu Gln Thr Val Asp Leu Lys Asp

210 215 220

Tyr Trp Glu Ser Gly Glu Trp Ala Ile Val Asn Ala Thr Gly Thr Tyr

225 230 235 240

Asn Ser Lys Lys Tyr Asp Cys Cys Ala Glu Ile Tyr Pro Asp Val Thr

245 250 255

Tyr Ala Phe Val Ile Arg Arg Leu Pro Leu Phe Tyr Thr Ile Asn Leu

260 265 270

Ile Ile Pro Cys Leu Leu Ile Ser Cys Leu Thr Val Leu Val Phe Tyr

275 280 285

Leu Pro Ser Asp Cys Gly Glu Lys Ile Thr Leu Cys Ile Ser Val Leu

290 295 300

Leu Ser Leu Thr Val Phe Leu Leu Leu Ile Thr Glu Ile Ile Pro Ser

305 310 315 320

Thr Ser Leu Val Ile Pro Leu Ile Gly Glu Tyr Leu Leu Phe Thr Met

325 330 335

Ile Phe Val Thr Leu Ser Ile Val Ile Thr Val Phe Val Leu Asn Val

340 345 350

His His Arg Ser Pro Ser Thr His Thr Met Pro His Trp Val Arg Gly

355 360 365

Ala Leu Leu Gly Cys Val Pro Arg Trp Leu Leu Met Asn Arg Pro Pro

370 375 380

Pro Pro Val Glu Leu Cys His Pro Leu Arg Leu Lys Leu Ser Pro Ser

385 390 395 400

Tyr His Trp Leu Glu Ser Asn Val Asp Ala Glu Glu Arg Glu Val Val

405 410 415

Val Glu Glu Glu Asp Arg Trp Ala Cys Ala Gly His Val Ala Pro Ser

420 425 430

Val Gly Thr Leu Cys Ser His Gly His Leu His Ser Gly Ala Ser Gly

435 440 445

Pro Lys Ala Glu Ala Leu Leu Gln Glu Gly Glu Leu Leu Leu Ser Pro

450 455 460

His Met Gln Lys Ala Leu Glu Gly Val His Tyr Ile Ala Asp His Leu

465 470 475 480

Arg Ser Glu Asp Ala Asp Ser Ser Val Lys Glu Asp Trp Lys Tyr Val

485 490 495

Ala Met Val Ile Asp Arg Ile Phe Leu Trp Leu Phe Ile Ile Val Cys

500 505 510

Phe Leu Gly Thr Ile Gly Leu Phe Leu Pro Pro Phe Leu Ala Gly Met

515 520 525

Ile

<210> 4

<211> 1587

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 4

atgggcccct cctgtcctgt gttcctgtcc ttcacaaagc tcagcctgtg gtggctcctt 60

ctgaccccag caggtggaga ggaagctaag cgcccacctc ccagggctcc tggagaccca 120

ctctcctctc ccagtcccac ggcattgccg cagggaggct cgcataccga gactgaggac 180

cggctcttca aacacctctt ccggggctac aaccgctggg cgcgcccggt gcccaacact 240

tcagacgtgg tgattgtgcg ctttggactg tccatcgctc agctcatcga tgtggatgag 300

aagaaccaaa tgatgaccac caacgtctgg ctaaaacagg agtggagcga ctacaaactg 360

cgctggaacc ccactgattt tggcaacatc acatctctca gggtcccttc tgagatgatc 420

tggatccccg acattgttct ctacaacaat gcagatgggg agtttgcagt gacccacatg 480

accaaggccc acctcttctc cacgggcact gtgcactggg tgcccccggc catctacaag 540

agctcctgca gcatcgacgt caccttcttc cccttcgacc agcagaactg caagatgaag 600

tttggctcct ggacttatga caaggccaag atcgacctgg agcagatgga gcagactgtg 660

gacctgaagg actactggga gagcggcgag tgggccatcg tcaatgccac gggcacctac 720

aacagcaaga agtacgactg ctgcgccgag atctaccccg acgtcaccta cgccttcgtc 780

atccggcggc tgccgctctt ctacaccatc aacctcatca tcccctgcct gctcatctcc 840

tgcctcactg tgctggtctt ctacctgccc tccgactgcg gcgagaagat cacgctgtgc 900

atttcggtgc tgctgtcact caccgtcttc ctgctgctca tcactgagat catcccgtcc 960

acctcgctgg tcatcccgct catcggcgag tacctgctgt tcaccatgat cttcgtcacc 1020

ctgtccatcg tcatcaccgt cttcgtgctc aatgtgcacc accgctcccc cagcacccac 1080

accatgcccc actgggtgcg gggggccctt ctgggctgtg tgccccggtg gcttctgatg 1140

aaccggcccc caccacccgt ggagctctgc caccccctac gcctgaagct cagcccctct 1200

tatcactggc tggagagcaa cgtggatgcc gaggagaggg aggtggtggt ggaggaggag 1260

gacagatggg catgtgcagg tcatgtggcc ccctctgtgg gcaccctctg cagccacggc 1320

cacctgcact ctggggcctc aggtcccaag gctgaggctc tgctgcagga gggtgagctg 1380

ctgctatcac cccacatgca gaaggcactg gaaggtgtgc actacattgc cgaccacctg 1440

cggtctgagg atgctgactc ttcggtgaag gaggactgga agtatgttgc catggtcatc 1500

gacaggatct tcctctggct gtttatcatc gtctgcttcc tggggaccat cggcctcttt 1560

ctgcctccgt tcctagctgg aatgatc 1587

<210> 5

<211> 505

<212> PRT

<213> 人

<400> 5

Met Gly Ser Gly Pro Leu Ser Leu Pro Leu Ala Leu Ser Pro Pro Arg

1 5 10 15

Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ser Leu Leu Pro Val Ala Arg Ala Ser

