CN113891895A - 用于使用生物发光检测分析物的组合物和方法 - Google Patents

用于使用生物发光检测分析物的组合物和方法 Download PDF

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Abstract

本文提供了用于检测样品中的一种或多种分析物的系统和方法。特别地，本公开提供了用于使用生物发光复合物检测和/或定量目标分析物的组合物、测定和方法，所述生物发光复合物包含能够产生与所述目标分析物的存在、不存在或量相关的生物发光信号的底物、肽和/或多肽。

Description

用于使用生物发光检测分析物的组合物和方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2019年4月10日提交的美国临时专利申请号62/832,052的优先权和权益，所述专利以引用的方式整体且出于所有目的并入本文。
技术领域
本文提供了用于检测样品中的一种或多种分析物的系统和方法。特别地，本公开提供了用于使用生物发光复合物检测和/或定量目标分析物的组合物、测定和方法，所述生物发光复合物包含能够产生与所述目标分析物的存在、不存在或量相关的生物发光信号的底物、肽和/或多肽。
背景技术
生物过程依赖于分子、大分子和分子复合物之间的共价和非共价相互作用。为了理解此类过程并开发技术和化合物来操纵它们用于研究和临床及其他实际应用，有必要有可用的工具来检测和监测这些相互作用和/或此类相互作用中涉及的组分。研究这些相互作用，特别是在生理条件下(例如，在正常表达水平下用于监测蛋白质相互作用)需要高灵敏度。
创建用于现场和临床环境中的更好的测定是持续迫切需要的领域。速度、灵敏度、选择性、稳健性、简单性、定量与定性能力以及成本都是影响诊断生物测定相关性的关键因素，并且由此影响相关社区对所述生物测定的效用和采用。快速诊断测试不仅与临床环境相关，而且可应用于环境、工业且直接应用于消费者环境。
发明内容
本文提供了包含发光底物和目标分析物结合剂的组合物和制剂，所述目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和生物发光复合物的多肽组分或生物发光复合物的肽组分中的一者。
根据这些实施方案，所述目标分析物结合剂的多肽组分包含与SEQ ID NO:5的至少60％序列同一性；与SEQ ID NO:9的至少60％序列同一性；或与SEQ ID NO:12的至少60％序列同一性。
在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂的肽组分包含与SEQ ID NO:10的至少60％序列同一性；与SEQ ID NO:11的至少60％序列同一性；与SEQ ID NO:13的至少60％序列同一性；或与SEQ ID NO:14的至少60％序列同一性。
在一些实施方案中，所述组合物包含所述生物发光复合物的互补肽或多肽组分，其中所述目标分析物结合剂和所述生物发光复合物的互补肽或多肽组分在目标分析物存在下形成生物发光分析物检测复合物。
在一些实施方案中，包含所述发光底物的组合物和所述目标分析物结合剂合并成干燥制剂，并且所述生物发光复合物的互补肽或多肽组分构成液体制剂，其中所述液体制剂添加至所述干燥制剂并且在所述目标分析物存在下在再水合后形成所述生物发光分析物检测复合物。
在一些实施方案中，包含所述发光底物的组合物、所述目标分析物结合剂和所述生物发光复合物的互补肽或多肽组分合并成干燥制剂，其中所述干燥制剂在所述目标分析物存在下在再水合后形成所述生物发光分析物检测复合物。
在一些实施方案中，所述互补肽或多肽组分包含在所述目标分析物存在下形成所述生物发光分析物检测复合物的第二目标分析物结合元件。
在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂的多肽组分包含与SEQ ID NO:6的至少60％序列同一性，并且其中所述生物发光复合物的互补肽或多肽组分包含与SEQ ID NO:10的至少60％序列同一性。
在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂的多肽组分包含与SEQ ID NO:6的至少60％序列同一性，并且其中所述生物发光复合物的互补肽或多肽组分包含与SEQ ID NO:14的至少60％序列同一性。
本公开的实施方案还包括一种包含干燥制剂的组合物，所述干燥制剂包含(a)第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含第一目标分析物结合元件和与SEQID NO:9具有至少60％序列同一性的多肽组分；和(b)第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含第二目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:10具有至少60％序列同一性的互补肽组分。
在一些实施方案中，所述干燥制剂还包含发光底物。
在一些实施方案中，所述组合物还包含含有所述目标分析物的液体制剂。
本公开的实施方案还包括一种包含干燥制剂的组合物，所述干燥制剂包含(a)第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含第一目标分析物结合元件和与SEQID NO:12具有至少60％序列同一性的多肽组分；和(b)第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含第二目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:14具有至少60％序列同一性的互补肽组分。
在一些实施方案中，所述干燥制剂还包含发光底物。
在一些实施方案中，所述组合物还包含含有所述目标分析物的液体制剂。
本公开的实施方案还包括一种包含干燥制剂的组合物，所述干燥制剂包含(a)第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含第一目标分析物结合元件和与SEQID NO:13具有至少60％序列同一性的肽组分；(b)第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含第二目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的互补肽组分；以及(c)与SEQ ID NO:12具有至少60％序列同一性的互补多肽组分。
在一些实施方案中，所述干燥制剂还包含发光底物。
在一些实施方案中，所述组合物还包含含有所述目标分析物的液体制剂。
本公开的实施方案还包括一种组合物，所述组合物包含：(a)包含第一目标分析物结合剂的干燥制剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:9具有至少60％序列同一性的多肽组分；以及(b)包含第二目标分析物结合剂的液体制剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11具有至少60％序列同一性的互补肽组分。
本公开的实施方案还包括一种组合物，所述组合物包含：(a)包含第一目标分析物结合剂的干燥制剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11具有至少60％序列同一性的肽组分；以及(b)包含第二目标分析物结合剂的液体制剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:9具有至少60％序列同一性的互补多肽组分。
本公开的实施方案还包括一种组合物，所述组合物包含：(a)包含第一目标分析物结合剂的干燥制剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:12具有至少60％序列同一性的多肽组分；以及(b)包含第二目标分析物结合剂的液体制剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:14具有至少60％序列同一性的互补肽组分。
在一些实施方案中，所述干燥制剂还包含发光底物。
在一些实施方案中，所述液体制剂还包含发光底物。
在一些实施方案中，所述液体制剂还包含含有目标分析物的样品，并且其中在所述目标分析物存在下在将所述干燥制剂和所述液体制剂合并后形成生物发光分析物检测复合物。
在一些实施方案中，所述组合物还包含所述生物发光复合物的第二互补肽或多肽组分，其中所述目标分析物结合剂、所述生物发光复合物的第一互补肽或多肽组分和所述生物发光复合物的第二互补肽或多肽组分在目标分析物存在下形成生物发光分析物检测复合物。
在一些实施方案中，包含所述目标分析物结合剂的组合物构成干燥制剂，并且其中所述生物发光复合物的第一互补肽或多肽组分和第二互补肽或多肽构成液体制剂；其中所述液体制剂添加至所述干燥制剂并且在所述目标分析物存在下在再水合后形成所述生物发光分析物检测复合物。
在一些实施方案中，包含所述目标分析物结合剂的组合物和所述第一或所述第二互补肽或多肽组分合并成干燥制剂，并且其中不存在于所述干燥制剂中的所述第一或所述第二互补肽或多肽组分构成液体制剂；其中所述液体制剂添加至所述干燥制剂并且在所述目标分析物存在下在再水合后形成所述生物发光分析物检测复合物。
在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂、所述第一互补肽或多肽组分和所述第二互补肽或多肽组分合并成干燥制剂，所述干燥制剂在所述目标分析物存在下在再水合后形成所述生物发光分析物检测复合物。
在一些实施方案中，所述干燥制剂还包含发光底物。
在一些实施方案中，所述液体制剂还包含发光底物。
在一些实施方案中，所述液体制剂还包含含有目标分析物的样品，并且其中在所述目标分析物存在下在将所述干燥制剂和所述液体制剂合并后形成生物发光分析物检测复合物。
在一些实施方案中，所述第一或所述第二互补肽或多肽组分包含第二目标分析物结合元件，所述第二目标分析物结合元件在所述目标分析物存在下在再水合后形成所述生物发光分析物检测复合物。
在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂的多肽组分包含与SEQ ID NO:6的至少60％序列同一性，并且其中所述生物发光复合物的所述第一或所述第二互补肽或多肽组分包含与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15的至少60％序列同一性。
本公开的实施方案还包括一种组合物，所述组合物包含：(a)包含第一目标分析物结合剂的干燥制剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:6具有至少60％序列同一性的多肽组分；以及(b)液体制剂，所述液体制剂包含第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的互补肽组分；和与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的第二互补肽组分。
本公开的实施方案还包括(a)干燥制剂，所述干燥制剂包含第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:6具有至少60％序列同一性的多肽组分；和第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的互补肽组分；以及(b)液体制剂，所述液体制剂包含与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的第二互补肽组分。
本公开的实施方案还包括(a)干燥制剂，所述干燥制剂包含第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:6具有至少60％序列同一性的多肽组分；和与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的互补肽组分；以及(b)液体制剂，所述液体制剂包含第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的互补肽组分。
本公开的实施方案还包括(a)干燥制剂，所述干燥制剂包含第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:13具有至少60％序列同一性的肽组分；和第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的互补肽组分；以及(b)液体制剂，所述液体制剂包含与SEQ ID NO:6具有至少60％序列同一性的互补多肽组分。
本公开的实施方案还包括(a)干燥制剂，所述干燥制剂包含与SEQ ID NO:6具有至少60％序列同一性的互补多肽组分；以及(b)液体制剂，所述液体制剂包含第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:13具有至少60％序列同一性的肽组分；和第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的互补肽组分。
本公开的实施方案还包括一种包含干燥制剂的组合物，所述干燥制剂包含第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:13具有至少60％序列同一性的肽组分；第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的互补肽组分；以及与SEQ ID NO:6具有至少60％序列同一性的互补多肽组分。
在一些实施方案中，所述干燥制剂还包含发光底物。
在一些实施方案中，所述液体制剂还包含发光底物。
在一些实施方案中，所述液体制剂还包含含有目标分析物的样品，并且其中在所述目标分析物存在下在将所述干燥制剂和所述液体制剂合并后形成生物发光分析物检测复合物。
在一些实施方案中，与仅由所述目标分析物结合剂和所述发光底物产生的生物发光信号相比，当所述目标分析物结合剂接触所述生物发光复合物的一种或多种互补肽或多肽组分时，在所述发光底物存在下产生的生物发光信号显著增加。
在一些实施方案中，所述目标分析物是目标抗体。
在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂包含非特异性地结合至抗体的元件。
在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂包含特异性地结合至抗体的元件。
在一些实施方案中，所述目标抗体是针对病原体、毒素或治疗性生物制剂的抗体。
在一些实施方案中，目标分析物结合元件选自由以下组成的组：抗体、多克隆抗体、单克隆抗体、重组抗体、抗体片段、蛋白A、蛋白A的Ig结合结构域、蛋白G、蛋白G的Ig结合结构域、蛋白A/G、蛋白A/G的Ig结合结构域、蛋白L、蛋白L的Ig结合结构域、蛋白M、蛋白M的Ig结合结构域、寡核苷酸探针、肽核酸、DARPin、适体、affimer、蛋白质结构域和纯化的蛋白质。
在一些实施方案中，所述发光底物选自腔肠素、腔肠素-h、腔肠素-h-h、furimazine、JRW-0238、JRW-1404、JRW-1482、JRW-1667、JRW-1743、JRW-1744和其他腔肠素类似物或衍生物。
在一些实施方案中，所述组合物还包含聚合物。
在一些实施方案中，所述聚合物是天然存在的生物聚合物。在一些实施方案中，所述天然存在的生物聚合物选自普鲁兰多糖、海藻糖、麦芽糖、纤维素、葡聚糖以及它们的任何组合。在一些实施方案中，所述天然存在的生物聚合物是普鲁兰多糖。
在一些实施方案中，所述聚合物是环状糖聚合物或其衍生物。在一些实施方案中，所述聚合物是羟丙基β-环糊精。
在一些实施方案中，所述聚合物是合成聚合物。在一些实施方案中，所述合成聚合物选自聚苯乙烯、聚(甲基)丙烯酸酯以及它们的任何组合。在一些实施方案中，所述合成聚合物是包含至少一个聚(环氧丙烷)嵌段和至少一个聚(环氧乙烷)嵌段的嵌段共聚物。在一些实施方案中，所述合成聚合物是泊洛沙姆188。
在一些实施方案中，所述组合物还包含用于减少自发光的物质。
在一些实施方案中，用于减少自发光的所述物质是ATT(6-氮杂-2-硫代胸腺嘧啶)、ATT的衍生物或类似物、硫代核苷、硫脲等。
在一些实施方案中，所述组合物还包含缓冲剂、表面活性剂、还原剂、盐、自由基清除剂、螯合剂、蛋白质或它们的任何组合。在一些实施方案中，所述表面活性剂选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40和聚山梨醇酯80。
在一些实施方案中，所述组合物与分析物检测平台结合使用以检测样品中的分析物。
在一些实施方案中，样品选自血液、血清、血浆、尿液、粪便、脑脊液、间质液、唾液、组织样品、水样品、土壤样品、植物样品、食物样品、饮料样品、油和工业流体样品。
本公开的实施方案还包括一种检测样品中的分析物的方法，所述方法包括将上述组合物中的任一者与包含目标分析物的样品合并。
在一些实施方案中，检测所述样品中的目标分析物包括检测从分析物检测复合物产生的生物发光信号。
在一些实施方案中，所述方法还包括定量从所述分析物检测复合物产生的生物发光信号。
在一些实施方案中，从所述分析物检测复合物产生的生物发光信号与所述分析物的浓度成比例。
在一些实施方案中，与单独在溶液中的组分相比，所述组合物的一种或多种组分在所述组合物内表现出增强的稳定性。
本公开的实施方案还包括用于检测样品中的一种或多种分析物的系统和方法。特别地，本公开提供了用于使用生物发光复合物检测和/或定量目标分析物的组合物、测定和方法，所述生物发光复合物包含能够产生与所述目标分析物的存在、不存在或量相关的生物发光信号的底物、肽和/或多肽。
本公开的实施方案包括侧流检测系统。根据这些实施方案，所述系统包括分析膜，所述分析膜包括检测区域和对照区域。在一些实施方案中，所述检测区域包括固定至所述检测区域的第一目标分析物结合剂、包括第二目标分析物结合剂的结合垫和样品垫。在一些实施方案中，当在样品中检测到目标分析物时，所述第一目标分析物结合剂和所述第二目标分析物结合剂在至少一个检测区域中形成生物发光分析物检测复合物。
在一些实施方案中，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件并且是非发光的。在一些实施方案中，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和生物发光多肽。在一些实施方案中，所述生物发光多肽与SEQ ID NO:5具有至少60％序列同一性。
在一些实施方案中，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和生物发光复合物的多肽组分，并且所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和生物发光复合物的肽组分。在一些实施方案中，与仅由所述第一目标分析物结合剂和发光底物产生的生物发光信号相比，当所述第一目标分析物结合剂接触所述第二目标分析物结合剂时，在所述发光底物存在下产生的生物发光信号显著增加。
在一些实施方案中，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和生物发光复合物的肽组分，并且所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和生物发光复合物的多肽组分。在一些实施方案中，与仅由所述第一目标分析物结合剂和发光底物产生的生物发光信号相比，当所述第一目标分析物结合剂接触所述第二目标分析物结合剂时，在所述发光底物存在下产生的生物发光信号显著增加。
在一些实施方案中，生物发光复合物的多肽组分与SEQ ID NO:6具有至少60％序列同一性。在一些实施方案中，生物发光复合物的多肽组分与SEQ ID NO:10具有至少60％序列同一性。在一些实施方案中，生物发光复合物的多肽组分与SEQ ID NO:12具有至少60％序列同一性。在一些实施方案中，生物发光复合物的多肽组分与SEQ ID NO:14具有至少60％序列同一性。
在一些实施方案中，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和三联生物发光复合物的第一肽组分，并且所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和所述三联生物发光复合物的第二肽组分。在一些实施方案中，与仅由(i)所述第一目标分析物结合剂、所述第二目标分析物结合剂和/或所述三联生物发光复合物的多肽组分和(ii)发光底物产生的生物发光信号相比，当所述第一目标分析物结合剂接触所述第二目标分析物结合剂和所述多肽组分时，在所述发光底物存在下产生的生物发光信号显著增加。
在一些实施方案中，三联生物发光复合物的第一肽组分与SEQ ID NO:11具有至少60％序列同一性。在一些实施方案中，三联生物发光复合物的第二第一肽组分与SEQ IDNO:13具有至少60％序列同一性。在一些实施方案中，三联生物发光复合物的多肽组分与SEQ ID NO:12具有至少60％序列同一性。
在一些实施方案中，所述目标分析物是目标抗体。在一些实施方案中，所述第一目标分析物结合元件包含非特异性地结合至抗体的剂。在一些实施方案中，所述第二目标分析物结合元件包含特异性地结合至目标抗体的剂。在一些实施方案中，所述目标抗体是针对病原体、毒素或治疗性生物制剂的抗体。
在一些实施方案中，目标分析物结合元件选自由以下组成的组：抗体、多克隆抗体、单克隆抗体、重组抗体、抗体片段、蛋白A、蛋白A的Ig结合结构域、蛋白G、蛋白G的Ig结合结构域、蛋白A/G、蛋白A/G的Ig结合结构域、蛋白L、蛋白L的Ig结合结构域、蛋白M、蛋白M的Ig结合结构域、寡核苷酸探针、肽核酸、DARPin、适体、affimer、蛋白质结构域和纯化的蛋白质。
在一些实施方案中，所述系统还包括发光底物。在一些实施方案中，所述发光底物选自腔肠素、腔肠素-h、腔肠素-h-h、furimazine、JRW-0238、JRW-1404、JRW-1482、JRW-1667、JRW-1743、JRW-1744和其他腔肠素类似物或衍生物。在一些实施方案中，所述发光底物作为组合物的一部分施加至所述系统，所述组合物包含所述发光底物和选自普鲁兰多糖、海藻糖、麦芽糖、纤维素、葡聚糖、聚苯乙烯、聚(甲基)丙烯酸酯以及它们的任何组合的聚合物。在一些实施方案中，将所述发光底物作为组合物的一部分施加至所述系统，所述组合物包含所述发光底物和用于减少自发光的物质如ATT(6-氮杂-2-硫代胸腺嘧啶)、ATT的衍生物或类似物、硫代核苷、硫脲等。
在一些实施方案中，将所述组合物施加至所述样品垫、所述结合垫、所述检测区域和所述对照区域中的至少一者。
在一些实施方案中，所述分析膜包括多个检测区域，其中每个检测区域包括具有不同目标分析物结合元件的不同目标分析物结合剂。
在一些实施方案中，所述系统还包括用于检测或定量来自所述分析物检测复合物的生物发光信号的装置。
本公开的实施方案还包括一种包含至少一种目标分析物结合剂的结合垫。根据这些实施方案，所述至少一种目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和以下中的一者：包含与SEQ ID NO:5的至少60％序列同一性的生物发光多肽；包含与SEQ ID NO:9的至少60％序列同一性的多肽；包含与SEQ ID NO:10的至少60％序列同一性的肽；包含与SEQ IDNO:11的至少60％序列同一性的肽；包含与SEQ ID NO:13的至少60％序列同一性的肽；包含与SEQ ID NO:12的至少60％序列同一性的多肽；包含与SEQ ID NO:14的至少60％序列同一性的肽；或能够被来自刺虾荧光素酶的能量转移激活的荧光团。
在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和以下中的一者：SEQ ID NO:5的生物发光多肽；SEQ ID NO:9的多肽；SEQ ID NO:10的肽；SEQ ID NO:11的肽；SEQ ID NO:13的肽；SEQ ID NO:12的多肽；SEQ ID NO:14的肽；或能够被来自刺虾荧光素酶的能量转移激活的荧光团。
在一些实施方案中，所述结合垫还包含发光底物。在一些实施方案中，所述发光底物选自腔肠素、腔肠素-h、腔肠素-h-h、furimazine、JRW-0238、JRW-1404、JRW-1482、JRW-1667、JRW-1743、JRW-1744和其他腔肠素类似物或衍生物。在一些实施方案中，所述发光底物作为组合物的一部分包含在所述结合垫之上或之内，所述组合物包含所述发光底物和选自普鲁兰多糖、海藻糖、麦芽糖、纤维素、葡聚糖、聚苯乙烯、聚(甲基)丙烯酸酯以及它们的任何组合的聚合物。在一些实施方案中，将所述发光底物作为组合物的一部分施加至所述系统，所述组合物包含所述发光底物和用于减少自发光的物质如ATT(6-氮杂-2-硫代胸腺嘧啶)、ATT的衍生物或类似物、硫代核苷、硫脲等。
本公开的实施方案还包括分析膜，所述分析膜包括检测区域和对照区域。根据这些实施方案，所述检测区域包括固定至所述检测区域的至少一种目标分析物结合剂。
在一些实施方案中，所述至少一种目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和以下中的一者：包含SEQ ID NO:5的至少60％序列同一性的生物发光多肽；包含与SEQ IDNO:9的至少60％序列同一性的多肽；包含与SEQ ID NO:10的至少60％序列同一性的肽；包含与SEQ ID NO:11的至少60％序列同一性的肽；包含与SEQ ID NO:13的至少60％序列同一性的肽；包含与SEQ ID NO:12的至少60％序列同一性的多肽；包含与SEQ ID NO:14的至少60％序列同一性的肽；或能够被来自刺虾荧光素酶的能量转移激活的荧光团。
在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和以下中的一者：SEQ ID NO:5的生物发光多肽；SEQ ID NO:9的多肽；SEQ ID NO:10的肽；SEQ ID NO:11的肽；SEQ ID NO:13的肽；SEQ ID NO:12的多肽；SEQ ID NO:14的肽；或能够被来自刺虾荧光素酶的能量转移激活的荧光团。
在一些实施方案中，所述分析膜还包括多个检测区域，其中每个检测区域包括具有不同目标分析物结合元件的不同目标分析物结合剂。在一些实施方案中，所述分析膜还包括发光底物。在一些实施方案中，所述发光底物选自腔肠素、腔肠素-h、腔肠素-h-h、furimazine、JRW-0238、JRW-1404、JRW-1482、JRW-1667、JRW-1743、JRW-1744和其他腔肠素类似物或衍生物。
在一些实施方案中，所述发光底物作为组合物的一部分可逆地缀合至所述结合垫，所述组合物包含所述发光底物和选自普鲁兰多糖、海藻糖、麦芽糖、纤维素、葡聚糖、聚苯乙烯、聚(甲基)丙烯酸酯以及它们的任何组合的聚合物。在一些实施方案中，所述发光底物是组合物的一部分，所述组合物包含所述发光底物和减少自发光的物质如ATT(6-氮杂-2-硫代胸腺嘧啶)、ATT的衍生物或类似物、硫代核苷、硫脲等。
本公开的实施方案还包括一种包含检测区域的固相检测平台。根据这些实施方案，所述检测区域包括缀合至所述检测区域的至少一种目标分析物结合剂。在一些实施方案中，所述至少一种目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和以下中的一者：包含SEQID NO:5的至少60％序列同一性的生物发光多肽；包含与SEQ ID NO:9的至少60％序列同一性的多肽；包含与SEQ ID NO:10的至少60％序列同一性的肽；包含与SEQ ID NO:11的至少60％序列同一性的肽；包含与SEQ ID NO:13的至少60％序列同一性的肽；包含与SEQ IDNO:12的至少60％序列同一性的多肽；包含与SEQ ID NO:14的至少60％序列同一性的肽；或能够被来自刺虾荧光素酶的能量转移激活的荧光团。
在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和以下中的一者：SEQ ID NO:5的生物发光多肽；SEQ ID NO:9的多肽；SEQ ID NO:10的肽；SEQ ID NO:11的肽；SEQ ID NO:13的肽；SEQ ID NO:12的多肽；SEQ ID NO:14的肽；或能够被来自刺虾荧光素酶的能量转移激活的荧光团。
在一些实施方案中，所述检测平台包括：缀合至所述检测区域的第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:6的至少60％序列同一性的多肽；以及施加至所述检测区域的第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:10的至少60％序列同一性的肽。
在一些实施方案中，所述检测平台包括：缀合至所述检测区域的第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:10的至少60％序列同一性的多肽；以及施加至所述检测区域的第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:6的至少60％序列同一性的肽。
在一些实施方案中，所述检测平台包括：缀合至所述检测区域的第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:11的至少60％序列同一性的肽；施加至所述检测区域的第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:13的至少60％序列同一性的肽；以及施加至所述检测区域的包含与SEQ ID NO:12的至少60％序列同一性的多肽。
在一些实施方案中，所述检测平台包括：缀合至所述检测区域的第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:6的至少60％序列同一性的多肽；以及施加至所述检测区域的第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与ID NO:14的至少60％序列同一性的多肽。
在一些实施方案中，所述检测平台包括：缀合至所述检测区域的第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:14的至少60％序列同一性的多肽；以及施加至所述检测区域的第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:6的至少60％序列同一性的多肽。
在一些实施方案中，所述检测平台包括：缀合至所述检测区域的第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:5具有至少60％序列同一性的生物发光多肽；以及施加至所述检测区域的第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和能够被来自所述生物发光多肽的能量转移激活的荧光团。
在一些实施方案中，所述检测平台包括：施加至所述检测区域的第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:5具有至少60％序列同一性的生物发光多肽；以及缀合至所述检测区域的第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和能够被来自所述生物发光多肽的能量转移激活的荧光团。
在一些实施方案中，所述检测平台还包括多个检测区域，其中每个检测区域包括具有不同目标分析物结合元件的不同目标分析物结合剂。在一些实施方案中，所述检测平台还包括对照区域。在一些实施方案中，所述检测平台还包括发光底物。在一些实施方案中，所述发光底物选自腔肠素、腔肠素-h、腔肠素-h-h、furimazine、JRW-0238、JRW-1404、JRW-1482、JRW-1667、JRW-1743、JRW-1744和其他腔肠素类似物或衍生物。在一些实施方案中，所述发光底物作为组合物的一部分可逆地缀合至所述结合垫，所述组合物包含所述发光底物和选自普鲁兰多糖、海藻糖、麦芽糖、纤维素、葡聚糖、聚苯乙烯、聚(甲基)丙烯酸酯以及它们的任何组合的聚合物。在一些实施方案中，所述发光底物是组合物的一部分，所述组合物包含所述发光底物和减少自发光的物质如ATT(6-氮杂-2-硫代胸腺嘧啶)、ATT的衍生物或类似物、硫代核苷、硫脲等。
本公开的实施方案还包括一种溶液相检测平台，所述溶液相检测平台包括至少一个检测容器和冻干片(冻干饼状物)。根据这些实施方案，所述冻干饼状物包含目标分析物结合剂，所述目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和以下中的一者：包含与SEQ IDNO:5的至少60％序列同一性的生物发光多肽；包含与SEQ ID NO:9的至少60％序列同一性的多肽；包含与SEQ ID NO:10的至少60％序列同一性的肽；包含与SEQ ID NO:11的至少60％序列同一性的肽；包含与SEQ ID NO:13的至少60％序列同一性的肽；包含与SEQ IDNO:12的至少60％序列同一性的多肽；包含与SEQ ID NO:14的至少60％序列同一性的肽；或能够被来自刺虾荧光素酶的能量转移激活的荧光团。
在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和以下中的一者：SEQ ID NO:5的生物发光多肽；SEQ ID NO:9的多肽；SEQ ID NO:10的肽；SEQ ID NO:11的肽；SEQ ID NO:13的肽；SEQ ID NO:12的多肽；SEQ ID NO:14的肽；或能够被来自刺虾荧光素酶的能量转移激活的荧光团。
在一些实施方案中，所述冻干饼状物包含：第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:6的至少60％序列同一性的多肽；以及第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:10的至少60％序列同一性的肽。
在一些实施方案中，所述冻干饼状物包含：第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:11的至少60％序列同一性的肽；第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:13的至少60％序列同一性的肽；以及包含与SEQ ID NO:12的至少60％序列同一性的多肽。
在一些实施方案中，所述冻干饼状物包含：第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:6的至少60％序列同一性的多肽；以及第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与ID NO:14的至少60％序列同一性的多肽。
在一些实施方案中，所述冻干饼状物包含：第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:5具有至少60％序列同一性的生物发光多肽；以及第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和能够被来自所述生物发光多肽的能量转移激活的荧光团。
在一些实施方案中，所述检测平台包括96孔微量滴定板，所述微量滴定板包括多个检测容器；以及包含不同目标分析物结合元件的至少两种不同的目标分析物结合剂。
