CN114072161A - 用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物及其用途,具体地,本发明涉及包含选自由乳杆菌属菌株、乳球菌属菌株、肠球菌属菌株、双歧杆菌属菌株、芽孢杆菌属菌株、酵母菌属菌株、片球菌属菌株及明串珠菌属菌株组成的组中的一种以上的菌株的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物及具有包含上述组合物的非荧光晚期糖基化终末产物降低活性的食品组合物、药物组合物、用于调节肠道的组合物、益生菌组合物、饲料用组合物、发酵产品,并且,本发明涉及非荧光晚期糖基化终末产物抑制剂的制备方法及非荧光晚期糖基化终末产物的抑制方法。
Description
技术领域
本发明涉及用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物、其用途以及利用其的非荧光晚期糖基化终末产物的抑制方法。
背景技术
蛋白质的非酶糖基化反应(Nonenzymatic glycation reaction)是指蛋白质的赖氨酸残基等的氨基酸基团与还原糖在没有酶作用的情况下发生的美拉德反应(Maillardreaction),通过此反应形成晚期糖基化终末产物(Advanced glycation end products,AGEs)。蛋白质的非酶糖基化反应是如下的反应:作为蛋白质的游离氨基酸的赖氨酸(lysine)或精氨酸(arginine)与还原糖的羰基(carbonyl group)进行反应来形成作为初始糖基化产物的席夫碱(Shciff base),此时形成的化合物继续通过缩合、重移位、氧化、分裂、环化等一系列复杂反应形成棕色化合物(黑色素(melanoidine)),由此形成整体概念下的不可逆晚期糖基化终末产物。
晚期糖基化终末产物为不可逆反应产物,因此,一旦生成,即使血糖恢复正常也不会降解,在蛋白质的生存期间在组织中累积,导致组织的结构和功能异常变化。半衰期较长的胶原蛋白(collagen)容易发生糖基化反应,并与已形成的晚期糖基化终末产物形成胶原蛋白交联(cross-linking),从而引起体内结构及其他蛋白质缔结组织等异常物理化学变化。并且,被各种细胞类型的特异性受体识别,成为引起如糖尿病性视网膜病变(retinopathy)、糖尿病性神经病变(diabetic neuropathy)、糖尿病性白内障(cataract)、糖尿病性肾病(nephropathy)等的糖尿病并发症和糖尿病、慢性肾病、心脏病、血管疾病及老化疾病的原因。
因此,正在进行抑制这些晚期糖基化终末产物的生成的研究,典型的合成药物有氨基胍,它是亲和性肼(hydrazine),其与缩合反应的产物结合并通过抑制晚期糖基化终末产物的生成来防止并发症的发展。并且,氨基胍为预防及治疗糖尿病并发症的最有前景的药物,已进行到III期临床试验,但是存在当长期给药时引起毒性的问题,因此需要开发更安全的药剂。
为此,需要开发一种对人体没有副作用、确保稳定性并能够抑制及降低晚期糖基化终末产物的新材料。
在这方面,本申请研发了利用乳酸菌的有效降低晚期糖基化终末产物的方法,从而完成了本发明。
发明内容
技术问题
本发明的目的在于,提供一种用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物,其包含选自由乳杆菌属菌株、乳球菌属菌株、肠球菌属菌株、双歧杆菌属菌株、芽孢杆菌属菌株、酵母菌属菌株、片球菌属菌株及明串珠菌属菌株组成的组中的一种以上的菌株。
本发明的再一目的在于,提供一种功能性保健食品,其包含上述本发明的利用乳酸菌的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物。
本发明的另一目的在于,提供一种用于预防或治疗非荧光晚期糖基化终末产物相关疾病的药物组合物,其包含上述本发明的利用乳酸菌的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物。
本发明的还有一目的在于,提供一种饲料用组合物,其包含上述本发明的利用乳酸菌的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物。
本发明的又一目的在于,提供一种非荧光晚期糖基化终末产物抑制剂的制备方法,其包括将选自由乳杆菌属菌株、乳球菌属菌株、肠球菌属菌株、双歧杆菌属菌株、芽孢杆菌属菌株、酵母菌属菌株、片球菌属菌株及明串珠菌属菌株组成的组中的一种以上的菌株、其破碎物或其培养物粉末化的步骤。
进而,本发明的又一目的在于,提供一种非荧光晚期糖基化终末产物的抑制方法,利用选自由乳杆菌属菌株、乳球菌属菌株、肠球菌属菌株、双歧杆菌属菌株、芽孢杆菌属菌株、酵母菌属菌株、片球菌属菌株及明串珠菌属菌株组成的组中的一种以上的菌株的非荧光晚期糖基化终末产物的抑制方法。
技术方案
为了实现如上所述的本发明的目的,本发明提供一种用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物,其包含选自由乳杆菌属菌株、乳球菌属菌株、肠球菌属菌株、双歧杆菌属菌株、芽孢杆菌属菌株、酵母菌属菌株、片球菌属菌株及明串珠菌属菌株组成的组中的一种以上的菌株。
