CN113975224A - 一种用于表皮脱敏治疗的离子液体-反相胶束载药递释系统及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种用于表皮脱敏治疗的离子液体‑反相胶束载药递释系统及其制备。所述离子液体‑反胶束载药递释系统由胆碱类化合物和有机羧酸制备得到的离子液体、包裹蛋白过敏原的反相胶束均制而得。本发明制备的离子液体‑反相胶束载药递释系统通过离子液体扰乱角质层结构，促进脂质流化，增强反相胶束的透皮效率；通过反相胶束提高蛋白过敏原的皮肤亲和性，提高蛋白稳定性并控制释放。本发明制备的离子液体‑反相胶束载药递释系统，合成工艺简便、透皮效率高、易于皮肤局部给药，安全性良好，适用于临床脱敏治疗需求。

Description

一种用于表皮脱敏治疗的离子液体-反相胶束载药递释系统 及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种用于表皮脱敏治疗的离子液体-反相胶束载药递释系统及其制备方法和应用。
背景技术
过敏被定义为当暴露于周围抗原时在体内发生获得性免疫应答，并且在反复暴露于抗原期间免疫应答因为对抗原的记忆而改变的病症。临床上，常使用抗组胺药物、过敏反应介质阻释药、组胺脱敏药、白三烯受体拮抗剂等药物治疗过敏症的发作，但无法治愈。
免疫治疗被认为是治愈过敏症的唯一方法，通过使用诱导获得性免疫应答的策略来诱导防御性免疫，该获得性免疫应答具有诱导抗原特异性长期防御记忆的能力，使得机体达到对特定过敏原的长期脱敏。针对过敏性鼻炎、过敏性支气管哮喘、过敏性结膜炎或昆虫叮咬过敏反应症状等过敏性疾病，免疫治疗业已成为改变疾病自然病程的重要手段。临床应用的过敏原免疫治疗一般使用皮下注射少量过敏原提取物的形式，具有一定的安全风险，并且需要长期来往医院，给患者造成了严重的负担。由此，表皮免疫治疗应运而生，成了改善疗法安全性、提高患者依从性的新手段。
表皮免疫治疗是一种目前正在研究中的新型免疫疗法，通过反复应用于皮肤来递送过敏原，并靶向浅表皮肤层中的抗原呈递细胞，皮肤抗原呈递细胞的主动摄取过敏原，随后迁移到引流淋巴结进行呈递并诱导调节性T细胞的增殖。由于过敏原应用于表皮而限制了过敏原的全身吸收，该疗法有助于提高免疫治疗的安全性。动物实验结果表明，表皮免疫疗法在挑战结果、气道高反应性和免疫参数方面具有与作为免疫疗法金标准的皮下免疫疗法相当的功效。即使具备上述优势，较大的过敏原剂量仍是该疗法的隐忧，如何更高效率递送过敏原进入表皮，开发一种高渗透性、低毒又成本低廉、使用体感佳的药物递释系统成为科学界亟待解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于克服现有表皮免疫疗法中过敏原跨皮肤屏障的不足，提供一种用于表皮免疫治疗过敏性疾病的离子液体-反相胶束载药递释系统及其制备方法和应用。
具体的，本发明采用以下技术方案：
本发明的第一个目的是提供一种用于表皮脱敏治疗的离子液体-反相胶束载药递释系统的制备方法，所述方法包括以下步骤：
步骤1，将含蛋白过敏原溶液和含有表面活性剂的有机溶剂溶液制备成W/O型乳液并冷冻干燥，获得冻干产物；向冻干产物中加入油相，超声分散，得到含蛋白过敏原的反相胶束；
步骤2，将有机羧酸的甲醇溶液滴加入胆碱类化合物的水溶液中，进行反应，反应液经减压旋蒸后真空干燥除去残留溶剂，得到离子液体；
步骤3，将步骤1得到的含蛋白过敏原的反相胶束与步骤2得到的离子液体混合，混合温度为20～30℃，混合时间为5～15min，制备得到所述离子液体-反相胶束载药递释系统；
优选的，混合温度为25℃；
优选的，混合时间为5～10min。
进一步的，步骤1所述蛋白过敏原选自β-乳球蛋白、α-酪蛋白、卵清蛋白、卵类黏蛋白、卵转铁蛋白、大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白中的一种或多种；所述蛋白过敏原溶液的溶剂选自水、生理盐水、缓冲溶液、组织培养液或体液，优选为水；所述蛋白过敏原溶液中蛋白过敏原的浓度为0.5～2mg/mL，优选为0.5～1mg/mL。