20 25 30

Glu Ala Glu His Arg Leu Phe Glu Arg Leu Phe Glu Asp Tyr Asn Glu

35 40 45

Ile Ile Arg Pro Val Ala Asn Val Ser Asp Pro Val Ile Ile His Phe

50 55 60

Glu Val Ser Met Ser Gln Leu Val Lys Val Asp Glu Val Asn Gln Ile

65 70 75 80

Met Glu Thr Asn Leu Trp Leu Lys Gln Ile Trp Asn Asp Tyr Lys Leu

85 90 95

Lys Trp Asn Pro Ser Asp Tyr Gly Gly Ala Glu Phe Met Arg Val Pro

100 105 110

Ala Gln Lys Ile Trp Lys Pro Asp Ile Val Leu Tyr Asn Asn Ala Val

115 120 125

Gly Asp Phe Gln Val Asp Asp Lys Thr Lys Ala Leu Leu Lys Tyr Thr

130 135 140

Gly Glu Val Thr Trp Ile Pro Pro Ala Ile Phe Lys Ser Ser Cys Lys

145 150 155 160

Ile Asp Val Thr Tyr Phe Pro Phe Asp Tyr Gln Asn Cys Thr Met Lys

165 170 175

Phe Gly Ser Trp Ser Tyr Asp Lys Ala Lys Ile Asp Leu Val Leu Ile

180 185 190

Gly Ser Ser Met Asn Leu Lys Asp Tyr Trp Glu Ser Gly Glu Trp Ala

195 200 205

Ile Ile Lys Ala Pro Gly Tyr Lys His Asp Ile Lys Tyr Asn Cys Cys

210 215 220

Glu Glu Ile Tyr Pro Asp Ile Thr Tyr Ser Leu Tyr Ile Arg Arg Leu

225 230 235 240

Pro Leu Phe Tyr Thr Ile Asn Leu Ile Ile Pro Cys Leu Leu Ile Ser

245 250 255

Phe Leu Thr Val Leu Val Phe Tyr Leu Pro Ser Asp Cys Gly Glu Lys

260 265 270

Val Thr Leu Cys Ile Ser Val Leu Leu Ser Leu Thr Val Phe Leu Leu

275 280 285

Val Ile Thr Glu Thr Ile Pro Ser Thr Ser Leu Val Ile Pro Leu Ile

290 295 300

Gly Glu Tyr Leu Leu Phe Thr Met Ile Phe Val Thr Leu Ser Ile Val

305 310 315 320

Ile Thr Val Phe Val Leu Asn Val His Tyr Arg Thr Pro Thr Thr His

325 330 335

Thr Met Pro Ser Trp Val Lys Thr Val Phe Leu Asn Leu Leu Pro Arg

340 345 350

Val Met Phe Met Thr Arg Pro Thr Ser Asn Glu Gly Asn Ala Gln Lys

355 360 365

Pro Arg Pro Leu Tyr Gly Ala Glu Leu Ser Asn Leu Asn Cys Phe Ser

370 375 380

Arg Ala Glu Ser Lys Gly Cys Lys Glu Gly Tyr Pro Cys Gln Asp Gly

385 390 395 400

Met Cys Gly Tyr Cys His His Arg Arg Ile Lys Ile Ser Asn Phe Ser

405 410 415

Ala Asn Leu Thr Arg Ser Ser Ser Ser Glu Ser Val Asp Ala Val Leu

420 425 430

Ser Leu Ser Ala Leu Ser Pro Glu Ile Lys Glu Ala Ile Gln Ser Val

435 440 445

Lys Tyr Ile Ala Glu Asn Met Lys Ala Gln Asn Glu Ala Lys Glu Ile

450 455 460

Gln Asp Asp Trp Lys Tyr Val Ala Met Val Ile Asp Arg Ile Phe Leu

465 470 475 480

Trp Val Phe Thr Leu Val Cys Ile Leu Gly Thr Ala Gly Leu Phe Leu

485 490 495

Gln Pro Leu Met Ala Arg Glu Asp Ala

500 505

<210> 6

<211> 1515

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 6

atgggctctg gcccgctctc gctgcccctg gcgctgtcgc cgccgcggct gctgctgctg 60

ctgctgctgt ctctgctgcc agtggccagg gcctcagagg ctgagcaccg tctatttgag 120

cggctgtttg aagattacaa tgagatcatc cggcctgtag ccaacgtgtc tgacccagtc 180

atcatccatt tcgaggtgtc catgtctcag ctggtgaagg tggatgaagt aaaccagatc 240

atggagacca acctgtggct caagcaaatc tggaatgact acaagctgaa atggaacccc 300

tctgactatg gtggggcaga gttcatgcgt gtccctgcac agaagatctg gaagccagac 360

attgtgctgt ataacaatgc tgttggggat ttccaggtgg acgacaagac caaagcctta 420

ctcaagtaca ctggggaggt gacttggata cctccggcca tctttaagag ctcctgtaaa 480

atcgacgtga cctacttccc gtttgattac caaaactgta ccatgaagtt cggttcctgg 540

tcctacgata aggcgaaaat cgatctggtc ctgatcggct cttccatgaa cctcaaggac 600

tattgggaga gcggcgagtg ggccatcatc aaagccccag gctacaaaca cgacatcaag 660

tacaactgct gcgaggagat ctaccccgac atcacatact cgctgtacat ccggcgcctg 720

cccttgttct acaccatcaa cctcatcatc ccctgcctgc tcatctcctt cctcactgtg 780

ctcgtcttct acctgccctc cgactgcggt gagaaggtga ccctgtgcat ttctgtcctc 840

ctctccctga cggtgtttct cctggtgatc actgagacca tcccttccac ctcgctggtc 900

atccccctga ttggagagta cctcctgttc accatgattt ttgtaacctt gtccatcgtc 960

atcaccgtct tcgtgctcaa cgtgcactac agaaccccga cgacacacac aatgccctca 1020

tgggtgaaga ctgtattctt gaacctgctc cccagggtca tgttcatgac caggccaaca 1080

agcaacgagg gcaacgctca gaagccgagg cccctctacg gtgccgagct ctcaaatctg 1140

aattgcttca gccgcgcaga gtccaaaggc tgcaaggagg gctacccctg ccaggacggg 1200

atgtgtggtt actgccacca ccgcaggata aaaatctcca atttcagtgc taacctcacg 1260

agaagctcta gttctgaatc tgttgatgct gtgctgtccc tctctgcttt gtcaccagaa 1320

atcaaagaag ccatccaaag tgtcaagtat attgctgaaa atatgaaagc acaaaatgaa 1380

gccaaagaga ttcaagatga ttggaagtat gttgccatgg tgattgatcg tatttttctg 1440

tgggttttca ccctggtgtg cattctaggg acagcaggat tgtttctgca acccctgatg 1500

gccagggaag atgca 1515

<210> 7

<211> 627

<212> PRT

<213> 人

<400> 7

Met Glu Leu Gly Gly Pro Gly Ala Pro Arg Leu Leu Pro Pro Leu Leu

1 5 10 15

Leu Leu Leu Gly Thr Gly Leu Leu Arg Ala Ser Ser His Val Glu Thr

20 25 30

Arg Ala His Ala Glu Glu Arg Leu Leu Lys Lys Leu Phe Ser Gly Tyr

35 40 45

Asn Lys Trp Ser Arg Pro Val Ala Asn Ile Ser Asp Val Val Leu Val

50 55 60

Arg Phe Gly Leu Ser Ile Ala Gln Leu Ile Asp Val Asp Glu Lys Asn

65 70 75 80

Gln Met Met Thr Thr Asn Val Trp Val Lys Gln Glu Trp His Asp Tyr

85 90 95

Lys Leu Arg Trp Asp Pro Ala Asp Tyr Glu Asn Val Thr Ser Ile Arg

100 105 110

Ile Pro Ser Glu Leu Ile Trp Arg Pro Asp Ile Val Leu Tyr Asn Asn

115 120 125

Ala Asp Gly Asp Phe Ala Val Thr His Leu Thr Lys Ala His Leu Phe

130 135 140

His Asp Gly Arg Val Gln Trp Thr Pro Pro Ala Ile Tyr Lys Ser Ser

145 150 155 160

Cys Ser Ile Asp Val Thr Phe Phe Pro Phe Asp Gln Gln Asn Cys Thr

165 170 175

Met Lys Phe Gly Ser Trp Thr Tyr Asp Lys Ala Lys Ile Asp Leu Val

180 185 190

Asn Met His Ser Arg Val Asp Gln Leu Asp Phe Trp Glu Ser Gly Glu

195 200 205

Trp Val Ile Val Asp Ala Val Gly Thr Tyr Asn Thr Arg Lys Tyr Glu

210 215 220

Cys Cys Ala Glu Ile Tyr Pro Asp Ile Thr Tyr Ala Phe Val Ile Arg

225 230 235 240

Arg Leu Pro Leu Phe Tyr Thr Ile Asn Leu Ile Ile Pro Cys Leu Leu

245 250 255

Ile Ser Cys Leu Thr Val Leu Val Phe Tyr Leu Pro Ser Glu Cys Gly

260 265 270

Glu Lys Ile Thr Leu Cys Ile Ser Val Leu Leu Ser Leu Thr Val Phe

275 280 285

Leu Leu Leu Ile Thr Glu Ile Ile Pro Ser Thr Ser Leu Val Ile Pro

290 295 300

Leu Ile Gly Glu Tyr Leu Leu Phe Thr Met Ile Phe Val Thr Leu Ser

305 310 315 320

Ile Val Ile Thr Val Phe Val Leu Asn Val His His Arg Ser Pro Arg

325 330 335

Thr His Thr Met Pro Thr Trp Val Arg Arg Val Phe Leu Asp Ile Val

340 345 350

Pro Arg Leu Leu Leu Met Lys Arg Pro Ser Val Val Lys Asp Asn Cys

355 360 365

Arg Arg Leu Ile Glu Ser Met His Lys Met Ala Ser Ala Pro Arg Phe

370 375 380

Trp Pro Glu Pro Glu Gly Glu Pro Pro Ala Thr Ser Gly Thr Gln Ser

385 390 395 400

Leu His Pro Pro Ser Pro Ser Phe Cys Val Pro Leu Asp Val Pro Ala

405 410 415

Glu Pro Gly Pro Ser Cys Lys Ser Pro Ser Asp Gln Leu Pro Pro Gln

420 425 430

Gln Pro Leu Glu Ala Glu Lys Ala Ser Pro His Pro Ser Pro Gly Pro

435 440 445

Cys Arg Pro Pro His Gly Thr Gln Ala Pro Gly Leu Ala Lys Ala Arg

450 455 460

Ser Leu Ser Val Gln His Met Ser Ser Pro Gly Glu Ala Val Glu Gly

465 470 475 480

Gly Val Arg Cys Arg Ser Arg Ser Ile Gln Tyr Cys Val Pro Arg Asp

485 490 495

Asp Ala Ala Pro Glu Ala Asp Gly Gln Ala Ala Gly Ala Leu Ala Ser

500 505 510

Arg Asn Thr His Ser Ala Glu Leu Pro Pro Pro Asp Gln Pro Ser Pro

515 520 525

Cys Lys Cys Thr Cys Lys Lys Glu Pro Ser Ser Val Ser Pro Ser Ala

530 535 540

Thr Val Lys Thr Arg Ser Thr Lys Ala Pro Pro Pro His Leu Pro Leu

545 550 555 560

Ser Pro Ala Leu Thr Arg Ala Val Glu Gly Val Gln Tyr Ile Ala Asp

565 570 575

His Leu Lys Ala Glu Asp Thr Asp Phe Ser Val Lys Glu Asp Trp Lys

580 585 590

Tyr Val Ala Met Val Ile Asp Arg Ile Phe Leu Trp Met Phe Ile Ile

595 600 605

Val Cys Leu Leu Gly Thr Val Gly Leu Phe Leu Pro Pro Trp Leu Ala

610 615 620

Gly Met Ile

625

<210> 8

<211> 1881

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 8

atggagctag ggggccccgg agcgccgcgg ctgctgccgc cgctgctgct gcttctgggg 60

accggcctcc tgcgcgccag cagccatgtg gagacccggg cccacgccga ggagcggctc 120

ctgaagaaac tcttctccgg ttacaacaag tggtcccgac ccgtggccaa catctcggac 180

gtggtcctcg tccgcttcgg cctgtccatc gctcagctca ttgacgtgga tgagaagaac 240

cagatgatga ccacgaacgt atgggtgaag caggagtggc acgactacaa gctgcgctgg 300

gacccagctg actatgagaa tgtcacctcc atccgcatcc cctccgagct catctggcgg 360

ccggacatcg tcctctacaa caatgctgac ggggacttcg cggtcaccca cctgaccaag 420

gcccacctgt tccatgacgg gcgggtgcag tggactcccc cggccattta caagagctcc 480

tgcagcatcg acgtcacctt cttccccttc gaccagcaga actgcaccat gaaattcggc 540

tcctggacct acgacaaggc caagatcgac ctggtgaaca tgcacagccg cgtggaccag 600

ctggacttct gggagagtgg cgagtgggtc atcgtggatg ccgtgggcac ctacaacacc 660

aggaagtacg agtgctgtgc cgagatctac ccggacatca cctatgcctt cgtcatccgg 720

cggctgccgc tcttctacac catcaacctc atcatcccct gcctgctcat ctcctgcctc 780

accgtgctgg tcttctacct gccctccgag tgtggcgaga agatcacgct gtgcatctcc 840

gtgctgctgt cgctcaccgt cttcctgctg ctcatcaccg agatcatccc gtccacctca 900

ctggtcatcc cactcatcgg cgagtacctg ctgttcacca tgatcttcgt caccctgtcc 960

atcgtcatca cggtcttcgt gctcaacgtg caccaccgct cgccacgcac gcacaccatg 1020

cccacctggg tacgcagggt cttcctggac atcgtgccac gcctgctcct catgaagcgg 1080

ccgtccgtgg tcaaggacaa ttgccggcgg ctcatcgagt ccatgcataa gatggccagt 1140

gccccgcgct tctggcccga gccagaaggg gagccccctg ccacgagcgg cacccagagc 1200

ctgcacccgc cctcaccgtc cttctgtgtc cccctggatg tgccggctga gcctgggcct 1260

tcctgcaagt caccctccga ccagctccct cctcagcagc ccctggaagc tgagaaagcc 1320

agcccccacc cctcgcctgg accctgccgc ccgccccacg gcacccaggc accagggctg 1380

gccaaagcca ggtccctcag cgtccagcac atgtccagcc ctggcgaagc ggtggaaggc 1440

ggcgtccggt gccggtctcg gagcatccag tactgtgttc cccgagacga tgccgccccc 1500

gaggcagatg gccaggctgc cggcgccctg gcctctcgca acacccactc ggctgagctc 1560

ccacccccag accagccctc tccgtgcaaa tgcacatgca agaaggagcc ctcttcggtg 1620

tccccgagcg ccacggtcaa gacccgcagc accaaagcgc cgcccccgca cctgcccctg 1680

tcgccggccc tgacccgggc ggtggagggc gtccagtaca ttgcagacca cctgaaggcc 1740

gaagacacag acttctcggt gaaggaggac tggaagtacg tggccatggt catcgaccgc 1800

atcttcctct ggatgttcat catcgtctgc ctgctgggga cggtgggcct cttcctgccg 1860

ccctggctgg ctggcatgat c 1881

<210> 9

<211> 468

<212> PRT

<213> 人

<400> 9

Met Ala Ala Arg Gly Ser Gly Pro Arg Ala Leu Arg Leu Leu Leu Leu

1 5 10 15

Val Gln Leu Val Ala Gly Arg Cys Gly Leu Ala Gly Ala Ala Gly Gly

20 25 30

Ala Gln Arg Gly Leu Ser Glu Pro Ser Ser Ile Ala Lys His Glu Asp

35 40 45

Ser Leu Leu Lys Asp Leu Phe Gln Asp Tyr Glu Arg Trp Val Arg Pro

50 55 60

Val Glu His Leu Asn Asp Lys Ile Lys Ile Lys Phe Gly Leu Ala Ile

65 70 75 80

Ser Gln Leu Val Asp Val Asp Glu Lys Asn Gln Leu Met Thr Thr Asn

85 90 95

Val Trp Leu Lys Gln Glu Trp Ile Asp Val Lys Leu Arg Trp Asn Pro

100 105 110

Asp Asp Tyr Gly Gly Ile Lys Val Ile Arg Val Pro Ser Asp Ser Val

115 120 125

Trp Thr Pro Asp Ile Val Leu Phe Asp Asn Ala Asp Gly Arg Phe Glu

130 135 140

Gly Thr Ser Thr Lys Thr Val Ile Arg Tyr Asn Gly Thr Val Thr Trp

145 150 155 160

Thr Pro Pro Ala Asn Tyr Lys Ser Ser Cys Thr Ile Asp Val Thr Phe

165 170 175

Phe Pro Phe Asp Leu Gln Asn Cys Ser Met Lys Phe Gly Ser Trp Thr

180 185 190

Tyr Asp Gly Ser Gln Val Asp Ile Ile Leu Glu Asp Gln Asp Val Asp

195 200 205

Lys Arg Asp Phe Phe Asp Asn Gly Glu Trp Glu Ile Val Ser Ala Thr

210 215 220

Gly Ser Lys Gly Asn Arg Thr Asp Ser Cys Cys Trp Tyr Pro Tyr Val

225 230 235 240

Thr Tyr Ser Phe Val Ile Lys Arg Leu Pro Leu Phe Tyr Thr Leu Phe

245 250 255

Leu Ile Ile Pro Cys Ile Gly Leu Ser Phe Leu Thr Val Leu Val Phe

260 265 270

Tyr Leu Pro Ser Asn Glu Gly Glu Lys Ile Cys Leu Cys Thr Ser Val

275 280 285

Leu Val Ser Leu Thr Val Phe Leu Leu Val Ile Glu Glu Ile Ile Pro

290 295 300

Ser Ser Ser Lys Val Ile Pro Leu Ile Gly Glu Tyr Leu Val Phe Thr

305 310 315 320

Met Ile Phe Val Thr Leu Ser Ile Met Val Thr Val Phe Ala Ile Asn

325 330 335

Ile His His Arg Ser Ser Ser Thr His Asn Ala Met Ala Pro Leu Val

340 345 350

Arg Lys Ile Phe Leu His Thr Leu Pro Lys Leu Leu Cys Met Arg Ser