在本发明的一实施例中,上述乳杆菌属菌株可以为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、干酪乳杆菌(Lactobacilluscassei)、瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)、清酒乳杆菌(Lactobacillus sakei)、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracassei)、卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)、乳酸乳杆菌(Lactobacillus lactis)、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)、短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、副干酪乳杆菌坚韧亚种(Lactobacillus paracasei subsp.tolerans)、短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)、植物乳杆菌植物亚种(Lactobacillus plantarumsubsp.Plantarum)、类植物乳杆菌(Lactobacillus paraplantarum)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、副干酪乳杆菌KF00816(保藏编号:KCCM11998P)或戊糖乳杆菌KF8(保藏编号:KCCM11997P)。
在本发明的一实施例中,上述乳球菌属菌株可以为乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)、韩中大乳球菌(Lactococcus chungangensis)、斐济乳球菌(Lactococcusfujiensis)、乳酸乳球菌乳脂亚种(Lactococcus lactis subsp.cremoris)、乳酸乳球菌乳亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)、棉籽糖乳球菌(Lactococcusraffinolactis)、格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)或乳酸乳球菌KF140(保藏编号:KCCM11673P)。
在本发明的一实施例中,上述肠球菌属菌株可以为屎肠球菌(Enterococcusfaecium)或粪肠球菌(Enterococcus faecalis)。
在本发明的一实施例中,上述双歧杆菌属菌株可以为长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)、双歧杆菌乳酸亚种(Bifidobacterium animalis sub.Lactis)或两岐双岐杆菌(Bifidobacterium bifidum)。
在本发明的一实施例中,上述芽孢杆菌属菌株可以为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)、萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)、纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)、聚酵素芽孢杆菌(Bacillus polyfermenticus)或枯草芽孢杆菌KF11(保藏编号:KCCM11981P)。
在本发明的一实施例中,上述酵母菌属菌株可以为酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、布拉酵母(Saccharomyces boulardii)、葡萄酒酵母(Saccharomycesellipsoideus)、巴氏酵母(Saccharomyces Pastorianus)或贝酵母(SaccharomycesBayanus)。
在本发明的一实施例中,上述片球菌属菌株可以为戊糖片球菌(Pediococcuspentosaceus)或乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)。
在本发明的一实施例中,上述明串珠菌属菌株可以为柠檬明串珠菌(Leuconostoccitreum)。
在本发明的一实施例中,上述非荧光晚期糖基化终末产物可以为N-羧甲基赖氨酸(N-carboxymethyl lysine,CML)或N-羧乙基赖氨酸(N-carboxyethyl lysine,CEL)。
并且,本发明提供一种食品组合物,其包含本发明的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物。