进一步的，步骤1所述表面活性剂选自甘油脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯甘油脂肪酸酯、山梨糖醇酐脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯蓖麻子油和硬化蓖麻子油中的一种或几种；所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、正己烷、环己烷、二氯甲烷、三氯甲烷中的一种或多种，优选为环己烷；所述含有表面活性剂的有机溶剂溶液中表面活性剂浓度为10～20mg/mL，优选为10～15mg/mL。
优选的，步骤1所述含蛋白过敏原溶液和含有表面活性剂的有机溶剂溶液的体积比为1:1～1:5，
进一步优选的，步骤1所述含蛋白过敏原溶液和含有表面活性剂的有机溶剂溶液的体积比为1:1～1:3，更进一步优选的，步骤1所述含蛋白过敏原溶液和含有表面活性剂的有机溶剂溶液的体积比1:2；
进一步的，W/O型乳液的制备条件为使用高速分散器高速分散成乳，分散速度5000～15000rpm，优选8000～12000rpm；分散时间1～5min，优选1～3min。
进一步的，步骤1所述油相选自辛基十二醇肉豆蔻酸酯、肉豆蔻酸十六烷基酯、油酸乙酯、油酸癸酯、亚油酸乙酯、亚油酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯和棕榈酸异丙酯中的一种或几种；所述冻干产物与油相的质量比为1:10～1:30，优选为1:12～1:29。
进一步的，步骤1所述含蛋白过敏原的反相胶束平均粒径为100～500nm。
进一步的，步骤2所述有机羧酸为饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸或α-羟基酸，优选的，所述有机羧酸是癸酸、月桂酸、豆蔻酸、软脂酸、硬脂酸、亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸、油酸、乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、杏仁酸中的一种或多种；所述机羧酸的甲醇溶液中有机羧酸的浓度为0.1～1g/mL，优选为0.2～1g/mL，进一步优选的，0.2～0.7g/mL。
进一步的，步骤2所述胆碱类化合物是胆碱、氯化胆碱、乙酰胆碱、磷酰胆碱、丁酰胆碱、氢氧化胆碱中的一种或多种；所述胆碱类化合物的水溶液中胆碱类化合物的浓度为0.1～1g/mL，优选为0.1～0.5g/mL。
优选的，步骤2所述有机羧酸的甲醇溶液与胆碱类化合物的水溶液的体积比为5:1～1:2，
进一步优选的，步骤2所述有机羧酸的甲醇溶液与胆碱类化合物的水溶液的体积比为3:1～1:2；
进一步的，步骤3含蛋白过敏原的反相胶束和离子液体的混合体系中，反相胶束的质量百分比不超过35％，且反相胶束的质量百分比不为0。
本发明的第二个目的是提供前述制备方法制备得到的离子液体-反相胶束载药递释系统，所述载药递释系统包括离子液体、蛋白过敏原和反向胶束，所述反向胶束包裹蛋白过敏原。
本发明的第三个目的是提供前述离子液体-反相胶束载药递释系统在制备表皮脱敏治疗药物中的应用；
所述药物通过表皮途径向过敏性疾病患者反复地给药一种或多种蛋白过敏原，所述一种或多种蛋白在施加到皮肤之后渗透入表皮，然后通过表皮途径投送到抗原呈递细胞，所述给药在反复进行之后，导致过敏症患者对该蛋白过敏原耐受性逐步增加。
与现有技术相比，本发明的积极和有益效果在于：
(1)本发明提供了一种全新的用于表皮脱敏治疗的离子液体-反相胶束载药递释系统及其制备和应用，该离子液体-反相胶束载药递释系统组分简单，合成工艺简便、易于皮肤局部给药，原材料廉价易得、易于制备及大批量生产。
(2)本发明制备了以胆碱和有机羧酸为组分的离子液体，显著提高离子液体的安全性，并保留了促渗性能；同时由于其较大的黏度，适宜作为透皮制剂的基质。
(3)本发明提供的反相胶束结构与角质层亲和力强，适宜与角质层脂质相互作用而进入角质层内；离子液体则发挥扰乱角质层结构，促进脂质流化的功能，增强反相胶束的透皮效率。二者结合促进蛋白过敏原在皮内的穿透与蓄积，发挥生物功能。
(4)与市售PLO透皮凝胶基质相比，本发明制备的离子液体-反相胶束载药递释系统透皮具有更高的透皮效率与更好的涂展性。
