CN113943708A - 用于构建胆管癌异种移植模型的移植体及制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物医药技术领域，公开了一种用于构建胆管癌异种移植模型的移植体及制备方法和用途，包括：制备培养基体；胆管癌细胞分离：利用解离液对胆管癌实体瘤组织进行解离处理得到胆管癌细胞；将所述解离得到的胆管癌细胞种植于培养基体的碳纳米结构的极性化表面上；于所述培养基体上进行胆管癌细胞的培养，直至形成胆管癌组织，即可得到用于构建胆管癌异种移植模型的移植体。本发明利用癌细胞得到包含胆管癌类器官的移植体，利用该移植体构建胆管癌异种移植模型时，可在少量组织条件下，获得较高的成功率，且构建异种移植模型所需时间较短。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及一种用于构建胆管癌异种移植模型的移植体及制备方法和用途。
背景技术
目前，胆管癌是指源于肝外胆管包括肝门区至胆总管下端的胆管的恶性肿瘤。其病因可能与胆管结石、原发性硬化性胆管炎等疾病有关。临床可采用手术治疗、放射治疗、化学治疗等方法，但效果不明显，预后较差。为了改善胆管癌的治疗效果，需要对胆管癌的致病机理、抗药性等进行深入研究，而动物性异种移植模型是用于研究的重要工具。
相关技术中主要利用胆管癌患者的原发灶或者转移灶肿瘤组织块作为移植体，然而胆管癌患者的原发灶或者转移灶肿瘤组织块较少导致移植体数量不足，且获取方法繁琐，患者痛苦大，构建胆管癌异种移植模型的成功率较低，且所需时间较长。
通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有胆管癌患者的原发灶或者转移灶肿瘤组织块作为移植体数量不足，且获取方法繁琐，患者痛苦大，构建胆管癌异种移植模型的成功率较低，且所需时间较长。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种用于构建胆管癌异种移植模型的移植体及制备方法和用途。
本发明是这样实现的，一种用于构建胆管癌异种移植模型的移植体的制备方法，所述用于构建胆管癌异种移植模型的移植体的制备方法包括：
步骤一，制备培养基体：将处理后的的碳纳米管固定于载体上，并将所述设置有碳纳米管结构的载体置于培养基中，得到培养基体；
步骤二，胆管癌细胞分离：利用解离液对胆管癌实体瘤组织进行解离处理得到胆管癌细胞；
步骤三，将所述解离得到的胆管癌细胞种植于培养基体的碳纳米结构的极性化表面上；
步骤四，于所述培养基体上进行胆管癌细胞的培养，直至形成胆管癌组织，即可得到用于构建胆管癌异种移植模型的移植体。
进一步，步骤一中，所述制备培养基体包括：
(1)利用离子注入或离子束辅助沉积方法对碳纳米管结构进行表面极性化修饰，得到具备极性化表面的碳纳米管结构；
(2)将具备极性化表面的碳纳米管结构固定于生物可降解材料制备的载体上，并将固定有碳纳米管结构的载体的另一面粘接在预先制备的培养基上，并真空干燥所述培养基，即可得到培养基体。
进一步，所述培养基制备包括：
向RPMI-1640培养基中加入链霉素完全溶解后，静置，再加入青霉素、牛血清白蛋白完全溶解后，静置，接着加入烟氨酸完全溶解后，静置；加入灭活的胆汁上清液样本完全溶解后，静置，调节pH值，滤膜过滤得到培养基。
进一步，所述灭活的胆汁上清液样本制备方法包括：
取胆管癌胆汁液体样本，离心后收集上清，过滤去除杂质，灭活后，得到灭活的胆汁上清液样本。
进一步，所述胆管癌细胞分离包括：
首先，利用75％的乙醇清洗胆管癌实体瘤组织样本表面；并利用含抗菌剂的清洗液和无菌的PBS溶液先后清洗所述胆管癌实体瘤组织样本；
其次，对清洗后的胆管癌实体瘤组织样本进行粉碎处理，得到粉碎后的胆管癌实体瘤组织；
最后，将解离液水浴加热35℃，并将粉碎后的胆管癌实体瘤组织放入预热后的解离液中进行解离处理，即可得胆管癌细胞。
进一步，所述解离处理包括：于35℃解离4.5h。
进一步，所述于所述培养基体上进行胆管癌细胞的培养包括：
于所述培养基体的碳纳米结构的极性化表面上，于37℃，5％CO2条件下进行培养，每2-4天更换一次培养基；
并于胆管癌细胞形成一定大小的团块时，进行传代，并于满足要求时采用含胎牛血清的消化终止液终止传代。
本发明的另一目的在于提供一种利用所述用于构建胆管癌异种移植模型的移植体的制备方法制备的用于构建胆管癌异种移植模型的移植体。
