CN113939535A

CN113939535A - 提供抗cd40抗体的安全施用的方法

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Publication number: CN113939535A
Application number: CN202080039748.6A
Authority: CN
Inventors: M·斯特雷特
Original assignee: Janssen Biotech Inc
Current assignee: Janssen Biotech Inc
Priority date: 2019-05-28
Filing date: 2020-05-27
Publication date: 2022-01-14
Also published as: JP2022534494A; KR20220012918A; WO2020240434A1; MA56027A; US20230174658A1; SG11202112909SA; AU2020284706A1; IL288288A; CA3142226A1; EP3976651A1; MX2021014572A; BR112021023906A2

Abstract

本发明提供了通过静脉内施用来实现经临床上证实安全的抗CD40抗体的施用的方法。本发明还提供了通过静脉内施用抗CD40抗体来实现经临床上证实安全的晚期实体瘤的治疗的方法。

Description

提供抗CD40抗体的安全施用的方法

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技术领域

CD40(一种48千道尔顿的跨膜细胞表面糖蛋白)是属于肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族的共刺激受体(Elgueta R等人，免疫学评论(Immunol Rev.)，2009，229(1):152-172)。CD40的组成性表达是多样的并且可在抗原呈递细胞(APC)(包括树突细胞(DC)、B淋巴细胞和巨噬细胞)的表面上检测到该受体。另外，CD40表达于粒细胞、内皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞和上皮细胞上(Korniluk等人，肿瘤生物学(Tumour Biol.)，2014，35(10):9447-9457；Peters等人，免疫学研讨文辑(Semin Immunol.)，2009，21(5):293-300)。

与其在正常细胞上的广泛表达一致，CD40还存在于多种多样的恶性细胞的膜上，包括非霍奇金和霍奇金淋巴瘤、骨髓瘤以及一些癌(包括鼻咽癌、膀胱癌、宫颈癌、肾癌和卵巢癌)(Eliopoulos AG和Young LS.，药理学新见(Curr.Opin.Pharmacol.)，2004，4(4):360-367)。CD40与单种配体CD40L(或CD154)相互作用，该配体是由活化的T淋巴细胞、B淋巴细胞、血小板、肥大细胞、巨噬细胞、嗜碱性粒细胞、自然杀伤(NK)细胞和非造血细胞(平滑肌细胞、内皮细胞和上皮细胞)表达的跨膜蛋白。作为细胞间相互作用一部分的CD40与其唯一配体CD40L的结合活化了涉及称为TNF受体活化因子(或TRAF)的一系列衔接分子的细胞内信号转导通路。为了引发该细胞内信号转导，多个CD40受体必须在细胞膜上形成簇(Peters等人，免疫学研讨文辑(Semin Immunol.)，2009，21(5):293-300)。该CD40簇聚允许由多个TRAF组成的超分子信号复合物进行组装，继而引起包括核因子κB(NF-κB)在内的下游转录因子的活化(Kornbluth等人，国际免疫学评论(Int.Rev.Immunol.)，2012，31(4):279-288)。

CD40信号转导的分子后果取决于表达CD40的细胞类型以及提供CD40信号的微环境(Vonderheide等人，临床癌症研究(Clin Cancer Res.)，2013，19(5):1035-1043)。CD40连接和交联是适应性免疫应答所必需的，其作用机制是通过诱导膜共刺激分子和MHC分子的上调以及促炎细胞因子的产生而使APC、尤其是DC发放授权。因此，CD40参与APC的功能性成熟并因此参与抗原特异性T淋巴细胞的活化(Long等人，癌症探索(Cancer Discov.)，2016，6(4):400-13；Moran等人，免疫学新见(Curr.Opin.Immunol.)，2013，25(2):230-237)。CD40还在体液免疫中起着一定作用，具体方式是活化静息B淋巴细胞并且增强其抗原呈递功能(Vonderheide等人，临床癌症研究(Clin Cancer Res.)，2013，19(5):1035-1043；Wolchok等人，临床癌症研究(Clin.Cancer Res.)，2009，15(23):7412-7420)。此外，CD40通过刺激细胞毒性髓细胞(诸如NK细胞、巨噬细胞和粒细胞)来参与先天免疫的诱导(Rakhmilevich等人，国际免疫学评论(Int.Rev.Immunol.)，2012，31(4):267-278)。既促进肿瘤进展又促进肿瘤细胞凋亡的矛盾作用被认为是不同肿瘤疾病中的CD40/CD450L通路所为(Korniluk等人，肿瘤生物学(Tumour Biol.)，2014，35(10):9447-9457)。

这些关键的CD40/CD40L介导通路在不同肿瘤疾病中具有既促进肿瘤进展又诱导肿瘤细胞凋亡的矛盾作用(Beatty GL等人，科学(Science)，2011，331(6024):1612-1616)。然而，CD40抗体的全身性施用与诸如休克综合征和细胞因子释放综合征之类的不良副作用有关(van Mierlo等人，2002，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，99:5561-5566；van Mierlo等人，2004，免疫学杂志(J Immunol)，173:6753-6759)。其他抗CD40抗体及其产生的示例在例如US 9,676,862中有所描述。

鉴于上述情况，仍然需要改进的抗肿瘤疗法，特别是适用于临床应用的抗CD40激动剂抗体。

发明内容

本发明涉及向受试者进行的经临床上证实安全的抗CD40抗体的施用，包括经临床上证实安全的晚期实体瘤的治疗。

在一个总的方面，本发明涉及一种向有需要的人类受试者提供经临床上证实安全的抗CD40抗体的施用的方法，该方法包括向受试者静脉内施用包含该抗体和药学上可接受的载体的药物组合物，优选地该抗体包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含分别为SEQ ID NO:1、2和3的重链互补决定区(HCDR)HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列或分别具有与SEQ ID No:1、2和3的至少95％(或至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列同一性的序列，并且该轻链可变区包含分别为SEQ ID NO:4、5和6的轻链互补决定区(LCDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列或分别具有与SEQ ID No:4、5和6的至少95％(或至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列同一性的序列，并且其中所施用的抗体的总剂量为每次施用50μg/kg至2500μg/kg，优选地75μg/kg至2000μg/kg，任选地100μg/kg至1800μg/kg；200μg/kg至1500μg/kg；300μg/kg至1400μg/kg；400μg/kg至1300μg/kg；500μg/kg至1200μg/kg；600μg/kg至1100μg/kg；700至1000μg/kg、800至900μg/kg受试者的体重。

在一个实施方案中，人类受试者被诊断为患有晚期实体瘤。

在一个实施方案中，抗CD40抗体包含具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。

在一个实施方案中，抗CD40抗体包含具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链(HC)和具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的轻链(LC)。

在一些实施方案中，每次施用时施用的抗CD40抗体的总剂量为50μg/kg、75μg/kg、100μg/kg、200μg/kg、300μg/kg、400μg/kg、500μg/kg、600μg/kg、700μg/kg、800μg/kg、900μg/kg、1000μg/kg、1100μg/kg、1200μg/kg、1300μg/kg、1400μg/kg、1500μg/kg、1800μg/kg、2000μg/kg或2500μg/kg受试者的体重或其间的任何剂量。

在一个实施方案中，在一定时间段内向人类受试者静脉内施用药物组合物的总剂量，该时间段为0分钟至3小时，优选地5分钟至150分钟、10分钟至2小时、15分钟至90分钟、20分钟至1小时、25分钟至55分钟、30分钟至50分钟、或35分钟至45分钟、或40分钟至45分钟；诸如约0分钟、约5分钟、约10分钟、约15分钟、约20分钟、约25分钟、约30分钟、约35分钟、约40分钟、约45分钟、约50分钟、约55分钟、约1小时、约90分钟、约2小时、约150分钟或约3小时。优选地，重复地向人类受试者静脉内施用药物组合物，即超过一次，更优选地每天一次、每周一次、每两周一次、每月一次、每六个月一次等，持续一天、一周、一个月、六个月、1年、2年或更长的时间段。