本发明所述反相胶束可有效包封亲水性生物药物，形成均一、稳定的球形纳米微粒，改善其皮肤渗透能力；离子液体与该反相胶束均匀混合，促进反相胶束纳米微粒的渗透，并使液态的反相胶束分散液制剂化为凝胶，方便皮肤给药，发挥生物功能。离子液体-反相胶束载药递释系统制备工艺简单易行，合成原料廉价易得，使用简便，剂量固定，具有较小的刺激性与细胞毒性，在生物学、医学研究领域和临床治疗上具有广阔的应用前景。
本发明中，所谓反相胶束，是指分散于连续有机相中的表面活性剂自发形成具有纳米尺度的团聚体，表面活性剂疏水端向外，与非极性的有机溶剂接触，而极性基团则排列在内形成一个极性核，其中可包封亲水性药物。亲水性生物药物即蛋白过敏原可由表面活性剂包封为疏水层向外的胶束，提高其与角质层脂质的亲和力，促进包封药物的跨角质层转运能力。
附图说明
图1为实施例22中离子液体[胆碱][油酸]的1H-NMR核磁共振图谱；
图2为实施例26中离子液体在不同IPM添加量下持油性变化图；
图3为实施例28中含不同量反相胶束制剂的FAM-OVA释放曲线；
图4为实施例29中各制剂中FAM-OVA在48h内的单位面积累计透过量曲线；
图5为实施例29中各制剂中FAM-OVA在48h内的累计透过率曲线；
图6为实施例29中各制剂中FAM-OVA在48h时的单位面积累计透过量；
图7为实施例29中各制剂中FAM-OVA在48h时的累计透过率；
具体实施方式
本发明提供一些具体实施例，但本发明不受这些实施例的限制，以下实施例仅用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，在不脱离本发明原理的前提下，对本发明进行的若干修饰或改进也落入本发明权利的保护范围内。对所公开实施例的下述说明，可使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。
本发明所述“IPM”是指：肉豆蔻酸异丙酯
本发明所述“IPP”是指：棕榈酸异丙酯
本发明所述“IPL”是指：亚油酸异丙酯
本发明所述“ODM”是指：辛基十二醇肉豆蔻酸酯
本发明所述“EO”是指：油酸乙酯
本发明所述“DO”是指：油酸癸酯
本发明所述“FAM”是指：FAM荧光染料
本发明所述“OVA”是指：卵清蛋白
本发明所述“FAM-OVA”是指：FAM标记的卵清蛋白
本发明所述“β-LG”是指：β-乳球蛋白
本发明所述“α-CN”是指：α-酪蛋白
本发明所述“OVM”是指：卵类黏蛋白
本发明所述“OTF”是指：卵转铁蛋白
本发明所述“GL”是指：大豆球蛋白
本发明所述“β-CG”是指：β-伴大豆球蛋白
本发明所述“PLO”是指：卵磷脂普朗尼克
一、OVA反相胶束的制备
本实施例蛋白过敏原为卵清蛋白(OVA)，蛋白过敏原溶液的溶剂为水，表面活性剂为蔗糖脂肪酸酯，有机溶剂为环己烷，油相为肉豆蔻酸异丙酯，处方如表1所示。
反相胶束制备方法为：
(1)将含蛋白过敏原溶液和含有表面活性剂的有机溶剂溶液制备成W/O型乳液并冷冻干燥，获得冻干产物：
精密量取处方量蔗糖脂肪酸酯，将其投入环己烷中并溶解而制备出有机相，即含有表面活性剂的有机溶剂溶液；
将处方量水溶性蛋白过敏原卵清蛋白(OVA)添加到水性溶剂中溶解而制备出水相，即含蛋白过敏原溶液。
通过对所制备的油相和水相进行高速搅拌，制造出W/O乳剂。W/O型乳液的制备条件为使用高速分散器高速分散成乳，分散速度12000rpm，分散时间2min。
在W/O乳剂制备后，使用液氮将W/O乳液急速冷冻，通过将该乳剂冷冻干燥24h，制备表面活性剂-OVA复合体，即冻干产物。
(2)向冻干产物中加入油相，超声分散，得到含蛋白过敏原的反相胶束：
向冻干产物中加入1mL的肉豆蔻酸异丙酯(IPM)864.11mg，使用细胞破碎仪超声使其分散，得到本发明的反相胶束。
表1反相胶束的制备处方
Figure BDA0003331026280000061
2、反相胶束的粒径测定
采用激光粒度仪测定各实施例的纳米粒的平均粒径，含蛋白过敏原的反相胶束粒径结果如下表所示。
表2不同处方制备的OVA反相胶束粒径结果(mean±SD,n＝3)
Figure BDA0003331026280000071
3、反相胶束的蛋白负载率测定
取实施例1～9中步骤(1)制备得到的表面活性剂-OVA复合体，即冻干产物，向该冻干产物中加入4mL水，加入磁子，以1000rpm速度搅拌2min，12000rpm离心20min，取上清，通过BCA试剂盒检测水中OVA含量，按公式计算得各样品的蛋白负载率。各实施例制备的反相胶束蛋白负载率结果汇总在表3中。
