CN114053281A

CN114053281A - 治疗慢性肾病的方法和药物组合物

Info

Publication number: CN114053281A
Application number: CN202010794864.0A
Authority: CN
Inventors: 不公告发明人
Original assignee: Chengdu Wending Technology Development Co ltd
Current assignee: Chengdu Wending Technology Development Co ltd
Priority date: 2020-08-10
Filing date: 2020-08-10
Publication date: 2022-02-18
Also published as: US20230181542A1; KR20230050406A; CN116113408A; CA3189106A1; WO2022033265A1; JP2023537418A; EP4193997A1; AU2021326180A1

Abstract

本发明涉及一种治疗慢性肾病的方法和药物组合物。本发明的方法和药物组合物涉及多沙唑嗪、普拉克索和美托洛尔(或其可药用的盐)的组合使用，能显著改善慢性肾病，显著降低尿白蛋白排泄率UACR，显著改善肾小球滤过率eGFR，有效延缓肾脏功能减退发展至终末期肾衰。

Description

治疗慢性肾病的方法和药物组合物

技术领域

本发明涉及疾病治疗和药物领域，具体涉及慢性肾病尤其是糖尿病肾病的治疗。

背景技术

慢性肾病(Chronic Kidney Disease，CKD)是严重影响人类健康、尤其是老年人健康的一种疾病。据统计，美国成人CKD的患病率已高达11.3％，而中国的CKD的患病率据估计约为10％。糖尿病、高血压被认为是CKD的主要诱发因素。

糖尿病是影响人类健康的常见病之一。2015年全球有近4.2亿糖尿病患者，预计至2040年糖尿病患者人数将达6.4亿，预计20％～40％糖尿病患者可能会出现糖尿病肾病。糖尿病肾病是糖尿病主要并发症，在文献中也被称为DKD(Diabetic Kidney Disease)或DN(Diabetic Nephropathy)。糖尿病肾病是由糖尿病慢性微血管病变所引起的肾脏结构和功能异常的病变，临床表现以高血压、蛋白尿、水肿等为主，病理表现为肾小球血管受损、硬化形成结节性病变，进而引起肾功能异常和持续性尿蛋白，最终导致肾功能衰竭形成终末期肾病(End Stage Renal Disease，ESRD)，具有较高的致死率。

DKD是由环境和遗传因素共同参与的复杂疾病，已报道的发生发展机制十分复杂，涉及氧化应激、炎症、肾功能损伤、肾间质纤维化、血流动力学改变、遗传因素等多种病理病机变化。其中，氧化应激在发病机制中发挥着重要的角色，被认为与DKD的发生发展密切相关。

目前DKD管理策略主要是实现最佳的血糖血压控制、纠正血脂代谢紊乱、逆转胰岛素抵抗，减少蛋白尿(使用血管紧张素转换酶抑制剂和血管紧张素受体阻断剂)，从而延缓肾脏功能减退和降低心血管风险事件。通过应用血管紧张素转化酶抑制剂ACEI和/或血管紧张素受体拮抗剂ARB来抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)活化是目前治疗DKD的主要手段。缬沙坦(Valsartan)是临床上常用的ARB，其通过改善肾小球选择性通透性，使肾小球滤过孔的半径保持不变，从而持续降低尿白蛋白，且不引起肾小球滤过率(eGFR)下降，是目前常用的治疗DKD的药物。但是，现有的治疗手段和药物对于预防和控制糖尿病肾病进展和有效性方面表现仍然欠佳。有研究显示，ARB不增加心肌梗死发病的风险，并能进一步减少心力衰竭、脑卒中风险，但该研究也发现ARB不能减少纳入患者的全因死亡。同时对于血压正常，无蛋白尿的糖尿病患者，使用ACEI或ARB药物，并不能阻止微量蛋白尿的发生。

因此，临床对于开发能有效治疗CKD和/或DKD、有效延缓CKD/DKD发展至ESRD的新型药物提出了迫切需求。

发明内容

因此，本发明的一个目的是提供一种用于治疗慢性肾病(尤其是糖尿病肾病)的更好的或替代性的治疗方法和药物。

本发明人惊讶地发现，多沙唑嗪、普拉克索和美托洛尔的组合在慢性肾病、尤其是糖尿病肾病的治疗中具有显著疗效。

因此，本发明的第一方面涉及一种用于治疗慢性肾病的药物组合物，其包含多沙唑嗪(或其可药用的盐)、普拉克索或其可药用的盐和美托洛尔(或其可药用的盐)作为活性成分。

本发明的第二方面涉及多沙唑嗪(或其可药用的盐)、普拉克索(或其可药用的盐)和美托洛尔(或其可药用的盐)的组合在制备药物组合物中的用途，所述药物组合物用于在有需要的受试者中治疗慢性肾病、尤其是糖尿病肾病。

本发明的第三方面涉及多沙唑嗪(或其可药用的盐)、普拉克索(或其可药用的盐)和美托洛尔(或其可药用的盐)的组合在在有需要的受试者中治疗慢性肾病、尤其是糖尿病肾病的用途。

本发明的第四方面涉及一种治疗慢性肾病、尤其是糖尿病肾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的多沙唑嗪(或其可药用的盐)、普拉克索(或其可药用的盐)和美托洛尔(或其可药用的盐)。

本发明人以自发性慢性糖尿病肾病恒河猴作为动物模型模拟人类DKD患者，出人意料地发现，采用多沙唑嗪、普拉克索和美托洛尔的组合，能够在动物模型中显著降低蛋白尿、显著改善肾小球滤过率，从而控制或延缓DKD发展至终末期肾病(ESRD)，并且在给药期间未见与给药相关的不良反应显示出良好的安全性。因此，本发明的药物组合代表了慢性肾病尤其是糖尿病肾病的一种新型疗法。

附图说明

下面结合附图，对本发明的具体实施方式进行详细说明，其中：

图1示出了各组恒河猴在给药治疗30天(D30)的白蛋白尿(UACR，尿白蛋白排泄率)变化情况的对比(**，与安慰剂组比p＜0.01；*，与安慰剂组比p＜0.05)；

图2示出了各组恒河猴在给药治疗58天(D58)的白蛋白尿(UACR，尿白蛋白排泄率)变化情况的对比(**，与安慰剂组比p＜0.01；*，与安慰剂组比p＜0.05)；

图3示出了各组恒河猴给药后eGFR变化情况(各组入选eGFR：30～59ml/min/1.73m²进行分析，DOX+PMP+MTP1#实验组和DOX+PMP+MTP2#实验组合并为一个组进行分析；*，DOX+PMP+MTP组与安慰剂组比p＜0.05)。