本发明的另一目的在于提供一种所述用于构建胆管癌异种移植模型的移植体在构建胆管癌异种移植模型中的应用。
结合上述的所有技术方案，本发明所具备的优点及积极效果为：本发明提供的培养基体中的碳纳米管结构被极化，形成所述极性化表面，该极性化表面具有与待培养的胆管癌细胞相匹配的电荷极性，可以吸附细胞。本发明提供的移植体的制备方法不需要对所述碳纳米管结构进行镀层、涂层或化学修饰处理，就可以直接制备移植体，因此，该方法比较简单，易于实施。
本发明利用癌细胞得到包含胆管癌类器官的移植体，利用该移植体构建胆管癌异种移植模型时，可在少量组织条件下，获得较高的成功率，且构建异种移植模型所需时间较短。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对本申请实施例中所需要使用的附图做简单的介绍，显而易见地，下面所描述的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实施例提供的用于构建胆管癌异种移植模型的移植体的制备方法流程图。
图2是本发明实施例提供的制备培养基体的方法流程图。
图3是本发明实施例提供的培养基制备的方法流程图。
图4是本发明实施例提供的胆管癌细胞分离的方法流程图。
图5是本发明实施例提供的于所述培养基体上进行胆管癌细胞的培养的方法流程图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种用于构建胆管癌异种移植模型的移植体及制备方法和用途，下面结合附图对本发明作详细的描述。
如图1所示，本发明实施例提供的用于构建胆管癌异种移植模型的移植体的制备方法包括：
S101，制备培养基体：将处理后的的碳纳米管固定于载体上，并将所述设置有碳纳米管结构的载体置于培养基中，得到培养基体；
S102，胆管癌细胞分离：利用解离液对胆管癌实体瘤组织进行解离处理得到胆管癌细胞；
S103，将所述解离得到的胆管癌细胞种植于培养基体的碳纳米结构的极性化表面上；
S104，于所述培养基体上进行胆管癌细胞的培养，直至形成胆管癌组织，即可得到用于构建胆管癌异种移植模型的移植体。
如图2所示，本发明实施例提供的制备培养基体包括：
S201，利用离子注入或离子束辅助沉积方法对碳纳米管结构进行表面极性化修饰，得到具备极性化表面的碳纳米管结构；
S202，将具备极性化表面的碳纳米管结构固定于生物可降解材料制备的载体上；
S203，将固定有碳纳米管结构的载体的另一面粘接在预先制备的培养基上，并真空干燥所述培养基，即可得到培养基体。
如图3所示，本发明实施例提供的培养基制备包括：
S301，向RPMI-1640培养基中加入链霉素完全溶解后，静置，再加入青霉素、牛血清白蛋白完全溶解后，静置；
S302，加入烟氨酸完全溶解后，静置；加入灭活的胆汁上清液样本完全溶解后，静置，调节pH值，滤膜过滤得到培养基。
本发明实施例提供的灭活的胆汁上清液样本制备方法包括：
取胆管癌胆汁液体样本，离心后收集上清，过滤去除杂质，灭活后，得到灭活的胆汁上清液样本。
如图4所示，本发明实施例提供的胆管癌细胞分离包括：
S401，利用75％的乙醇清洗胆管癌实体瘤组织样本表面；并利用含抗菌剂的清洗液和无菌的PBS溶液先后清洗所述胆管癌实体瘤组织样本；
S402，对清洗后的胆管癌实体瘤组织样本进行粉碎处理，得到粉碎后的胆管癌实体瘤组织；
S403，将解离液水浴加热35℃，并将粉碎后的胆管癌实体瘤组织放入预热后的解离液中进行解离处理，即可得胆管癌细胞。
本发明实施例提供的解离处理包括：于35℃解离4.5h。
如图5所示，本发明实施例提供的于所述培养基体上进行胆管癌细胞的培养包括：
S501，于所述培养基体的碳纳米结构的极性化表面上，于37℃，5％CO2条件下进行培养，每2-4天更换一次培养基；
S502，并于胆管癌细胞形成一定大小的团块时，进行传代，并于满足要求时采用含胎牛血清的消化终止液终止传代。
以上所述，仅为本发明较优的具体的实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种用于构建胆管癌异种移植模型的移植体的制备方法，其特征在于，所述用于构建胆管癌异种移植模型的移植体的制备方法包括：
步骤一，制备培养基体：将处理后的的碳纳米管固定于载体上，并将所述设置有碳纳米管结构的载体置于培养基中，得到培养基体；
步骤二，胆管癌细胞分离：利用解离液对胆管癌实体瘤组织进行解离处理得到胆管癌细胞；
步骤三，将所述解离得到的胆管癌细胞种植于培养基体的碳纳米结构的极性化表面上；
