CN114028595B - 一种新型冠状病毒气溶胶暴露系统消毒及评价方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种新型冠状病毒气溶胶暴露系统消毒及评价方法,具体的,所述方法包含了对气溶胶暴露系统负压安全柜、气溶胶发生管路、排风高效过滤器、补风高效过滤器、总抽气高效过滤器的消毒效果评价。所涉及的生物指示剂为嗜热脂肪芽孢杆菌(ATCC 7953,菌种浓度:5×105~5×106cfu/片),所使用的消毒剂为30%~35%的过氧化氢溶液,消毒设备为Bioquell L4型。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域,具体的,涉及一种新型冠状病毒气溶胶暴露系统消毒及评价方法。
背景技术
对于呼吸道病原微生物而言,尤其是目前世界范围内广泛流行的新型冠状病毒及其相关变异株,气溶胶吸入是其感染宿主的重要途径。非人灵长类动物口鼻式气溶胶暴露系统可以通过装有细菌、病毒等病原微生物悬浮液的雾化器雾化产生微生物气溶胶,非人灵长类动物吸入气溶胶后,在感染过程中避免了消化道、皮肤等其他暴露途径感染,感染方式与自然环境极为相似,为致病性病原微生物吸入感染、疫苗气溶胶免疫、肺脏给药、气溶胶攻毒评价疫苗或药物效果的研究提供了良好的评价技术平台。
非人灵长类动物口鼻式气溶胶暴露系统主要包括主机控制模块(调节阀、流量控制器)、气溶胶发生模块(含Collison气溶胶发生器、静压腔、流量控制器)、染毒模块(含口鼻式面罩、头罩、预实验采样器6个(从左到右依次编号为1-6号)、猴椅(从左到右依次编号为1-6号))、气溶胶采集模块(含生物采样器AGI30、控制阀)、废气处理模块(含排风高效过滤器、总抽气高效过滤器、补风高效过滤器)等。非人灵长类动物口鼻式气溶胶暴露系统示意图如图1所示,该暴露系统可同时供6只非人灵长类动物(猴)进行新型冠状病毒气溶胶吸入感染实验。感染实验结束后,针对该气溶胶暴露系统的消毒环节显得至关重要。
Bioquell L4型(英国Bioquell公司)专门用于设备管道和空间消毒。该设备采用闪蒸方式(即将过氧化氢溶液滴在加热的金属板上)使过氧化氢快速汽化,从而对设备进行消毒。目前,国内在生物安全三级实验室中使用非人灵长类动物口鼻式气溶胶暴露系统较为罕见,而针对该系统新型冠状病毒感染之后的消毒尤为重要。因此,建立一种非人灵长类动物口鼻式气溶胶暴露系统消毒效果验证的评价方法具有重要意义。
发明内容
为确保气溶胶暴露系统消毒效果达到要求,本发明提供了一种非人灵长类动物口鼻式气溶胶暴露系统消毒及评价方法。
所述的消毒方法包含:暴露系统负压安全柜与气溶胶发生管路、总抽气高效过滤器同步消毒,补风高效过滤器、排风高效过滤器逐个单独消毒的步骤:
具体的,
(1)暴露系统负压安全柜与气溶胶发生管路、总抽气高效过滤器同步消毒的方法为:
将气溶胶暴露系统主机接通电源,将总抽气高效过滤器气体出口处阀门调节至关闭状态,打开另一侧手动阀,使过氧化氢气体经过总抽气高效过滤器后能再次循环到负压安全柜内;在负压安全柜内放置一鼓风机,利用软管及三通将头罩抽气高效过滤器、采样高效过滤器、总抽气高效过滤器连接在鼓风机气体进气端,通过另一根软管将供气静压腔气溶胶进气口连接在鼓风机气体出气端,打开预实验采样器盖子和动物椅头罩以及采样管路中阀门,使过氧化氢气体能充分经过上述各类管路。关闭负压安全柜6扇门和负压安全柜顶3个生物密闭阀,同时将负压安全柜底部的补风格栅板关闭。通过2根软管将汽化过氧化氢发生器(移动VHP)气体进出口连接在暴露系统消毒进出口上,使过氧化氢气体从柜体左侧出右侧进。