具体实施方式

本申请涉及多种GPCR药物的组合和相应的组合治疗方法。

G蛋白(鸟嘌呤核苷酸-结合蛋白)偶联受体(GPCR)是一大类跨膜蛋白，它调节细胞内信号传导，且是细胞内稳态所必需的。已有文献研究表明GPCR信号通路与糖尿病诱导的过氧化物产生有关(Du,Y.,et al.,Adrenergic and serotonin receptors affect reti/l superoxide generation in diabetic mice:Relationship to capillarydegeneration and permeability.2015.29(5):p.2194.)。虽然氧化应激是DKD发生发展过程中重要的发生机制，调节糖尿病诱导的过氧化物产生的GPCR类药物在理论上对DKD的发展可能有一定影响，但是，目前的研究仅限于发病机理层面，GPCR类药物对于DKD的治疗效果还有待研究。另外，GPCR类药物涵盖成百上千种不同物质，从中筛选出对于DKD临床有效的药物也困难重重。

此外，目前糖尿病肾病动物模型多为啮齿类动物，如药物诱导的小鼠模型、自发性的db/db小鼠、ob/ob鼠、Agout突变小鼠和新西兰肥胖鼠、以及转基因小鼠模型等。但是，由于糖尿病肾病的发病机理复杂、涉及环节多，这些动物模型中肾脏功能的损伤难以准确体现患者DKD的病程，难以用于评价疾病治疗手段的效果。非人灵长类与人类在生理、生化和系统生物学上极其相似，已有多篇研究报道自发性慢性糖尿病肾病恒河猴的疾病特征与临床DKD患者非常相似，同样表现出中重度增多尿白蛋白，eGFR降低等特征，因此自发性慢性糖尿病肾病恒河猴为CKD/DKD研究和新药发展提供重要研究手段(Najafian,B.,et al.,Glomerulopathy in spontaneously obese rhesus monkeys with type 2diabetes:astereological study.Diabetes Metab Res Rev,2011.27(4):p.341-7.Liang Y,Yang Z,et al.Diabetic Kidney Disease(DKD)in Nonhuman Primates(NHP’s)is Comparable toHumans for Glomerular Filtration Rate(GFR),Histology and High RiskFactors.ADA2017)。

考虑到啮齿类动物模型在研究人类糖尿病肾病中的局限性，本发明人以自发性慢性糖尿病肾病恒河猴为动物模型模拟人类患者对众多GPCR类药物进行了大量细致的研究和广泛的筛选。结果出人意料地发现，某些GPCR类药物组合在一起时对于DKD有明显疗效。具体地，已发现采用多沙唑嗪、普拉克索和美托洛尔的组合，能够在CKD-EPI评级G3期且合并中重度蛋白尿恒河猴动物模型中显著降低蛋白尿(UACR)，显著改善肾小球滤过率eGFR，抑制DKD发展至终末期肾病(ESRD)，其疗效与临床一线常用药物缬沙坦(Valsartan)相当。基于此，本申请公开了一种治疗慢性肾病尤其是DKD的药物组合物及其医学用途。

一、药物组合物

本发明的第一方面提供了一种用于治疗慢性肾病、尤其是糖尿病肾病的药物组合物，其包含多沙唑嗪(或其可药用的盐)、普拉克索(或其可药用的盐)和美托洛尔(或其可药用的盐)作为活性成分。

在本申请说明书、实施例和权利要求书中使用了某些术语。除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属领域技术人员通常所理解的相同的含义。

术语“包括”、“包含”、“具有”以包含性的、开放的意义使用，这意味着除所指明的之外，可以包括额外的元素。本文所使用的术语“诸如”、“例如”是非限制性的，且仅用于说明的目的。“包括”和“包括但不限于”可互换使用。

除非上下文另有明确指示，术语“或”，在本文中使用时应当被理解为是指“和/或”。

术语“治疗”是指抑制受试者的疾病、病症和/或症状，例如阻碍其进展；和缓解疾病、病症和/或症状，例如引起疾病、病症和/或症状的消退。治疗疾病或病症包括改善特定疾病或病症的至少一种症状，即使潜在的病理生理学不受影响。特别地，在本申请中“治疗”也涵盖通过用药降低某疾病发病风险的含义，即“治疗”既包括发病前的预防，也包括发病后的疾病的缓解、抑制和治愈。

术语“药物组合物”是指具有特定医药或生物用途的多种物质的组合，通常在被施用给受试者后预期对特定的疾病具有治疗或预防作用。药物组合物既可以仅包含规定的活性成分(生物活性物质)，也可以为了各种用途与常规的可药用的载体一起提供。对本申请中的术语“组合物”应该按照广义进行解释。作为本发明药物组合物的一种实现方式，例如，可以通过将规定的活性成分(以及任选的可药用的载体)混匀在一起，以各个成分不可区分的混合物的形式提供。作为本发明药物组合物的另一种实现方式，也可以将各个规定的活性成分分别独立包装成小份，再以更大的容器将这些小的独立包装合并容纳在一起来提供本发明的“药物组合物”。

术语“活性成分”和“生物活性物质”是指在患者或受试者中对于治疗疾病或病症(例如糖尿病肾病)起作用的生物学、生理学或药学活性物质的分子和其他试剂。该术语是相对于“可药用的载体”、“赋形剂”、“助剂”等术语而使用的。“活性成分”(或“生物活性物质”)包括但不限于其可药用的盐和前药。这些试剂可以是酸、碱或盐；它们可以是中性分子、极性分子或能够氢键结合的分子复合物；它们可以是醚、酯、酰胺等形式的前药，当给予患者或受试者时被生物活化。

本文所使用的术语“多沙唑嗪”是指英文名为Doxazosin(简称DOX)、IUPAC名称为(RS)-2-[4-(2,3-二氢-1,4-苯并二恶烯-2-羰基)哌嗪-1-基]-6,7-二甲氧基-4-胺(分子式C₂₃H₂₅N₅O₅，分子量：451.475g/mol)的如下分子：

。术语“多沙唑嗪”也涵盖其同位素标记化合物、或其光学异构体、几何异构体、互变异构体或异构体混合物、或其前体药(即通过体内反应而得到上述分子的化合物)。

多沙唑嗪是被各主要医药监管机构(如FDA)批准的已上市药，它是一种选择性α1受体拮抗剂，其抑制去甲肾上腺素(从交感神经末梢释放)与血管平滑肌细胞膜上的α-1受体的结合，常用于治疗原发性高血压。

本发明的药物组合物中可以包含多沙唑嗪或其可药用的盐作为活性成分。多沙唑嗪的市售药多为盐形式，特别是其甲磺酸盐，例如可由辉瑞制药公司提供的甲磺酸多沙唑嗪控释片(可多华)、杭州康恩贝制药有限公司提供的甲磺酸多沙唑嗪片等。

本文所使用的术语“普拉克索”是指英文名为Pramipexole(简称PMP)、IUPAC名称为(S)-N6-丙基-4,5,6,7-四氢-1,3-苯并噻唑-2,6-二胺(分子式C₁₀H₁₇N₃S，分子量：211.324g/mol)的如下分子：

。术语“普拉克索”也涵盖其同位素标记化合物、或其光学异构体、几何异构体、互变异构体或异构体混合物、或其前体药(即通过体内反应而得到上述分子的化合物)。

普拉克索是被各主要医药监管机构(如FDA)批准的已上市药，它是一种抗组胺药，作为多巴胺受体D2/D3激动剂，临床上主要用于治疗帕金森病，单独(无左旋多巴)或与左旋多巴联用。在文献中，普拉克索有时也被称为“米拉帕”或“Mirapex”、“Mirapexin”、“Sifrol”等。