355 360 365

His Val Asp Arg Tyr Phe Thr Gln Lys Glu Glu Thr Glu Ser Gly Ser

370 375 380

Gly Pro Lys Ser Ser Arg Asn Thr Leu Glu Ala Ala Leu Asp Ser Ile

385 390 395 400

Arg Tyr Ile Thr Arg His Ile Met Lys Glu Asn Asp Val Arg Glu Val

405 410 415

Val Glu Asp Trp Lys Phe Ile Ala Gln Val Leu Asp Arg Met Phe Leu

420 425 430

Trp Thr Phe Leu Phe Val Ser Ile Val Gly Ser Leu Gly Leu Phe Val

435 440 445

Pro Val Ile Tyr Lys Trp Ala Asn Ile Leu Ile Pro Val His Ile Gly

450 455 460

Asn Ala Asn Lys

465

<210> 10

<211> 1404

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 10

atggcggcgc gggggtcagg gccccgcgcg ctccgcctgc tgctcttggt ccagctggtc 60

gcggggcgct gcggtctagc gggcgcggcg ggcggcgcgc agagaggatt atctgaacct 120

tcttctattg caaaacatga agatagtttg cttaaggatt tatttcaaga ctacgaaaga 180

tgggttcgtc ctgtggaaca cctgaatgac aaaataaaaa taaaatttgg acttgcaata 240

tctcaattgg tggatgtgga tgagaaaaat cagttaatga caacaaacgt ctggttgaaa 300

caggaatgga tagatgtaaa attaagatgg aaccctgatg actatggtgg aataaaagtt 360

atacgtgttc cttcagactc tgtctggaca ccagacatcg ttttgtttga taatgcagat 420

ggacgttttg aagggaccag tacgaaaaca gtcatcaggt acaatggcac tgtcacctgg 480

actccaccgg caaactacaa aagttcctgt accatagatg tcacgttttt cccatttgac 540

cttcagaact gttccatgaa atttggttct tggacttatg atggatcaca ggttgatata 600

attctagagg accaagatgt agacaagaga gatttttttg ataatggaga atgggagatt 660

gtgagtgcaa cagggagcaa aggaaacaga accgacagct gttgctggta tccgtatgtc 720

acttactcat ttgtaatcaa gcgcctgcct ctcttttata ccttgttcct tataataccc 780

tgtattgggc tctcattttt aactgtactt gtcttctatc ttccttcaaa tgaaggtgaa 840

aagatttgtc tctgcacttc agtacttgtg tctttgactg tcttccttct ggttattgaa 900

gagatcatac catcatcttc aaaagtcata cctctaattg gagagtatct ggtatttacc 960

atgatttttg tgacactgtc aattatggta accgtcttcg ctatcaacat tcatcatcgt 1020

tcttcctcaa cacataatgc catggcgcct ttggtccgca agatatttct tcacacgctt 1080

cccaaactgc tttgcatgag aagtcatgta gacaggtact tcactcagaa agaggaaact 1140

gagagtggta gtggaccaaa atcttctaga aacacattgg aagctgcgct cgattctatt 1200

cgctacatta caagacacat catgaaggaa aatgatgtcc gtgaggttgt tgaagattgg 1260

aaattcatag cccaggttct tgatcggatg tttctgtgga cttttctttt cgtttcaatt 1320

gttggatctc ttgggctttt tgttcctgtt atttataaat gggcaaatat attaatacca 1380

gttcatattg gaaatgcaaa taag 1404

<210> 11

<211> 494

<212> PRT

<213> 人

<400> 11

Met Leu Thr Ser Lys Gly Gln Gly Phe Leu His Gly Gly Leu Cys Leu

1 5 10 15

Trp Leu Cys Val Phe Thr Pro Phe Phe Lys Gly Cys Val Gly Cys Ala

20 25 30

Thr Glu Glu Arg Leu Phe His Lys Leu Phe Ser His Tyr Asn Gln Phe

35 40 45

Ile Arg Pro Val Glu Asn Val Ser Asp Pro Val Thr Val His Phe Glu

50 55 60

Val Ala Ile Thr Gln Leu Ala Asn Val Asp Glu Val Asn Gln Ile Met

65 70 75 80

Glu Thr Asn Leu Trp Leu Arg His Ile Trp Asn Asp Tyr Lys Leu Arg

85 90 95

Trp Asp Pro Met Glu Tyr Asp Gly Ile Glu Thr Leu Arg Val Pro Ala

100 105 110

Asp Lys Ile Trp Lys Pro Asp Ile Val Leu Tyr Asn Asn Ala Val Gly

115 120 125

Asp Phe Gln Val Glu Gly Lys Thr Lys Ala Leu Leu Lys Tyr Asn Gly

130 135 140

Met Ile Thr Trp Thr Pro Pro Ala Ile Phe Lys Ser Ser Cys Pro Met

145 150 155 160

Asp Ile Thr Phe Phe Pro Phe Asp His Gln Asn Cys Ser Leu Lys Phe

165 170 175

Gly Ser Trp Thr Tyr Asp Lys Ala Glu Ile Asp Leu Leu Ile Ile Gly

180 185 190

Ser Lys Val Asp Met Asn Asp Phe Trp Glu Asn Ser Glu Trp Glu Ile

195 200 205

Ile Asp Ala Ser Gly Tyr Lys His Asp Ile Lys Tyr Asn Cys Cys Glu

210 215 220

Glu Ile Tyr Thr Asp Ile Thr Tyr Ser Phe Tyr Ile Arg Arg Leu Pro

225 230 235 240

Met Phe Tyr Thr Ile Asn Leu Ile Ile Pro Cys Leu Phe Ile Ser Phe

245 250 255

Leu Thr Val Leu Val Phe Tyr Leu Pro Ser Asp Cys Gly Glu Lys Val

260 265 270

Thr Leu Cys Ile Ser Val Leu Leu Ser Leu Thr Val Phe Leu Leu Val

275 280 285

Ile Thr Glu Thr Ile Pro Ser Thr Ser Leu Val Val Pro Leu Val Gly

290 295 300

Glu Tyr Leu Leu Phe Thr Met Ile Phe Val Thr Leu Ser Ile Val Val

305 310 315 320

Thr Val Phe Val Leu Asn Ile His Tyr Arg Thr Pro Thr Thr His Thr

325 330 335

Met Pro Arg Trp Val Lys Thr Val Phe Leu Lys Leu Leu Pro Gln Val

340 345 350

Leu Leu Met Arg Trp Pro Leu Asp Lys Thr Arg Gly Thr Gly Ser Asp

355 360 365

Ala Val Pro Arg Gly Leu Ala Arg Arg Pro Ala Lys Gly Lys Leu Ala

370 375 380

Ser His Gly Glu Pro Arg His Leu Lys Glu Cys Phe His Cys His Lys

385 390 395 400

Ser Asn Glu Leu Ala Thr Ser Lys Arg Arg Leu Ser His Gln Pro Leu

405 410 415

Gln Trp Val Val Glu Asn Ser Glu His Ser Pro Glu Val Glu Asp Val

420 425 430

Ile Asn Ser Val Gln Phe Ile Ala Glu Asn Met Lys Ser His Asn Glu

435 440 445

Thr Lys Glu Val Glu Asp Asp Trp Lys Tyr Val Ala Met Val Val Asp

450 455 460

Arg Val Phe Leu Trp Val Phe Ile Ile Val Cys Val Phe Gly Thr Ala

465 470 475 480

Gly Leu Phe Leu Gln Pro Leu Leu Gly Asn Thr Gly Lys Ser

485 490

<210> 12

<211> 1482

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 12

atgctgacca gcaaggggca gggattcctt catgggggct tgtgtctctg gctgtgtgtg 60

ttcacacctt tctttaaagg ctgtgtgggc tgtgcaactg aggagaggct cttccacaaa 120

ctgttttctc attacaacca gttcatcagg cctgtggaaa acgtttccga ccctgtcacg 180

gtacactttg aagtggccat cacccagctg gccaacgtgg atgaagtaaa ccagatcatg 240

gaaaccaatt tgtggctgcg tcacatctgg aatgattata aattgcgctg ggatccaatg 300

gaatatgatg gcattgagac tcttcgcgtt cctgcagata agatttggaa gcccgacatt 360

gttctctata acaatgctgt tggtgacttc caagtagaag gcaaaacaaa agctcttctt 420

aaatacaatg gcatgataac ctggactcca ccagctattt ttaagagttc ctgccctatg 480

gatatcacct ttttcccttt tgatcatcaa aactgttccc taaaatttgg ttcctggacg 540

tatgacaaag ctgaaattga tcttctaatc attggatcaa aagtggatat gaatgatttt 600

tgggaaaaca gtgaatggga aatcattgat gcctctggct acaaacatga catcaaatac 660

aactgttgtg aagagatata cacagatata acctattctt tctacattag aagattgccg 720

atgttttaca cgattaatct gatcatccct tgtctcttta tttcatttct aaccgtgttg 780

gtcttttacc ttccttcgga ctgtggtgaa aaagtgacgc tttgtatttc agtcctgctt 840

tctctgactg tgtttttgct ggtcatcaca gaaaccatcc catccacatc tctggtggtc 900

ccactggtgg gtgagtacct gctgttcacc atgatctttg tcacactgtc catcgtggtg 960

actgtgtttg tgttgaacat acactaccgc accccaacca cgcacacaat gcccaggtgg 1020

gtgaagacag ttttcctgaa gctgctgccc caggtcctgc tgatgaggtg gcctctggac 1080

aagacaaggg gcacaggctc tgatgcagtg cccagaggcc ttgccaggag gcctgccaaa 1140

ggcaagcttg caagccatgg ggaacccaga catcttaaag aatgcttcca ttgtcacaaa 1200

tcaaatgagc ttgccacaag caagagaaga ttaagtcatc agccattaca gtgggtggtg 1260

gaaaattcgg agcactcgcc tgaagttgaa gatgtgatta acagtgttca gttcatagca 1320

gaaaacatga agagccacaa tgaaaccaag gaggtagaag atgactggaa atacgtggcc 1380

atggtggtgg acagagtatt tctttgggta tttataattg tctgtgtatt tggaactgca 1440

gggctatttc tacagccact acttgggaac acaggaaaat ct 1482

<210> 13

<211> 502

<212> PRT

<213> 人

<400> 13

Met Arg Cys Ser Pro Gly Gly Val Trp Leu Ala Leu Ala Ala Ser Leu

1 5 10 15

Leu His Val Ser Leu Gln Gly Glu Phe Gln Arg Lys Leu Tyr Lys Glu

20 25 30

Leu Val Lys Asn Tyr Asn Pro Leu Glu Arg Pro Val Ala Asn Asp Ser

35 40 45

Gln Pro Leu Thr Val Tyr Phe Ser Leu Ser Leu Leu Gln Ile Met Asp

50 55 60

Val Asp Glu Lys Asn Gln Val Leu Thr Thr Asn Ile Trp Leu Gln Met

65 70 75 80

Ser Trp Thr Asp His Tyr Leu Gln Trp Asn Val Ser Glu Tyr Pro Gly

85 90 95

Val Lys Thr Val Arg Phe Pro Asp Gly Gln Ile Trp Lys Pro Asp Ile

100 105 110

Leu Leu Tyr Asn Ser Ala Asp Glu Arg Phe Asp Ala Thr Phe His Thr

115 120 125

Asn Val Leu Val Asn Ser Ser Gly His Cys Gln Tyr Leu Pro Pro Gly

130 135 140

Ile Phe Lys Ser Ser Cys Tyr Ile Asp Val Arg Trp Phe Pro Phe Asp

145 150 155 160

Val Gln His Cys Lys Leu Lys Phe Gly Ser Trp Ser Tyr Gly Gly Trp

165 170 175

Ser Leu Asp Leu Gln Met Gln Glu Ala Asp Ile Ser Gly Tyr Ile Pro

180 185 190

Asn Gly Glu Trp Asp Leu Val Gly Ile Pro Gly Lys Arg Ser Glu Arg

195 200 205

Phe Tyr Glu Cys Cys Lys Glu Pro Tyr Pro Asp Val Thr Phe Thr Val

210 215 220

Thr Met Arg Arg Arg Thr Leu Tyr Tyr Gly Leu Asn Leu Leu Ile Pro

225 230 235 240

Cys Val Leu Ile Ser Ala Leu Ala Leu Leu Val Phe Leu Leu Pro Ala

245 250 255

Asp Ser Gly Glu Lys Ile Ser Leu Gly Ile Thr Val Leu Leu Ser Leu

260 265 270

Thr Val Phe Met Leu Leu Val Ala Glu Ile Met Pro Ala Thr Ser Asp

275 280 285

Ser Val Pro Leu Ile Ala Gln Tyr Phe Ala Ser Thr Met Ile Ile Val

290 295 300

Gly Leu Ser Val Val Val Thr Val Ile Val Leu Gln Tyr His His His

305 310 315 320

Asp Pro Asp Gly Gly Lys Met Pro Lys Trp Thr Arg Val Ile Leu Leu

325 330 335

Asn Trp Cys Ala Trp Phe Leu Arg Met Lys Arg Pro Gly Glu Asp Lys

340 345 350

Val Arg Pro Ala Cys Gln His Lys Gln Arg Arg Cys Ser Leu Ala Ser

355 360 365

Val Glu Met Ser Ala Val Ala Pro Pro Pro Ala Ser Asn Gly Asn Leu

370 375 380

Leu Tyr Ile Gly Phe Arg Gly Leu Asp Gly Val His Cys Val Pro Thr

385 390 395 400

Pro Asp Ser Gly Val Val Cys Gly Arg Met Ala Cys Ser Pro Thr His

405 410 415

Asp Glu His Leu Leu His Gly Gly Gln Pro Pro Glu Gly Asp Pro Asp

420 425 430

Leu Ala Lys Ile Leu Glu Glu Val Arg Tyr Ile Ala Asn Arg Phe Arg

435 440 445

Cys Gln Asp Glu Ser Glu Ala Val Cys Ser Glu Trp Lys Phe Ala Ala

450 455 460

Cys Val Val Asp Arg Leu Cys Leu Met Ala Phe Ser Val Phe Thr Ile

465 470 475 480

Ile Cys Thr Ile Gly Ile Leu Met Ser Ala Pro Asn Phe Val Glu Ala

485 490 495

Val Ser Lys Asp Phe Ala

500

<210> 14

<211> 1506

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 14

atgcgctgct cgccgggagg cgtctggctg gcgctggccg cgtcgctcct gcacgtgtcc 60

ctgcaaggcg agttccagag gaagctttac aaggagctgg tcaagaacta caatcccttg 120

gagaggcccg tggccaatga ctcgcaacca ctcaccgtct acttctccct gagcctcctg 180

cagatcatgg acgtggatga gaagaaccaa gttttaacca ccaacatttg gctgcaaatg 240

tcttggacag atcactattt acagtggaat gtgtcagaat atccaggggt gaagactgtt 300

cgtttcccag atggccagat ttggaaacca gacattcttc tctataacag tgctgatgag 360

cgctttgacg ccacattcca cactaacgtg ttggtgaatt cttctgggca ttgccagtac 420

ctgcctccag gcatattcaa gagttcctgc tacatcgatg tacgctggtt tccctttgat 480

gtgcagcact gcaaactgaa gtttgggtcc tggtcttacg gaggctggtc cttggatctg 540

cagatgcagg aggcagatat cagtggctat atccccaatg gagaatggga cctagtggga 600

atccccggca agaggagtga aaggttctat gagtgctgca aagagcccta ccccgatgtc 660

accttcacag tgaccatgcg ccgcaggacg ctctactatg gcctcaacct gctgatcccc 720

tgtgtgctca tctccgccct cgccctgctg gtgttcctgc ttcctgcaga ttccggggag 780

aagatttccc tggggataac agtcttactc tctcttaccg tcttcatgct gctcgtggct 840

gagatcatgc ccgcaacatc cgattcggta ccattgatag cccagtactt cgccagcacc 900

atgatcatcg tgggcctctc ggtggtggtg acagtgatcg tgctgcagta ccaccaccac 960

gaccccgacg ggggcaagat gcccaagtgg accagagtca tccttctgaa ctggtgcgcg 1020

tggttcctgc gaatgaagag gcccggggag gacaaggtgc gcccggcctg ccagcacaag 1080

cagcggcgct gcagcctggc cagtgtggag atgagcgccg tggcgccgcc gcccgccagc 1140

aacgggaacc tgctgtacat cggcttccgc ggcctggacg gcgtgcactg tgtcccgacc 1200

cccgactctg gggtagtgtg tggccgcatg gcctgctccc ccacgcacga tgagcacctc 1260

ctgcacggcg ggcaaccccc cgagggggac ccggacttgg ccaagatcct ggaggaggtc 1320

cgctacattg ccaaccgctt ccgctgccag gacgaaagcg aggcggtctg cagcgagtgg 1380

aagttcgccg cctgtgtggt ggaccgcctg tgcctcatgg ccttctcggt cttcaccatc 1440

atctgcacca tcggcatcct gatgtcggct cccaacttcg tggaggccgt gtccaaagac 1500

tttgcg 1506

<210> 15

<211> 479

<212> PRT

<213> 人

<400> 15

Met Asn Trp Ser His Ser Cys Ile Ser Phe Cys Trp Ile Tyr Phe Ala

1 5 10 15

Ala Ser Arg Leu Arg Ala Ala Glu Thr Ala Asp Gly Lys Tyr Ala Gln

20 25 30

Lys Leu Phe Asn Asp Leu Phe Glu Asp Tyr Ser Asn Ala Leu Arg Pro

35 40 45

Val Glu Asp Thr Asp Lys Val Leu Asn Val Thr Leu Gln Ile Thr Leu

50 55 60

Ser Gln Ile Lys Asp Met Asp Glu Arg Asn Gln Ile Leu Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Trp Ile Arg Gln Ile Trp His Asp Ala Tyr Leu Thr Trp Asp Arg