并且,本发明提供一种用于预防或治疗非荧光晚期糖基化终末产物相关疾病的药物组合物,其包含本发明的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物。
在本发明的一实施例中,上述疾病可选自由糖尿病、糖尿病并发症、慢性肾病、心脏病、血管疾病及老化组成的组中。
并且,本发明提供一种饲料用组合物,其包含本发明的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物。
并且,本发明提供一种用于调节肠道的组合物,其包含本发明的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物。
并且,本发明提供一种益生菌组合物,其包含本发明的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物。
并且,本发明提供一种发酵产品,其包含本发明的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物。
并且,本发明提供非荧光晚期糖基化终末产物抑制剂的制备方法,其包括将选自由乳杆菌属菌株、乳球菌属菌株、肠球菌属菌株、双歧杆菌属菌株、芽孢杆菌属菌株、酵母菌属菌株、片球菌属菌株及明串珠菌属菌株组成的组中的单一菌株或两种以上的混合菌株、其破碎物或其培养物粉末化的步骤。
并且,本发明提供一种非荧光晚期糖基化终末产物的抑制方法,其利用选自由乳杆菌属菌株、乳球菌属菌株、肠球菌属菌株、双歧杆菌属菌株、芽孢杆菌属菌株、酵母菌属菌株、片球菌属菌株及明串珠菌属菌株组成的组中的单一菌株或两种以上的混合菌株。
发明的效果
本发明涉及利用乳酸菌的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物及其用途,本发明的利用乳酸菌的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物具有能够有效降低晚期糖基化终末产物的活性,因此具有可用于制备能够预防、改善或治疗由晚期糖基化终末产物诱发的疾病的功能性食品及药物的效果,进而,具有还可用于制备肠道调节用、益生菌、饲料及发酵产品的效果。
附图说明
图1示出本发明的一实施例中的当在包含晚期糖基化终末产物(N-羧甲基赖氨酸)的食品处理微生物时的晚期糖基化终末产物的抑制程度的分析结果。
图2示出本发明的一实施例中的包含晚期糖基化终末产物(N-羧甲基赖氨酸)的食品处理微生物时没有晚期糖基化终末产物抑制活性的微生物的结果。
具体实施方式
本发明提供用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物及其用途,具体地,本发明提供利用乳酸菌的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物及非荧光晚期糖基化终末产物的降低方法。
如前述的现有技术中所记述,晚期糖基化终末产物为不可逆反应产物,一旦生成,即使血糖恢复正常也不会降解,在蛋白质的生存期间在组织中累积,导致组织的结构和功能异常变化,由此成为诱发如糖尿病、糖尿病并发症、慢性肾病、心脏病、血管疾病或老化的疾病的原因。
晚期糖基化终末产物的种类具有如人戊糖素(pentosidine)或精氨嘧啶(argpyrimidine)的荧光性物质以及如N-羧甲基赖氨酸、N-羧乙基赖氨酸等的非荧光性物质,在本发明中所要抑制的晚期糖基化终末产物为非荧光晚期糖基化终末产物。
据报告,针对非荧光晚期糖基化终末产物中的N-羧甲基赖氨酸的风险,糖尿病性视网膜病变患者与正常人之间的N-羧甲基赖氨酸水平的比较结果显示,在糖尿病性视网膜病变的情况下,N-羧甲基赖氨酸的表达水平与正常相比增加,若抑制N-羧甲基赖氨酸,则可治疗糖尿病性视网膜病变。
并且,已知与非糖尿病性白内障患者相比,糖尿病性白内障患者的N-羧甲基赖氨酸水平增加,发现N-羧甲基赖氨酸为造成糖尿病性白内障的主要原因,当诱发糖尿病性肾病时,N-羧甲基赖氨酸的水平也增加,已知N-羧甲基赖氨酸为糖尿病性肾病的疾病引起因素。
并且,发现诱发慢性肾病时N-羧甲基赖氨酸的水平与正常相比增加,已知增加的N-羧甲基赖氨酸的水平可用作判断慢性肾病的发病与否的因子,其抑制剂可用作慢性肾病的治疗剂。
不仅如此,已知N-羧甲基赖氨酸为糖尿病性神经病变的危险因子,据研究结果报告,与正常患者相比,糖尿病性神经病变患者的N-羧甲基赖氨酸的水平显著增加。
已知在血管疾病的情况下,当血管疾病发病时,N-羧甲基赖氨酸的水平增加,N-羧甲基赖氨酸也是血管疾病的危险因子,已知N-羧甲基赖氨酸的抑制可预防或治疗血管疾病,还已知N-羧甲基赖氨酸是心脏病和糖尿病的主要病因,在引起这些疾病的情况下,N-羧甲基赖氨酸的水平增加。
因此,在抑制或减少这种非荧光晚期糖基化终末产物的生成的情况下,可预防、改善或治疗晚期糖基化终末产物诱发的各种疾病。
为此,本发明人在研究非荧光晚期糖基化终末产物的有效降低方法的过程中,确认了当利用微生物时,可有效抑制非荧光晚期糖基化终末产物。