在一些实施方案中，所述冻干饼状物包含发光底物。在一些实施方案中，所述发光底物选自腔肠素、腔肠素-h、腔肠素-h-h、furimazine、JRW-0238、JRW-1404、JRW-1482、JRW-1667、JRW-1743、JRW-1744和其他腔肠素类似物或衍生物。
在一些实施方案中，所述冻干饼状物包含发光底物和选自普鲁兰多糖、海藻糖、麦芽糖、纤维素、葡聚糖、聚苯乙烯、聚(甲基)丙烯酸酯以及它们的任何组合的聚合物。
在一些实施方案中，所述冻干饼状物包含发光底物和用于减少自发光的物质如ATT(6-氮杂-2-硫代胸腺嘧啶)、ATT的衍生物或类似物、硫代核苷、硫脲等。
在一些实施方案中，所述检测平台还包括至少一种样品。在一些实施方案中，所述样品选自血液、血清、血浆、尿液、粪便、脑脊液、间质液、唾液、组织样品、水样品、土壤样品、植物样品、食物样品、饮料样品、油和工业流体样品。
本公开的实施方案还包括一种使用上述侧流测定系统检测样品中的分析物的方法。根据这些实施方案，所述方法包括将样品施加至所述样品垫上，促进所述样品从所述样品垫流动至所述结合垫，然后从所述结合垫流动至所述分析膜上的检测区域和对照区域。在一些实施方案中，当在所述样品中检测到所述目标分析物时，所述第一目标分析物结合剂、所述第二目标分析物结合剂和所述目标分析物在所述至少一个检测区域中形成所述分析物检测复合物。
在一些实施方案中，所述样品是来自受试者的选自血液、血清、血浆、尿液、粪便、脑脊液、间质液、组织和唾液的样品。在一些实施方案中，所述样品选自水样品、土壤样品、植物样品、食物样品、饮料样品、油和工业流体样品。在一些实施方案中，检测所述样品中的目标分析物包括检测从所述分析物检测复合物产生的生物发光信号。
在一些实施方案中，所述方法还包括定量从所述分析物检测复合物产生的生物发光信号。在一些实施方案中，所述方法还包括基于所述分析物的检测将从其获得所述样品的受试者诊断为患有或未患疾病。
本公开的实施方案还包括一种使用上述固相检测平台检测样品中的分析物的方法。根据这些实施方案，所述方法包括使样品暴露于所述检测区域和对照区域。在一些实施方案中，当在所述样品中检测到所述目标分析物时，所述至少一种目标分析物结合剂和所述至少一种目标分析物在所述至少一个检测区域中形成分析物检测复合物。
在一些实施方案中，所述样品是来自受试者的选自血液、血清、血浆、尿液、粪便、脑脊液、间质液、组织和唾液的样品。在一些实施方案中，所述样品选自水样品、土壤样品、植物样品、食物样品、饮料样品、油和工业流体样品。在一些实施方案中，检测所述样品中的目标分析物包括检测从所述分析物检测复合物产生的生物发光信号。
在一些实施方案中，所述方法还包括定量从所述分析物检测复合物产生的生物发光信号。在一些实施方案中，所述方法还包括基于所述分析物的检测将从其获得所述样品的受试者诊断为患有或未患疾病。
本公开的实施方案还包括一种产生用于生物发光测定中的基底的方法。根据这些实施方案，所述方法包括将溶液施加到基底上。在一些实施方案中，所述溶液含有至少一种目标分析物结合剂，所述至少一种目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和生物发光复合物的多肽组分或生物发光复合物的肽组分中的一者。在一些实施方案中，所述方法包括干燥含有所述溶液的基底。
在一些实施方案中，所述溶液还包含所述生物发光复合物的互补肽或多肽组分。在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂和所述生物发光复合物的互补肽或多肽组分在目标分析物存在下形成生物发光分析物检测复合物。
在一些实施方案中，所述溶液包含蛋白质缓冲剂和至少一种赋形剂。在一些实施方案中，所述溶液包含发光底物。
在一些实施方案中，包含所述干燥溶液的基底是W-903纸、FTA纸、FTA Elute纸、FTA DMPK纸、Ahlstrom A-226纸、M-TFN纸、FTA纸、FP705纸、Bode DNA收集纸、硝化纤维素纸、尼龙纸、纤维素纸、Dacron纸、棉纸和聚酯纸或它们的组合。在一些实施方案中，所述基底是包括塑料、尼龙、金属或其组合的网。
在一些实施方案中，干燥含有所述溶液的基底包括在约30℃至40℃的温度下干燥介于约30分钟与2小时之间的时间段。在一些实施方案中，干燥含有所述溶液的基底包括冻干和/或冷冻所述基底。
在一些实施方案中，所述方法还包括将所述至少一种目标分析物结合剂和/或所述生物发光复合物的互补肽或多肽组分干燥到第一基底上，并且将所述发光底物干燥到第二基底上。
根据这些实施方案，在含有所述溶液的基底暴露于目标分析物时产生生物发光信号，并且在一些实施方案中，所述生物发光信号与所述目标分析物的浓度成比例。
在一些实施方案中，当在所述基底上干燥时，所述至少一种目标分析物结合剂和/或所述生物发光复合物的互补肽或多肽组分表现出增强的稳定性。
本公开的实施方案包括组合物，所述组合物包含发光底物、包含目标分析物结合元件和生物发光复合物的多肽组分的目标分析物结合剂以及生物发光复合物的互补多肽组分的。根据这些实施方案，所述目标分析物结合剂和所述生物发光复合物的互补多肽组分能够在目标分析物存在下形成生物发光分析物检测复合物。
在一些实施方案中，所述组合物还包含第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含第二目标分析物结合元件和生物发光复合物的第二多肽组分。
在一些实施方案中，所述第一目标分析物结合剂和第二目标分析物结合剂结合同一目标分析物的不同部分。
在一些实施方案中，所述生物发光复合物的第一多肽组分和第二多肽组分结合所述生物发光复合物的互补多肽组分以在所述目标分析物存在下形成生物发光分析物检测复合物。
在一些实施方案中，所述第一多肽组分和第二多肽组分与能够与卤代烷烃底物形成共价键的经修饰脱卤素酶连接。
在一些实施方案中，所述第一目标分析物结合元件和第二目标分析物结合元件包含卤代烷烃底物。
在一些实施方案中，所述第一目标分析物结合剂和第二目标分析物结合剂的第一多肽组分或第二多肽组分包含：与SEQ ID NO:10的至少60％序列同一性；与SEQ ID NO:11的至少60％序列同一性；与SEQ ID NO:13的至少60％序列同一性；或与SEQ ID NO:15的至少60％序列同一性。
在一些实施方案中，所述互补多肽组分包含：与SEQ ID NO:6的至少60％序列同一性；与SEQ ID NO:9的至少60％序列同一性；或与SEQ ID NO:12的至少60％序列同一性。
在一些实施方案中，所述目标分析物结合元件选自由以下组成的组：抗体、多克隆抗体、单克隆抗体、重组抗体、抗体片段、蛋白A、蛋白A的Ig结合结构域、蛋白G、蛋白G的Ig结合结构域、蛋白A/G、蛋白A/G的Ig结合结构域、蛋白L、蛋白L的Ig结合结构域、蛋白M、蛋白M的Ig结合结构域、寡核苷酸探针、肽核酸、DARPin、适体、affimer、蛋白质结构域和纯化的蛋白质。
在一些实施方案中，所述目标分析物是抗体，并且其中所述第一目标分析物结合剂的目标分析物结合元件包含由所述抗体识别的抗原，并且其中所述第二目标分析物结合剂的目标分析物结合元件包含Fc结合区。
在一些实施方案中，所述第一目标分析物结合剂和/或第二目标分析物结合剂还包含与所述生物发光复合物的第一多肽组分和/或第二多肽组分偶联的荧光团。
在一些实施方案中，所述组合物的一种或多种组分呈冻干片(冻干饼状物)形式，所述冻干片当在溶液中复原时能够形成生物发光复合物以检测和/或定量目标分析物。
在一些实施方案中，所述组合物构成能够检测和/或定量目标分析物的溶液相检测平台。
在一些实施方案中，所述多肽组分和所述发光底物呈冻干片(冻干饼状物)形式，所述冻干片当在溶液中复原时能够形成生物发光复合物以检测和/或定量目标分析物。
本公开的实施方案还包括一种检测样品中的分析物的方法，所述方法包括将上述组合物中的任一者与包含目标分析物的样品合并。
在一些实施方案中，检测所述样品中的目标分析物包括检测从分析物检测复合物产生的生物发光信号。
在一些实施方案中，所述方法还包括定量从所述分析物检测复合物产生的生物发光信号。
在一些实施方案中，从所述分析物检测复合物产生的生物发光信号与所述分析物的浓度成比例。
附图说明
图1示出根据本公开的一个实施方案，用于基于生物发光复合物形成检测和/或定量样品中的一种或多种目标分析物的侧流测定的代表性示意图。
图2示出根据本公开的一个实施方案，用于基于生物发光复合物形成来检测和/或定量样品中的目标分析物的固相检测平台的代表性示意图。
图3示出证明生物发光复合物的组分在被施加至固体支持基底(例如膜)、干燥并在室温下储存后产生可检测的生物发光的代表性图像。
图4示出证明生物发光复合物的组分在施加至基于膜和纸的固体支持基底后产生可检测的生物发光的代表性图像。
图5示出代表性测定示意图(左)和代表性曲线图(右)，其证明生物发光复合物的组分用作目标分析物结合剂上的报告分子以用于目标分析物检测的能力。
图6示出使用生物发光复合物的组分作为目标分析物结合剂上的报告分子以用于目标分析物检测的测定平台的代表性描述。
图7A-7E示出根据本公开的一个实施方案，使用生物发光复合物的组分作为目标分析物结合剂上的报告分子以用于目标分析物检测的测定平台的代表性稳定性测试(图7A在4℃下；图7B在25℃下；图7C在37℃下；图7D在37℃下，添加NanoLuc；以及图7E在4℃和37℃下，添加HiBiT)。
图8A-8B示出根据本公开的一个实施方案，使用生物发光复合物的组分作为目标分析物结合剂上的报告分子以用于目标分析物检测的测定平台的储存条件的代表性测试(图8A在4℃和25℃；图8B在4℃和25℃下，使用基于蔗糖的蛋白质缓冲液)。
图9A-9C示出来自固相测定平台(图9A)的代表性图像，其中在复杂采样环境(图9B中的全血和图9C中的血清)中产生指示目标分析物检测的生物发光信号。
图10A-10B示出可定量地(图10A)或定性地(图10B)测量在用测定缓冲液再水合之后源自Whatman 903纸斑点的RLU信号。
图11A-11B示出证明高亲和力二肽Pep263形成生物发光复合物的能力的代表性图(Pep263是包含NanoTrip复合物的β9和β10链的肽；参见例如，美国专利申请序列号16/439,565(PCT/US2019/036844)，其以引用的方式整体并入本文)。
图12示出固相测定的代表性结果，其证明使用来自iPhone(例如，iPhone 6S)或来自成像器(例如，LAS4000)的标准相机，来自放置到标准微量滴定板中的纸穿孔的生物发光的定性评估。
图13示出图12中描绘的相同固相测定的定量分析，但在25℃下储存的第3天使用光度计检测到发光。
图14示出如图12-13中描绘的相同固相测定的定量时间过程，证明所有蛋白质在实验条件下在所有测试的温度下在时间范围内的稳定性。
图15示出在25℃和60℃下在两种缓冲液条件下进行的加速稳定性研究的第0天收集的代表性RLU信号动力学结果。
图16示出使用图15中定义的缀合缓冲液条件放置的蛋白质的加速稳定性研究的时程结果。
图17示出缓冲液条件对来自干燥到硝化纤维素膜上的NanoLuc的发光的影响的比较。
图18示出膜封闭和蔗糖预处理对在20X SSC、1％BSA(pH 7.0)和10μM N205(活细胞底物；LCS)的运行缓冲液中进行的侧流测定的影响。
图19示出膜封闭和蔗糖预处理对在0.01M PBS、1％BSA(pH 7.0)和10μM可渗透细胞底物(PCS)的运行缓冲液中进行的侧流测定的影响。
图20示出膜封闭和蔗糖预处理对在5x LCS稀释缓冲液+5x LCS-在PBS中稀释至1X的运行缓冲液中进行的侧流测定的影响。
图21示出在侧流测定中膜性质对生物发光试剂吸收和毛细管作用的影响。
图22A-22B示出来自硝化纤维素(左)和Whatman 541级(右)纸上的NanoBiT/HiBiT互补的生物发光信号(图22A)，以及来自在总曝光时间内拍摄的相应影片的编辑图像(图22B)。
图23示出来自Whatman 903纸上的NanoBiT/HiBiT互补的生物发光信号，具有在20分钟时另外底物和液体的尖峰。
图24示出来自Whatman 903纸上的NanoBiT/HiBiT互补的生物发光信号。
图25A-25C示出由在Whatman 903纸中用LgTrip的二肽和底物复原产生的生物发光信号，其在有BSA(图25B)或无BSA(图25A)的情况下制备；图25C示出针对图25B中测试的每个浓度获得的最大RLU信号。
图26A-26B示出由用来自冻干饼状物的LgTrip的二肽和底物复原产生的生物发光信号(图26A)以及所述二肽的滴定；图26B示出针对图26A中测试的每个浓度获得的最大RLU信号。
图27示出在三种不同的固相材料(Whatman 903、Ahlstrom 237和Ahlstrom6613H)中由用添加至干燥的LgTrip的二肽和底物或添加至干燥的LgTrip和底物的NanoLuc复原产生的生物发光信号。
图28示出从含有Lg/Trip/底物并在环境条件下储存25天以上的Whatman 903斑点产生的生物发光信号；使斑点暴露于PBS中的1nM二肽。
图29A-29C示出在具有各种蛋白质缓冲液制剂的Whatman 903纸中干燥并用furimazine复原的NanoLuc(图29A)、LgBiT(图29B)和LgTrip(图29C)的生物发光信号(RLU)。
图30A-30C示出如图29中所示在具有各种蛋白质缓冲液制剂的Whatman 903纸中干燥并用furimazine复原的NanoLuc(图30A)、LgBiT(图30B)和LgTrip(图30C)的生物发光信号(Bmax)。
图31A-31B示出如图29中所示在具有各种蛋白质缓冲液制剂的Whatman 903纸中干燥并用furimazine复原的LgBiT(图31A)和LgTrip(图31B)的生物发光背景水平。
图32A-32F示出在具有各种蛋白质缓冲液制剂的Whatman 903纸中干燥并在60℃下储存6天后用furimazine复原的NanoLuc(图32A和32D)、LgBiT(图32B和32E)和LgTrip(图32C和32F)的用furimazine复原后的生物发光信号(RLU信号动力学)(图32A-32C中)；Bmax(图32D-32F中)。
图33包括含有执行分析物检测测试的所有所需试剂、支持多种类型的测定形式(包括比色皿、试管、瓶中大容量、快速测试类型测定等)的一体化冻干饼状物(“lyocake”)或片的代表性实施方案。
图34示出来自跨含有NanoLuc的侧流条带的底物移动的生物发光信号，所述生物发光信号来自对应于在总曝光时间内拍摄的影片的编辑图像。
图35示出来自跨侧流条带的NanoLuc移动的生物发光信号，所述生物发光信号来自对应于在总曝光时间内拍摄的影片的编辑图像。
图36示出通过将伏马菌素B1经由生物素/链霉亲和素键联、经由HaloTag键联或直接(例如，经由磺基-SE标记，描述于例如，美国专利申请序列号16/698,143(PCT/US2019/063652)，以引用的方式并入本文)系栓至肽标签(例如，包含SEQ ID NO:10)产生的各种示踪剂，，所述示踪剂可用于根据本文所述的材料和方法的竞争性结合测定中。
图37示出示例性竞争性结合测定，其中不同浓度的未标记的伏马菌素B1破坏生物发光复合物并导致减少的发光以及检测/定量样品中伏马菌素B1的量的能力。
图38A-38B示出当用PBS中的二肽复原时，由含有LgBiT和底物的冻干饼状物产生的生物发光信号(图38A)；图38B示出针对图38A中测试的每个浓度获得的最大RLU信号。
图39示出由直接冻干到有或没有底物的标准96孔板中的LgBiT或LgTrip 3546的复原产生的生物发光信号；用含或不含底物的PBS中的二肽进行复原。
图40A-40C示出在用PBS中的不同浓度的目标分析物类克(Remicade)复原后，由Whatman 903纸斑点(图40A-40B)中和冻干饼状物形式(图40C)中LgBiT-蛋白G、SmBiT-TNFα和底物的互补产生的生物发光信号。
图41A-41C示出在用PBS中的不同浓度的目标分析物类克复原后，由Whatman 903纸斑点(图41A)中和冻干饼状物形式(图41B-41C)中LgTrip、SmTrip9-蛋白G、HiBiT-TNFα和底物的互补产生的生物发光信号。
图42A-42E示出由以不包括底物的形式干燥的生物发光复合物的互补产生的生物发光信号(图42B-42C：基于网的冻干饼状物；图42D-42E：基于网的薄膜)；单独添加底物以在分析物存在下产生生物发光信号。
图43示出四种不同furimazine底物制剂的冻干饼状物形成和比色pH。
图44示出在纯化的NanoLuc(Nluc)酶存在下各种furimazine(Fz)底物制剂的动力学活性性能。
图45示出已经在60℃下储存指定时间(天)的furimazine底物制剂的活性性能。
图46A-46B示出保持在环境温度(图46A)或60℃(图46B)下的各种furimazine底物制剂随时间(天)推移的热稳定性，如通过在含有0.01％BSA的PBS(pH 7.0)中复原后剩余的绝对furimazine浓度的HPLC所分析。
图47示出如通过HPLC所分析，在水中复原12天后各种furimazine底物制剂剩余的furimazine的量，从而表明液体稳定性。
图48示出分析物白细胞介素-6(IL-6)的均质三联免疫测定的示意性图示。
图49示出用三联-HaloTag融合蛋白标记的抗体的SDS-PAGE凝胶的实例。使SmTrip9或SmTrip10的变体与HaloTag融合并表达、纯化，并且用于标记小鼠抗人IL-6抗体。
图50A-50B示出有和没有IL-6的基于溶液的均质三联IL-6免疫测定的信号动力学(图50A中的原始RLU，以及图50B中的倍数响应)。
图51A-51B示出重组人IL-6对于基于溶液的均质IL-6三联免疫测定的剂量反应曲线(图51A中的对数图；图51B中的线性图)。
图52A-52C示出冻干饼状物产物(图52A；#1和#2)以及在环境温度下储存指定时间(天)后复原后不含furimazine(Fz；图52B)和含有furimazine(Fz；图52C)的各种配制的单一试剂冻干饼状物的IL-6免疫测定性能和贮存稳定性。
图53A-53B示出饼状物外观(图53A)以及在环境储存下储存90天的配制的、冻干的单一试剂IL-6三联免疫测定的性能(图53B)和贮存稳定性。
图54示出复原后单一试剂冻干三联IL-6免疫测定的信号动力学。
图55示出冻干单一试剂IL-6免疫测定与复杂人基质的相容性。
图56A-56B示出预填充的96孔微量滴定板中的冻干单一试剂IL-6三联免疫测定(图56A)，和复原后使用冻干单一试剂IL-6三联免疫测定的rhIL-6剂量反应曲线的测定板(图56B)。
图57A-57B示出基于溶液的IL-6三联免疫测定在单一制剂赋形剂(图57A)中和各种配制溶液(图57B)中的测定性能。
图58示出模型分析物心肌肌钙蛋白I的均质三联免疫测定的示意性图示。
图59A-59B示出使用重组人心肌肌钙蛋白I的基于溶液的均质心肌肌钙蛋白I三联免疫测定在原始RLU(图59A)和相对于背景的信号(图59B)方面的剂量反应曲线。
图60示出在用PBS中的0.01％BSA或在通用血清稀释剂中稀释的10％正常混合人血清复原后，单一试剂配制的冻干心肌肌钙蛋白I三联免疫测定在原始RLU方面的测定性能。
图61A-61B示出当使用PBS(图61A)中和通用血清稀释剂(图61B)中的0.01％BSA的测定缓冲液时，基于溶液的均质IL-6三联免疫测定背景信号的原始RLU结果。
图62A-62B示出当使用PBS(图62A)中和通用血清稀释剂(图62B)中的0.01％BSA的测定缓冲液时，在50ng/ml的rhIL-6存在下，基于溶液的均质IL-6三联免疫测定的原始BmaxRLU结果。
图63A-63D示出当在作为测定缓冲液的PBS中的0.01％BSA或通用血清稀释剂和NanoGlo(Promega目录号N113)(图63C和63D)或活细胞(Promega目录号N205)底物(图63A和63B)中运行时，使用增加量的正常混合人血清(图63A和63C)或正常混合人血浆(图63B和63D)在存在或不存在50ng/ml rhIL-6的情况下基于溶液的均质IL-6三联免疫测定的信号与背景比结果。
图64示出当使用通用血清稀释剂作为测定缓冲液时，使用增加量的正常混合人血清和已被耗尽内源性IgG的混合人血清在存在或不存在50ng/ml rhIL-6的情况下基于溶液的均质IL-6三联免疫测定的信号与背景比结果。
图65A-65C示出使用增加量的在VeriChem基质加化学参考试剂盒中提供的人血液化学组组分在存在或不存在50ng/ml rhIL-6的情况下基于溶液的均质IL-6三联免疫测定的背景RLU(图65A)、Bmax RLU(图65B)和相对于背景的所得信号(图65C)的结果。
图66A-66C示出使用增加量的混合正常人尿液和NanoGlo(Promega目录号N113)或活细胞(Promega目录号N205)底物在存在或不存在50ng/ml rhIL-6的情况下基于溶液的均质IL-6三联免疫测定的背景RLU(图66A)、Bmax RLU(图66B)和相对于背景的所得信号(图66C)的结果。
图67A-67C示出用纯化的NanoLuc酶(Nluc)(图67A)测试的复原冻干配制的furimazine、用纯化的二肽(SEQ ID NO:14)测试的配制的LgTrip多肽(SEQ ID NO:12)(图67B)以及合并的用纯化的二肽(SEQ ID NO:14)测试的配制的furimazine和LgTrip多肽(SEQ ID NO:12)(图67C)的原始RLU活性测定响应，从而分析冻干小瓶的热稳定性。
图68示出三种抗TNFα生物制剂的均质三联免疫测定的示意性图示：类克、恩利(Enbrel)和修美乐(Humira)。
图69A-69C示出定量抗TNFα生物制剂类克、恩利和修美乐的基于溶液的均质三联(LgTrip 3546+SmTrip9 pep521+SmTrip10)免疫测定在原始RLU方面的测定性能。
图70A-70B示出动力学测定性能，展示为使用NanoTrip(三联-NanoLuc；图70A)和NanoBiT(图70B)用于检测类克的复原配制的冻干单一试剂免疫测定的原始RLU。
图71示出用于检测类克的单一试剂冻干NanoBiT(“Bits”)和NanoTrip(“Trips；”三联NanoLuc)免疫测定系统在环境温度下的热稳定性。在不存在或存在100nM类克的情况下，在所指示的时间点复原冻干饼状物，并分析所得的原始RLU。
图72A-72D示出使用NanoBiT系统来检测类克的代表性结果，其中配制的组分在用于测定中之前被分离成两种单独的饼状物：(图72A)两种单独的冻干组分的图像，其中一种含有LgBiT-TNFα融合蛋白和furimazine(黄色)，并且另一种含有SmBiT-蛋白G融合蛋白(白色)；(图72B)手动合并图72A中的两种冻干组分后的图像；(图72C)复原的冻干组分的图像；以及(D)在增加量的类克存在下产生的动态生物发光RLU信号。
图73示出使用双重冻干NanoTrip免疫测定系统在增加量的类克存在下产生的所得动态生物发光RLU信号，其中TNFα+furimazine和蛋白G融合蛋白被配制、单独冻干，然后在复原之前合并。
图74示出用于检测抗EGFR生物制剂(例如，帕尼单抗)的均质NanoTrip(三联NanoLuc)基于细胞的免疫测定系统的示意性图示。
图75示出使用用于抗EGFR生物制剂的均质基于细胞的NanoTrip免疫测定系统的帕尼单抗剂量反应曲线。
图76示出使用用于抗EGFR生物制剂的均质基于细胞的NanoTrip免疫测定系统测试与蛋白G融合的SmTrip9(SEQ ID NO:13)的不同变体的帕尼单抗剂量反应曲线。
图77A-77B示出使用用于抗TNFα生物制剂的均质基于溶液的NanoTrip免疫测定系统测试与蛋白G融合的SmTrip9(SEQ ID NO:13)的不同变体的类克剂量反应曲线(图77A)和使用用于抗TNFα生物制剂的冻干NanoTrip免疫测定系统的类克剂量反应曲线(图77B)。
图78示出使用直接用反应性肽(例如，SEQ ID NO:18)标记的抗体的三联IL-6免疫测定系统的示意性图示。
图79A-79C示出直接标记的抗体缀合物的变性SDS-PAGE凝胶分析。
图80示出在用反应性肽HW-0984(SEQ ID NO:20)、HW-1010(SEQ ID NO:24)和HW-0977(SEQ ID NO:18)直接标记的抗IL-6抗体对存在下来自IL-6滴定的原始RLU输出。
图81示出在用反应性肽HW-0984(SEQ ID NO:20)和HW-1053(SEQ ID NO:19)直接标记的抗IL-6抗体对存在下来自IL-6滴定的原始RLU输出。
图82示出在用反应性肽HW-1042(SEQ ID NO:20)、HW-1050(SEQ ID NO:27)、HW-1052(SEQ ID NO:25)、HW-1043(SEQ ID NO:24)和HW-1055(SEQ ID NO:25)标记的抗IL-6抗体对存在下来自IL-6滴定的原始RLU输出。
图83示出在用反应性肽HW-0977(SEQ ID NO:18)、HW-0984(SEQ ID NO:20)、HW-1010(SEQ ID NO:24)、HW-1042(SEQ ID NO:20)、HW-1050(SEQ ID NO:27)、HW-1052(SEQ IDNO:25)、HW-1053(SEQ ID NO:19)、HW-1043(SEQ ID NO:24)和HW-1055(SEQ ID NO:25)直接标记的单独抗IL-6抗体存在下来自IL-6滴定的原始RLU输出。
图84示出在LgTrip 5146(SEQ ID NO:451)和用反应性肽HW-1050(SEQ ID NO:27)、HW-1043(SEQ ID NO:24)和HW-0977(SEQ ID NO:18)标记的抗IL-6抗体对存在下来自IL-6滴定的原始RLU输出。
图85示出使用直接用含有荧光团的反应性肽标记的抗体的三联IL-6免疫测定模型的示意性图示，从而实现荧光素酶与标记的抗体之间的BRET。
图86示出在标记的抗IL-6抗体上的互补三联荧光素酶与荧光团之间的IL-6诱导的BRET。
图87A-87C示出源自复合物基质中的发光底物N113 Fz(图87A)、JRW-1404(图87B)和JRW-1482(图87C)的发光。
具体实施方式
本公开的实施方案提供用于检测样品中的一种或多种分析物的系统和方法。特别地，本公开提供了用于使用生物发光复合物检测和/或定量目标分析物的组合物、测定和方法，所述生物发光复合物包含能够产生与所述目标分析物的存在、不存在或量相关的生物发光信号的底物、肽和/或多肽。
大多数快速诊断生物测定是基于免疫学原理。本公开的一些实施方案将基于免疫测定的概念与生物发光的优点相结合，其包括大的线性范围和极低的背景等优点。然而，尽管有这些优点，但基于定点照护生物发光的免疫测定尚未商业化。造成这种情况的一些原因可能是许多目前可用的荧光素酶信号低，这从本质上限制了它们在免疫测定中的有用性。此外，当生物发光信号输出被配置为条件性(例如，通过互补或生物发光共振能量转移(BRET))时，信号可甚至进一步减少。许多目前可用的荧光素酶对某些测定条件(如高温、非最佳缓冲液组合物和复杂样品基质)的耐受性或敏感性低，因此需要与定点照护装置兼容的专门化学物质。
本公开的实施方案还解决了对用于分析物检测的“一体化”测定形式的需求，在本申请之前，现有技术中尚未开发或描述所述测定形式。例如，Tenda,K.等人(Angew.Chem.Int.Ed.57,15369–15373(2018))公开了纸装置，其中底物和生物发光组分被干燥到纸的不同部分上，而不是一起包含在单一形式系统中。此外，Yu,Q.等人(Science361,1122–1126(2018))公开，虽然生物发光组分可一起干燥，但底物单独与目标分析物混合且随后添加至纸中，而不是在单一形式系统中干燥底物和生物发光组分。如本文中进一步描述的，本公开的实施方案提供了包括单一形式(例如，“一体化”)系统中生物发光检测复合物的所有必需组分(不包括目标分析物)的方法、组合物和系统。这与目前可用的系统形成对比，目前可用的系统包括单独形式/溶液中的至少一种必要的生物发光组分。因此，本公开的实施方案提供了优于当前可用的生物发光分析物检测系统的令人惊讶和出人意料的优点。
为了解决对不一定限于使用典型免疫测定试剂的基于生物发光的定点照护免疫测定平台的需求，本公开的实施方案包括使用
Figure BDA0003382854880000361
生物发光平台，包括用于由两种或多种肽和/或多肽组分组装生物发光复合物的组合物和方法。在一些实施方案中，所述肽和/或多肽组分不是预先存在的蛋白质的片段(例如，不是已知多肽序列的互补子序列)，而是通过结构互补赋予生物发光活性(参见例如，WO/2014/151736(国际申请号PCT/US2014/026354)和美国专利申请序列号16/439,565(PCT/US2019/036844)以引用的方式整体并入本文)，如本文进一步描述。在一些实施方案中，肽和/或多肽组分在不存在互补的情况下是非发光的，和/或互补增强肽或多肽组分的生物发光。在一些实施方案中，目标分析物结合剂用本文所述的生物发光复合物的各种组分标记，但不包括结合剂结合其目标分析物的能力。本公开的生物发光复合物的组分被配置为与当前可用的定点照护装置和系统(如侧流装置、基于纸的斑点测试、试纸测试、芯片实验室、微流体装置、预填充的96孔微量滴定板等)兼容。
例如，本公开的实施方案将基于
Figure BDA0003382854880000362
的技术(例如，NanoBiT、NanoTrip、Nano-Glo(例如，NANOGLO活细胞底物或NANOGLO LCS(Promega目录号N205和N113))、NanoBRET等)并入目标分析物检测测定中，所述目标分析物检测测定可嵌入固相测定或装置(包括各种组成的塑料、基质和膜)中，和/或用于其他分析形式，如用于溶液相测定的冻干饼状物或片，其所有即使在复杂采样环境(例如，血液成分、食物基质、土壤样品、粪便、尿液、水和其他人和动物生物样本)中也能可靠地发挥作用。在一些实施方案中，将基于
Figure BDA0003382854880000363
的报告系统并入侧流测定(LFA)技术、纸斑点测试和类似装置中。LFA是常用的定点照护技术，用于测量各种目标分析物，包括但不限于抗体、细菌和病毒抗原、代谢物、蛋白质等。如图1所示，LFA可与基于
Figure BDA0003382854880000371
的报告基因技术相结合，以提供多重病毒感染检测测定来在护理点检测抗病毒抗体。目前唯一可用的、经批准的用于检测寨卡病毒暴露的紧急使用免疫测定是传统的基于板的多步夹心ELISA，用于检测血液样品中是否存在抗寨卡病毒IgM。与这种系统相比，基于
Figure BDA0003382854880000372
的生物发光报告平台的多路复用能力允许快速检测样品中的多种抗体，无论所述抗体识别同一病毒的多个不同表位，还是识别多于一种病毒上的多个不同表位。利用生物发光快速且灵敏地检测和坚定病毒感染的能力将有助于治疗决策。除了抗体和抗原之外，本文所述的生物发光复合物的组分肽的小尺寸允许使用替代结合剂和材料(如但不限于DARPin、适体、寡核苷酸探针、肽核酸(PNA)和锁核酸测定(LNA))检测许多其他目标分析物。
如在本章节和本文的整个公开内容中使用的章节标题仅用于组构目的并且并非意图进行限制。
1.定义
除非另外定义，否则本文中所用的所有技术和科学术语均具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。在冲突的情况下，以本文件(包括定义)为准。虽然在本公开的实践或测试中可使用与本文所描述的那些方法和材料类似或等效的方法和材料，但以下描述了优选的方法和材料。本文提及的所有公布、专利申请、专利以及其它参考文献以引用的方式整体并入。本文公开的材料、方法和实施例仅是说明性的，并且不意图是限制性的。
如本文所用，术语“包含(comprise)”、“包括(include)”、“具有(having)”、“具有(has)”、“可(can)”、“含有(contain)”以及其变化形式意图是不排除另外行为或结构的可能性的开放式连接词、术语、或词语。除非上下文另外清楚地说明，否则单数形式“一个/种(a)”、“一个/种(an)”以及“所述”包括复数引用。使用开放式“包含”语言描述本文的许多实施方案。此类实施方案涵盖多个封闭的“由……组成”和/或“基本上由……组成”的实施方案，所述实施方案可替代地使用这样的语言来要求保护或描述。本公开还涵盖“包括本文所呈现的实施方案或要素”、“由本文所呈现的实施方案或要素组成”以及“主要由本文所呈现的实施方案或要素组成”的其它实施方案，无论是否明确地提出。
对于本文的数值范围的叙述来说，明确地涵盖具有相同精确度的介于其间的每个中间数字。例如，对于6-9的范围来说，除6和9之外，还涵盖数字7和8，并且对于范围6.0-7.0来说，明确地涵盖数字6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9和7.0。
“生物发光”是指通过由酶、蛋白质、蛋白质复合物或其他生物分子(例如，生物发光复合物)催化或促成的化学反应产生和发射光。在典型实施方案中，生物发光实体(例如生物发光蛋白或生物发光复合物)的底物由生物发光实体转化为不稳定形式；所述底物随后发光。
“互补”是指两个或更多个结构元件(例如，肽、多肽、核酸、小分子等)能够彼此杂交、二聚化或以其他方式形成复合物的特征。例如，“互补肽和多肽”能够聚集在一起形成复合物。互补元件可能需要辅助以形成复合物(例如，来自相互作用元件)，例如，将元件置于适当的构象以获得互补性、共定位互补元件、降低相互作用能以实现互补等。
“复合物”是指彼此直接和/或间接接触的分子(例如，肽、多肽等)的集合或聚集体。在一个方面，“接触”或更具体地“直接接触”是指两个或更多个分子足够接近，使得吸引非共价相互作用如范德华力、氢键合、离子和疏水相互作用等占分子的相互作用的主导地位。在这样的方面，在测定条件下形成分子(例如，肽和多肽)的复合物使得所述复合物在热力学上是有利的(例如，与其组分分子的非聚集或非复合状态相比)。如本文所用，除非另有说明，否则术语“复合物”是指两个或更多个分子(例如，肽、多肽或其组合)的集合。
如本文所用，抗体的“衍生物”可指当与真正的或亲本抗体相比时具有对其氨基酸序列的一个或多个修饰并表现出经修饰的结构域结构的抗体。所述衍生物可能仍然能够采用在天然抗体中发现的典型结构域构型，以及能够特异性结合至靶标(抗原)的氨基酸序列。抗体衍生物的典型实例是与其他多肽偶联的抗体、重排的抗体结构域或抗体的片段。衍生物还可包含至少一种另外的化合物，如通过共价键或非共价键连接的蛋白质结构域。根据本领域已知的方法，连接可以是基于遗传融合。包含抗体的融合蛋白中存在的另外结构域可优选地通过柔性接头(有利地是肽接头)连接，其中所述肽接头包含长度足以跨越另一蛋白质结构域的C-末端与抗体的N-末端之间的距离(反之亦然)的多个亲水性肽键合氨基酸。抗体可例如连接至具有适于生物活性或选择性结合至固体支持物、生物活性物质(例如细胞因子或生长激素)、化学试剂、肽、蛋白质或药物的构象的效应分子。
“片段”是指由更大的完整实体(例如，蛋白质、多肽、酶等)的分离或“片段化”产生的肽或多肽，或如此制备成具有相同序列的肽或多肽。因此，片段是从其制备和/或设计它的整个实体(例如，蛋白质、多肽、酶等)的子序列。不是预先存在的完整蛋白质的子序列的肽或多肽不是片段(例如，不是预先存在的蛋白质的片段)。“不是预先存在的生物发光蛋白的片段”的肽或多肽是不为蛋白质(例如，天然的或合成的)的子序列的氨基酸链，所述氨基酸链：(1)在所述肽或多肽的设计和/或合成之前已经物理存在，和(2)表现出显著生物发光活性。