本发明的药物组合物中可以包含普拉克索或其可药用的盐作为活性成分。普拉克索的市售药多为盐形式，特别是其盐酸盐，例如可由勃林格殷格翰制药公司提供的盐酸普拉克索片(森福罗)等。

本文所使用的术语“美托洛尔”是指英文名为Metoprolol(简称MTP)、IUPAC名称为(RS)-1-[4-(2-甲氧基乙基)苯氧基]-3-[(丙-2-基)氨基]丙-2-醇(分子式C₁₅H₂₅NO₃、分子量267.37g/mol)的如下分子：

。术语“美托洛尔”也涵盖其同位素标记化合物、或其光学异构体、几何异构体、互变异构体或异构体混合物、或其前体药(即通过体内反应而得到上述分子的化合物)。

美托洛尔是被各主要医药监管机构(如FDA)批准的已上市药，它是一种选择性肾上腺素β1受体阻断剂，常用于治疗高血压及心绞痛。本发明的药物组合物中可以包含美托洛尔或其可药用的盐作为活性成分。美托洛尔的市售药多为盐形式，特别是酒石酸盐，例如可由阿斯利康制药有限公司提供的酒石酸美托洛尔片(倍他乐克)、可由广州白云山天心制药股份有限公司提供的酒石酸美托洛尔控释片(立君宁)等。

本发明的组合物中所包含的活性成分(多沙唑嗪、普拉克索、美托洛尔)都可以用其可药用的盐来代替。术语化合物的“可药用的盐”是指药学上可接受的并且具有母体化合物的所需药理学活性的盐。本文所用的可药用的盐是与可药用酸或碱形成的盐。可药用酸包括但不限于无机酸，例如盐酸、硫酸、磷酸、焦磷酸、氢溴酸或硝酸，以及有机酸，例如柠檬酸、富马酸、马来酸、苹果酸、抗坏血酸、琥珀酸、酒石酸、苯甲酸、乙酸、甲磺酸、乙磺酸、水杨酸、硬脂酸、苯磺酸或对甲苯磺酸。可药用碱包括碱金属(例如钠或钾)以及碱土金属(例如钙或镁)的氢氧化物，以及有机碱，例如烷基胺、芳基胺或杂环胺。为避免疑义，本发明所述的某一活性成分的“可药用的盐”还包括由该活性成分的同位素标记化合物、或其光学异构体、几何异构体、互变异构体或异构体混合物、或其前体药所形成的可药用的盐。

可以通过常规化学方法从含有碱性或酸性部分的母体化合物合成可药用的盐。通常，这些盐可以通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计算量的适当的碱或酸在水中或在有机溶剂中或在两者的混合物中反应来制备；通常，优选非水介质如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。盐的列表可在Remington's Pharmaceutical Sciences第18版中找到(Mack Publishing Company，1990)。例如，盐可包括但不限于本发明化合物的盐酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐等。

应当理解，对各种活性成分或可药用的盐的所有提及包括相同活性成分或盐的溶剂加成形式(溶剂化物，例如水合物、乙醇溶剂化物、丙酮溶剂化物等)或其各种晶体形式(例如无定型、多晶型物等)。

本发明的药物组合物中多沙唑嗪(或其可药用的盐)、普拉克索(或其可药用的盐)和美托洛尔(或其可药用的盐)的含量可以根据实际需要进行调整。例如，根据药物组合物的施用方式(口服或注射等)可以改变药物组合物中各药物的含量或比例。

在一些实施方式中，本发明的药物组合物通常包含0.5重量份至45重量份(优选1重量份至10重量份)的普拉克索或其可药用的盐、5重量份至160重量份(优选5重量份至80重量份)的多沙唑嗪或其可药用的盐和50重量份至2000重量份(优选100重量份至1000重量份)的美托洛尔或其可药用的盐。

本发明的药物组合物中，普拉克索或其可药用的盐的量通常为0.5重量份至45重量份，例如可以为0.5重量份至42重量份、0.5重量份至40重量份、0.5重量份至35重量份、0.5重量份至30重量份、0.5重量份至25重量份、0.5重量份至20重量份、0.5重量份至15重量份、0.5重量份至10重量份、1重量份至45重量份、1重量份至42重量份、1重量份至40重量份、1重量份至35重量份、1重量份至30重量份、1重量份至25重量份、1重量份至20重量份、1重量份至15重量份、1重量份至10重量份、2重量份至45重量份、2重量份至40重量份、2重量份至35重量份、2重量份至30重量份、2重量份至25重量份、2重量份至20重量份、2重量份至15重量份、2重量份至10重量份、5重量份至45重量份、5重量份至40重量份、5重量份至35重量份、5重量份至30重量份、5重量份至25重量份、5重量份至20重量份、5重量份至15重量份、5重量份至10重量份、10重量份至40重量份、10重量份至30重量份、10重量份至25重量份等。在本发明的一个优选的实施方式中，普拉克索或其可药用的盐的含量为1重量份至10重量份。

本发明的药物组合物中，多沙唑嗪或其可药用的盐的通常量为5重量份至160重量份，例如可以为5重量份至150重量份、5重量份至130重量份、5重量份至120重量份、5重量份至100重量份、5重量份至80重量份、5重量份至60重量份、5重量份至50重量份、5重量份至40重量份、10重量份至150重量份、10重量份至130重量份、10重量份至120重量份、10重量份至100重量份、10重量份至80重量份、10重量份至60重量份、10重量份至50重量份、10重量份至40重量份、15重量份至160重量份、15重量份至150重量份、15重量份至130重量份、15重量份至120重量份、15重量份至100重量份、15重量份至80重量份、15重量份至60重量份、15重量份至50重量份、15重量份至40重量份、20重量份至160重量份、20重量份至150重量份、20重量份至130重量份、20重量份至120重量份、20重量份至100重量份、20重量份至80重量份、20重量份至60重量份、20重量份至50重量份、20重量份至40重量份等。在本发明的一个优选的实施方式中，多沙唑嗪或其可药用的盐的含量为5重量份至80重量份。

本发明的药物组合物中，美托洛尔或其可药用的盐的量通常为50重量份至2000重量份，例如可以为50重量份至1800重量份、50重量份至1600重量份、50重量份至1500重量份、50重量份至1300重量份、50重量份至1200重量份、50重量份至1000重量份、50重量份至800重量份、50重量份至600重量份、50重量份至500重量份、50重量份至400重量份、100重量份至1800重量份、100重量份至1600重量份、100重量份至1500重量份、100重量份至1300重量份、100重量份至1200重量份、100重量份至1000重量份、100重量份至800重量份、100重量份至600重量份、100重量份至500重量份、100重量份至400重量份、150重量份至2000重量份、150重量份至1800重量份、150重量份至1600重量份、150重量份至1500重量份、150重量份至1300重量份、150重量份至1200重量份、150重量份至1000重量份、150重量份至800重量份、150重量份至600重量份、200重量份至2000重量份、200重量份至1800重量份、200重量份至1600重量份、200重量份至1500重量份、200重量份至1300重量份、200重量份至1200重量份、200重量份至1000重量份、200重量份至800重量份、200重量份至600重量份等。在本发明的一个优选的实施方式中，多沙唑嗪或其可药用的盐的含量为100重量份至1000重量份。