85 90 95

Asp Gln Tyr Asp Gly Leu Asp Ser Ile Arg Ile Pro Ser Asp Leu Val

100 105 110

Trp Arg Pro Asp Ile Val Leu Tyr Asn Lys Ala Asp Asp Glu Ser Ser

115 120 125

Glu Pro Val Asn Thr Asn Val Val Leu Arg Tyr Asp Gly Leu Ile Thr

130 135 140

Trp Asp Ala Pro Ala Ile Thr Lys Ser Ser Cys Val Val Asp Val Thr

145 150 155 160

Tyr Phe Pro Phe Asp Asn Gln Gln Cys Asn Leu Thr Phe Gly Ser Trp

165 170 175

Thr Tyr Asn Gly Asn Gln Val Asp Ile Phe Asn Ala Leu Asp Ser Gly

180 185 190

Asp Leu Ser Asp Phe Ile Glu Asp Val Glu Trp Glu Val His Gly Met

195 200 205

Pro Ala Val Lys Asn Val Ile Ser Tyr Gly Cys Cys Ser Glu Pro Tyr

210 215 220

Pro Asp Val Thr Phe Thr Leu Leu Leu Lys Arg Arg Ser Ser Phe Tyr

225 230 235 240

Ile Val Asn Leu Leu Ile Pro Cys Val Leu Ile Ser Phe Leu Ala Pro

245 250 255

Leu Ser Phe Tyr Leu Pro Ala Ala Ser Gly Glu Lys Val Ser Leu Gly

260 265 270

Val Thr Ile Leu Leu Ala Met Thr Val Phe Gln Leu Met Val Ala Glu

275 280 285

Ile Met Pro Ala Ser Glu Asn Val Pro Leu Ile Gly Lys Tyr Tyr Ile

290 295 300

Ala Thr Met Ala Leu Ile Thr Ala Ser Thr Ala Leu Thr Ile Met Val

305 310 315 320

Met Asn Ile His Phe Cys Gly Ala Glu Ala Arg Pro Val Pro His Trp

325 330 335

Ala Arg Val Val Ile Leu Lys Tyr Met Ser Arg Val Leu Phe Val Tyr

340 345 350

Asp Val Gly Glu Ser Cys Leu Ser Pro His His Ser Arg Glu Arg Asp

355 360 365

His Leu Thr Lys Val Tyr Ser Lys Leu Pro Glu Ser Asn Leu Lys Ala

370 375 380

Ala Arg Asn Lys Asp Leu Ser Arg Lys Lys Asp Met Asn Lys Arg Leu

385 390 395 400

Lys Asn Asp Leu Gly Cys Gln Gly Lys Asn Pro Gln Glu Ala Glu Ser

405 410 415

Tyr Cys Ala Gln Tyr Lys Val Leu Thr Arg Asn Ile Glu Tyr Ile Ala

420 425 430

Lys Cys Leu Lys Asp His Lys Ala Thr Asn Ser Lys Gly Ser Glu Trp

435 440 445

Lys Lys Val Ala Lys Val Ile Asp Arg Phe Phe Met Trp Ile Phe Phe

450 455 460

Ile Met Val Phe Val Met Thr Ile Leu Ile Ile Ala Arg Ala Asp

465 470 475

<210> 16

<211> 1437

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 16

atgaactggt cccattcctg catctccttt tgctggatct actttgctgc ttccagactg 60

agagctgcag agacggcaga tggaaaatat gctcagaagt tgtttaatga cctttttgaa 120

gattattcta atgctcttcg tccagtggaa gatacagata aagtcctgaa tgtgaccctg 180

cagattacgc tctctcagat taaggatatg gatgaaagaa accaaattct gactgcttat 240

ttgtggatcc gccaaatctg gcacgatgcc tatctcacgt gggaccgaga tcagtacgat 300

ggcctagact ccatcaggat ccccagtgac ctcgtgtgga ggccagacat cgtcttatat 360

aacaaggctg atgatgaatc ttcagagcct gtgaacacca atgtggtcct gcggtatgat 420

gggctgatca cctgggatgc accggccatc accaaaagct cctgtgtggt ggatgtcacc 480

tacttccctt ttgacaacca gcagtgcaac ctgacttttg gttcctggac ctacaatggc 540

aatcaggtgg acatattcaa cgccttggac agcggagatc tctctgactt cattgaagat 600

gtggaatggg aggtccatgg catgcccgct gtgaagaatg tgatctccta tggctgctgc 660

tctgagcctt acccggatgt cacattcacc ctccttctga agaggaggtc ctcgttctat 720

atcgtcaacc tcctcatccc atgcgtcctc atatcttttc tggctcctct gagtttttat 780

ctcccagcag cctccggaga aaaggtctcc ctgggagtga ccatcctgtt ggccatgact 840

gtatttcagc taatggtggc agaaatcatg ccggcctcag aaaatgtgcc cctgataggt 900

aaatactaca tagccacgat ggccctgatc acagcctcca ctgcgttgac catcatggtg 960

atgaatatcc acttctgtgg ggccgaggcc cggccggtgc cacactgggc cagggtggtc 1020

atcctgaaat acatgtccag ggtcttgttt gtctatgatg tgggtgaaag ctgcctcagc 1080

ccgcaccaca gtagagagcg ggaccacctc acgaaagttt atagcaaact cccagagtct 1140

aacctgaaag cagccaggaa caaagacctt tccagaaaga aggacatgaa caaacgctta 1200

aagaacgacc tgggctgcca gggtaagaac cctcaggagg ccgagagtta ctgtgcacag 1260

tacaaagtgc tgacgaggaa tattgagtac atcgccaagt gcctcaaaga ccacaaggcc 1320

accaattcca aggggagtga atggaagaag gtggcgaaag tcatagaccg attcttcatg 1380

tggatttttt tcattatggt gtttgtgatg actattttga tcatagcaag agcggat 1437

<210> 17

<211> 450

<212> PRT

<213> 人

<400> 17

Met Gly Leu Arg Ser His His Leu Ser Leu Gly Leu Leu Leu Leu Phe

1 5 10 15

Leu Leu Pro Ala Glu Cys Leu Gly Ala Glu Gly Arg Leu Ala Leu Lys

20 25 30

Leu Phe Arg Asp Leu Phe Ala Asn Tyr Thr Ser Ala Leu Arg Pro Val

35 40 45

Ala Asp Thr Asp Gln Thr Leu Asn Val Thr Leu Glu Val Thr Leu Ser

50 55 60

Gln Ile Ile Asp Met Asp Glu Arg Asn Gln Val Leu Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Trp Ile Arg Gln Glu Trp Thr Asp Ala Tyr Leu Arg Trp Asp Pro Asn