因此,本发明提供用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物,其包含选自由乳杆菌属菌株、乳球菌属菌株、肠球菌属菌株、双歧杆菌属菌株、芽孢杆菌属菌株、酵母菌属菌株、片球菌属菌株及明串珠菌属菌株组成的组中的一种以上的菌株。
其中,在上述乳杆菌属菌株中,乳杆菌属菌株可以为植物乳杆菌、加氏乳杆菌、干酪乳杆菌、瑞士乳杆菌、清酒乳杆菌、副干酪乳杆菌、卷曲乳杆菌、乳酸乳杆菌、唾液乳杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、约氏乳杆菌、短乳杆菌、副干酪乳杆菌坚韧亚种、短乳杆菌、戊糖乳杆菌、植物乳杆菌植物亚种、类植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、副干酪乳杆菌KF00816(保藏编号:KCCM11998P)或戊糖乳杆菌KF8(保藏编号:KCCM11997P),但并不局限于此。
上述乳球菌属菌株可以为乳酸乳球菌、韩中大乳球菌、斐济乳球菌、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳亚种、棉籽糖乳球菌、格氏乳球菌或乳酸乳球菌KF140(保藏编号:KCCM11673P),但并不局限于此。
上述肠球菌属菌株可以为屎肠球菌或粪肠球菌,但并不局限于此。
上述双歧杆菌属菌株可以为长双歧杆菌、短双歧杆菌、双歧杆菌乳酸亚种或两岐双岐杆菌,但并不局限于此。
上述芽孢杆菌属菌株可以为解淀粉芽孢杆菌、萎缩芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、莫海威芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、聚酵素芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌KF11(保藏编号:KCCM11981P),但并不局限于此。
上述酵母菌属菌株可以为酿酒酵母、布拉酵母、葡萄酒酵母、巴氏酵母或贝酵母,但并不局限于此。
上述片球菌属菌株可以为戊糖片球菌或乳酸片球菌,但并不局限于此。
上述明串珠菌属菌株可以为柠檬明串珠菌。
本发明人为了分析上述记述的各微生物单独菌株及上述微生物的混合菌株降低非荧光晚期糖基化终末产物的活性,在包含晚期糖基化终末产物的试样中分别处理各菌株后,测定培养液中的晚期糖基化终末产物的含量,结果确认显示优秀的晚期糖基化终末产物降低效果。
因此,本发明人可知,可将上述微生物,具体地,各微生物的单独菌株或两种以上的混合菌株有用地用于制备旨在降低非荧光晚期糖基化终末产物的功能性产品。
在本发明的一实施例中,分析了40种各微生物降低作为晚期糖基化终末产物的N-羧甲基赖氨酸的活性,结果确认,在包含N-羧甲基赖氨酸的食品中,36种微生物具有降低N-羧甲基赖氨酸的活性,相反,4种微生物没有降低N-羧甲基赖氨酸的活性,反而增加N-羧甲基赖氨酸。
因此,本发明可提供一种用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物,优选地,其包含选自下述实施例的表1中记载的36种微生物组中的一种以上的菌株。
并且,在本发明的再一实施例中,分析使用混合菌株时的降低N-羧甲基赖氨酸的活性是否与单独使用相比更优秀的结果,与单独处理组相比,当使用互不相同的微生物的两种以上的混合菌株时,可确认降低N-羧甲基赖氨酸的活性增加,以1∶1∶1∶1混合比(微生物细胞数)处理副干酪乳杆菌KF00816(保藏编号:KCCM11998P)、戊糖乳杆菌KF8(保藏编号:KCCM11997P)、乳酸乳球菌KF140(保藏编号:KCCM11673P)及枯草芽孢杆菌KF11(保藏编号:KCCM11981P)的组也示出优秀的降低N-羧甲基赖氨酸的活性,在本发明中确认的将共36种菌株都混合的组中,显示出N-羧甲基赖氨酸降低至几乎不存在的程度。
因此,本发明可提供用于抑制晚期糖基化终末产物的组合物,其包含上述微生物、其破碎物或其培养物作为有效成分。
并且,本发明可提供功能性保健食品组合物,其包含上述本发明的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物。
本发明的食品组合物包括功能性食品(functional food)、营养补充剂(nutritional supplement)、保健食品(health food)及食品添加剂(food additives)等的所有形态。上述类型的食品组合物可根据本领域中公知的常规方法制备成各种形态。例如,作为保健食品,可将本发明的上述菌株本身、其破碎物及上述菌株培养物组中的一种以上制成茶、果汁及饮料的形态来饮用,或者通过颗粒化、胶囊化及粉末化来摄取。并且,可将本发明的菌株、其破碎物及培养物组中的一种以上与已知具有晚期糖基化终末产物降低效果的公知的物质或活性成分一起混合来制成组合物的形态。并且,作为功能性食品,可通过向饮料(包括酒精饮料)、果实及其加工食品(例:水果罐头、瓶装罐头、果酱、结皮果冻等)、鱼类、肉类及其加工食品(例:火腿、玉米牛肉香肠等)、面包类及面类(例:乌冬面、荞麦面、拉面、意大利面、通心粉等)、果汁、各种饮料、饼干、饴糖、乳制品(例:黄油、奶酪等)、食用植物油脂、人造黄油、植物蛋白、蒸煮食品、冷冻食品、各种调味料(例:大酱、酱油、酱汁等)等中添加本发明的菌株、其破碎物及培养物组中的一种以上来制备。