二、药物剂型

在一些实施方式中，本发明的药物组合物可以作为原料药的形式(例如均匀混合物或各成分的独立包装)提供。在另一些实施方式中，本发明的药物组合物可以根据需要加入可药用的载体而配制成各种药物剂型(制剂)。为此目的，可以使用各种液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包封材料作为“可药用的载体”。在本申请中，短语“可药用的”是指在合理的医学判断范围内，与本申请组合物的其他成分相容、且适合与人类和动物的组织接触而没有过多毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症的化合物、组合物、聚合物和其他材料。在某些优选实施方案中，可药用的载体是无热原的。可用作可药用的载体的材料的一些实例包括：(1)糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠，乙基纤维素和醋酸纤维素；(4)粉末黄蓍胶；(5)麦芽糊精；(6)明胶；(7)滑石粉；(8)辅料，如可可脂和栓剂蜡；(9)花生油、棉籽油、葵花籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和豆油等油类；(10)二醇，如丙二醇；(11)多元醇，如甘油、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯类，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；(21)药物制剂中使用的其他无毒相容物质。

本发明的药物组合物可根据需要配制成适用于口服、胃肠外(包括皮下、肌肉、皮层和静脉)施予、支气管施予、玻璃体腔内注射或鼻施予等给药途径的剂型。其中，优选地，本发明的药物组合物被配制成适用于口服的剂型(制剂)。

如果使用固体载剂，则该制剂可以成片，以粉末或颗粒形式置于硬质凝胶胶囊中，或制成糖锭或锭剂形式。固体载剂可以包括常规的赋形剂，诸如粘合剂、填料、成片润滑剂、崩解剂、润湿剂等等。如果需要可以通过常规技术膜包衣该片剂。如果使用液体载剂，则该制剂可以是糖浆、乳液、软凝胶胶囊、用于注射的无菌载体、水性或非水性液体悬浮液形式的，或者可以是在使用前用水或其他适当载体复原的干品。液体制剂可以包含常规添加剂，诸如悬浮剂、乳化剂、润湿剂、非水性载体(包括可食用油)、防腐剂以及香味剂和/或着色剂。为了胃肠外施予，通常载体至少大部分包括无菌水，但也可以使用盐水溶液、葡萄糖溶液等。也可以使用可注射悬浮液，在这种情况下，可以使用常规悬浮剂。常规防腐剂、缓冲试剂等也可以添加到胃肠外剂型中。

适于非肠道注射的剂型可以包括生理学上可接受无菌水性或非水性溶液、分散液、悬浮液或乳液和用于无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。合适的水性和非水性载体、稀释剂、溶剂的实例包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、丙三醇等)、其合适的混合物、植物油(例如，橄榄油)和可注射有机酯(例如，油酸乙酯)。

这些药物剂型还可以包含各种赋形剂，例如，防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。可以通过各种抗菌剂和抗真菌剂(例如，对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等)来确保对微生物的作用的抑制。还可以包括等渗剂，例如，糖、氯化钠等。可以通过使用延迟吸收试剂(例如，单硬脂酸铝和凝胶)来延长可注射药学剂型的吸收。

用于口服的固体剂型包括胶囊、药片、药丸、粉末和颗粒。在这种固体剂型中，将活性化合物与至少一种惰性赋型剂(或载体)(例如，柠檬酸钠或磷酸二钙)混合，其中还可以包括：(a)填料或混合剂(例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸)；(b)粘结剂(例如，羧基甲基纤维素、褐藻酸酯、凝胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶)；(c)保湿剂(例如，丙三醇)；(d)崩解剂(例如，琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、褐藻酸、某些合成的硅酸酯、碳酸钠)；(e)溶液阻滞剂(例如，石蜡)；(f)吸收促进剂(例如，季铵化合物)；(g)润湿剂(例如，十六烷醇和单硬脂酸丙三醇酯)；(h)吸附剂(例如，高岭土和斑脱土)和(i)润滑剂(例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠)或其混合物混合。

类似类型的固体组合物还可以在使用例如乳糖以及高分子量聚乙二醇等作为赋型剂的软填充和硬填充凝胶胶囊中作为填料。

固体剂型(例如，药片、糖衣丸、胶囊、药丸和颗粒)可以采用涂层和外壳(例如，肠道涂层和本领域已知的其它)来制备。它们可以包含遮光剂，它们还可以是以延迟方式在肠道的某一部分中释放活性化合物或各种活性化合物的组合物。可用的包埋组合物的实例是聚合物质和蜡。活性组分还可以以微胶囊化形式，如果适当的话，可以具有一种或更多种上述赋型剂。

用于口服的液体剂型包括可药用的乳液、溶液、分散液、糖浆和酏剂。除了活性化合物以外，液体剂型可以包含本领域中通常所用的惰性稀释剂(例如，水或其它溶剂)、增溶剂和乳化剂(例如，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3丁二醇、二甲基甲酰铵)、油(具体为，棉花子油、落花生油、玉米油、橄榄油、蓖麻油、芝麻油)、丙三醇、四氢呋喃醇、聚乙二醇和山梨聚糖的脂肪酸酯或这些物质的混合物等。

除了这些惰性稀释剂，药物剂型还可以包括，例如，润湿剂、乳化和悬浮剂、香化剂、调味剂和加香剂。

除了活性化合物，悬浮液可以包含悬浮剂，例如乙氧基化异十八烷醇、聚氧化乙烯山梨醇、山梨聚糖酯、微晶纤维、偏氢氧化铝、斑脱土、琼脂-琼脂和黄芪胶或这些物质的混合物等。

本发明的药物剂型也包括软膏、粉末、喷雾和吸入剂。该活性组分在无菌条件下与生理学上可接受载体和任何所需要的防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。

在药物组合物和药物剂型中活性成分的量可以由本领域技术人员根据需要适当地确定，例如各活性成分通常以治疗有效量存在于药物组合物或剂型中。

例如，本发明的药物组合物可以被配制成口服剂型(例如每日2至3次的口服剂型或长效缓释口服制剂)、静脉注射剂型、肌肉注射剂型。

在本发明的一个优选实施方式中，本发明的药物组合物是口服施用的剂型。在本发明的进一步优选的实施方式中，本发明的药物组合物是每日1次的口服剂型、每日2至3次的口服剂型或长效缓释口服制剂。

在本发明的一个优选实施方式中，本发明的药物组合物是口服施用的剂型。在本发明的进一步优选的实施方式中，本发明的药物组合物是每日口服剂型。

三、药物组合物和药物剂型的用途

业已发现，本发明的药物组合物和药物剂型可以用于治疗慢性肾病(CKD)，尤其是糖尿病肾病(DN或DKD)。

因此，本发明的第二方面涉及多沙唑嗪(或其可药用的盐)、普拉克索(或其可药用的盐)和美托洛尔(或其可药用的盐)的组合在制备药物组合物中的用途，所述药物组合物用于在有需要的受试者中治疗慢性肾病，尤其是糖尿病肾病。