85 90 95

Ala Tyr Gly Gly Leu Asp Ala Ile Arg Ile Pro Ser Ser Leu Val Trp

100 105 110

Arg Pro Asp Ile Val Leu Tyr Asn Lys Ala Asp Ala Gln Pro Pro Gly

115 120 125

Ser Ala Ser Thr Asn Val Val Leu Arg His Asp Gly Ala Val Arg Trp

130 135 140

Asp Ala Pro Ala Ile Thr Arg Ser Ser Cys Arg Val Asp Val Ala Ala

145 150 155 160

Phe Pro Phe Asp Ala Gln His Cys Gly Leu Thr Phe Gly Ser Trp Thr

165 170 175

His Gly Gly His Gln Leu Asp Val Arg Pro Arg Gly Ala Ala Ala Ser

180 185 190

Leu Ala Asp Phe Val Glu Asn Val Glu Trp Arg Val Leu Gly Met Pro

195 200 205

Ala Arg Arg Arg Val Leu Thr Tyr Gly Cys Cys Ser Glu Pro Tyr Pro

210 215 220

Asp Val Thr Phe Thr Leu Leu Leu Arg Arg Arg Ala Ala Ala Tyr Val

225 230 235 240

Cys Asn Leu Leu Leu Pro Cys Val Leu Ile Ser Leu Leu Ala Pro Leu

245 250 255

Ala Phe His Leu Pro Ala Asp Ser Gly Glu Lys Val Ser Leu Gly Val

260 265 270

Thr Val Leu Leu Ala Leu Thr Val Phe Gln Leu Leu Leu Ala Glu Ser

275 280 285

Met Pro Pro Ala Glu Ser Val Pro Leu Ile Gly Lys Tyr Tyr Met Ala

290 295 300

Thr Met Thr Met Val Thr Phe Ser Thr Ala Leu Thr Ile Leu Ile Met

305 310 315 320

Asn Leu His Tyr Cys Gly Pro Ser Val Arg Pro Val Pro Ala Trp Ala

325 330 335

Arg Ala Leu Leu Leu Gly His Leu Ala Arg Gly Leu Cys Val Arg Glu

340 345 350

Arg Gly Glu Pro Cys Gly Gln Ser Arg Pro Pro Glu Leu Ser Pro Ser

355 360 365

Pro Gln Ser Pro Glu Gly Gly Ala Gly Pro Pro Ala Gly Pro Cys His

370 375 380

Glu Pro Arg Cys Leu Cys Arg Gln Glu Ala Leu Leu His His Val Ala

385 390 395 400

Thr Ile Ala Asn Thr Phe Arg Ser His Arg Ala Ala Gln Arg Cys His

405 410 415

Glu Asp Trp Lys Arg Leu Ala Arg Val Met Asp Arg Phe Phe Leu Ala

420 425 430

Ile Phe Phe Ser Met Ala Leu Val Met Ser Leu Leu Val Leu Val Gln

435 440 445

Ala Leu

450

<210> 18

<211> 1350

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 18

atggggctcc ggagccacca cctcagcctg ggccttctgc ttctgtttct actccctgca 60

gagtgcctgg gagctgaggg ccggctggct ctcaagctgt tccgtgacct ctttgccaac 120

tacacaagtg ccctgagacc tgtggcagac acagaccaga ctctgaatgt gaccctggag 180

gtgacactgt cccagatcat cgacatggat gaacggaacc aggtgctgac cctgtatctg 240

tggatacggc aggagtggac agatgcctac ctacgatggg accccaatgc ctatggtggc 300

ctggatgcca tccgcatccc cagcagtctt gtgtggcggc cagacatcgt actctataac 360

aaagccgacg cgcagcctcc aggttccgcc agcaccaacg tggtcctgcg ccacgatggc 420

gccgtgcgct gggacgcgcc ggccatcacg cgcagctcgt gccgcgtgga tgtagcagcc 480

ttcccgttcg acgcccagca ctgcggcctg acgttcggct cctggactca cggcgggcac 540

caactggatg tgcggccgcg cggcgctgca gccagcctgg cggacttcgt ggagaacgtg 600

gagtggcgcg tgctgggcat gccggcgcgg cggcgcgtgc tcacctacgg ctgctgctcc 660

gagccctacc ccgacgtcac cttcacgctg ctgctgcgcc gccgcgccgc cgcctacgtg 720

tgcaacctgc tgctgccctg cgtgctcatc tcgctgcttg cgccgctcgc cttccacctg 780

cctgccgact caggcgagaa ggtgtcgctg ggcgtcaccg tgctgctggc gctcaccgtc 840

ttccagttgc tgctggccga gagcatgcca ccggccgaga gcgtgccgct catcgggaag 900

tactacatgg ccactatgac catggtcaca ttctcaacag cactcaccat ccttatcatg 960

aacctgcatt actgtggtcc cagtgtccgc ccagtgccag cctgggctag ggccctcctg 1020

ctgggacacc tggcacgggg cctgtgcgtg cgggaaagag gggagccctg tgggcagtcc 1080

aggccacctg agttatctcc tagcccccag tcgcctgaag gaggggctgg ccccccagcg 1140

ggcccttgcc acgagccacg atgtctgtgc cgccaggaag ccctactgca ccacgtagcc 1200

accattgcca ataccttccg cagccaccga gctgcccagc gctgccatga ggactggaag 1260

cgcctggccc gtgtgatgga ccgcttcttc ctggccatct tcttctccat ggccctggtc 1320

atgagcctcc tggtgctggt gcaggccctg 1350

<210> 19

<211> 501

<212> PRT

<213> 人

<400> 19

Met Thr Pro Gly Ala Leu Leu Met Leu Leu Gly Ala Leu Gly Ala Pro

1 5 10 15

Leu Ala Pro Gly Val Arg Gly Ser Glu Ala Glu Gly Arg Leu Arg Glu

20 25 30

Lys Leu Phe Ser Gly Tyr Asp Ser Ser Val Arg Pro Ala Arg Glu Val

35 40 45

Gly Asp Arg Val Arg Val Ser Val Gly Leu Ile Leu Ala Gln Leu Ile

50 55 60

Ser Leu Asn Glu Lys Asp Glu Glu Met Ser Thr Lys Val Tyr Leu Asp

65 70 75 80

Leu Glu Trp Thr Asp Tyr Arg Leu Ser Trp Asp Pro Ala Glu His Asp

85 90 95

Gly Ile Asp Ser Leu Arg Ile Thr Ala Glu Ser Val Trp Leu Pro Asp

100 105 110

Val Val Leu Leu Asn Asn Asn Asp Gly Asn Phe Asp Val Ala Leu Asp

115 120 125

Ile Ser Val Val Val Ser Ser Asp Gly Ser Val Arg Trp Gln Pro Pro

130 135 140

Gly Ile Tyr Arg Ser Ser Cys Ser Ile Gln Val Thr Tyr Phe Pro Phe

145 150 155 160

Asp Trp Gln Asn Cys Thr Met Val Phe Ser Ser Tyr Ser Tyr Asp Ser

165 170 175

Ser Glu Val Ser Leu Gln Thr Gly Leu Gly Pro Asp Gly Gln Gly His

180 185 190

Gln Glu Ile His Ile His Glu Gly Thr Phe Ile Glu Asn Gly Gln Trp

195 200 205

Glu Ile Ile His Lys Pro Ser Arg Leu Ile Gln Pro Pro Gly Asp Pro

210 215 220

Arg Gly Gly Arg Glu Gly Gln Arg Gln Glu Val Ile Phe Tyr Leu Ile

225 230 235 240

Ile Arg Arg Lys Pro Leu Phe Tyr Leu Val Asn Val Ile Ala Pro Cys

245 250 255

Ile Leu Ile Thr Leu Leu Ala Ile Phe Val Phe Tyr Leu Pro Pro Asp

260 265 270

Ala Gly Glu Lys Met Gly Leu Ser Ile Phe Ala Leu Leu Thr Leu Thr

275 280 285

Val Phe Leu Leu Leu Leu Ala Asp Lys Val Pro Glu Thr Ser Leu Ser

290 295 300

Val Pro Ile Ile Ile Lys Tyr Leu Met Phe Thr Met Val Leu Val Thr

305 310 315 320

Phe Ser Val Ile Leu Ser Val Val Val Leu Asn Leu His His Arg Ser

325 330 335

Pro His Thr His Gln Met Pro Leu Trp Val Arg Gln Ile Phe Ile His

340 345 350

Lys Leu Pro Leu Tyr Leu Arg Leu Lys Arg Pro Lys Pro Glu Arg Asp

355 360 365

Leu Met Pro Glu Pro Pro His Cys Ser Ser Pro Gly Ser Gly Trp Gly

370 375 380

Arg Gly Thr Asp Glu Tyr Phe Ile Arg Lys Pro Pro Ser Asp Phe Leu

385 390 395 400

Phe Pro Lys Pro Asn Arg Phe Gln Pro Glu Leu Ser Ala Pro Asp Leu

405 410 415

Arg Arg Phe Ile Asp Gly Pro Asn Arg Ala Val Ala Leu Leu Pro Glu

420 425 430

Leu Arg Glu Val Val Ser Ser Ile Ser Tyr Ile Ala Arg Gln Leu Gln

435 440 445

Glu Gln Glu Asp His Asp Ala Leu Lys Glu Asp Trp Gln Phe Val Ala

450 455 460

Met Val Val Asp Arg Leu Phe Leu Trp Thr Phe Ile Ile Phe Thr Ser

465 470 475 480

Val Gly Thr Leu Val Ile Phe Leu Asp Ala Thr Tyr His Leu Pro Pro

485 490 495

Pro Asp Pro Phe Pro

500

<210> 20

<211> 1503

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 20

atgaccccag gggctctgct gatgctgctg ggggcgctgg gggcgccgct cgccccaggc 60

gtccgcggct cggaggcgga gggtcgactc cgggagaaac ttttctctgg ctatgatagc 120

tccgtgcggc cagcgcggga ggtgggagac cgtgtcaggg tcagcgttgg tctcatcctg 180

gcgcaactca tcagcctgaa cgagaaggat gaagagatga gcacaaaggt gtacttagac 240

ctggagtgga ctgactacag gctgagctgg gaccctgcgg agcacgacgg catcgattcg 300

ctccgcatca cggcggaatc cgtgtggctc cctgacgtgg tgctactgaa caacaatgat 360

gggaattttg acgtggctct ggacattagc gtcgtggtgt cctccgacgg ctccgtgcgt 420

tggcaacccc cgggcatcta tcgcagcagc tgcagcatcc aggtcaccta cttccccttc 480

gactggcaga attgcactat ggtgttcagc tcctacagct acgacagctc ggaggtcagc 540

ctgcagacag gcctgggtcc tgacgggcaa gggcatcagg aaatccacat tcatgaaggg 600

actttcattg agaatggcca gtgggagatt atccacaagc cctctcggct aatccagcct 660

ccaggcgatc ctaggggagg gagggaagga cagcgccagg aagtcatctt ctacctcatc 720

atccgccgca agcctctctt ctacctggtc aacgtcattg ccccatgcat cctcatcact 780

cttctggcca tcttcgtctt ctacctgcca ccagatgcag gagagaagat ggggctctca 840

atctttgccc tgctgaccct tactgtgttc ctgctgctgc tggctgacaa agtacctgag 900

acctcactat cagtacccat tattatcaag tacctcatgt ttaccatggt cctcgtcacc 960

ttctcagtca tccttagtgt cgtggttctc aacctgcacc accgctcacc ccacacccac 1020

caaatgcccc tttgggtccg tcagatcttc attcacaaac ttccgctgta cctgcgtcta 1080

aaaaggccca aacccgagag agacctgatg ccggagcccc ctcactgttc ttctccagga 1140

agtggctggg gtcggggaac agatgaatat ttcatccgga agccgccaag tgattttctc 1200

ttccccaaac ccaataggtt ccagcctgaa ctgtctgccc ctgatctgcg gcgatttatc 1260

gatggtccaa accgggctgt ggccctgctt ccggagctac gggaggtcgt ctcctctatc 1320

agctacatcg ctcgacagct gcaggaacag gaggaccacg atgcgctgaa ggaggactgg 1380

cagtttgtgg ccatggtagt ggaccgcctc ttcctgtgga ctttcatcat cttcaccagc 1440

gttgggaccc tagtcatctt cctggacgcc acgtaccact tgccccctcc agaccccttt 1500

cct 1503

<210> 21

<211> 502

<212> PRT

<213> 人

<400> 21

Met Ala Arg Arg Cys Gly Pro Val Ala Leu Leu Leu Gly Phe Gly Leu

1 5 10 15

Leu Arg Leu Cys Ser Gly Val Trp Gly Thr Asp Thr Glu Glu Arg Leu

20 25 30

Val Glu His Leu Leu Asp Pro Ser Arg Tyr Asn Lys Leu Ile Arg Pro

35 40 45

Ala Thr Asn Gly Ser Glu Leu Val Thr Val Gln Leu Met Val Ser Leu

50 55 60

Ala Gln Leu Ile Ser Val His Glu Arg Glu Gln Ile Met Thr Thr Asn

65 70 75 80

Val Trp Leu Thr Gln Glu Trp Glu Asp Tyr Arg Leu Thr Trp Lys Pro

85 90 95

Glu Glu Phe Asp Asn Met Lys Lys Val Arg Leu Pro Ser Lys His Ile

100 105 110

Trp Leu Pro Asp Val Val Leu Tyr Asn Asn Ala Asp Gly Met Tyr Glu

115 120 125

Val Ser Phe Tyr Ser Asn Ala Val Val Ser Tyr Asp Gly Ser Ile Phe

130 135 140

Trp Leu Pro Pro Ala Ile Tyr Lys Ser Ala Cys Lys Ile Glu Val Lys

145 150 155 160

His Phe Pro Phe Asp Gln Gln Asn Cys Thr Met Lys Phe Arg Ser Trp

165 170 175

Thr Tyr Asp Arg Thr Glu Ile Asp Leu Val Leu Lys Ser Glu Val Ala

180 185 190

Ser Leu Asp Asp Phe Thr Pro Ser Gly Glu Trp Asp Ile Val Ala Leu

195 200 205

Pro Gly Arg Arg Asn Glu Asn Pro Asp Asp Ser Thr Tyr Val Asp Ile

210 215 220

Thr Tyr Asp Phe Ile Ile Arg Arg Lys Pro Leu Phe Tyr Thr Ile Asn

225 230 235 240

Leu Ile Ile Pro Cys Val Leu Ile Thr Ser Leu Ala Ile Leu Val Phe

245 250 255

Tyr Leu Pro Ser Asp Cys Gly Glu Lys Met Thr Leu Cys Ile Ser Val

260 265 270

Leu Leu Ala Leu Thr Val Phe Leu Leu Leu Ile Ser Lys Ile Val Pro

275 280 285

Pro Thr Ser Leu Asp Val Pro Leu Val Gly Lys Tyr Leu Met Phe Thr

290 295 300

Met Val Leu Val Thr Phe Ser Ile Val Thr Ser Val Cys Val Leu Asn

305 310 315 320

Val His His Arg Ser Pro Thr Thr His Thr Met Ala Pro Trp Val Lys

325 330 335

Val Val Phe Leu Glu Lys Leu Pro Ala Leu Leu Phe Met Gln Gln Pro

340 345 350

Arg His His Cys Ala Arg Gln Arg Leu Arg Leu Arg Arg Arg Gln Arg

355 360 365

Glu Arg Glu Gly Ala Gly Ala Leu Phe Phe Arg Glu Ala Pro Gly Ala

370 375 380

Asp Ser Cys Thr Cys Phe Val Asn Arg Ala Ser Val Gln Gly Leu Ala

385 390 395 400