如本文所用，术语“抗体片段”是指全长抗体的一部分，包括抗原结合区或可变区的至少一部分。抗体片段包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv、Fd、可变轻链、可变重链、双抗体和保留完整抗体的可变区的至少一部分的其他抗体片段。参见例如，Hudson等人(2003)Nat.Med.9:129-134；其以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，抗体片段通过重组DNA技术或化学多肽合成产生的完整抗体的酶促或化学裂解(例如，抗体的木瓜蛋白酶消化和胃蛋白酶消化)产生。例如，“Fab”片段包含一条轻链以及一条重链的CH1和可变区。Fab分子的重链不能与另一重链分子形成二硫键。“Fab'”片段包含一条轻链和一条重链，所述重链包含在CH1与CH2结构域之间延伸的额外恒定区。Fab'片段的两条重链之间可形成链间二硫键，从而形成“F(ab')2”分子。“Fv”片段包含来自重链和轻链两者的可变区，但缺乏恒定区。单链Fv(scFv)片段包含通过柔性接头连接的重链和轻链可变区，以形成具有抗原结合区的单一多肽链。示例性单链抗体在WO 88/01649和美国专利号4,946,778以及5,260,203中进行了详细论述；所述专利以引用的方式整体并入。在某些情况下，单个可变区(例如，重链可变区或轻链可变区)可具有识别和结合抗原的能力。熟练的技术人员将了解其他抗体片段。
如本文所用的“分离的多核苷酸”可意指(例如，基因组、cDNA或合成来源或它们的组合的)多核苷酸，所述“分离的多核苷酸”根据其来源不与“分离的多核苷酸”见于自然界中所处的多核苷酸的全部或一部分缔合；可操作地连接至其在自然界中不连接的多核苷酸；或不作为较大序列的一部分存在于自然界中。
“非发光”是指表现出在可见光谱(例如，在底物存在下)不发射可检测量的光的特征的实体(例如，肽、多肽、复合物、蛋白质等)。例如，如果实体在给定测定中不表现出可检测的发光，则所述实体可被称为非发光的。如本文所用，术语“非发光的”与术语“基本上不发光”同义。例如，与多肽与其非发光补体肽的复合物相比，非发光多肽基本上不发光，表现出例如10倍或更多倍(例如，100倍、200倍、500倍、1x103倍、1x104倍、1x105倍、1x106倍、1x107倍等)的发光减少。在一些实施方案中，如果任何光发射足够小以致不会对特定测定产生干扰背景，则实体是“非发光的”。
“非发光肽”和“非发光多肽”是指与在标准条件(例如生理条件、测定条件等)和典型仪器(例如光度计等)下的显著信号(例如发光复合物)相比，基本上不表现出发光(例如，在底物存在下)或量低于噪声或10倍或更多倍(例如，100倍、200倍、500倍、1x103倍、1x104倍、1x105倍、1x106倍、1x107倍等)的肽和多肽。在一些实施方案中，根据本文所述的标准，此类非发光肽和多肽组装以形成生物发光复合物。如本文所用，“非发光元件”是非发光肽或非发光多肽。术语“生物发光复合物”是指两种或更多种非发光肽和/或非发光多肽的组装复合物。生物发光复合物催化或能够将生物发光复合物的底物转化为不稳定形式；所述底物随后发光。当未复合时，形成生物发光复合物的两个非发光元件可被称为“非发光对”。如果生物发光复合物由三种或更多种非发光肽和/或非发光多肽形成，则生物发光复合物的未复合成分可被称为“非发光基团”。
如本文所用并且除非另有说明，否则“肽”和“多肽”是指通过肽酰胺键(--C(O)NH--)通过主链连接的两个或多个氨基酸的聚合物化合物。术语“肽”通常是指短氨基酸聚合物(例如，具有少于25个氨基酸的链)，而术语“多肽”通常是指较长的氨基酸聚合物(例如，具有超过25个氨基酸的链)。
“预先存在的蛋白质”是指在某个事件或日期之前物理存在的氨基酸序列。“不是预先存在的蛋白质的片段的肽”是不为在肽的设计和/或合成之前物理存在的蛋白质(天然的或合成的)的片段或子序列的短氨基酸链。
如本文所用，“样品”、“测试样品”、“试样”、“来自受试者的样品”和“患者样品”可互换使用并且可以是血液样品，如全血、组织、尿液、血清、血浆、羊水、脑脊液、胎盘细胞或组织、内皮细胞、白细胞或单核细胞。样品可按从患者获得的原样直接使用，或者可诸如通过过滤、蒸馏、萃取、浓缩、离心、干扰组分的灭活、添加试剂等进行预处理，以以本文论述的某种方式或本领域已知的其他方式改变样品的性质。
“序列同一性”是指两个聚合物序列(例如，肽、多肽、核酸等)具有相同的单体亚基顺序组成的程度。术语“序列相似性”是指两个聚合物序列(例如，肽、多肽、核酸等)具有相似聚合物序列的程度。例如，相似的氨基酸是具有相同生物物理特性并且可归类为以下家族的那些氨基酸，例如酸性(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、碱性(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、非极性(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)和不带电的极性(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸)。“序列同一性百分比”(或“序列相似性百分比”)通过以下方式计算：(1)在比较窗口(例如，较长序列的长度、较短序列的长度、指定的窗口)上比较两个最佳比对的序列，(2)确定含有相同(或相似)单体(例如，在两个序列中出现的相同氨基酸，在两个序列中出现的相似氨基酸)的位置的数量以产生匹配位置的数量，(3)将匹配位置的数量除以比较窗口(例如，较长序列的长度、较短序列的长度、指定的窗口)中的总位置数，以及(4)将结果乘以100得到序列同一性百分比或序列相似性百分比。例如，如果肽A和B的长度均为20个氨基酸，并且除了1个位置之外的所有氨基酸都相同，则肽A和肽B具有95％的序列同一性。如果不同位置的氨基酸具有相同的生物物理特征(例如，两者都是酸性的)，则肽A和肽B将具有100％序列相似性。作为另一个实例，如果肽C的长度为20个氨基酸，并且肽D的长度为15个氨基酸，并且肽D中15个氨基酸中有14个与肽C的一部分的氨基酸相同，则肽C和D具有70％序列同一性，但肽D与肽C的最佳比较窗口具有93.3％序列同一性。为了计算本文中的“序列同一性百分比”(或“序列相似性百分比”)，比对序列中的任何空位被视为在所述位置不匹配。
如本文所用的“受试者”和“患者”可互换地指任何脊椎动物，包括但不限于哺乳动物和人。在一些实施方案中，受试者可以是人或非人。受试者或患者可能正在接受多种形式的治疗。如本文所用的“哺乳动物”是指哺乳纲的任何成员，包括而不限于人和非人灵长类动物，如黑猩猩以及其它猿和猴物种；农场动物，如牛、绵羊、猪、山羊、美洲鸵、骆驼和马；家养哺乳动物，如狗和猫；实验室动物，包括啮齿动物，如小鼠、大鼠、兔、豚鼠等。所述术语不指示特定年龄或性别。因此，成年和新生受试者以及胎儿无论雄性或雌性都意图包括在此术语的范围内。
“子序列”是指与另一个更大的肽或多肽具有100％序列同一性的肽或多肽。子序列是较大氨基酸链的一部分的完美序列匹配。
如本文所用的“基本上”意味着无需精确地达到所列举的特性、参数和/或值，但在不妨碍所述特性旨在提供的效果的量内，可出现偏差或变化，包括例如容限、测量误差、测量准确度限制以及本领域技术人员已知的其他因素。基本不存在(例如，基本上不发光)的特性或特征可以是在噪声内、在背景之下、在所使用的测定的检测能力之下或显著特征(例如，生物发光蛋白或生物发光复合物的发光强度)的一小部分(例如<1％、<0.1％、<0.01％、<0.001％、<0.00001％、<0.000001％、<0.0000001％)的特性或特征。
“变体”在本文用于描述因氨基酸的插入、缺失或保守性取代而在氨基酸序列方面不同、但保留至少一种生物活性的肽或多肽。“SNP”是指具有单核苷酸多态性的变体。“生物活性”的代表性实例包括被特异性抗体结合或促进免疫应答的能力。变体在本文还用于描述具有与参考蛋白质基本上相同的氨基酸序列的蛋白质，所述参考蛋白质具有保留至少一种生物活性的氨基酸序列。氨基酸的保守性取代，例如将氨基酸用具有相似性质(如亲水性、带电区域的程度和分布)的不同氨基酸替代在本领域中被视为通常涉及微小变化。这些微小变化可部分地通过考虑氨基酸的亲水指数来鉴定，如本领域中所理解的。氨基酸的亲水指数是基于其疏水性和电荷的考虑。本领域已知具有类似亲水指数的氨基酸可被取代并且仍然保留蛋白质功能。一方面，亲水指数为±2的氨基酸被取代。氨基酸的亲水性还可用于揭示将产生保留生物功能的蛋白质的取代。在肽的背景下氨基酸的亲水性的考虑允许计算所述肽的最大局部平均亲水性，其是据报道与抗原性和免疫原性良好相关的有用测量。如本领域所了解的，具有相似亲水性值的氨基酸的取代可产生保留生物活性(例如免疫原性)的肽。可用彼此具有±2之内的亲水性值的氨基酸进行取代。氨基酸的疏水性指数和亲水性值两者受氨基酸的特定侧链影响。与所述观察一致的是，可与生物功能相容的氨基酸取代被理解为取决于所述氨基酸的相对类似性，并且特别是那些氨基酸的侧链的相对类似性，如通过疏水性、亲水性、电荷、大小及其他性质所揭示。
如本文所用的“目标分析物”或“分析物”是指样品中可被检测、定量、测量、测试和/或监测的物质，通常作为评估过程或条件的方法(例如，诊断或预后测定)的一部分。目标分析物可包括但不限于蛋白质、肽、多肽、酶、辅因子、核苷酸、多核苷酸、DNA、RNA、小分子化合物、抗体以及它们的任何变型、组合和衍生物。
如本文所用，“目标分析物结合剂”是指能够与目标分析物结合的剂。在一些实施方案中，目标分析物结合剂包括可结合多种物质(如目标分析物和固相支持物)的剂。在一些实施方案中，目标分析物结合剂包括结合目标分析物(例如，通过目标分析物结合元件)和不同的肽/多肽两者以形成目标分析物检测复合物(例如，以产生生物发光信号)的剂。在一些实施方案中，目标分析物结合剂可包括能够结合一组或一类分析物(例如，蛋白L与抗体的结合)的目标分析物结合元件；并且在其他实施方案中，目标分析物结合剂可包括能够结合特定分析物(例如，结合单克隆抗体的抗原)的目标分析物结合元件。目标分析物结合剂可以是抗体、抗体片段、结合目标配体的受体结构域、结合至免疫球蛋白的蛋白质或蛋白质结构域(例如，蛋白A、蛋白G、蛋白A/G、蛋白L、蛋白M)、结合至免疫球蛋白的蛋白质(例如，蛋白A、蛋白G、蛋白A/G、蛋白L、蛋白M)的结合结构域、寡核苷酸探针、肽核酸、DARPin、适体、affimer、纯化的蛋白质，或蛋白质结构域(分析物本身或与分析物结合的蛋白质)和蛋白质的分析物结合结构域等。表A提供示例性结合部分的列表，所述示例性结合部分可在本文的方法、系统和测定(例如免疫测定)中单独使用或以各种组合使用。
表1：示例性目标分析物结合剂。
Figure BDA0003382854880000451
Figure BDA0003382854880000461
除非在本文中另外定义，否则结合本公开使用的科学和技术术语应该具有本领域技术人员通常所理解的含义。例如，与本文所描述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学以及蛋白质和核酸化学及杂交结合使用的任何命名法是本领域中众所周知且常用的那些。术语的含义和范围应为清晰的，然而，如果存在任何隐含歧义，那么本文中所提供的定义优先于任何字典或外来定义。另外，除非上下文另有要求，否则单数术语应包括复数并且复数术语应包括单数。
2.生物发光
本公开包括与生物发光多肽、生物发光复合物及其组分和生物发光共振能量转移(BRET)相关的材料和方法。
在一些实施方案中，本文提供了并入了(例如，非发光肽和/或非发光多肽组分的)生物发光多肽和/或生物发光复合物的固相和/或侧流测定、装置和系统，其是基于(例如结构上、功能上等)细角刺虾(Oplophorus gracilirostris)的荧光素酶、
Figure BDA0003382854880000462
荧光素酶(Promega Corporation；美国专利号8,557,970；美国专利号8,669,103；以引用的方式整体并入本文)、NanoBiT(美国专利号9,797,889；以引用的方式整体并入本文)或NanoTrip(美国专利申请序列号16/439,565；和美国临时申请序列号62/941,255；两者均以引用的方式整体并入本文)。如下所述，在一些实施方案中，本文的组合物、测定、装置、方法和系统并入了可商购的基于
Figure BDA0003382854880000463
的技术(例如
Figure BDA0003382854880000464
荧光素酶、NanoBRET、NanoBiT、NanoTrip、NanoGlo等)，但在其他实施方案中，采用了来自可商购的基于
Figure BDA0003382854880000471
的技术的各种组合、变型或衍生。
a.NanoLuc
PCT申请号PCT/US2010/033449、美国专利号8,557,970、PCT申请号PCT/2011/059018和美国专利号8,669,103(其各自以引用的方式整体并入本文并用于所有目的)描述包含生物发光多肽的组合物和方法。此类多肽可用于本文的实施方案中并且可与本文所述的组合物、测定、装置、系统和方法结合使用。
在一些实施方案中，本文提供的组合物、测定、装置、系统和方法包含SEQ ID NO:5或与SEQ ID NO:5具有至少60％(例如，60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、100％或它们之间的范围)的序列同一性的生物发光多肽。
在一些实施方案中，任何前述生物发光多肽连接(例如，融合、化学连接等)至本文所述的测定和系统的结合元件或其他组分。
在一些实施方案中，任何前述生物发光多肽或其融合物或缀合物(例如，具有结合元件等)被固定至本文所述的装置的一部分(例如，侧流测定的检测或对照区域、固相检测元件等)。
b.NanoBiT
PCT申请号PCT/US14/26354和美国专利号9,797,889(其各自以引用的方式整体并入本文并用于所有目的)描述用于组装生物发光复合物的组合物和方法，此类复合物及其肽和多肽组分可用于本文的实施方案中并且可与本文所述的测定和方法结合使用。
在一些实施方案中，本文提供了与SEQ ID NO:9具有至少60％(例如，60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、100％或它们之间的范围)的序列同一性、但与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:6具有小于100％(例如，<99％、<98％、<97％、<96％、<95％、<94％、<93％、<92％、<91％、<90％)的序列同一性的非发光(NL)多肽。
在一些实施方案中，本文提供了与SEQ ID NO:10具有至少60％(例如，60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、100％或它们之间的范围)的序列同一性、但与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:8具有小于100％(例如，<99％、<98％、<97％、<96％、<95％、<94％、<93％、<92％、<91％、<90％)的序列同一性的非发光(NL)肽。
在一些实施方案中，本文提供了与SEQ ID NO:11具有至少60％(例如，60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、100％或它们之间的范围)的序列同一性、但与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:8具有小于100％(例如，<99％、<98％、<97％、<96％、<95％、<94％、<93％、<92％、<91％、<90％)的序列同一性的NL肽。
在一些实施方案中，任何前述NL肽或NL多肽连接(例如，融合、化学连接等)至本文所述的组合物、测定、装置、方法和系统的结合元件或其他组分。
在一些实施方案中，任何前述NL肽或NL多肽或其融合物或缀合物(例如，具有结合元件等)被固定至本文所述的装置的一部分(例如，侧流测定的检测或对照区域、固相检测元件等)。
在一些实施方案中，本文提供了一种侧流检测系统，所述侧流检测系统包括：包括检测区域和对照区域的分析膜，其中所述检测区域包括固定至所述检测区域的第一目标分析物结合剂；包括第二目标分析物结合剂的结合垫；和样品垫；其中所述第一目标分析物结合剂包含第一目标分析物结合元件和第一基于NanoBiT的NL肽或NL多肽组分(如上所述)，并且其中所述第二目标分析物结合剂包含第二目标分析物结合元件和互补的基于NanoBiT的NL肽或NL多肽组分(如上所述)。在一些实施方案中，当在样品中检测到目标分析物时，所述第一目标分析物结合剂和所述第二目标分析物结合剂在至少一个检测区域中形成分析物检测复合物。在一些实施方案中，与仅由第二目标分析物结合剂或第一目标分析物结合剂和发光底物产生的生物发光信号相比，当所述第一目标分析物结合剂接触所述第二目标分析物结合剂时，在所述发光底物存在下产生的生物发光信号显著增加。
在一些实施方案中，本文提供了固相检测系统，所述固相检测系统包括：固相基底，所述固相基底包括第一目标分析物结合剂和第二目标分析物结合剂；其中所述第一目标分析物结合剂包含第一目标分析物结合元件和第一基于NanoBiT的NL肽或NL多肽组分(如上所述)，并且其中所述第二目标分析物结合剂包含第二目标分析物结合元件和互补的基于NanoBiT的NL肽或NL多肽组分(如上所述)。在一些实施方案中，当在样品中检测到目标分析物时，所述第一目标分析物结合剂和所述第二目标分析物结合剂在所述固相基底中形成分析物检测复合物。在一些实施方案中，与仅由第二目标分析物结合剂或第一目标分析物结合剂和发光底物产生的生物发光信号相比，当所述第一目标分析物结合剂接触所述第二目标分析物结合剂时，在所述发光底物存在下产生的生物发光信号显著增加。
c.NanoTrip
美国专利申请序列号16/439,565(PCT/US2019/036844)和美国临时申请序列号62/941,255(两者均以引用的方式整体并入本文并用于所有目的)描述用于组装生物发光复合物的组合物、系统和方法。此类复合物及其肽和多肽组分可用于本文的实施方案中并且可与本文所述的测定和方法结合使用。
在一些实施方案中，本文提供了与SEQ ID NO:12具有至少60％(例如，60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、100％或它们之间的范围)的序列同一性、但与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:9具有小于100％(例如，<99％、<98％、<97％、<96％、<95％、<94％、<93％、<92％、<91％、<90％)的序列同一性的非发光(NL)多肽。
在一些实施方案中，本文提供了与SEQ ID NO:11具有至少60％(例如，60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、100％或它们之间的范围)的序列同一性、但与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:8具有小于100％(例如，<99％、<98％、<97％、<96％、<95％、<94％、<93％、<92％、<91％、<90％)的序列同一性的非发光(NL)肽。
在一些实施方案中，本文提供了与SEQ ID NO:13具有至少60％(例如，60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、100％或它们之间的范围)的序列同一性、但与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:7具有小于100％(例如，<99％、<98％、<97％、<96％、<95％、<94％、<93％、<92％、<91％、<90％)的序列同一性的NL肽。
在一些实施方案中，本文提供了与SEQ ID NO:14具有至少60％(例如，60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、100％或它们之间的范围)的序列同一性、但与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8具有小于100％(例如，<99％、<98％、<97％、<96％、<95％、<94％、<93％、<92％、<91％、<90％)的序列同一性的NL肽。
在一些实施方案中，任何前述基于NanoTrip的NL肽或NL多肽连接(例如，融合、化学连接等)至本文所述的组合物、方法、装置、测定和系统的结合元件或其他组分。
在一些实施方案中，任何前述基于NanoTrip的NL肽或NL多肽或其融合物或缀合物(例如，具有结合元件等)被固定至本文所述的装置的一部分(例如，侧流测定的检测或对照区域、固相检测元件等)。
在一些实施方案中，本文提供了一种侧流检测系统，所述侧流检测系统包括：包括检测区域和对照区域的分析膜，其中所述检测区域包括固定至所述检测区域的第一目标分析物结合剂；包括第二目标分析物结合剂的结合垫；和样品垫；其中所述第一目标分析物结合剂包含第一目标分析物结合元件和第一基于NanoTrip的NL肽(如上所述)，并且其中所述第二目标分析物结合剂包含第二目标分析物结合元件和互补的基于NanoTrip的NL肽(如上所述)。在一些实施方案中，当在样品中检测到目标分析物时，在基于NanoTrip的NL多肽组分(如上所述)存在下，所述第一目标分析物结合剂和所述第二目标分析物结合剂在至少一个检测区域中形成分析物检测复合物。在一些实施方案中，与仅由第二目标分析物结合剂或第一目标分析物结合剂和发光底物产生的生物发光信号相比，当在基于NanoTrip的NL多肽组分存在下所述第一目标分析物结合剂接触所述第二目标分析物结合剂时，在所述发光底物存在下产生的生物发光信号显著增加。
在一些实施方案中，本文提供了一种固相检测系统，所述固相检测系统包括：固相(例如，纸基底等)，所述固相包括第一目标分析物结合剂和第二目标分析物结合剂；其中所述第一目标分析物结合剂包含第一目标分析物结合元件和第一基于NanoTrip的NL肽(如上所述)，并且其中所述第二目标分析物结合剂包含第二目标分析物结合元件和互补的第二NL基于NanoTrip的肽(如上所述)。在一些实施方案中，当在样品中检测到目标分析物时，在基于NanoTrip的NL多肽(如上所述)存在下，所述第一目标分析物结合剂和所述第二目标分析物结合剂形成分析物检测复合物。在一些实施方案中，与仅由第二目标分析物结合剂或第一目标分析物结合剂和发光底物产生的生物发光信号相比，当所述第一目标分析物结合剂接触所述第二目标分析物结合剂和基于NanoTrip的NL多肽时，在所述发光底物存在下产生的生物发光信号显著增加。
d.NanoBRET
如PCT申请号PCT/US13/74765和美国专利申请序列号15/263,416(以引用的方式整体并入本文并用于所有目的)中所公开，描述了生物发光共振能量转移(BRET)组合物、系统和方法(例如，并入了基于
Figure BDA0003382854880000521
的技术)；此类组合物、系统和方法以及其生物发光多肽和荧光团缀合的组分可用于本文的实施方案中，并且可与本文所述的组合物、系统、装置、测定和方法结合使用。
在一些实施方案中，任何基于
Figure BDA0003382854880000522
基于NanoBiT和/或基于NanoTrip(在上文a-c部分中描述)的肽、多肽、复合物、融合物和缀合物均可与本文描述的组合物、测定、方法、装置和系统一起用于基于BRET的应用中。例如，在某些实施方案中，第一目标分析物结合剂包含第一目标分析物结合元件和基于
Figure BDA0003382854880000523
基于NanoBiT和/或基于NanoTrip的多肽、肽或复合物，并且第二目标分析物结合剂包含第二目标分析物结合元件和荧光团(例如，荧光蛋白、小分子荧光团等)，其中所述基于
Figure BDA0003382854880000524
基于NanoBiT和/或基于NanoTrip的多肽、肽或复合物的发射光谱与所述荧光团的激发光谱重叠。在一些实施方案中，可以冻干形式制备基于
Figure BDA0003382854880000525
基于NanoBiT和/或基于NanoTrip的多肽、肽或复合物，所述多肽、肽或复合物可包含或不包含发光底物(例如furimazine)。
在一些实施方案中，目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和能够被来自生物发光多肽的能量转移激活的荧光团。
如本文所用，术语“能量受体”是指响应于能量吸收(例如，共振能量转移)产生可容易检测的信号的任何小分子(例如，生色团)、大分子(例如，自发荧光蛋白、藻胆蛋白、纳米颗粒、表面等)或分子复合物。在某些实施方案中，能量受体是荧光团或其他可检测的生色团。合适的荧光团包括但不限于：呫吨衍生物(例如，荧光素、罗丹明、俄勒冈绿、曙红、德克萨斯红等)、花青衍生物(例如，吲哚碳菁、氧杂碳菁、硫杂碳菁、部花青等)、萘衍生物(例如，丹磺酰和普罗丹衍生物)、噁二唑衍生物(例如，吡啶基噁唑、硝基苯并噁二唑、苯并噁二唑等)、芘衍生物(例如，瀑布蓝)、噁嗪衍生物(例如，尼罗红、尼罗蓝、甲酚紫、噁嗪170等)、吖啶衍生物(例如，原黄素、吖啶橙、吖啶黄等)、芳基次甲基衍生物(例如，金胺、结晶紫、孔雀石绿等)、四吡咯衍生物(例如，卟啉、酞菁、胆红素等)、CF染料(Biotium)、BODIPY(Invitrogen)、ALEXA FLuoR(Invitrogen)、DYLIGHT FLUOR(Thermo Scientific,Pierce)、ATTO和TRACY(Sigma Aldrich)、FluoProbes(Interchim)、DY和MEGASTOKES(Dyomics)、磺基CY染料(CYANDYE,LLC)、SETAU和SQUARE染料(SETA BioMedicals)、QUASAR和CAL FLUOR染料(Biosearch Technologies)、SURELIGHT染料(APC、RPE、PerCP、藻胆蛋白体)(ColumbiaBiosciences)、APC、APCXL、RPE、BPE(Phyco-Biotech)、自发荧光蛋白(例如，YFP、RFP、mCherry、mKate)、量子点纳米晶体等。在一些实施方案中，荧光团是罗丹明类似物(例如，羧基罗丹明类似物)，如在美国专利申请序列号13/682,589中描述的那些，所述专利申请以引用的方式整体并入本文。
e.HALOTAG
本文的一些实施方案包括能够与捕获配体形成共价键的捕获蛋白。捕获蛋白可连接至第一元件(例如，生物发光复合物的肽组分)，并且捕获配体连接至第二元件(例如，目标分析物结合元件(例如，抗体或抗原结合蛋白))，并且共价键的形成将所述第一元件和第二元件彼此连接。在一些实施方案中，连接所述第一元件和第二元件产生目标分析物结合剂。在一些实施方案中，如此形成的两种或更多种目标分析物结合剂可结合至互补多肽组分(例如，LgTrip)并在分析物(例如，由目标分析物结合元件识别的目标抗原)存在下形成生物发光复合物(参见例如图48和58)。在一些实施方案中，捕获配体是卤代烷烃(又名“烷基卤化物”)。在一些实施方案中，捕获配体是氯烷烃。在一些实施方案中，捕获配体是-A-X。在一些实施方案中，X是Cl。在一些实施方案中，-A-X是-(CH2)6Cl。当捕获配体是卤代烷烃时，捕获蛋白通常是经修饰以与其底物形成共价键的脱卤素酶(参见例如，美国专利号7,425,436；美国专利号7,429,472；美国专利号7,867,726；美国专利号7,888,086；美国专利号7,935,803；美国专利号RE42,931；美国专利号8,168,405；美国专利号8,202,700；美国专利号8,257,939；以引用的方式整体并入本文)。
一种如此修饰的脱卤素酶是可商购的HALOTAG蛋白(SEQ ID NO:720)。在一些实施方案中，捕获蛋白包含与SEQ ID NO.:720具有至少70％序列同一性(例如，75％同一性、80％同一性、85％同一性、90％同一性、95％同一性、98％同一性、99％同一性)的多肽。一些实施方案包含捕获蛋白(例如，HALOTAG)和另一种肽/多肽元件(例如，结合部分、生物发光复合物的肽/多肽组分等)的融合蛋白。在一些实施方案中，捕获配体是包含共价连接至烷基链(例如，(CH2)4-24)末端的卤素(例如，Cl、Br、F、I等)的卤代烷烃。在一些实施方案中，烷基链的另一端连接至接头或连接至另一元件(例如，肽、分析物等)。接头可包含烷基链或取代的烷基链(例如，C＝O、NH、S、O、氨基甲酸酯、乙烯等)，如美国专利申请号14/207,959中描述的那些，以引用的方式并入本文。
3.组合物和制剂
本公开的实施方案包括包含本文提供的生物发光复合物的一种或多种肽和/或多肽组分的组合物和制剂。根据这些实施方案，本公开的组合物和制剂可包含发光底物和/或各种其他组分。本文提供的组合物和方法可用于配制能够在目标分析物存在下产生发光信号的贮存稳定的液体制剂(例如，以溶液相测定形式使用)和贮存稳定的干燥制剂(例如，以固相测定形式使用)，即使在长时间储存后也如此。如下文进一步描述的，本公开的组合物和制剂可包含NanoLuc、NanoBiT、NanoTrip和NanoBRET中的一种或多种组分以及本文所述的各种发光底物(例如furimazine)。
与许多当前可用的荧光和比色测定相比，本公开的组合物和制剂提供用于进行生物测定的手段，其中生物发光复合物的一种或多种肽和/或多肽组分存在于稳定的干燥制剂中，所述干燥制剂能够在含有例如互补肽/多肽和/或发光底物的溶液中复原，使得在目标分析物存在下形成生物发光复合物。在一些实施方案中，本公开的组合物和制剂提供用于进行稳健固相生物测定的手段，其中所产生的生物发光信号是定量的并且与目标分析物的浓度成比例。
在一些实施方案中，本公开的组合物和制剂包含发光底物和目标分析物结合剂，所述目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和生物发光复合物的多肽组分或生物发光复合物的肽组分。在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂的多肽组分包含与SEQ IDNO:6的至少60％序列同一性、与SEQ ID NO:9的至少60％序列同一性或与SEQ ID NO:12的至少60％序列同一性。在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂的多肽组分包含与SEQID NO:6的至少70％序列同一性、与SEQ ID NO:9的至少70％序列同一性或与SEQ ID NO:12的至少70％序列同一性。在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂的多肽组分包含与SEQID NO:6的至少80％序列同一性、与SEQ ID NO:9的至少80％序列同一性或与SEQ ID NO:12的至少80％序列同一性。在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂的多肽组分包含与SEQID NO:6的至少85％序列同一性、与SEQ ID NO:9的至少85％序列同一性或与SEQ ID NO:12的至少85％序列同一性。在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂的多肽组分包含与SEQID NO:6的至少90％序列同一性、与SEQ ID NO:9的至少90％序列同一性或与SEQ ID NO:12的至少90％序列同一性。在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂的多肽组分包含与SEQID NO:6的至少95％序列同一性、与SEQ ID NO:9的至少95％序列同一性或与SEQ ID NO:12的至少95％序列同一性。
在其他实施方案中，所述目标分析物结合剂的肽组分包含与SEQ ID NO:10的至少60％序列同一性、与SEQ ID NO:11的至少60％序列同一性、与SEQ ID NO:13的至少60％序列同一性或与SEQ ID NO:14的至少60％序列同一性。在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂的肽组分包含与SEQ ID NO:10的至少70％序列同一性、与SEQ ID NO:11的至少70％序列同一性、与SEQ ID NO:13的至少70％序列同一性或与SEQ ID NO:14的至少70％序列同一性。在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂的肽组分包含与SEQ ID NO:10的至少80％序列同一性、与SEQ ID NO:11的至少80％序列同一性、与SEQ ID NO:13的至少80％序列同一性或与SEQ ID NO:14的至少80％序列同一性。在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂的肽组分包含与SEQ ID NO:10的至少85％序列同一性、与SEQ ID NO:11的至少85％序列同一性、与SEQ ID NO:13的至少85％序列同一性或与SEQ ID NO:14的至少85％序列同一性。在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂的肽组分包含与SEQ ID NO:10的至少90％序列同一性、与SEQ ID NO:11的至少90％序列同一性、与SEQ ID NO:13的至少90％序列同一性或与SEQ ID NO:14的至少90％序列同一性。在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂的肽组分包含与SEQ ID NO:10的至少95％序列同一性、与SEQ ID NO:11的至少95％序列同一性、与SEQ ID NO:13的至少95％序列同一性或与SEQ ID NO:14的至少95％序列同一性。
在一些实施方案中，所述组合物或制剂包含所述生物发光复合物的互补肽或多肽组分。根据这些实施方案中，所述目标分析物结合剂和所述生物发光复合物的互补肽或多肽组分可在目标分析物存在下形成生物发光分析物检测复合物。在一些实施方案中，包含发光底物和目标分析物结合剂的组合物可合并成干燥制剂，并且所述生物发光复合物的互补肽或多肽组分可被配制为液体制剂。在一些实施方案中，所述液体制剂添加至所述干燥制剂并且在所述目标分析物存在下在再水合后形成所述生物发光分析物检测复合物。在其他实施方案中，包含所述发光底物的组合物或制剂、所述目标分析物结合剂和所述生物发光复合物的互补肽或多肽组分合并成干燥制剂，其中所述干燥制剂在所述目标分析物存在下在再水合后形成所述生物发光分析物检测复合物。
在一些实施方案中，所述互补肽或多肽组分包含在所述目标分析物存在下形成所述生物发光分析物检测复合物的第二目标分析物结合元件。在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂的多肽组分包含与SEQ ID NO:6的至少60％序列同一性，并且其中所述生物发光复合物的互补肽或多肽组分包含与SEQ ID NO:10的至少60％序列同一性。在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂的多肽组分包含与SEQ ID NO:6的至少60％序列同一性，并且其中所述生物发光复合物的互补肽或多肽组分包含与SEQ ID NO:14的至少60％序列同一性。
本公开的实施方案还包括一种包含干燥制剂的组合物或制剂，所述干燥制剂包含第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含第一目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:9具有至少60％序列同一性的多肽组分；以及第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含第二目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:10具有至少60％序列同一性的互补肽组分。在一些实施方案中，所述干燥制剂还包含发光底物。在一些实施方案中，所述组合物还包含含有所述目标分析物的液体制剂。