本发明的食品组合物中上述本发明的菌株、其破碎物及培养物等的优选含量并不限定于此,但优选地,在最终制备的食品中的含量为0.01重量百分比至50重量百分比。并且,为了用作包含选自由本发明的菌株、其破碎物及培养物组成的组中的一种以上作为有效成分的食品添加剂的形态,可制成粉末或浓缩液形态来使用。
并且,本发明可提供用于预防或治疗非荧光晚期糖基化终末产物相关疾病的药物组合物,其包含上述本发明的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物,上述疾病可以为糖尿病、糖尿病并发症、慢性肾病、心脏病、血管疾病或老化,但并不限定于此。
上述药物组合物可单独包含药学上可接受的盐,或者还可包含一种以上的药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。作为药学上可接受的载体,例如,还可包含用于口服给药的载体或用于非口服给药的载体。用于口服给药的载体可包括乳糖、淀粉、纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸等。并且,用于非口服给药的载体可包括水、适当的油、食盐水、水性葡萄糖及乙二醇等,还可包括稳定剂及保鲜剂。作为适当的稳定剂有抗氧化剂,如亚硫酸氢钠、亚硫酸钠或抗坏血酸。作为适当的保鲜剂有苯扎氯铵、羟苯甲酯或羟苯丙酯及氯丁醇。其他药学上可接受的载体可以参考以下文献中所说明的(Remington'sPharmaceuticalSciences,19th ed.,Mack Publishing Company,Easton,PA,1995)。
可通过任意方法将本发明的药物组合物给药于包括人在内的哺乳动物。例如,可通过口服或非口服方式给药。作为非口服给药方法可以静脉内、肌肉内、动脉内、脊髓内、硬膜内、心脏内、透皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、肠内、局部、舌下或直肠内给药,但并不限定于此。优选地,本发明的药物组合物可口服或透皮给药。
根据如上所述的给药途径,可将本发明的药物组合物剂型化为用于口服给药或用于非口服给药的制剂。
在用于口服给药的制剂的情况下,可利用本领域公知的方法将本发明的组合物剂型化成粉末、颗粒、片剂、丸剂、糖衣片剂、胶囊剂、液剂、凝胶剂、糖浆剂、浆料、悬浮液等。例如,用于口服的制剂可通过将活性成分和固体赋形剂混合后将其粉碎,并添加适当的辅助剂后加工成颗粒混合物来获得片剂或糖衣片剂。作为适当的赋形剂的例可包括:糖类,如乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇及麦芽糖醇;淀粉类,如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉及土豆淀粉;纤维素类,如纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠及羟丙基甲基纤维素;以及填充剂,如明胶、聚乙烯吡咯烷酮等。并且,根据情况还可添加交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、海藻酸或海藻酸钠等作为崩解剂。进一步地,本发明的药物组合物还可包含抗凝剂、润滑剂、湿润剂、香料、乳化剂及防腐剂等。
在用于非口服给药的制剂的情况下,可通过本领域公知的方法剂型化成注射剂、膏剂、乳液、外用软膏剂、油剂、保湿剂、凝胶、气溶胶及鼻腔吸入剂形态。这些剂型说明于作为所有制药化学中通常公知的处方的文献中(Remington's Pharmaceutical Science,15th Edition,1975.Mack Publishing Company,Easton,Pennsylvania 18042,Chapter87:Blaug,Seymour)。
能够以单剂量(single dose)向患者给药本发明的菌株本身、其破碎物及上述菌株培养物等的总有效量,并且能够以多剂量(multiple dose)长期给药的分次治疗方法(fractionated treatment protocol)给药。本发明的药物组合物可以根据疾病的程度改变有效成分的含量。优选地,本发明的菌株、其破碎物及培养物的优选的总用量为每日每千克患者体重约0.01ug至1000mg,最优选地,可以是0.1ug至100mg。但是,上述本发明的菌株本身、其破碎物及上述菌株培养物等的用量通过考虑药物组合物的给药途径及治疗次数以及患者的年龄、体重、健康状态、性别、疾病的严重程度、饮食及排泄率等多种因素,确定对患者的有效剂量,因此,鉴于此,本领域普通技术人员将能够确定用于上述本发明的菌株、其破碎物及培养物作为免疫增强剂的特定用途的适当的有效剂量。本发明的药物组合物不特别限于其剂型、给药途径及给药方法,只要具有本发明的效果即可。
