CN113893348A - Pth1r作为靶点在治疗或预防非酒精性脂肪性肝纤维化中的应用 - Google Patents

Pth1r作为靶点在治疗或预防非酒精性脂肪性肝纤维化中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了PTH1R作为靶点在治疗或预防非酒精性脂肪性肝纤维化中的应用。本发明通过动物实验证明PTH1R敲除可以降低NASH小鼠血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶的水平，降低NASH小鼠肝组织炎症基因表达的升高。本发明通过细胞实验证明PTH1R的敲除可以显著下降HSC细胞的增殖力，降低HSC细胞中多种细胞活化相关基因的表达，表明PTH1R参与NASH疾病进展中胶原纤维沉积，抑制PTH1R的表达可以显著地减缓或预防NASH肝纤维化、肝硬化的发生。本发明提供了PTH1R作为靶点在治疗或预防NASH肝纤维化中的新用途，为临床上NASH肝纤维化疾病的防治提供了新的策略。

Description

PTH1R作为靶点在治疗或预防非酒精性脂肪性肝纤维化中的 应用
技术领域
本发明涉及PTH1R作为靶点在治疗或预防非酒精性脂肪性肝纤维化中的应 用，属于生物医药技术领域。
背景技术
随着肥胖流行和生活方式的改变，非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fattyliver disease，NAFLD)发病率呈逐年递增，威胁全球近四分之一人口的医疗健 康。脂肪性肝损伤造成肝细胞过氧化应激、内质网应激等，导致肝细胞死亡，并 进一步形成了肝脂肪积蓄-肝损伤-胰岛素抵抗-脂质代谢紊乱的恶性循环。肝细胞 损伤激发炎症反应，趋化免疫细胞浸润，诱发炎症形成。既往报道NAFLD进展 过程中脂质过氧化、炎症小体与肠道微生物的相互作用、祖细胞扩增、适应性免 疫等多种机制均可最终诱导肝星状细胞(Hepaticstellate cells，HSCs)激活或转 分化为肌纤维母细胞，表达平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin，α-SMA) 及细胞珠蛋白，分泌大量细胞外基质，尤其是胶原纤维(I型和III型)，诱导肝 纤维化形成。因此，脂肪性肝细胞损伤的持续及炎症应答将诱导肝纤维化持续进 展,是否伴有肝纤维化已成为非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholicsteatohepatitis， NASH)远期预后的重要指标。目前认为肝纤维化是一种动态、早期可逆的病程， 抑制脂毒性环境下HSC的活化及胶原分泌是有效的治疗策略。但是，尚无公认 的药物治疗方案，尤其是针对进展到肝纤维化甚至肝硬化的患者，缺乏早期有效 的干预将威胁患者生命。针对这一高危人群的抗肝纤维化药物研发、筛选治疗靶 点是现阶段亟待解决的临床问题。
甲状旁腺激素1型受体(parathyroid hormone 1receptor，PTH1R)是一类B 类G蛋白偶联受体，且在HSC细胞中表达。目前发现PTH1R与其配体甲状旁 腺激素(parathyroidhormone，PTH)结合后可参与调控多种重要的病理生理过 程。而肥胖患者血清PTH升高，和人体脂肪含量、NAFLD发病率呈独立正相关 关系，是重度肥胖患者罹患NASH的预测因素之一。基于PTH1R的激活机制以 及其对多种疾病的调控作用，研发以PTH1R信号级联反应为靶点的药物是重要 的肝纤维化治疗的应用方向。但目前PTH1R在NASH肝纤维化中的作用机制尚 不清楚。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：目前尚无有效的能够治疗NASH肝纤维化、 肝硬化的药物。
为了解决上述技术问题，本发明提供了抑制PTH1R表达和/或活性的试剂、 抑制PTH1R/PTH信号通路的试剂在制备治疗和/或预防非酒精性脂肪性肝纤维 化的药物中的应用。
优选地，所述的抑制PTH1R表达和/或活性的试剂包括PTH1R的特异性干 扰RNA或PTH1R的抑制剂。
优选地，所述的PTH1R的特异性干扰RNA为：正义链序列如SEQ ID NO： 1(GCACACAGCAGCCAACAUATT)所示、反义链序列如SEQ ID NO：2 (UAUGUUGGCUGCUGUGUGCTT)所示的siRNA。