在一个实施方案中，该方法还包括在施用抗CD40抗体之前、之后或同时向人类受试者施用治疗剂，优选地该治疗剂选自皮质类固醇、抗组胺剂、退热剂、H2拮抗剂和止吐药。

在一个实施方案中，药物组合物包含1mg/ml至100mg/ml的抗CD40抗体，优选地10mg/ml至90mg/ml、20mg/ml至80mg/ml、30mg/ml至70mg/ml、40mg/ml至60mg/ml、40mg/ml至50mg/ml；诸如10mg/ml、20mg/ml、30mg/ml、40mg/ml、50mg/ml、60mg/ml、70mg/ml、80mg/ml、90mg/ml或100mg/ml，以及药学上可接受的载体。

在另一个总的方面，本发明涉及一种向有需要的人类受试者提供经临床上证实安全的抗CD40抗体的施用的方法，该方法包括向受试者静脉内施用包含该抗体和药学上可接受的载体的药物组合物，优选地该抗体包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含分别为SEQ ID NO:1、2和3的重链互补决定区(HCDR)HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列或分别具有与SEQ ID No:1、2和3的至少95％(或至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列同一性的序列，并且该轻链可变区包含分别为SEQ ID NO:4、5和6的轻链互补决定区(LCDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列或分别具有与SEQ ID No:4、5和6的至少95％(或至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列同一性的序列，其中所施用的抗体的总剂量为每次施用约600μg/kg至约900μg/kg受试者的体重，优选地人类受试者被诊断为患有非小细胞肺癌(NSCLC)、胰腺癌或皮肤黑色素瘤。

在本发明的一个实施方案中，提供了如先前实施方案中所述的用于药物中的抗CD40抗体。

在本发明的另外一个实施方案中，提供了如先前实施方案中所述的用于治疗晚期实体瘤的抗CD40抗体，所述晚期实体瘤包括但不限于膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌与直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、唇癌与口腔癌、肝癌、黑色素瘤(包括皮肤黑色素瘤)、间皮瘤、非小细胞肺癌、非黑色素瘤皮肤癌、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、小细胞肺癌和甲状腺癌。

在本发明的另外一个实施方案中，提供了如先前实施方案中所述的用于制造治疗晚期实体瘤的药物的抗CD40抗体，所述晚期实体瘤包括但不限于膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌与直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、唇癌与口腔癌、肝癌、黑色素瘤(包括皮肤黑色素瘤)、间皮瘤、非小细胞肺癌、非黑色素瘤皮肤癌、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、小细胞肺癌和甲状腺癌。

优选地，在这两个实施方案中，晚期实体瘤的治疗包括向被诊断为患有晚期实体瘤的人类受试者施用如上所定义的抗CD40抗体的步骤，包括向受试者静脉内施用包含该抗体和药学上可接受的载体的药物组合物，并且其中所施用的抗体的总剂量为每次施用50μg/kg至2500μg/kg，优选地75μg/kg至2000μg/kg受试者的体重。

本发明的一个或多个实施方案的细节在以下描述中示出。其他特征和优点在以下具体实施方式和所附权利要求书中将显而易见。

附图说明

当结合附图阅读时，将更好地理解上述发明内容以及以下具体实施方式。应当理解，本发明不限于附图中示出的精确实施方案。

本专利或专利申请文件包含至少一张绘制成彩色的附图。在提出请求并且支付必要的费用后，美国专利和商标局将会提供本专利或专利申请公开的带彩图副本。

图1示出了实施例1中的临床研究的研究设计的图解示意图。IV＝静脉内；NSCLC＝非小细胞肺癌；q14d＝每14天一次；RP2D＝2期推荐剂量。

图2示出了该研究设计以及预输注和不预输注皮质类固醇的队列。

图3示出了使用剂量递增删失的每个分配剂量的输注相关反应(IRR)发生率。

图4展示了时间周期1和2内的平均血清浓度。

图5展示了剂量归一化AUC_0-24h。

图6A至C展示了在输注ANTIBODY A之后外周血液中归一化到输注前水平的B细胞(图6A)、T细胞(图6B)和NK(图6C)细胞的比例(不给予皮质类固醇的队列)。

图7A至I展示了在输注ANTIBODY A之后外周血液中的细胞因子/趋化因子水平(不给予皮质类固醇的队列)：MCP-1(图7A)、IP-10(图7B)、MIP-1β(图7C)、IFN-γ(图7D)、MIP-1α(图7E)、IL-8(图7F)、TNF-α(图7G)、IL-6(图7H)和IL12p70(图7I)。

图8A至D展示了外周血液B淋巴细胞上的活化/成熟标记的表达：HLA-DR(图8A)、CD54(图8B)、CD80(图8C)和CD86(图8D)。符号和线条表示队列6B扩展的每个个体患者(参见图2)。注：计算了每个标记的染色强度的倍数变化(ANTIBODY A输注后24小时与输注前相比)并且将其换算为Log₂尺度。在最终队列(1200μg/kg且不给予皮质类固醇)中的6名患者中，4名患者具有可用的数据并且相应地进行了作图。

具体实施方式

背景以及说明书全篇中引用或描述了各种出版物、文章和专利；这些参考文献中的每一者全文均以引用方式并入本文。本说明书中包括的对文件、行为、材料、装置、文章等的讨论旨在为本发明提供上下文。此类讨论并不是承认这些事项中的任一事项或全部事项均相对于所公开或受权利要求书保护的任何发明形成现有技术的一部分。

除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语的含义与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同。否则，本文所用的某些术语具有本说明书中所述的含义。本文引用的所有专利、公布的专利申请和出版物均以引用方式并入本文，如同在本文中进行了充分阐述。

应该注意的是，除非上下文清楚地指明，否则如本文和所附权利要求中所用的单数形式“一个/一种”和“所述/该”包括复数引用物。

除非另有说明，否则在一系列元素之前的术语“至少”应理解为指代系列中的每个元素。本领域的技术人员将会认识到、或仅使用常规实验就能够确定本文所述发明的具体实施方案的多种等同物。此类等同物旨在由本发明所涵盖。

贯穿本说明书和随后的权利要求书，除非上下文另有要求，否则词语“包括”以及诸如“包含”和“含有”的变型形式将被理解为暗示包括所陈述的整数或步骤或者整数或步骤的组，但不排除任何其他整数或步骤或者整数或步骤的组。当在本文使用时，术语“包含”可用术语“含有”或“包括”替代，或者有时在本文使用时用术语“具有”替代。

当在本文使用时，“由……组成”排除权利要求要素中未指定的任何要素、步骤或成分。当在本文使用时，“基本上由……组成”不排除没有实质上影响权利要求的基本和新颖特征的材料或步骤。每当在本文中用于本发明的一个方面或实施方案的情境时，任何前述术语“包含”、“含有”、“包括”和“具有”均可用术语“由……组成”或“基本上由……组成”替代以改变本公开的范围。

如本文所用，多个列举的要素之间的连接术语“和/或”被理解为包含单个选项和组合选项两者。例如，在两个要素由“和/或”连接的情况下，第一种选项是指在没有第二个要素的情况下适用第一个要素。第二种选项是指在没有第一个要素的情况下适用第二个要素。第三种选项是指适合一起使用第一要素和第二要素。这些选项中的任一种均被理解为落在含义内，并且因此满足如本文所用的术语“和/或”的要求。多于一种选项的并行适用性也被理解为落在含义内，并且因此满足术语“和/或”的要求。