本发明的第三方面涉及多沙唑嗪(或其可药用的盐)、普拉克索(或其可药用的盐)和美托洛尔(或其可药用的盐)的组合在在有需要的受试者中治疗慢性肾病，尤其是糖尿病肾病的用途。

本发明的第四方面涉及一种治疗慢性肾病，尤其是糖尿病肾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的多沙唑嗪(或其可药用的盐)、普拉克索(或其可药用的盐)和美托洛尔(或其可药用的盐)。

本发明的药物组合物和剂型适合各个阶段的糖尿病肾病治疗，也适合在发病前的预防性治疗。

通过本发明方法治疗的“患者”或“受试者”可以指人或非人动物，例如灵长类动物。优选地，所述“患者”或“受试者”是人。

本发明的治疗方法涉及多种活性成分的联合用药，也称为“组合治疗”或“组合疗法”。所述“联合用药”或“组合治疗”是指施用本发明所述的多种活性成分使它们共同作用来提供有益的效果。上述组合的有益效果包括，但不局限于，上述活性成分的组合所产生的药物动力方面或者药效方面的共同作用。这些活性成分的组合施用通常是在一段规定的时间段内完成的(通常是分钟、小时、天或者周，这取决于医生的判断)。“联合用药”或“组合治疗”意在包括以按顺序的方式施用这些活性成分，即，其中的每一种活性成分在不同的时间被施用，也包括以基本上同时的方式施用这些活性成分，或者施用这些活性成分中的至少两种。可以通过例如下述方式来完成基本上同时的施用：向所述的宿主施用单一的胶囊，所述的胶囊中装有固定比例的每种活性成分，或者向所述的宿主施用多个胶囊，每个胶囊中装有一种所述的活性成分。每种活性成分的按顺序施用或者基本上同时施用可能会受到任何适合的路径的影响，所述的途径包括，但不局限于，口服途径、静脉内途径、肌肉内途径，以及经由黏膜组织的直接吸收。所述的活性成分可以通过同样的途径或者不同的途径进行施用。例如，所选定的组合中的第一种活性成分可以通过静脉内注射的方式进行施用，而所述组合中的其他活性成分可以通过口服的方式进行施用。或者，例如，所有的活性成分均可以通过口服的方式进行施用，或者所有的活性成分均可以通过静脉内注射的方式进行施用。所述这些活性成分的施用顺序并不受到严格的限制。

“联合用药”或“组合治疗”还包括将上文中所描述的活性成分进一步的与其他生物活性成分以及非药物治疗(例如，外科手术治疗或者机械治疗)进行组合施用。当所述的组合治疗中进一步包括非药物治疗时，所述的非药物治疗可以在任意适当的时间进行，只要能够达到所述的活性成分以及非药物治疗的组合的共同作用所产生的有益效果即可。例如，在适当的情形中，当从所述的活性成分的施用中临时停止所述的非药物治疗后，仍旧能够达到所述的有益效果，其中所述的停止可能是几天或者甚至是几周。

为了起到预期效果，通常需要将治疗有效量的本发明的药物组合物或剂型或单独的各活性成分给予患者或受试者。

短语“治疗有效量”是本领域公认的术语。在某些实施方案中，该术语是指消除、减少或维持特定治疗方案的目标所必需或足够的量。有效量可以根据诸如所治疗的疾病或病症、所施用的特定靶向构建体、受试者的大小或疾病或病症的严重性等因素而变化。本领域普通技术人员或医生可凭经验确定特定化合物的有效量，而无需过多的实验。在某些实施方案中，体内使用的治疗剂的治疗有效量可能取决于许多因素，包括：施用的方式和方法；除了药剂之外还包含在药物中的任何其他材料。可选使用体外或体内试验来帮助确定最佳剂量范围。

在本发明的一些实施方式中，对于正常的体重为约60千克的成年人而言，当经口服用本发明的药物剂型或药物组合物时，多沙唑嗪或其可药用盐的日剂量范围可以为0.5mg至16mg，例如可以为0.5mg至15mg、0.5mg至13mg、0.5mg至12mg、0.5mg至10mg、0.5mg至8mg、0.5mg至6mg、0.5mg至5mg、0.5mg至4mg、1mg至15mg、1mg至13mg、1mg至12mg、1mg至10mg、1mg至8mg、1mg至6mg、1mg至5mg、1mg至4mg、1.5mg至16mg、1.5mg至15mg、1.5mg至13mg、1.5mg至12mg、1.5mg至10mg、1.5mg至8mg、1.5mg至6mg、1.5mg至5mg、1.5mg至4mg、2mg至16mg、2mg至15mg、2mg至13mg、2mg至12mg、2mg至10mg、2mg至8mg、2mg至6mg、2mg至5mg、2mg至4mg等。在本发明的一个优选的实施方式中，多沙唑嗪或其可药用盐的多沙唑嗪的日剂量范围可以为约2mg。在本发明的另一个优选的实施方式中，多沙唑嗪的日剂量为约4mg。。

在本发明的一些实施方式中，对于正常的体重为约60千克的成年人而言，当经口服用本发明的药物剂型或药物组合物时，普拉克索或其可药用盐的日剂量范围可以为0.05mg至4.5mg，例如可以为0.05mg至4.2mg、0.05mg至4mg、0.05mg至3.5mg、0.05mg至3mg、0.05mg至2.5mg、0.05mg至2mg、0.05mg至1.5mg、0.05mg至1mg、0.1mg至4.5mg、0.1mg至4.2mg、0.1mg至4mg、0.1mg至3.5mg、0.1mg至3mg、0.1mg至2.5mg、0.1mg至2mg、0.1mg至1.5mg、0.1mg至1mg、0.2mg至4.5mg、0.2mg至4.2mg、0.2mg至4mg、0.2mg至3.5mg、0.2mg至3mg、0.2mg至2.5mg、0.2mg至2mg、0.2mg至1.5mg、0.2mg至1.0mg、0.5mg至4.5mg、0.5mg至4.2mg、0.5mg至4mg、0.5mg至3.5mg、0.5mg至3mg、0.5mg至2.5mg、0.5mg至2mg、0.5mg至1.5mg、0.5mg至1mg、1mg至4mg、1mg至3mg、1mg至2.5mg等。在本发明的一个优选的实施方式中，普拉克索或其可药用的盐的日剂量范围为约0.1mg至1mg。在本发明的一个优选的实施方式中，普拉克索的日剂量为约0.0625mg。在本发明的另一个优选的实施方式中，普拉克索的日剂量为约0.125mg。