Gly Ala Phe Gly Ala Glu Pro Ala Pro Val Ala Gly Pro Gly Arg Ser

405 410 415

Gly Glu Pro Cys Gly Cys Gly Leu Arg Glu Ala Val Asp Gly Val Arg

420 425 430

Phe Ile Ala Asp His Met Arg Ser Glu Asp Asp Asp Gln Ser Val Ser

435 440 445

Glu Asp Trp Lys Tyr Val Ala Met Val Ile Asp Arg Leu Phe Leu Trp

450 455 460

Ile Phe Val Phe Val Cys Val Phe Gly Thr Ile Gly Met Phe Leu Gln

465 470 475 480

Pro Leu Phe Gln Asn Tyr Thr Thr Thr Thr Phe Leu His Ser Asp His

485 490 495

Ser Ala Pro Ser Ser Lys

500

<210> 22

<211> 1506

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 22

atggcccggc gctgcggccc cgtggcgctg ctccttggct tcggcctcct ccggctgtgc 60

tcaggggtgt ggggtacgga tacagaggag cggctggtgg agcatctcct ggatccttcc 120

cgctacaaca agcttatccg cccagccacc aatggctctg agctggtgac agtacagctt 180

atggtgtcac tggcccagct catcagtgtg catgagcggg agcagatcat gaccaccaat 240

gtctggctga cccaggagtg ggaagattat cgcctcacct ggaagcctga agagtttgac 300

aacatgaaga aagttcggct cccttccaaa cacatctggc tcccagatgt ggtcctgtac 360

aacaatgctg acggcatgta cgaggtgtcc ttctattcca atgccgtggt ctcctatgat 420

ggcagcatct tctggctgcc gcctgccatc tacaagagcg catgcaagat tgaagtaaag 480

cacttcccat ttgaccagca gaactgcacc atgaagttcc gttcgtggac ctacgaccgc 540

acagagatcg acttggtgct gaagagtgag gtggccagcc tggacgactt cacacctagt 600

ggtgagtggg acatcgtggc gctgccgggc cggcgcaacg agaaccccga cgactctacg 660

tacgtggaca tcacgtatga cttcatcatt cgccgcaagc cgctcttcta caccatcaac 720

ctcatcatcc cctgtgtgct catcacctcg ctagccatcc ttgtcttcta cctgccatcc 780

gactgtggcg agaagatgac gttgtgcatc tcagtgctgc tggcgctcac ggtcttcctg 840

ctgctcatct ccaagatcgt gcctcccacc tccctcgacg tgccgctcgt cggcaagtac 900

ctcatgttca ccatggtgct tgtcaccttc tccatcgtca ccagcgtgtg cgtgctcaac 960

gtgcaccacc gctcgcccac cacgcacacc atggcgccct gggtgaaggt cgtcttcctg 1020

gagaagctgc ccgcgctgct cttcatgcag cagccacgcc atcattgcgc ccgtcagcgc 1080

ctgcgcctgc ggcgacgcca gcgtgagcgc gagggcgctg gagccctctt cttccgcgaa 1140

gccccagggg ccgactcctg cacgtgcttc gtcaaccgcg cgtcggtgca ggggttggcc 1200

ggggccttcg gggctgagcc tgcaccagtg gcgggccccg ggcgctcagg ggagccgtgt 1260

ggctgtggcc tccgggaggc ggtggacggc gtgcgcttca tcgcagacca catgcggagc 1320

gaggacgatg accagagcgt gagtgaggac tggaagtacg tcgccatggt gatcgaccgc 1380

ctcttcctct ggatctttgt ctttgtctgt gtctttggca ccatcggcat gttcctgcag 1440

cctctcttcc agaactacac caccaccacc ttcctccact cagaccactc agcccccagc 1500

tccaag 1506

<210> 23

<211> 458

<212> PRT

<213> 人

<400> 23

Met Leu Pro Asp Phe Met Leu Val Leu Ile Val Leu Gly Ile Pro Ser

1 5 10 15

Ser Ala Thr Thr Gly Phe Asn Ser Ile Ala Glu Asn Glu Asp Ala Leu

20 25 30

Leu Arg His Leu Phe Gln Gly Tyr Gln Lys Trp Val Arg Pro Val Leu

35 40 45

His Ser Asn Asp Thr Ile Lys Val Tyr Phe Gly Leu Lys Ile Ser Gln

50 55 60

Leu Val Asp Val Asp Glu Lys Asn Gln Leu Met Thr Thr Asn Val Trp

65 70 75 80

Leu Lys Gln Glu Trp Thr Asp His Lys Leu Arg Trp Asn Pro Asp Asp

85 90 95

Tyr Gly Gly Ile His Ser Ile Lys Val Pro Ser Glu Ser Leu Trp Leu

100 105 110

Pro Asp Ile Val Leu Phe Glu Asn Ala Asp Gly Arg Phe Glu Gly Ser

115 120 125

Leu Met Thr Lys Val Ile Val Lys Ser Asn Gly Thr Val Val Trp Thr

130 135 140

Pro Pro Ala Ser Tyr Lys Ser Ser Cys Thr Met Asp Val Thr Phe Phe

145 150 155 160

Pro Phe Asp Arg Gln Asn Cys Ser Met Lys Phe Gly Ser Trp Thr Tyr

165 170 175

Asp Gly Thr Met Val Asp Leu Ile Leu Ile Asn Glu Asn Val Asp Arg

180 185 190

Lys Asp Phe Phe Asp Asn Gly Glu Trp Glu Ile Leu Asn Ala Lys Gly

195 200 205

Met Lys Gly Asn Arg Arg Asp Gly Val Tyr Ser Tyr Pro Phe Ile Thr

210 215 220

Tyr Ser Phe Val Leu Arg Arg Leu Pro Leu Phe Tyr Thr Leu Phe Leu

225 230 235 240

Ile Ile Pro Cys Leu Gly Leu Ser Phe Leu Thr Val Leu Val Phe Tyr

245 250 255

Leu Pro Ser Asp Glu Gly Glu Lys Leu Ser Leu Ser Thr Ser Val Leu

260 265 270

Val Ser Leu Thr Val Phe Leu Leu Val Ile Glu Glu Ile Ile Pro Ser

275 280 285

Ser Ser Lys Val Ile Pro Leu Ile Gly Glu Tyr Leu Leu Phe Ile Met

290 295 300

Ile Phe Val Thr Leu Ser Ile Ile Val Thr Val Phe Val Ile Asn Val

305 310 315 320

His His Arg Ser Ser Ser Thr Tyr His Pro Met Ala Pro Trp Val Lys

325 330 335

Arg Leu Phe Leu Gln Lys Leu Pro Lys Leu Leu Cys Met Lys Asp His

340 345 350

Val Asp Arg Tyr Ser Ser Pro Glu Lys Glu Glu Ser Gln Pro Val Val

355 360 365

Lys Gly Lys Val Leu Glu Lys Lys Lys Gln Lys Gln Leu Ser Asp Gly

370 375 380

Glu Lys Val Leu Val Ala Phe Leu Glu Lys Ala Ala Asp Ser Ile Arg

385 390 395 400

Tyr Ile Ser Arg His Val Lys Lys Glu His Phe Ile Ser Gln Val Val

405 410 415

Gln Asp Trp Lys Phe Val Ala Gln Val Leu Asp Arg Ile Phe Leu Trp

420 425 430

Leu Phe Leu Ile Val Ser Val Thr Gly Ser Val Leu Ile Phe Thr Pro

435 440 445

Ala Leu Lys Met Trp Leu His Ser Tyr His

450 455

<210> 24

<211> 1374

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 24

atgctcccag attttatgct ggttctcatc gtccttggca tcccttcctc agccaccaca 60

ggtttcaact caatcgccga aaatgaagat gccctcctca gacatttgtt ccaaggttat 120

cagaaatggg tccgccctgt attacattct aatgacacca taaaagtata ttttggattg 180

aaaatatccc agcttgtaga tgtggatgaa aagaatcagc tgatgacaac caatgtgtgg 240

ctcaaacagg aatggacaga ccacaagtta cgctggaatc ctgatgatta tggtgggatc 300

cattccatta aagttccatc agaatctctg tggcttcctg acatagttct ctttgaaaat 360

gctgacggcc gcttcgaagg ctccctgatg accaaggtca tcgtgaaatc aaacggaact 420

gttgtctgga cccctcccgc cagctacaaa agctcctgca ccatggacgt cacgtttttc 480

ccgttcgacc gacagaactg ctccatgaag tttggatcct ggacttatga tggcaccatg 540

gttgacctca ttttgatcaa tgaaaatgtc gacagaaaag acttcttcga taacggagaa 600

tgggaaatac tgaacgcaaa ggggatgaag gggaacagaa gggacggcgt gtactcctat 660

ccctttatca cgtattcctt cgtcctgaga cgcctgcctt tattctatac cctctttctc 720

atcatcccct gcctggggct gtctttccta acagttcttg tgttctattt accttcggat 780

gaaggagaaa aactttcatt atccacatcg gtcttggttt ctctgacagt tttcctttta 840

gtgattgaag aaatcatccc atcgtcttcc aaagtcattc ctctcattgg agagtacctg 900

ctgttcatca tgatttttgt gaccctgtcc atcattgtta ccgtgtttgt cattaacgtt 960

caccacagat cttcttccac gtaccacccc atggccccct gggttaagag gctctttctg 1020

cagaaacttc caaaattact ttgcatgaaa gatcatgtgg atcgctactc atccccagag 1080

aaagaggaga gtcaaccagt agtgaaaggc aaagtcctcg aaaaaaagaa acagaaacag 1140

cttagtgatg gagaaaaagt tctagttgct tttttggaaa aagctgctga ttccattaga 1200

tacatttcga gacatgtgaa gaaagaacat tttatcagcc aggtagtaca agactggaaa 1260

tttgtagctc aagttcttga ccgaatcttc ctgtggctct ttctgatagt gtcagtaaca 1320

ggctcggttc tgatttttac ccctgctttg aagatgtggc tacatagtta ccat 1374

<210> 25

<211> 498

<212> PRT

<213> 人

<400> 25

Met Arg Arg Ala Pro Ser Leu Val Leu Phe Phe Leu Val Ala Leu Cys

1 5 10 15

Gly Arg Gly Asn Cys Arg Val Ala Asn Ala Glu Glu Lys Leu Met Asp

20 25 30

Asp Leu Leu Asn Lys Thr Arg Tyr Asn Asn Leu Ile Arg Pro Ala Thr

35 40 45

Ser Ser Ser Gln Leu Ile Ser Ile Lys Leu Gln Leu Ser Leu Ala Gln

50 55 60

Leu Ile Ser Val Asn Glu Arg Glu Gln Ile Met Thr Thr Asn Val Trp

65 70 75 80

Leu Lys Gln Glu Trp Thr Asp Tyr Arg Leu Thr Trp Asn Ser Ser Arg

85 90 95

Tyr Glu Gly Val Asn Ile Leu Arg Ile Pro Ala Lys Arg Ile Trp Leu

100 105 110

Pro Asp Ile Val Leu Tyr Asn Asn Ala Asp Gly Thr Tyr Glu Val Ser

115 120 125

Val Tyr Thr Asn Leu Ile Val Arg Ser Asn Gly Ser Val Leu Trp Leu

130 135 140

Pro Pro Ala Ile Tyr Lys Ser Ala Cys Lys Ile Glu Val Lys Tyr Phe

145 150 155 160

Pro Phe Asp Gln Gln Asn Cys Thr Leu Lys Phe Arg Ser Trp Thr Tyr

165 170 175

Asp His Thr Glu Ile Asp Met Val Leu Met Thr Pro Thr Ala Ser Met

180 185 190

Asp Asp Phe Thr Pro Ser Gly Glu Trp Asp Ile Val Ala Leu Pro Gly

195 200 205

Arg Arg Thr Val Asn Pro Gln Asp Pro Ser Tyr Val Asp Val Thr Tyr

210 215 220

Asp Phe Ile Ile Lys Arg Lys Pro Leu Phe Tyr Thr Ile Asn Leu Ile

225 230 235 240

Ile Pro Cys Val Leu Thr Thr Leu Leu Ala Ile Leu Val Phe Tyr Leu

245 250 255

Pro Ser Asp Cys Gly Glu Lys Met Thr Leu Cys Ile Ser Val Leu Leu

260 265 270

Ala Leu Thr Phe Phe Leu Leu Leu Ile Ser Lys Ile Val Pro Pro Thr

275 280 285

Ser Leu Asp Val Pro Leu Ile Gly Lys Tyr Leu Met Phe Thr Met Val

290 295 300

Leu Val Thr Phe Ser Ile Val Thr Ser Val Cys Val Leu Asn Val His

305 310 315 320

His Arg Ser Pro Ser Thr His Thr Met Ala Pro Trp Val Lys Arg Cys

325 330 335

Phe Leu His Lys Leu Pro Thr Phe Leu Phe Met Lys Arg Pro Gly Pro

340 345 350

Asp Ser Ser Pro Ala Arg Ala Phe Pro Pro Ser Lys Ser Cys Val Thr

355 360 365

Lys Pro Glu Ala Thr Ala Thr Ser Thr Ser Pro Ser Asn Phe Tyr Gly

370 375 380

Asn Ser Met Tyr Phe Val Asn Pro Ala Ser Ala Ala Ser Lys Ser Pro

385 390 395 400

Ala Gly Ser Thr Pro Val Ala Ile Pro Arg Asp Phe Trp Leu Arg Ser

405 410 415

Ser Gly Arg Phe Arg Gln Asp Val Gln Glu Ala Leu Glu Gly Val Ser

420 425 430

Phe Ile Ala Gln His Met Lys Asn Asp Asp Glu Asp Gln Ser Val Val

435 440 445

Glu Asp Trp Lys Tyr Val Ala Met Val Val Asp Arg Leu Phe Leu Trp

450 455 460

Val Phe Met Phe Val Cys Val Leu Gly Thr Val Gly Leu Phe Leu Pro

465 470 475 480

Pro Leu Phe Gln Thr His Ala Ala Ser Glu Gly Pro Tyr Ala Ala Gln

485 490 495

Arg Asp

<210> 26

<211> 1494

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 26

atgaggcgcg cgccttccct ggtccttttc ttcctggtcg ccctttgcgg gcgcgggaac 60

tgccgcgtgg ccaatgcgga ggaaaagctg atggacgacc ttctgaacaa aacccgttac 120

aataacctga tccgcccagc caccagctcc tcacagctca tctccatcaa gctgcagctc 180

tccctggccc agcttatcag cgtgaatgag cgagagcaga tcatgaccac caatgtctgg 240

ctgaaacagg aatggactga ttaccgcctg acctggaaca gctcccgcta cgagggtgtg 300

aacatcctga ggatccctgc aaagcgcatc tggttgcctg acatcgtgct ttacaacaac 360

gccgacggga cctatgaggt gtctgtctac accaacttga tagtccggtc caacggcagc 420

gtcctgtggc tgccccctgc catctacaag agcgcctgca agattgaggt gaagtacttt 480

cccttcgacc agcagaactg caccctcaag ttccgctcct ggacctatga ccacacggag 540

atagacatgg tcctcatgac gcccacagcc agcatggatg actttactcc cagtggtgag 600

tgggacatag tggccctccc agggagaagg acagtgaacc cacaagaccc cagctacgtg 660

gacgtgactt acgacttcat catcaagcgc aagcctctgt tctacaccat caacctcatc 720

atcccctgcg tgctcaccac cttgctggcc atcctcgtct tctacctgcc atccgactgc 780