如本文所用，术语“受试者”是指被诊断为或疑似患有癌的哺乳动物受试者，优选地人类，其将或已经根据本发明的方法施用抗CD40抗体。癌的诊断可由临床医生根据临床诊断测试、受试者的体检或任何其他可接受的用于诊断患有特定疾病的受试者的方法来进行。

如本文所用，“CD40”是指一种细胞表面表达的糖蛋白，它属于肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族并且在免疫系统中起着核心作用。它表达于多种免疫细胞上，诸如B细胞、树突细胞、单核细胞和巨噬细胞，并且在发生经由CD40的信号转导时会活化专职性APC(由如下文献综述：Tasci等人，细胞和分子生命科学(Cell.Mol.Life.Sci.)，2001，(58):4-43)。许多正常细胞和肿瘤细胞(诸如B细胞淋巴瘤、实体瘤、黑色素瘤和癌)中都有CD40表达。非常明确的是，CD40的活化可有效触发抗肿瘤应答，并且CD40活化通过至少如下机制促成肿瘤生长障碍：免疫活化、对CD40阳性肿瘤的直接凋亡作用以及体液应答的刺激，从而引起抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)。

如本文所用，“CD40”包括与如本文所定义的人CD40蛋白和/或其天然变体具有结构和/或功能同一性的任何天然或合成蛋白。优选地，CD40是人CD40，诸如UniProt登录号P25942和GenBank登录号AAH12419。

如本文所用，“抗CD40抗体”是指结合天然配体CD40L并增强该配体的效应的IgG1亚型的激动性人单克隆抗体(mAb)或其抗原结合片段。本发明的激动性CD40抗体可诱导直接抗肿瘤作用和间接抗肿瘤作用，该直接抗肿瘤作用(1)通过结合表达于肿瘤细胞上的CD40受体实现，而该间接抗肿瘤作用(2)通过DC“发放授权”和细胞毒性T细胞(CTL)活化以及(3)通过细胞毒性髓细胞(诸如NK细胞或肿瘤巨噬细胞)活化实现。在一个优选的实施方案中，抗CD40抗体包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含分别为SEQ ID NO:1、2和3的重链互补决定区(HCDR)HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列或分别具有与SEQ ID No:1、2和3的至少95％(或至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列同一性的序列，并且该轻链可变区包含分别为SEQ ID NO:4、5和6的轻链互补决定区(LCDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列或分别具有与SEQ ID No:4、5和6的至少95％(或至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)序列同一性的序列。在另一个优选的实施方案中，抗CD40抗体包含具有SEQ IDNO:7的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。在另一个优选的实施方案中，抗CD40抗体包含具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链(HC)和具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的轻链(LC)。

可用于本发明的附加抗CD40抗体或其抗原结合片段包括美国专利No.9,676,862中所述的那些，该专利以引用方式并入本文。

根据本公开，抗CD40抗体可通过本领域已知的用于制备单克隆抗体的任何方法制备，包括但不限于杂交瘤产生。例如，可使用重组DNA技术在哺乳动物细胞系(例如，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系)中产生抗CD40抗体。具体地讲，产生可用于本发明的抗CD40抗体的方法在例如美国专利No.9,676,862中进一步描述，该专利以引用方式并入本文。

当涉及使用抗CD40抗体的剂量、剂量方案、治疗或方法时，术语“安全”是指与根据《联邦食品、药品和化妆品法案(修订版)》(第201–902节，52法令第1040页以及之后，修订版；21U.S.C.§§321–392)的护理标准或另一个比较物相比，治疗期不良事件(称为AE或TEAE)的可接受频率和/或可接受严重程度的有利风险:效益比。具体地讲，当涉及使用本发明的抗CD40抗体的剂量、剂量方案或治疗时，“安全”是指如果认为归因可能、很可能或非常可能是由于使用抗CD40抗体，则与施用该抗体相关联的不良事件具有可接受的频率和/或可接受的严重程度。安全性通常通过毒性测试来测量，以确定实现所需有益效果所需的活性药物成分的最高耐受剂量或最佳剂量。着眼于安全性的研究还寻求识别可能因暴露于药物而引起的任何潜在不利影响。

如本文所用，除非另外指明，否则术语“经临床上证实”(单独使用或用于修饰术语“安全”)应意指临床试验已经证明其安全，其中临床试验已经符合美国食品与药品监督管理局、欧洲药物评审局(EMEA)或相应国家监管机构的批准标准。在本发明中，临床研究是ANTIBODY A(即，靶向CD40的激动性人单克隆抗体)在晚期实体瘤患者中的安全性、药代动力学和药效动力学的1期开放标签研究。

如本文所用，短语“不良事件”、“治疗期不良事件”和“不良反应”意指与施用药物组合物或治疗剂相关或由施用药物组合物或治疗剂引起的任何伤害、不利、无意或不期望的病征或结果。然而，异常值或观察结果不会被报告为不良事件，除非研究人员认为有临床显著意义。如本文所用，当提及不良事件时，“临床上明显的”意指由医生或研究人员使用本领域普通技术人员可接受的标准所确定的有临床显著意义。当不良事件的伤害或不期望的结果达到此类严重程度时，监管机构可认为该药物组合物或治疗剂对于所提议的用途是不可接受的。当在抗CD40抗体的静脉内施用的语境中使用时，不良事件或不良反应的示例包括但不限于感染和侵染，诸如鼻炎、带状疱疹和大疱性鼓膜炎；呼吸系统、胸廓和纵隔障碍，诸如咳嗽、咽喉刺激和口咽痛；肠胃障碍，诸如腹泻和肠胃气胀；神经系统障碍，诸如头痛和眩晕；血液和淋巴系统障碍，诸如贫血和淋巴结病；背痛、早产、输液反应、局部注射部位反应性、恶性但没有过敏性或血清病型反应。

如本文所用，“治疗”是指用治疗剂治疗。需要治疗的个体包括被诊断患有障碍或呈现障碍症状的受试者。可治疗的受试者还包括倾向于或易于患上障碍的受试者或障碍待预防的受试者。有益或期望的临床结果包括症状的减轻、疾病程度的减弱、疾病的稳定(即，未恶化)状态、疾病进展的延迟或减慢、疾病状态的改善或缓和，以及缓解(不论是部分缓解还是完全缓解)，不论是可检测的还是不可检测的。有益的临床结果包括，在已经接受治疗的受试者体内，例如B细胞或树突细胞的增殖减少；炎性细胞因子、粘附分子、蛋白酶、免疫球蛋白及其组合减少；抗炎蛋白质的产生增加；自身反应性细胞数目的减少；免疫耐受性的增加；自身反应性细胞存活的抑制，以及/或者由CD40/CD40L介导通路所介导的一种或多种症状的减少。可以使用如下筛查技术来评估临床应答，诸如磁共振成像(MRI)扫描、x射线照相成像、计算机断层摄影(CT)扫描、流式细胞术或荧光激活细胞分选仪(FACS)分析、组织学、总体病理学和血液化学，包括但不限于可通过ELISA、RIA、色谱法等而检测的变化。

如本文所用，在剂量、剂量方案、治疗或方法的上下文中，术语“功效”和“有效”是指特定剂量、剂量方案或治疗方案的有效性。功效可基于病程响应于本发明药剂发生的变化进行测量。例如，将本发明的抗CD40抗体(例如，ANTIBODY A)以足以诱导至少一种反映所治疗障碍严重程度的指标的改善，优选地持续改善的量和时间施用于受试者。可评价反映受试者的病、疾病或病症程度的各种指标，以确定治疗的量和时间是否足够。此类指标包括例如临床上公认的疾病严重程度、症状或所考虑病症的表现的指标。改善程度通常由医师确定，该医师可基于病征、症状、活检或其他测试结果进行该确定，并且还可采用施用给受试者的问卷(诸如针对给定疾病开发的生活质量问卷)进行该确定。例如，可以施用本发明的抗CD40抗体以实现受试者的晚期实体瘤相关病症的改善。