本公开的实施方案还包括一种包含干燥制剂的组合物，所述干燥制剂包含第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含第一目标分析物结合元件和与SEQ IDNO:12具有至少60％序列同一性的多肽组分；以及第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含第二目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:14具有至少60％序列同一性的互补肽组分。在一些实施方案中，所述干燥制剂还包含发光底物。在一些实施方案中，所述组合物还包含含有所述目标分析物的液体制剂。
本公开的实施方案还包括一种包含干燥制剂的组合物，所述干燥制剂包含第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含第一目标分析物结合元件和与SEQ IDNO:13具有至少60％序列同一性的肽组分；第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含第二目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的互补肽组分；以及与SEQ ID NO:12具有至少60％序列同一性的互补多肽组分。在一些实施方案中，所述干燥制剂还包含发光底物。在一些实施方案中，所述组合物还包含含有所述目标分析物的液体制剂。
本公开的实施方案还包括一种组合物，所述组合物包含：包含第一目标分析物结合剂的干燥制剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:9具有至少60％序列同一性的多肽组分；以及包含第二目标分析物结合剂的液体制剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11具有至少60％序列同一性的互补肽组分。
本公开的实施方案还包括一种组合物，所述组合物包含：包含第一目标分析物结合剂的干燥制剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11具有至少60％序列同一性的肽组分；以及含有第二目标分析物结合剂的液体制剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:9具有至少60％序列同一性的互补多肽组分。
本公开的实施方案还包括一种组合物，所述组合物包含：包含第一目标分析物结合剂的干燥制剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:12具有至少60％序列同一性的多肽组分；以及包含第二目标分析物结合剂的液体制剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:14具有至少60％序列同一性的互补肽组分。在一些实施方案中，所述干燥制剂还包含发光底物。在一些实施方案中，所述液体制剂还包含发光底物。在一些实施方案中，所述液体制剂还包含含有目标分析物的样品。根据这些实施方案，在目标分析物存在下将所述干燥制剂和液体制剂合并后形成生物发光分析物检测复合物。
在一些实施方案中，所述组合物还包含所述生物发光复合物的第二互补肽或多肽组分。根据这些实施方案，所述目标分析物结合剂、所述生物发光复合物的所述第一互补肽或多肽组分和所述生物发光复合物的所述第二互补肽或多肽组分在目标分析物存在下形成生物发光分析物检测复合物。
在一些实施方案中，包含目标分析物结合剂的组合物产生为干燥制剂。在一些实施方案中，所述生物发光复合物的第一互补肽或多肽组分和第二互补肽或多肽产生为液体制剂。根据这些实施方案，可将所述液体制剂添加至所述干燥制剂，这有助于在目标分析物存在下在再水合后形成所述生物发光分析物检测复合物。
在一些实施方案中，包含目标分析物结合剂的组合物和所述第一或第二互补肽或多肽组分合并成干燥制剂，并且不存在于所述干燥制剂中的所述第一或第二互补肽或多肽组分产生为液体制剂。可将所述液体制剂添加至所述干燥制剂，这有助于在目标分析物存在下在再水合后形成所述生物发光分析物检测复合物。
在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂、所述第一互补肽或多肽组分和所述第二互补肽或多肽组分合并成干燥制剂，所述干燥制剂在所述目标分析物存在下在再水合后形成所述生物发光分析物检测复合物。在一些实施方案中，所述干燥制剂还包含发光底物。在一些实施方案中，所述液体制剂还包含发光底物。在一些实施方案中，所述液体制剂还包含含有目标分析物的样品，其中在所述目标分析物存在下在将所述干燥制剂和所述液体制剂合并后形成生物发光分析物检测复合物。
在一些实施方案中，所述第一或所述第二互补肽或多肽组分包含第二目标分析物结合元件，所述第二目标分析物结合元件在所述目标分析物存在下在再水合后形成所述生物发光分析物检测复合物。
在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂的多肽组分包含与SEQ ID NO:12的至少60％序列同一性，并且其中所述生物发光复合物的所述第一或所述第二互补肽或多肽组分包含与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15的至少60％序列同一性。
本公开的实施方案还包括一种组合物，所述组合物包含：包含第一目标分析物结合剂的干燥制剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:12具有至少60％序列同一性的多肽组分；以及液体制剂，所述液体制剂包含第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:13或SEQ IDNO:15具有至少60％序列同一性的互补肽组分，并且还包含与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的第二互补肽组分。
本公开的实施方案还包括干燥制剂，所述干燥制剂包含第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:12具有至少60％序列同一性的多肽组分；以及第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的互补肽组分，并且还包括液体制剂，所述液体制剂包含与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的第二互补肽组分。
本公开的实施方案还包括干燥制剂，所述干燥制剂包含第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:12具有至少60％序列同一性的多肽组分；和与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的互补肽组分；以及液体制剂，所述液体制剂包含第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的互补肽组分。
本公开的实施方案还包括干燥制剂，所述干燥制剂包含第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:13具有至少60％序列同一性的肽组分；和第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的互补肽组分，并且还包括液体制剂，所述液体制剂包含与SEQ ID NO:12具有至少60％序列同一性的互补多肽组分。
本公开的实施方案还包括干燥制剂，所述干燥制剂包含与SEQ ID NO:12具有至少60％序列同一性的互补多肽组分；以及液体制剂，所述液体制剂包含第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:13具有至少60％序列同一性的肽组分；和第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的互补肽组分。
本公开的实施方案还包括一种包含干燥制剂的组合物，所述干燥制剂包含第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:13具有至少60％序列同一性的肽组分；第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的互补肽组分；以及与SEQ ID NO:12具有至少60％序列同一性的互补多肽组分。在一些实施方案中，所述干燥制剂还包含发光底物。在一些实施方案中，所述液体制剂还包含发光底物。在一些实施方案中，所述液体制剂还包含含有目标分析物的样品，并且其中在所述目标分析物存在下在将所述干燥制剂和所述液体制剂合并后形成生物发光分析物检测复合物。
在一些实施方案中，与仅由所述目标分析物结合剂和所述发光底物产生的生物发光信号相比，当所述目标分析物结合剂接触所述生物发光复合物的一种或多种互补肽或多肽组分时，在所述发光底物存在下产生的生物发光信号显著增加。
在一些实施方案中，所述目标分析物是目标抗体。在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂包含非特异性地结合至抗体的元件。在一些实施方案中，所述目标分析物结合剂包含特异性地结合至抗体的元件。在一些实施方案中，所述目标抗体是针对病原体、毒素或治疗性生物制剂的抗体。
在一些实施方案中，目标分析物结合元件选自由以下组成的组：抗体、多克隆抗体、单克隆抗体、重组抗体、抗体片段、蛋白A、蛋白A的Ig结合结构域、蛋白G、蛋白G的Ig结合结构域、蛋白A/G、蛋白A/G的Ig结合结构域、蛋白L、蛋白L的Ig结合结构域、蛋白M、蛋白M的Ig结合结构域、寡核苷酸探针、肽核酸、DARPin、适体、affimer、蛋白质结构域和纯化的蛋白质。
在一些实施方案中，所述发光底物选自腔肠素、腔肠素-h、腔肠素-h-h、furimazine、JRW-0238、JRW-1404、JRW-1482、JRW-1667、JRW-1743、JRW-1744和其他腔肠素类似物或衍生物。在一些实施方案中，腔肠素类似物或衍生物是促发光底物，如美国专利号9,487,520中公开的那些，所述专利以引用的方式并入本文。在一些实施方案中，腔肠素类似物或衍生物是Enduazine(Promega Corporation)和Vivazine(Promega Corporation)。
在一些实施方案中，所述组合物还包含聚合物。在一些实施方案中，所述聚合物是天然存在的生物聚合物。在一些实施方案中，所述天然存在的生物聚合物选自普鲁兰多糖、海藻糖、麦芽糖、纤维素、葡聚糖以及它们的任何组合。在一些实施方案中，所述天然存在的生物聚合物是普鲁兰多糖。在一些实施方案中，所述聚合物是环状糖聚合物或其衍生物。在一些实施方案中，所述聚合物是羟丙基β-环糊精。
在一些实施方案中，所述聚合物是合成聚合物。在一些实施方案中，所述合成聚合物选自聚苯乙烯、聚(甲基)丙烯酸酯以及它们的任何组合。在一些实施方案中，所述合成聚合物是包含至少一个聚(环氧丙烷)嵌段和至少一个聚(环氧乙烷)嵌段的嵌段共聚物。在一些实施方案中，所述合成聚合物是泊洛沙姆188。
在一些实施方案中，所述组合物还包含缓冲剂、表面活性剂、还原剂、盐、自由基清除剂、螯合剂、蛋白质或它们的任何组合。在一些实施方案中，所述表面活性剂选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40和聚山梨醇酯80。
在一些实施方案中，所述组合物还包含减少自发光的物质。在一些实施方案中，所述物质是ATT(6-氮杂-2-硫代胸腺嘧啶)、ATT的衍生物或类似物、硫代核苷、硫脲等。在一些实施方案中，所述物质是美国专利号9,676,997中公开的硫代核苷，所述专利以引用的方式并入本文。在一些实施方案中，所述物质是硫脲，其用于减少自发光的用途在美国专利号7,118,878；7,078,181；和7,108,996中公开，所述专利以引用的方式并入本文。
在一些实施方案中，所述组合物与分析物检测平台结合使用以检测样品中的分析物。在一些实施方案中，样品选自血液、血清、血浆、尿液、粪便、脑脊液、间质液、唾液、组织样品、水样品、土壤样品、植物样品、食物样品、饮料样品、油和工业流体样品。
本公开的实施方案还包括一种检测样品中的分析物的方法，所述方法包括将上述组合物中的任一者与包含目标分析物的样品合并。在一些实施方案中，检测所述样品中的目标分析物包括检测从分析物检测复合物产生的生物发光信号。在一些实施方案中，所述方法还包括定量从所述分析物检测复合物产生的生物发光信号。在一些实施方案中，从所述分析物检测复合物产生的生物发光信号与所述分析物的浓度成比例。在一些实施方案中，与单独在溶液中的组分相比，所述组合物的一种或多种组分在所述组合物内表现出增强的稳定性。
上述组合物和制剂的各种实施方案证明增强的稳定性，如实施例和图中所示。例如，当产生为干燥制剂如冻干饼状物时，当在基底或基质(例如，Whatman 903、Ahlstrom237和Ahlstrom 6613H；96孔板的孔、尼龙网)上干燥时，或者当在有或没有发光底物的各种蛋白质缓冲液制剂中干燥时，本公开的组合物和制剂在储存延长的时间段时表现出增强的稳定性。如本文所提供，本公开的组合物和制剂能够在储存延长的时间段后在目标分析物存在下产生发光信号。在一些实施方案中，与含有生物发光复合物的相同或相似组分(例如，互补肽/多肽、发光底物)但在没有所述制剂的一种或多种其它组分的情况下配制和/或不是根据本文所述的方法配制的组合物和制剂相比，本公开的组合物和制剂表现出增强的稳定性。
在一些实施方案中，本公开的组合物和制剂表现出增强的稳定性持续至少约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、2周、3周、4周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、12个月且最多1年。在一些实施方案中，本公开的组合物和制剂在约0℃至65℃、约4℃至65℃、约10℃至65℃、约15℃至65℃、约15℃至65℃、约20℃至65℃、约25℃至65℃、约30℃至65℃、约35℃至65℃、约37℃至65℃、约40℃至65℃、约45℃至65℃、约50℃至65℃、约55℃至65℃、约60℃至65℃、约4℃至55℃，约10℃至50℃、约15℃至45℃以及约20℃至40℃范围内的温度下表现出增强的稳定性。
4.检测测定和系统
本公开的实施方案包括用于检测样品中的一种或多种分析物的组合物、系统、测定和方法。根据这些实施方案，以下描述了与本文的各种实施方案一起使用的示例性测定和装置。以下装置和测定不应被视为限制本文所述的系统、测定和方法的全部范围。
a.侧流测定
在某些实施方案中，本公开提供了用于进行侧流测定(例如，侧流免疫测定)的组合物和材料。侧流测定是基于免疫色谱的原理，并且可用于检测、定量、测试、测量和监测多种分析物，如但不限于与监测排卵、检测/诊断传染性疾病/生物体、分析滥用药物、检测/定量对人体生理学重要的分析物、安全筛查、兽医测试、农业应用、环境测试、产品质量评估等有关的分析物。
如图1所示，本公开的实施方案包括用于基于生物发光复合物形成检测和/或定量目标分析物的侧流检测系统(100)。在一些实施方案中，本公开的侧流测定系统包括被分成一个或多个检测区域(110)和一个或多个对照区域(115)的分析膜(105)。所述一个或多个检测区可包括固定至所述检测区域的一部分的目标分析物结合剂，使得它在促进侧流穿过分析膜时不会移位。本公开的侧流测定系统还可包括结合垫(120)，在所述结合垫内含有目标分析物结合剂。在一些实施方案中，目标分析物结合剂包含在结合垫内，但在发生侧流时从结合垫流动穿过分析膜流向检测区域和对照区域。本公开的侧流测定系统还可包括位于所述侧流测定系统的一个远端处(例如，与吸收垫相对)的样品垫(125)。将含有(或可能含有)目标分析物的样品施加至样品垫上。在一些实施方案中，侧流测定系统还包括在装置的远离样品垫的端部处的芯吸垫(130)。芯吸垫产生从样品垫通过结合垫、分析膜、检测区域和对照区域的样品的毛细管流动。
根据这些实施方案，在将样品添加至样品垫后，侧流的促进引起样品内的目标分析物接触结合垫内的第一目标分析物结合剂；随后，侧流引起目标分析物和第一目标分析物结合剂接触固定至分析膜的检测区域的第二目标分析物结合剂。然后基于检测区域中分析物的检测(例如，在生物发光复合物的发光底物存在下)和/或与对照相比，确定目标分析物的存在和/或数量。
在一些实施方案中，上述侧流系统利用一种或多种基于
Figure BDA0003382854880000661
的技术(例如，NanoBiT、NanoTrip、NanoBRET等)来检测结合的目标分析物。
在示例性实施方案中，如图1所示，目标分析物是响应于暴露于传染性疾病/生物体而在受试者中产生的抗体。第一目标分析物结合剂包含结合所述抗体的目标分析物结合元件(例如，非特异性抗体结合剂(例如，蛋白L))和能够与不同肽或多肽相互作用以产生生物发光信号的第一肽或多肽(例如，NanoBiT非发光肽或多肽或其变体(例如，SEQ ID NO:9-11或12/14中的一者))。第二目标分析物结合剂可包含结合所述抗体的目标分析物结合元件(如由所述抗体识别的抗原的表位)，和能够与所述第一肽或多肽相互作用以产生生物发光信号的第二肽或多肽(例如，NanoBiT非发光肽或多肽或其变体(例如，SEQ ID NO:9-11或12/14中的一者))。一旦生物发光复合物在检测区域牢固，就可检测和/或定量生物发光信号(例如，在生物发光复合物的发光底物存在下)，从而指示样品中抗体的存在/数量。
如图1所示，本公开的侧流测定可被配置为测试来自受试者的单个样品中的多种不同的分析物，如针对不同疾病/微生物产生的抗体(例如，多路复用)。根据这些实施方案，分析膜可包括多个检测区域，其中每个检测区域包括具有不同目标分析物结合元件(例如，不同疾病抗原)的不同目标分析物结合剂。
在图1所描绘的实施方案的替代侧流实施方案中，目标分析物是响应于暴露于传染性疾病/生物体而在受试者中产生的抗体。第一目标分析物结合剂包含结合所述抗体的目标分析物结合元件(例如，由所述抗体识别的抗原的表位)和生物发光多肽(例如，NanoLuc或其变体(例如，SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:6))。第二目标分析物结合剂可包含结合所述抗体的目标分析物结合元件，如非特异性抗体结合剂(例如，蛋白L)。在检测区域中检测生物发光(例如，在生物发光复合物的发光底物存在下)然后指示两种目标分析物结合剂均与目标分析物结合，并且因此目标分析物存在于所述样品中。
在另一个示例性替代实施方案中，目标分析物是响应于暴露于传染性疾病/生物体而在受试者中产生的抗体。第一目标分析物结合剂包含结合所述抗体的目标分析物结合元件(例如，非特异性抗体结合剂(例如，蛋白L)、目标特异性(例如，抗体)结合剂)和能够与第二非发光(NL)肽(例如，SEQ ID NO:11或13或其变体)和非发光(NL)多肽(例如，SEQ IDNO:12或其变体)相互作用以产生生物发光信号的第一非发光(NL)肽标签(例如，SEQ IDNO:13或11或其变体)。第二目标分析物结合剂包含结合所述抗体的目标分析物结合元件(例如，目标特异性(例如抗体)结合剂、非特异性抗体结合剂(例如蛋白L))和第二NL肽标签(例如，SEQ ID NO:11或13或其变体)。在NL多肽组分(例如，SEQ ID NO:12或其变体)和检测区域中的发光底物存在下生物发光复合物的形成表明样品中存在目标分析物。检测和/或定量生物发光信号以检测/定量样品中的抗体。
考虑上述示例性实施方案的另外替代方案。例如，替代结合剂、目标分析物、可检测元件、各种组分的顺序(例如，非特异性结合剂/目标特异性结合剂、目标特异性结合剂/非特异性结合剂、目标特异性结合剂/目特异性结合剂等)在本文中进行了描述，并且并入了这些组分的各种组合的实施方案在本文的范围内。
在一些实施方案中，目标分析物不是抗体，而是小分子、肽、蛋白质、碳水化合物、脂质等。在一些实施方案中，配置上述侧流测定和系统(例如，使用一种或多种基于
Figure BDA0003382854880000671
的技术(例如NanoBiT、NanoTrip、NanoBRET等)用于检测任何此类目标分析物。
b.固相测定
本公开的实施方案包括用于检测样品中的一种或多种分析物的组合物、测定、系统、装置和方法。根据这些实施方案，本公开提供了用于进行固相测定(例如，用于进行免疫测定的固相平台)的组合物和材料。固相检测平台通常是免疫测定的最简单形式，并且可用于检测、定量、测试、测量和监测多种分析物，如但不限于与监测排卵、检测/诊断传染性疾病/生物体、分析滥用药物、检测/定量对人体生理学重要的分析物、兽医测试、安全筛查、农业应用、环境测试以及产品质量评估有关的分析物。与侧流测定相比，固相检测平台不涉及促进测定试剂流动穿过膜，而是通常包括固体支持物，所述测定的组分附着或包含在所述固体支持物上(例如，试纸测试或斑点测试)。
如图2所示，本公开的实施方案包括用于基于生物发光复合物形成检测和/或定量目标分析物的固相检测平台(200)。在一些实施方案中，本公开的固相检测平台包括向其施加样品的一个或多个检测区域(205)和一个或多个对照区域(210)。在一些实施方案中，所述一个或多个检测区域包括在所述检测区域的一部分内和/或与所述检测区域的一部分缀合的目标分析物结合剂。本公开的固相检测平台还可包括固体支持物(215)，所述检测区域和对照区域附着至所述固体支持物并且彼此分界，并且允许将样品施加至所述检测区域和对照区域(例如，试纸测试)。
根据这些实施方案，将样品或样品的一部分施加至固相测定平台的检测区域和对照区域，使得目标分析物在使得结合事件和/或目标分析物在固相上的固定是可检测的条件下接触与检测区域缀合和/或在所述检测区域内的目标分析物结合剂(220)(例如，生物发光实体被固定，形成生物发光复合物)，从而表明样品中存在分析物。
在一些实施方案中，固相测定平台包括固定在固相上的第一目标分析物结合剂(例如目标特异性结合剂(例如目标特异性抗体、目标标抗体的抗原等))。将连接至生物发光多肽(例如，SEQ ID NO:5或其变体)的第二目标分析物结合剂(例如，目标特异性结合剂(例如，目标特异性抗体，目标抗体的抗原等)、非特异性结合剂(例如，蛋白L))与样品一起添加至固相(例如，同时地、顺序地等)。如果两种目标分析物结合剂均与目标分析物结合，则生物发光多肽就固定在固相上。固相上生物发光的检测/定量(例如，在洗涤步骤后)指示样品中目标分析物的存在/量。在一些情况下，第一目标分析物结合剂缀合至检测区域，并且第二目标分析物结合剂(连接至生物发光多肽)在有或没有样品的情况下施加至检测区域。在一些情况下，第二目标分析物结合剂缀合至检测区域，并且第一目标分析物结合剂(连接至生物发光多肽)在有或没有样品的情况下施加至检测区域。根据这些实施方案，当发光底物(如下文进一步描述)存在时，可检测和/或定量检测区域处的生物发光的固定，从而指示样品中抗体的存在(或不存在)。
在替代实施方案中，固相测定平台利用二元互补方法，其中在两种非发光(NL)肽/多肽组分(例如，NanoBiT系统)结合后形成生物发光复合物，以检测目标分析物。利用二元互补方法的固相测定和系统的多种配置在本文的范围内。例如，示例性系统可包括(i)能够以高亲和力与第二不同的NL多肽或NL肽(例如，SEQ ID NO:10或9或其变体)相互作用以产生生物发光信号的与第一NL肽或NL多肽(例如，SEQ ID NOs:9或10或其变体)连接的第一目标分析物结合剂，和(ii)与互补NL多肽或NL肽连接的第二目标分析物结合剂，其中所述第二目标分析物结合剂固定至固相上。当目标分析物结合剂与目标分析物结合时，在所述固相上形成生物发光复合物并且当存在发光底物时生物发光信号是可检测/可定量的(如下文进一步描述)。
在其他实施方案中，固相测定平台利用三联互补方法，其中在两种非发光(NL)肽组分和非发光(NL)多肽组分(例如，NanoTrip系统)结合后形成生物发光复合物，以检测目标分析物。在一些实施方案中，固相测定平台包括：(i)第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含能够形成三联生物发光复合物(例如，NanoTrip复合物)的目标分析物结合元件(例如，通用的或特异性的)和NL肽(例如，SEQ ID NO:11或13)；(ii)第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含能够形成三联生物发光复合物(例如，NanoTrip复合物)的目标分析物结合元件(例如，特异性)和NL肽(例如，SEQ ID NO:11或13)；(iii)三联生物发光复合物(例如，NanoTrip复合物)的NL多肽组分；以及和(iv)发光底物。在一些情况下，第一目标分析物结合剂缀合至检测区域，并且第二目标分析物结合剂在有或没有样品的情况下施加至检测区域。在一些情况下，第二目标分析物结合剂缀合至检测区域，并且第一目标分析物结合剂在有或没有样品的情况下施加至检测区域。一旦在检测区域形成生物发光复合物，就检测和/或定量生物发光信号，从而指示样品中抗体的存在(或不存在)。
在其他实施方案中，固相测定平台包括(i)包含目标分析物结合元件和基于
Figure BDA0003382854880000702
的肽或多肽的第一目标分析物结合剂，(ii)包含目标分析物结合元件和荧光团的目标分析物结合剂，和(iii)任选的另外的肽/多肽组分以形成生物发光复合物(例如，在基于
Figure BDA0003382854880000704
的肽或多肽不是生物发光多肽，例如非发光的实施方案中)，其中在生物发光所需的任何另外组分(例如，发光底物、互补组分等)存在下在所述第一和第二目标分析物结合剂与样品中的目标分析物结合后，来自基于
Figure BDA0003382854880000703
的组分(例如
Figure BDA0003382854880000701
蛋白质或生物发光复合物)的发射激发荧光团(例如，通过BRET)。在一些情况下，第一目标分析物结合剂缀合至检测区域，并且第二目标分析物结合剂在有或没有样品的情况下施加至检测区域。在一些情况下，第二目标分析物结合剂缀合至检测区域，并且第一目标分析物结合剂在有或没有样品的情况下施加至检测区域。
如图2所示，本公开的固相平台可被配置为测试来自受试者的单个样品中的多种不同的分析物，如针对不同疾病/微生物产生的抗体(例如，多路复用)。根据这些实施方案，固相平台可包括多个检测区域，其中每个检测区域包括具有不同目标分析物结合元件(例如，不同疾病抗原)的不同目标分析物结合剂。
在一些实施方案中，本公开的固相平台可包括多个检测区域，如微量滴定板的一个或多个孔。在此类实施方案中，一种或多种不同的目标分析物结合剂可与进行特定生物发光测定所需的一种或多种其他检测试剂(例如，第二目标分析物结合剂、发光底物、测定缓冲液等)一起缀合(例如，涂覆)至微量滴定板的孔。在一些实施方案中，可将进行测定所需的一种或多种其他检测试剂(未缀合至微量滴定板的试剂)以冻干饼状物(lyocake)或片的形式添加至微量滴定板的孔中，并且重组为生物发光测定的一部分。
c.溶液相测定
本公开的实施方案包括用于检测样品中的一种或多种分析物的组合物、测定、系统、装置和方法。根据这些实施方案，本公开提供了用于进行溶液相测定(例如，用于在溶液内进行免疫测定的基于液体的形式)的组合物和材料。溶液相检测平台可用于检测、定量、测试、测量和监测多种分析物，如但不限于与监测排卵、检测/诊断传染性疾病/生物体、分析滥用药物、检测/定量对人体生理学重要的分析物、兽医测试、安全筛查、农业应用、环境测试以及产品质量评估有关的分析物。与侧流测定和固相检测平台相比，溶液相检测平台通常包括用于溶液/液体的容器，在所述容器中发生涉及检测试剂的反应，而不是将一种或多种检测试剂缀合至固体支持物或膜以促进检测。
例如，如图33所示，本公开的溶液相平台的实施方案可包括在片或冻干饼状物中的生物发光复合物的一种或多种组分，所述片或冻干饼状物可在溶液(例如，缓冲溶液)中复原以促进分析物检测。在一些实施方案中，所述片或冻干饼状物可包括进行反应以检测分析物所必需的所有试剂。此类冻干饼状物或片与许多不同的测定形式相容，包括但不限于比色皿、微量滴定板(例如，96孔微量滴定板)的孔、试管、大容量瓶、SNAP测定等。
在一些实施方案中，溶液相测定平台包括包含第一目标分析物结合剂(例如目标特异性结合剂(例如目标特异性抗体、目标抗体的抗原等))、第二目标标分析物结合剂(例如，目标特异性结合剂(例如，目标特异性抗体、目标抗体的抗原等)和与生物发光多肽(例如，SEQ ID NO:5及其变体)连接的非特异性结合剂(例如蛋白L))中的一者或多者的冻干饼状物或片。溶液中生物发光的检测/定量指示样品中目标分析物的存在/量。
在一些实施方案中，溶液相测定平台利用二元互补方法，其中在两种非发光(NL)肽/多肽组分(例如，NanoBiT系统)结合后形成生物发光复合物，以检测目标分析物。利用二元互补方法的溶液相测定和系统的多种配置在本文的范围内。例如，示例性系统可包括(i)能够以高亲和力与第二不同的NL多肽或NL肽(例如，SEQ ID NO:10或9或其变体)相互作用以产生生物发光信号的与第一NL肽或NL多肽(例如，SEQ ID NOs:9或10或其变体)连接的第一目标分析物结合剂，和(ii)与互补NL多肽或NL肽连接的第二目标分析物结合剂。当目标分析物结合剂与目标分析物结合时，在所述溶液中形成生物发光复合物并且当存在发光底物时生物发光信号是可检测/可定量的(如下文进一步描述)。
在其他实施方案中，溶液相测定平台利用三联互补方法，其中在两种非发光(NL)肽组分和非发光(NL)多肽组分(例如，NanoTrip系统)结合后形成生物发光复合物，以检测目标分析物。在一些实施方案中，溶液相测定平台包括：(i)第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含能够形成三联生物发光复合物(例如，NanoTrip复合物)的目标分析物结合元件(例如，通用的或特异性的)和NL肽(例如，SEQ ID NO:11或13)；(ii)第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含能够形成三联生物发光复合物(例如，NanoTrip复合物)的目标分析物结合元件(例如，特异性)和NL肽(例如，SEQ ID NO:11或13)；(iii)三联生物发光复合物(例如，NanoTrip复合物)的NL多肽组分；以及和(iv)发光底物。一旦在溶液中形成生物发光复合物，就检测和/或定量生物发光信号，从而指示样品中抗体的存在(或不存在)。
在其他实施方案中，溶液相测定平台包括(i)包含目标分析物结合元件和基于
Figure BDA0003382854880000734
的肽或多肽的第一目标分析物结合剂，(ii)包含目标分析物结合元件和荧光团的目标分析物结合剂，和(iii)任选的另外的肽/多肽组分以形成生物发光复合物(例如，在基于
Figure BDA0003382854880000733
的肽或多肽不是生物发光多肽，例如非发光的实施方案中)，其中在生物发光所需的任何另外组分(例如，发光底物、互补组分等)存在下在所述第一和第二目标分析物结合剂与样品中的目标分析物结合后，来自基于
Figure BDA0003382854880000732
的组分(例如
Figure BDA0003382854880000731
蛋白质或生物发光复合物)的发射激发荧光团(例如，通过BRET)。
本公开的溶液相平台可被配置为测试来自受试者的单个样品中的多种不同的分析物(例如，多路复用)，如针对不同疾病/微生物产生的抗体。在一些实施方案中，进行生物发光反应以检测/定量分析物所需的一种或多种检测试剂存在于所使用的特定测定平台的一个或多个容器(例如，96孔板的各个孔)中，例如，作为待在缓冲溶液中复原的冻干饼状物或片。在其他实施方案中，一种或多种类型的样品溶液已经存在于容器中，并且将一个或多个冻干饼状物或片添加至所述容器中并且再水合以促进生物发光反应。根据这些实施方案，溶液相平台可包括多个容器，所述容器包括具有不同目标分析物结合元件(例如，不同疾病抗原)的不同目标分析物结合剂。
d.其它测定
本公开的实施方案包括用于使用本领域中已知的其他测定平台检测样品中的一种或多种分析物的组合物、测定、系统、装置和方法。例如，可在基于微流体和/或芯片的测定的背景下使用本文所述的生物发光多肽和/或复合物来检测和/或测量目标分析物。由于微流体系统集成了多种操作来操纵流体(如化学或生物样品)，因此这些系统适用于许多不同的领域，如生物和医学诊断。一种类型的微流体装置是微流体芯片。微流体芯片可包括微尺度特征(或微特征)，如用于储存流体、用于将流体引导至和离开芯片上的不同位置和/或用于使流体试剂反应的通道、阀、泵和/或贮液器。
配置有生物发光多肽和/或复合物(其包含能够在目标分析物存在下产生生物发光信号的肽和多肽)的微流体芯片或芯片实验室(LOC)为自动化、集成、小型化和多路复用提供增加的灵活性。例如，基于微流控芯片的病原体检测使用通常在微米或纳米尺度的反应室，这使得装置可小型化和便携；这对于定点照护检验尤其有利。LOC技术允许集成样品制备、扩增和信号检测，从而减少生成结果所需的时间。样品和试剂的高通量和低消耗使所述技术灵活且相对具有成本效益。消除了对用于扩增的PCR或实时PCR的需要的用于检测细菌、病毒和真菌的基于核酸的微流体病原体检测是本公开的生物发光复合物的明显优点。
5.测定组合物、组分和制造方法
本公开的实施方案还包括制造用于与生物发光肽和多肽一起用于目标分析物检测的测定平台的方法。尽管测定平台可根据各种因素(如所检测的分析物、采样环境的复杂性和诊断参数)而变化，但本公开的组合物、材料和方法可应用于大多数当前可用的测定平台，如固相测定、侧流测定和基于微流体的测定。
a.发光底物
在一些实施方案中，制造本公开的测定平台的方法包括施加发光底物。发光底物(如腔肠素及其类似物和衍生物)在储存过程中可分解，从而导致底物在添加至或用于生物测定之前损失。这种分解可能是溶液中的发光底物随时间推移以温度依赖性方式不稳定的结果。这种分解导致发光底物的浪费，并降低了源自使用分解的发光底物的生物测定的发光测量的灵敏度和再现性。
本文提供了包含发光底物如腔肠素或其类似物或衍生物的组合物。示例性腔肠素类似物包括腔肠素-h、腔肠素-h-h、furimazine、JRW-0238、JRW-1404、JRW-1482、JRW-1667、JRW-1743和JRW-1744。
在一些实施方案中，底物是腔肠素，其具有以下结构：
Figure BDA0003382854880000751