ggcgagaaga tgacactgtg catctcagtg ctgctggcac tgacattctt cctgctgctc 840

atctccaaga tcgtgccacc cacctccctc gatgtgcctc tcatcggcaa gtacctcatg 900

ttcaccatgg tgctggtcac cttctccatc gtcaccagcg tctgtgtgct caatgtgcac 960

caccgctcgc ccagcaccca caccatggca ccctgggtca agcgctgctt cctgcacaag 1020

ctgcctacct tcctcttcat gaagcgccct ggccccgaca gcagcccggc cagagccttc 1080

ccgcccagca agtcatgcgt gaccaagccc gaggccaccg ccacctccac cagcccctcc 1140

aacttctatg ggaactccat gtactttgtg aaccccgcct ctgcagcttc caagtctcca 1200

gccggctcta ccccggtggc tatccccagg gatttctggc tgcggtcctc tgggaggttc 1260

cgacaggatg tgcaggaggc attagaaggt gtcagcttca tcgcccagca catgaagaat 1320

gacgatgaag accagagtgt cgttgaggac tggaagtacg tggctatggt ggtggaccgg 1380

ctgttcctgt gggtgttcat gtttgtgtgc gtcctgggca ctgtggggct cttcctaccg 1440

cccctcttcc agacccatgc agcttctgag gggccctacg ctgcccagcg tgac 1494

<210> 27

<211> 517

<212> PRT

<213> 人

<400> 27

Met Glu Gly Pro Val Leu Thr Leu Gly Leu Leu Ala Ala Leu Ala Val

1 5 10 15

Cys Gly Ser Trp Gly Leu Asn Glu Glu Glu Arg Leu Ile Arg His Leu

20 25 30

Phe Gln Glu Lys Gly Tyr Asn Lys Glu Leu Arg Pro Val Ala His Lys

35 40 45

Glu Glu Ser Val Asp Val Ala Leu Ala Leu Thr Leu Ser Asn Leu Ile

50 55 60

Ser Leu Lys Glu Val Glu Glu Thr Leu Thr Thr Asn Val Trp Ile Glu

65 70 75 80

His Gly Trp Thr Asp Asn Arg Leu Lys Trp Asn Ala Glu Glu Phe Gly

85 90 95

Asn Ile Ser Val Leu Arg Leu Pro Pro Asp Met Val Trp Leu Pro Glu

100 105 110

Ile Val Leu Glu Asn Asn Asn Asp Gly Ser Phe Gln Ile Ser Tyr Ser

115 120 125

Cys Asn Val Leu Val Tyr His Tyr Gly Phe Val Tyr Trp Leu Pro Pro

130 135 140

Ala Ile Phe Arg Ser Ser Cys Pro Ile Ser Val Thr Tyr Phe Pro Phe

145 150 155 160

Asp Trp Gln Asn Cys Ser Leu Lys Phe Ser Ser Leu Lys Tyr Thr Ala

165 170 175

Lys Glu Ile Thr Leu Ser Leu Lys Gln Asp Ala Lys Glu Asn Arg Thr

180 185 190

Tyr Pro Val Glu Trp Ile Ile Ile Asp Pro Glu Gly Phe Thr Glu Asn

195 200 205

Gly Glu Trp Glu Ile Val His Arg Pro Ala Arg Val Asn Val Asp Pro

210 215 220

Arg Ala Pro Leu Asp Ser Pro Ser Arg Gln Asp Ile Thr Phe Tyr Leu

225 230 235 240

Ile Ile Arg Arg Lys Pro Leu Phe Tyr Ile Ile Asn Ile Leu Val Pro

245 250 255

Cys Val Leu Ile Ser Phe Met Val Asn Leu Val Phe Tyr Leu Pro Ala

260 265 270

Asp Ser Gly Glu Lys Thr Ser Val Ala Ile Ser Val Leu Leu Ala Gln

275 280 285

Ser Val Phe Leu Leu Leu Ile Ser Lys Arg Leu Pro Ala Thr Ser Met

290 295 300

Ala Ile Pro Leu Ile Gly Lys Phe Leu Leu Phe Gly Met Val Leu Val

305 310 315 320

Thr Met Val Val Val Ile Cys Val Ile Val Leu Asn Ile His Phe Arg

325 330 335

Thr Pro Ser Thr His Val Leu Ser Glu Gly Val Lys Lys Leu Phe Leu

340 345 350

Glu Thr Leu Pro Glu Leu Leu His Met Ser Arg Pro Ala Glu Asp Gly

355 360 365

Pro Ser Pro Gly Ala Leu Val Arg Arg Ser Ser Ser Leu Gly Tyr Ile

370 375 380

Ser Lys Ala Glu Glu Tyr Phe Leu Leu Lys Ser Arg Ser Asp Leu Met

385 390 395 400

Phe Glu Lys Gln Ser Glu Arg His Gly Leu Ala Arg Arg Leu Thr Thr

405 410 415

Ala Arg Arg Pro Pro Ala Ser Ser Glu Gln Ala Gln Gln Glu Leu Phe

420 425 430

Asn Glu Leu Lys Pro Ala Val Asp Gly Ala Asn Phe Ile Val Asn His

435 440 445

Met Arg Asp Gln Asn Asn Tyr Asn Glu Glu Lys Asp Ser Trp Asn Arg

450 455 460

Val Ala Arg Thr Val Asp Arg Leu Cys Leu Phe Val Val Thr Pro Val

465 470 475 480

Met Val Val Gly Thr Ala Trp Ile Phe Leu Gln Gly Val Tyr Asn Gln

485 490 495

Pro Pro Pro Gln Pro Phe Pro Gly Asp Pro Tyr Ser Tyr Asn Val Gln

500 505 510

Asp Lys Arg Phe Ile

515

<210> 28

<211> 1551

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 28

atggaggggc cagtgctgac actggggctg ctggctgccc tggcggtgtg tggcagctgg 60

gggctgaacg aggaggagcg gctgatccgg cacctgtttc aagagaaggg ctacaacaag 120

gagctccggc ccgtggcaca caaagaggag agtgtggacg ttgccctggc cctcacactc 180

tccaacctca tctccctgaa agaagttgag gagaccctca ctaccaatgt gtggatagag 240

cacggctgga cagacaaccg gctgaagtgg aatgctgaag aatttggaaa catcagtgtc 300

ctgcgcctcc ccccggacat ggtgtggctc ccagagattg tgctggagaa caacaatgac 360

ggctccttcc agatctccta ctcctgcaac gtgcttgtct accactacgg cttcgtgtac 420

tggctgccac ctgccatctt ccgctcctcc tgccccatct ctgtcaccta tttccccttc 480

gactggcaga actgctccct caagttcagt tccctcaagt atacggccaa agagatcacc 540

ctgagcctga aacaggatgc caaggagaac cgcacctacc ccgtggagtg gatcatcatt 600

gatcctgaag gcttcacaga gaacggggag tgggagatag tccaccggcc ggccagggtc 660

aacgtggacc ccagagcccc tctggacagc cccagccgcc aggacatcac cttctacctc 720

atcatccgcc gcaagcccct cttctacatc atcaacatcc tggtgccctg cgtgctcatc 780

tccttcatgg tcaacctggt cttctaccta ccggctgaca gtggtgagaa gacatcagtg 840

gccatctcgg tgctcctggc tcagtctgtc ttcctgctgc tcatctccaa gcgtctgcct 900

gccacatcca tggccatccc ccttatcggc aagttcctgc tcttcggcat ggtgctggtc 960

accatggttg tggtgatctg tgtcatcgtg ctcaacatcc acttccgaac acccagcacc 1020

catgtgctgt ctgagggggt caagaagctc ttcctggaga ccctgccgga gctcctgcac 1080

atgtcccgcc cagcagagga tggacccagc cctggggccc tggtgcggag gagcagctcc 1140

ctgggataca tctccaaggc cgaggagtac ttcctgctca agtcccgcag tgacctcatg 1200

ttcgagaagc agtcagagcg gcatgggctg gccaggcgcc tcaccactgc acgccggccc 1260

ccagcaagct ctgagcaggc ccagcaggaa ctcttcaatg agctgaagcc agctgtggat 1320

ggggcaaact tcattgttaa ccacatgagg gaccagaaca attacaatga ggagaaagac 1380

agctggaacc gagtggcccg cacagtggac cgcctctgcc tgtttgtggt gacgcctgtc 1440

atggtggtgg gcacagcctg gatcttcctg cagggcgttt acaaccagcc accaccccag 1500

ccttttcctg gggaccccta ctcctacaac gtgcaggaca agcgcttcat c 1551

<210> 29

<211> 493

<212> PRT

<213> 人

<400> 29

Met Ala Arg Ala Pro Leu Gly Val Leu Leu Leu Leu Gly Leu Leu Gly

1 5 10 15

Arg Gly Val Gly Lys Asn Glu Glu Leu Arg Leu Tyr His His Leu Phe

20 25 30

Asn Asn Tyr Asp Pro Gly Ser Arg Pro Val Arg Glu Pro Glu Asp Thr

35 40 45

Val Thr Ile Ser Leu Lys Val Thr Leu Thr Asn Leu Ile Ser Leu Asn

50 55 60

Glu Lys Glu Glu Thr Leu Thr Thr Ser Val Trp Ile Gly Ile Asp Trp

65 70 75 80

Gln Asp Tyr Arg Leu Asn Tyr Ser Lys Asp Asp Phe Gly Gly Ile Glu

85 90 95

Thr Leu Arg Val Pro Ser Glu Leu Val Trp Leu Pro Glu Ile Val Leu

100 105 110

Glu Asn Asn Ile Asp Gly Gln Phe Gly Val Ala Tyr Asp Ala Asn Val

115 120 125

Leu Val Tyr Glu Gly Gly Ser Val Thr Trp Leu Pro Pro Ala Ile Tyr

130 135 140

Arg Ser Val Cys Ala Val Glu Val Thr Tyr Phe Pro Phe Asp Trp Gln

145 150 155 160

Asn Cys Ser Leu Ile Phe Arg Ser Gln Thr Tyr Asn Ala Glu Glu Val

165 170 175

Glu Phe Thr Phe Ala Val Asp Asn Asp Gly Lys Thr Ile Asn Lys Ile

180 185 190

Asp Ile Asp Thr Glu Ala Tyr Thr Glu Asn Gly Glu Trp Ala Ile Asp

195 200 205

Phe Cys Pro Gly Val Ile Arg Arg His His Gly Gly Ala Thr Asp Gly

210 215 220

Pro Gly Glu Thr Asp Val Ile Tyr Ser Leu Ile Ile Arg Arg Lys Pro

225 230 235 240

Leu Phe Tyr Val Ile Asn Ile Ile Val Pro Cys Val Leu Ile Ser Gly

245 250 255

Leu Val Leu Leu Ala Tyr Phe Leu Pro Ala Gln Ala Gly Gly Gln Lys

260 265 270

Cys Thr Val Ser Ile Asn Val Leu Leu Ala Gln Thr Val Phe Leu Phe

275 280 285

Leu Ile Ala Gln Lys Ile Pro Glu Thr Ser Leu Ser Val Pro Leu Leu

290 295 300

Gly Arg Phe Leu Ile Phe Val Met Val Val Ala Thr Leu Ile Val Met

305 310 315 320

Asn Cys Val Ile Val Leu Asn Val Ser Gln Arg Thr Pro Thr Thr His

325 330 335

Ala Met Ser Pro Arg Leu Arg His Val Leu Leu Glu Leu Leu Pro Arg

340 345 350

Leu Leu Gly Ser Pro Pro Pro Pro Glu Ala Pro Arg Ala Ala Ser Pro

355 360 365

Pro Arg Arg Ala Ser Ser Val Gly Leu Leu Leu Arg Ala Glu Glu Leu

370 375 380

Ile Leu Lys Lys Pro Arg Ser Glu Leu Val Phe Glu Gly Gln Arg His

385 390 395 400

Arg Gln Gly Thr Trp Thr Ala Ala Phe Cys Gln Ser Leu Gly Ala Ala

405 410 415

Ala Pro Glu Val Arg Cys Cys Val Asp Ala Val Asn Phe Val Ala Glu

420 425 430

Ser Thr Arg Asp Gln Glu Ala Thr Gly Glu Glu Val Ser Asp Trp Val

435 440 445

Arg Met Gly Asn Ala Leu Asp Asn Ile Cys Phe Trp Ala Ala Leu Val

450 455 460

Leu Phe Ser Val Gly Ser Ser Leu Ile Phe Leu Gly Ala Tyr Phe Asn

465 470 475 480

Arg Val Pro Asp Leu Pro Tyr Ala Pro Cys Ile Gln Pro

485 490

<210> 30

<211> 1479

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 30

atggcaaggg ctccgcttgg ggtcctgctc ctcttggggc ttctcggcag gggtgtgggg 60

aagaacgagg aactgcgtct ttatcaccat ctcttcaaca actatgaccc aggaagccgg 120

ccagtgcggg agcctgagga tactgtcacc atcagcctca aggtcaccct gacgaatctc 180

atctcactga atgaaaaaga ggagactctc accactagcg tctggattgg aatcgattgg 240

caggattacc gactcaacta cagcaaggac gactttgggg gtatagaaac cctgcgagtc 300

ccttcagaac tcgtgtggct gccagagatt gtgctggaaa acaatattga tggccagttc 360

ggagtggcct acgacgccaa cgtgctcgtc tacgagggcg gctccgtgac gtggctgcct 420

ccggccatct accgcagcgt ctgcgcagtg gaggtcacct acttcccctt cgattggcag 480

aactgttcgc ttattttccg ctctcagacg tacaatgccg aagaggtgga gttcactttt 540

gccgtagaca acgacggcaa gaccatcaac aagatcgaca tcgacacaga ggcctatact 600

gagaacggcg agtgggccat cgacttctgc ccgggggtga tccgccgcca ccacggtggc 660

gccaccgacg gcccagggga gactgacgtc atctactcgc tcatcatccg ccggaagccg 720

ctcttctacg tcattaacat catcgtgccc tgtgtgctca tctcgggcct ggtgctgctc 780

gcctacttcc tgccggcgca ggccggcggc cagaaatgca cggtctccat caacgtcctg 840

ctcgcccaga ccgtcttctt gttcctcatt gcccagaaaa tcccagagac ttctctgagc 900

gtgccgctcc tgggcaggtt ccttattttc gtcatggtgg tcgccacgct cattgtcatg 960

aattgcgtca tcgtgctcaa cgtgtcccag cggacgccca ccacccacgc catgtccccg 1020

cggctgcgcc acgttctcct ggagctgctg ccgcgcctcc tgggctcccc gccgccgccc 1080

gaggcccccc gggccgcctc gcccccaagg cgggcgtcgt cggtgggctt attgctccgc 1140

gcggaggagc tgatactgaa aaagccacgg agcgagctcg tgtttgaggg gcagaggcac 1200

cggcagggga cctggacggc tgccttctgc cagagcctgg gcgccgccgc ccccgaggtc 1260

cgctgctgtg tggatgccgt gaacttcgtg gccgagagca cgagagatca ggaggccacc 1320

ggcgaggaag tgtccgactg ggtgcgcatg gggaatgccc ttgacaacat ctgcttctgg 1380

gccgctctgg tgctcttcag cgtgggctcc agcctcatct tcctcggggc ctacttcaac 1440

cgagtgcctg atctccccta cgcgccgtgt atccagcct 1479

<210> 31

<211> 517

<212> PRT

<213> 人

<400> 31

Met His Gly Gly Gln Gly Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ala Val