晚期实体瘤的疾病评价包括所有受试者的计算机断层扫描(CT)或磁共振成像(MRI)以及患有前列腺癌的受试者的骨扫描。根据实体瘤应答评价标准(RECIST)v1.1标准并根据免疫相关应答标准(irRC)来评价疾病应答。使用前列腺癌临床试验工作组3(PCWG3)标准35来评价患有前列腺癌的受试者的疾病应答。

如本文所用，晚期实体瘤是指已广泛扩散到其他解剖部位或不再对治疗产生应答的恶性实体瘤。如本文所用，积聚是指通过药代动力学测量法测量的在重复给予抗CD40抗体时循环中积聚和增加的抗CD40抗体的量。

如本文所用，以“μg/kg”计的抗CD40抗体的剂量是指以微克/千克待施用抗体的受试者体重计的抗CD40抗体的量。

在一个总的方面，本发明涉及一种向有需要的受试者(优选地人类受试者)提供经临床上证实安全的抗CD40抗体的静脉内施用的方法。优选地，受试者被诊断为患有转移性或不可切除的任何类型晚期或难治性实体瘤恶性肿瘤。上述疾病的示例包括但不限于膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌与直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、唇癌与口腔癌、肝癌、黑色素瘤(包括皮肤黑色素瘤)、间皮瘤、非小细胞肺癌、非黑色素瘤皮肤癌、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、小细胞肺癌和甲状腺癌。

在一个实施方案中，一种向受试者提供经临床上证实安全的抗CD40抗体的施用和/或受试者(优选地人类受试者)体内的晚期实体瘤的安全治疗的方法，包括向受试者静脉内施用包含抗CD40抗体和药学上可接受的载体的药物组合物，其中所施用的抗CD40抗体的总剂量为每次施用50μg/kg至2500μg/kg，优选地75μg/kg至2000μg/kg mg/kg，任选地100μg/kg至1800μg/kg；200μg/kg至1500μg/kg；300μg/kg至1400μg/kg；400μg/kg至1300μg/kg；500μg/kg至1200μg/kg；600μg/kg至1100μg/kg；700至1000μg/kg、800至900μg/kg受试者的体重。

静脉内施用是指直接施用到静脉中。静脉内施用可经由注射(例如，在较高压力下使用注射器)或经由输注(例如，使用由重力提供的压力)进行。静脉内施用通常为用于在全身递送药物或治疗剂的最快速方法，因为药物或治疗剂通过循环携带。当抗CD40抗体的施用经由静脉内施用进行时，施用可通过静脉内输注或注射进行，并且优选地经由输注进行。例如，每次施用时待施用于受试者的抗CD40抗体的总剂量可在约30分钟至180分钟(优选地60分钟至120分钟，任选地90至120分钟，诸如30分钟、60分钟、90分钟、120分钟、150分钟或180分钟)的时间段内通过静脉内输注来施用。任选地，可在一定时间段内通过静脉内输注来施用该总剂量，该时间段为0分钟至3小时，优选地5分钟至150分钟、10分钟至2小时、15分钟至90分钟、20分钟至1小时、25分钟至55分钟、30分钟至50分钟、或35分钟至45分钟、或40分钟至45分钟；诸如约0分钟、约5分钟、约10分钟、约15分钟、约20分钟、约25分钟、约30分钟、约35分钟、约40分钟、约45分钟、约50分钟、约55分钟、约1小时、约90分钟、约2小时、约150分钟或约3小时。

选择每次施用的抗CD40抗体的总剂量，以便提供如临床试验中所确定的安全施用和/或通过静脉内施用的安全治疗。根据本发明的实施方案，当静脉内施用药物组合物时，每次施用时施用的抗CD40抗体的总剂量为例如50μg/kg、75μg/kg、100μg/kg、200μg/kg、300μg/kg、400μg/kg、500μg/kg、600μg/kg、700μg/kg、800μg/kg、900μg/kg、1000μg/kg、1100μg/kg、1200μg/kg、1300μg/kg、1400μg/kg、1500μg/kg、1800μg/kg或2000μg/kg或其间的任何剂量。

抗CD40抗体的总剂量的施用可每天一次、每周一次、每两周一次、每月一次、每六个月一次等，持续一天、一周、一个月、六个月、1年、2年或更长的时间段。例如，可在每次施用时通过单次静脉内注射来施用总剂量为75μg/kg至2000μg/kg的抗CD40抗体(例如，每天一次，持续至少一天)，即持续如下时间段：0分钟至3小时，优选地5分钟至150分钟、10分钟至2小时、15分钟至90分钟、20分钟至1小时、25分钟至55分钟、30分钟至50分钟、或35分钟至45分钟、或40分钟至45分钟；诸如约0分钟、约5分钟、约10分钟、约15分钟、约20分钟、约25分钟、约30分钟、约35分钟、约40分钟、约45分钟、约50分钟、约55分钟、约1小时、约90分钟、约2小时、约150分钟或约3小时。可将抗CD40抗体的多次施用(每次以75μg/kg至2000μg/kg的总剂量)施用给有需要的受试者。

适用于本发明方法的药物组合物被配制用于静脉内施用。适用于静脉内施用的制剂的示例包括但不限于可以溶解或悬浮在用于注射或输注的药学上可接受的载体中的溶液剂、混悬剂、乳剂和干燥产品。在一个优选的实施方案中，将用于本发明方法的包含抗CD40抗体的药物组合物配制为溶液。

包含在用于本发明的药物组合物中的抗CD40抗体的浓度可变化。通常，抗CD40抗体的浓度为1mg/mL至100mg/mL，优选地10mg/mL至90mg/mL、20mg/mL至80mg/mL、30mg/mL至70mg/mL、40mg/mL至60mg/mL、40mg/mL至50mg/mL，诸如1mg/mL、10mg/mL、20mg/mL、30mg/mL、40mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL或100mg/mL或其间的任何浓度。在一个实施方案中，抗CD40抗体的浓度为10mg/mL至30mg/mL，例如20mg/mL。在一个实施方案中，抗CD40抗体的浓度为20mg/mL至60mg/mL，例如40mg/mL。

用于本发明的药物组合物还包含一种或多种药学上可接受的载体，诸如广泛用于药物制造领域，并且尤其是抗体药物制造领域的那些。如本文所用，术语“载体”是指任何赋形剂、稀释剂、缓冲剂、稳定剂或本领域公知的用于药物制剂的其他材料。药学上可接受的载体为无毒的并且不应干扰活性成分的功效。药学上可接受的载体包括适用于本领域已知的药物组合物中的赋形剂和/或添加剂，例如，如在下列文献中列出的：“雷明顿：药学技术与实践(Remington:The Science&Practice of Pharmacy)”，第19版，Williams&Williams,(1995)和“医师案头参考(Physician's Desk Reference)”，第52版，Medical Economics,Montvale,N.J.(1998)，这些文献的公开内容全文以引用方式并入本文。

根据本发明的实施方案，用于本发明的药物组合物包含抗CD40抗体和药学上可接受的载体。在一些实施方案中，药学上可接受的载体包含一种或多种氨基酸(诸如L-组氨酸和甘氨酸)、一种或多种碳水化合物(诸如乳糖、麦芽糖、蔗糖和海藻糖)、一种或多种表面活性剂(诸如聚山梨酸酯20和聚山梨酸酯80)以及一种或多种醇(诸如D-山梨醇)。优选地，药物组合物的pH为5至6，优选地5.1至5.9、5.2至5.8、5.3至5.7、5.4至5.6、5.4至5.5，诸如5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9或6.0或其间的任何值的pH。