示例性腔肠素类似物包括腔肠素-h(2-脱氧腔肠素或2,8-二苄基-6-(4-羟基苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-3(7H)-酮)、腔肠素-h-h(二脱氧腔肠素或2,8-二苄基-6-苯基咪唑并[1,2-a]吡嗪-3(7H)-酮)、furimazine(8-苄基-2-(呋喃-2-基甲基)-6-苯基咪唑并[1,2-a]吡嗪-3(7H)-酮)、JRW-0238(8-苄基-2-(呋喃-2-基甲基)-6-(3-羟基苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-3(7H)-酮)、JRW-1404(8-苄基-6-(2-氟-3-羟基苯基)-2-(呋喃-2-基甲基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-3(7H)-酮、JRW-1482(.6-(3-氨基-2-氟苯基)-8-苄基-2-(呋喃-2-基甲基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-3(7H)-酮)、JRW-1667(6-(3-氨基-2-氟苯基)-8-(2-氟苄基)-2-(呋喃-2-基甲基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-3(7H)-酮)、JRW-1744(6-(3-氨基-2-氟苯基)-8-苄基-2-(呋喃-2-基甲基)咪唑并[1,2-α]吡嗪-3(7H)-酮)和JRW-1743(6-(3-氨基-2-氟苯基)-8-(2-氟苄基)-2-(呋喃-2-基甲基)咪唑并[1,2-α]吡嗪-3(7H)-酮)，其具有以下结构：
Figure BDA0003382854880000752
Figure BDA0003382854880000761
另外的示例性腔肠素类似物包括腔肠素-n、腔肠素-f、腔肠素-hcp、腔肠素-cp、腔肠素-c、腔肠素-e、腔肠素-fcp、腔肠素-i、腔肠素-icp、腔肠素-v、2-甲基腔肠素等。在一些实施方案中，所述化合物可以是WO 2003/040100；美国专利公布2008/0248511(例如，段落[0086])；美国专利号8,669,103；WO 2012/061529；美国专利公布2017/0233789；美国专利号9,924,073；美国专利公布2018/0030059；美国专利号10,000,500；美国专利公布2018/0155350；美国专利申请号16/399,410(PCT/US2019/029975)；美国专利申请号16/548,214(PCT/US2019/047688)；美国专利公布2014/0227759；美国专利号9,840,730；美国专利号7,268,229；美国专利号7,537,912；美国专利号8,809,529；美国专利号9,139,836；美国专利号10,077,244；美国专利号9,487,520；美国专利号9,924,073；美国专利号9,938,564；美国专利号9,951,373；美国专利号10,280,447；美国专利号10,308,975；美国专利号10,428,075中描述的腔肠素类似物；所述专利的公开内容以引用的方式整体并入本文。在一些实施方案中，腔肠素类似物包括前-底物，例如美国专利公布2008/0248511；美国专利公布2012/0707849；美国专利公布2014/0099654；美国专利号9,487,520；美国专利号9,927,430；美国专利号10,316,070中描述的那些；所述专利以引用的方式整体并入本文。在一些实施方案中，所述化合物是furimazine。在一些实施方案中，所述化合物是JRW-0238。在一些实施方案中，所述化合物是JRW-1743。在一些实施方案中，所述化合物是JRW-1744。
本文提供了组合物，所述组合物包含发光底物，如腔肠素或其类似物或衍生物，以及用于制造生物发光目标分析物检测平台的聚合物或纸/纤维基底。稳定和/或增强发光底物如腔肠素或其类似物或衍生物的复原效率的组合物描述于美国专利申请序列号16/592,310(PCT/US2019/054501)中；其以引用的方式整体并入本文。在一些实施方案中，所述组合物使所述化合物稳定以防止分解。在一些实施方案中，与不含聚合物或纸/纤维基底的组合物相比，所述组合物使化合物稳定以防止分解。在一些实施方案中，聚合物或纸/纤维基底减少或抑制由所述化合物形成一种或多种分解产物。在一些实施方案中，所述组合物增强底物的复原效率或复原速率。
此外，本公开的实施方案包括用于使本文进一步描述的组合物稳定(例如，增强储存稳定性)的手段。在一些实施方案中，增强本文提供的组合物的储存稳定性包括用于使发光底物稳定的方法和组合物。发光底物可以是但不限于腔肠素、腔肠素-h、腔肠素-h-h、furimazine、其衍生物、其类似物或它们的任何组合。所述组合物可包含发光底物、硫代核苷和有机溶剂。所述组合物可不包含或含有发光酶。如美国专利号9,676,997中提供的(所述专利以引用的方式并入本文)，硫代核苷可以是式(I)化合物或其互变异构体，
Figure BDA0003382854880000771
其中
R1是氢、烷基、取代的烷基、烷基-芳基、烷基-杂芳基、环烷基、芳基、杂芳基、羧酸、酯、NRaRb、亚胺、羟基或氧代基；
R2是氢、NRaRb、亚胺、烷基或芳基；并且
Ra和Rb各自独立地是氢、烷基或芳基。
在一些实施方案中，式(I)化合物可以是ATT(6-甲基-3-硫代-3,4-二氢-1,2,4-三嗪-5(2H)-酮)；3-(4-氨基-5-氧代基-3-硫代-2,3,4,5-四氢-1,2,4-三嗪-6-基)丙酸；四氢-2-甲基-3-硫代-1,2,4-三嗪-5,6-二酮；4-((2-呋喃基亚甲基)氨基)-3-巯基-6-甲基-1,2,4-三嗪-5(4H)-酮；6-苄基-3-硫烷基-1,2,4-三嗪-5-醇；4-氨基-3-巯基-6-甲基-1,2,4-三嗪-5(4H)-酮；3-(5-氧代基-3-硫代-2,3,4,5-四氢-1,2,4-三嗪-6-基)丙酸；(E)-6-甲基-4-((噻吩-2-基亚甲基)氨基)-3-硫代-3,4-二氢-1,2,4-三嗪-5(2H)-酮；(E)-6-甲基-4-((3-硝基亚苄基)氨基)-3-硫代-3,4-二氢-1,2,4-三嗪-5(2H)-酮；(E)-4-((4-(二乙基氨基)亚苄基)氨基)-6-甲基-3-硫代-3,4-二氢-1,2,4-三嗪-5(2H)-酮；ATCA乙酯；如美国专利号9,676,997(其以引用的方式并入本文)中提供的TAK-0021、TAK-0020、TAK-0018、TAK-0009、TAK-0014、TAK-0007、TAK-0008、TAK-0003和TAK-0004；3-硫代-6-(三氟甲基)-3,4-二氢-1,2,4-三嗪-5(2H)-酮；6-环丙基-3-硫代基-3,4-二氢-1,2,4-三嗪-5(2H)-酮；6-(羟甲基)-3-硫代-3,4-二氢-1,2,4-三嗪-5(2H)-酮；或它们的任何组合。
在一些实施方案中，硫代核苷可使发光底物稳定以防止在存在光、不存在光的情况下和/或在不同温度下随时间分解。硫代核苷可使发光底物稳定以防止在光存在、光不存在和/或在不同温度下随时间推移分解成一种或多种分解产物。因此，与不包含硫代核苷的组合物相比，在本文进一步描述的组合物中包含硫代核苷可通过抑制或减少一种或多种分解产物的形成来使发光底物稳定以防止分解。这进而提供在特定温度、在光存在和/或光不存在下使发光底物储存或孵育一段时间的能力，而发光底物用于测定中之前没有发光底物的显著分解。根据这些实施方案，在本文所述的组合物中包含硫代核苷可增强组合物的储存稳定性。这些实施方案还涉及用于使发光底物稳定的方法。这种方法可使发光底物稳定以防止分解和/或抑制或减少一种或多种分解产物的形成。所述方法可包括在有机溶剂存在下使发光底物与有效量的硫代核苷(例如，225mM)接触。此接触步骤可包括形成上述组合物。
在一些实施方案中，形成上述生物发光复合物的一种或多种非发光(NL)肽/多肽组分可与或不与发光底物一起包含作为组合物(如冻干粉末)的一部分。这些组合物可在有或没有其他组分的情况下直接施加至检测平台的一部分，或者它们可复原为施加至检测平台的单独溶液的一部分。
腔肠素及其类似物和衍生物可能遇到与将它们复原为用于许多测定如本文所述的生物发光方法中的缓冲系统相关的挑战。例如，腔肠素或其类似物或衍生物如furimazine可在缓冲溶液中缓慢和/或不一致地溶解(例如，由于固体材料的异质微晶性质)。虽然在用缓冲液稀释之前溶解在有机溶剂中可提供更快且更一致的结果，但腔肠素化合物在储存时可能遭受在有机溶液中的不稳定性，包括热不稳定性和光不稳定性。在一些实施方案中，所述组合物还包含聚合物。如本文进一步描述的，聚合物的存在可使化合物稳定以防止分解，并且聚合物的存在可提高化合物在水或水溶液中的溶解度。
聚合物可以是天然存在的生物聚合物或合成聚合物。在一些实施方案中，聚合物是天然存在的生物聚合物。合适的天然存在的生物聚合物是碳水化合物，包括二糖(例如海藻糖和麦芽糖)和多糖(例如普鲁兰多糖、葡聚糖和纤维素)。也可使用天然存在的生物聚合物的混合物。在一些实施方案中，聚合物是普鲁兰多糖，其是包含麦芽三糖重复单元的多糖。麦芽三糖是包含通过α-1,4糖苷键连接的三个葡萄糖单元的三糖。普鲁兰多糖聚合物中的麦芽三糖单元通过α-1,6糖苷键彼此连接。
在一些实施方案中，聚合物是合成聚合物。合成聚合物可以是均聚物、共聚物或嵌段共聚物(例如，二嵌段共聚物、三嵌段共聚物等)。合适聚合物的非限制性实例包括但不限于聚胺、聚醚、聚酰胺、聚酯、聚氨基甲酸酯、聚脲、聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚酰亚胺、聚砜、聚氨酯、聚乙炔、聚乙烯、聚乙烯亚胺、聚异氰酸酯、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯腈和聚芳酯。具体聚合物的非限制性实例包括聚(己内酯)(PCL)、乙烯乙酸乙烯酯聚合物(EVA)、聚(乳酸)(PLA)、聚(L-乳酸)(PLLA)、聚(乙醇酸)(PGA)、聚(乳酸-共-乙醇酸)(PLGA)、聚(L-乳酸-共-乙醇酸)(PLLGA)、聚(D,L-丙交酯)(PDLA)、聚(L-丙交酯)(PLLA)、聚(D,L-丙交酯-共-己内酯)、聚(D,L-丙交酯-共-己内酯-共-乙交酯)、聚(D,L-丙交酯-共-PEO-共-D,L-丙交酯)、聚(D,L-丙交酯-共-PPO-共-D,L-共)、聚氰基丙烯酸烷基酯、聚氨酯、聚-L-赖氨酸(PLL)、甲基丙烯酸羟丙酯(HPMA)、聚(乙二醇)、聚-L-谷氨酸、聚(羟基酸)、聚酸酐、聚原酸酯、聚(酯酰胺)、聚酰胺、聚(酯醚)、聚碳酸酯、聚烯烃(例如，聚乙烯和聚丙烯、聚亚烷基二醇(例如，聚(乙二醇)(PEG))、聚对苯二甲酸亚烷基酯(例如，聚(对苯二甲酸乙二醇酯)等)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯醚、聚乙烯酯(例如聚(乙酸乙烯酯)等)、聚乙烯卤化物(例如，聚(氯乙烯)(PVC)等)、聚乙烯吡咯烷酮、聚硅氧烷、聚苯乙烯(PS)、聚氨酯、衍生的纤维素(例如，烷基纤维素、羟基烷基纤维素、纤维素醚、纤维素酯、硝基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素等)、丙烯酸的聚合物(“聚丙烯酸”)(例如，聚((甲基)丙烯酸甲酯)(PMMA)、聚((甲基)丙烯酸乙酯)、聚((甲基)丙烯酸丁酯)、聚((甲基)丙烯酸异丁酯)、聚((甲基)丙烯酸己酯)、聚((甲基)丙烯酸异癸酯)、聚((甲基)丙烯酸月桂酯)、聚((甲基)丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸异丙酯)、聚(丙烯酸异丁酯)、聚(丙烯酸十八烷基酯)、聚二氧杂环己酮及其共聚物(例如，聚羟基烷酸酯、聚丙烯富马酸酯)、聚甲醛、泊洛沙姆(poloxamer)、聚(原酸)酯、聚(丁酸)、聚(戊酸)、聚(丙交酯-共-己内酯)、碳酸三亚甲基酯以及它们的混合物和共聚物。
在一些实施方案中，所述组合物还包含纸基底。如本文进一步描述的，纸基底的存在可使化合物稳定以防止分解，并且纸基底的存在可提高化合物在水溶液中的溶解度。示例性纸基底包括但不限于Whatman牌纸(例如W-903纸、FTA纸、FTA Elute纸、FTA DMPK纸等)、Ahlstrom纸(例如，A-226纸等)、M-TFN纸、FTA纸、FP705纸、Bode DNA收集纸、硝化纤维素纸、尼龙纸、纤维素纸、Dacron纸、棉纸和聚酯纸以及它们的组合。
除了化合物和聚合物和/或纸基底之外，所述组合物还可包含另外的组分，如缓冲剂、表面活性剂、盐、蛋白质或它们的任何组合。例如，所述组合物可包含缓冲液，如磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液或柠檬酸盐缓冲液，或其他常见的缓冲液，如bicine、tricine、三(羟甲基)氨基甲烷(tris)、N-[三(羟甲基)甲基]-3-氨基丙磺酸(TAPS)、3-[N-三(羟甲基)甲基氨基]-2-羟基丙磺酸(TAPSO)、2-[4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基]乙磺酸(HEPES)、N-[三(羟甲基)甲基]-2-氨基乙磺酸(TES)、哌嗪-N,N'-双(2-乙磺酸)(PIPES)、2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES)等。
在一些实施方案中，所述组合物可包含表面活性剂。示例性表面活性剂包括非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂和两性离子表面活性剂。例如，表面活性剂可以是非离子表面活性剂，如脱水山梨糖醇20。
在一些实施方案中，所述组合物可包含盐，如氯化钠、氯化钾、氯化镁等。
在一些实施方案中，所述组合物可包含蛋白质。例如，所述组合物可包含载体蛋白以防止可在下游测定中添加的发光酶的表面吸附。在一些实施方案中，蛋白质可以是牛血清白蛋白(BSA)。
在一些实施方案中，所述组合物可包含减少自发光的物质。在一些实施方案中，所述物质是ATT(6-氮杂-2-硫代胸腺嘧啶)、ATT的衍生物或类似物、硫代核苷、硫脲等。在一些实施方案中，所述物质是美国专利号9,676,997中公开的硫代核苷，所述专利以引用的方式并入本文。在一些实施方案中，所述物质是硫脲，其用于减少自发光的用途在美国专利号7,118,878；7,078,181；和7,108,996中公开，所述专利以引用的方式并入本文。
所述组合物可呈冻干粉末的形式。这种组合物可通过干燥组合物组分的混合物来制备。例如，可通过以下方式来制备所述组合物：将化合物溶解在溶剂(例如有机溶剂)中以形成第一溶液，将聚合物添加至第一溶液以形成第二溶液，然后干燥所述第二溶液以提供所述组合物。在一些实施方案中，干燥步骤可包括冻干。这可提供呈粉末形式的组合物。在一些实施方案中，干燥步骤可包括风干。这可提供呈可锻盘形式的组合物。
在一些实施方案中(例如，其中组合物包含聚合物而不是纸基底的那些)，所述组合物呈溶液的形式。当组合物是溶液时，所述组合物可具有约5.5至约8.0，例如约6.5至约7.5的pH。在一些实施方案中，所述组合物具有约5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0的pH。
b.侧流组分
在一些实施方案中，本公开提供了制造侧流测定平台的方法，所述侧流测定平台包括结合垫、分析膜、样品垫和促进侧流穿过膜(例如，吸收垫)所必需的其他部件。例如，结合垫可包括与结合垫可逆地缀合的至少一种目标分析物结合剂，以使得当施加侧流时，所述目标分析物结合剂能够从偶联物垫转移至分析膜，于是目标分析物结合剂可结合目标分析物并形成生物发光复合物。在一些实施方案中，目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件以促进与目标分析物的结合，以及生物发光复合物的生物发光多肽或组分，如SEQ IDNO:5的生物发光多肽(NanoLuc及其变体)、SEQ ID NO:9的非发光(NL)多肽(LgBiT)、SEQ IDNO:10的NL肽(SmBiT)、SEQ ID NO:11的NL肽(HiBiT)、SEQ ID NO:12的NL多肽(LgTrip-3546)、SEQ ID NO:13的NL肽(SmTrip)、SEQ ID NO:14的NL肽(β9/β10二肽)或其变体。在一些实施方案中，目标分析物结合剂包含能够被能量转移(例如，来自生物发光多肽或生物发光复合物的组分)激活的荧光团。
在一些实施方案中，结合垫包含第一目标分析物结合剂。在一些实施方案中，第一目标分析物结合剂包含第一目标分析物结合元件和生物发光复合物的第一生物发光多肽或第一组分(例如NL肽或NL多肽)。在一些实施方案中，将目标分析物结合剂储存在结合垫之上或之内，使得它与结合垫保持在一起直到横向从装置中移位。
在一些实施方案中，结合垫包含发光底物，如腔肠素、腔肠素-h、腔肠素-h-h、furimazine、JRW-0238、JRW-1404、JRW-1482、JRW-1667、JRW-1743、JRW-1744、其他腔肠素类似物或衍生物、前底物和/或本文所述的其他底物(例如，腔肠素类似物或衍生物)。在一些实施方案中，发光底物可逆地缀合至结合垫。在一些实施方案中，发光底物在结合垫之上或之内干燥。在一些实施方案中，发光底物是包含发光底物和选自普鲁兰多糖、海藻糖、麦芽糖、纤维素、葡聚糖、聚苯乙烯、聚(甲基)丙烯酸酯以及它们的任何组合的聚合物的组合物的一部分(例如，上文和/或美国临时申请序列号62/740,622更详细地描述)。在一些实施方案中，发光底物作为组合物或溶液的一部分(如蛋白质缓冲液)施加。在一些实施方案中，蛋白质缓冲液包含20mM Na3PO4；5％w/v BSA；0.25％v/v Tween 20；10％w/v蔗糖。在一些实施方案中，将发光底物添加至蛋白质缓冲液中并在37℃下在基底或基质(例如，滤纸或膜)上干燥1小时。在其他实施方案中，发光底物作为单独的试剂作为测定方法或系统的一部分施加。
在一些实施方案中，测定平台包括分析膜，所述分析膜包括检测区域和对照区域以促进指示目标分析物检测的生物发光复合物的检测。检测区域可包括固定至所述检测区域的至少一种目标分析物结合剂，以使得它不会因跨膜施加侧流而移位。在一些实施方案中，分析膜包括至少一种目标分析物结合剂。在一些实施方案中，目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和生物发光复合物的第一生物发光多肽或第一组分(例如NL肽或NL多肽)。
在一些实施方案中，所述分析膜包括多个检测区域，其中每个检测区域包括含有不同目标分析物结合元件的不同目标分析物结合剂(例如，多路复用能力)。
在一些实施方案中，分析膜包含发光底物，如腔肠素、腔肠素-h、腔肠素-h-h、furimazine、JRW-0238、JRW-1404、JRW-1482、JRW-1667、JRW-1743、JRW-1744、其他腔肠素类似物或衍生物、前底物或本文所述的其他底物(例如，腔肠素类似物或衍生物)。在一些实施方案中，发光底物例如作为组合物的一部分可逆地缀合至分析膜和/或包含在分析膜之上/之内，所述组合物包含所述发光底物和选自普鲁兰多糖、海藻糖、麦芽糖、纤维素、葡聚糖、聚苯乙烯、聚(甲基)丙烯酸酯以及它们的任何组合的聚合物。在一些实施方案中，发光底物作为组合物或溶液的一部分(如蛋白质缓冲液)施加。在一些实施方案中，蛋白质缓冲液包含20mM Na3PO4；5％w/v BSA；0.25％v/v Tween 20；10％w/v蔗糖。在一些实施方案中，蛋白质缓冲液包含20mM Na3PO4；5％w/v BSA；0.25％v/v Tween 20；5％w/v普鲁兰多糖。在一些实施方案中，蛋白质缓冲液包含20mM Na3PO4；1-5％w/v BSA；0.25％v/vTween 20。在一些实施方案中，蛋白质缓冲液包含20mM Na3PO4；1-5％w/v Prionex；0.25％v/v Tween 20。在一些实施方案中，蛋白质缓冲液包含20mM Na3PO4；1-5％w/v BSA；5mM ATT。在一些实施方案中，蛋白质缓冲液包含20mM Na3PO4；1-5％v/v Prionex；5mM ATT。在一些实施方案中，蛋白质缓冲液包含20mM Na3PO4；1-5％w/vBSA；5mM ATT；5mM抗坏血酸盐。在一些实施方案中，蛋白质缓冲液包含20mM Na3PO4；1-5％w/v Prionex；5mM ATT；5mM抗坏血酸盐。在一些实施方案中，蛋白质缓冲液包含20mM Na3PO4；1-5％w/v BSA；5mM ATT；5mM抗坏血酸盐。在一些实施方案中，蛋白质缓冲液包含1-5％w/v BSA；5mM ATT；5mM抗坏血酸盐。在一些实施方案中，将发光底物添加至蛋白质缓冲液中并在37℃下在基底或基质(例如，滤纸或膜)上干燥1小时。在其他实施方案中，发光底物作为单独的试剂作为测定方法或系统的一部分施加。
c.固相组分
在一些实施方案中，本公开提供了制造包括检测区域和对照区域的固相检测平台(例如，试纸测定或斑点测试)的方法。在一些实施方案中，所述检测区域包括缀合至所述检测区域的至少一种目标分析物结合剂。在一些实施方案中，所述检测区域包括未缀合至所述检测区域的至少一种目标分析物结合剂。这种非缀合的结合剂可添加至检测区域(例如，与样品一起或作为检测试剂的一部分)或可驻留在检测区域之上或之内，而无需缀合。在一些实施方案中，非缀合结合剂包含目标分析物结合元件和生物发光复合物的生物发光多肽或组分，如SEQ ID NO:5的生物发光多肽(NanoLuc及其变体)、SEQ ID NO:9的非发光(NL)多肽(LgBiT)、SEQ ID NO:10的NL肽(SmBiT)、SEQ ID NO:11的NL肽(HiBiT)、SEQ ID NO:12的NL多肽(LgTrip-3546)、SEQ ID NO:13的NL肽(SmTrip)、SEQ ID NO:14的NL肽(β9/β10二肽)或其变体。
在一些实施方案中，所述固相检测平台包括多个检测区域，其中每个检测区域包括含有不同目标分析物结合元件的不同目标分析物结合剂(例如，多路复用能力)。在一些实施方案中，一种或多种不同的目标分析物结合剂可与进行特定测定所需的一种或多种其他检测试剂(例如，第二目标分析物结合剂、发光底物、测定缓冲液等)一起缀合(例如，涂覆)至微量滴定板的孔。在其他实施方案中，检测试剂可作为测定方法或系统的一部分(例如，作为冻干饼状物或片的一部分并作为测定的一部分复原)作为单独的试剂施加。
检测平台还可包括发光底物，如腔肠素、腔肠素-h、腔肠素-h-h、furimazine、JRW-0238、JRW-1404、JRW-1482、JRW-1667、JRW-1743、JRW-1744、其他腔肠素类似物或衍生物、前底物或本文所述的其他底物(例如，腔肠素类似物或衍生物)。在一些实施方案中，发光底物可逆地缀合至检测区域。在一些实施方案中，发光底物稳定地储存在检测区域之上或之内。在一些实施方案中，发光底物是组合物的一部分，所述组合物包含所述发光底物和选自普鲁兰多糖、海藻糖、麦芽糖、纤维素、葡聚糖、聚苯乙烯、聚(甲基)丙烯酸酯以及它们的任何组合的聚合物。在一些实施方案中，发光底物作为组合物或溶液的一部分(如蛋白质缓冲液、检测试剂)或与样品一起施加。在一些实施方案中，蛋白质缓冲液包含20mM Na3PO4；5％w/v BSA；0.25％v/vTween 20；10％w/v蔗糖。在一些实施方案中，将发光底物添加至蛋白质缓冲液中并在37℃下在基底或基质(例如，滤纸、膜、微量滴定板的各个孔)上干燥1小时。在其他实施方案中，发光底物作为测定方法或系统的一部分(例如，作为冻干饼状物或片的一部分并作为测定的一部分复原)作为单独的试剂施加。
本公开的实施方案还包括产生用于生物发光测定中的基底或基质的方法。根据这些实施方案，所述方法包括产生含有至少一种目标分析物结合剂的溶液或液体制剂，所述至少一种目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和生物发光复合物的多肽组分或生物发光复合物的肽组分中的一者。在一些实施方案中，所述溶液包含蛋白质缓冲剂和至少一种赋形剂，包括但不限于表面活性剂、还原剂、盐、自由基清除剂、螯合剂、蛋白质或它们的任何组合。在一些实施方案中，所述溶液包含生物发光复合物的互补肽或多肽组分，以使得目标分析物结合剂和生物发光复合物的互补肽或多肽组分在目标分析物存在下形成生物发光分析物检测复合物。在一些实施方案中，所述溶液包含发光底物。
在产生所述溶液或液体制剂之后，所述方法包括将所述溶液施加至基底或基质的表面。在一些实施方案中，所述基底或基质是W-903纸、FTA纸、FTA Elute纸、FTA DMPK纸、Ahlstrom A-226纸、M-TFN纸、FTA纸、FP705纸、Bode DNA收集纸、硝化纤维素纸、尼龙纸、纤维素纸、Dacron纸、棉纸和聚酯纸或它们的组合。在其它实施方案中，所述基底或基质是包括塑料、尼龙、金属或其组合的网。
所述方法的实施方案还包括在将溶液施加至基底或基质之后干燥所述基底或基质。在一些实施方案中，干燥含有所述溶液的基底或基质包括在约30℃至65℃、约30℃至60℃、约30℃至55℃、约30℃至约50℃、约30℃至45℃或约30℃至40℃的温度下干燥所述基底或基质。在一些实施方案中，将所述基底或基质干燥约15分钟至8小时、约30分钟至7小时、约45分钟至6小时、约1小时至5小时、约2小时至4小时、约30分钟至2小时或约30分钟至1小时。在一些实施方案中，干燥含有所述溶液的基底包括冻干和/或冷冻所述基底。
在一些实施方案中，所述方法包括将所述至少一种目标分析物结合剂和/或所述生物发光复合物的互补肽或多肽组分干燥到第一基底上，并且将所述发光底物干燥到第二基底上。在一些实施方案中，将至少一种目标分析物结合剂和/或生物发光复合物的互补肽或多肽组分干燥到基于纸的基底上，并且将发光底物干燥到网上(参见例如图42A-42E)。
根据这些实施方案，所述基底或基质可用于生物发光测定中以检测目标分析物。例如，当含有所述溶液的基底或基质暴露于目标分析物时，可产生生物发光信号。在一些实施方案中，生物发光信号与目标分析物的浓度成比例。在一些实施方案中，如本文进一步描述的，当在所述基底上干燥时，所述至少一种目标分析物结合剂和/或所述生物发光复合物的互补肽或多肽组分表现出增强的稳定性。
d.溶液相组分
在一些实施方案中，本公开提供了制造包括一个或多个检测区域和对照区域(例如，96孔微量滴定板的孔)的溶液相检测平台(如本文所述)的方法。例如，如图33所示，本公开的溶液相平台的实施方案可包括在片或冻干饼状物中的本文所述的生物发光复合物的一种或多种组分，所述片或冻干饼状物可在溶液(例如，缓冲溶液)中复原以促进分析物检测。在一些实施方案中，所述片或冻干饼状物可包括进行反应以检测分析物所需的所有试剂，并且作为溶液相检测平台的一部分而包括(例如，存在于96孔微量滴定板的一个或多个孔中)。此类冻干饼状物或片与许多不同的测定形式相容，包括但不限于比色皿、微量滴定板(例如，96孔微量滴定板)的孔、试管、大容量瓶、SNAP测定等。
在一些实施方案中，本文所述的生物发光复合物的一种或多种组分可添加至检测区域和/或在样品存在或不存在的情况下可能已经存在于检测区域内。然后可将检测试剂复原(例如，再水合)作为进行样品中的分析物检测的一部分。在一些实施方案中，所述检测试剂包含目标分析物结合元件和生物发光复合物的生物发光多肽或组分，如SEQ ID NO:5的生物发光多肽(NanoLuc及其变体)、SEQ ID NO:9的非发光(NL)多肽(LgBiT)、SEQ ID NO:10的NL肽(SmBiT)、SEQ ID NO:11的NL肽(HiBiT)、SEQ ID NO:12的NL多肽(LgTrip-3546)、SEQ ID NO:13的NL肽(SmTrip)、SEQ ID NO:14的NL肽(β9/β10二肽)或其变体。
溶液相检测平台还可包括发光底物，如腔肠素、腔肠素-h、腔肠素-h-h、furimazine、JRW-0238、JRW-1404、JRW-1482、JRW-1667、JRW-1743、JRW-1744、其他腔肠素类似物或衍生物、前底物或本文所述的其他底物(例如，腔肠素类似物或衍生物)。在一些实施方案中，发光底物是组合物的一部分，所述组合物包含所述发光底物和选自普鲁兰多糖、海藻糖、麦芽糖、纤维素、葡聚糖、聚苯乙烯、聚(甲基)丙烯酸酯以及它们的任何组合的聚合物。在一些实施方案中，发光底物作为组合物或溶液的一部分(如蛋白质缓冲液、检测试剂)或与样品一起施加。在一些实施方案中，发光底物作为测定方法或系统的一部分作为单独试剂施加，并且在其他实施方案中，它是包含一种或多种检测试剂的冻干饼状物或片的一部分。
6.模板分析物
本公开的实施方案可用于目标分析物的检测/定量并且包括能够通过目标分析物结合元件与目标分析物结合或相互作用的目标分析物结合剂。在一些实施方案中，目标分析物结合剂包含能够结合一组或一类分析物(例如，通常与抗体结合的蛋白L)的目标分析物结合元件，此类结合元件在本文中可称为“非特异性”等；在其他实施方案中，目标分析物结合剂包含能够结合特定分析物(例如，结合单克隆抗体的抗原)的目标分析物结合元件，此类结合元件在本文中可称为“目标特异性”等。
在一些实施方案中，产生目标分析物结合剂和相应的目标分析物结合元件以检测与疾病状态或环境条件相关的一种或多种分析物。目标分析物结合元件可独立地选自由以下组成的组：抗体(例如，多克隆、单克隆和/或重组)、抗体片段(例如，Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv、Fd、可变轻链、可变重链、双抗体、scFv等)、蛋白A、蛋白A的Ig结合结构域、蛋白G、蛋白G的Ig结合结构域、蛋白A/G、蛋白A/G的Ig结合结构域、蛋白L、蛋白L的Ig结合结构域、蛋白M、蛋白M的Ig结合结构域、寡核苷酸探针、肽核酸、DARPin、适体、affimer、纯化的蛋白(例如，分析物本身或与分析物结合的蛋白质)以及蛋白质的分析物结合结构域。
在一些实施方案中，目标分析物结合元件包含由抗体(目标分析物)识别的抗原或表位，如由受试者响应于对病原体的免疫原性反应产生的抗体，其可表明受试者感染了所述病原体。在一些实施方案中，目标分析物是针对寨卡病毒、登革热病毒、西尼罗河病毒、黄热病病毒和/或基孔肯雅病毒的抗体，并且目标分析物结合元件是由抗体特异性地识别的免疫原性表位。在一些实施方案中，目标分析物是针对Hep A、B、C、D或E的抗体。在一些实施方案中，目标分析物是针对腮腺炎、麻疹、风疹、RSV、EBV、疱疹、流感、水痘-带状疱疹、产前寨卡病毒、或1、2或3型副流感病毒的抗体。在一些实施方案中，目标分析物是针对虫媒病毒、HIV、产前肝炎、CMV、汉坦病毒、脊髓灰质炎病毒、细小病毒的抗体。在一些实施方案中，目标分析物是针对蜱媒传染病(例如，莱姆病)的抗体。在一些实施方案中，目标分析物是针对百日咳博德特氏菌、肺炎球菌、衣原体、链球菌、肺炎支原体、肺炎链球菌、产志贺氏杆菌细菌、大肠杆菌、肠杆菌、梅毒、淋病的抗体。在一些实施方案中，目标分析物是针对ANA、心磷脂、乳糜泻、胰岛素、GAD65、IA-2、网硬蛋白、甲状腺球蛋白、RNP、细胞质嗜中性粒细胞、促甲状腺激素受体、甲状腺过氧化物酶、血小板抗体、PLAR2、心肌、GBM、组织转谷氨酰胺酶或甲状腺刺激的自身抗体。在一些实施方案中，目标分析物是毒素或针对毒素(例如，白喉、破伤风)的抗体。在一些实施方案中，目标分析物来自寄生虫或针对寄生虫(例如旋毛虫、旋毛虫病、克氏锥虫、刚地弓形虫)的抗体。在一些实施方案中，目标分析物是治疗性生物制剂或针对治疗性生物制剂的抗体(维多珠单抗、阿达木单抗、英夫利昔单抗、赛妥珠单抗、恩那西普、Opdivo、Keytruda、伊匹单抗、优特克单抗、苏金单抗、古塞库单抗、托珠单抗、利妥昔单抗、帕尼单抗、曲妥珠单抗、西妥昔单抗、奥法木单抗、依曲妥珠单抗(eptratuzumab)、阿巴西普、托法替尼)。
其他目标分析物包括与病原生物体(如病毒、细菌、原生动物、朊病毒、真菌、寄生线虫或其他微生物)相关的已知生物标志物。疾病生物标志物可包括病原生物体本身的标志物和/或受试者对病原生物体感染的反应的标志物。可使用本公开的测定和方法检测的疾病包括以下中的任一种：不动杆菌感染(鲍氏不动杆菌)、放线菌病(以色列放线菌、戈氏放线菌和丙酸丙酸盐杆菌)、非洲睡眠病或非洲锥虫病(布氏锥虫)、AIDS(HIV)、阿米巴病(溶组织内阿米巴)、无形体病(无形体属物种)、管圆线虫病(管圆线虫)、异尖线虫病(异尖线虫)、炭疽(炭疽杆菌)、溶血隐秘杆菌感染(溶血隐秘杆菌)、阿根廷蒂根热(胡宁病毒)、蛔虫病(蛔虫)、曲霉病(曲霉属物种)、星状病毒感染(星状病毒科)、巴贝西虫病(巴贝西虫物种)、蜡样芽孢杆菌感染(蜡样芽孢杆菌)、细菌性肺炎(多种细菌)、拟杆菌感染(拟杆菌属物种)、小袋虫病(结肠小袋纤毛虫)、巴尔通体病(巴尔通体属)、贝里斯蛔虫感染(B贝里斯蛔虫属物种)、BK病毒感染(BK病毒)、黑色毛结节病(何德毛结节菌)、芽囊原虫病(芽囊原虫属物种)、芽生菌病(皮炎芽生菌)、玻利维亚出血热(马丘波病毒)、巴西出血热(萨比亚病毒)、布鲁氏菌病(布鲁氏菌物种)、黑死病(鼠疫耶尔森氏菌)、伯克霍尔德氏菌感染(通常洋葱伯克霍尔德氏菌和其它伯克霍尔德氏属物种)、布路里溃疡(溃疡分枝杆菌)、杯状病毒感染(杯状病毒科)、弯曲杆菌病(弯曲杆菌属物种)、念珠菌病(通常白色念珠菌和其他念珠菌属物种)、卡里翁氏病(杆菌状巴尔通体)、猫抓病(汉氏巴尔通体)、蜂窝组织炎(通常A群链球菌和葡萄球菌)、查加斯病(克氏锥虫)、软性下疳(杜克雷嗜血杆菌)、水痘(水痘-带状疱疹病毒或VZV)、基孔肯雅病(甲病毒属)、衣原体(沙眼衣原体)、霍乱(霍乱弧菌)、着色芽生菌病(通常裴氏着色霉)、壶菌病(蛙壶菌)、华支睾吸虫病(华支睾吸虫)、艰难梭菌结肠炎(艰难梭菌)、球孢子菌病(粗球孢子菌和波萨达斯球孢子菌(Coccidioides posadasii))、科罗拉多蜱传热(科罗拉多蜱传热病毒或CTFV)、感冒(通常鼻病毒和冠状病毒)、克罗伊茨费尔特-雅各布病(PRNP)、克里米亚-刚果出血热(克里米亚-刚果出血热病毒)、隐球菌病(新型隐球菌)、隐孢子虫病(隐孢子虫属物种)、皮肤幼虫移行症(通常巴西钩虫；多种其他寄生虫)、圆孢子虫病(圆孢子虫)、囊虫病(猪带绦虫)、巨细胞病毒感染(巨细胞病毒)、登革热(登革病毒：DEN-1、DEN-2、DEN-3和DEN-4)、Desmodesmus感染(绿藻栅藻)、双核阿米巴病(脆弱双核阿米巴)、白喉(白喉杆菌)、裂头绦虫病(裂头绦虫)、麦地那龙线虫病(麦地那龙线虫)、埃博拉出血热(埃博拉病毒或EBOV)、棘球蚴病(棘球绦虫属物种)、埃立克体病(埃立克体属物种)、蛲虫病(蠕形住肠蛲虫)、肠球菌感染(肠球菌属物种)、肠道病毒感染(肠道病毒物种)、流行性斑疹伤寒(普氏立克次氏体)、传染性红斑(细小病毒B19)、幼儿急疹(人疱疹病毒6或HHV-6；人疱疹病毒7或HHV-7)、片吸虫病(肝片吸虫和大片吸虫)、姜片虫病(布氏姜片虫)、致死性家族性失眠症(PRNP)、丝虫病(丝虫目总科)、梭菌属感染(梭菌属物种)、气性坏疽(通常产气荚膜梭菌；其它梭菌属物种)、地霉菌病(白地霉)、格斯特曼-施特劳斯-沙因克尔病(PRNP)、贾第虫病(兰伯氏贾第虫)、鼻疽病(鼻疽伯克霍尔德氏菌)、颚口线虫病(棘腭口线虫和刚棘颚口线虫)、淋病(淋病奈瑟氏菌)、腹股沟肉芽肿(肉芽肿克雷伯氏菌)、A群链球菌感染(酿脓链球菌)、B群链球菌感染(无乳链球菌)、嗜血杆菌感染(流感嗜血杆菌)、手足口病(肠道病毒，主要是柯萨奇A病毒和肠道病毒71或EV71)、汉坦病毒肺综合征(辛诺柏病毒)、哈特兰病毒病(哈特兰病毒)、幽门螺杆菌感染(幽门螺杆菌)、溶血性尿毒症综合征(大肠杆菌O157:H7、O111和O104:H4)、肾综合征出血热(布尼亚病毒科)、甲型肝炎(甲型肝炎病毒)、乙型肝炎(乙型肝炎病毒)、丙型肝炎(丙型肝炎病毒)、丁型肝炎(丁型肝炎病毒)、戊型肝炎(戊型肝炎病毒)、单纯性疱疹(单纯疱疹病毒1和2(HSV-1和HSV-2))、组织胞浆菌病(荚膜组织胞浆菌)钩虫感染(十二指肠钩虫和美洲钩虫)、人博卡病毒感染(人博卡病毒或HBoV)、人伊氏埃立克体病(伊氏埃立克体)、人粒细胞无形体病(嗜吞噬细胞无形体)、人偏肺病毒感染(人偏肺病毒或hMPV)、人单核细胞埃立克体病(查菲埃立克体)、人乳头瘤病毒(HPV)感染(人乳头瘤病毒或HPV)、人副流感病毒感染(人副流感病毒或HPIV)、膜壳绦虫病(短膜壳绦虫和缩小膜壳绦虫)、传染性单核细胞增多症(爱泼斯坦-巴尔病毒或EBV)、流感(正粘病毒科)、等孢球虫病(贝氏等孢球虫)、金氏金氏菌感染(金氏金氏菌)、库鲁病(PRNP)、拉沙热(拉沙病毒)、军团菌病(嗜肺军团菌)、军团菌病(嗜肺军团菌)、利什曼原虫病(利什曼原虫属物种)、麻风(麻风分枝杆菌和弥散型麻风分枝杆菌)、钩端螺旋体病(钩端螺旋体属物种)、李斯特氏菌病(单核细胞增多性李斯特氏菌)、莱姆病(伯氏疏螺旋体、伽氏疏螺旋体和埃氏疏螺旋体)、淋巴丝虫病(班氏丝虫和马来丝虫)、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎(淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒或LCMV)、疟疾(疟原虫属物种)、马尔堡出血热(马尔堡病毒)、麻疹(麻疹病毒)、中东呼吸综合征(中东呼吸综合征冠状病毒)、类鼻疽(类鼻疽伯克霍尔德氏菌)、脑膜炎球菌病(脑膜炎奈瑟氏菌)、后殖吸虫病(通常横川后殖吸虫)、微孢子虫病(微孢子虫门)、接触传染性软疣(传染性软疣病毒或MCV)、猴痘(猴痘病毒)、腮腺炎(腮腺炎病毒)、鼠型斑疹伤寒(斑疹伤寒立克次氏体)、支原体肺炎(肺炎支原体)、足分支菌病(多种细菌(放线菌性足分支菌)和真菌(霉菌性足分支菌)种类)、蝇蛆病(寄生双翅目蝇幼虫)、新生儿结膜炎(最常见的是沙眼衣原体和淋病奈瑟氏菌)、诺如病毒(诺如病毒)、诺卡氏菌病(通常星状诺卡氏菌和其它诺卡氏菌属物种)、盘尾丝虫病(旋盘尾丝虫)、后睾吸虫病(麝猫后睾吸虫和猫后皋吸虫)、副球孢子菌病(巴西副球孢子菌)、并殖吸虫病(通常卫氏并殖吸虫和其它并殖吸虫属物种)、巴斯德氏菌病(巴斯德氏菌属物种)、头虱病(人头虱)、体虱病(人体虱)、阴虱病(阴虱)、百日咳(百日咳博德特氏菌)、鼠疫(鼠疫耶尔森氏菌)、肺炎球菌感染(肺炎链球菌)、肺孢子虫性肺炎(耶氏肺孢子虫)、肺炎(多种原因)、脊髓灰质炎(脊髓灰质炎病毒)、普雷沃氏菌感染(普雷沃氏菌属物种)、原发性阿米巴脑膜脑炎(通常福氏耐格里阿米巴原虫)、进行性多灶性白质脑病(JC病毒)、鹦鹉热(C鹦鹉热衣原体)、Q热(伯纳特氏柯克斯氏体)、狂犬病(狂犬病毒)、回归热(赫氏疏螺旋体、回归热疏螺旋体和其它疏螺旋体属物种)、呼吸道合胞病毒感染(呼吸道合胞病毒(RSV))、鼻孢子菌病(西伯鼻孢子菌)、鼻病毒感染(鼻病毒)、立克次氏体感染(立克次氏体属物种)、立克次氏体痘(小蛛立克次氏体)、里夫特裂谷热(里夫特裂谷热病毒)、落基山斑疹热(斑疹伤寒立克次氏体)、轮状病毒感染(轮状病毒)、风疹(风疹病毒)、沙门氏菌病(沙门氏菌属物种)、严重急性呼吸综合征(SARS冠状病毒)、疥疮(疥螨)、猩红热(A群链球菌属物种)、血吸虫病(血吸虫属物种)、败血症(多种原因)、志贺氏菌病(志贺氏菌属物种)、带状疱疹(水痘带状疱疹病毒或VZV)、天花(重型天花或轻型天花)、孢子丝菌病(申克孢子丝菌)、葡萄球菌性食物中毒(葡萄球菌属物种)、葡萄球菌感染(葡萄球菌属物种)、类圆线虫病(粪类圆线虫)、亚急性硬化性全脑炎(麻疹病毒)、梅毒(苍白密螺旋体)、绦虫病(绦虫属物种)、破伤风(破伤风梭菌)、须疮(通常毛癣菌属物种)、头癣(通常断发毛癣菌)、体癣(通常毛癣菌属物种)、股癣(通常絮状表皮癣菌、红色毛癣菌和须毛癣菌)、手癣(红色毛癣菌)、黑癣(通常威尼克何德霉)、脚癣(通常毛癣菌属物种)、甲癣(通常毛癣菌属物种)、花斑癣(马拉色氏霉菌属物种)、弓蛔虫病(犬弓蛔虫或猫弓蛔虫)、弓蛔虫病(犬弓蛔虫或猫弓蛔虫)、弓形体病(刚地弓形虫)、沙眼(沙眼衣原体)、旋毛虫病(旋毛虫)、毛滴虫病(阴道毛滴虫)、鞭虫病(毛首鞭虫)、结核病(通常结核分枝杆菌)、兔热病(土拉弗朗西斯菌)、伤寒热(肠道沙门氏菌肠道亚种伤寒血清型)、斑疹伤寒(立克次氏体)、解脲支原体感染(解脲支原体)、裂谷热(粗球孢子菌或波萨达斯球孢子菌)、委内瑞拉马脑炎(委内瑞拉马脑炎表达)、委内瑞拉出血热(瓜纳瑞托病毒)、创伤弧菌感染(创伤弧菌)、副溶血性弧菌肠炎(副溶血性弧菌)、病毒性肺炎(多种病毒)、西尼罗河热(西尼罗河病毒)、白色毛结节菌病(白吉利毛孢子菌)、假结核耶尔森氏菌感染(假结核耶尔森氏菌)、耶尔森菌病(小肠结肠炎耶尔森氏菌)、黄热病(黄热病病毒)、结合菌病(毛霉菌目(毛霉菌病)和虫霉目(虫霉病))以及寨卡热(寨卡病毒)。