(2)补风高效过滤器、排风高效过滤器逐个单独消毒的方法为:
补风高效过滤器消毒:将气溶胶暴露系统主机接通电源,任意开启负压安全柜一扇门,此时补风高效过滤器电动阀门会自动关闭。补风高效过滤器密封罩安装后,通过软管该高效过滤器的消毒入口与VHP的气体出口连接,密封罩上的出口与过氧化氢消毒器入口连接。通过循环对补风高效过滤器进行消毒,在补风高效过滤器正面布点,使过氧化氢气体流向为VHP-补风高效过滤器(反面)-排风高效过滤器(正面)-VHP。
排风高效过滤器消毒:将气溶胶暴露系统主机接通电源,关闭负压安全柜6扇门和负压安全柜顶3个生物密闭阀,同时将负压安全柜底部的补风格栅板关闭。通过软管将汽化过氧化氢发生器(移动VHP)气体出口连接在暴露系统左排风高效过滤器消毒进口上,暴露系统负压安全柜消毒验证出口连接在VHP气体进口处,同时关闭负压安全柜消毒验证进口阀门,使过氧化氢气体流向为VHP-排风高效过滤器(反面)-排风高效过滤器(正面)-负压安全柜-VHP。左排风高效过滤器消毒程序完成后,关闭过氧化氢消毒器,从左排风高效过滤器消毒进口上取下软管,与中排风高效过滤器消毒进口连接,按左排风高效过滤器的消毒参数对中排风高效过滤器进行消毒,直到右排风高效过滤器消毒完成。
所述的消毒剂为30%~35%的过氧化氢溶液,过氧化氢发生设备为Bioquell L4型过氧化氢发生器。
所述的评价方法为:
对气溶胶暴露系统负压安全柜、气溶胶发生管路、排风高效过滤器、补风高效过滤器、总抽气高效过滤器的消毒效果评价;
所述的消毒效果评价采用定点采样的方式评价,优选的,采样点采样编号及位置为:
1.预实验采样器1:样品编号01;
2.预实验采样器3:样品编号02;
3.预实验采样器5:样品编号03;
4.猴椅气溶胶进气管1:样品编号04;
5.猴椅气溶胶进气管3:样品编号05;
6.猴椅气溶胶进气管5:样品编号06;
7.供气静压腔:样品编号07;
8.头罩抽气高效过滤器后端:样品编号08;
9.采样高效过滤器后端:样本编号09;
10.总抽气高效过滤器后端:样品编号10;
11.负压安全柜左侧腔体下部:样品编号11;
12.负压安全柜腔体中心下部:样品编号12;
13.负压安全柜右侧腔体下部:样品编号13;
14.左排风高效过滤器正面:样品编号14;
15.左排风高效过滤器反面:样品编号15;
16.中排风高效过滤器正面:样品编号16;
17.中排风高效过滤器反面:样品编号17;
18.右排风高效过滤器正面:样品编号18;
19.右排风高效过滤器反面:样品编号19。
20.补风高效过滤器正面1:样品编号20;
21.补风高效过滤器正面2:样品编号21;
所述的消毒效果评价采用嗜热脂肪芽孢杆菌生物指示剂法,所述的嗜热脂肪芽孢杆菌为ATCC 7953菌株,使用浓度为菌种浓度:5×105~5×106cfu/片。
本发明还涉及所述的一种非人灵长类动物口鼻式气溶胶暴露系统消毒及评价方法在评价疫苗或药物效果中的应用,优选的,所述的疫苗或药物针对新型冠状病毒。
本发明的有益效果在于,
(1)本发明的方法可实现在短时间内快速对非人灵长类动物口鼻式气溶胶暴露系统进行有效地消毒灭菌,对细菌芽孢杀灭达到6log杀灭率,
(2)使用本发明的方法,为后续生物安全三级实验室利用该气溶胶暴露系统开展非人灵长类动物病原自然感染途径,尤其是新型冠状病毒等病原奠定了良好的实验室基础。
附图说明
图1、非人灵长类动物口鼻式气溶胶暴露系统示意图。
