CN114015753A - 一种病毒保存液及用于存放该保存液的病毒保存管 - Google Patents

Abstract

本申请涉及病毒保存的领域，具体公开了一种病毒保存液及用于存放该保存液的病毒保存管。病毒保存液包括以下重量份数的组分：氯化钾390‑410份、磷酸二氢钾55‑60份、碳酸氢钠320‑330份、氯化钠7800‑8200份、十二水磷酸氢钠115‑125份、D‑葡萄糖900‑1200份、酚红8‑10份、牛血清白蛋白4‑8份、抗生素2‑3份。一种病毒保存管包括管体，所述管体的侧壁内沿管体周向开设有空腔，所述空腔内设有由相变材料组成的隔热缓冲剂，所述隔热缓冲剂在空腔内的填充体积小于空腔的体积。本申请具有提高病毒保存时间的优点。

Description

一种病毒保存液及用于存放该保存液的病毒保存管

技术领域

本申请涉及病毒保存的领域，更具体地说，它涉及一种病毒保存液及用于存放该保存液的病毒保存管。

背景技术

病毒由一种核酸分子与蛋白质构成或仅由蛋白质构成，个体微小、结构简单。由于没有细胞结构，病毒自身不能复制，而是将基因侵入宿主细胞内，借助后者的复制系统复制新的病毒。目前临床病毒病原学诊断的“金标准”为病毒分离培养法，其检验结果的灵敏度及特异性直接决定临床诊断的有效性，进一步提供及时有效更科学的用药治疗。因此及时有效的临床检验结果在防控工作中意义非常重大。

在检测的过程中，需要采集病原核酸样本，主要的样本类型是鼻咽拭子，常用的拭子样本采样保存液为病毒转运培养基。拭子标本的采集、运送、保存是核酸检验前质量控制的重要部分。

针对上述中的相关技术，发明人认为病毒样品在较长时间的运输过程中，其在在运送实验室的途中就容易失活，这是目前分离诊断中最主要的困难。

发明内容

为了延长对病毒样品的保存时间，本申请提供一种病毒保存液及用于存放该保存液的病毒保存管。

第一方面，本申请提供病毒保存液，采用如下的技术方案：

一种病毒保存液，包括以下重量份数的组分：氯化钾390-410份、磷酸二氢钾55-60份、碳酸氢钠320-330份、氯化钠7800-8200份、十二水磷酸氢钠115-125份、D-葡萄糖900-1200份、酚红8-10份、牛血清白蛋白4-8份、抗生素2-3份。

通过采用上述技术方案，氯化钾、磷酸二氢钾、碳酸氢钠、氯化钠、十二水磷酸氢钠、D-葡萄糖和酚红组成Hank’s基础培养液，Hank’s基础培养液具有稳定盐平衡的作用，控制体系中的pH为中性，可以为样本采样提供较为稳定的保存环境，有利于延长病毒的生存时间和维持病毒的感染能力。牛血清白蛋白具有冷冻血清白蛋白可以在病毒的蛋白质外壳形成保护膜，使其不易被降解，保持病毒颗粒的完整性。抗生素可以抑制样品中的细菌真菌生长，降低样本被污染的可能，从而提高病毒的生存能力。

可选地，所述病毒保存液中还添加有6-10重量份的4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸。

通过采用上述技术方案，4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸是一种氢离子缓冲剂，可以在较长时间控制恒定的pH范围，能在较长的时间和温度范围内维持病毒的活性，降低病毒分解速度。

第二方面，本申请提供一种病毒保存管，采用如下的技术方案：

一种病毒保存管，包括管体，所述管体的侧壁内沿管体周向开设有空腔，所述空腔内设有由相变材料组成的隔热缓冲剂，所述隔热缓冲剂在空腔内的填充体积小于空腔的体积。

通过采用上述技术方案，病毒保存管的内壁中的隔热缓冲剂增加了病毒保存管内部与外部之间的传热阻力，当外部的环境温度较高时，热量从病毒保存管的外壁先传递到隔热缓冲剂中，待隔热缓冲剂失效后，热量继续向内传入病毒保存管内部，再对病毒保存液进行热量传递。因此，病毒保存管可以缓冲热量的传递过程，从而避免病毒保存管在意外或不可避免受到环境中较高温度的影响时，可以维持病毒保存管内部的温度依旧处于低温状态，从而提高病毒样品的存活时间。