并且,本发明提供肠道调节用、益生菌、饲料用组合物,其包含上述本发明的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物。本发明的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物可用于增进人和动物的健康,即,可作为肠道调节用、益生菌或饲料用组合物来使用,上述组合物可包含上述菌株本身、其破碎物及上述菌株培养物等作为有效成分,还可包含赋形剂或载体。上述组合物包含在液体培养基培养的培养液本身、通过过滤或离心上述培养液来去除菌株的滤液(离心的上清液)等。组合物中上述本发明的菌株含量可根据组合物的用途及剂型而不同。
可通过多种剂型和方法制备并给药本发明的肠道调节用或益生菌组合物。例如,将上述本发明中使用的菌株、其破碎物及其培养物与通常用于药剂学领域中的载体及香料混合,能够以片剂(tablet)、锭剂(troche)、胶囊(capsule)、酏剂(elixir)、糖浆(syrup)、散剂(powder)、悬浮剂(suspension)或颗粒剂(granule)等的形态制备并给药。
作为载体可使用结合剂、润滑剂、崩解剂、赋形剂、增溶剂,分散剂、稳定剂、悬浮剂等。给药方式可使用口服、非口服或涂敷法,但是优选地为口服给药。并且,剂量可根据体内活性成分的吸收度、非活性率及排泄速度、接受者的年龄、性别和状况适当选择。并且,本发明的饲料用组合物能够以发酵饲料、配制饲料、颗粒形态和青贮饲料(silage)等形态制备。
可通过添加本发明的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物和各种微生物菌或酶来发酵有机物来制备上述发酵饲料,可通过混合各种普通饲料和本发明的菌株来制备上述配制饲料。可通过颗粒机对上述发酵饲料或配制饲料进行剂型化来制备颗粒形态的饲料,利用本发明的菌株发酵青刈饲料来制备青贮饲料。
并且,提供一种发酵产品,其包含本发明的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物。通常,发酵产品的制备方法包括原料准备、乳酸菌的添加、发酵、成品回收等过程。原料准备步骤是准备作为发酵对象的材料,并准备发酵条件,以使发酵很好地进行的步骤。乳酸菌的添加是根据发酵对象的量添加适量的菌,在本发明中的特征在于使用本发明的菌株。发酵根据常规的发酵菌的发酵条件进行,优选地在37℃至43℃的温度下进行4小时至168小时。成品回收包括从发酵物中去除不必要的副产物或未发酵的物质以及易于储存和运输的所有后处理过程及包装等。优选地,根据上述的方法制备的发酵产品可以是饮料,例如,此饮料可以是指通过培养本发明的菌株来进行乳酸发酵,并加入灭菌水稀释,加入糖分、香料等后装入容器的产品。这种饮料通常含有活乳酸菌,因此饮用后可以预期在肠道中起到调节肠道的作用。
进一步地,本发明提供一种非荧光晚期糖基化终末产物抑制剂的制备方法,其包括将选自由乳杆菌属菌株、乳球菌属菌株、肠球菌属菌株、双歧杆菌属菌株、芽孢杆菌属菌株、酵母菌属菌株、片球菌属菌株及明串珠菌属菌株组成的组中的单一菌株或两种以上的混合菌株、其破碎物或其培养物粉末化的步骤。
并且,本发明提供一种非荧光晚期糖基化终末产物的抑制方法,其利用选自由乳杆菌属菌株、乳球菌属菌株、肠球菌属菌株、双歧杆菌属菌株、芽孢杆菌属菌株、酵母菌属菌株、片球菌属菌株及明串珠菌属菌株组成的组中的一种以上的菌株。
以下,通过实施例更详细地说明本发明。这些实施例用于更加具体地说明本发明,本发明的范围并不限定于这些实施例。
实施例1
筛选具有非荧光晚期糖基化终末产物的降低活性的微生物
为了研发利用微生物的非荧光晚期糖基化终末产物抑制剂,首先,筛选了具有对于作为非荧光晚期糖基化终末产物的N-羧甲基赖氨酸(Nε-(Carboxymethyl)-L-lysine)的降低活性的微生物。为此,制备了包含N-羧甲基赖氨酸的食品,向上述食品添加各个微生物后,测定N-羧甲基赖氨酸的含量变化。
1-1:制备包含N-羧甲基赖氨酸的食品
首先,制备了包含N-羧甲基赖氨酸的食品,即,为了降低乳的热处理工序中生成的N-羧甲基赖氨酸而使用作为乳蛋白的酪蛋白和作为乳糖的乳糖,酪蛋白酸钠(sodiumcaseinate)和D乳糖(D-lactose)分别购自(株)ES食品原料和西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)。考虑乳中酪蛋白和乳糖的比例,以1:7的比例混合乳蛋白(酪蛋白)和糖(乳糖)并在140℃的温度下反应80分钟,并将其用于本发明的微生物的N-羧甲基赖氨酸降低功效的评价。此时,确认通过酪蛋白和乳糖的美拉德反应的N-羧甲基赖氨酸含量为5.90ug/mL。
1-2:分析N-羧甲基赖氨酸的含量
