CN114062558A - 一种食品中二氧化硫的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于食品检测方法领域，公开了一种食品中二氧化硫的测定方法，利用离子色谱法测定食品中二氧化硫含量，首先绘制标准曲线，样品经蒸馏后，用含10mmol/L甘露醇的氢氧化钠溶液吸收后定容，过0.22μm滤膜进行色谱分析，选用IonPac AS 11阴离子交换分析柱，IonPac AG 11阴离子保护柱，氢氧化钠等度洗脱的方式分离，并用硫酸进行柱后衍生化，电化学检测器测定含量，计算得到最终含量。本发明提供的方法简单、快速、灵敏度高且结果可靠，获得良好的加标回收率，可用于测定食品中的二氧化硫、亚硫酸盐含量。
Description
技术领域
本发明属于食品检测方法领域，具体涉及一种食品中二氧化硫的测定方法。
背景技术
亚硫酸盐是食品加工中常用的防腐剂和增白剂，具有抗氧化和抗菌特性，可以延长保质期并提高食品质量和外观。有些食品，特别是发酵食品，会自然存在亚硫酸盐。目前FDA批准的可用作食品添加剂的亚硫酸盐类试剂有：二氧化硫，亚硫酸钠，亚硫酸氢钠和亚硫酸氢钾等。二氧化硫进入人体呼吸道会生成亚硫酸盐，导致支气管收缩，危害人体健康。FDA要求亚硫酸盐含量高于10mg/kg的食品需要标明，WHO规定二氧化硫ADI为0～0.7mg/kg体重。国标《食品添加剂使用标准》中也对二氧化硫类物质的使用也做出了明确规定。
对于食品的日常监管中，常需要对其中的亚硫酸盐进行测定。目前，食品中二氧化硫的检测主要方法有比色法，蒸馏滴定法，气相色谱法，液相色谱法，此前也有很多二氧化硫检测相关研究。
比色法在新版的二氧化硫检测国家标准中已被删除，此法虽操作简单、再现度高，但使用试剂四氯汞钠有剧毒，并且红色食品会干扰测定。在现有的蒸馏滴定方法中，酸碱定法需要特定蒸馏装置，蒸馏过程耗时长且需要不断通氮气，单个样品需要2小时以上，不适用于大批量样品的处理；氧化还原滴定法为非特异性方法，测定香辛料等样品时，样品中的氧化还原物质会随蒸馏液一起蒸出，而香菇类产品蒸馏后蒸馏液会变为黑色，因此此法不适用于香辛料调味品及香菇类食品的检验。由于亚硫酸盐具有阴离子特性，所以在氢氧根体系中能够使用阴离子交换分析柱分离，但亚硫酸根在电导检测器中响应值较低，不能满足样品检测需求。且亚硫酸盐具有氧化还原特性，在酸性条件下，电化学检测器中有较高响应值。
目前的离子色谱法测定二氧化硫的研究中，若使用电导检测器测定，由于亚硫酸盐为不完全电离，因此其本身在电导检测器上响应值很低，不足以满足检测要求。现有的方法参考药典中的酸碱滴定法，蒸馏后用双氧水氧化，以电导检测器检测硫酸根含量。此法弊端在于硫酸根本底的干扰，实验室纯化水中含有硫酸根本底，对于痕量检测的影响很大。若使用电化学检测器，现有文献较少，仅仪器公司方法文献中提到使用离子排斥色谱柱分离，以Pt电极进行检测。该方法对于基质中杂质的分离效果不佳且亚硫酸盐峰形拖尾严重，不适用于建立检测方法。
二氧化硫本身为阴离子，使用阴离子分析柱可以实现较好分离，但电导检测器无法满足检验要求；电化学检测中，亚硫酸盐在酸性条件下有较好响应值，但在阴离子分析条件(碱性流动相)下，亚硫酸盐没有响应值。
发明内容
本发明提供的一种食品中二氧化硫的测定方法，简单、快速、灵敏度高且结果可靠，获得良好的加标回收率，可用于测定食品中的二氧化硫、亚硫酸盐含量。
本发明提供了一种食品中二氧化硫的测定方法，包括如下步骤：
S1，绘制标准曲线：吸取亚硫酸钠储备液并用缓冲液定容，制成浓度依次为0.00、0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0μg/mL的标准系列溶液，按照以下色谱条件测定标准系列，以测得峰面积对目标物浓度绘制标准曲线；