步骤四，于所述培养基体上进行胆管癌细胞的培养，直至形成胆管癌组织，即可得到用于构建胆管癌异种移植模型的移植体。
2.如权利要求1所述用于构建胆管癌异种移植模型的移植体的制备方法，其特征在于，步骤一中，所述制备培养基体包括：
(1)利用离子注入或离子束辅助沉积方法对碳纳米管结构进行表面极性化修饰，得到具备极性化表面的碳纳米管结构；
(2)将具备极性化表面的碳纳米管结构固定于生物可降解材料制备的载体上，并将固定有碳纳米管结构的载体的另一面粘接在预先制备的培养基上，并真空干燥所述培养基，即可得到培养基体。
3.如权利要求2所述用于构建胆管癌异种移植模型的移植体的制备方法，其特征在于，所述培养基制备包括：
向RPMI-1640培养基中加入链霉素完全溶解后，静置，再加入青霉素、牛血清白蛋白完全溶解后，静置，接着加入烟氨酸完全溶解后，静置；加入灭活的胆汁上清液样本完全溶解后，静置，调节pH值，滤膜过滤得到培养基。
4.如权利要求3所述用于构建胆管癌异种移植模型的移植体的制备方法，其特征在于，所述灭活的胆汁上清液样本制备方法包括：
取胆管癌胆汁液体样本，离心后收集上清，过滤去除杂质，灭活后，得到灭活的胆汁上清液样本。
5.如权利要求1所述用于构建胆管癌异种移植模型的移植体的制备方法，其特征在于，所述胆管癌细胞分离包括：
首先，利用75％的乙醇清洗胆管癌实体瘤组织样本表面；并利用含抗菌剂的清洗液和无菌的PBS溶液先后清洗所述胆管癌实体瘤组织样本；
其次，对清洗后的胆管癌实体瘤组织样本进行粉碎处理，得到粉碎后的胆管癌实体瘤组织；
最后，将解离液水浴加热，并将粉碎后的胆管癌实体瘤组织放入预热后的解离液中进行解离处理，即可得胆管癌细胞。
6.如权利要求5所述用于构建胆管癌异种移植模型的移植体的制备方法，其特征在于，所述水浴加热温度为35℃。
7.如权利要求5所述用于构建胆管癌异种移植模型的移植体的制备方法，其特征在于，所述解离处理包括：于35℃解离4.5h。
8.如权利要求1所述用于构建胆管癌异种移植模型的移植体的制备方法，其特征在于，所述于所述培养基体上进行胆管癌细胞的培养包括：
于所述培养基体的碳纳米结构的极性化表面上，于37℃，5％CO2条件下进行培养，每2-4天更换一次培养基；
并于胆管癌细胞形成一定大小的团块时，进行传代，并于满足要求时采用含胎牛血清的消化终止液终止传代。
9.一种利用如权利要求1-8任意一项所述用于构建胆管癌异种移植模型的移植体的制备方法制备的用于构建胆管癌异种移植模型的移植体。
10.一种如权利要求9用于构建胆管癌异种移植模型的移植体在构建胆管癌异种移植模型中的应用。
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| CN202111222215.4A CN113943708A (zh) | 2021-10-20 | 2021-10-20 | 用于构建胆管癌异种移植模型的移植体及制备方法和用途 |
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Citations (4)
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|---|---|---|---|---|
| CN102847199A (zh) * | 2011-06-30 | 2013-01-02 | 清华大学 | 培养基体、应用该培养基体的移植体及移植体的制备方法 |
| CN203938677U (zh) * | 2014-07-07 | 2014-11-12 | 内蒙古工业大学 | 一种新型细胞培养皿 |
| CN111903603A (zh) * | 2020-07-17 | 2020-11-10 | 浙江科途医学科技有限公司 | 用于构建胆管癌异种移植模型的移植体及其制备方法和用途 |
| KR20210007358A (ko) * | 2019-07-11 | 2021-01-20 | 가천대학교 산학협력단 | 줄기세포의 암세포로의 이동성 강화 방법 |
-
2021
- 2021-10-20 CN CN202111222215.4A patent/CN113943708A/zh active Pending
Patent Citations (4)
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