7.检测、定量和诊断的方法
本公开的实施方案包括使用测定平台(例如，固相检测平台或侧流测定)检测和/或定量样品中的模板分析物的方法，所述测定平台使用生物发光多肽或生物发光复合物(及其组分；例如，非发光肽或多肽)用于目标分析物检测。实施方案还包括基于检测和/或定量样品中的目标分析物来诊断疾病状态或评价环境条件的方法。
在一些实施方案中，检测样品中的分析物的方法包括使用如本文所述的侧流测定系统或固相检测平台。根据这些实施方案，所述方法包括将样品施加至样品垫上，促进所述样品从所述样品垫流动至结合垫，然后从所述结合垫流动至分析膜上的检测区域和对照区域。所述方法可包括当在样品中检测到目标分析物时在至少一个检测区域中形成分析物检测复合物的第一目标分析物结合剂、第二目标分析物结合剂和目标分析物。在一些实施方案中，方法包括以下中的一个或多个步骤：样品添加、试剂(例如检测试剂)添加、洗涤、等待等。
在一些实施方案中，样品是来自受试者的生物样品，如血液、血清、血浆、尿液、粪便、脑脊液、间质液和唾液。在其他实施方案中，样品是来自自然或工业环境的样品，如水样品、土壤样品、植物样品、食物样品、饮料样品、油和工业流体样品。所述方法包括通过检测从分析物检测复合物产生的生物发光信号来检测样品中的目标分析物。在一些实施方案中，基于从分析物检测复合物产生的生物发光信号来定量样品中的目标分析物。在一些实施方案中，所述方法包括基于分析物的检测将从其获得样品的受试者诊断为患有或未患疾病。
8.竞争
本文中的一些实施方案利用标记的分析物与样品中的目标分析物之间的竞争来检测/定量样品中的目标分析物。示例性实施方案包括使用(i)用本文所述的可检测元件(例如，基于
Figure BDA0003382854880000951
的技术(例如，NanoLuc、NanoBiT、NanoTrip、NanoBRET或其变体的组分(例如，肽、多肽等)))标记的分析物(例如，与目标分析物相同或相似)，和(ii)目标分析物的结合部分(例如，融合或连接至本文所述的第二可检测元件(例如，基于
Figure BDA0003382854880000952
的技术(例如，NanoLuc、NanoBiT、NanoTrip、NanoBRET或其变体的组分(例如，肽、多肽等)))。在样品中不存在目标分析物的情况下，可检测元件产生由系统产生的可检测信号(例如，通过可检测元件之间的互补、通过BRET等)。当使系统暴露于样品(例如，生物样品、环境样品等)时，如果样品中存在目标分析物(标记的分析物将被竞争出复合物)，则生物发光信号减少。
本文的各种实施方案利用此类竞争免疫测定法用于小分子检测。在一些实施方案中，目标小分子是毒素(例如，霉菌毒素等)、代谢物(例如，氨基酸、葡萄糖分子、脂肪酸、核苷酸、胆固醇、类固醇等)、维生素(例如，维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B7、维生素B9、维生素B12、维生素C、维生素D、维生素E、维生素H或维生素K等)、辅酶或辅因子(如辅酶A、辅酶B、辅酶M、辅酶Q、胞苷三磷酸、乙酰辅酶A、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)、烟酰胺腺嘌呤(NAD+)、核苷酸腺苷单磷酸、核苷酸腺苷三磷酸、谷胱甘肽、血红素、硫辛酰胺、钼蝶呤、3’-磷酸腺苷-5’-磷酸硫酸、吡咯并喹啉醌、四氢生物蝶呤等)、生物标志物或抗原(例如，促红细胞生成素(EPO)、铁蛋白、叶酸、血红蛋白、碱性磷酸酶、转铁蛋白、载脂蛋白E、CK、CKMB、甲状旁腺激素、胰岛素、胆固醇酯转移蛋白(CETP)、细胞因子、细胞色素c、载脂蛋白AI、载脂蛋白AII、载脂蛋白BI、载脂蛋白B-100、载脂蛋白B48、载脂蛋白CII、载脂蛋白CIII、载脂蛋白E、甘油三酯、HD胆固醇、LDL胆固醇、卵磷脂胆固醇酰基转移酶、对氧磷酶、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转移酶(AST)、CEA、HER-2、膀胱肿瘤抗原、甲状腺球蛋白、甲胎蛋白、PSA、CA 125、CA 19.9、CA 15.3、瘦素、催乳素、骨桥蛋白(osteoponitin)、CD 98、肌成束蛋白、肌钙蛋白I、CD20、HER2、CD33、EGFR、VEGFA等)、药物(大麻素(例如四氢大麻酚(THC)、大麻二酚(CBD)和大麻酚(CBN)等)、阿片类(例如，海洛因、鸦片、芬太尼等)、兴奋剂(例如，可卡因、苯丙胺、甲基苯丙胺等)、俱乐部药物(例如，MDMA、氟硝西泮、γ-羟基丁酸等)、离解药物(例如，氯胺酮、苯环利定、丹参、右美沙芬等)、致幻剂(例如，LSD、墨斯卡灵(mescaline)、裸盖菇素(psilocybin)等)、爆炸物(例如，2,4,6-三硝基甲苯(TNT)和六氢-1,3,5-三硝基-1,3,5-三嗪(RDX)、季戊四醇四硝酸酯(PETN)等)、毒性化学物质(例如，塔崩(GA)、沙林(GB)、索曼(GD)、环沙林(GF)、2-(二甲基氨基)乙基N,N-二甲基氟代磷酰胺(GV)、VE、VG、VM、VP、VR、VS或VX神经毒剂)等。
在一些实施方案中，小分子检测免疫测定(如实施例5中举例说明的小分子检测免疫测定等)在固相、侧流和本文所述的其他测定和装置中进行。
9.实施例
对本领域技术人员来说显而易见的是，在不脱离本公开的范围或本文公开的方面和实施方案的情况下，本文描述的本公开的方法的其他合适的修改和改编是容易应用和可理解的，并且可使用合适的等效物进行。现在已详细描述了本公开，通过参考以下实施例将对其有更明确理解，所述实施例仅意图用于说明本公开的一些方面和实施方案，并且不应被视为对本公开范围的限制。本文提及的所有期刊参考文献、美国专利和出版物的公开内容特此以引用的方式整体并入。
本公开具有多个方面，所述方面通过以下非限制性实例说明。
实施例1
固相材料
如图3所示，本公开的生物发光复合物的组分在被施加至固体支持基底(例如，膜)之后产生可检测的生物发光。将用
Figure BDA0003382854880000971
组分(例如，目标分析物结合剂)的抗体施加至封闭(缓冲液1；左图和右图上的上面两个膜)或未封闭(缓冲液2；左图和右图上的下面两个膜)的膜，然后在室温下用氮气干燥或在37℃在无氮气的情况下干燥。使用ImagequantLAS4000成像平台(1秒曝光)，在这些条件下产生了可检测的生物发光。这些结果表明，本公开的生物发光复合物的组分可成功地用于固相和侧流测定平台，所述固相和侧流测定平台可涉及干燥试剂和施加至固相材料以及暴露于各种温度和加工条件。
如图4所示，生物发光复合物的组分在施加至基于膜和纸的固体支持基质后产生可检测的生物发光。将包含缓冲液、底物(例如，furimazine)和生物发光复合物的两种互补组分(例如，HiBiT和LgBiT)的组合物施加至硝化纤维素膜(左侧三个图)或滤纸(中间三个图中所示的Whatman 541；右侧三个图中所示的Whatman 903)。然后将这些组分干燥，在4℃下运输，然后在24小时后使用LAS4000成像平台(30秒和5分钟曝光)进行测试。在这些条件下产生可检测的生物发光，其中滤纸基质允许比硝化纤维素膜更亮的生物发光信号。用玻璃和合成纤维(例如，Ahlstrom 8950级)制成的基质也产生可检测的生物发光信号(数据未示出)，从而证明本公开的生物发光复合物的组分可成功地与各种基质材料一起使用。
实施例2
使用生物发光复合物检测目标分析物
如图5所示，本公开的生物发光复合物的组分(例如，非发光肽和多肽)可用作用于目标分析物识别的目标分析物结合剂。例如，如图5(左图)所示，多克隆山羊抗小鼠IgG3抗体(例如，目标分析物结合元件)与生物发光复合物的组分(例如，LgBiT和SmBiT)缀合。在目标分析物(例如，小鼠IgG3)存在下，形成了生物发光复合物，并且生物发光信号由所述生物发光复合物的组分的互补相互作用产生(图5，右图)，其中随着目标分析物的浓度增加而产生增加的信号。这些结果证明了使用本公开的生物发光复合物的组分检测目标分析物的可行性。
如图6所示，本公开的实施方案包括使用生物发光复合物的组分作为用于目标分析物识别的目标分析物结合剂的固相测定平台。如所示在Whatman 903滤纸上制备四个测试斑点，并且之后添加目标分析物(图6，上图)。在一个实施方案中，20ng的缀合至生物发光复合物的组分(例如，SmBiT)的山羊抗小鼠和20ng的缀合至生物发光复合物的互补组分(例如，LgBiT)的山羊抗小鼠各自在5μl的蛋白质缓冲液(20mM Na3PO4；5％w/v BSA；0.25％v/vTween 20；10％w/v蔗糖)中制备，并在37℃下干燥1小时到纸上的所指示位置中。此外，如所示，在高真空下将5μl的5mM furimazine于乙醇中的溶液施加至斑点上持续15分钟(图6，上图)。然后将制备的斑点在4℃下储存一周。如所证明的，在目标分析物(例如，小鼠IgG3；斑点#2)存在下，形成了生物发光复合物，并且生物发光信号由所述生物发光复合物的组分的互补相互作用产生(图6，底图)。虽然背景生物发光信号是在不存在目标分析物的情况下产生的(斑点#4)，但与使用单独发光底物产生的信号相比，在目标分析物和发光底物(例如furimazine)存在下产生的信号显著增加(比较斑点#2和#4)。
进行了底物和蛋白质稳定性的另外测试，并描绘于7A-7E中。如上所述进行这些测试，具有在添加目标分析物以测试发光底物稳定性之后添加完全功能性生物发光复合物(例如，NanoLuc)的另外步骤。如图7A-7C所示，当在较高温度(例如，37℃)下储存两周时，生物发光复合物的组分失去活性。生物发光信号的损失似乎不是由于发光底物的不稳定性或分解，因为添加完全功能性生物发光复合物(例如，NanoLuc)仍然产生信号(图7D)。此外，为了测试生物发光复合物的一种或多种组分的分解是否导致生物发光信号减少，添加了不受储存条件影响的非抗体缀合的组分(例如，HiBiT)。如图7E所示，添加非抗体缀合的组分导致在4℃下产生生物发光信号，而在37℃下不产生，从而表明生物发光复合物的互补组分(例如，LgBiT)的降解可能导致信号的损失。
进行了储存条件的另外测试，并且描绘于图8A-8B中。这些测试如上所述进行，除了测试斑点储存总计3个月。如图8A所示，即使在储存3个月后，在目标分析物存在下在4℃和25℃下仍产生可检测的生物发光信号，尽管活性有所降低。添加完全功能性生物发光复合物(例如，NanoLuc)产生了信号(图8B)，但所述信号似乎取决于蛋白质缓冲液的使用(比较斑点#1和#2)，从而表明发光底物通过蛋白质缓冲液稳定。
实施例3
在复杂采样环境中检测目标分析物
图9A-9C包括来自测试生物发光复合物形成和分析物检测是否能够在复杂采样环境中发生的固相测定平台(例如，斑点测试)的代表性图像。如图9A所示，将发光底物和生物发光复合物的两种互补组分(HiBiT和LgBiT)施加至Whatman 903滤纸，如上所述每种组分还具有目标分析物结合元件(多克隆抗小鼠IgM)，并且在4℃下储存6周。向EDTA收集的全血样品(图9B)和100％血清样品(图9C)各自掺杂10pg小鼠IgG3(目标分析物)，并施加至图9A中所指示的斑点。相应的对照样品未掺杂小鼠IgG3。这些结果证明使用本公开的生物发光复合物的组分在复杂采样环境中检测目标分析物的可行性。
实施例4
定性和定量评估
图10A-10B包括固相测定的代表性结果，从而证明可定量地(图10A)和定性地(图10B)评估生物发光信号。如图10A所示，将10μM的发光底物(例如，furimazine)施加至滤纸并放置在微量滴定板中。然后添加含有
Figure BDA0003382854880001001
酶的PBS测定缓冲液，并且定量地(图10A，右图)和定性地评估生物发光信号(图10B)。此外，使用光度计(图10B，左图)以及智能手机(图10B，右图)有效地评估了生物发光信号。
这些结果证明，本公开的测定和方法可包括将对应于目标分析物检测的生物发光的水平与各种对照样品进行比较以促进快速定量和定性评估。例如，测定形式可包括具有不同浓度的目标分析物的多个对照样品，所述目标分析物可充当可评估测试样品的标准。
根据这些方法，可使用能够与LgBiT或LgTrip形成生物发光复合物的高亲和力二肽定量地和定性地评估生物发光信号。图11A-11B中所示的结果包括证明高亲和力二肽pep263与LgBiT和LgTrip形成生物发光复合物的能力的代表性图(图11A中的RLU；图11B中的S/B)。高亲和力二肽pep263包含NanoTrip复合物的β9和β10链。(参见例如，美国专利申请16/439,565(PCT/US2019/036844)和美国临时申请序列号62/941,255，两者均以引用的方式整体并入本文。)
此外，图12示出固相测定的代表性结果，其证明使用来自iPhone或来自成像器(例如，LAS4000)的标准相机，来自放置到标准微量滴定板中的纸穿孔的生物发光的定性评估。这种斑点测试测定评估了干燥到Whatman 903纸上的不同LgBiT组分的功能稳定性。Whatman903蛋白质保存斑点卡(1/8”冲孔)与以下蛋白质缓冲液一起使用：20mM Na3PO4，5％w/v BSA，0.25％v/v tween20，10％w/v蔗糖。将1000x
Figure BDA0003382854880001011
储备溶液1:1000稀释在蛋白质缓冲液中。将约5μL的此反应溶液施加至斑点1。对于HT-LgBiT复合物，每个斑点使用约5μL的106.8nM蛋白质。将约20μM储备蛋白质1:100稀释在蛋白质缓冲液中。将约534μL储备液稀释在466μL蛋白质缓冲液中。将约5μL的这种缀合溶液添加至斑点2。对于LgTrip(2098)复合物，每个斑点使用约5μL的106.8nM蛋白质。通过将约11.6μL的储备液稀释在988μL的蛋白质缓冲液中以制得1mL的106.8nM溶液获得约9.6μM的蛋白质储备液。将约5μL的这种缀合溶液添加至斑点3。对于LgTrip(3546)复合物，每个斑点约5μL的106.8nM蛋白质。通过将约1.13μL的LgTrip储备液稀释到998.87μL蛋白质缓冲液中获得约94μM蛋白质储备液。将约5μL的这种缀合溶液添加至斑点4。在添加所有蛋白质后，将样品在30℃、4℃、25℃和37℃下干燥1小时。
用于评估这些实验的RLU活性的方法包括对于全部在第6天在25℃和37℃下(在1或2天的4℃时间范围之后)；对于LgTrip 3546在4℃下在第8天；以及对于NanoLuc、LgBiT和LgTrip 2098在第9天成像。furimazine在50μM下进行了测试，并且约1.2μM二肽用于NanoBiT和NanoTrip实验。将所有斑点放置到具有底物试剂的板上，用iPhone和LAS4000成像系统捕获图像，然后插入板读数器中。使用NanoGlo活细胞底物目录号N205B(批次189096)以及测定缓冲液1x PBS，pH 7.0)。
图13A-13B示出图12中描绘的相同固相测定的定量分析，但是使用光度计在第3天在25℃下检测到发光(图13A中的RLU；图13B中的S/B)。这些定量数据支持来自图12的定性数据。用于图12的材料和方法与图13A-13B使用的相同(例如，在PBS(pH 7.0)中添加1μM二肽+50μM活细胞底物，并在光度计上读取)。在一些情况下，LgBiT的背景升高可降低S/B比。
图14A-14C示出如图12-13中描绘的相同固相测定的定量时间过程，证明所有蛋白质在实验条件下在所有测试的温度下在时间范围内的稳定性。对于4℃(图14A)、25℃(图14B)和37℃(图14C)示出在50μM furimazine下随时间推移(0至60天)的Bmax RLU值。这些定量数据与图12和13一致，从而证明所有测试的复合物和在整个时间范围内测试的所有温度下的稳定性。用于图12的材料和方法与图14A-14C使用的相同。
实施例5
缓冲液组合物
还进行了实验以测试复合物在不同缓冲液组合物中从0至90分钟的短期或加速稳定性。方法包括使用约1.068nM浓度的在Whatman903纸斑点(1/8”)上吸收和干燥的每种蛋白质。制备蛋白质样品并用蛋白质缓冲液或PBS缓冲液在纸斑点上干燥(对于所使用的特定缓冲液组成，参见各图)。储备液浓度包括1000x(0.4mg/mL)的NanoLuc、20μM的LgBiT-1672-11s-His和94μM的LgTrip(3546)。蛋白质缓冲液由20mM Na3PO4、5％w/v BSA、0.25％v/vtween20、10％w/v蔗糖组成。使用在100μl测定缓冲液PBS中添加furimazine的二肽测试发光活性(pH 7.0)(最终[二肽]＝1nM；最终[furimazine]＝50μM)。在时间点0读取样品(刚从4℃取出)，然后置于60℃和25℃中继续测试。将NanoLuc的1000x储备溶液1:1000稀释在蛋白质缓冲液(1mL)中，或将10μL的储备液稀释到990μL的蛋白质缓冲液中以获得1.068nM储备液(对于所使用的特定缓冲液组成，参见各图)。将约5μL每种浓度添加至纸斑点进行测试。对于所测试的每种蛋白质(LgBiT和LgTrip)，在每种缓冲液中进行适当的稀释，以确保每个斑点使用约5μL的1.068nM蛋白质。添加所有蛋白质后，将样品在35℃下干燥1小时，并且每种条件和温度制备40个斑点。
图15A-15D示出在25℃和60℃的两种缓冲液条件下进行的加速稳定性研究的第0天收集的代表性结果(图15A和15C使用蛋白质缓冲液，而图15B和15D使用PBS)。这些数据证明，与蛋白质缓冲液相比，所测试的复合物不能耐受PBS作为输入到Whatman 903纸中的缓冲液条件。即使在早期时间点，缓冲条件似乎也会影响稳定性。在一些情况下，LgTrip 3546表现出更好的活性，从而表明在这些条件下比NanoLuc和LgBiT更好的化学稳定性。
图16A-16B示出图15中描绘的加速稳定性研究的结果，但在0至50天的时间过程内。图16A包括在25℃的蛋白质缓冲液中测试的样品的结果，并且图16B包括在60℃蛋白质缓冲液中测试的样品的结果。使用与图15中相同的材料和方法。这些结果证明复合物在这些条件(25℃和60℃)下保持稳定直到至少50天。
图17示出缓冲条件对来自干燥到硝化纤维素膜上的NanoLuc的发光的影响的比较，以在侧流测定的背景下评估
Figure BDA0003382854880001031
稳定性。测试了四种不同的条件：条件1：PBS(pH 7.4)中的小鼠抗Hum+IgG–Nluc；条件2：PBS(pH 7.4)中的IgG—Nluc；条件3：负载缓冲液(20mM Na3PO4，5％w/v BSA，0.25％v/v tween20，10％w/v蔗糖)中的小鼠抗Hum+IgG–Nluc；条件4：负载缓冲液(20mM Na3PO4，5％w/v BSA，0.25％v/v tween20，10％w/v蔗糖)中的IgG—Nluc。将每种条件应用于膜并在室温或37℃下干燥。
对于这些实验，制备了以下溶液：(1)995μl添加缓冲液(0.1MPBS，pH 7.4)中的5μl小鼠/抗人；(2)995μl添加缓冲液(0.1M PBS，pH 7.4)中的5μl抗小鼠-NanoLuc；(3)蛋白质缓冲液(20mM Na3PO4，5％w/v BSA，0.25％v/v tween20，10％w/v蔗糖)中的5μl小鼠/抗人；(4)995μl蛋白质缓冲液中的5μl抗小鼠-NanoLuc(20mM Na3PO4，5％w/v BSA，0.25％v/vtween20，10％w/v蔗糖)。将约0.5ml的溶液(1)负载到喷枪中并施加至硝化纤维素条带(条带1和条带2)的左侧。使所述条带在室温下或在37℃下干燥1小时。将约0.5ml的溶液(2)施加至条带1和条带2的整个表面并在室温或37℃下干燥；分别形成条件1和2。将约0.5ml的溶液(3)负载到喷枪中并施加至硝化纤维素条带(条带3和条带4)的左侧。使条带在室温或37℃下干燥1小时。将约0.5ml的溶液(4)施加至条带3和条带4的整个表面并在室温或37℃下干燥；分别形成条件3和4。为了成像，制备了1x底物溶液(4ml PBS+1ml Nano-Glo LCS稀释缓冲液+50ul Nano-Glo活细胞底物)并用1ml的底物溶液覆盖在每个条带上；此后立即开始成像。
这些数据证明缓冲液配方对于侧流膜的活性是重要的。在条件1–4中，其中蛋白质刚施加至PBS中的膜，当膜暴露于新鲜制备的Nano-Glo活细胞底物时，几乎没有观察到光。相比之下，使用含有诸如Na3PO4、BSA、Tween 20和蔗糖的另外组分的负载缓冲液制备的蛋白质显示出相当大的光输出。这表明用于将蛋白质添加至膜表面的特定负载缓冲液对于稳定性和功能是重要的(图17)。
实施例6
侧流测定组分
进行实验以测试不同的膜封闭剂和测定运行缓冲液，以促进蛋白质和目标在侧流测定期间的适当移动。使用了四个条带，并且每个条带的设计(有或没有蔗糖和封闭剂)显示在图18最左侧图像下方的示意图中。简言之，条带1包括在结合垫上具有蔗糖预处理的封闭膜；条带2包括在结合垫上没有蔗糖预处理的封闭膜；条带3包括在结合垫上具有蔗糖预处理的未封闭的膜；并且条带4包括在结合垫上没有蔗糖预处理的未封闭的膜。
封闭缓冲液由20mM tris(pH 7.4)中的1％w/v聚乙烯醇组成。缀合预处理包括去离子水中的30％蔗糖w/v。结合垫是Ahlstrom 8950级(带粘合剂的短切玻璃，50g/m2)，并且膜是硝化纤维素。为了封闭，将膜在室温下在封闭缓冲液中浸泡30分钟，且随后从缓冲液中取出，用去离子水洗涤，并在35℃下干燥30分钟。对于二次预处理，将蔗糖溶液施加至膜垫上，靠近将施加缀合试剂(底物)的位置。将膜在35℃下干燥1小时。为了制备蛋白质，将约5μL抗小鼠NanoLuc添加至995μl蛋白质缓冲液中。将约1ml的蛋白质溶液放入喷枪中，并将薄涂层施加至结合垫。使其在35℃下干燥1小时。然后将条带组装在背衬卡上。此外，对于图18-20，测试了以下缓冲液组合物：缓冲液1由20X SSC、1％BSA(pH 7.0)+10μM LCS组成(图18)。缓冲液2由0.01M PBS、1％BSA(pH 7.0)+10μM PCS组成(图19)。并且缓冲液3由5x LCS稀释缓冲液+5x LCS–在PBS中稀释至1X组成(图20)。
图18示出膜封闭和蔗糖预处理对在20X SSC、1％BSA(pH 7.0)+10μM LCS的运行缓冲液中进行的侧流测定的影响。图19示出膜封闭和蔗糖预处理对在0.01M PBS、1％BSA(pH7.0)+10μM可渗透细胞底物(PCS)的运行缓冲液中进行的侧流测定的影响。图20示出膜封闭和蔗糖预处理对在5x LCS稀释缓冲液+5x LCS-在PBS中稀释至1X的运行缓冲液中进行的侧流测定的影响。这些数据证明，膜处理和蛋白质缓冲液确实影响结合垫内和侧流膜上的测定流体流动。
还进行了实验以在侧流测定的背景下评估不同的膜和膜性质，如膜性质对吸收和毛细管作用的影响。图21示出在侧流测定中膜性质对生物发光试剂吸收和毛细管作用的影响。测试含有不同孔径的膜的流动效率。每个膜是未封闭的，并且在条带的大约底部1/3上含有30％w/v蔗糖预处理。其他材料包括结合垫(Ahlstrom 8950级，带粘合剂的短切玻璃，50g/m2)；样品垫(纤维素玻璃纤维CFSP203000(Millipore))；和吸收垫(棉绒，238级(Ahlstrom))。对以下膜条件进行了测试：
1.硝化纤维素FF170HP(Ahlstrom)
2.硝化纤维素Hi-Flow Plus HFC18002(Millipore)–180秒/4cm
3.硝化纤维素Hi-Flow Plus HFC13502(Millipore)–135秒/4cm
4.硝化纤维素Hi-Flow Plus HFC09002(Millipore)–90秒/4cm
5.硝化纤维素Hi-Flow Plus HFC12002(Millipore)–120秒/4cm
6.硝化纤维素Hi-Flow Plus HFC07502(Millipore)–75秒/4cm
7.硝化纤维素FF170HP(Ahlstrom)-阴性对照。
运行缓冲液由5x LCS稀释缓冲液+5x LCS–在PBS中稀释至1X组成。通过将30％蔗糖溶液施加至膜上来对膜进行预处理，覆盖条带的底部约1.5cm，使其在35℃下干燥1小时。通过在995μL蛋白质缓冲液中添加约5μL抗小鼠NanoLuc来制备蛋白质。将约1mL蛋白质溶液添加至喷枪，所述喷枪用于轻微涂覆结合垫。使其在35℃下干燥1小时。这些实验的阴性对照包含不含蛋白质的蛋白质缓冲液，其以与测试条件相同的方式用喷枪施加。将条带组装在背衬卡上。将结合垫、样品垫和芯吸垫切割成2cmx1cm。样品垫和结合垫重叠约1.8cm。条带的总尺寸是约6cmx1cm。
创建了成像程序，以每30秒捕获5秒曝光图像总计约10分钟。如果看起来仍有NanoLuc流过膜，则重复成像。使用ImageJ将图像堆叠成影片，并且包含在图21中的最终图像是随时间推移拍摄的所有图像的累积信号。
这些结果表明，基于这些实验中使用的条件，条带4和6(图21中的方框)具有最完全的NanoLuc从结合垫移出并进入样品容器中。
实施例7
生物发光复合物形成
进行实验以评价在膜和滤纸上存在各种试剂的情况下的生物发光复合物形成。实验是根据下面的示意图设计和进行的，所述示意图示出所测试的四种不同条件。
Figure BDA0003382854880001071
对于这些实验，将2.5μL的HaloTag-HiBiT添加至498μL蛋白质缓冲液中。将约5μL的此溶液点样在第1、3和4象限中的膜和滤纸上(参见以上示意图)，并在37℃下干燥1小时。将约2.5μL的ATG-1672-11S-6His稀释在498μL的蛋白质缓冲液中，并将约5μL直接点样到第2、3和4象限中的硝化纤维素膜和滤纸上(参见以上示意图)。使膜在室温下干燥1小时。将furimazine制备为EtOH中的5mM储备溶液。将约5μL的此溶液点样到第1、2和3象限中的膜和滤纸上，并立即置于高真空下持续15分钟。将约2.5μL的储备蛋白质(20μM)稀释在498μL的NanoGLO缓冲液中，所述缓冲液不含底物。将约5μL添加至上述象限中，且随后在光度计中读取。
图22A-22B示出来自硝化纤维素(左)和Whatman 541级(右)纸上的NanoBiT/HiBiT互补的生物发光信号(图22A)，以及来自在总曝光时间内拍摄的相应影片的编辑图像(影片可根据要求提供)。在添加所指示的试剂之后以1秒开始并以10分钟曝光结束(1秒、3秒、10秒、30秒、1分钟、2分钟、3分钟、4分钟、5分钟、10分钟)持续总时间(26分钟)的递增曝光时间下捕获图像26。
这些结果表明，与膜相比，滤纸可提供增加的信号。此外，象限4中存在的条件未产生可检测的发光，这可能表明复合物形成受到所存在的一种或多种其他试剂的阻碍。
进行实验以评估增加的底物浓度对复合物形成的影响。图23示出来自Whatman903级纸上的NanoBiT/HiBiT互补的生物发光信号，具有在20分钟时另外底物和液体的尖峰。图23是来自在总曝光时间内拍摄的相应影片的代表性编辑图像(影片可根据要求提供)。将约2.5μl的纯化LgBiT或HiBiT稀释在498μl 1X LCS缓冲液中，并以10μL体积(2:1LgBiT与HiBiT比率)直接添加至滤纸(与象限1中的条件一致)。原始底物是NanoBRETNanoGlo(以5mM添加5μl)，并且另外的浸没底物是NanoBRET NanoGlo(5mM储备液)，在1XNanoGlo缓冲液中1:5稀释，其在PBS中稀释至1X。添加约500μl以覆盖滤纸。在整个持续时间期间以重复30秒曝光捕获图像。
在过量的液体体积中掺杂另外的底物(furimazine)显示信号返回，从而表明随着组分开始在另外的流体中移动，由于它们的流动性增加而可能形成更多的复合物。这一实验还表明酶保持活性，其中底物浓度是可通过添加过量底物来补救的限制性因素。
图24示出来自Whatman 903纸而非Whatman 541纸上的NanoBiT/HiBiT互补的生物发光信号，实验条件与上述示意图中的那些一致(图22中的象限1-4)。在接近实验结束时添加缓冲液以使膜再水合。图24是来自在总曝光时间内拍摄的相应影片的代表性编辑图像(影片可根据要求提供)。象限2中的条件似乎提供最强的发光信号。
实施例8
使用LgTrip和底物的斑点测试
进行了实验以通过首先测试可向其添加目标分析物(例如二肽)的含有LgTrip3546和furimazine的纸基质来评估“一体化”斑点的可行性。图25A-25C示出在存在(图25B)和不存在(图25A)BSA的情况下，由在Whatman 903纸中用LgTrip 3546的二肽和底物复原产生的生物发光信号，以及用BSA对二肽进行的连续稀释(图25C)。制备了两组斑点，每个斑点由以下组分组成：1)5mM ATT，5mM抗坏血酸盐、5μM LgTrip 3546和1mM furimazine；2)5％BSA、5mM ATT、5mM抗坏血酸盐、5μM LgTrip 3546和1mM furimazine。
为了制备斑点，制备了含有200μL的5μM LgTrip 3546、5mM ATT和5mM抗坏血酸的小瓶。将约5μL的此溶液添加至每个斑点，然后使所述斑点在35℃下干燥1小时。在干燥后，制备furimazine于乙醇中的1mM溶液。将约5μL的此溶液添加至每个斑点，并使其在35℃下再干燥30分钟。对于发光测量，在测试时，将水中的1.2mM二肽储备液在PBS(pH 7.0)中连续稀释至1e-10M。将约100μL的每种二肽储备液添加至含有斑点的96孔板中，并立即开始动力学测量。
这些数据证明在添加二肽的情况下观察到稳定的浓度依赖性响应(图25)。此实验突出显示，可制备含有LgTrip 3546和底物的纸形式，然后在含有潜在目标分析物(例如二肽)的缓冲水性介质中复原。然后使用底物和LgTrip 3546输入测试不同的材料。添加1nM的新鲜二肽以测试NanoTrip和底物活性，或者添加新鲜的Nluc以分离底物。图27示出在三种不同的固相材料(Whatman 903、Ahlstrom 237和Ahlstrom 6613H)中由用LgTrip 3546的二肽和底物或添加至干燥的LgTrip 3546和底物的NanoLuc复原产生的生物发光信号。Alhstrom6613H似乎对随时间推移的信号输出有害，因为在两种条件下发光信号似乎都减少。总的来说，测定组分的稳定性可受到它们所包埋于其中的固体基质材料的组成的影响。
图28示出来自Whatman 903纸的生物发光信号，所述纸含有LgTrip 3546以及底物两者并在环境条件下储存超过25天。在测试时，使斑点暴露于PBS中的1nM二肽。总体而言，这一实验表明，在环境温度下延长的储存时间后，没有来自材料的信号的显著损失。
实施例9
含有LgTrip和底物的冻干饼状物
图26A-26B示出由用来自冻干饼状物的LgTrip 3546的二肽和底物复原产生的生物发光信号(图26A)以及二肽滴定的汇总数据(图26B)。为了制备冻干饼状物，将5％w/v普鲁兰多糖添加至含有26.3mM ATT和11.3mM抗坏血酸的水(溶液1)中。然后将溶液1在弹扣盖小瓶(snap-cap vial)中等分成35μL体积。然后将约10μL的95μMLgTrip 3546蛋白添加至每个小瓶中并移液混合(溶液2)。制备furimazine于乙醇中的10mM储备溶液，并将5μL的此溶液添加至每个小瓶中并混合(溶液3)。将含有溶液3的小瓶置于干冰上冷冻1小时，然后冻干过夜。对于发光测量，在测试时，将添加至水中的1.2mM二肽储备液在PBS(pH 7.0)中连续稀释至1e-10M。将约100μL的每种二肽储备液添加至含有LgTrip 3546和底物的冻干小瓶中，短暂吸移混合，然后置于96孔板中，并且立即开始动力学测量。
这些数据证明在添加二肽的情况下观察到稳定的浓度依赖性生物发光响应(图26)。此实验突出显示，可制备含有LgTrip 3546和底物的固体形式冻干饼状物或片，然后在含有潜在目标分析物(例如二肽)的水性介质中复原。
实施例10
蛋白质缓冲液配方
对于图29-33，根据以下示意图中所示的实验设计进行实验以测试蛋白质组分与不同蛋白质缓冲剂配方的相容性。
Figure BDA0003382854880001111