优选地，所述的PTH1R的抑制剂包括PTH1R中和抗体。
优选地，所述药物包括医学上可接受的载体和有效量的活性成分，所述活性 成分为抑制PTH1R表达和/或活性的试剂或抑制PTH1R/PTH信号通路的试剂。
本发明通过动物实验证明，在不同疾病进展阶段，PTH1R敲除可以降低 NASH小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的水平。降低NASH 小鼠肝组织炎症基因表达的升高。组织染色显示敲除PTH1R可以显著减轻 NASH小鼠的肝纤维化程度，而激活PTH1R信号可以明显加重NASH小鼠肝脏 胶原纤维沉积。说明PTH1R信号活化对预防或治疗NASH肝纤维化具有重要的 调控作用。
本发明通过细胞实验证明，在肝纤维化进程中PTH1R在HSC细胞中表达水 平显著升高。PTH1R的敲除可以显著下降HSC细胞的增殖力，降低HSC细胞 中多种细胞活化相关基因的表达，如α-SMA、I型胶原纤维的分泌等。同时， PTH1R敲除抑制HSC细胞肿瘤生长因子β(TGFβ)的表达，从而显著抑制HSC 细胞的自我放大级联反应；相反的，激活PTH1R信号可以促进HSC细胞活化， 增加细胞增殖能力，促进大量胶原纤维分泌。说明PTH1R参与NASH疾病进展 中胶原纤维沉积，抑制PTH1R的表达可以显著地减缓或预防NASH肝纤维化、 肝硬化的发生。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
本发明提供了PTH1R作为靶点在治疗或预防NASH肝纤维化中的新用途， 特别是针对在脂毒性条件下抑制HSC细胞活化、增殖及分泌胶原纤维，为临床 上NASH肝纤维化疾病的防治提供了新的策略。
附图说明
图1为NASH患者肝组织中PTH1R表达情况，其中，A、B分别为人类肝 纤维化组织样本单细胞测序数据的聚类分析图和小提琴分析图，C为NASH患 者肝组织样本中PTH1R与纤维化标记蛋白α-SMA的免疫荧光共定位染色分析；
图2为NASH肝纤维化模型中PTH1R的表达情况，其中，A为PTH1R-GFAP KO小鼠及其野生对照小鼠肝脏原代肝细胞(PH)、星状细胞(HSC)、内皮细 胞(LESC)中PTH1R的mRNA水平，B为PTH1R-GFAP KO小鼠及其野生对 照小鼠肝脏HSC细胞中PTH1R的蛋白水平，C为PTH干预小鼠及干预对照小 鼠肝脏HSC细胞中PTH1R的表达水平；
图3为NASH肝纤维化模型下的PTH1R-GFAP KO小鼠及其野生对照小鼠 肝脏组织H&E、天狼星红染色及马松染色结果图；
图4为NASH肝纤维化模型下的PTH1R-GFAP KO小鼠及其野生对照小鼠 血清中ALT含量(A)和AST含量(B)的对比图；
图5为NASH肝纤维化模型下的PTH1R-GFAP KO小鼠及其野生对照小鼠 肝脏组织α-SMA、Col1a1、IL-1β、TNF-α及IL-6的mRNA表达水平；
图6为在NASH肝纤维化模型诱导后，PTH干预下PTH1R信号激活小鼠及 其野生对照小鼠肝脏组织H&E、天狼星红染色、马松染色、F4/80及TUNEL结 果图；
图7为在NASH肝纤维化模型诱导后，PTH干预下PTH1R信号激活小鼠及 其野生对照小鼠肝脏组织α-SMA、Col1a1、IL-1β、TNF-α及IL-6的mRNA表达 水平。
图8为HSC细胞中siRNA-PTH1R敲除组及其对照转染组细胞的增殖能力检 测图；
图9为HSC细胞中siRNA-PTH1R敲除组及其对照转染组(A)、中和抗体 PTH1R组及其对照组(B)细胞中胶原标记蛋白α-SMA的蛋白表达水平与siRNA-PTH1R敲除组及其对照转染组(C)胶原标记蛋白α-SMA的mRNA表达 水平以及siRNA-PTH1R敲除组及其对照转染组(D)胶原标记蛋白Col1a1的 mRNA表达水平。
图10为PTH干预的HSC细胞及其对照组细胞的增殖能力检测图。
图11为PTH干预的HSC细胞及其对照组细胞的I型胶原、α-SMA及TGFβ 蛋白的表达水平；
以上各图中，*表示经过统计学分析，两组间比较具有显著性差异，P＜0.05。
具体实施方式
为使本发明更明显易懂，兹以优选实施例，并配合附图作详细说明如下。
实施例1
本实施例提供了PTH1R作为靶点在治疗或预防NASH肝纤维化中的应用：
(一)动物来源及小鼠模型的构建
动物来源：