控制隔热缓冲剂在空腔内的填充体积小于空腔的体积可以避免病毒保存管的外壁由于隔热缓冲剂的相变而发生鼓胀现象。

可选地，所述空腔由多个容纳腔组成，多个所述容纳腔沿所述管体的周向间隔等距设置，所述容纳腔内设置有用于将容纳腔分隔成第一容腔和第二容腔的弹性隔板，每个所述第一容腔内均填充有隔热缓冲剂，所述隔热缓冲剂为相变材料。

通过采用上述技术方案，第一容腔内的隔热缓冲剂通过相变转化吸收病毒保存管外部的热量，而隔热缓冲剂在相变的过程中会产生密度体积的变化，第二容腔和弹性隔板可以在隔热缓冲剂发生体积变化时提供缓冲空间，从而避免病毒保存管的外壁由于隔热缓冲剂的相变而发生鼓胀现象。

沿病毒保存管设置多个第一容腔进行填充隔热缓冲剂，使得病毒保存管的重心不会由于隔热缓冲剂的分布不均匀而发生偏移，从而提高病毒保存管在放置时的稳定性。

可选地，所述隔热缓冲剂包括以下重量份数的组分：十水硫酸钠70-80份、硼砂2-4份、增稠剂1-3份、氯化铵14-18份、氯化钾2-3份、去离子水0.2-1份。

通过采用上述技术方案，十水硫酸钠在发生相变的过程中可以吸收热量，且十水硫酸钠性质稳定，可以多次循环使用。硼砂为成核剂，可以基本消除十水硫酸钠的过冷度，提高成核率，同时可以提高体系的稳定性，以及降低体系的相变温度。增稠剂也可以提高十水硫酸钠的稳定性，因为熔化后的十水硫酸钠存在比较严重的相分离现象，而增稠剂可以提高溶液的黏性，使得液体中的固体颗粒能较均匀地分布在溶液的各处而不沉积在底部，基本消除晶液分离。氯化铵和氯化钾可以降低十水硫酸钠的熔点，从而降低体系的相变温度。

可选地，所述增稠剂选自聚丙烯酸钠、聚丙烯酰胺、海藻酸钠中的一种或多种。

通过采用上述技术方案，聚丙烯酸钠、聚丙烯酰胺和海藻酸钠均可以增加隔热缓冲剂体系的黏度，从而使得液体中的固体颗粒能较均匀地分布在溶液的各处而不沉积在底部。

可选地，所述第二容腔内填充有经过预处理液浸渍处理后的海绵块，所述浸渍液包括以下重量份数的组分：甲酸钠20-30份、去离子水60-80份。

通过采用上述技术方案，海绵块具有一定的弹性，填充在第二容腔内可以对弹性隔板起到更好的支撑作用，避免弹性隔板由于多次形变而失效。甲酸钠水溶液在发生相变时的温度为零下10℃-15℃，浸渍后的海绵块可以通过浸渍液的相变过程来提高病毒保存管在更低温度下的隔热保温能力，使得病毒保存管内部可以维持更低的温度，提高对病毒样本的保存能力，延长病毒的存活时间。

可选地，所述管体的外侧壁上涂覆有一层隔热层，所述隔热层包括以下重量份数的组分：水性丙烯酸树脂60-80份、聚氨酯20-30份、纳米氧化锡锑浆料3-9份、流平剂0.3-0.5份、消泡剂0.5-1份。

通过采用上述技术方案，隔热层具有较低的热传导率，且通过纳米氧化锡锑的作用可以屏蔽部分热量的辐射，从而降低进入病毒保存管中的热量，从而使得病毒保存管中的病毒样本可以维持在较低的温度下，提高病毒的存活时间。

综上所述，本申请具有以下有益效果：

1、本申请复配得到的病毒保存液，通过整体复配后的协同效果可以更加稳定长效地保存病毒样本。

2、本申请采用具有隔热缓冲能力的病毒保存管，使得病毒保存液不易受到外界环境温度的影响，提高病毒样本的保存时间。

3、本申请采用在病毒保存管的外壁上设置隔热层，从而提高病毒保存管的对于病毒样本的保存时间。

附图说明

图1是本申请实施例1中病毒保存管的剖视图。

附图说明：1、管体；2、空腔；3、容纳腔；31、第一容腔；32、第二容腔；4、海绵块；5、隔热缓冲剂；6、弹性隔板。

具体实施方式

以下结合附图1和实施例对本申请作进一步详细说明。

制备例

制备例1-制备例3

隔热缓冲剂5通过以下制备方法制备得到：

按表1中的各原料组分配比将原料进行搅拌混合，搅拌速率控制为100r/min，搅拌时间控制为1h。搅拌完成后即可得到隔热缓冲剂5。

表1隔热缓冲剂原料组分(kg)