色谱条件为：IonPac AS 11阴离子交换分析，IonPac AG 11阴离子保护柱，NaOH洗脱，15mmol/L，1mol/min，H2SO4柱后衍生，58.3mmol/L,0.3ml/min，电化学检测器测定含量；
S2，样品蒸汽蒸馏：称取样品，置于装有盐酸溶液的蒸馏管中蒸馏，样品接收液为氢氧化钠-甘露醇接收液，蒸馏时间为3-5min，收集馏出液，定容，利用滤膜对样品净化，回收样品；
所述氢氧化钠-甘露醇接收液中NaOH浓度为18-22mmol/L，甘露醇浓度为8-12mmol/L；
S3，离子色谱法检测：将回收的样品按照S1中的色谱条件进行色谱分析，由标准曲线计算食品中二氧化硫的含量。
进一步地，S1中，所述亚硫酸钠储备液浓度为1000mg/L。
进一步地，S2中，所述样品为香菇、八角、烧烤调料、葡萄酒和火腿肉中的任意一种。
进一步地，S2中，所述样品称取量按照固体样品与盐酸溶液用量比为5g：10ml称取，液体样品与盐酸溶液体积比为1:1称取。
进一步地，S2中，所述滤膜采用0.22μm的滤孔规格。
进一步地，所述样品接收液的制备过程为：取18.2g甘露醇和5.26mL 50％氢氧化钠溶液，溶于1.0L水中，获得样品接收液。
进一步地，S1中，以15mmol/L NaOH洗脱，流速为1mol/min，经H2SO4柱后衍生，电化学检测器采用铂电极。
进一步地，S1中，所述离子色谱法检测的进样量为25μL。
进一步地，S3中，利用标准曲线计算食品中二氧化硫的公式为X＝(YⅹV)/m；
其中，X为样品中目标物的含量；Y为由标准曲线得到样品溶液中目标物的浓度；V为样品溶液定容体积；m为样品质量。
与现有技术相比，本发明提供的一种食品中二氧化硫的测定方法，具有以下有益效果：
1、本发明提供的方法结合蒸汽蒸馏和离子色谱法，能够有效节约检测时间及检测成本，分析速度快，结果稳定可靠，可适用于食品中二氧化硫的快速测定，对于测定底物干扰样品具有明显优势。
2、本发明通过蒸汽蒸馏对样品进行前处理，有效去除了样品中大量杂质，且不影响二氧化硫回收率，步骤简单且快速，能够有效去除样品中的杂质干扰，对目标物质有较好回收率，适用于大批量样品的检验。
3、本发明选择含甘露醇的NaOH溶液作为接收液，其中NaOH浓度为20mmol/L，甘露醇浓度为10mmol/L，在不引入其他离子的同时，又能保证样品中亚硫酸盐稳定性，由于亚硫酸盐容易氧化成硫酸盐，甘露醇可以减少亚硫酸盐的氧化，使亚硫酸盐在溶液稳定8小时，因此在接收液中加入甘露醇作为稳定剂。
4、本发明以基质较为复杂的五种代表性食品为研究对象，选取香菇、八角、烧烤调料、葡萄酒、火腿肉为代表，采用蒸汽蒸馏结合离子色谱法，探讨优化样品前处理方法以及样品基质对于目标物测定的影响，为食品中添加剂的检测提供一种新的可靠方法。
5、本发明利用阴离子分析柱进行分离后，进行柱后衍生化，改变流动相pH值，使之能够被电化学检测检出，取得良好效果，实验精密度及检出限均满足检验需求。亚硫酸根在阴离子体系下易分离但电导检测器响应值低，在电化学体系下响应值高但分离效果差，阴离子体系分离后经柱后衍生化改变体系pH值，使用电化学检测器检测，能够将两者优势结合，在保证良好分离度的前提下，满足检测精密度和检出限要求。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明中标准品分离色谱图；
图2为本发明中香菇样品色谱图；
其中，从上到下第一个峰图表示标准品的色谱图，第二个峰图表示香菇样品的色谱图，第三个峰图表示样品加标的峰图；
图3为本发明中八角样品色谱图；
其中，从上到下第一个峰图表示标准品的色谱图，第二个峰图表示八角样品的色谱图，第三个峰图表示样品加标的峰图；
图4为本发明中烧烤调料样品色谱图；
其中，从上到下第一个峰图表示标准品的色谱图，第二个峰图表示烧烤调料样品的色谱图，第三个峰图表示样品加标的峰图；