在一些实施方案中，用于本发明的药物组合物包含一种或多种氨基酸，诸如L-组氨酸和甘氨酸。氨基酸可以以如下浓度存在：1mM至40mM、1mM至20mM、5mM至35mM、10mM至30mM、15mM至25mM或20mM至40mM，或0.50％至2.00％重量/体积(w/v)，优选地0.75％(w/v)至1.75％(w/v)、1.00％(w/v)至1.50％(w/v)或1.00％(w/v)至1.25％(w/v)。例如，药物组合物可包含1mM、5mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM或40mM的浓度或其间的任何浓度的L-组氨酸或甘氨酸。在另一个示例中，药物组合物可包含0.50％(w/v)、0.75％(w/v)、1.00％(w/v)、1.25％(w/v)、1.50％(w/v)、1.75％(w/v)或2.00％(w/v)的浓度或其间的任何浓度的L-组氨酸或甘氨酸。

在一些实施方案中，用于本发明的药物组合物包含1％至10％重量/体积(w/v)、5％至10％(w/v)、8％至9％(w/v)、1.5％(w/v)至9.5％(w/v)、2％(w/v)至9％(w/v)、2.5％(w/v)至8.5％(w/v)、3％(w/v)至8％(w/v)、3.5％(w/v)至7.5％(w/v)、4％(w/v)至7％(w/v)、4.5％(w/v)至6.5％(w/v)、5％(w/v)至6％(w/v)或5％(w/v)至5.5％(w/v)的浓度的至少一种糖，诸如蔗糖、葡萄糖、纤维二糖或海藻糖。例如，药物组合物可包含1％(w/v)、1.5％(w/v)、2％(w/v)、2.5％(w/v)、3％(w/v)、3.5％(w/v)、4％(w/v)、4.5％(w/v)、5％(w/v)、5.5％(w/v)、6％(w/v)、6.5％(w/v)、7％(w/v)、7.5％(w/v)、8％(w/v)、8.5％(w/v)、9％(w/v)、9.5％(w/v)或10％(w/v)的浓度或其间的任何浓度的蔗糖、纤维二糖和/或海藻糖。

在一些实施方案中，用于本发明的药物组合物包含0.01％(w/v)至0.10％(w/v)、0.01％(w/v)至0.08％(w/v)、0.02％(w/v)至0.05％(w/v)、0.02％(w/v)至0.09％(w/v)、0.03％(w/v)至0.08％(w/v)、0.04％(w/v)至0.07％(w/v)或0.05％(w/v)至0.06％(w/v)的浓度的至少一种表面活性剂，诸如聚山梨酸酯80(PS80)或聚山梨酸酯20(PS20)。例如，聚山梨酸酯20和/或聚山梨酸酯80的浓度可以为0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％或0.1％(w/v)或其间的任何浓度。

在一些实施方案中，用于本发明的药物组合物包含0.01％(w/v)至0.10％(w/v)、0.01％(w/v)至0.08％(w/v)、0.02％(w/v)至0.05％(w/v)、0.02％(w/v)至0.09％(w/v)、0.03％(w/v)至0.08％(w/v)、0.04％(w/v)至0.07％(w/v)或0.05％(w/v)至0.06％(w/v)的浓度的至少一种多元醇，诸如甘露醇、木糖醇或D-山梨醇。例如，甘露醇、木糖醇或D-山梨醇的浓度可以为0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％或0.1％(w/v)或其间的任何浓度。

根据本公开，用于本发明的包含抗CD40抗体的药物组合物可通过本领域已知的任何方法制备。例如，可将抗CD40抗体与一种或多种药学上可接受的载体混合以获得溶液。该溶液可作为冷冻液体在-40℃±10℃至-70℃±20℃(负40℃±10℃至负70℃±20℃)范围内的受控温度下储存，并且在适当的小瓶中避光暴露直至施用于受试者。

根据本发明的实施方案，除了抗CD40抗体的施用之外，还可使用支持疗法(诸如输注前和输注后支持疗法)来治疗晚期实体瘤。在一些实施方案中，人类受试者在抗CD40抗体施用之前接受输注前药物。在一些实施方案中，人类受试者在抗CD40抗体施用之后接受输注后药物。在一些实施方案中，人类受试者在抗CD40抗体施用的同时接受支持疗法药物。这些药物的示例包括但不限于皮质类固醇、抗组胺剂、退热剂、H₂拮抗剂和止吐药。优选地，受试者接受所有皮质类固醇、抗组胺剂、退热剂、H₂拮抗剂和止吐药。任选地，受试者接受抗组胺剂、退热剂、H₂拮抗剂和止吐药。进一步任选地，受试者接受选自皮质类固醇、抗组胺剂、退热剂、H₂拮抗剂和止吐药中的一种或多种。

合适的皮质类固醇的示例包括地塞米松和甲泼尼龙。地塞米松可以以20mg施用并且甲泼尼龙可以以80mg施用。合适的抗组胺剂的示例包括苯海拉明和西替利嗪。西替利嗪可以以10mg施用。合适的退热剂的示例包括对乙酰氨基酚(扑热息痛)。对乙酰氨基酚可以以650至1000mg的剂量施用。合适的H₂拮抗剂的示例包括雷尼替丁。雷尼替丁可以以50mg施用。合适的止吐药的示例包括昂丹司琼。昂丹司琼可以以8mg施用。

根据本发明的实施方案，可分析多种因素以通过临床试验诸如本文所述的那些来确定特定剂量的抗CD40抗体是否提供安全的静脉内施用。例如，静脉内施用的抗CD40抗体的一定剂量的安全性可以通过以下各项来评估：免疫原性研究(例如，测量抗CD40抗体的抗体的产量)；确定受试者的剂量限制性毒性(DLT)；通过蛋白表达谱确定对血液生物标记诸如血清蛋白(例如，细胞因子、趋化因子和炎性蛋白)的影响；药代动力学研究(例如，浓度时间曲线下面积(AUC)和观察到的最大浓度(C_max)。静脉内施用的抗CD40抗体的安全性也可通过以下方式来监测：受试者的体检；观察局部注射部位反应、系统性注射相关反应和其他过敏反应；心电图；临床实验室测试；生命体征；以及监测其他不良事件，诸如输注相关反应(IRRS)。

在一些实施方案中，通过测量从受试者获得的样本中抗CD40抗体的抗体的量来确定经临床上证实安全的抗CD40抗体的施用和/或经临床上证实安全的晚期实体瘤的治疗。根据本公开，可通过本领域已知的任何方法(例如ELISA)来测量抗CD40抗体的抗体的量。

在一些实施方案中，通过评估药代动力学参数(诸如终末半衰期、目标饱和度、浓度时间曲线下面积(AUC)和观察到的最大浓度(C_max))来确定经临床上证实安全的抗CD40抗体的施用和/或经临床上证实安全的晚期实体瘤的治疗。根据本公开，通过本领域已知的任何方法来分析血清样本以确定抗CD40抗体的浓度。然后例如通过非房室分析(NCA)来分析这些药代动力学参数，以计算药代动力学参数，诸如AUC、C_max、终末半衰期(T_1/2)、静脉内施用后的总系统清除率(CL)、终末期的分布容积(Vz)、总系统清除率与生物利用度之比(CL/F)以及终末期的分布容积与生物利用度之比(V_z/F)。