Figure BDA0003331026280000072
表3不同处方制备的OVA反相胶束蛋白负载率结果
Figure BDA0003331026280000073
通过正交实验，以较大的蛋白负载率和较小的粒径为标准，反相胶束的处方为1mgOVA投药量，45mg蔗糖酸酯投料量，水相(即含蛋白过敏原溶液)：有机相(即含有表面活性剂的有机溶剂溶液)体积比为1:2。
二、反相胶束的制备
本实施例蛋白过敏原为卵清蛋白(OVA)、β-乳球蛋白(β-LG)、α-酪蛋白(α-CN)、卵类黏蛋白(OVM)、卵转铁蛋白(OTF)、大豆球蛋白(GL)、β-伴大豆球蛋白(β-CG)，蛋白过敏原溶液的溶剂为水或磷酸盐缓冲液(PBS,0.01M,pH 7.4)，表面活性剂为甘油脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯甘油脂肪酸酯、山梨糖醇酐脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯蓖麻子油和硬化蓖麻子油，有机溶剂为环己烷、二氯甲烷、三氯甲烷、甲醇、乙醇、正己烷，油相为肉豆蔻酸异丙酯(IPM)、棕榈酸异丙酯(IPP)、亚油酸异丙酯(IPL)、辛基十二醇肉豆蔻酸酯(ODM)、油酸乙酯(EO)、油酸癸酯(DO)，处方如表4所示。
反相胶束制备方法为：
(1)将含蛋白过敏原溶液和含有表面活性剂的有机溶剂溶液制备成W/O型乳液并冷冻干燥，获得冻干产物：
精密量取45mg表面活性剂，将其投入环己烷等有机溶剂中并溶解而制备出有机相，即含有表面活性剂的有机溶剂溶液；将1mg不同水溶性蛋白过敏原添加到水性溶剂中溶解而制备出水相，即含不同蛋白过敏原溶液。以水相：有机相相体积比为1:2对所制备的油相和水相进行高速搅拌，制造出W/O乳剂。W/O型乳液的制备条件为使用高速分散器高速分散成乳，分散速度12000rpm，分散时间2min。
在W/O乳剂制备后，使用液氮将W/O乳液急速冷冻，通过将该乳剂冷冻干燥24h，制备表面活性剂-OVA复合体，即冻干产物。
(2)向冻干产物中加入油相，超声分散，得到含蛋白过敏原的反相胶束：
向该复合体中加入1mL的油相，使用细胞破碎仪超声使其分散，得到本发明的反相胶束。
表4反相胶束的制备处方
Figure BDA0003331026280000081
Figure BDA0003331026280000091
2、反相胶束的粒径测定
采用激光粒度仪测定实施例10的纳米粒的平均粒径，含蛋白过敏原的反相胶束粒径为265.8±5.110。
3、反相胶束的蛋白负载率测定
取实施例10中步骤(1)制备得到的表面活性剂-OVA复合体，即冻干产物，向该冻干产物中加入4mL水，加入磁子，以1000rpm速度搅拌2min，12000rpm离心20min，取上清，通过BCA试剂盒检测水中OVA含量，按公式计算得各样品的蛋白负载率。
Figure BDA0003331026280000101
实验结果表明，反相胶束的蛋白负载率为89.43％。
实施例22：离子液体[胆碱][油酸]的合成
离子液体的制备方法为：
将有机羧酸的甲醇溶液滴加入胆碱类化合物的水溶液中，进行反应，反应液经减压旋蒸后真空干燥除去残留溶剂，得到离子液体；
本实施例有机羧酸为油酸。称量13.21g油酸，加入20mL甲醇使油酸溶解完全，油酸的甲醇溶液中油酸的浓度为0.66g/mL，所述油酸的甲醇溶液总体积为34.1mL。
本实施例胆碱类化合物为氢氧化胆碱。在50mL烧瓶底加入12mL 0.44g/mL氢氧化胆碱水溶液，向该氢氧化胆碱溶液中逐滴加入油酸甲醇溶液，使有机羧酸的甲醇溶液(34.1ml)与胆碱类化合物的水溶液的体积比为2.8:1；室温搅拌下反应12h，反应完毕后旋蒸除甲醇得粘稠液体或半固体，随后冻干除水得淡黄色粘稠产物。产率为91％。离子液体[胆碱][油酸]的1H-NMR核磁共振图谱见图1。
实施例23：离子液体[胆碱][月桂酸]的合成
离子液体的制备方法为：
将有机羧酸的甲醇溶液滴加入胆碱类化合物的水溶液中，进行反应，反应液经减压旋蒸后真空干燥除去残留溶剂，得到离子液体；