图2、气溶胶暴露系统负压安全柜、气溶胶发生管路、总抽气高效过滤器消毒效果验证布点位置图,
2a为负压安全柜右侧腔体下部:样品编号13;
2b为供气静压腔:样品编号07;
2c为总抽气高效过滤器后端:样品编号10;
2d为猴椅气溶胶进气管3:样品编号05。
图3、排风高效过滤器消毒效果验证布点位置图。
图4、补风高效过滤器消毒效果验证布点位置图。
图5、生物指示剂培养结果图。
具体实施方式
试剂耗材与仪器
表1主要试剂耗材与仪器
名称 | 供应商/生产厂商 |
嗜热脂肪芽孢杆菌片(ATCC 7953) | 北京四环卫生药械厂有限公司平谷分公司 |
溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基 | 北京路桥技术股份有限公司 |
五水合硫代硫酸钠 | 天津市科密欧化学试剂有限公司 |
过氧化氢消毒液 | 荆州双雄化工科技有限公司 |
生化培养箱 | 上海一恒科学仪器有限公司 |
Bioquell L4型过氧化氢发生器 | 深圳柏安诺科技有限公司 |
溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基配制:称取15.0g于1L蒸馏水中,加热煮沸至完全溶解,加入0.5%中和剂硫代硫酸钠,混匀,115℃高压灭菌30min,4℃备用。
生物指示剂添加:消毒程序结束之后,收集生物指示剂。在生物安全柜内小心打开培养基,将生物指示剂加入到对应的培养基试管中,拧紧盖子。
实施例1、气溶胶暴露系统负压安全柜、气溶胶发生管路、总抽气高效过滤器消毒效果验证
将气溶胶暴露系统主机接通电源,将总抽气高效过滤器气体出口处阀门调节至关闭状态,打开另一侧手动阀,使过氧化氢气体经过总抽气高效过滤器后能再次循环到负压安全柜内。在负压安全柜内放置一鼓风机,利用软管及三通将头罩抽气高效过滤器、采样高效过滤器、总抽气高效过滤器连接在鼓风机气体进气端,通过另一根软管将供气静压腔气溶胶进气口连接在鼓风机气体出气端,打开6个预实验采样器盖子和6个猴椅头罩以及采样管路中阀门,使过氧化氢气体能充分经过上述各类管路。鼓风机的作用在于增加各类管路中过氧化氢气体的流动,确保管路消毒完全。关闭负压安全柜6扇门和负压安全柜顶3个生物密闭阀,同时将负压安全柜底部的补风格栅板关闭。通过2根软管将汽化过氧化氢发生器(移动VHP)气体进出口连接在暴露系统消毒进出口上,使过氧化氢气体从柜体左侧出右侧进。生物指示剂布点如图1和图2所示,布点编号如下:
1.预实验采样器1:样品编号01;
2.预实验采样器3:样品编号02;
3.预实验采样器5:样品编号03;
4.猴椅气溶胶进气管1:样品编号04;
5.猴椅气溶胶进气管3:样品编号05;
6.猴椅气溶胶进气管5:样品编号06;
7.供气静压腔:样品编号07;
8.头罩抽气高效过滤器后端:样品编号08;
9.采样高效过滤器后端:样本编号09;
10.总抽气高效过滤器后端:样品编号10;
11.负压安全柜左侧腔体下部:样品编号11;
12.负压安全柜腔体中心下部:样品编号12;
13.负压安全柜右侧腔体下部:样品编号13;
Bioquell L4型消毒机参数设置如下:
1.Conditioning Time:20min
2.Gassing Time:150min
3.Gassing Injection Rate:2.0g/min
4.Dwell Time:120min
5.Aeration Parametric:off
6.Aeration Time:120min
7.其他参数为系统默认设置。