1 5 10 15

Cys Leu Gly Ala Gln Gly Arg Asn Gln Glu Glu Arg Leu Leu Ala Asp

20 25 30

Leu Met Gln Asn Tyr Asp Pro Asn Leu Arg Pro Ala Glu Arg Asp Ser

35 40 45

Asp Val Val Asn Val Ser Leu Lys Leu Thr Leu Thr Asn Leu Ile Ser

50 55 60

Leu Asn Glu Arg Glu Glu Ala Leu Thr Thr Asn Val Trp Ile Glu Met

65 70 75 80

Gln Trp Cys Asp Tyr Arg Leu Arg Trp Asp Pro Arg Asp Tyr Glu Gly

85 90 95

Leu Trp Val Leu Arg Val Pro Ser Thr Met Val Trp Arg Pro Asp Ile

100 105 110

Val Leu Glu Asn Asn Val Asp Gly Val Phe Glu Val Ala Leu Tyr Cys

115 120 125

Asn Val Leu Val Ser Pro Asp Gly Cys Ile Tyr Trp Leu Pro Pro Ala

130 135 140

Ile Phe Arg Ser Ala Cys Ser Ile Ser Val Thr Tyr Phe Pro Phe Asp

145 150 155 160

Trp Gln Asn Cys Ser Leu Ile Phe Gln Ser Gln Thr Tyr Ser Thr Asn

165 170 175

Glu Ile Asp Leu Gln Leu Ser Gln Glu Asp Gly Gln Thr Ile Glu Trp

180 185 190

Ile Phe Ile Asp Pro Glu Ala Phe Thr Glu Asn Gly Glu Trp Ala Ile

195 200 205

Gln His Arg Pro Ala Lys Met Leu Leu Asp Pro Ala Ala Pro Ala Gln

210 215 220

Glu Ala Gly His Gln Lys Val Val Phe Tyr Leu Leu Ile Gln Arg Lys

225 230 235 240

Pro Leu Phe Tyr Val Ile Asn Ile Ile Ala Pro Cys Val Leu Ile Ser

245 250 255

Ser Val Ala Ile Leu Ile His Phe Leu Pro Ala Lys Ala Gly Gly Gln

260 265 270

Lys Cys Thr Val Ala Ile Asn Val Leu Leu Ala Gln Thr Val Phe Leu

275 280 285

Phe Leu Val Ala Lys Lys Val Pro Glu Thr Ser Gln Ala Val Pro Leu

290 295 300

Ile Ser Lys Tyr Leu Thr Phe Leu Leu Val Val Thr Ile Leu Ile Val

305 310 315 320

Val Asn Ala Val Val Val Leu Asn Val Ser Leu Arg Ser Pro His Thr

325 330 335

His Ser Met Ala Arg Gly Val Arg Lys Val Phe Leu Arg Leu Leu Pro

340 345 350

Gln Leu Leu Arg Met His Val Arg Pro Leu Ala Pro Ala Ala Val Gln

355 360 365

Asp Thr Gln Ser Arg Leu Gln Asn Gly Ser Ser Gly Trp Ser Ile Thr

370 375 380

Thr Gly Glu Glu Val Ala Leu Cys Leu Pro Arg Ser Glu Leu Leu Phe

385 390 395 400

Gln Gln Trp Gln Arg Gln Gly Leu Val Ala Ala Ala Leu Glu Lys Leu

405 410 415

Glu Lys Gly Pro Glu Leu Gly Leu Ser Gln Phe Cys Gly Ser Leu Lys

420 425 430

Gln Ala Ala Pro Ala Ile Gln Ala Cys Val Glu Ala Cys Asn Leu Ile

435 440 445

Ala Cys Ala Arg His Gln Gln Ser His Phe Asp Asn Gly Asn Glu Glu

450 455 460

Trp Phe Leu Val Gly Arg Val Leu Asp Arg Val Cys Phe Leu Ala Met

465 470 475 480

Leu Ser Leu Phe Ile Cys Gly Thr Ala Gly Ile Phe Leu Met Ala His

485 490 495

Tyr Asn Arg Val Pro Ala Leu Pro Phe Pro Gly Asp Pro Arg Pro Tyr

500 505 510

Leu Pro Ser Pro Asp

515

<210> 32

<211> 1551

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 32

atgcatgggg gccaggggcc gctgctcctc ctgctgctgc tggctgtctg cctgggggcc 60

cagggccgga accaggagga gcgcctgctc gcagacctga tgcaaaacta cgaccccaac 120

ctgcggcccg cggaacgaga ctcggatgtg gtcaatgtca gcctgaagct aaccctcacc 180

aacctcatct ccctgaacga gcgagaggaa gccctcacca ccaatgtctg gatagagatg 240

cagtggtgcg actatcgcct gcgctgggat ccgcgagact acgaaggcct gtgggtgctg 300

agggtgccgt ccaccatggt gtggcggccg gatatcgtgc tggagaacaa cgtggacggt 360

gtcttcgagg tggccctcta ctgcaatgtg ctcgtgtccc ctgacggctg tatctactgg 420

ctgccgcctg ccatcttccg ttccgcctgc tctatctcag tcacctactt ccccttcgac 480

tggcagaact gctcccttat cttccagtcc cagacttaca gcaccaatga gattgatctg 540

cagctgagtc aggaagatgg ccagaccatc gagtggattt tcattgaccc tgaggccttc 600

acagagaatg gggagtgggc catccagcac cgaccagcca agatgctcct ggacccagcg 660

gcgccagccc aggaagcagg ccaccagaag gtggtgttct acctgctcat ccagcgcaag 720

cccctcttct acgtcatcaa catcatcgcc ccctgtgtgc tcatctcctc tgtcgccatc 780

ctcatccact tccttcctgc caaggctggg ggccagaagt gtaccgtcgc catcaacgtg 840

ctcctggccc agactgtctt cctcttcctt gtggccaaga aggtgcctga aacctcccag 900

gcggtgccac tcatcagcaa gtacctgacc ttcctcctgg tggtgaccat cctcattgtc 960

gtgaatgctg tggttgtgct caatgtctcc ttgcggtctc cacacacaca ctccatggcc 1020

cgaggggtcc gcaaggtgtt cctgaggctc ttgccccagc tgctgaggat gcacgttcgc 1080

ccgctggccc cggcagctgt gcaggacacc cagtcccggc tacagaatgg ctcctcggga 1140

tggtcgatca caactgggga ggaggtggcc ctctgcctgc ctcgcagtga actcctcttc 1200

cagcagtggc agcggcaagg gctggtggcg gcagcgctgg agaagctaga gaaaggcccg 1260

gagttagggc tgagccagtt ctgtggcagc ctgaagcagg ctgccccagc catccaggcc 1320

tgtgtggaag cctgcaacct cattgcctgt gcccggcacc agcagagtca ctttgacaat 1380

gggaatgagg agtggttcct ggtgggccga gtgctggacc gcgtctgctt cctggccatg 1440

ctctcgctct tcatctgtgg cacagctggc atcttcctca tggcccacta caaccgggtg 1500

ccggccctgc cattccctgg agatccacgc ccctacctgc cctcaccaga c 1551

<210> 33

<211> 20

<212> PRT

<213> 人

<400> 33

Ser Glu His Glu Thr Arg Leu Val Ala Lys Leu Phe Lys Asp Tyr Ser

1 5 10 15

Ser Val Val Arg

20

<210> 34

<211> 20

<212> PRT

<213> 人

<400> 34

Thr Glu Thr Glu Asp Arg Leu Phe Lys His Leu Phe Arg Gly Tyr Asn

1 5 10 15

Arg Trp Ala Arg

20

<210> 35

<211> 20

<212> PRT

<213> 人

<400> 35

Ser Glu Ala Glu His Arg Leu Phe Glu Arg Leu Phe Glu Asp Tyr Asn

1 5 10 15

Glu Ile Ile Arg

20

<210> 36

<211> 20

<212> PRT

<213> 人

<400> 36

Ala His Ala Glu Glu Arg Leu Leu Lys Lys Leu Phe Ser Gly Tyr Asn

1 5 10 15

Lys Trp Ser Arg

20

<210> 37

<211> 20

<212> PRT

<213> 人

<400> 37

Ala Lys His Glu Asp Ser Leu Leu Lys Asp Leu Phe Gln Asp Tyr Glu

1 5 10 15

Arg Trp Val Arg

20

<210> 38

<211> 20

<212> PRT

<213> 人

<400> 38

Cys Ala Thr Glu Glu Arg Leu Phe His Lys Leu Phe Ser His Tyr Asn

1 5 10 15

Gln Phe Ile Arg

20

<210> 39

<211> 20

<212> PRT

<213> 人

<400> 39

Gly Glu Phe Gln Arg Lys Leu Tyr Lys Glu Leu Val Lys Asn Tyr Asn

1 5 10 15

Pro Leu Glu Arg

20

<210> 40

<211> 20

<212> PRT

<213> 人

<400> 40

Gly Lys Tyr Ala Gln Lys Leu Phe Asn Asp Leu Phe Glu Asp Tyr Ser

1 5 10 15

Asn Ala Leu Arg

20

<210> 41

<211> 20

<212> PRT

<213> 人

<400> 41

Gly Arg Leu Ala Leu Lys Leu Phe Arg Asp Leu Phe Ala Asn Tyr Thr

1 5 10 15

Ser Ala Leu Arg

20

<210> 42

<211> 20

<212> PRT

<213> 人

<400> 42

Ser Glu Ala Glu Gly Arg Leu Arg Glu Lys Leu Phe Ser Gly Tyr Asp

1 5 10 15

Ser Ser Val Arg

20

<210> 43

<211> 22

<212> PRT

<213> 人

<400> 43

Thr Asp Thr Glu Glu Arg Leu Val Glu His Leu Leu Asp Pro Ser Arg

1 5 10 15

Tyr Asn Lys Leu Ile Arg

20

<210> 44

<211> 20

<212> PRT

<213> 人

<400> 44

Ala Glu Asn Glu Asp Ala Leu Leu Arg His Leu Phe Gln Gly Tyr Gln

1 5 10 15

Lys Trp Val Arg

20

<210> 45

<211> 22

<212> PRT

<213> 人

<400> 45

Ala Asn Ala Glu Glu Lys Leu Met Asp Asp Leu Leu Asn Lys Thr Arg

1 5 10 15

Tyr Asn Asn Leu Ile Arg

20

<210> 46

<211> 22

<212> PRT

<213> 人

<400> 46

Leu Asn Glu Glu Glu Arg Leu Ile Arg His Leu Phe Gln Glu Lys Gly

1 5 10 15

Tyr Asn Lys Glu Leu Arg

20

<210> 47

<211> 20

<212> PRT

<213> 人

<400> 47

Lys Asn Glu Glu Leu Arg Leu Tyr His His Leu Phe Asn Asn Tyr Asp

1 5 10 15

Pro Gly Ser Arg

20

<210> 48

<211> 20

<212> PRT

<213> 人

<400> 48

Arg Asn Gln Glu Glu Arg Leu Leu Ala Asp Leu Met Gln Asn Tyr Asp

1 5 10 15

Pro Asn Leu Arg

20

<210> 49

<211> 17

<212> PRT

<213> 人

<400> 49

Trp Val Asp Tyr Asn Leu Lys Trp Asn Pro Asp Asp Tyr Gly Gly Val

1 5 10 15

Lys

<210> 50

<211> 17

<212> PRT

<213> 人

<400> 50

Trp Ser Asp Tyr Lys Leu Arg Trp Asn Pro Thr Asp Phe Gly Asn Ile

1 5 10 15

Thr

<210> 51

<211> 17

<212> PRT

<213> 人

<400> 51

Trp Asn Asp Tyr Lys Leu Lys Trp Asn Pro Ser Asp Tyr Gly Gly Ala

1 5 10 15

Glu

<210> 52

<211> 17

<212> PRT

<213> 人

<400> 52

Trp His Asp Tyr Lys Leu Arg Trp Asp Pro Ala Asp Tyr Glu Asn Val

1 5 10 15

Thr

<210> 53

<211> 17

<212> PRT

<213> 人

<400> 53

Trp Ile Asp Val Lys Leu Arg Trp Asn Pro Asp Asp Tyr Gly Gly Ile

1 5 10 15

Lys

<210> 54

<211> 17

<212> PRT

<213> 人

<400> 54

Trp Asn Asp Tyr Lys Leu Arg Trp Asp Pro Met Glu Tyr Asp Gly Ile

1 5 10 15

Glu

<210> 55

<211> 17

<212> PRT

<213> 人

<400> 55

Trp Thr Asp His Tyr Leu Gln Trp Asn Val Ser Glu Tyr Pro Gly Val

1 5 10 15

Lys

<210> 56

<211> 17

<212> PRT

<213> 人

<400> 56

Trp His Asp Ala Tyr Leu Thr Trp Asp Arg Asp Gln Tyr Asp Gly Leu

1 5 10 15

Asp

<210> 57

<211> 17

<212> PRT

<213> 人

<400> 57

Trp Thr Asp Ala Tyr Leu Arg Trp Asp Pro Asn Ala Tyr Gly Gly Leu

1 5 10 15

Asp

<210> 58

<211> 17

<212> PRT

<213> 人

<400> 58

Trp Thr Asp Tyr Arg Leu Ser Trp Asp Pro Ala Glu His Asp Gly Ile

1 5 10 15

Asp

<210> 59

<211> 17

<212> PRT

<213> 人

<400> 59

Trp Glu Asp Tyr Arg Leu Thr Trp Lys Pro Glu Glu Phe Asp Asn Met

1 5 10 15

Lys

<210> 60

<211> 17

<212> PRT

<213> 人

<400> 60

Trp Thr Asp His Lys Leu Arg Trp Asn Pro Asp Asp Tyr Gly Gly Ile

1 5 10 15

His

<210> 61

<211> 17

<212> PRT

<213> 人

<400> 61

Trp Thr Asp Tyr Arg Leu Thr Trp Asn Ser Ser Arg Tyr Glu Gly Val

1 5 10 15

Asn

<210> 62

<211> 17

<212> PRT

<213> 人

<400> 62

Trp Thr Asp Asn Arg Leu Lys Trp Asn Ala Glu Glu Phe Gly Asn Ile

1 5 10 15

Ser

<210> 63

<211> 17

<212> PRT

<213> 人

<400> 63

Trp Gln Asp Tyr Arg Leu Asn Tyr Ser Lys Asp Asp Phe Gly Gly Ile

1 5 10 15

Glu

<210> 64

<211> 17

<212> PRT

<213> 人

<400> 64

Trp Cys Asp Tyr Arg Leu Arg Trp Asp Pro Arg Asp Tyr Glu Gly Leu

1 5 10 15

Trp

<210> 65

<211> 21

<212> PRT

<213> 人

<400> 65

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro

20

<210> 66

<211> 21

<212> PRT

<213> 人

<400> 66

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

1 5 10 15

Ser Leu Val Ile Thr

20

<210> 67

<211> 45

<212> PRT

<213> 人

<400> 67

Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala

1 5 10 15

Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly

20 25 30

Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

35 40 45

<210> 68

<211> 42

<212> PRT

<213> 人

<400> 68

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

1 5 10 15

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

20 25 30

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu

35 40

<210> 69

<211> 112

<212> PRT

<213> 人

<400> 69

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 70

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 70

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly

1 5 10

Claims (30)

1.一种编码嵌合自身抗体受体(CAAR)的多核苷酸，其中所述CAAR包含：胞外域、跨膜域和胞内信号传导域，所述胞外域包含nAChR的免疫原性片段，其中所述胞外域与B细胞上表达的针对nAChR的B细胞受体(BCR)结合，其中表达所述CAAR的细胞与B细胞上表达的BCR结合，或诱导杀伤表达所述BCR或表达针对nAChR的自身抗体的B细胞。

2.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述nAChR的免疫原性片段包含nAChR的亚基的胞外区或所述胞外区的片段。

3.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述nAChR的免疫原性片段包含选自表2所列组的序列或与其具有至少90％同一性的序列，或与其具有1、2、3、4或5个氨基酸残基差异的序列。

4.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述CAAR还包含信号肽。

5.根据权利要求4所述的多核苷酸，其中所述信号肽是CD8α的信号肽。

6.根据权利要求5所述的多核苷酸，其中所述CD8α的信号肽包含SEQ ID NO:65的序列或与其具有至少90％同一性的序列；或与其具有1、2、3、4、5个氨基酸残基差异的序列。

7.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述跨膜域包含CD8α的跨膜域。

8.根据权利要求7所述的多核苷酸，其中所述CD8α的跨膜域包含SEQ ID NO:66的序列或与其具有至少90％同一性的序列；或与其具有1、2、3、4、5个氨基酸残基差异的序列。

9.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述胞外域通过铰链区连接至所述跨膜域。

10.根据权利要求9所述的多核苷酸，其中所述铰链区包含CD8α的铰链区。

11.根据权利要求10所述的多核苷酸，其中所述CD8α的铰链区包含SEQ ID NO:67的序列或与其具有至少90％同一性的序列；或与其具有1、2、3、4、5个氨基酸残基差异的序列。

12.根据权利要求9所述的多核苷酸，其中所述铰链区包含GS连接子。

13.根据权利要求12所述的多核苷酸，其中所述GS连接子包含SEQ ID NO:70的序列或与其具有至少90％同一性的序列；或与其具有1、2、3、4、5个氨基酸残基差异的序列。

14.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中胞内域包含共刺激域和信号传导域。

15.根据权利要求14所述的多核苷酸，其中所述共刺激域包含CD137的胞内域。

16.根据权利要求15所述的多核苷酸，其中所述CD137的胞内域包含SEQ ID NO:68的序列或与其具有至少90％同一性的序列；或与其具有1、2、3、4、5个氨基酸残基差异的序列。

17.根据权利要求14所述的多核苷酸，其中所述胞内域包含CD3ζ的信号传导域。

18.根据权利要求17所述的多核苷酸，其中所述CD3ζ的信号传导域包含SEQ ID NO:69的序列或与其具有至少90％同一性的序列；或与其具有1、2、3、4、5个氨基酸残基差异的序列。

19.一种多肽，其由根据权利要求1至18中任一项所述的多核苷酸编码。

20.一种载体，其包含根据权利要求1至18中任一项所述的多核苷酸，其中编码所述CAAR的所述多核苷酸可操作地连接于至少一个调节性多核苷酸元件以用于表达所述CAAR。

21.根据权利要求20所述的载体，其中所述载体是质粒载体、病毒载体、逆转录转座子、定点插入载体或自杀式表达载体。

22.根据权利要求21所述的载体，其中所述载体是慢病毒载体、逆转录病毒载体或AAV载体。

23.一种工程细胞，其包含根据权利要求1至18中任一项所述的多核苷酸。

24.根据权利要求23所述的工程细胞，其中所述工程细胞是T细胞或NK细胞。

25.一种治疗或预防有需要的受试者的与抗nAChR自身抗体相关的病症的方法，其包括施用有效量的根据权利要求23或24所述的工程细胞。

26.根据权利要求25所述的方法，其中所述与抗nAChR自身抗体相关的病症是重症肌无力。

27.根据权利要求25或26中任一项所述的方法，其中所述工程细胞是自体细胞。

28.根据权利要求25或26中任一项所述的方法，其中所述工程细胞是同种异体细胞。

29.根据权利要求25至28中任一项所述的方法，其中所述方法还包括共同施用增加所述工程细胞的功效的药剂。

30.根据权利要求25至29中任一项所述的方法，其中所述方法还包括共同施用改善与施用所述工程细胞相关的副作用的药剂。

Images