本实施例有机羧酸为月桂酸。称量8.73g月桂酸，加入20mL甲醇使月桂酸溶解完全，月桂酸的甲醇溶液中月桂酸的浓度为0.44g/mL，所述月桂酸的甲醇溶液总体积为20.0mL。
本实施例胆碱类化合物为氢氧化胆碱。在50mL烧瓶底加入12mL 0.44g/mL氢氧化胆碱水溶液，向该氢氧化胆碱溶液中逐滴加入月桂酸甲醇溶液，使有机羧酸的甲醇溶液(20.0ml)与胆碱类化合物的水溶液的体积比为5:3；室温搅拌下反应12h，反应完毕后旋蒸除甲醇得粘稠液体或半固体，随后冻干除水得淡黄色粘稠产物。产率为95％。
实施例24：离子液体[胆碱][乳酸]的合成
离子液体的制备方法为：
将有机羧酸的甲醇溶液滴加入胆碱类化合物的水溶液中，进行反应，反应液经减压旋蒸后真空干燥除去残留溶剂，得到离子液体；
本实施例有机羧酸为乳酸。称量3.92g乳酸，加入10mL甲醇使乳酸溶解完全，乳酸的甲醇溶液中乳酸的浓度为0.39g/mL，所述乳酸的甲醇溶液总体积为13.2mL。
本实施例胆碱类化合物为氢氧化胆碱。在50mL烧瓶底加入12mL 0.44g/mL氢氧化胆碱水溶液，向该氢氧化胆碱溶液中逐滴加入乳酸甲醇溶液，使有机羧酸的甲醇溶液(13.2ml)与胆碱类化合物的水溶液的体积比为1.1:1；室温搅拌下反应12h，反应完毕后旋蒸除甲醇得粘稠液体，随后冻干除水得黄色粘稠产物。产率为92％。
实施例25：离子液体[胆碱][苹果酸]的合成
离子液体的制备方法为：
将有机羧酸的甲醇溶液滴加入胆碱类化合物的水溶液中，进行反应，反应液经减压旋蒸后真空干燥除去残留溶剂，得到离子液体；
本实施例有机羧酸为苹果酸。称量2.91g苹果酸，加入10mL甲醇使苹果酸溶解完全，苹果酸的甲醇溶液中苹果酸的浓度为0.29g/mL，所述苹果酸的甲醇溶液总体积为10.0mL。
本实施例胆碱类化合物为氢氧化胆碱。在50mL烧瓶底加入12mL 0.44g/mL氢氧化胆碱水溶液，向该氢氧化胆碱溶液中逐滴加入苹果酸甲醇溶液，使有机羧酸的甲醇溶液(10.0ml)与胆碱类化合物的水溶液的体积比为5:6；室温搅拌下反应12h，反应完毕后旋蒸除甲醇得粘稠液体，随后冻干除水得黄色粘稠产物。产率为91％。
实施例26：离子液体与反相胶束的配比筛选
离子液体具有较大的黏度，结构中油酸长碳链具有较好的亲油性能，反相胶束为油性液体，为筛选离子液体与反相胶束的配比，本实施例将一定量的离子液体中加入不同量的肉豆蔻酸异丙酯(IPM)，可通过离心倒去无法容纳的IPM，计算离子液体的持油量，如图2所示，得到离子液体中反相胶束的最大加入量。具体步骤如下：
称量空离心管，将约1g实施例22制备的离子液体置于空的离心管中，然后加入0.428g、0.538g、0.667g的IPM，搅拌混匀后，室温下10000rpm离心15min，离心结束后将离心管倒置15min，将液态油排出后再次称量，计算由加入不同量IPM后离子液体的持油性。持油性的计算公式如下：
持油性/％＝(c-a)/(b-a)×100％
其中a为空离心管质量/g；b为离子液体加入离心管中的总质量/g；c为离心后排出液态油的离心管质量/g。每个比例重复3次。离子液体在不同反相胶束添加量下持油性变化见图2。通过持油性实验得出，制剂中反相胶束的最大加入质量百分比为35％。
实施例27制备本发明离子液体-反相胶束载药递释系统
将实施例10制备的含蛋白过敏原的反相胶束与实施例22制备的离子液体以35:65质量比混合，混合温度为25℃，混合时间为5min；制备得到所述离子液体-反相胶束载药递释系统。
实施例28：离子液体-反相胶束载药递释系统的体外释放考察
FAM标记OVA：称取OVA适量，溶于50mM NaHCO3溶液中，配制为2mg/mL的OVA溶液。称取FAM适量，溶于DMSO中，配制成0.5mg/mL的FAM溶液。避光，搅拌下将OVA溶液与FAM溶液以摩尔比2:1反应12h，反应完成后，收集反应液，超纯水中透析24h，冻干得橙红色FAM-OVA。
标准溶液配制：精密称取FAM-OVA 2.0mg于2ml容量瓶中，用释放介质PBS溶解并定容，得到1mg/ml FAM-OVA储备液，于冰箱4℃保存备用。
标准曲线的建立：精密量取1mg/ml FAM-OVA储备液0.2ml于容量瓶中，加入1.8mlPBS缓冲液配制成浓度为100μg/ml的标准溶液，后梯度稀释得50,25,10,1,0.1,0.01μg/ml溶液。在确定的激发、发射波长(494,522nm)处测定其相对荧光强度。以FAM-OVA的浓度(C)为横坐标，相对荧光强度(RFU)为纵坐标，进行线性回归，得到回归方程。