消毒程序结束后,断开暴露系统主机电源(负压安全柜6扇门会自动开启),开启负压安全柜顶3个生物密闭阀。收集生物指示剂,将生物指示剂接种到培养基上,56℃培养2天后进行结果初判,培养7天后进行结果终判。同时设置阳性对照(未灭菌的生物指示剂)和阴性对照(培养基)。
结果判断:培养基保持紫色不变是阴性,培养基紫色变成黄色是阳性。生物指示剂培养结果如图5所示,结果表明对气溶胶暴露系统负压安全柜、气溶胶发生管路、总抽气高效过滤器所有布点位置嗜热脂肪芽孢杆菌全部杀灭。
实施例2、排风高效过滤器消毒效果验证
气溶胶暴露系统负压安全柜顶安装了三个排风高效过滤器,从左到右依次编号为左排风高效过滤器,中排风高效过滤器和右排风高效过滤器,三个排风高效过滤器的作用在于过滤除去负压安全柜内有毒病毒气溶胶。将气溶胶暴露系统主机接通电源,关闭负压安全柜6扇门和负压安全柜顶3个生物密闭阀,同时将负压安全柜底部的补风格栅板关闭。通过软管将汽化过氧化氢发生器(移动VHP)气体出口连接在暴露系统左排风高效过滤器消毒进口上,暴露系统负压安全柜消毒验证出口连接在VHP气体进口处,同时关闭负压安全柜消毒验证进口阀门,使过氧化氢气体流向为VHP-排风高效过滤器(反面)-排风高效过滤器(正面)-负压安全柜-VHP。左排风高效过滤器消毒程序完成后,关闭过氧化氢消毒器,从左排风高效过滤器消毒进口上取下软管,与中排风高效过滤器消毒进口连接,按左排风高效过滤器的消毒参数对中排风高效过滤器进行消毒,直到右排风高效过滤器消毒完成。在每个排风高效过滤器正反面布点,布点如图1和图3所示,布点编号如下:
14.左排风高效过滤器正面:样品编号14;
15.左排风高效过滤器反面:样品编号15;
16.中排风高效过滤器正面:样品编号16;
17.中排风高效过滤器反面:样品编号17;
18.右排风高效过滤器正面:样品编号18;
19.右排风高效过滤器反面:样品编号19;
Bioquell L4型消毒机参数设置如下:
1.Conditioning Time:15min
2.Gassing Time:20min
3.Gassing Injection Rate:1.5g/min
4.Aeration Parametric:off
5.Aeration Time:120min
6.其他参数为系统默认设置。
消毒时间结束后,断开暴露系统主机电源(负压安全柜6扇门会自动开启),开启负压安全柜顶3个生物密闭阀。收集化学指示剂和生物指示剂,将生物指示剂接种到培养基上,56℃培养2天后进行结果初判,培养7天后进行结果终判。同时设置阳性对照和阴性对照。
结果判断:培养基保持紫色不变是阴性,培养基紫色变成黄色是阳性。生物指示剂培养结果如图5所示,结果表明对气溶胶暴露系统排风高效过滤器所有布点位置嗜热脂肪芽孢杆菌全部杀灭。
实施例3、补风高效过滤器消毒效果验证
非人灵长类动物口鼻式气溶胶暴露系统在使用中,补风高效过滤器作用在于调节核心工作间的压差,使房间负压处于相对稳定的状态。将气溶胶暴露系统主机接通电源,任意开启负压安全柜一扇门,此时补风高效过滤器电动阀门会自动关闭。补风高效过滤器密封罩安装后,通过软管该高效过滤器的消毒入口与VHP的气体出口连接,密封罩上的出口与过氧化氢消毒器入口连接。通过循环对补风高效过滤器进行消毒,在补风高效过滤器正面布点,使过氧化氢气体流向为VHP-补风高效过滤器(反面)-排风高效过滤器(正面)-VHP。如图1和图4所示,布点编号如下:
20.补风高效过滤器正面1:样品编号20;
21.补风高效过滤器正面2:样品编号21;