在一些实施方案中，经临床上证实安全的抗CD40抗体的施用和/或经临床上证实安全的晚期实体瘤的治疗表现出靶点介导的药物处置并且血清浓度迅速下降。例如，当每次施用时施用的抗CD40抗体的总剂量为约600μg/kg受试者的体重时，抗CD40抗体的半衰期为约10至16小时，优选地约13小时，或者当每次施用时施用的抗CD40抗体的总剂量不小于1200μg/kg受试者的体重时，抗CD40抗体的半衰期为约20至28小时，优选地24小时。

在一些实施方案中，经临床上证实安全的抗CD40抗体的施用和/或经临床上证实安全的晚期实体瘤的治疗在1000μg/kg至1400μg/kg、1050μg/kg至1350μg/kg、1100μg/kg至1300μg/kg、1150μg/kg至1250μg/kg或1150μg/kg至1200μg/kg受试者的体重的浓度下实现了目标饱和度。例如，饱和浓度可以是1000μg/kg、1050μg/kg、1100μg/kg、1150μg/kg、1200μg/kg、1250μg/kg、1300μg/kg、1350μg/kg或1400μg/kg或其间的任何剂量。

根据本发明的实施方案，平均C_max和AUC_0-24h的增加在<1200μg/kg剂量下超过剂量比例并且在≥1200μg/kg剂量下与剂量成比例。在一些实施方案中，通过评估CD40受体占有率来确定经临床上证实安全的抗CD40抗体的施用和/或经临床上证实安全的晚期实体瘤的治疗。例如，按照归一化到输注前水平的方式测量输注抗CD40抗体后外周血液中的B细胞、T细胞和NK细胞的比例。根据本发明的实施方案，在输注抗CD40抗体后实现了B细胞、T细胞和自然杀伤(NK)细胞的非剂量依赖性边集，同时实现了剂量依赖性B细胞恢复，这与竞争物抗CD40激动剂抗体的观察结果相符。输注后NK细胞和T细胞在外周血液中的数量已减少，并且所测试的T细胞和自然杀伤(NK)细胞随后完全恢复。

在一些实施方案中，通过测量血清细胞因子和趋化因子的组合(包括但不限于MCP-1、IP-10、MIP-1β、MIP-1α、IFN-γ、TNF-α、IL12p70、IL-2、IL-6、IL-8和IL-12)来评估经临床上证实安全的抗CD40抗体的施用和/或经临床上证实安全的晚期实体瘤的治疗。这些数据补充了B细胞、T细胞、髓细胞和NK区室的流式细胞术研究以证实输注抗CD40抗体后细胞计数和/或活化状态的PD变化。根据本发明的实施方案，在输注抗CD40抗体之后，外周趋化因子(MCP-1、IP-10和MIP-1β)在外周血液中很明显，在输注后1至4小时达到峰值，这与髓细胞活化相符；还观察到细胞因子(IFN-γ、TNF-α和IL12p70)和趋化因子(MIP-1α和IL-8)，但程度较小；输注后IL-6的水平(其与其他CD40激动剂抗体诱导细胞因子风暴有关)不充足。

在一些实施方案中，通过使用适当的方法(诸如但不限于细胞表面活化标记诸如HLA-DR、CD54、CD80和CD86的流式细胞术)测量APC/DC发放授权和血液样本中的各种B和T细胞亚群的活化来评估经临床上证实安全的抗CD40抗体的施用和/或经临床上证实安全的晚期实体瘤的治疗。根据本发明的实施方案，在输注抗CD40抗体的抗CD40抗体后这些活化标记在活化的B细胞和单核细胞上增加。

缩写

β-hCG β-人绒毛膜促性腺激素

ADA 抗药物抗体

ADCC 抗体依赖性细胞介导的细胞毒性

AE (治疗期间出现的)不良事件

ALT 丙氨酸转氨酶

抗HCV 抗丙型肝炎抗体

APC 抗原呈递细胞

AST 天冬氨酸转氨酶

AUC 血清浓度对时间曲线下面积

BLRM 贝叶斯逻辑回归模型

CI 置信区间

C_max 观察到的最大血清浓度

CR 完全应答

CRF 病例报告表格(适用于该研究的纸质或电子结果)

CRS 细胞因子释放综合征

CT 计算机断层扫描

CTCAE 不良事件通用术语标准

DC 树突细胞

DLT 剂量限制性毒性

DOR 应答持续时间

ECG 心电图

ECOG 东部肿瘤协作组

eDC 电子数据捕集

EWOC 过高剂量控制的剂量递增方法

FcγR Fcγ-受体

FSH 促卵泡激素

GCP 良好的临床实践

GLP 良好的实验室实践

HBsAg 乙型肝炎表面抗原

hCD40tg 人CD40转基因

HIV 人免疫缺陷病毒

ICF 知情同意书

ICH 国际协调会议

IEC 独立伦理委员会

IRB 机构审查委员会

irCR 免疫相关完全应答

irRC 免疫相关应答标准

IRRs 输注相关反应(IRRS)

IT 瘤内

IV 静脉内

LLOQ 定量下限

MAD 最大施用剂量

mCRM 改进的连续重新评估方法

MRI 磁共振成像

MTD 最大耐受剂量

NCI 美国国家癌症研究所

NK 自然杀手

NSCLC 非小细胞肺癌

ORR 客观应答率

PCWG 前列腺癌临床试验工作组

PD 药效

PFS 无进展生存期

PK 药代动力学

POM 机制验证

PQC 产品质量投诉

PR 部分应答

RBC 红细胞

RECIST 实体瘤应答评价标准

RP2D 2期推荐剂量

SC 皮下

SET 安全性评价小组

SUSAR 疑似出乎意料严重的不良反应

TEAE 治疗期间出现的不良事件

T_max 观察到的最大血清浓度的时间

TRAF 肿瘤坏死因子受体活化因子

Vd 分布容积

WBC 白细胞

实施例

实施例1：ANTIBODY A在晚期实体瘤患者中的安全性、药代动力学和药效动力学的 1期开放标签研究

ANTIBODY A是靶向CD40的激动性人单克隆(IgG1)抗体，研究该抗体是为了治疗晚期实体瘤。该1期开放标签研究被设计为评价按静脉内输注的方式施用的ANTIBODY A在晚期实体瘤患者中的安全性、药代动力学和药效动力学并且确立2期推荐剂量(RP2D)和时间表。在该研究的第2部分中，将在患有非小细胞肺癌(NSCLC)、胰腺癌和皮肤黑色素瘤并且对于经批准且有效的疗法没有效果或不再符合条件的受试者的扩展队列中生成附加安全性数据并且将探讨ANTIBODY A的治疗功效。

研究设计概况

第1部分，剂量递增：将在患有晚期实体瘤的受试者中以改进的连续重新评估方法(mCRM)设计探讨从75μg/kg开始的递增ANTIBODY A剂量，以便确定2期推荐剂量(RP2D)。该剂量将增加不超过半对数(3.2倍)剂量增量。剂量递增将一直持续到定义ANTIBODY A的最大耐受剂量(MTD)和/或RP2D或已达到最大施用剂量(MAD)为止。

·MTD是通过在DLT评价期间在采用EWOC原则的统计模型(BLRM)指导下评价PK/PD和安全性数据而得出的最高ANTIBODY A剂量。

·MAD被定义为所施用的最高ANTIBODY A剂量。

·将在审查所有可用PK/PD、安全性和功效数据之后根据贝叶斯逻辑回归模型(BLRM)确定RP2D。

第2部分，剂量扩展：将在各大约30名受试者的扩展队列中以RP2D施用ANTIBODYA，以便进一步表征安全性和PK/药效动力学(PD)特征并且评估该药剂在患有NSCLC、胰腺癌和皮肤黑色素瘤的受试者中的功效。