图5为本发明中红酒样品色谱图；
其中，从上到下第一个峰图表示标准品的色谱图，第二个峰图表示红酒样品的色谱图，第三个峰图表示样品加标的峰图；
图6为本发明中火腿样品色谱图；
其中，从上到下第一个峰图表示标准品的色谱图，第二个峰图表示火腿样品的色谱图，第三个峰图表示样品加标的峰图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明，但不应理解为本发明的限制。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
本实施例提供了一种食品中二氧化硫的测定方法，包括如下步骤：
S1，绘制标准曲线：吸取亚硫酸钠储备液并用缓冲液定容，制成浓度依次为0.00、0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0μg/mL的标准系列溶液，按照以下色谱条件测定标准系列，以测得峰面积对目标物浓度绘制标准曲线；
色谱条件为：色谱柱：IonPac AS 11阴离子交换分析柱(250mm×4mm)；IonPac AG11阴离子保护柱(50mm×4mm)；NaOH洗脱液：15mmol/L，流速1.0mL/min；H2SO4衍生化试剂：58.3mmol/L，流速0.3ml/min；进样量25μL；
S2，样品蒸汽蒸馏：
选择具有代表性的市售香菇(S1)、八角(S2)、烧烤调料(S3)、葡萄酒(S4)和火腿肉(S5)为样品，分别称取固体样品5g，液体样品10mL，于蒸馏管中，在冷凝管下端插入预先备有10ml氢氧化钠-甘露醇样品接收液的接收瓶液面下，然后在蒸馏管中加入10ml盐酸溶液，立即装管，开始水蒸气蒸馏，蒸馏时间为3-5min，收集馏出液，用水定容至100ml，过0.22μm水性样品滤膜，对样品净化，回收样品；
使用蒸汽蒸馏可以有效缩短蒸馏时间，在酸性条件下，亚硫酸根以二氧化硫气体的形态蒸馏出，被接收液接收；
所述氢氧化钠-甘露醇接收液中NaOH浓度为20mmol/L，甘露醇浓度为10mmol/L；以NaOH作为接收液与离子色谱洗脱液一致，且可以使二氧化硫气体在碱性环境转化为亚硫酸盐，加入甘露醇可以提高亚硫酸盐稳定性，保持在24h内不被氧化。
S3，离子色谱法检测：将回收的样品进行色谱分析；
按照如下色谱条件测定样品液，由标准曲线计算含量；
色谱条件为：IonPac AS 11阴离子交换分析，IonPac AG 11阴离子保护柱，NaOH洗脱，15mmol/L，1mol/min，H2SO4柱后衍生，58.3mmol/L,0.3ml/min，电化学检测器测定含量；
电化学检测器需要在特定pH范围内才有响应值，因此柱后衍生化采用的H2SO4作用是中和洗脱液中15mmol/L NaOH后，将体系pH值控制在需要的范围，因此衍生液的流速及浓度可以依照次原理进行调整。
一、材料与方法
1、材料、仪器与试剂
香菇 产地：中国重庆市 实验编码：S1；
八角 产地：中国重庆市 实验编码：S2
烧烤调料 产地：中国重庆市 实验编码：S3
葡萄酒 产地：中国河北省秦皇岛市 实验编码：S4
火腿肉 产地：中国重庆市 实验编码：S5
亚硫酸钠 美国sigma公司；氢氧化钠(50％W/W)美国Fisher公司；硫酸(98％)美国ACS恩科化学公司；甘露醇 美国Avantor公司；七水合磷酸氢二钠 美国sigma公司；超纯水(电阻率为18.2MΩ/cm)美国Millipore纯水仪。
0.22μm尼龙聚醚矾滤膜 德国MEMBRANA公司；ICS5000离子色谱仪、EGC500OH-离子发生器、电化学检测器(Pt工作电极)美国戴安公司、Ag/AgCl参比电极美国戴安公司。
2、实验方法
(1)色谱条件
色谱柱：IonPac AS 11阴离子交换分析柱(250mm×4mm)；