Bioquell L4型消毒机参数设置同“排风高效过滤器消毒效果验证”参数设置。
消毒时间结束后,断开暴露系统主机电源(负压安全柜6扇门会自动开启),收集化学指示剂和生物指示剂,将生物指示剂接种到培养基上,56℃培养2天后进行结果初判,培养7天后进行结果终判。同时设置阳性对照和阴性对照。
结果判断:培养基保持紫色不变是阴性,培养基紫色变成黄色是阳性。生物指示剂培养结果如图5所示,结果表明对气溶胶暴露系统补风高效过滤器所有布点位置嗜热脂肪芽孢杆菌全部杀灭。
最后需要说明的是,以上实施例仅用于帮助本领域技术人员理解本发明的实质,不用于限定本发明的保护范围。
Claims (3)
1.一种非人灵长类动物口鼻式气溶胶暴露系统消毒及评价方法;
所述的消毒方法包含:
(1)暴露系统负压安全柜与气溶胶发生管路、总抽气高效过滤器同步消毒,具体为,
将气溶胶暴露系统主机接通电源,将总抽气高效过滤器气体出口处阀门调节至关闭状态,打开另一侧手动阀,使过氧化氢气体经过总抽气高效过滤器后能再次循环到负压安全柜内;
在负压安全柜内放置一鼓风机,利用软管及三通将头罩抽气高效过滤器、采样高效过滤器、总抽气高效过滤器连接在鼓风机气体进气端,通过另一根软管将供气静压腔气溶胶进气口连接在鼓风机气体出气端,打开预实验采样器盖子和动物椅头罩以及采样管路中阀门,使过氧化氢气体能充分经过上述各类管路;
关闭负压安全柜6扇门和负压安全柜顶3个生物密闭阀,同时将负压安全柜底部的补风格栅板关闭,通过2根软管将汽化过氧化氢发生器气体进出口连接在暴露系统消毒进出口上,使过氧化氢气体从柜体左侧出右侧进;
(2)补风高效过滤器、排风高效过滤器逐个单独消毒的步骤,具体为,
补风高效过滤器消毒:将气溶胶暴露系统主机接通电源,任意开启负压安全柜一扇门,此时补风高效电动阀门会自动关闭;
补风高效密封罩安装后,通过软管该高效过滤器的消毒入口与VHP的气体出口连接,密封罩上的出口与过氧化氢消毒器入口连接;
通过循环对补风高效过滤器进行消毒,在补风高效过滤器正面布点,使过氧化氢气体流向为VHP-补风高效过滤器的反面-排风高效过滤器的正面-VHP;
排风高效过滤器消毒:将气溶胶暴露系统主机接通电源,关闭负压安全柜6扇门和负压安全柜顶3个生物密闭阀,同时将负压安全柜底部的补风格栅板关闭;
通过软管将汽化过氧化氢发生器气体出口连接在暴露系统左排风高效过滤器消毒进口上,暴露系统负压安全柜消毒验证出口连接在VHP气体进口处,同时关闭负压安全柜消毒验证进口阀门,使过氧化氢气体流向为VHP-排风高效过滤器的反面-排风高效过滤器的正面-负压安全柜-VHP;
左排风高效过滤器消毒程序完成后,关闭过氧化氢消毒器,从左排风高效过滤器消毒进口上取下软管,与中排风高效过滤器消毒进口连接,按左排风高效过滤器的消毒参数对中排风高效过滤器进行消毒,直到右排风高效过滤器消毒完成;
所述的评价方法为:
对气溶胶暴露系统负压安全柜、气溶胶发生管路、排风高效过滤器、补风高效过滤器、总抽气高效过滤器的消毒效果评价;
采用嗜热脂肪芽孢杆菌生物指示剂法进行评价,所述的嗜热脂肪芽孢杆菌为ATCC7953菌株,使用浓度为菌种浓度:5×105~5×106cfu/片。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的过氧化氢为30%~35%的过氧化氢溶液,过氧化氢发生设备为Bioquell L4型过氧化氢发生器。
3.权利要求1或2所述的方法在评价疫苗或药物效果中的应用。
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