在本发明的一些实施方式中，对于正常的体重为约60千克的成年人而言，当经口服用本发明的药物剂型或药物组合物时，美托洛尔或其可药用盐的日剂量范围可以为5mg至200mg，例如可以为5mg至180mg、5mg至160mg、5mg至150mg、5mg至130mg、5mg至120mg、5mg至100mg、5mg至80mg、5mg至60mg、5mg至50mg、5mg至40mg、10mg至180mg、10mg至160mg、10mg至150mg、10mg至130mg、10mg至120mg、10mg至100mg、10mg至80mg、10mg至60mg、10mg至50mg、10mg至40mg、15mg至200mg、15mg至180mg、15mg至160mg、15mg至150mg、15mg至130mg、15mg至120mg、15mg至100mg、15mg至80mg、15mg至60mg、20mg至200mg、20mg至180mg、20mg至160mg、20mg至150mg、20mg至130mg、20mg至120mg、20mg至100mg、20mg至80mg、20mg至600重量。在本发明的一个优选的实施方式中，美托洛尔或其可药用盐的日剂量范围为10mg至100mg。在本发明的一个优选实施方式中，美托洛尔的日剂量为约20mg。在本发明的另一个优选的实施方式中，美托洛尔的日剂量为约40mg。

以上所述日剂量可以周期性地连续施予，例如每2小时、每6小时、每8小时、每12小时、约每24小时施用一次。优选地，所述日剂量可以每日2至3次的形式施予给患者，或采用缓释片施予。上述三种活性成分的口服日剂量相差比较大，这是由各个活性成分的体内药物代谢动力学所决定的。

本领域技术人员可以理解，当本发明的药物组合物被配制成适合于静脉滴注或肌肉注射等其它剂型时，各个活性成分的剂量范围可能不同于上面给出的口服剂量范围，本领域技术人员或医生可以结合体内体外实验并考虑到各种给药途径的不同药物代谢动力学特点进行合理确定。

在本发明的优选实施方式中，本发明的药物组合物用于灵长类受试者，特别是人受试者。

本领域技术人员能够理解，本文所述的本发明的各个方面可以以本领域技术人员明了的各种方式分别组合，而不偏离本申请的主题和思想。所述组合也包括在本申请的范围内。例如，本发明涉及的某些组分的用量范围包括说明书中所提到的任意下限和任意上限的任意组合，也包括各具体实施例中该组分的具体含量作为上限或下限组合而构成的任意范围；所有这些范围都涵盖在本发明的范围内。另外，说明书中所列举的本发明的每一个特征，可以与发明的其它任意特征相组合，这种组合也都在本发明的公开范围内。

实施例

发明人以自发性慢性糖尿病肾病恒河猴为实验动物，通过实验验证三种已上市GPCR信号通路药物多沙唑嗪(DOX)、普拉克索(PMP)和美托洛尔(MTP)联合用药对于糖尿病肾病的有效性和药物安全耐受性。实验中以目前常见的DKD一线常用药物缬沙坦作为阳性对照。

一、实验材料

具体而言，实验中采用以下三种已上市药物作为供试品：

注：猴用药剂量与人用剂量可采用体表面积法或体内药物浓度暴露进行剂量换算。

供试品1：

名称或缩写名(英文名)：甲磺酸酸多沙唑嗪(Doxazosin mesylate,DOX)

纯度：98％HPLC

生产单位：上海子起生物科技有限公司

供试品2：

名称或缩写名(英文名)：盐酸普拉克索(Pramipexole 2HCL Monohydrate，PMP)

纯度：99.55％HPLC

生产单位：上海子起生物科技有限公司

供试品3

名称或缩写名(英文名)：酒石酸美托洛尔(Metoprolol tartratesalt，MTP)

纯度：98％HPLC

生产单位：阿拉丁(上海)试剂有限公司

阳性对照药：缬沙坦

名称或缩写名(英文名)：Valsartan

生产单位：上海毕得医药科技有限公司

二、具体实验方案

实验动物：

动物种属:恒河猴，Macaca mulatta(Rhesus Macaque)。

等级：普通级。试验前检疫合格，内容包括体检、2次结核杆菌试验、寄生虫、沙门氏菌、致贺氏菌和B病毒检查。

动物标识：脖环上戴刻有阿拉伯数字的不锈钢号牌，胸口纹身

供应单位：雅安普莱美生物科技有限公司

生产许可证号：SCXK(川)2019-027

试验体系遵循AAALAC要求和GLP标准

饲养环境：

环境等级：普通级。温度：18～26℃。相对湿度：40％至70％。通风：每小时换气次数不小于8次，使用100％的全新风(无空气循环)。照明时间：自动光照，每12hr明暗交替，7:30PM关灯，次日7:30AM开灯。动物笼具：850*900*2365mm双层不锈钢笼具。饲养密度：1只/笼。

实验共入选16只自发性慢性糖尿病肾病(DKD)恒河猴，入选标准如下：

1)16只雄性/雌性，年龄14至24岁(等同于40至75岁成年人)；雄性14只，体重7至13kg；雌性2只：6至8kg

2)糖尿病病程2年以上：空腹血糖(FPG):大于4.8mmol/L,vs年龄匹配对照组(age-matched controls)4.1±0.3mmol/L；

3)CKD-EPI评级G3a至G3b为肾小球滤过率eGFR:30～59ml/min/1.73m²vs年龄匹配对照组(age-matched controls)92±11ml/min/1.73m²；或蛋白尿中重度增多(A2至A3)为尿白蛋白/肌酐比值(UACR):15mg/g至350mg/g(4至6小时尿液收集)，vs年龄匹配对照组3±2mg/g。

4)正常血压、1级或2级高血压(与临床患者标准一致)。

排除标准如下：

1)严重肝功能异常

2)任何可能会影响药效评价的其他疾病

下表1给出了基线期-各组自发性慢性糖尿病肾病恒河猴恒河猴基础病因和特征。

分组和给药方案：

本次试验设DOX+PMP+MTP组(n＝8)、Valsartan组(n＝4)和安慰剂组(n＝4)。其中DOX+PMP+MTP组又分为1#实验组和2#实验组。各组给药方案具体见如下描述，其中给药途径是口服给药。基线期1个月，之后连续口服给药58天。

1#实验组：动物数4只

D0至D14:DOX+PMP+MTP:0.133+0.002+0.833mg/kg，每日2次；

D15至D28：DOX+PMP+MTP:0.266+0.002+1.667mg/kg，每日2次；

D29至D58：DOX+PMP+MTP:0.266+0.004+0.833mg/kg，DOX和MTP药每日2次，PMP药每日1次

2#实验组：动物数4只

D0至D14:DOX+PMP+MTP:0.133+0.002+0.833mg/kg，每日2次

D15至D28,：DOX+PMP+MTP:0.133+0.002+1.667mg/kg，每日2次

D29至D58：DOX+PMP+MTP:0.266+0.002+1.667mg/kg，每日2次

Valsartan组：动物数4只，剂量2.67mg/kg(相当于临床等效剂量40至80mg)，在D0至D58每日给予；给药期第1至2周每天1次，第3～8周每天2次。