IonPac AG 11阴离子保护柱(50mm×4mm)；NaOH洗脱液：15mmol/L，流速1.0mL/min；H2SO4衍生化试剂：58.3mmol/L，流速0.3ml/min；进样量25μL；
电化学检测器参数如下：
流速：1.0mL/min
检测器：脉冲安培，Pt工作电极
波形选择：
(2)试剂配制
缓冲液：取5.36g Na2HPO4·7H2O和1.82g甘露醇混合，溶于1.0L水中；
样品接收液：取18.2g甘露醇和5.26mL 50％氢氧化钠溶液，溶于1.0L水中；
盐酸溶液(1+1)：量取50mL盐酸,缓缓倾入50mL水中，边加边搅拌；
(3)标准溶液配制及曲线绘制
称取195mg的亚硫酸钠，用缓冲液定容至100mL，配制成1000mg/L的亚硫酸钠储备液；
准确吸取亚硫酸钠储备液并用缓冲液定容，制成浓度依次为0.00、0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0μg/mL的标准系列溶液；参照(1)色谱条件测定标准系列，以测得峰面积对目标物浓度绘制标准曲线；
(4)样品预处理
准确称取样品(固体5g，液体10mL)，于蒸馏管中，在冷凝管下端插入预先备有10mL氢氧化钠-甘露醇接收液的接收瓶的液面下，然后在蒸馏管中加入10mL盐酸溶液，立即装管，开始水蒸气蒸馏，收集馏出液，用水定容至100mL；
(5)样品净化及分析测定
吸取样品液，过0.22μm水性样品滤膜，以(1)色谱条件测定样品液，由标准曲线计算含量。含量计算公式：
X＝(YⅹV)/m
式中：X为样品中目标物的含量(mg/kg)；Y为由标准曲线得到样品溶液中目标物的浓度(μg/mL)；V为样品溶液定容体积(mL)；m为样品质量(g)。
二、结果与分析
1、样品前处理条件的选择
用本法测定食品中的亚硫酸盐，干扰物质为食品固有成分所带入的具有氧化还原性的杂质。本实验通过缓冲液直接提取后发现，香辛料中的大量杂质干扰了样品的分析。因此采用了蒸汽蒸馏对样品进行前处理，蒸馏时间为3.5min，再用0.22μm滤膜对样品进行净化，有效去除了样品中大量杂质，且不影响二氧化硫回收率。本方法步骤简单且快速，能够有效去除样品中的杂质干扰，对目标物质有较好回收率，适用于大批量样品的检验。
样品接收液的选择，现有文献中，采用氧化还原滴定法测定食品中二氧化硫，绝大部分使用乙酸铅溶液吸收样品。本研究在实验过程中发现，部分样品(如香菇)的本底物质会与乙酸铅溶液反应生成棕色物质，影响滴定法的测定结果。本法选用与淋洗液浓度相当的氢氧化钠溶液作为接收液，由于亚硫酸盐容易氧化成硫酸盐，甘露醇可以减少亚硫酸盐的氧化，使亚硫酸盐在溶液稳定8小时，因此在接收液中加入甘露醇作为稳定剂。本研究最终选取含甘露醇的NaOH溶液作为接收液，其中NaOH浓度为20mmol/L，甘露醇浓度为10mmol/L，在不引入其他离子的同时，又能保证样品中亚硫酸盐稳定性。
2、色谱条件的选择
本研究选用IonPac AS 11阴离子交换分析柱，对亚硫酸盐有良好的分离效果，能够用较低浓度OH-离子洗脱将目标物分离，可获得平稳基线和良好的峰形，如图1所示。
本研究选用铂电极，铂电极相比于银电极、金电极等金属电极较不活泼，导电性好，能承受更大的电流，且不易钝化，可以480小时连续使用不需打磨。
3、线性范围和检出限
不同时间配制多个浓度的标准品进行线性范围及检出限分析，结果表明，在0.5μg/mL～5.0μg/mL范围内，二氧化硫的浓度与峰面积有良好的线性关系，以二氧化硫的质量浓度(μg/mL)为横坐标，峰面积(nC*min)为纵坐标，二氧化硫的回归方程为：y＝3.3183x+0.2738，R2＝0.9996。
选一系列较低浓度的二氧化硫标准品溶液，按实验方法中的色谱条件进行测定，当称样量为5.0g时，二氧化硫的检出限为2mg/kg(信噪比RSN＝3)。