体外膜释放实验：用FAM-OVA替代OVA，以最佳处方实施例10制备FAM-OVA反相胶束。
称量不同量的实施例22制备的离子液体，并取100μL FAM-OVA反相胶束(含FAM-OVA100μg)均匀混合，获得二者质量比分别为FAM-OVA反相胶束：离子液体＝25:75,30:70,35:65和FAM-OVA反相胶束单一样品的4组样品。
混合温度为25℃，混合时间为5min；制备得到所述离子液体-反相胶束载药递释系统。
试验是通过将Franz型扩散池(开口部：1.77cm2)的接收侧部件用接收液(PBSBuffer、容量：7mL、液温：32℃)充满，安放醋酸纤维素膜，安放供给侧部件，涂布各组制剂而进行的。累计释放率是通过用酶标仪荧光分析1,2,4,8,12,24,36,48h时的接收液中FAM-OVA含量而进行分析的，每个质量比重复三次。离子液体-反相胶束载药递释系统的体外释放曲线见图3，在FAM-OVA反相胶束：离子液体＝35:65时，48h累计释放率达到90％，释放完全。
实施例29：离子液体-反相胶束载药递释系统的体外透皮能力考察
本实施例取实施例28制备的FAM-OVA进一步操作，分为以下6组。
(1)反胶束/离子液体组：称取FAM-OVA适量，用FAM-OVA替代最佳处方实施例10中的OVA，制备FAM-OVA反相胶束1mL。称量0.16g的实施例22制备的离子液体，使之与100μL反相胶束(含FAM-OVA 100μg)均匀混合，含蛋白过敏原的反相胶束和离子液体的质量比为1:1.86，混合温度为25℃，混合时间为5min，4℃冰箱存储备用。
(2)反胶束/市售凝胶组：所述市售凝胶为卵磷脂普朗尼克(PLO)(厂家：Transderma，规格：100g)，称取FAM-OVA适量，制备含1mg FAM-OVA的反相胶束冻干粉，将反相胶束冻干粉溶于0.75ml有机相中，所述有机相为棕榈酸异丙酯和卵磷脂，FAM-OVA反相胶束冻干粉在有机相中的浓度61mg/ml，将有机相与2.25ml水相混合，所述水相为普朗尼克的水溶液，制备得到反胶束/市售凝胶3g，将制得的反胶束/市售凝胶储存备用。
(3)OVA/离子液体组：称取FAM-OVA适量，用超纯水溶解，配制成1mg/ml FAM-OVA溶液，取100μL加入0.16g实施例22制备的离子液体中，混合均匀，4℃冰箱存储备用。
(4)OVA/市售凝胶组：所述市售凝胶为卵磷脂普朗尼克(PLO)(厂家：Transderma，规格：100g)，称取FAM-OVA适量，用超纯水溶解，配制成10mg/ml FAM-OVA溶液，取100μL加入2.15ml水相中，所述水相为普朗尼克的水溶液，将水相与0.75ml有机相混合，所述有机相为棕榈酸异丙酯和卵磷脂，制备得到OVA/市售凝胶3g(厂家：Transderma，规格：100g)，将制得的OVA/市售凝胶储存备用。
(5)反胶束/油凝胶组：称取FAM-OVA适量，用FAM-OVA替代最佳处方实施例10中的OVA，制备FAM-OVA反相胶束1mL。称量0.16g的氢化(苯乙烯/异戊二烯)共聚物油性凝胶，使之与100μL反相胶束(含FAM-OVA100μg)均匀混合，4℃冰箱存储备用。
(6)反胶束组：称取FAM-OVA适量，用FAM-OVA替代最佳处方实施例10中的OVA，制备FAM-OVA反相胶束1mL。取100μL反相胶束(含FAM-OVA100μg)，4℃冰箱存储备用。
试验是通过将Franz型扩散池(开口部：1.77cm2)的接收侧部件用接收液(PBSBuffer、容量：7mL、液温：32℃)充满，安放小鼠去毛背皮，安放供给侧部件，涂布各组制剂而进行的。分别于1,2,4,8,12,24,36,48h取出200μL接收液，荧光法检测FAM-OVA含量。
实验结果如图4、5、6、7所示，就FAM-OVA的48h单位面积累计透过量而言，OVA/离子液体或反相胶束组能达到15.0μg/cm2或14.9μg/cm2的透过量，而本发明的离子液体-反相胶束载药递释系统(即反胶束/离子液体组)显示出20.5μg/cm2的高OVA透过量，是单促渗技术的1.4倍，呈现出良好的增强效应。