对于这些实验，将Whatman 903蛋白质保存斑点卡与以下蛋白质缓冲液配方一起使用：
蛋白质缓冲液1：20mM Na3PO4、5％w/v BSA、0.25％v/vtween20、10％w/v蔗糖
蛋白质缓冲液2：20mM Na3PO4、0.25％v/v tween20、10％w/v蔗糖
蛋白质缓冲液3：20mM Na3PO4、5％w/v BSA、0.25％v/v tween20
蛋白质缓冲液4：20mM Na3PO4、5％w/v BSA、0.25％v/vtween20、2.5％普鲁兰多糖
蛋白质缓冲液5：20mM Na3PO4、0.25％v/v tween20、2.5％普鲁兰多糖
对于NanoLuc，将1000x储备溶液1:1000稀释在蛋白质缓冲液(1mL)中。对于1.068nM储备溶液，将3μl稀释到297μl的蛋白质缓冲液中。将每种浓度约5μL点样在滤纸上。对于LgBiT-1672-11s-His，每个斑使用5μL的1.068nM蛋白质。将约10μL稀释在990μL蛋白质缓冲液中以获得用于2e-7M储备液。然后制备约100μL的100nM蛋白质溶液，并将约10μL储备液稀释到990μL蛋白质缓冲液中以获得1nM储备液。将每种浓度约5μL点样到滤纸上。对于LgTrip3546，每个斑点使用约5μL的1.068nM蛋白质。将约1.1μL的LgBiT-1672储备液稀释到998.94μL蛋白质缓冲液中。将约3μL储备液稀释到297μL蛋白质缓冲液中。将每种浓度约5μL点样到滤纸上。在添加所有蛋白质后，将样品在30℃下干燥约1小时。对于每种条件制备了约40个斑点(参见上面的示意图)。在第0天测试斑点作为基线，然后放置在60℃下并在6天后测试。通过在PBS(pH 7.0)中添加1nM高亲和力二肽+50μM活细胞底物来测试RLU活性。
图29A-29C示出在上文针对NanoLuc(图29A)、LgBiT-1672(图29B)和LgTrip 3546(图29C)描述的各种蛋白质缓冲液制剂中，通过RLU测量的生物发光信号，并且图30A-30C示出在NanoLuc(图30A)、LgBiT-1672(图30B)和LgTrip 3546(图30C)的各种蛋白质缓冲液制剂中通过Bmax测量的生物发光信号。总之，这些数据表明BSA是所测试的蛋白质缓冲液制剂中的重要组分，其中NanoLuc和LgTrip3546表现出RLU的最大减少(缓冲液2和5)。
还进行了实验以评估上述各种蛋白质缓冲液组合物中的发光背景水平。图31A-31B示出LgBiT-1672(图31A)和LgTrip 3546(图31B)在各种蛋白质缓冲液组合物中的生物发光背景水平。这些数据表明，BSA或普鲁兰多糖是用于LgBiT-1672的蛋白质缓冲液配方的重要组分以最小化背景发光，但在这些条件下似乎对LgTrip 3546背景水平几乎没有影响。
在图32A-32F中，在PBS中添加二肽和底物之后评估上述条件的动力学。更具体地，图32A-32F示出在60℃下6天后，用于
Figure BDA0003382854880001121
(图32A和32D)、LgBiT-1672(图32B和32E)和LgTrip 3546(图32C和32F)的各种蛋白质缓冲制剂中的生物发光信号(图32A-32C中的RLU；图32D-32F中的Bmax)。这些数据表明，在这些条件下在60℃下6天后，蛋白质是稳定的并保持活性，并且表明BSA是所有蛋白质缓冲液配方的重要组分。此外，图33包括含有执行分析物检测测试的所有所需试剂、支持多种类型的测定形式(包括但不限于比色皿、试管、瓶中大容量、快速测试类型测定等)的一体化冻干饼状物(“lyocake”)或片的代表性实施方案。
实施例11
侧流测定
对于图34和35，使用在上述实验中获得的信息并根据以下示意图中所示的实验设计进行侧流测定。
Figure BDA0003382854880001131
用于这些实验的材料包括结合垫(Ahlstrom 8950级，具有粘合剂的短切玻璃，50g/m2)、样品垫(纤维素玻璃纤维CFSP203000(Millipore))、吸收垫(棉绒，238级(Ahlstrom))、膜(硝化纤维素Hi-Flow Plus HFC07502(Millipore)，来自条带测试2的#6)和运行缓冲液(5xLCS稀释缓冲液+5x LCS(在PBS中稀释至1X))。通过将30％蔗糖溶液施加至覆盖条带的底部约1.5cm的膜来制备膜。使所述膜在35℃下干燥1小时。条带最初被切割为4.5cmx1cm。
根据以下条件进行蛋白质制备：
条件1：在995μL蛋白质缓冲液中稀释的5μL小鼠抗NanoLuc抗体，用喷枪均匀施加在结合垫上，并在37℃下在烘箱中干燥。将2.5μL小鼠抗体稀释在0.5mL的蛋白质缓冲液中，并直接施加至膜。
条件2：将2.5μL的NanoLuc稀释在0.5mL的蛋白质缓冲液中，并直接施加至膜。使其在37℃下干燥1小时。
条件3：用5μL的在蛋白质缓冲液中稀释至1mL的NanoLuc直接处理整个膜。用喷枪均匀施加。使其在37℃下干燥1小时。
条件4：997μL蛋白质缓冲液中的2.5μL小鼠抗NanoLuc抗体。用喷枪均匀施加在结合垫上。使其在37℃下干燥1小时。
条件5：999μL蛋白质缓冲液中的1μL小鼠抗NanoLuc抗体。用喷枪均匀施加在结合垫上。使其在37℃下干燥1小时。
将条带组装在切割成1cmx1cm的具有结合垫、样品垫和芯吸垫的背卡上。一旦组装了条带，就将它们纵向切割成两半至4.5cmx0.5cm的最终尺寸。对于成像分析，将约250μl1X LCS缓冲液+LCS稀释在PBS中。图像以5秒曝光时间捕获，图像之间有5秒等待时间；代表性图像是来自在总曝光时间内拍摄的相应影片的编辑图像(影片可根据要求提供)。总读取时间是2:40分钟。
图34示出来自跨侧流条带的底物移动的生物发光信号，所述生物发光信号来自对应于在总曝光时间内拍摄的影片的编辑图像。将底物添加至侧流测定盒的样品窗口中，并且实时成像显示条带上的底物移动，并且可在整个测试窗口中观察到
Figure BDA0003382854880001141
活性(以上示意图中的条带#3)。到70秒时，底物流过整个样品窗口。
图35示出来自跨侧流条带的
Figure BDA0003382854880001151
移动的生物发光信号，所述生物发光信号来自对应于在总曝光时间内拍摄的影片的编辑图像(以上示意图中的条带#4和5)。在这些条件下，条带#5的性能似乎优于#4条带，正如
Figure BDA0003382854880001152
从结合垫流出并进入液体流跨过膜至含有小鼠抗NanoLuc抗体的条带所证明。
实施例12
伏马菌素检测
在本文实施方案的开发过程中进行了实验，以证明基于
Figure BDA0003382854880001153
的技术在竞争型免疫测定中用于检测伏马菌素B1(一种示例性小分子毒素)的用途。此类测定可在本文所述的装置和系统中进行，并与其他小分子目标和目标分析物一起进行。
在示例性测定中，将伏马菌素B1通过生物素/链霉亲和素键联、通过HaloTag键联或直接系栓至NL肽标签(例如，包含SEQ ID NO:10的肽标签)来产生示踪剂(图36)。在一些实施方案中，示踪剂可与连接至NL肽标签的多肽补体(例如，包含SEQ ID NO:9的补体)的抗伏马菌素B1抗体组合。在抗体与伏马菌素B1结合后，可在肽标签与多肽组分之间形成生物发光复合物。暴露于不同浓度的未标记的伏马菌素B1破坏生物发光复合物并导致减少的发光以及检测/定量样品中伏马菌素B1量的能力(图37)。
实施例13
含有LgBiT和底物的冻干饼状物
图38A-38B示出由用来自冻干饼状物的LgBiT和底物的二肽复原产生的生物发光信号(图38A)以及二肽的滴定(图38B)。为了制备具有LgBiT的冻干饼状物：制备可在含有5mM ATT和5mM抗坏血酸的水中的5％w/v普鲁兰多糖(溶液1)。然后将溶液1在弹扣盖小瓶中等分成45μL体积。然后将约5μL的20μM LgBiT蛋白添加至每个小瓶中并移液混合(溶液2)。制备furimazine于乙醇中的10mM储备溶液，并将5μL的此溶液添加至每个小瓶中并混合(溶液3)。将含有溶液3的小瓶置于干冰上冷冻1小时，然后冻干过夜。
对于发光测量，在测试时，将水中的1.2mM二肽储备液在PBS(pH 7.0)中连续稀释至1e-10M。将100μl的每种二肽储备液添加至含有LgBiT和底物的冻干小瓶中，短暂吸移混合，然后置于96孔板中，并且立即开始动力学测量。
这些数据证明在添加二肽的情况下观察到稳定的浓度依赖性生物发光响应。此实验突出显示，可制备含有LgBiT和底物的固体形式，然后在含有潜在目标分析物(例如二肽)的水性介质中复原。
实施例14
底物和LgTrip 3546或LgBiT冻干
图39示出由用来自直接制备到标准96孔组织培养处理板(Costar3917)中的冻干饼状物的LgBiT或LgTrip 3546的二肽和底物复原产生的生物发光信号。为了在板中制备冻干饼状物：制备了在含有5mM ATT和5mM抗坏血酸的水中的2.5％w/v普鲁兰多糖(溶液1，pH6.5)。然后将溶液1等分成45μl体积到板的每个孔中。然后将2.6μl的95μM LgTrip 3546蛋白添加至每个小瓶中并移液以混合，从而形成条件1(仅LgTrip 3546)。此外，将5μl的20μM LgBiT蛋白添加至每个小瓶中并移液混合，从而形成条件2(仅LgBiT)。然后将5μl乙醇添加至条件1和2的每个孔中作为媒介物对照。
如上所述制备条件3(LgTrip 3546/底物)和4(LgBiT/底物)：制备了在含有5mMATT和5mM抗坏血酸的水中的2.5％w/v普鲁兰多糖(溶液1，pH 6.5)。然后将溶液1等分成45μl体积到板的每个孔中。将约2.6μl的95μM LgTrip 3546蛋白或5μl的20μM LgBiT蛋白添加至每个小瓶中并移液混合。然后向每个孔添加大约5μl的10mM于乙醇中的furimazine，从而分别形成条件3和4。然后将板置于具有干冰的冷却器中冷冻1小时，然后冻干过夜。
对于发光测量，在测试时，将水中的1.2mM二肽储备液在PBS(pH 7.0)中连续稀释至1e-9M(图39)。然后将新鲜
Figure BDA0003382854880001171
底物添加至此储备液中以获得10μM底物的最终浓度。将100μl的此溶液添加至含有条件1(LgTrip 3546)和2(LgBiT)的孔中。条件3(LgTrip3546/底物)和4(LgBiT/底物)仅接受100μl的于PBS中的1e-9M二肽。测试后，将板包裹在锡箔中，并在环境温度下置于工作台上。
此数据表明，可在96孔板内直接制备含有LgBiT或LgTrip 3546和底物的冻干饼状物，并在目标分析物(二肽)存在下进行复原，从而产生稳定且稳健的信号。
实施例15
基于纸的一体化分析物检测系统
进行实验以测试含有NanoBiT(图40A-40B)和NanoTrip(图41A)互补系统的基于纸的检测平台的功效。纸斑点是通过从Whatman 903斑点纸中冲孔出1/8”直径的圆圈来创建的。将斑点用5μl的主混合物溶液处理，所述溶液含有：水中5％w/v BSA、5mM ATT、5mM抗坏血酸盐、40nM LgBiT-蛋白G融合物和20nM SmBiT-TNFα，pH6.5。使斑点在35C下干燥1小时。制备了furimazine于乙醇中的200μM溶液，并且将5μl的此溶液添加至每个斑点。使所述斑点在35℃下再干燥30-60分钟。在测试时，将斑点涂铺到96孔NBS板(Costar3917)的各个孔中，并用含有0nM(空白)、1nM或100nM类克的Opti-MEM测定缓冲液复原。
图40A-40B包括使用NanoBiT组分的测定结果。在斑点暴露于含有1nM类克的测定缓冲液的条件下，与不含类克的空白条件/对照相比，总体光输出增加。随着类克的浓度增加至100nM，观察到信号的增加。如图40B所示，在opti-MEM测定缓冲液中以100nM、10nM、1nM和0.1nM浓度制备类克。在测试时，将100μl的含有类克的每种溶液添加至含有斑点的96孔板的孔中，并测量RLU输出。
使用NanoTrip组分进行了类似的实验，如图41A所示。斑点是通过从Whatman 903斑点纸中冲孔出1/8”直径的圆圈来创建的。将每个斑点用5μl的主混合物溶液处理，所述溶液含有：水中的5％w/vBSA、5mM ATT、5mM抗坏血酸盐、20μM LgTrip 3546、100nM TNFα-15gs-VSHiBiT、SmTrip9 Pep521-15gs-蛋白G，pH 6.5。使所述斑点在35℃下干燥1小时。制备了furimazine于乙醇中的200μM溶液，并且将5μl的此溶液添加至每个斑点。使所述斑点在35℃下再干燥30分钟。在测试时，将斑点涂铺到96孔NBS板(Costar 3917)的各个孔中，并用含有0nM(空白)、1nM或100nM类克的opti-MEM测定缓冲液复原。结果在图41A中示出。
这些实验表明，有可能使用NanoBiT和NanoTrip互补系统构建用于检测目标分析物的一体化的基于纸的生物发光测定平台。此外，这些实验证明，有可能基于总体光输出的变化来定量样品基质中存在的分析物的量。增加目标分析物(即类克)的浓度导致生物发光信号的成比例增加(从分析物检测复合物产生的生物发光信号与分析物的浓度成比例)。
实施例16
基于冻干饼状物的一体化分析物检测系统
还进行了实验以测试含有NanoBiT(图40C)和NanoTrip(图41B-41C)互补系统的基于冻干饼状物的检测平台的功效。
如图40C所示，在干燥生物发光复合物的组分时测试稳定性条件。将约45μl的主混合物溶液添加至1.5mL的塑料弹扣盖小瓶中。所述主混合物包含：5％w/v普鲁兰多糖、5mMATT、5mM抗坏血酸盐、40nM LgBiT-蛋白G融合物和20nM SmBiT-TNFα，pH 6.5。将约5-10μl的于乙醇中的底物furimazine添加至每个小瓶，混合并置于干冰中约1小时。然后将冷冻样品冻干过夜以形成冻干饼状物。在测试时，在Opti-MEM测定缓冲液中制备100nM和10nM类克的溶液。将约100μl的这些溶液添加至含有NanoBiT饼的小瓶中，移液混合，然后转移至Costar3600 96孔板。制备了不含分析物类克的空白对照。图40C中的结果证明随着分析物浓度增加，信号的成比例增加，即使当生物发光复合物的所有组分(包括底物)都被冷冻并以冻干饼状物形式储存且随后暴露于目标分析物时也如此。
在图41B-41C中，在干燥生物发光复合物的组分时测试稳定性条件。将约45μl的主混合物溶液添加至1.5mL的塑料弹扣盖小瓶中。所述主混合物包含：5％w/v普鲁兰多糖、5mMATT、5mM抗坏血酸盐、9μM LgTrip 3546、225nM SmTrip9-蛋白G和45nM SmBiT-TNFα，pH6.5。将约5-10μl的于乙醇中的底物furimazine添加至每个小瓶，混合并置于干冰中约1小时。然后将冷冻样品冻干过夜以形成冻干饼状物。在测试时，在Opti-MEM测定缓冲液中制备100nM、10nM和1nM类克的溶液。将约100μl的这些溶液添加至含有NanoTrip饼的小瓶中，移液混合，然后转移至Costar 3600 96孔板。制备了不含分析物类克的空白对照。图41B-41C中的结果证明随着分析物浓度增加，信号的成比例增加，即使当生物发光复合物的所有组分(包括底物)都被冷冻并以冻干饼状物形式储存且随后暴露于目标分析物时也如此。
在斑点暴露于含有1nM类克的测定缓冲液的条件下，与不含类克的空白条件相比，总体光输出增加。随着类克的浓度增加至100nM，观察到信号的增加。这些实验表明，有可能使用NanoBiT和NanoTrip互补系统构建用于检测目标分析物的一体化的基于冻干饼状物的基于生物发光的测定平台。此外，这些实验证明，有可能基于总体光输出的变化来定量样品基质中存在的分析物的量。增加目标分析物(即类克)的浓度导致生物发光信号的成比例增加(从分析物检测复合物产生的生物发光信号与分析物的浓度成比例)。
实施例17
用于使底物与生物发光复合物分离以进行分析物检测的基于网的系统
进行实验以研究当本文提供的生物发光复合物的肽和多肽组分以不包含底物的形式产生时产生生物发光信号所需的条件。例如，在一个实施方案中，将一定量的溶液(例如，含有目标分析物)添加至具有粘附(“结块”)至其上的发光底物的网或基质。溶液的添加起到在网上复原底物的作用，并且此溶液随后与含有本公开的生物发光复合物的干燥肽和多肽的纸的表面相互作用，从而产生生物发光信号(图42A)。网形式不妨碍检测生物发光信号的能力；检测到的任何生物发光都来自纸的表面，而不是来自实验过程中形成的任何溶液相。
如图42A所示，使用这种形式可检测到生物发光。Whatman 903纸斑点被制备为具有约0.25英寸直径，类似于尼龙网。用于产生含有生物发光肽/多肽组分的纸斑点的主混合物包含：5％w/v BSA、5mM ATT、5mM抗坏血酸盐、10μM NanoLuc，pH 6.5。将约10-20μl的主混合物添加至斑点，然后在约35℃下干燥约1小时。为了产生含有底物的网，制备了约0.75％普鲁兰多糖于水中的溶液。将约450μl的此溶液添加至塑料弹扣盖小瓶中。将约50μl的10mM于EtOH中的furimazine添加至小瓶中并移液混合。将约25μl的此溶液添加至网斑点的顶部。然后将网斑点在干冰上冷冻，并冻干过夜。在测试时，将含有冻干饼状物底物的网放置在含有
Figure BDA0003382854880001201
蛋白质的斑点的顶部上。然后将完整系统添加至96孔costar 3600板的孔中。然后将约10μl的PBS添加至网的顶部以复原材料，并读取板的RLU光输出。
还以基于网的形式使用LgTrip 3546生物发光组分进行了实验。用于产生含有生物发光肽/多肽组分的纸斑点的主混合物包含：5％w/v BSA、5mM ATT、5mM抗坏血酸盐、100nM LgTrip 3546，pH 6.5。将约10-20μl的主混合物添加至斑点，然后在约35℃下干燥约1小时。为了产生含有底物的网，制备了约0.75％普鲁兰多糖于水中的溶液。将约450μl的此溶液添加至塑料弹扣盖小瓶中。将约50μl的10mM于EtOH中的furimazine添加至小瓶中并移液混合。将约25μl的此溶液添加至网斑点的顶部。然后将网斑点在干冰上冷冻，并冻干过夜。在测试时，在PBS中制备了100nM至0.1nM范围的二肽。将斑点置于孔中，并将含有底物的筛网置于斑点的表面上。将约10μl的含有每种浓度肽的溶液添加至筛网的表面并记录RLU(图42B-42C)。空白对照不含任何二肽。
还以基于网的形式使用LgTrip 3546生物发光组分并通过形成普鲁兰多糖薄膜进行了实验。用于产生含有生物发光肽/多肽组分的纸斑点的主混合物包含：5％w/v BSA、5mMATT、5mM抗坏血酸盐、100nM LgTrip 3546，pH 6.5。将约10-20μl的主混合物添加至斑点，然后在约35℃下干燥约1小时。为了产生含有底物的网，制备了约2.0％普鲁兰多糖于水中的溶液。将约450μl的此溶液添加至塑料弹扣盖小瓶中。将约50μl的10mM于EtOH中的furimazine添加至小瓶中并移液混合。将约25μl的此溶液添加至网斑点的顶部。然后使斑点在环境条件下在黑暗中干燥过夜。这种方法导致形成填充网的孔的普鲁兰多糖薄膜。在测试时，在PBS中制备了100nM至0.1nM范围的二肽。将斑点置于孔中，并将含有底物的筛网置于斑点的表面上。将约10μl的含有每种浓度肽的溶液添加至筛网的表面并记录RLU(图42D-42E)。空白对照不含任何二肽。
这些实验表明，以基于网的形式检测生物发光信号是可行的，其中肽/多肽组分与底物分离。此外，在这种形式的背景下，这些实验证明，增加目标分析物(即二肽)的浓度导致生物发光信号的成比例增加(从分析物检测复合物产生的生物发光信号与分析物的浓度成比例)。
实施例18
测试不同配制的冻干底物的饼状物外观、复原动力学活性性能和加速热稳定性
为了评估冻干以用于保存furimazine底物的潜在应用，制备了含有furimazine的制剂。20X储备液配方如下：
条件1：乙醇中的100μM furimazine、5mM偶氮硫代胸腺嘧啶、5mM抗坏血酸、2.5％普鲁兰多糖w/v、ddH20(Millipore)；
条件3：乙醇中的100μM furimazine、5mM偶氮硫代胸腺嘧啶、5mM抗坏血酸、2.5％普鲁兰多糖w/v、20mM HEPES缓冲液(pH 8.0)、90mM甘氨酸、20mM组氨酸、25mg/ml蔗糖、0.01％聚山梨醇酯80；
条件5：85％乙醇+15％乙二醇中的40μM furimazine、200mM MES缓冲液(pH 6.0)、200mM羟丙基β环糊精(分子量1396Da)、600mM抗坏血酸钠、2.5％普鲁兰多糖w/v；以及
条件7：乙醇中的20μM furimazine、200mM MES缓冲液(pH6.0)、200mM羟丙基β环糊精(分子量1396Da)、600mM抗坏血酸钠、2.5％普鲁兰多糖w/v。
将20X储备溶液的1mL等分试样分配到10mL琥珀色玻璃小瓶中，并将流道塞部分插入所述小瓶中。将小瓶负载到搁板预冷至4.7℃的冻干机(Virtis Genesis 12EL冻干机)上。然后将产品在-50℃的搁板温度下经历冷冻步骤持续2小时，此后开始冷凝器步骤。在运行期间，冷凝器温度在-5℃与-87℃之间运行。接下来在75和200毫托的压力设定点下运行真空下拉。升华持续约7.5小时，并且解吸持续约16.1小时。在冻干过程结束时，将小瓶用氮气回填并用完全插入的塞子在约600托的压力下密封。
将小瓶储存在25℃或60℃，并在冻干后的不同时间点进行测试。对于基于活性的测定，用10mL的含0.01％BSA的PBS复原furimazine饼。手动振荡小瓶并使其在室温下平衡5分钟。将50μl的复原底物添加至50μl的1ng/mL纯化的NANOLUC酶(Promega)，所述酶在相同BSA缓冲液中复原(最终[NanoLuc]＝0.5ng/ml)。根据制造商的方案，所使用的对照是NANOGLO活细胞底物(Promega目录N205)或NANOGLO底物(Promega目录N113)，但稀释到含0.01％BSA的PBS中，而不是试剂盒(Promega)中提供的稀释缓冲液。测定在固体、白色、非结合表面(NBS)板(Costar)中进行，并取决于实验使用动力学或终点读数在收集总发光的GLOMAX Discover多模式酶标仪(Promega)上进行分析。为了分析绝对[furimazine]，在HPLC上分析复原样品在波长245nm处的吸收光谱，并绘制从第0天剩余的绝对量。
由这些制剂产生的冻干饼状物的外观展示在图43中，其表明所有4个测试条件都产生了完整饼状物，尽管条件5和7确实展示一些裂纹。为这些小瓶提供的pH指示剂表明，所得饼状物对于条件1pH值为约2-3，对于条件3pH值为约7.5，并且对于条件6和7pH值为约6。当用纯化的NanoLuc测试时，将复原的furimazine的信号动力学与标准有机储存缓冲液(N113和N205)中且保持在-20℃下的furimazine的信号动力学进行比较，表明没有由于配制的缓冲液和冻干过程本身所致的明显性能损失，条件5和7的半衰期有所改善(图44)。
加速热稳定性研究表明，对于条件1，配制且冻干的furimazine在3个月内没有活性损失，这与储存在有机溶剂中的furimazine形成鲜明对比，后者在这种高温下储存约10天后失去所有活性(图45)。对在25℃和60℃下储存后剩余的绝对[furimazine]的HPLC分析支持了活性发现，其中配制且冻干的底物相对于标准有机储存缓冲液中的furimazine含有显著更高纯度的furimazine(图46A和46B)。为了确定配制的冻干furimazine的液体稳定性，将小瓶用水复原并在通过HPLC分析与第0天相比的总剩余furimazine之前在溶液中保持12天。发现条件5和7的液体稳定性更好(图47)。
实施例19
使用HaloTag-肽融合物以化学缀合单克隆抗体对，开发基于溶液的均质人白细胞介素-6三联免疫测定
均质NanoLuc三联(NanoTrip)免疫测定的基本原理描绘在图48中。首先，使用
Figure BDA0003382854880001241
技术将靶向IL-6上的非重叠表位的一对抗体化学缀合至SmTrip9(SEQ ID NO:13)或HiBiT(SEQ ID NO:11)。当标记的抗体结合IL-6分析物时，使互补亚基靠近，从而在LgTrip3546蛋白(SEQ ID NO:12)和furimazine底物存在下复原亮荧光素酶。此测定是定量的，因为由标准读板光度计产生的发光的量与存在的目标分析物的量成正比。
含有通过与HaloTag的氨基末端的2X或3X Gly-Ser-Ser-Gly接头隔开的SmTrip9变体(SmTrip9 Pep521；SEQ ID NO:16)或SmTrip10变体(SmTrip10 Pep289或VSHiBiT；SEQID NO:17)的遗传融合物是使用pFN29A HIS6HaloTag T7 Flexi载体(Promega)实现的。使用表达HisTag-HaloTag融合蛋白的大肠杆菌的甘油储备液接种50mL起子培养物，所述培养物在37℃下在含有25ug/ml卡那霉素的LB培养基中生长过夜。将起子培养物1:100稀释到500mL新鲜LB培养基中，所述起子培养基含有25ug/mL卡那霉素、0.12％葡萄糖和0.2％鼠李糖。使培养物在25℃下生长22-24小时。通过在4℃下离心(10,000rpm)30分钟使细胞沉淀，并重新悬浮在50mL PBS中。添加1mL蛋白酶抑制剂混合物(Promega)、0.5mL RQ1 DNA酶(Promega)和0.5mL的10mg/mL溶菌酶(Sigma)，并将细胞悬液在冰上在温和搅拌下孵育1小时。通过以15％功率以5秒的间隔超声处理使细胞裂解1.5分钟(总计3分钟)，然后在4℃下以10,000rpm离心30分钟。收集上清液，并按照制造商推荐的方案使用HisTag柱(GE)纯化蛋白质。将蛋白质使用500mM咪唑洗脱，在PBS中透析，使用SDS-PAGE凝胶表征，并且>95％纯。将蛋白质在-20℃下储存在50％甘油中。
为了使抗体化学缀合至HaloTag-肽融合蛋白，使用Zeba旋转脱盐柱(ThermoFisher)将抗体缓冲交换2x为10mM碳酸氢钠缓冲液(pH8.5)。然后在22℃下以1000rpm振荡将抗体用200μM胺反应性HaloTag琥珀酰亚胺酯(04)配体(Promega)引发2小时。在两次通过PBS缓冲液中的Zeba旋转柱情况下除去未反应的配体。然后，在振荡同时在4℃下将抗体用30μM的HaloTag融合蛋白共价标记过夜。使用HaloLink树脂(Promega)除去过量的未反应的HaloTag融合蛋白。非变性SDS-PAGE凝胶用于表征缀合的抗体。用于人IL-6免疫测定中的小鼠抗人IL-6单克隆抗体是克隆5IL6(Thermo目录号M620)和克隆505E 9A12A3(Thermo目录号AHC0662)。对标记的抗体进行SDS-PAGE凝胶，并确定每种抗体都用不同数量的肽-HaloTag融合蛋白标记，主要种类含有3-5个肽标记(图49)。
进行结合动力学研究以建立完全互补系统的最大光输出和信号持续时间，如图50所示。比较以下条件之间的信号动力学：(1)将肽标记的抗体和LgTrip 3546(SEQ ID NO:12)用rhIL-6预平衡90分钟，在时间0添加furimazine；(2)将肽标记的抗体用rhIL-6预平衡90分钟，在时间0添加LgTrip 3546和furimazine；以及(3)在时间0将所有测定试剂添加至rhIL-6。条件2追踪LgTrip 3546(SEQ ID NO:12)与肽标记的抗体:rhIL-6复合物的结合动力学。条件3追踪抗体与分析物以及LgTrip 3546与肽的结合动力学。图50A展示原始RLU，并且图50B展示如通过将在5ng/ml rhIL-6存在下产生的RLU值除以在rhIL-6不存在下产生的背景信号而计算的倍数响应。所用的测定缓冲液是PBS(pH 7.0)中的0.01％BSA，并且对于每种肽标记的抗体、1μMLgTrip 3546(SEQ ID NO:12)蛋白和furimazine，测定试剂浓度是7ng/ml。
图51展示在由PBS(pH 7.0)中的0.01％BSA组成的标准测定缓冲液中进行的基于溶液的均质IL-6免疫测定的剂量反应曲线。此测定显示为极其灵敏的，检测限(LOD)为2.1pg/ml，其导致超过3-4个数量级的宽动态范围，并在整个线性范围中保持低变异性(CV<10％)。对于这些实验，将7ng/ml的每种肽标记的抗体和1μM LgTrip3546(SEQ ID NO:12)蛋白在rhIL-6存在下孵育90分钟。添加furimazine，并分析发光信号。
实施例20
小瓶中的冻干单一试剂三联免疫测定
为了评价冻干在单个小瓶中保存整个IL-6三联免疫测定的潜在应用，制备了含有肽标记的抗体(SmTrip9 Pep521(SEQ ID NO:16)和SmTrip10 Pep289(SEQ ID NO:17))、LgTrip 3546(SEQ ID NO:12)和furimazine的制剂。20X储备液制剂如下：
制剂A：20mM HEPES缓冲液(pH 8.0)、90mM甘氨酸、20mM组氨酸、25mg/ml蔗糖、0.01％聚山梨醇酯80、0.6ug/ml用HaloTag-SmTrip9 Pep521(SEQ ID NO:16)标记的克隆5IL6抗体、1.2ug/ml用HaloTag-SmTrip10 Pep289(SEQ ID NO:17)标记的505E A12A3抗体和20μM LgTrip 3546(SEQ ID NO:17)。
制剂B：20mM HEPES缓冲液(pH 8.0)、90mM甘氨酸、20mM组氨酸、25mg/ml蔗糖、0.01％聚山梨醇酯80、0.6ug/ml用HaloTag-SmTrip9 Pep521(SEQ ID NO:16)标记的克隆5IL6抗体、1.2ug/ml用HaloTag-SmTrip10 Pep289(SEQ ID NO:17)标记的505E A12A3抗体、20μM LgTrip 3546(SEQ ID NO:12)和100μM于乙醇中的furimazine。
制剂C：5mM偶氮硫代胸腺嘧啶、5mM抗坏血酸、2.5％普鲁兰多糖w/v、20mM HEPES缓冲液(pH 8.0)、90mM甘氨酸、20mM组氨酸、25mg/ml蔗糖、0.01％聚山梨醇酯80、0.6ug/ml用HaloTag-SmTrip9 Pep521(SEQ ID NO:16)标记的克隆5IL6抗体、1.2ug/ml用HaloTag-SmTrip10 Pep289(SEQ ID NO:17)标记的505E A12A3抗体、20μM LgTrip 3546(SEQ ID NO:12)和100μM于乙醇中的furimazine。
将20X储备溶液的1mL等分试样分配到10mL琥珀色玻璃小瓶中，并将流道塞部分插入所述小瓶中。将小瓶负载到搁板预冷至4.7℃的冻干机(Virtis Genesis 12EL冻干机)上。然后将产品在-50℃的搁板温度下经历冷冻步骤持续2小时，此后开始冷凝器步骤。在运行期间，冷凝器温度在-5℃与-87℃之间运行。接下来在75和200毫托的压力设定点下运行真空下拉。升华持续约7.5小时，并且解吸持续约16.1小时。在冻干过程结束时，将小瓶用氮气回填并用完全插入的塞子在约600托的压力下密封。
图52A展示使用制剂A和B的单一试剂IL-6NanoTrip(三联NanoLuc)免疫测定的所得冻干产物。
将小瓶储存在25℃，并在冻干后的不同时间点进行测试。对于基于活性的测定，用10mL的含0.01％BSA的PBS复原单一试剂饼状物。将小瓶手动振荡并使其在室温下平衡5分钟。将50μl的复原底物添加至在相同BSA缓冲液中复原的50μl重组人IL-6(来源)中。制剂A需要添加furimazine，其中使用了NANOGLO活细胞底物(Promega N205)。测定在固体、白色、非结合表面(NBS)板(Costar)中进行，并取决于实验使用动力学或终点读数在收集总发光的GLOMAX Discover多模式酶标仪(Promega)上进行分析。图52B展示制剂A在环境温度下在两周时间过程中的信号/背景测定性能，表明这种制剂是贮存稳定的并且展示在所测试的时间内优异的剂量反应曲线。然而，当添加furimazine(即制剂B)时，观察到贮存稳定性降低(图52C)。
图53A展示使用制剂C的单一试剂IL-6NanoTrip(三联NanoLuc)免疫测定的所得冻干产物。此配方产生非常理想的饼状物，所述饼状物是完整的并且可从玻璃侧移动而没有任何碎裂。图53B展示制剂C在环境温度下在3个月储存时间过程中的信号/背景测定性能，表明这种制剂是贮存稳定的并且展示在所测试的时间内没有变化的优异剂量反应曲线。图54示出在含0.01％BSA的PBS中复原后冻干制剂C的IL-6剂量反应的动力学曲线。
为了确定冻干测定与复杂人基质的相容性，将用制剂C产生的冻干饼状物在含有0.01％BSA的PBS(pH 7.0)中复原。将50μl添加至96孔微量滴定板的孔中，所述孔含有50ul的于20％正常混合人血清、柠檬酸盐收集的血浆或尿液中的rhIL-6。在所有实验中，将板在室温下孵育90分钟。在所有实验中，测定试剂的最终浓度是60ng/ml SmTrip10标记的抗体、30ng/ml SmTrip9标记的抗体、1μM LgTrip3546和5μM furimazine。对发光进行分析。图55展示来自这些实验的信号/背景结果，表明复杂样品基质与用制剂C产生的单一试剂IL-6NanoTrip免疫测定的相容性。
实施例21
预填充的96孔微量滴定板中的冻干单一试剂三联免疫测定
为了评价冻干在将整个IL-6NanoTrip(三联NanoLuc)免疫测定直接保存到96孔微量滴定板中的潜在应用，使用了含有5mM偶氮硫代胸腺嘧啶、5mM抗坏血酸、2.5％普鲁兰多糖w/v、20mM HEPES缓冲液(pH 8.0)、90mM甘氨酸、20mM组氨酸、25mg/ml蔗糖、0.01％聚山梨醇酯80、0.12ug/ml用HaloTag-SmTrip9 Pep521(SEQ ID NO:16)标记的克隆5IL6抗体、0.24ug/ml用HaloTag-SmTrip10 Pep289(SEQ ID NO:17)标记的505E A12 A3抗体、4μMLgTrip 3546(SEQ ID NO:12)和100μM于乙醇中的furimazine的制剂(与前一实施例中的制剂C相同，但用4x试剂添加代替如在小瓶中使用的20x储备液试剂)。
将4X储备溶液的大约25μl等分试样分配到96孔微量滴定板中。使用两种类型的板：非结合表面(Costar 3600)和未处理的表面(Costar3912)。将板负载到搁板预冷至4.7℃的冻干机(Virtis Genesis 12EL冻干机)中。然后将产品在-50℃的搁板温度下经历冷冻步骤持续2小时，此后开始冷凝器步骤。在运行期间，冷凝器温度在-5℃与-87℃之间运行。接下来在75和200毫托的压力设定点下运行真空下拉。升华持续约7.5小时，并且解吸持续约16.1小时。在冻干过程结束时，将板用氮气回填并用粘性板盖密封。
图56A描绘在孔的底部中具有冻干材料的板之一。冻干饼状物保持在完整饼状物中，但在使用非结合表面板时是可移动的。冻干材料保持“粘”在未处理板中的孔的底部上。图56B示出当将1X rhIL-6直接添加至孔中并使用GLOMAX光度计分析发光时的所得生物发光。所得的剂量反应曲线在两个板中均显示出优异的复原和性能。
实施例22
使用基于溶液的均质IL-6三联免疫测定测试制剂中单独赋形剂的影响
为了确定用于单一试剂NanoTrip(三联NanoLuc)免疫测定的冻干制剂中的单独赋形剂的测定性能的影响，使用了基于溶液的测定中的IL-6模型系统，分析了各种赋形剂的影响。图57A展示在由PBS(pH 7.0)中的0.01％BSA组成的标准测定缓冲液中进行的基于溶液的均质IL-6免疫测定的测定背景信号，该标准分析缓冲液，并添加如X轴上所指示的各种单独赋形剂。图57B展示在由来自实施方案20的制剂C和制剂C的修改型式组成的不同缓冲液中进行测定时的IL-6剂量反应曲线。对于这些实验，将30ng/ml用HaloTag-SmTrip9Pep521(SEQ ID NO:16)标记的5IL6抗体、60ng/ml用HaloTag-SmTrip10Pep289(SEQ ID NO:17)标记的505E A12 A3抗体和1μM LgTrip3546(SEQ ID NO:12)在rhIL-6存在下孵育90分钟。根据制造商的说明书添加furimazine(Promega活细胞底物N205)，但使用所指示的制剂作为缓冲液。使用GLOMAX光度计分析发光信号。这些实验证明，需要反复实验来确定用于NanoTrip免疫测定的适当缓冲液组分。