4、样品分析及加标回收率
分别选取具有代表性的市售香菇(S1)、八角(S2)、烧烤调料(S3)、葡萄酒(S4)、火腿肉(S5)，在样品中添加已知浓度的标准溶液进行样品分析及加标回收试验(n＝6)
在五种样品中添加已知浓度的混合标准溶液，进行样品分析及加标回收试验(n＝6)，对于亚硫酸盐含量高于0.5的样品，采取减半加标的方式，即称取2.5g样品(液体5ml)再加入标样。
如表1所示，样品加标后回收率在89.9％～110.6％之间，相对标准偏差(RSD)在2.00％-4.64％之间。
表1样品分析及回收率、精密度(n＝6)
注：ND.未检出。
由图2-6可看出，五种样品(香菇、八角、烧烤调料、红酒和火腿)的基体峰均集中在2～8min，与亚硫酸盐出峰时间相隔较远，避开了待测物质亚硫酸盐的出峰区域，达到了很好的分离效果，基本没有干扰峰存在。由此可见，本方法稳定可靠，准确性高。
综上所述，本发明建立了能够测定食品中的二氧化硫的离子色谱法，色谱条件为：IonPac AS 11阴离子交换分析，IonPac AG 11阴离子保护柱，NaOH洗脱(15mmol/L，1mol/min)，H2SO4柱后衍生(58.3mmol/L,0.3ml/min)，电化学检测器(Pt电极)测定含量。样品经蒸汽蒸馏，氢氧化钠溶液吸收后，过0.22μm滤膜直接进行色谱分析。该法结合蒸汽蒸馏和离子色谱法，能够有效节约检测时间及检测成本，分析速度快，结果稳定可靠。可适用于食品中二氧化硫的快速测定，对于测定底物干扰样品具有明显优势。
需要说明的是，为了防止赘述，本发明的描述了优选的实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
Claims (9)
1.一种食品中二氧化硫的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1，绘制标准曲线：吸取亚硫酸钠储备液并用缓冲液定容，制成浓度依次为0.00、0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0μg/mL的标准系列溶液，按照以下色谱条件测定标准系列，以测得峰面积对目标物浓度绘制标准曲线；
色谱条件为：IonPac AS 11阴离子交换分析，IonPac AG 11阴离子保护柱，NaOH洗脱，15mmol/L，流速1mol/min，H2SO4柱后衍生，58.3mmol/L,流速0.3ml/min，电化学检测器测定含量；
S2，样品蒸汽蒸馏：称取样品，置于装有盐酸溶液的蒸馏管中蒸馏，样品接收液为氢氧化钠-甘露醇接收液，蒸馏时间为3-5min，收集馏出液，定容，利用滤膜对样品净化，回收样品；
所述氢氧化钠-甘露醇接收液中NaOH浓度为18-22mmol/L，甘露醇浓度为8-12mmol/L；
S3，离子色谱法检测：将回收的样品按照S1中的色谱条件进行色谱分析，由标准曲线计算食品中二氧化硫含量。
2.如权利要求1所述的一种食品中二氧化硫的测定方法，其特征在于，S1中，所述亚硫酸钠储备液浓度为1000mg/L。
3.如权利要求1所述的一种食品中二氧化硫的测定方法，其特征在于，S2中，所述样品为香菇、八角、烧烤调料、葡萄酒和火腿肉中的任意一种。
4.如权利要求3所述的一种食品中二氧化硫的测定方法，其特征在于，S2中，所述样品称取量按照固体样品与盐酸溶液用量比为5g：10ml称取，液体样品与盐酸溶液体积比为1:1称取。
5.如权利要求1所述的一种食品中二氧化硫的测定方法，其特征在于，S2中，所述滤膜采用0.22μm的滤孔规格。
6.如权利要求1所述的一种食品中二氧化硫的测定方法，其特征在于，所述样品接收液的制备过程为：取18.2g甘露醇和5.26mL 50％氢氧化钠溶液，溶于1.0L水中，获得样品接收液。