对于反胶束/市售凝胶组，离子液体-反相胶束载药递释系统(即反胶束/离子液体组)的OVA透过量可达到其的8.5倍，具有显著高的透皮效率，这归因于该凝胶的相对低的黏度与多重透皮机制。
在市售PLO凝胶基质上，应用反相胶束技术(即反胶束/市售凝胶组)相较未应用(即OVA/市售凝胶组)可提高1.6倍，说明了反相胶束技术对于凝胶基质的普适性。
所有组对阴性对照油性凝胶(即反胶束/油凝胶组)都存在显著性增强，说明除油性凝胶外所有凝胶基质均可有效释放FAM-OVA。
FAM-OVA的48h累计透过百分率结果与单位面积累计释放量存在一致性，本发明的离子液体-反相胶束载药递释系统显示出36％的高OVA透过率，是单促渗技术(即反胶束组或OVA/离子液体组)的1.4倍。
市售PLO凝胶(即OVA/市售凝胶组)仅能透过4.3％的FAM-OVA，主要原因在于该凝胶稠厚的特性而导致的低涂展性与低释放，并且透皮机制单一，本发明的离子液体-反相胶束载药递释系统可对于市售凝胶的不足进行针对性改良，取得更加优异的透皮效果。

Claims (10)

1.一种用于表皮脱敏治疗的离子液体-反相胶束载药递释系统的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
步骤1，将含蛋白过敏原溶液和含有表面活性剂的有机溶剂溶液制备成W/O型乳液并冷冻干燥，获得冻干产物；向冻干产物中加入油相，超声分散，得到含蛋白过敏原的反相胶束；
优选的，步骤1所述含蛋白过敏原溶液和含有表面活性剂的有机溶剂溶液的体积比为1:1～1:5；
进一步优选的，步骤1所述含蛋白过敏原溶液和含有表面活性剂的有机溶剂溶液的体积比为1:1～1:3；
更进一步优选的，步骤1所述含蛋白过敏原溶液和含有表面活性剂的有机溶剂溶液的体积比1:2；
步骤2，将有机羧酸的甲醇溶液滴加入胆碱类化合物的水溶液中，进行反应，反应液去除溶剂，得到离子液体；
优选的，步骤2所述有机羧酸的甲醇溶液与胆碱类化合物的水溶液的体积比为5:1～1:2；
进一步优选为3:1～1:2；
步骤3，将步骤1得到的含蛋白过敏原的反相胶束与步骤2得到的离子液体混合，混合温度为20～30℃，混合时间为5～15min，制备得到所述离子液体-反相胶束载药递释系统；
优选的，混合温度为25℃；
优选的，混合时间为5～10min。
2.根据权利要求1所述离子液体-反相胶束载药递释系统的制备方法，其特征在于，步骤1所述蛋白过敏原选自β-乳球蛋白、α-酪蛋白、卵清蛋白、卵类黏蛋白、卵转铁蛋白、大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白中的一种或多种；所述蛋白过敏原溶液的溶剂选自水、生理盐水、缓冲溶液、组织培养液或体液，优选为水；所述含蛋白过敏原溶液中蛋白过敏原的浓度为0.5～2mg/mL，优选为0.5～1mg/mL。
3.根据权利要求1所述离子液体-反相胶束载药递释系统的制备方法，其特征在于，步骤1所述表面活性剂选自甘油脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯甘油脂肪酸酯、山梨糖醇酐脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯蓖麻子油和硬化蓖麻子油中的一种或几种；所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、正己烷、环己烷、二氯甲烷、三氯甲烷中的一种或多种，优选为环己烷；所述含有表面活性剂的有机溶剂溶液中表面活性剂浓度为5～30mg/mL，优选为10～15mg/mL。
4.根据权利要求1所述离子液体-反相胶束载药递释系统的制备方法，其特征在于，步骤1所述油相选自辛基十二醇肉豆蔻酸酯、肉豆蔻酸十六烷基酯、油酸乙酯、油酸癸酯、亚油酸乙酯、亚油酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯和棕榈酸异丙酯中的一种或几种；所述冻干产物与油相的质量比为1:10～1:30，优选为1:12～1:29。
5.根据权利要求1所述离子液体-反相胶束载药递释系统的制备方法，其特征在于，步骤1所述含蛋白过敏原的反相胶束平均粒径为100～500nm。