8周龄SPF级C57BL/6小鼠购自南京大学模式动物研究所(合格证号 201603265)。小鼠普通饲料购买于扬州大学研究中心，成分约为碳水化合物70％、 脂肪10％、蛋白质20％。NASH纤维化模型饲料(货号A02082002)购于Harlan Teklad公司。动物饲养于中国科学院上海分院无特定病原体级(SPF)级实验动 物中心，实验过程中动物操作遵循2006年科学技术部制定的《关于善待实验动 物的指导性意见》。
小鼠模型的构建：
Cre/LoxP技术构建肝脏HSC细胞特异性敲除PTH1R小鼠模型：白蛋白启 动子介导的Cre重组酶(GFAP-Cre)纯合子转基因小鼠由美国Jackson实验室引 进(Stock number:016992)，PTH1R(flox/flox)转基因小鼠委托南京大学模式动 物研究所构建。首先，利用Cas9/RNA system gene targeting技术，构建针对基因 的gRNA，指导Cas9蛋白在crRNA引导序列靶标的特定位点剪切DNA双链。 并制作一个携带靶位点同源臂及条件性敲除元件的Donor vector，与Cas9 system 共同注射，在Cas9 system切开DNA链后通过homologousrecombination将条件 性敲除元件重组到靶位点，注射所用的受精卵为C57BL/6J背景，通过PCR和测 序对出生的小鼠进行基因鉴定，得到F0代阳性小鼠。然后，将PTH1R(flox/flox)转基因小鼠与GFAP-Cre转基因小鼠进行杂交,培育繁殖出PTH1R(flox/+) /GFAP-Cre+基因小鼠。利用PTH1R(flox/+)/GFAP-Cre+转基因小鼠与PTH1R (flox/flox)转基因小鼠进行杂交，繁殖培育出在肝脏内特异敲除PTH1R基因 的PTH1R(flox/flox)/GFAP-Cre+鼠，标记为GFAP-PTH1R KO。另外PTH1R (flox/flox)/GFAP-Cre-鼠用作对照，标记为WT(wild type)。各组小鼠以NASH 及其对照饲料喂养构建肝纤维化模型，干预后留取血清样本，同时留取部分组织 于4％多聚甲醛浸泡用于制作冰冻切片及组织蜡块，其余部分用液氮快速冰冻后并转移至-80℃冰箱中冻存备用。
(二)临床样本来源及检测方法
临床样本：
人类肝硬化组织样本由南京大学附属鼓楼医院伏晓博士合作提供，纳入标 准：选取2015年9月至2021年3月就诊于南京鼓楼医院并接受肝脏切除手术或 者胆囊手术的患者资料。经临床及病理诊断为有或无肝硬化的患者样本。样本收 集过程中受试者均已签署知情同意书并经伦理委员会批准。
检测方法：
1.原代肝HSC细胞提取
使用肝脏两步灌注法，先将小鼠浸没入75％乙醇中消毒10秒，取出后放入 超净台中的托盘上。用剪刀“十”字形切口开腹，切口最上面剪开肋骨，打开胸腔。 将小肠拨到小鼠的左边，显露出下腔静脉和肝门静脉。在胸腔中结扎下腔静脉， 将恒流泵出水管端的针从下向上插入下腔静脉，再用另外一根线固定针头。剪开 肝门静脉，用预热的灌注液1灌注肝脏，速度约10mL/分钟，灌注时间约7分 钟。用预热的灌注液2灌注肝脏，速度约10mL/分钟，灌注时间约10分钟。取 下肝脏组织后离心得到细胞悬液，用percoll分离法获得纯化的HSC细胞，细胞 培养条件是DMEM培养基+10％胎牛血清，37℃，5％CO2。
灌注液配方如下：
灌注液1：33mM KCl，0.441mM KH2PO4，4.17mM NaHCO3，137.93mM NaCl，0.338mMNa2HPO4，4.75mg/mL D–葡萄糖，0.5mM乙二醇双(2-氨基乙 基醚)四乙酸。用1mM氢氧化钠调节至pH 7.4，0.22μm滤器无菌过滤。
灌注液2：3mM CaCl2，1mM MgCl2，5.33mM KCl，0.441mM KH2PO4，4.17 mM NaHCO3，137.93mM NaCl，0.338mM Na2HPO4，4.75mg/mL D–葡萄糖， 0.72％(w/v)牛血清白蛋白，0.005％Ⅳ型胶原酶。用1mM氢氧化钠调节至pH 7.4，0.22μm滤器无菌过滤。
2.血清AST、ALT测定
根据商业试剂盒说明书，按照下表配制检测：
Figure BDA0003331242810000061
血清ALT的计算公式如下：
ALT(U/L)＝(▲A样本管/分钟-▲A空白管/分钟)×K；
其中，K＝4180(标准品较准理论K值)。
AST计算同上。
2.苏木素-伊红(H&E)染色
肝脏组织用4％多聚甲醛固定24小时，石蜡包埋，切成4微米的切片脱蜡后 进行苏木素染色，经脱水、分化及封片步骤后利用显微镜进行图像采集分析。