第2部分(剂量扩展)将在RP2D确定之后开始以(1)收集关于ANTIBODY A在所选择的疾病人群中的安全性和PK/PD特征的附加信息以及(2)评价研究药物在患有NSCLC、胰腺癌和皮肤黑色素瘤的受试者中的临床活性。这些扩展队列将各由大约30名受试者组成。

生物标记子研究：将评估附加生物标记以定义ANTIBODY A对肿瘤中的先天和适应性免疫应答的影响。

图1中提供了本研究设计的图表。

受试者

受试者必须是18岁或以上并且具有0或1的东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态。

第1部分：患有转移性或不可切除的任何类型晚期或难治性实体瘤恶性肿瘤的受试者符合第1部分中的入组条件。这些受试者已接受所有标准治疗方案或不再符合附加标准治疗方案的条件。

第2部分：患有经组织学或细胞学确诊的NSCLC、胰腺癌或皮肤黑色素瘤的受试者符合第2部分中的入组条件。这些受试者队列包括例如

队列2A：

·经组织学或细胞学确诊的NSCLC

·IV期疾病

·既往接受过至少2线经批准的全身性疗法，其中1种疗法必须是含铂方案

·按照RECIST v1.1，有至少1个可测量肿瘤病变

队列2B：

·经组织学或细胞学确诊的胰腺腺癌

·不可切除、局部晚期(III期)或转移性(IV期)疾病

·既往接受过至少1线经批准的全身性疗法

·按照RECIST v1.1，有至少1个可测量肿瘤病变

队列2C：

·经组织学或细胞学确诊的皮肤黑色素瘤

·不可切除(III期)或转移性(IV期)疾病

·既往接受过至少1线经批准的全身性疗法

·按照RECIST v1.1，有至少1个可测量肿瘤病变

第2部分的研究正在进行中。

研究试剂

按冻干饼或冷冻液体的形式提供ANTIBODY A。该制剂包含20mg/mL或40mg/mLANTIBODY A。

剂量和施用

将从75μg/kg的起始剂量开始逐步递增剂量。通过静脉内输注进行施用。初始施用时间表是28天周期每14天一次(Q14d)(第1天和第15天)。最初通过2小时内的静脉内输注进行施用。

推荐的输注前和输注后支持疗法

在每次输注ANTIBODY A之前，受试者将接受如表1中所指出的输注前药物。

表1：输注前药物

IV＝静脉内

^a如果安全性评价小组(SET)未明确要求，则为可选的图2中展示了该研究设计以及预输注和不预输注皮质类固醇的队列。

在每次输注ANTIBODY A后，在既往施用期间或之后出现ANTIBODY A相关毒性的受试者应接受如表2中所指出的输注后药物。

表2：输注后药物^a

药物	剂量	施用
			皮质类固醇<sup>b</sup>	地塞米松(4mg)每天两次<sup>c</sup>	如临床指示
抗组胺剂	苯海拉明(50mg)或等同物	如临床指示
			退热剂	对乙酰氨基酚(650mg至1,000mg)或等同物	如临床指示
止吐药	昂丹司琼(8mg)或等同物(长效或短效剂)	如临床指示

IV＝静脉内

^a在不存在JNJ-64457107相关毒性的症状的情况下，可在输注结束后给予输注后药物长达48小时

^b研究人员应使用临床判断，确定是否需要另外的皮质类固醇支持。

^c在施用第一剂研究药物之后12小时开始口服或IV。推荐限制在JNJ-64457107施用之后的48小时。

评估

安全性评价

安全性评估将基于不良事件报告和临床实验室测试结果的医学审查、心电图(ECG)、生命体征测量值、体检、ECOG体能状态以及各时间点的其他安全性评价。

药代动力学和免疫原性

对于参与该研究的所有受试者而言，使用血液或血清样本评价ANTIBODY A的PK以及免疫原性。将收集静脉血液样本以用于测量ANTIBODY A的血清浓度(大约5mL)并且用于评价抗ANTIBODY A抗体(组合的PK和免疫原性样本为大约7.5mL，否则单独的免疫原性样本为5mL)。将收集静脉血液样本并且在同时收集PK和免疫原性样本的时间点将每份血清样本分成3等份(PK、抗ANTIBODY A抗体和备用各1份)，否则在仅收集PK样本时将每份血清样本分成2等份。

由申办方或在申办方的监督下使用验证过的、特异性的和灵敏的测定法来分析血清样品以确定ANTIBODY A的浓度。将由申办方或在申办方的监督下使用MescoScaleDiscovery(MSD)平台验证的测定法进行ANTIBODY A的抗体的检测和表征。收集用于检测ANTIBODY A的抗体的所有样本也将针对ANTIBODY A血清浓度进行评价，以使得能够解释抗体数据。

生物标记

将评价生物标记以研究ANTIBODY A的分子作用模式以及探究可以预测疗法应答的生物标记。该研究的生物标记目标涵盖CD40受体占有率、先天性免疫应答、CD40活化标记、Fc依赖性效应子功能以及肿瘤组织上的CD40表达的研究。可选的生物标记子研究将使用用药前和用药后活检组织来评价CD40参与后免疫细胞的变化，目标是识别合并ANTIBODYA的联合用药机会。

效率评价

效率评价将包括所有受试者的计算机断层扫描(CT)或磁共振成像(MRI)以及患有前列腺癌的受试者的骨扫描。将根据实体瘤应答评价标准(RECIST)v1.1标准并根据免疫相关应答标准(irRC)来评价疾病应答。将使用前列腺癌临床试验工作组3(PCWG3)标准35来评价患有前列腺癌的受试者的疾病应答。将探讨PK与PD之间的关系(包括受体占有率)并将其报告于单独的报告中。

统计方法

使用描述性统计来汇总数据。连续变量将根据需要使用观察值的数量、平均值、标准偏差、中值和范围来汇总。分类值将根据需要使用观察值的数量和百分比来汇总。使用Kaplan-Meier方法估计事件发生时间终点的分布。

结果

人口统计和处置：95名18至80岁(中值59岁)的患者被纳入给予皮质类固醇的7个队列(n＝50，75μg/kg至2000μg/kg)和不给予类固醇的5个队列(n＝45，75μg/kg至1200μg/kg)并且接受1至26(中值3)个疗程的ANTIBODY A(图2)。大部分患者因进展性疾病而中断治疗(n＝62，76％)。

安全性结果

大多数不良事件(AE)为1级(G1)或2级(G2)并且只有有限数量的患者出现≥3级(G3)AE，如表3中所示。

表3.安全性总结(所有接受治疗的分析组)

如图3所示，51％的患者中报告了输注相关反应(IRR)(G1-2：50％；G3：1％)。最常见IRR(>10％)是瘙痒症(31％)、皮疹(15％)、发冷(13％)和脸红(12％)。基于高瘙痒症发生率，实施新的用药前计划。在每次ANTIBODY A输注的第-3天至第+3天进行西替利嗪和孟鲁司特的用药前/用药后施用，并且结果证实显著减少了IRR并且未报告瘙痒症。

报告了两例剂量限制性毒性(DLT)：采用1200μg/kg且给予皮质类固醇时G3头痛持续5天；以及采用1200μg/kg且不给予皮质类固醇时G3ALT/AST+G2胆红素升高。

药动学结果

ANTIBODY A的初步PK似乎表现出靶点介导的药物处置并且血清浓度迅速下降(半衰期：600μg/kg下约13小时；≥1200μg/kg剂量下约24小时)(图4)。在多次双周给药之后未观察到积聚。基于有限的数据，在约1200μg/kg下记录了目标饱和度。平均C_max和AUC_0-24h(图5)的增加在<1200μg/kg剂量下超过剂量比例并且在≥1200μg/kg剂量下与剂量成比例。免疫原性数据显示出ANTIBODY A的抗体的低发生率(大约10.5％)。