安慰剂组：动物数4只，给予饮用水或水果，连续观察58天。

三、主要观察指标及监测方法

1.主要药效指标

肾小球滤过率eGFR：检测肌酐(Cr-P)、尿素氮(BUN)、胱抑素(CysC)，计算获eGFR值。分别在给药前基线期1次、给药后D14、D28、D45和D58检测。参照参考文献(Levey AS,Stevens LA,Schmid CH et al.A new equation to eatimate glomerular filtrationrate.Ann Intern Med 2009；150:604-612)，eGFR计算公式如下：

eGFR_male＝135×min(Cr/0.9,1)^-0.207×max(Cr/0.9,1)^-0.601×min(CysC/0.8,1)^-0.375×max(CysC/0.8,1)-0.711×0.995Age×3

eGFR_female＝135×min(Cr/0.7,1)^-0.284×max(Cr/0.7,1)^-0.601×min(CysC/0.8,1)^-0.375×max(CysC/0.8,1)-0.711×0.995Age×3×0.969

尿白蛋白排泄率UACR：4h/6h尿液收集，检测尿微量白蛋白(Malb)和尿肌酐(Cr-U)，计算获得UACR值。给药前1次，给药后30天和D58各1次。UACR＝Malb/Cr-U。

血压：麻醉后检测血压，包括收缩压(SBP)，舒张压(DBP)，平均血压(MBP)和心率(HR)。给药前1次，给药第58天1次(给药结束)。

2.次要药效和安全性指标

血钾：给药前1次，给药后D14、D28、D45和D58各1次；

糖脂代谢及肝功：FPG、FRA、LDL-c、HDL-c、TG、TC、ALT、AST等，给药前1次，给药后D28和D58各1次；

血液学指标：给药前1次，给药后D28和D58各1次；

体重：给药前一次，给药期每2周一次；

给药后每天观察24小时摄食、行为等变化。

3.样品采集和保存

血液样品采集方法：动物有采血操作前，禁食过夜，不麻醉，动物驯化后背板轻轻挤压保定，经前臂静脉采血，采完后用灭菌干棉球轻压采血部位止血。

尿液样品采集方法：动物有接尿操作前，禁食过夜。操作当天转移至代谢笼，收集4至6小时排泄的所有尿液至集尿袋。

样品处理方法：见表3-1

表3-1样品采集处理信息

4.检测方法和设备

检测方法：见表3-2和表3-3

血常规检测仪器：Siemens ADVIA 2120i Hematolagy Systems

血生化和尿液指标检测仪器：Roche cobas6000 analyzer series C501模块检测，NT-proBNP采用ELISA试剂盒检测。

表3-2生化检测项目

表3-3血液学检测项目

5.血压检测

检测方法：肌肉注射15mg/kg盐酸氯胺酮对动物进行麻醉，麻醉后呈仰卧位，并按标准绑上合适大小的袖带，将血氧探头夹在动物手指或脚趾(左手除外)上，红色感光面在指肚一侧，使用自动模式连续检测3次动物血压，每次间隔1min。若三次血压的SBP、DBP和MBP差异不大(最高值与最低值差异小于15mmHg)，测定结束，否则继续测定。

检测指标：检测指标包括收缩压(SBP)，舒张压(DBP)，平均血压(MBP)和心率(HR)

检测仪器：GE B40i电生理监护仪

6.临床观察

观察次数：每天观察1次。

观察方法：隔笼观察

观察内容：注射部位、皮肤、被毛、眼、耳、鼻、口腔、胸部、腹部、泌尿生殖部、四肢等部位，以及呼吸、运动、泌尿、排便和行为改变等。

7.体重测定

称重时间：当天喂食前

测定方法：称重前动物禁食14至16h，动物在清醒状态下，进入转移笼后，用大动物称称重。

测定仪器：METTLER TOLEDO电子台秤

8.数据处理

实验结果以个体数据形式表示。各项计量资料采用“Mean±SD”(均值±标准偏差)表示，采用配对T检验的方差分析方法对给药前和给药后各时间点指标进行统计学分析，P＜0.05即为差异显著，具有统计学意义。

四、实验结果及讨论

1.对蛋白尿(UACR)的影响

尿中含有蛋白会使尿液的渗透压增高，使肾脏浓缩功能受到影响，对肾小球和肾小管的功能造成损害。蛋白尿是造成肾小球纤维化的独立危险因素。因此临床治疗中控制UACR能减少肾纤维化风险和延缓终末期肾衰进展是非常重要的治疗策略。

各组给药对尿白蛋白排泄率(UACR)的影响见图1、图2和表4-1。各组选择蛋白尿中重度增多，表现为基线尿白蛋白/肌酐比值(UACR):15mg/g至350mg/g(4至6小时尿液收集)的DKD恒河猴分析基线和给药D30、给药D58的UACR变化。结果如下：

安慰剂组(n＝4)：与基线比，试验期结束D58的UACR(mg/g)平均升高27.16±23.57％；4例动物UACR水平在一定范围内稳定波动未表现快速进展。

Valsartan组(n＝4，3/4只中重度蛋白尿增多纳入统计)：与基线比，给药D30的UACR平均下降约30％左右，一直维持显著降低至D58的UACR平均下降40.71±8.27％，与安慰剂组比呈极显著降低(p＜0.01)。

DOX+PMP+MTP1#实验组(n＝4，4/4只中重度蛋白尿增多纳入统计)：与基线比，给药后D30的UACR平均下降50.57±23.86％，与安慰剂组比呈极显著降低(p＜0.01)，一直维持显著降低至D58的UACR平均下降68.75±12.73％，与安慰剂组比呈极显著降低(p＜0.01)。

DOX+PMP+MTP2#实验组(n＝4，3/4中重度蛋白尿增多纳入统计)：与基线比，给药后D30的UACR平均下降41.56±17.57％，与安慰剂组比呈极显著降低(p＜0.01)，一直维持显著降低至D58的UACR平均下降42.37±3.50％，与安慰剂组比呈极显著降低(p＜0.01)。

总之，DOX+PMP+MTP给药30天能显著降低蛋白尿，且疗效能维持到给药后58天，疗效呈现时效性。

2.对肾小球滤过率eGFR影响

各组对eGFR的影响见图3、表4-2和表4-3。各组入选eGFR：30～59ml/min/1.73m²，分析对基线和给药后D58的肾小球滤过率变化。

安慰剂组(n＝4)：与基线比，4例动物肾小球滤过率eGFR在一定范围内稳定波动未表现快速进展。

Valsartan组(n＝4，3/4动物eGFR：30～59ml/min/1.73m²纳入统计)：与基线比，给药后D58肾小球滤过率eGFR平均增加10±7ml/min/1.73m²，与安慰剂组变化值比呈显著增加(p＜0.05)，显著改善了肾小球恶化，且疗效呈现时效性。

DOX+PMP+MTP1#实验组和2#实验组(入选eGFR：30～59ml/min/1.73m²，按n＝5统计，DOX+PMP+MTP1#实验组和DOX+PMP+MTP2#实验组合并为一个组进行分析)：与基线比，给药D58肾小球滤过率eGFR平均增加10±4ml/min/1.73m²，与安慰剂组变化值比呈极显著增加(p＜0.01)，且疗效呈现时效性。