3.天狼星红染色
肝脏石蜡包埋切片同上，滴入配制好天狼星红染液100μl(0.5％天狼星红染 液与饱和苦味酸溶液1：9混匀，加盐酸调节PH至小于4)，37℃孵育2h。 经脱水、透明及封片步骤后利用显微镜进行图像采集分析。
4.马松(Masson)染色
肝脏石蜡包埋切片同上，脱蜡后分别经重铬酸钾、铁苏木素、丽春红、磷钼 酸及苯胺蓝染色及超纯水冲洗，无水乙醇脱水后封片并利用显微镜进行图像采集 分析。
5.F4/80荧光染色
肝脏石蜡包埋切片同上，脱蜡后枸橼酸盐缓冲液微波抗原修复，封闭后滴加 F4/80一抗(美国CST公司)4℃过夜，洗涤后二抗敷育，DAPI复染，梯度酒精 脱水，二甲苯透明，抗荧光淬灭封片剂封片。荧光显微镜下观察，可选用的激发 波长范围为450-500nm，发射波长为515-565nm(绿色荧光)。
6.TUNEL染色
肝脏石蜡包埋切片同上，脱蜡后滴加蛋白酶K工作液，漂洗后滴加平衡液 工作液，再滴加50μL的TdT酶工作液，加盖玻片于37℃湿盒避光反应。DAPI 复染，抗荧光淬灭封片剂封片。荧光显微镜下观察，可选用的激发波长范围为 450-500nm，发射波长为515-565nm(绿色荧光)。
7.α-SMA荧光染色
肝脏石蜡包埋切片同上，脱蜡后枸橼酸盐缓冲液微波抗原修复，滴加α-SMA 一抗(美国CST公司)4℃过夜，洗涤后二抗敷育，DAPI复染，梯度酒精脱水， 二甲苯透明，抗荧光淬灭封片剂封片。荧光显微镜下观察，可选用的激发波长范 围为450-500nm，发射波长为515-565nm(绿色荧光)。
8.实时定量PCR
使用TRIzol(美国Invitrogen公司，货号15596018)裂解小鼠细胞及肝脏组 织，根据TaKaRa公司逆转录试剂盒逆转录成cDNA,使用引物设计软件Primer 5 设计PCR引物，并使用NCBI网站BLAST功能检测PCR引物特异性。在冰上 加样完成后，将反应板放入LightCycler 480荧光定量PCR仪中，设置如下反应 参数：
过程 反应条件 时间
预变性 95℃ 5min
扩增 95℃ 15s
(循环数：40) 60℃ 1min
60℃ 34s
95℃ 5s
溶解曲线 65℃ 1min
冷却 40℃ 30s
最后，计算相对定量：以GAPDH为内参，采用相对定量方法即2-ΔΔCT法计算目 的基因相对含量。
RT-PCR引物序列如下：
Figure BDA0003331242810000081
9.蛋白免疫印迹技术(Western blots)
利用RIPA裂解液(含1mM磷酸酶抑制剂+1mM蛋白磷酸酶抑制剂)提取 肝组织或细胞中蛋白，进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酞氨凝胶电泳(SDS-PAGE)， 再Bio-Rad仪器进行转膜(200mA),封闭剂封闭后加入相应浓度一抗(稀释比)， PTH1R(1：1000)、α-SMA(1：1000)、Collagen I(1：1000)、TGFβ1(1： 1000)及GAPDH(1：2000)；4℃摇床过夜。洗涤后敷育二抗。将条带浸泡入 发光液中，然后置于自动曝光机中，读取条带图像并按样本名称保存；利用Image J软件分析图像各泳道条带灰度值，以目的蛋白/内参蛋白计算相对灰度值，并进 行组间比较。
10.统计学方法
各组数据结果均采用平均数±标准误方法表示；各组间差异比较使用单因素 方差分析，两两比较采用最小显著差异法。数据分析采用SPSS 22.0统计软件进 行，P＜0.05(双侧)认为有统计学差异。
(三)实验及结果
1.确定PTH1R在肝纤维化进程中主要的应答细胞类型
如图1显示，基于单细胞测序检测技术的生物学信息分析的聚类分析图(图 1A)和小提琴分析图(图1B)显示，在纤维化进程中人类肝脏组织中PTH1R 主要在HSC细胞中表达水平显著增加。免疫荧光共定位的染色分析显示在NASH 患者肝组织中，PTH1R与纤维化标记蛋白α-SMA存在显著的共定位关系，如图 1C显示。提示HSC细胞是PTH1R在NASH肝纤维化进程中的主要作用细胞。
2.PTH1R-GFAP KO小鼠与PTH干预激活PTH1R小鼠模型的建立
取成年小鼠肝脏组织进行Western blotting分析，相比于野生型WT小鼠， 结果如图2A-B显示，KO小鼠原代HSC细胞中PTH1R蛋白表达显著降低，而 不是总细胞或肝细胞；同时，图2C显示PTH干预小鼠原代HSC中PTH1R表达 水平明显高于对照组小鼠。说明成功建立了PTH1R-GFAP KO小鼠与PTH干预 激活PTH1R的小鼠模型。