通过在上述1-1中制备的包含N-羧甲基赖氨酸的食品(溶液)添加各种微生物来培养24小时后,利用N-羧甲基赖氨酸ELISA kit(CircuLex,Ina,Nagano,Japan)测定N-羧甲基赖氨酸的变化量。用N-羧甲基赖氨酸-BSA预涂敷的96孔(well)中加入上清液或标准试样和抗-N-羧甲基赖氨酸加合物单克隆抗体(anti-CML-adduct monoclonal antibody)并在室温下反应1小时。用洗涤缓冲液洗涤四次后,添加100μl的HRP缀合的检测抗体(HRPconjugated detection antibody)反应1小时后,洗涤缓冲液洗涤四次,添加100μl的含底物溶液在遮光条件下反应20分钟后,添加100μl的终止溶液并利用酶标仪测量450nm处的吸光度,其结果如下述表所示。此时,阴性对照组(CON;control)是完全没有添加微生物的通过上述1-1的美拉德反应测定的N-羧甲基赖氨酸含量为5.90ug/mL的组,阴性对照组是以100%的N-羧甲基赖氨酸含量为基准测定,在分析的微生物中,在下述表1示出具有N-羧甲基赖氨酸抑制活性的微生物,在下述表2示出没有N-羧甲基赖氨酸抑制活性的微生物。并且,在下述表1中,33号、34号及35号的微生物为本发明人通过先行研究新发现鉴定并保藏的菌株,乳酸乳球菌KF140为保藏于作为国际微生物保藏机关的韩国微生物保藏中心(KCCM)且保藏编号为KCCM 11673P的菌株,枯草芽孢杆菌KF11为于2017年2月24日保藏于作为国际微生物保藏机关的韩国微生物保藏中心(KCCM)且保藏编号为KCCM 11981P的菌株,戊糖乳杆菌KF8菌株为于2017年3月24日保藏于作为国际微生物保藏机关的韩国微生物保藏中心(KCCM)且保藏编号为KCCM 11997P的菌株,副干酪乳杆菌KF00816为于2017年03月24日保藏于国际微生物保藏机关的韩国微生物保藏中心(KCCM)且保藏编号为KCCM 11998P的菌株。
表1
具有N-羧甲基赖氨酸抑制活性的微生物
表2
没有N-羧甲基赖氨酸抑制活性的微生物
分析结果,如上述表1及表2所示,可知并不是所有微生物,尤其所有乳酸菌具有能够抑制非荧光晚期糖基化终末产物的活性,本发明人可知在上述表1中记载的36种微生物具有降低N-羧甲基赖氨酸的活性。
通过以上结果,本发明人可知,当利用在本发明中确认的上述表1的微生物时,可有效降低如N-羧甲基赖氨酸的非荧光晚期糖基化终末产物,尤其,当在包含晚期糖基化终末产物的食品处理时,可有效降低食品中的非荧光晚期糖基化终末产物。
目前为止,以本发明优选的实施例为中心查看了本发明。本发明所属技术领域的普通技术人员将理解,在不脱离本发明的本质特性的范围下,能够以变形的形式实现本发明。因此,公开的实施例仅被认为是说明性的,而不是限制性的目的。本发明的范围在发明要求保护范围中示出而不是在前述的说明中示出,等同范围内的所有差异将被解释为包括在本发明中。
本专利是作为国家研究项目的一个环节进行的成果,项目固有编号为E0164400-04,部处名称:科学技术信息通信部,研究管理专门机构:韩国食品研究院,主管机构:韩国食品研究院,研究项目名称:韩国食品研究院主要项目,研究题目:糖尿病并发症危险因子降低化及改善食品及医药材料的开发,研究期限:对应于2019年01月01日~2019年12月31日的课题;以及项目固有编号为E0164401-03,部处名称:科学技术信息通信部,研究管理专门机构:韩国食品研究院,主管机构:韩国食品研究院,研究项目名称:韩国食品研究院主要项目,研究题目:糖尿病并发症的主要发病因子分析及降低化技术开发,研究期限:对应于2018年01月01日~2018年12月31日的课题。
保藏编号
保藏机构名:韩国微生物保藏中心(国外)
保藏编号:KCCM11997P
保藏日期:20170324
保藏机构名:韩国微生物保藏中心(国外)
保藏编号:KCCM11998P
保藏日期:20170324
保藏机构名:韩国微生物保藏中心(国外)
保藏编号:KCCM11673P
保藏日期:20150306
保藏机构名:韩国微生物保藏中心(国外)
保藏编号:KCCM11981P
保藏日期:20170224
适用细则6.4(d)的情况下,原保藏日期为国际保藏机构的自我取得日。
书写格式BP/4
适用细则6.4(d)的情况下,原保藏日期为国际保藏机构的自我取得日。
书写格式BP/4
适用细则6.4(d)的情况下,原保藏日期为国际保藏机构的自我取得日。
书写格式BP/4
适用细则6.4(d)的情况下,原保藏日期为国际保藏机构的自我取得日。
书写格式BP/4
Claims (19)
1.一种用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物,其特征在于,包含选自由乳杆菌属菌株、乳球菌属菌株、肠球菌属菌株、双歧杆菌属菌株、芽孢杆菌属菌株、酵母菌属菌株、片球菌属菌株及明串珠菌属菌株组成的组中的一种以上的菌株。