实施例	十水硫酸钠	硼砂	增稠剂	氯化铵	氯化钾	去离子水
							制备例1	70	2	1	14	2	0.2
制备例2	75	3	2	16	2.5	0.6
							制备例3	80	4	3	18	3	1

其中，制备例1-3中增稠剂均采用聚丙烯酸钠。

制备例4

制备例4与制备例1的区别在于，增稠剂采用聚丙烯酰胺。

制备例5

制备例5与制备例1的区别在于，增稠剂采用海藻酸钠。

制备例6

制备例6与制备例1的区别在于，增稠剂采用质量比为1∶1的聚丙烯酸钠和聚丙烯酰胺的混合物。

实施例

实施例1-6

一种病毒保存液，通过以下制备方法制备得到：

按表2中的各原料的重量配比将原料进行混合，混合时的搅拌速率为200r/min，搅拌时间为1h。搅拌完成后将混合液进行除菌过滤，过滤2次，即可得到病毒保存液。

表2病毒保存液原料组分(kg)

一种病毒保存管，用于储存上述病毒保存液。病毒保存管包括管体1，管体1的侧壁内沿管体1周向间隔等距开设有多个容纳腔3。多个容纳腔3共同组成空腔2。

每个容纳腔3内均固定连接有一块弹性隔板6，弹性隔板6将容纳腔3分隔成第一容腔31和第二容腔32。第一容腔31内填充有用于阻碍热传递的隔热缓冲剂5。第二容腔32内填充有海绵块4。

隔热缓冲剂5采用制备例1中制备得到的隔热缓冲剂5。

实施例7-11与实施例1的区别在于，隔热缓冲剂5不同。

实施例7中的隔热缓冲剂5采用制备例2中制备得到的隔热缓冲剂5。

实施例8中的隔热缓冲剂5采用制备例3中制备得到的隔热缓冲剂5。

实施例9中的隔热缓冲剂5采用制备例4中制备得到的隔热缓冲剂5。

实施例10中的隔热缓冲剂5采用制备例5中制备得到的隔热缓冲剂5。

实施例11中的隔热缓冲剂5采用制备例6中制备得到的隔热缓冲剂5。

实施例12

实施例12与实施例1的区别在于第二容腔32中的海绵经过预处理液预处理，预处理液由20kg的甲酸钠和80kg的去离子水搅拌混合得到。预处理步骤为：将海绵浸入预处理液中，在30℃下静止浸渍1h，然后将海绵取出即可。

实施例13-15

实施例13-15与实施例12的区别在于，预处理液中各组分含量不同，如表3所示。

表3预处理液中各组分含量(kg)

实施例	甲酸钠	去离子水
			实施例13	25	75
实施例14	30	60
			实施例15	30	80

实施例16-18

实施例16-18与实施例1的区别在于病毒保护管的外侧壁上涂覆有一层隔热层。

隔热层的制备方法如下：先按照表4中的原料配比将水性丙烯酸树脂与聚氨酯树脂搅拌混合均匀，搅拌速度为500r/min，搅拌时间为0.5h，然后继续搅拌同时加入纳米氧化锡锑浆料，搅拌1h；最后加入流平剂和消泡剂，继续搅拌1h即可得到隔热涂料。将隔热涂料涂到病毒保存管的外表面，然后在80℃下烘干20min，烘干后即可得到隔热层。

表4隔热层原料组分(kg)

实施例19

实施例19与实施例1的区别在于，第二容腔32内的海绵块4经过预处理。预处理液由20kg的甲酸钠和80kg的去离子水搅拌混合得到。预处理步骤为：将海绵浸入预处理液中，在30℃下静止浸渍1h，然后将海绵取出即可。

病毒保护管的外侧壁上涂覆有一层隔热层。隔热层的制备方法如下：先将60kg水性丙烯酸树脂与20kg聚氨酯树脂搅拌混合均匀，搅拌速度为500r/min，搅拌时间为0.5h，然后继续搅拌同时加入3kg纳米氧化锡锑浆料，搅拌1h；最后加入0.3kg流平剂和0.5kg消泡剂，继续搅拌1h即可得到隔热涂料。将隔热涂料涂到病毒保存管的外表面，然后在80℃下烘干20min，烘干后即可得到隔热层。