7.如权利要求1所述的一种食品中二氧化硫的测定方法，其特征在于，S1中，以15mmol/L NaOH洗脱，流速为1mol/min，经H2SO4柱后衍生，电化学检测器采用铂电极。
8.如权利要求1所述的一种食品中二氧化硫的测定方法，其特征在于，S1中，所述离子色谱法检测的进样量为25μL。
9.如权利要求1所述的一种食品中二氧化硫的测定方法，其特征在于，S3中，利用标准曲线计算食品中二氧化硫的公式为X＝(YⅹV)/m；
其中，X为样品中目标物的含量；Y为由标准曲线得到样品溶液中目标物的浓度；V为样品溶液定容体积；m为样品质量。
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4780417A (en) * | 1987-02-25 | 1988-10-25 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Rapid extraction, separation, and detection method for a separate analysis of free and total sulfites in foods by ion chromatography |
| CN101852786A (zh) * | 2010-06-17 | 2010-10-06 | 浙江省农业科学院 | 一种香菇中二氧化硫含量的检测方法 |
| CN106404981A (zh) * | 2016-11-08 | 2017-02-15 | 江苏中烟工业有限责任公司 | 一种采用离子色谱测定卷烟主流烟气中二氧化硫的方法 |
| CN113588803A (zh) * | 2021-05-08 | 2021-11-02 | 龙口海关综合技术服务中心 | 一种微提取-离子色谱法快速测定亚硫酸盐的方法 |
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4780417A (en) * | 1987-02-25 | 1988-10-25 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Rapid extraction, separation, and detection method for a separate analysis of free and total sulfites in foods by ion chromatography |
| CN101852786A (zh) * | 2010-06-17 | 2010-10-06 | 浙江省农业科学院 | 一种香菇中二氧化硫含量的检测方法 |
| CN106404981A (zh) * | 2016-11-08 | 2017-02-15 | 江苏中烟工业有限责任公司 | 一种采用离子色谱测定卷烟主流烟气中二氧化硫的方法 |
| CN113588803A (zh) * | 2021-05-08 | 2021-11-02 | 龙口海关综合技术服务中心 | 一种微提取-离子色谱法快速测定亚硫酸盐的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 雒丽丽;王海波;刘汉霞;李礼;许秀丽;张凤霞;邵雪鹏;仲维科;: "离子色谱法测定食品中的二氧化硫", 食品科技, no. 08, 20 August 2011 (2011-08-20) * |
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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