药效动力学结果

在ANTIBODY A输注后观察到B细胞、T细胞和自然杀伤(NK)细胞的非剂量依赖性边集，以及与竞争物抗CD40激动剂抗体的观察结果相符的剂量依赖性B细胞恢复。除了最低剂量(75μg/kg)以外，在所测试的所有剂量下输注后，NK细胞和T细胞在外周血液中减少；两种细胞的水平到研究第8天时都完全恢复。参见图6A至C。

外周趋化因子(MCP-1、IP-10和MIP-1β)在外周血液中很明显，在输注后1至4小时达到峰值，这与髓细胞活化相符。还观察到细胞因子(IFN-γ、TNF-α和IL12p70)和趋化因子(MIP-1α和IL-8)，但程度较小。在输注ANTIBODY A后IL-6的水平(其与其他CD40激动剂抗体诱导细胞因子风暴有关)不充足。参见图7A-I。

外周B细胞的表型染色显示出活化/成熟标记(HLA-DR、CD54、CD80和CD86)的荧光强度的增加，这与来自其他激动剂抗体的数据相符(图8A至D)。

临床活性结果

临床活性的早期证据包括肾细胞癌患者表现出部分应答以及10名患者具有≥6个月的长期稳定疾病。

讨论

CD40激动剂ANTIBODY A具有可管理的安全性特性及有利的PK和PD特性。初步ANTIBODY A PK呈线性并且在≥1200μg/kg剂量下与剂量成比例，变异性为中等程度。ANTIBODY A在输注后引起所选择的趋化因子(尤其是MCP-1和IP-10)水平升高以及B细胞、T细胞和NK细胞边集并随后恢复。剩余的外周B细胞表现出活化/成熟标记增加。

本领域的技术人员应当理解，在不脱离本发明的广义的发明构思的情况下，可对上述实施方案作出修改。因此，应当理解，本发明不局限于所公开的具体实施方案，但本发明旨在涵盖在本发明的实质和范围内的修改，如由具体描述所定义。

Claims

1.一种向被诊断为患有晚期实体瘤的人类受试者提供经临床上证实安全的抗CD40抗体的施用的方法，所述方法包括向所述受试者静脉内施用包含所述抗体和药学上可接受的载体的药物组合物，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含分别为SEQ ID NO:1、2和3的重链互补决定区(HCDR)HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含分别为SEQ ID NO:4、5和6的轻链互补决定区(LCDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列，并且其中所施用的所述抗体的总剂量为每次施用50μg/kg至2500μg/kg，优选地75μg/kg至2000μg/kg所述受试者的体重。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链(HC)和具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的轻链(LC)。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中每次施用时施用的所述抗CD40抗体的所述总剂量为75μg/kg、200μg/kg、400μg/kg、600μg/kg、700μg/kg、800μg/kg、900μg/kg、1000μg/kg、1100μg/kg、1200μg/kg、1300μg/kg、1400μg/kg、1500μg/kg、1800μg/kg或2000μg/kg所述受试者的体重或其间的任何剂量。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中在约2小时内向所述人类受试者静脉内施用所述药物组合物的所述总剂量，优选地重复地、更优选地每两周一次向所述人类受试者静脉内施用所述药物组合物。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，所述方法还包括在所述抗CD40抗体的所述施用之前或之后向所述人类受试者施用治疗剂，优选地所述治疗剂选自皮质类固醇、抗组胺剂、退热剂、H₂拮抗剂和止吐药。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，所述方法还包括向所述受试者联合施用有效量的西替利嗪和孟鲁司特中的至少一种和所述抗CD40抗体，从而减少输注相关反应(IRRS)或瘙痒症反应，优选地在不早于所述抗CD40抗体的所述施用之前3天并且不晚于所述抗CD40抗体的所述施用之后3天施用西替利嗪和孟鲁司特。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中当每次施用时施用的所述抗CD40抗体的所述总剂量为600μg/kg所述受试者的体重时，所述抗CD40抗体具有约10至16小时、优选地约13小时的体内半衰期，或者当每次施用时施用的所述抗CD40抗体的所述总剂量不小于1200μg/kg所述受试者的体重时，所述抗CD40抗体具有约20至28小时、优选地24小时的体内半衰期。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中当重复地向所述人类受试者静脉内施用所述药物组合物时，所述人类受试者未积聚所述抗CD40抗体。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中当每次施用时施用的所述抗CD40抗体的所述总剂量为约1000至1400μg/kg所述受试者的体重、优选地1200μg/kg所述受试者的体重时，所述抗CD40的所述施用产生目标饱和度。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述抗CD40抗体的所述施用在所述人类受试者的外周血液中引起选自B细胞、T细胞和自然杀伤(NK)细胞的一个或多个细胞的边集以及随后这些细胞的恢复。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述抗CD40抗体的所述施用在所述人类受试者的外周血液中实现选自MCP-1、IP-10、MIP-1β、MIP-1α和IL-8的一种或多种趋化因子的增加。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述抗CD40抗体的所述施用在所述人类受试者的外周血液中实现选自IFN-γ、TNF-α和IL12p70的一种或多种细胞因子的增加。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述抗CD40抗体的所述施用引起外周血液B淋巴细胞上的一种或多种活化标记的增加，其中所述活化标记选自HLA-DR、CD54、CD80和CD86。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述人类受试者具有至少部分应答或具有持续6个月或更多月的长期稳定疾病。

16.一种向被诊断为患有晚期实体瘤的人类受试者提供经临床上证实安全的抗CD40抗体的施用的方法，所述方法包括向所述受试者静脉内施用包含所述抗体和药学上可接受的载体的药物组合物，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含分别为SEQ IDNO:1、2和3的重链互补决定区(HCDR)HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含分别为SEQ ID NO:4、5和6的轻链互补决定区(LCDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列，其中所施用的所述抗体的总剂量为每次施用约600μg/kg至约1200μg/kg，诸如600μg/kg、700μg/kg、800μg/kg、900μg/kg、1000μg/kg、1100μg/kg、1200μg/kg所述受试者的体重，优选地所述人类受试者被诊断为患有非小细胞肺癌(NSCLC)、胰腺癌或皮肤黑色素瘤。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。

18.根据权利要求16或17所述的方法，其中所述抗体包含具有SEQ IDNO:9的氨基酸序列的重链(HC)和具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的轻链(LC)。

19.一种包含抗CD40抗体和药学上可接受的载体的药物组合物，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含分别为SEQ ID NO:1、2和3的重链互补决定区(HCDR)HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含分别为SEQ ID NO:4、5和6的轻链互补决定区(LCDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列，并且其中所施用的所述抗体的总剂量为每次施用50μg/kg至2500μg/kg，优选地75μg/kg至2000μg/kg所述受试者的体重。

20.一种用于药物中的抗CD40抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含分别为SEQ ID NO:1、2和3的重链互补决定区(HCDR)HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含分别为SEQ ID NO:4、5和6的轻链互补决定区(LCDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列，并且其中所施用的所述抗体的总剂量为每次施用50μg/kg至2500μg/kg，优选地75μg/kg至2000μg/kg所述受试者的体重。

21.一种用于治疗晚期实体瘤的抗CD40抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含分别为SEQ ID NO:1、2和3的重链互补决定区(HCDR)HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含分别为SEQ ID NO:4、5和6的轻链互补决定区(LCDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列，并且其中所施用的所述抗体的总剂量为每次施用50μg/kg至2500μg/kg，优选地75μg/kg至2000μg/kg所述受试者的体重。