对比例

对比例1

对比例1与实施例1的区别在于病毒保存液中未添加牛血清白蛋白。

对比例2

对比例2与实施例1的区别在于病毒保存液中未添加抗生素。

对比例3

对比例3与实施例1的区别在于病毒保存管采用市售的病毒保存管。

对比例4

对比例4与实施例1的区别在于病毒保存液采用青岛高科技工业园海博生物技术有限公司生产的VTM运送培养基。

性能检测试验

检测方法/试验方法

在实施例1-19和对比例1-4的病毒培养液中加入EV71(肠道病毒EV71型)，测试以上病毒在4℃和室温条件下的保存效果，测试保存前和保存3、5、7天后的病毒滴度，结果如表5所示。

在实施例1-19和对比例1-4的病毒培养液中加入EV71(肠道病毒EV71型)，依次在4℃下保存22h，室温下保存2h，循环3天、5天、7天后，测试保存前和保存3、5、7天后的病毒滴度，结果如表6所示。

表5不同病毒保存管和病毒保存液对EV71病毒的保存效果

表6不同病毒保存管和病毒保存液对EV71病毒的保存效果

结论：由表5中实施例1-6与对比例1、2、4的数据对比可知，本申请中采用的病毒保存液对于病毒的保存效果优于市售的病毒保存液，而且其中牛血清白蛋白、抗生素和4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸对于病毒样本的保存效果具有较明显的影响，添加牛血清白蛋白、抗生素和4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸后，病毒的保存效果更好。

由表6中实施例1-11、实施例12-15、实施例16-19与对比例1-4的数据对比可知，本申请中采用的病毒保存管具有较好的维持温度稳定的效果，可以使得病毒保存管内的病毒保存液的温度不易受到外界环境的影响。而且实施例12-15中海绵块经过预处理后在填充到第二容腔内，可以使得病毒保存管的温度稳定效果更好，更加不易受到外界环境的影响。实施例16-19则显示隔热层的设置也可以使得病毒保存管的温度稳定效果更好，更加不易受到外界环境的影响。

本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims (8)

1.一种病毒保存液，其特征在于，包括以下重量份数的组分：氯化钾390-410份、磷酸二氢钾55-60份、碳酸氢钠320-330份、氯化钠7800-8200份、十二水磷酸氢钠115-125份、D-葡萄糖900-1200份、酚红8-10份、牛血清白蛋白4-8份、抗生素2-3份。

2.根据权利要求1所述的一种病毒保存液，其特征在于：所述病毒保存液中还添加有6-10重量份的4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸。

3.一种用于存放权利要求1-2所述病毒保存液的病毒保存管，其特征在于，包括管体(1)，所述管体(1)的侧壁内沿管体(1)周向开设有空腔(2)，所述空腔(2)内设有由相变材料组成的隔热缓冲剂(5)，所述隔热缓冲剂(5)在空腔(2)内的填充体积小于空腔(2)的体积。

4.根据权利要求3所述的一种用于存放病毒保存液的病毒保存管，其特征在于：所述空腔(2)由多个容纳腔(3)组成，多个所述容纳腔(3)沿所述管体(1)的周向间隔等距设置，所述容纳腔(3)内设置有用于将容纳腔(3)分隔成第一容腔(31)和第二容腔(32)的弹性隔板(6)，每个所述第一容腔(31)内均填充有隔热缓冲剂(5)，所述隔热缓冲剂(5)为相变材料。

5.根据权利要求4所述的一种用于存放病毒保存液的一种病毒保存管，其特征在于：所述隔热缓冲剂(5)包括以下重量份数的组分：十水硫酸钠70-80份、硼砂2-4份、增稠剂1-3份、氯化铵14-18份、氯化钾2-3份、去离子水0.2-1份。

6.根据权利要求5所述的一种用于存放病毒保存液的一种病毒保存管，其特征在于，所述增稠剂选自聚丙烯酸钠、聚丙烯酰胺、海藻酸钠中的一种或多种。

7.根据权利要求4所述的一种用于存放病毒保存液的一种病毒保存管，其特征在于，所述第二容腔(32)内填充有经过预处理液浸渍处理后的海绵块(4)，所述浸渍液包括以下重量份数的组分：甲酸钠20-30份、去离子水60-80份。

8.根据权利要求4所述的一种用于存放病毒保存液的一种病毒保存管，其特征在于，所述管体(1)的外侧壁上涂覆有一层隔热层，所述隔热层包括以下重量份数的组分：水性丙烯酸树脂60-80份、聚氨酯20-30份、纳米氧化锡锑浆料3-9份、流平剂0.3-0.5份、消泡剂0.5-1份。

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