6.根据权利要求1所述离子液体-反相胶束载药递释系统的制备方法，其特征在于，步骤2所述有机羧酸为饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸或α-羟基酸，优选的，所述有机羧酸是癸酸、月桂酸、豆蔻酸、软脂酸、硬脂酸、亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸、油酸、乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、杏仁酸中的一种或多种；所述机羧酸的甲醇溶液中有机羧酸的浓度为0.1～1g/mL，优选为0.2～1g/mL，进一步优选的，0.2～0.7g/mL。
7.根据权利要求1所述离子液体-反相胶束载药递释系统的制备方法，其特征在于，步骤2所述胆碱类化合物是胆碱、氯化胆碱、乙酰胆碱、磷酰胆碱、丁酰胆碱、氢氧化胆碱中的一种或多种；所述胆碱类化合物的水溶液中胆碱类化合物的浓度为0.1～1g/mL，优选为0.1～0.5g/mL。
8.根据权利要求1所述离子液体-反相胶束载药递释系统的制备方法，其特征在于，步骤3含蛋白过敏原的反相胶束和离子液体的混合体系中，反相胶束的质量百分比不超过35％。
9.采用权利要求1至8任一项权利要求所述的制备方法制备得到的离子液体-反相胶束载药递释系统，其特征在于，所述载药递释系统包括离子液体、蛋白过敏原和反相胶束，所述反相胶束包裹蛋白过敏原。
10.权利要求9所述的离子液体-反相胶束载药递释系统在制备表皮脱敏治疗药物中的应用。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101485629A (zh) * 2008-01-16 2009-07-22 沈阳药科大学 一种给药系统及其制备方法
US20160289392A1 (en) * 2015-03-09 2016-10-06 California Institute Of Technology Triblock brush block copolymers
US20190192661A1 (en) * 2016-08-29 2019-06-27 The Regents Of The University Of California Topical formulations based on ionic species for skin treatment
JP2019202957A (ja) * 2018-05-23 2019-11-28 国立大学法人九州大学 免疫組成物

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101485629A (zh) * 2008-01-16 2009-07-22 沈阳药科大学 一种给药系统及其制备方法
US20160289392A1 (en) * 2015-03-09 2016-10-06 California Institute Of Technology Triblock brush block copolymers
US20190192661A1 (en) * 2016-08-29 2019-06-27 The Regents Of The University Of California Topical formulations based on ionic species for skin treatment
JP2019202957A (ja) * 2018-05-23 2019-11-28 国立大学法人九州大学 免疫組成物

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MD. RAIHAN CHOWDHURYA等: "Biocompatible ionic liquids assisted transdermal co-delivery of antigenic protein and adjuvant for cancer immunotherapy", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF PHARMACEUTICS》, vol. 601, pages 1 - 9 *

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