2.根据权利要求1所述的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物,其特征在于,上述乳杆菌属菌株选自由植物乳杆菌、加氏乳杆菌、干酪乳杆菌、瑞士乳杆菌、清酒乳杆菌、副干酪乳杆菌、卷曲乳杆菌、乳酸乳杆菌、唾液乳杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、约氏乳杆菌、短乳杆菌、副干酪乳杆菌坚韧亚种、短乳杆菌、戊糖乳杆菌、植物乳杆菌植物亚种、类植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、保藏编号为KCCM11998P的副干酪乳杆菌KF00816及保藏编号为KCCM11997P的戊糖乳杆菌KF8组成的组中。
3.根据权利要求1所述的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物,其特征在于,上述乳球菌属菌株选自由乳酸乳球菌、韩中大乳球菌、斐济乳球菌、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳亚种、棉籽糖乳球菌、格氏乳球菌及保藏编号为KCCM11673P的乳酸乳球菌KF140组成的组中。
4.根据权利要求1所述的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物,其特征在于,上述肠球菌属菌株为屎肠球菌或粪肠球菌。
5.根据权利要求1所述的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物,其特征在于,上述双歧杆菌属菌株为长双歧杆菌、短双歧杆菌、双歧杆菌乳酸亚种或两岐双岐杆菌。
6.根据权利要求1所述的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物,其特征在于,上述芽孢杆菌属菌株为解淀粉芽孢杆菌、萎缩芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、莫海威芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、聚酵素芽孢杆菌或保藏编号为KCCM11981P的枯草芽孢杆菌KF11。
7.根据权利要求1所述的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物,其特征在于,上述酵母菌属菌株为酿酒酵母、布拉酵母、葡萄酒酵母、巴氏酵母或贝酵母。
8.根据权利要求1所述的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物,其特征在于,上述片球菌属菌株为戊糖片球菌或乳酸片球菌。
9.根据权利要求1所述的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物,其特征在于,上述明串珠菌属菌株为柠檬明串珠菌。
10.根据权利要求1所述的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物,其特征在于,上述非荧光晚期糖基化终末产物为N-羧甲基赖氨酸或N-羧乙基赖氨酸。
11.一种食品组合物,其特征在于,包含权利要求1所述的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物。
12.一种用于预防或治疗非荧光晚期糖基化终末产物相关疾病的药物组合物,其特征在于,包含权利要求1所述的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物。
13.根据权利要求12所述的用于预防或治疗非荧光晚期糖基化终末产物相关疾病的药物组合物,其特征在于,上述疾病选自由糖尿病、糖尿病并发症、慢性肾病、心脏病、血管疾病及老化组成的组中。
14.一种饲料用组合物,其特征在于,包含权利要求1所述的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物。
15.一种用于调节肠道的组合物,其特征在于,包含权利要求1所述的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物。
16.一种益生菌组合物,其特征在于,包含权利要求1所述的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物。
17.一种发酵产品,其特征在于,包含权利要求1所述的用于抑制非荧光晚期糖基化终末产物的组合物。
18.一种非荧光晚期糖基化终末产物抑制剂的制备方法,其特征在于,包括将选自由乳杆菌属菌株、乳球菌属菌株、肠球菌属菌株、双歧杆菌属菌株、芽孢杆菌属菌株、酵母菌属菌株、片球菌属菌株及明串珠菌属菌株组成的组中的单一菌株或两种以上的混合菌株、其破碎物或其培养物粉末化的步骤。
19.一种非荧光晚期糖基化终末产物的抑制方法,其特征在于,利用选自由乳杆菌属菌株、乳球菌属菌株、肠球菌属菌株、双歧杆菌属菌株、芽孢杆菌属菌株、酵母菌属菌株、片球菌属菌株及明串珠菌属菌株组成的组中的单一菌株或两种以上的混合菌株。
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