总之，DOX+PMP+MTP实验组给药D58能显著改善肾小球滤过率eGFR。

表4-2DOX+PMP+MTP给药D58对自发性慢性糖尿病肾病恒河猴eGFR影响

备注：1.“a”与基线比。

表4-3DOX+PMP+MTP给药D58自发性慢性糖尿病肾病恒河猴eGFR变化值

备注：DOX+PMP+MTP组均入选eGFR在30至59的动物统计。1.“a”与基线比。2.变化值＝检测时间点-基线值

3.对CysC，Cr-P和BUN的影响

各组给药对CysC，Cr-P和BUN的影响见表4-4到表4-6。CysC是一种反映肾小球滤过率变化的内源性标志物，Cr-P作为肾功能主要评判指标已有40余年，本试验中肾小球滤过率eGFR是通过CysC、Cr-P来计算。BUN虽然首先被作为肾功能评价指标，但它不能满足内源性GFR标志物的要求，在本试验中仅仅做作为辅助指标。

表4-4各组给药58天对自发性慢性糖尿病肾病恒河猴CysC的影响

备注：1.“a”与基线比。

表4-5各组给药58天对自发性慢性糖尿病肾病恒河猴CR-P的影响

表4-6各组给药58天对自发性伴慢性糖尿病肾病恒河猴BUN的影响

4.对血压的影响

各给药组给药对血压的影响见表4-7和表4-8。

安慰剂组(n＝4，2/4高血压)：与基线比，4例动物血压在一定范围内稳定波动。

Valsartan组(n＝4，2/4高血压)：与基线比，给药后D58，SBP平均降低13±6mmHg，降低值与安慰剂组比显著降低(P＜0.05)；DBP平均降低8±5mmHg，与安慰剂组变化值比极显著降低(p＜0.01)。

DOX+PMP+MTP 1#实验组(n＝4，2/4高血压)：与基线比，给药D58的SBP平均降低10±3mmHg，降低值与安慰剂组比显著降低(P＜0.05)；DBP没有呈现降低活性。对血压正常动物没有导致低血压的风险。

DOX+PMP+MTP 2#实验组(n＝4，2/4高血压)：与基线比，给药D58的SBP平均降低5±5mmHg，降低值与安慰剂组无统计学意义。DBP没有呈现降低活性。降血压活性弱。

总之，DOX+PMP+MTP组合物有一定的降低高压活性5至10mmHg。

表4-7恒河猴高血压分级

注：当SBP和DBP分属于不同级别时，以较高的分级为准

表4-8各组给药58天对自发性慢性糖尿病肾病恒河猴血压的影响

备注：“a”与安慰剂组比。

5.对K+的影响

各给药组给药对K+的影响见表4-9。与基线期比，给药D58各试验组动物血清K+水平未见明显改变。总之，DOX+PMP+MTP治疗组给药D58未见导致高血K症的风险。

表4-9各组给药58天对自发性慢性糖尿病肾病恒河猴K离子的影响

6.安全性耐受研究

作为已上市药物，DOX、PMP、MTP的安全剂量范围和毒副反应是已知的。DOX常用片剂剂量是4至8mg/次，每天2次。PMP推荐个体剂量应该在每天0.375mg至4.5mg，用于治疗特发性帕金森病时起始剂量为每日0.375mg，然后每5至7天增加一次剂量，最大剂量为1.5mg。在日剂量高于1.5mg时嗜睡的发生率增加。MTP推荐剂量是50～200mg/天，必要时可达到300mg/天或400mg/天，已知不良反应为低血压。

本试验中DOX、PMP和MTP联合治疗慢性糖尿病肾病恒河猴的给药量推算为临床患者等效人用剂量均远低于上述推荐剂量的最大值，所以理论上本发明的DOX+PMP+MTP三药联用是安全性非常好的。

另外，给药期间未见与给药相关的不良事件，肝功、肾功、体重、生化指标(包括FPG、LDL、HDL、TC、TG、ALT、AST、TP、ALB等)等都未见明显改变，进一步证实了本发明的DOX+PMP+MTP三药联用确实具有良好的生物安全性指标。

五、结论

以上实验结果表明：三种GPCR激动剂(DOX+PMP+MTP)口服给药58天治疗自发性糖尿病肾病恒河猴，能显著降低中重度蛋白尿，显著改善肾小球滤过率的恶化，抑制终末期肾衰发生；同时具有良好的安全性和耐受性，治疗期未见导致高血K症和体液潴留。

六、药物组合物实施例1

对于10kg猴，可分别取甲磺酸酸多沙唑嗪(Doxazosin mesylate,DOX)原料药粉末1.5mg、盐酸普拉克索(Pramipexole Dihydrochloride，PMP)原料药粉末0.02mg、酒石酸美托洛尔(Metoprolol tartratesalt，MTP)原料药粉末8mg均匀混合后即得药物组合物实施例1。该药物组合物可以直接混入食物给动物喂食，或者配以适当的赋形剂或添加剂后，可以制成口服片剂。

尽管上文已经对具体实施方式进行了具体描述，本领域的技术人员可以理解的是，根据上述说明书的揭示和指导，本发明所属领域的技术人员还可以对上述实施方式进行适当的变更和修改。因此，本发明并不局限于上面揭示和描述的具体实方式，对本发明的一些修改和变更也落入本发明的权利要求的保护范围内。

Claims

1.用于治疗慢性肾病的药物组合物，其包含多沙唑嗪或其可药用的盐、普拉克索或其可药用的盐、以及美托洛尔或其可药用的盐作为活性成分。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其包含0.5重量份至45重量份(优选1重量份至10重量份)的普拉克索或其可药用的盐、5重量份至160重量份(优选5重量份至80重量份)的多沙唑嗪或其可药用的盐、和50重量份至2000重量份(优选100重量份至1000重量份)的美托洛尔或其可药用的盐。

3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其为口服剂型或静脉注射，优选为口服剂型。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的药物组合物，其中所述可药用的盐选自盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、焦磷酸盐、氢溴酸盐或硝酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、苯甲酸盐、乙酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、苯磺酸盐或对甲苯磺酸盐。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的药物组合物，其中所述慢性肾病是糖尿病肾病。

6.多沙唑嗪或其可药用的盐、普拉克索或其可药用的盐和美托洛尔或其可药用的盐的组合在制备药物组合物中的用途，所述药物组合物用于在有需要的受试者中治疗慢性肾病。

7.根据权利要求5所述的用途，其中所述药物组合物为口服剂型或静脉注射剂型，优选为口服剂型。

8.根据权利要求6至7中任一项所述的用途，其中所述药物组合物适用于灵长类受试者，特别是人受试者。

9.根据权利要求8所述的用途，其中多沙唑嗪或其可药用的盐的日剂量范围是0.5mg至16mg，优选0.5mg至8mg，普拉克索或其可药用的盐的日剂量范围是0.05mg至4.5mg，优选0.1mg至1mg，美托洛尔或其可药用的盐的日剂量范围是5mg至200mg，优选10mg至100mg。

10.根据权利要求6至9中任一项所述的用途，其中所述可药用的盐选自盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、焦磷酸盐、氢溴酸盐或硝酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、苯甲酸盐、乙酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、苯磺酸盐或对甲苯磺酸盐。

11.根据权利要求6至10中任一项所述的用途，其中所述慢性肾病是糖尿病肾病。