3.PTH1R-GFAP KO小鼠可以抵抗NASH诱导的肝纤维化形成
饮食诱导NASH纤维化模型并进行组织学评估，结果如图3显示，HE组织 染色显示NASH模型小鼠肝组织严重脂肪变性、炎症浸润，肝索结构明显紊乱、 界板形成，天狼星红染色及马松染色显示NASH模型小鼠肝组织胶原纤维显著 沉积、肝纤维化形成。相较之下，PTH1R-GFAP KO小鼠肝组织中的胶原沉积明 显减轻，由此看出，HSC中PTH1R在NASH肝纤维化中是有力的干预点。同时， 结果如图4所示，NASH肝纤维化模型小鼠肝脏血清肝酶ALT、AST较WT小 鼠显著升高，而PTH1R-GFAP KO小鼠中肝酶水平显著下降。提示敲除PTH1R 可以显著降低NASH肝纤维化小鼠肝酶水平。
4、PTH1R-GFAP KO对NASH小鼠肝脏炎症反应的影响
炎症状态是NASH肝纤维化进展的重要诱导因素。为进一步评估NASH疾 病中脂毒性相关肝脏炎症的损伤改变，检测了肝组织中炎症标志物IL-1β、TNF-α 及IL-6的表达水平。结果如图5所示，PCR检测结果发现NASH肝纤维化模型 小鼠肝脏α-SMA、Col1a1、IL-1β、TNF-α及IL-6的mRNA表达水平较WT小 鼠明显升高，而PTH1R-GFAP KO小鼠较对照组上述炎症基因水平显著下降。这 些结果进一步印证了PTH1R敲除可以有效抑制NASH纤维化进程中的肝脏炎症 水平。
5.PTH1R信号激活加重NASH所致的肝纤维化损伤
在动物模型中，PTH干预NASH小鼠12周，检测PTH1R活化后肝组织肝 纤维化程度改变。结果如图6所示，PTH干预组PTH1R蛋白表达水平明显增加， HE组织染色显示肝索结构明显紊乱、界板形成，天狼星红染色及马松染色均显 示PTH1R激活组小鼠肝脏胶原染色面积较对照组显著增加。F4/80及TUNEL染 色显示PTH干预组小鼠肝脏炎症及肝细胞凋亡明显增加。提示PTH1R信号激活 进一步加重NASH肝纤维化进展。
6.PTH1R信号激活升高NASH纤维化进程中的炎症水平
PCR检测结果发现PTH1R激活组小鼠肝脏IL-1β、TNF-α及IL-6的mRNA 表达水平较NASH对照组小鼠明显升高，结果如图7所示。这些结果进一步印 证了PTH1R活化可以促进NASH纤维化进程中的肝脏炎症水平。
7.PTH1R敲除抑制HSC细胞的增殖、胶原分泌能力及活化诱导因子TGFβ 表达
在脂毒性所致纤维化进程中，HSC细胞是PTH1R信号的主要效应细胞。通 过si-RNA(sense5'-3'(SEQ ID NO：1)：GCACACAGCAGCCAACAUATT； antisense5'-3'(SEQ ID NO：2)：UAUGUUGGCUGCUGUGUGCTT)转染敲除鼠 源HSC细胞中的PTH1R，利用CCK8试剂盒检测细胞增殖能力，结果如图8所 示，PTH1R敲除显著降低了HSC细胞的增殖能力。如图9A-C所示，Western blotting检测发现，PTH1R敲除组或PTH1R中和抗体(Novus，货号NBP1-40067) 组，HSC细胞α-SMA的表达水平较其各自对照组显著降低。如图9D显示PTH1R 敲除组较对照组I型胶原的分泌量降低。均提示PTH1R敲除可抑制HSC细胞分 泌大量纤维化因子。
8.PTH1R信号激活促进HSC细胞的增殖、胶原分泌能力及活化诱导因子 TGFβ表达
在体外培养HSC细胞模型中，PTH干预24小时激活HSC细胞中PTH1R信 号，利用CCK8试剂盒检测细胞增殖能力，结果如图10所示，PTH1R信号活化 显著促进了人HSC细胞的增殖能力。进一步Western blotting检测，结果如图11 所示，发现PTH1R激活组HSC细胞I型胶原、α-SMA及TGFβ蛋白的表达水平。 以上结果说明PTH1R异常活化可促进TGFβ表达，放大HSC激活过程并促进 HSC细胞分泌大量胶原纤维。
上述实施例仅为本发明的优选实施例，并非对本发明任何形式上和实质上的 限制，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明的前提下， 还将可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 复旦大学附属中山医院
<120> PTH1R作为靶点在治疗或预防非酒精性脂肪性肝纤维化中的应用
<160> 14
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
gcacacagca gccaacauat t 21
<210> 2
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
uauguuggcu gcugugugct t 21
<210> 3
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
gtcccagaca tcagggagta a 21
<210> 4
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
tcggatactt cagcgtcagg a 21
<210> 5
<211> 19
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
gctcctctta ggggccact 19
<210> 6
<211> 19
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
ccacgtctca ccattgggg 19
<210> 7
<211> 19
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
caggcggtgc ctatgtctc 19
<210> 8
<211> 22
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
cgatcacccc gaagttcagt ag 22
<210> 9
<211> 22
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
gaaatgccac cttttgacag tg 22
<210> 10
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
tggatgctct catcaggaca g 21
<210> 11
<211> 23
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
tagtccttcc taccccaatt tcc 23
<210> 12
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
ttggtcctta gccactcctt c 21
<210> 13
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
aggtcggtgt gaacggattt g 21
<210> 14
<211> 23
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
tgtagaccat gtagttgagg tca 23

Claims (5)

1.抑制PTH1R表达和/或活性的试剂、抑制PTH1R/PTH信号通路的试剂在制备治疗和/或预防非酒精性脂肪性肝纤维化的药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抑制PTH1R表达和/或活性的试剂包括PTH1R的特异性干扰RNA或PTH1R的抑制剂。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的PTH1R的特异性干扰RNA为：正义链序列如SEQ ID NO：1所示、反义链序列如SEQ ID NO：2所示的siRNA。
4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的PTH1R的抑制剂包括PTH1R中和抗体。
5.如权利要求1～4中任意一项所述的应用，其特征在于，所述药物包括医学上可接受的载体和有效量的活性成分，所述活性成分为抑制PTH1R表达和/或活性的试剂或抑制PTH1R/PTH信号通路的试剂。
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Non-Patent Citations (3)

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