实施例23
在小瓶中创建用于目标分析物人心肌肌钙蛋白I的基于溶液的和冻干的单一试剂三联免疫测定
均质NanoTrip(NanoLuc三联)心肌肌钙蛋白I免疫测定的基本原理如图58所示。首先，使用
Figure BDA0003382854880001301
技术将一对靶向人心肌肌钙蛋白I上的非重叠表位的抗体化学缀合至SmTrip9(或其变体)或HiBiT(或其变体)。当标记的抗体结合心肌肌钙蛋白I分析物时，使互补亚基相互靠近，从而在LgTrip 3546蛋白和furimazine底物存在下复原亮荧光素酶。此测定是定量的，因为由标准读板光度计产生的发光的量与存在的目标分析物的量成正比。
含有通过与HaloTag的氨基末端的2X或3X Gly-Ser-Ser-Gly接头隔开的SmTrip9Pep521(SEQ ID NO:16)或SmTrip10 Pep289(SEQ ID NO:17)的遗传融合物是使用pFN29AHIS6HaloTag T7 Flexi载体(Promega)实现的。使用表达HisTag-HaloTag融合蛋白的大肠杆菌的甘油储备液接种50mL起子培养物，所述起子培养物在37℃下在含有25ug/ml卡那霉素的LB培养基中生长过夜。将起子培养物1:100稀释到500mL新鲜LB培养基中，所述培养基含有25ug/mL卡那霉素、0.12％葡萄糖和0.2％鼠李糖。使培养物在25℃下生长22-24小时。通过在4℃下离心(10,000rpm)30分钟使细胞沉淀，并重新悬浮在50mL PBS中。添加1mL蛋白酶抑制剂混合物(Promega)、0.5mL RQ1DNA酶(Promega)和0.5mL的10mg/mL溶菌酶(Sigma)，并将细胞悬液在冰上在温和搅拌下孵育1小时。通过以15％功率以5秒的间隔超声处理使细胞裂解1.5分钟(总计3分钟)，然后在4℃下以10,000rpm离心30分钟。收集上清液，并按照制造商推荐的方案使用HisTag柱(GE)纯化蛋白质。将蛋白质使用500mM咪唑洗脱，在PBS中透析，使用SDS-PAGE凝胶表征，并且>95％纯。将蛋白质在-20℃下储存在50％甘油中。
为了使抗体化学缀合至HaloTag-肽融合蛋白，使用Zeba旋转脱盐柱(ThermoFisher)将抗体缓冲交换2x为10mM碳酸氢钠缓冲液(pH8.5)。然后在22℃下以1000rpm振荡将抗体用200μM胺反应性HaloTag琥珀酰亚胺酯(04)配体(Promega)引发2小时。在两次通过PBS缓冲液中的Zeba旋转柱情况下除去未反应的配体。然后，在振荡同时在4℃下将抗体用30μM的HaloTag融合蛋白共价标记过夜。使用HaloLink树脂(Promega)除去过量的未反应的HaloTag融合蛋白。非变性SDS-PAGE凝胶用于表征缀合的抗体。用于人心肌肌钙蛋白I免疫测定中的抗人心肌肌钙蛋白I单克隆抗体是重组兔克隆1H11L19(Invitrogen)和单克隆小鼠抗体克隆16A11(Invitrogen)。
图59A(原始RLU)和59B(信号/背景)展示在由PBS(pH 7.0)中的0.01％BSA组成的标准测定缓冲液中进行的基于溶液的均质心肌肌钙蛋白I免疫测定的剂量反应曲线。纯化的重组人心肌肌钙蛋白I(Fitzgerald)用于生成剂量反应曲线。对于这些实验，将2ng/ml的用HaloTag-24gly/ser-SmTrip9 Pep521(SEQ ID NO:16)标记的克隆1H11L19、40ng/ml的用HaloTag-8gly/ser-SmallTrip10 Pep289(SEQ ID NO:17)标记的克隆16A11和1μM LgTrip3546(SEQ ID NO:12)蛋白在重组人心肌肌钙蛋白I存在下孵育90分钟。根据制造商的说明书添加furimazine(Promega活细胞底物N205)，但使用PBS中的0.01％BSA作为缓冲液。在GLOMAX光度计上分析发光信号。
为了评价冻干在单个小瓶中保存整个心肌肌钙蛋白I三联免疫测定的潜在应用，制备了含有肽标记的抗体(SmTrip9 Pep521(SEQ ID NO:16)和SmTrip10 Pep289(SEQ IDNO:17))、LgTrip 3546(SEQ ID NO:12)和furimazine的制剂。20X储备液制剂如下：
大约5mM偶氮硫代胸腺嘧啶、5mM抗坏血酸、2.5％普鲁兰多糖w/v、20mM HEPES缓冲液(pH 8.0)、90mM甘氨酸、20mM组氨酸、25mg/ml蔗糖、0.01％聚山梨醇酯80、0.08ug/ml用HaloTag-SmTrip9 Pep521(SEQ ID NO:16)标记的克隆1H11L19抗体、1.6ug/ml的用HaloTag-SmTrip10 Pep289(SEQ ID NO:17)标记的克隆16A11抗体、20μM LgTrip 3546(SEQID NO:12)和200μMfurimazine(Promega NANOGLO底物N113)。
将20X储备溶液的1mL等分试样分配到10mL琥珀色玻璃小瓶中，并将流道塞部分插入所述小瓶中。将小瓶负载到搁板预冷至4.7℃的冻干机(Virtis Genesis 12EL冻干机)上。然后将产品在-50℃的搁板温度下经历冷冻步骤持续2小时，此后开始冷凝器步骤。在运行期间，冷凝器温度在-5℃与-87℃之间运行。接下来在75和200毫托的压力设定点下运行真空下拉。升华持续约7.5小时，并且解吸持续约16.1小时。在冻干过程结束时，将小瓶用氮气回填并用完全插入的塞子在约600托的压力下密封。
对于基于活性的测定，用10mL的含0.01％BSA的PBS复原单一试剂饼状物。将小瓶手动振荡并使其在室温下平衡5分钟。将50μl复原的单一试剂心肌肌钙蛋白I NanoTrip(三联NanoLuc)免疫测定添加至50μl的重组人心肌肌钙蛋白I(Fitzgerald)中，所述重组人心肌肌钙蛋白I在相同的BSA缓冲液中或用稀释在通用血清稀释剂(ImmunochemistryTechnologies)中的20％人血清复原。测定在固体、白色、非结合表面(NBS)板(Costar)中进行，并使用终点读数在收集总发光的GLOMAX Discover多模式酶标仪(Promega)上进行分析。图60示出在用PBS缓冲液中的0.01％BSA中的样品或在通用血清稀释剂中稀释的人血清的复杂基质样品存在下复原单一试剂肌钙蛋白NanoTrip免疫测定后所得生物发光的心肌肌钙蛋白I剂量反应曲线。即使在血清存在下，使用这种免疫测定也有效地检测到肌钙蛋白。
实施例24
调查和减轻复杂样品基质对三联免疫测定性能的影响
测试了基于溶液的均质IL-6NanoTrip(三联NanoLuc)免疫测定，以确定所述测定是否与通常针对临床生物标志物分析的人样品类型相容，以及样品中可能影响所述测定的性能的因素和用于减轻这些影响的可能溶液。这是至关重要的，因为免疫测定中的样品基质干扰效应(定义为样品中存在的改变结果的正确值的物质的影响)是常见现象，尤其是在均质形式中，这是由于除去洗涤步骤所致。
用于以下实验的试剂是实施例19中描述的HaloTag-肽标记的抗体。30ng/ml用HaloTag-SmTrip9 Pep521(SEQ ID NO:16)标记的克隆5IL6抗体、60ng/ml用HaloTag-SmTrip10 Pep289(SEQ ID NO:17)标记的505E A12 A3抗体、1μM LgTrip 3546(SEQ ID NO:12)和NANOGLO活细胞底物(Promega N205)或NANOGLO底物(Promega N113)，根据制造商的说明书使用，但在用于所述实验的给定缓冲液中稀释。使用具有测定背景的+/-50ng/ml重组人IL-6(R&D Systems)进行测定，并分析Bmax。在添加底物之前，允许测定在工作台上孵育90分钟。测定在固体、白色、非结合表面(NBS)板(Costar)中进行，并使用终点读数在收集总发光的GLOMAX Discover多模式酶标仪(Promega)上进行分析。
图61示出当在(A)PBS(pH 7.0)测定缓冲液中的0.01％BSA中或(B)通用血清稀释剂(Immunochemistry Technologies)中并使用NANOGLO活细胞底物(Promega N205)进行测定时，在增加的正常混合人血清存在下基于溶液的均质IL-6NanoTrip(三联NanoLuc)测定背景。通用血清稀释剂减轻了非特异性IgG效应，并通过降低测定背景而具有积极影响。图62示出当在(A)PBS(pH 7.0)测定缓冲液中的0.01％BSA或(B)通用血清稀释剂中并使用NANOGLO活细胞底物(Promega N205)进行测定时，在50ng/ml rhIL-6和增加的人血清存在下时的生物发光响应。通用血清稀释剂总体上展示略低的Bmax，但随着人血清增加，信号的损失较少。图63A-D示出当用PBS(pH 7.0)中的0.01％BSA或通用血清稀释剂并使用NANOGLO活细胞底物(Promega N205)或NANOGLO底物(Promega N113)和在增加量的正常混合人血清或血浆中测试进行rhIL-6筛选测定时结果的倍数响应。总体而言，使用与NANOGLO活细胞底物(Promega N205)配对的通用血清稀释剂在这些复杂的样品基质中提供最佳测定结果。
接下来，确定了人血清样品中的内源性IgG对测定性能的影响。使用通用血清稀释剂中基于溶液的均质IL-6NanoTrip测定+/-50ng/ml rhIL-6，对在正常混合人血清或已耗尽内源性IgG的血清中运行测定时的生物发光反应进行了分析。图64示出这一实验的倍数响应，这表明内源性IgG是血清中对不利地影响免疫测定的性能的组分之一。
接下来，使用VeriChem参考加化学试剂盒研究了血液生化对基于溶液的均质IL-6三联免疫测定的影响，所述试剂盒含有以下：
分析物 单位 水平A 水平B 水平C 水平D 水平E
葡萄糖 mg/dL 5 40 75 110 145
尿素氮 mg/dL 1.0 7.5 14.0 20.5 27.0
肌酸酐 mg/dL 0.04 1.24 2.44 3.64 4.84
钙 mg/dL 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0
磷 mg/dL 0.2 0.7 1.2 1.7 2.2
镁 mg/dL 0.16 0.46 0.76 1.06 1.36
镁 mEq/L 0.132 0.38 0.63 0.87 1.12
甘油三酯 mg/dL 2 49 240 143 190
IL-6NanoTrip测定在稀释于通用血清稀释剂中的水平A-E存在下并使用NANOGLO活细胞底物(Promega N205)运行的以确定增加这些血液化学组分对测定性能的影响。图65A示出原始RLU中的测定背景，图65B示出当在50ng/ml rhIL-6存在时的Bmax信号，并且图65C示出相对于背景的信号结果。结果表明，增加这些化学组分对增加测定背景以及减少Bmax具有影响，从而影响测定性能的总体信号与背景比。
为了确定尿液对基于溶液的均质IL-6NanoTrip免疫测定性能的影响，进行了在稀释于通用血清稀释剂和NANOGLO底物(Promega N113)或NANOGLO活细胞底物(PromegaN205)中的递增正常混合人尿液增存在下的IL-6筛选测定。图66A示出原始RLU中的测定背景，图66B示出当在50ng/ml rhIL-6存在时的Bmax信号，并且图66C示出相对于背景的信号结果。结果表明，当使用与NANOGLO活细胞底物(Promega N205)配对的通用血清稀释剂时，IL-6NanoTrip免疫测定与人尿液相容。
实施例25
在单个小瓶中创建稳定的冻干底物和LgTrip饼状物试剂
为了评价冻干用于保存furimazine的潜在应用，将LgTrip和furimazine与用作三联应用的通用检测试剂并在单个小瓶中提供的LgTrip 3546配对。制备了含有furimazine、LgTrip 3546(SEQ ID NO:12)和含LgTrip 3546的furimazine的制剂。20X储备液制剂如下：
仅furimazine制剂：5mM偶氮硫代胸腺嘧啶、5mM抗坏血酸、2.75％普鲁兰多糖w/v、200μM于乙醇中的furimazine和ddH20millipore
仅LgTrip 3546制剂：5mM偶氮硫代胸腺嘧啶、5mM抗坏血酸、2.75％普鲁兰多糖w/v、20μM LgTrip 3546(SEQ ID NO:12)和ddH20(Millipore)
含LgTrip 3546的furimazine制剂：5mM偶氮硫代胸腺嘧啶、5mM抗坏血酸、2.75％普鲁兰多糖w/v、200μM于乙醇中的furimazine、20μM LgTrip 3546(SEQ ID NO:12)和ddH20(Millipore)。
将20X储备溶液的1mL等分试样分配到10mL琥珀色玻璃小瓶中，并将流道塞部分插入所述小瓶中。将小瓶负载到搁板预冷至4.7℃的冻干机(Virtis Genesis 12EL冻干机)上。然后将产品在-50℃的搁板温度下经历冷冻步骤持续2小时，此后开始冷凝器步骤。在运行期间，冷凝器温度在-5℃与-87℃之间运行。接下来在75和200毫托的压力设定点下运行真空下拉。升华持续约7.5小时，并且解吸持续约16.1小时。在冻干过程结束时，将小瓶用氮气回填并用完全插入的塞子在约600托的压力下密封。
将小瓶储存在25℃或60℃，并在冻干后的不同时间点进行测试。对于基于活性的测定，用10mL的含0.01％BSA的PBS复原冻干饼状物。将小瓶手动振荡并使其在室温下平衡5分钟。将50μl的复原底物添加至50μl的在相同BSA缓冲液中复原的纯化NANOLUC酶(Promega)或二肽(SEQ ID NO:14)中。仅LgTrip 3546制剂需要添加furimazine，其中使用了NANOGLO活细胞底物(Promega N205)。测定在固体、白色、非结合表面(NBS)板(Costar)中进行，并使用终点读数在收集总发光的GLOMAX Discover多模式酶标仪(Promega)上进行分析。图67展示对于(A)在存在NanoLuc时仅furimazine制剂、(B)在存在二肽时仅LgTrip3546制剂和(C)在存在二肽时含LgTrip 3546的furimazine制剂产生的Bmax信号。与预先溶解于有机溶剂中的N205底物相反，所有制剂在对于100天的储存条件持续时间测试的所有温度下都表现出热稳定性。
实施例26
在小瓶中创建用于目标分析物抗TNFα生物制剂的基于溶液的和冻干的单一试剂三联免疫测定
均质抗TNFα生物制剂NanoTrip(三联NanoLuc)免疫测定的基本原理描绘于图68中。在此模型中，使用了蛋白G-SmTrip9(或其变体)融合蛋白和TNFα-HiBiT(或其变体)融合蛋白。蛋白G将结合抗TNFα生物制剂抗体分析物的Fc区，并且所述分析物本身将结合TNFα，由此使互补亚基靠近，从而在LgTrip 3546蛋白和furimazine底物存在下复原亮荧光素酶。此测定是定量的，因为由标准读板光度计产生的发光的量与存在的目标分析物的量成正比。
6xHis-TNFa-15GS-HiBiT(ATG-3998)。含有通过与TNFα的羧基末端的15GS接头(SSSGGGGSGGGSSGG)隔开的SmTrip10(SEQ ID NO:15)的遗传融合物是使用pF4Ag CMVFlexi载体(Promega)实现。将TNFα-链10融合物的纯化质粒DNA转化到改组T7大肠杆菌K12(New England Biolabs)中，并以1:100稀释度涂铺在含有100μg/ml氨苄青霉素的LB板上，并在37℃下孵育过夜。将来自此板的菌落用于接种50mL起子培养物，所述起子培养物在37℃下在含有100μg/ml氨苄青霉素的LB培养基中生长过夜。将起子培养物1:100稀释到500mL含有100μg/ml氨苄青霉素的新鲜LB培养基中，并在37℃下孵育直到其达到0.6的OD，此时将最终浓度的1mM IPTG添加至样品。在IPTG接种后，使培养物在25℃下生长过夜。通过在4℃下离心(10,000rpm)30分钟使细胞沉淀，并重新悬浮在50mL TBS中，添加1mL蛋白酶抑制剂混合物(Promega)、0.5mL RQ1 DNA酶(Promega)和1mL的10mg/mL溶菌酶(Sigma)，并将细胞悬液在冰上在温和搅拌下孵育1小时。通过从-80℃冰箱至37℃水浴的三个冻融循环裂解细胞，并且随后在4℃下以10,000rpm离心30分钟。按照制造商的推荐方案，收集上清液并使用Ni琼脂糖6速流树脂(GE)纯化蛋白质。将蛋白质使用以100mM咪唑开始且达到500mM咪唑的逐步咪唑洗脱来进行洗脱，在TBS中透析，使用SDS-PAGE凝胶表征，并且是>95％纯。将蛋白质在-20℃下储存在50％甘油中。
SmTrip9(521)-15GS-PtnG-6xHis(ATG4002)。含有通过与蛋白G的氨基末端的接头(GSSGGGGSGGGGSSG)隔开的SmTrip9(SEQ ID NO:13)的遗传融合物是使用pF1A T7 Flexi载体(Promega)实现。使用表达SmTrip9(521)-PtnG融合蛋白的大肠杆菌的甘油储备液来接种50mL起子培养物，所述起子培养物在37℃下在含有100μg/ml氨苄青霉素的LB培养基中生长过夜。将起子培养物1:100稀释到500mL新鲜LB培养基中，所述培养基含有100μg/mL氨苄青霉素、0.15％葡萄糖和0.1％鼠李糖。使培养物在25℃下生长16-24小时。通过在4℃下离心(10,000rpm)30分钟使细胞沉淀，并重新悬浮在50mL TBS中。添加1mL蛋白酶抑制剂混合物(Promega)、0.5mL RQ1 DNA酶(Promega)和1mL的10mg/mL溶菌酶(Sigma)，并将细胞悬液在冰上在温和搅拌下孵育1小时。通过从-80℃冰箱至37℃水浴的三个冻融循环裂解细胞，并且随后在4℃下以10,000rpm离心30分钟。收集上清液，并按照制造商推荐的方案使用HisTag柱(GE)纯化蛋白质。将蛋白质使用梯度洗脱以500mM咪唑最终浓度洗脱，在TBS中透析，使用SDS-PAGE凝胶表征，并且是>95％纯。将蛋白质在-20℃下储存在50％甘油中。
图69展示在由PBS(pH 7.0)中的0.01％BSA组成的标准测定缓冲液中进行的基于溶液的均质抗TNFα生物制剂免疫测定的剂量反应曲线。对于这些实验，将10nM的蛋白G-15gly/ser-SmTrip9 Pep521(SEQ ID NO:16)、10nM TNFα-15gly/ser–SmTrip10 Pep289(SEQ ID NO:17)和1μM LgTrip 3546(SEQ ID NO:12)蛋白在(A)类克、(B)恩利和(C)修美乐存在下孵育90分钟。添加furimazine(NANOGLO活细胞底物；Promega N205)，并使用GLOMAXDiscover分析总发光信号。
为了评价冻干用于保存整个抗TNFαTNFα生物制品的潜在应用，制备了含有肽标记的融合蛋白和LgTrip 3546(SEQ ID NO:12；用于NanoTrip测定)以及furimazine的单个小瓶制剂中的NanoTrip和NanoBiT免疫测定。20X储备液制剂如下：
NanoTrip抗TNFα生物制剂免疫测定：5mM偶氮硫代胸腺嘧啶、5mM抗坏血酸、2.75％w/v普鲁兰多糖、ddH20(Millipore)、200μM于乙醇中的furimazine、20μM LgTrip 3546蛋白(SEQ ID NO:12)、200nM蛋白G-SmTrip9 Pep521(SEQ ID NO:16)融合蛋白和200nM TNFα-SmTrip10 Pep289(SEQ ID NO:17)融合蛋白。
NanoBiT抗TNFα生物制剂免疫测定：5mM偶氮硫代胸腺嘧啶、5mM抗坏血酸、2.75％w/v普鲁兰多糖、ddH20(Millipore)、200μM于乙醇中furimazine、200nM蛋白G-SmBiT(SEQID NO:10)融合蛋白和200nM TNFα-LgBiT(SEQ ID NO:12)融合蛋白。
将20X储备溶液的1mL等分试样分配到10mL琥珀色玻璃小瓶中，并将流道塞部分插入所述小瓶中。将小瓶负载到搁板预冷至4.7℃的冻干机(Virtis Genesis 12EL冻干机)上。然后将产品在-50℃的搁板温度下经历冷冻步骤持续2小时，此后开始冷凝器步骤。在运行期间，冷凝器温度在-5℃与-87℃之间运行。接下来在75和200毫托的压力设定点下运行真空下拉。升华持续约7.5小时，并且解吸持续约16.1小时。在冻干过程结束时，将小瓶用氮气回填并用完全插入的塞子在约600托的压力下密封。
对于基于活性的测定，用10mL的含0.01％BSA的PBS复原单一试剂饼状物。将小瓶手动振荡并使其在室温下平衡5分钟。将50μl的复原单一试剂抗TNFα生物制剂NanoTrip和NanoBiT免疫测定以滴定方式添加至50μl的在相同BSA缓冲液中复原的类克。测定在固体、白色、非结合表面(NBS)板(Costar)中进行，并使用动力学读数在收集总发光的GLOMAXDiscover多模式酶标仪(Promega)上进行分析。图70示出在复原单一试剂类克(A)NanoTrip免疫测定或(B)NanoBiT免疫测定后所得生物发光的类克剂量反应曲线。
测试这些冻干单一试剂抗TNFα生物制剂NanoTrip和NanoBiT免疫测定在环境温度下储存时的热稳定性表明，当在存在或不存在100nM类克的情况下在PBS(pH 7.0)中的0.01％BSA中复原时，两种测定均展示贮存稳定性并且当存在分析物类克时展示信号的显著增加。结果在图71中示出。
实施例27
使用分裂试剂方法开发稳定的冻干三联和NanoBiT免疫测定
为了评价冻干用于保存抗TNFα生物制剂、NanoTrip和NanoBiT免疫测定的单独组分的潜在应用，制备了NanoTrip和NanoBiT免疫测定，所述免疫测定然后合并在含有肽标记的融合蛋白和LgTrip3546(SEQ ID NO:12；对于NanoTrip测定)以及furimazine的单个小瓶制剂中。20X储备液制剂如下：
NanoBiT抗TNFα生物制剂免疫测定：
含LgBiT-TNFα的furimazine：5mM偶氮硫代胸腺嘧啶、5mM抗坏血酸、2.75％w/v普鲁兰多糖、ddH20(Millipore)、200μM于乙醇中的furimazine和200nM TNFα-LgBiT(SEQ IDNO:12)融合蛋白。
NanoBiT蛋白G：5mM偶氮硫代胸腺嘧啶、5mM抗坏血酸、2.75％w/v普鲁兰多糖、ddH20 millipore、200nM蛋白G-SmBiT(SEQ ID NO:10)融合蛋白
NanoTrip抗TNFα生物制剂免疫测定：
含LgTrip 3546的furimazine：5mM偶氮硫代胸腺嘧啶、5mM抗坏血酸、2.75％w/v普鲁兰多糖、ddH20(Millipore)、200μM于乙醇中的furimazine、20μM LgTrip 3546蛋白(SEQID NO:12)，
含TNFα的蛋白G：5mM偶氮硫代胸腺嘧啶、5mM抗坏血酸、2.75％w/v普鲁兰多糖、ddH20(Millipore)、200nM蛋白G-SmTrip9Pep521(SEQ ID NO:16)融合蛋白和200nM TNFα-SmTrip10 Pep289(SEQ ID NO:17)融合蛋白。
将制剂冻干为单独的组分，然后手动合并以创建完整免疫测定。将饼状物用Opti-MEM(Gibco)复原，并将50ul以剂量滴定方式添加至50μl的类克。测定在固体、白色、非结合表面(NBS)板(Costar)中进行，并使用动力学读数在收集总发光的GLOMAX Discover多模式酶标仪(Promega)上进行分析。图72展示NanoBiT抗TNFα生物制剂“分裂饼状物”冻干免疫测定的过程和测定结果。图72A描绘独立的冻干产品。图72B描绘将两个单独的饼状物手动合并到一个微量离心管中后的结果。图72C描绘用Opti-MEM缓冲液复原后的冻干产品。图72D展示当存在增加量的类克时的动力学生物发光结果。图73展示在按照图72中列出的相同过程之后在类克存在下使用生物发光的动力学读数的抗TNFα生物制剂NanoTrip测定的动力学生物发光结果。双饼状物形式也创建了用于类克的成功免疫测定。
实施例28
开发用于定量抗EGFR生物制剂的基于细胞的均质三联测定
通过用1:10稀释的IL6-VSHiBiT-15GS-EGFR(GSSGGGGSGGG GSS)(ATG-4288)和pGEM3Z载体DNA(Promega)制备10μg/ml DNA溶液，对HEK293细胞进行批量转染。将FuGENEHD添加至DNA混合物中以形成脂质:DNA复合物。将此复合物添加至调整的细胞密度为2x105个细胞/ml的HEK293细胞中，并在37℃和5％CO2下孵育过夜。
将转染的HEK293细胞以2x105个细胞/孔的最终浓度添加至96孔NBS板(用于所测试的每个SmTrip-15GS-G的单独板)。将LgTrip3546和SmTrip9-G的试剂混合物以1μMLgTrip 3546和10nM SmTrip9-15GS-G的最终浓度添加至细胞中。将24点帕尼单抗滴定以100nM的最终起始浓度添加至每个孔，并以0nM的最终浓度1:2稀释。盖上所有板并在37℃和5％CO2下孵育一小时。将NANOLUC活细胞底物以10μM的最终浓度添加至所有孔，且随后在光度计上读取每个板的发光。对以下SmTrip9-G构建体进行了测试：ATG4002SmTrip9(521)-15GS-G(SEQ ID NO:724)；ATG4496 SmTrip9(743)-15GS-G(SEQ ID NO:(726)；ATG4558SmTrip9(759)-15GS-G(SEQ ID NO:728)；和ATG4551 SmTrip9(760)-15GS-G(SEQ ID NO:730)。每种配置在定量检测帕尼单抗方面均成功。
实施例29
在基于溶液的均质抗TNFα生物制剂三联免疫测定中测试各种SmTrip9-蛋白G融合蛋白
图77展示在由PBS(pH 7.0)中的0.01％BSA组成的标准测定缓冲液中使用SmTrip9变体SmTrip9 pep521(SEQ ID NO:16)、SmTrip9 pep743(SEQ ID NO:21)、SmTrip9 pep759(SEQ ID NO:22)或SmTrip 9pep760(SEQ ID NO:23)的基于溶液的均质抗TNFα生物制剂免疫测定的剂量反应曲线。对于这些实验，将10nM的蛋白G-15gly/ser-SmTrip9变体、10nMTNFα-15gly/ser–SmTrip10 Pe p289(SEQ ID NO:17)和1μM LgTrip 3546(SEQ ID NO:12)蛋白在类克存在下孵育90分钟。添加furimazine(NANOGLO活细胞底物；Promega N205)，并使用GLOMAX Discover分析总发光信号。所有SmTrip9变体在检测类克的测定中都成功，尽管具有不同水平的背景和Bmax。
为了评价冻干用于保存整个抗TNFα生物制剂的潜在应用，制备了含有肽标记的融合蛋白和LgTrip 3546(SEQ ID NO:12)以及furimazine的单个小瓶制剂中的NanoTrip免疫测定。20X储备液制剂如下：
NanoTrip抗TNFα生物制剂免疫测定：5mM偶氮硫代胸腺嘧啶、5mM抗坏血酸、2.75％w/v普鲁兰多糖、ddH20(Millipore)、200μM于乙醇中的furimazine、20μM LgTrip 3546蛋白(SEQ ID NO:12)、200nM蛋白G-SmTrip9变体融合蛋白和200nM TNFα-SmTrip10 Pep289(SEQID NO:17)融合蛋白。
将20X储备溶液的1mL等分试样分配到10mL琥珀色玻璃小瓶中，并将流道塞部分插入所述小瓶中。将小瓶负载到搁板预冷至4.7℃的冻干机(Virtis Genesis 12EL冻干机)上。然后将产品在-50℃的搁板温度下经历冷冻步骤持续2小时，此后开始冷凝器步骤。在运行期间，冷凝器温度在-5℃与-87℃之间运行。接下来在75和200毫托的压力设定点下运行真空下拉。升华持续约7.5小时，并且解吸持续约16.1小时。在冻干过程结束时，将小瓶用氮气回填并用完全插入的塞子在约600托的压力下密封。图77B提供使用冻干抗TNFα生物制剂免疫测定的类克剂量反应曲线。
实施例30
通过反应性肽直接标记抗体以开发基于溶液的均质IL-6免疫测定
使用直接标记的抗体的均质NanoLuc三联免疫测定的基本原理描绘于图78中。首先，使一对靶向IL-6上的非重叠表位的抗体化学缀合至基于SmTrip9或SmTrip10的反应性肽。当标记的抗体结合IL-6分析物时，使互补亚基靠近，从而复原在LgTrip蛋白和furimazine底物存在下产生生物发光信号的亮荧光素酶。由这种测定配置产生的发光的量与目标分析物的量成正比。
将SmTrip9变体如Pep693(SEQ ID NO:20)、Pep895(SEQ ID NO:24)和Pep929(SEQID NO:25)或SmTrip10变体如Pep691(SEQ ID NO:18)和Pep692(SEQ ID NO:19)单独在DMF中溶解至5mM。使用Zeba旋转脱盐柱(ThermoFisher)将抗体缓冲交换2x为10mM碳酸氢钠缓冲液(pH 8.5)。随后，在4℃下将这些抗体与20倍摩尔过量的反应性肽合并1小时，同时振荡以共价标记蛋白质。在两次通过PBS缓冲液中的Zeba旋转柱情况下除去未反应的标记。为了创建用于示例性人IL-6免疫测定的试剂，使用了小鼠抗人IL-6单克隆抗体克隆5IL6(Thermo目录号M620)和克隆505E 9A12 A3(Thermo目录号AHC0662)。SmTrip9反应性肽用于标记抗体5IL6，而SmTrip10反应性肽用于标记抗体505E。图79中所示的变性SDS-PAGE凝胶用于表征缀合的抗体。凝胶揭示抗体标记的程度取决于标记的肽序列和化学结构。
图80-82展示在rhIL-6滴定系列存在下抗体缀合物的原始RLU剂量反应曲线。对于这些实验，将rhIL-6和抗体缀合物与1μM LgTrip3546(SEQ ID NO:12)在含有0.01％BSA的PBS(pH 7.0)中孵育90分钟。添加N205后，测量发光信号。使用15ng/ml的SmTrip9标记的变体(HW-0984或HW-1010)5IL6抗体和60ng/ml的SmTrip10标记的变体(HW-0977)505E抗体产生图80中的数据。使用62.5ng/ml的SmTrip9标记的(HW-0984)5IL6抗体和60ng/ml的SmTrip10标记的变体(HW-1053)505E抗体产生图81中的数据。使用以下浓度的抗体缀合物产生图82中的数据：15ng/ml HW-1043(SEQ ID NO:24)+30ng/ml HW-1053(SEQ ID NO:18)、15ng/ml HW-1052(SEQ ID NO:25)+15ng/ml HW-1053,(SEQ ID NO:18)15ng/ml HW-1055(SEQ ID NO:25)+15ng/ml HW-1053(SEQ ID NO:18)、60ng/ml HW-1042(SEQ ID NO:20)+8ng/ml HW-1053(SEQ ID NO:18)以及60ng/ml HW-1050(SEQ ID NO:27)+8ng/ml HW-1053(SEQ ID NO:18)。在此实验中，SmTrip9变体标记HW-1050(SEQ ID NO:27)和HW-1043(SEQID NO:24)在高rhIL-6浓度存在下给出了展示接近106RLU的最佳信号与背景比，并且在分析物不存在下给出低光输出。相比之下，SmTrip9变体标记HW-1055(SEQ ID NO:25(磺基SE-PEG3))和HW-1052(SEQ ID NO:25(磺基SE-PEG6))即使在rhIL-6不存在下也具有高信号，从而表明这些标记自发地组装成复原的荧光素酶。图83展示在含有0.01％BSA、1μM LgTrip3546(SEQ ID NO:12)和N205的PBS(pH 7.0)中来自单独抗体缀合物的滴定的光输出。大多数缀合物显示与furimazine背景(约100RLU)相当的RLU，并且随着标记的抗体的浓度增加，RLU没有增加。缀合物HW-0984(SEQ ID NO:20)和HW-1053(SEQ ID NO:19)是例外，随着浓度增加产生增加的RLU，并在高于100ng/ml的浓度下达到超过1,000。在图84中，在针对图82描述的条件下测定了具有高S/B的两种SmTrip9缀合物(用HW-1050(SEQ ID NO:27)和HW-1043(SEQ ID NO:24)标记)，但使用1μM LgTrip 5146(SEQ ID NO:451)，产生类似于LgTrip3546(SEQ ID NO:12)的结果，从而证明使用不同LgTrp变体构建这些测定的可行性。
用于均质三联NanoLuc免疫测定的组分也可通过直接标记抗体与SmTrip9或SmTrip10变体构建，所述变体含有诸如四甲基罗丹明(TMR)的荧光团。这在图85中示意性地描绘，包括从荧光素酶到荧光团标记的预期BRET。IL-6免疫测定中具有标记HW-0987(具有TMR的SmTrip9变体)和HW-0992(具有TMR的SmTrip10变体)的BRET的动力学读数示于图86中。仅在rhIL-6分析物存在下观察到BRET，从而证明当分析物将这些组分聚集在一起时发生互补和能量转移。
实施例31
磺基SE-PEG3-SmTrip9 Pep693(HW-0984)
PEG3双磺基-SE
Figure BDA0003382854880001451
将3,3'-((氧基双(乙烷-2,1-二基))双(氧基))二丙酸(55mg，0.22mmol)溶解于无水DMF中，然后添加二异丙基乙胺(120mg，0.88mmol)和HATU(176mg，0.45mmol)。将混合物搅拌5分钟。同时，将N-羟基-2,5-二氧代吡咯烷-3-磺酸(90mg，0.46mmol)溶解于5ml DMSO中，然后逐滴添加至之前的溶液中。将混合物再搅拌一小时直到LC-MS显示酸消失。溶液直接用于下一步骤中。计算值：m/z＝603.05[M-]；测量值(ESI)：m/z＝603.04[M-]。
磺基SE-PEG3-SmTrip9 Pep693(HW-0984)
Figure BDA0003382854880001452
将SmTrip9 Pep693(GRMLFRVTINSWR，27mg，0.045mmol)溶解于DMF中。然后将所述溶液添加至先前的PEG3双磺基-SE溶液中。然后将混合物再搅拌一小时并通过制备型HPLC直接纯化。计算值：m/z＝1022.98[M+2H]2+；测量值(ESI)：m/z＝1023.09[M+2H]2+。
实施例32
磺基SE-PEG3-SmTrip10 Pep691(HW-0977)
Figure BDA0003382854880001461
通过与HW-0984相同的方法合成HW-0977。计算值：m/z＝892.93[M+2H]2+；测量值(ESI)：m/z＝893.61[M+2H]2+。
实施例33
磺基SE-PEG3-SmTrip9 Pep895(HW-1010)
Figure BDA0003382854880001462
通过与HW-0984相同的方法合成HW-1010。计算值：m/z＝1016.51[M+2H]2+；测量值(ESI)：m/z＝1016.92[M+2H]2+。
实施例34
磺基SE-PEG3-SmTrip9 Pep929(HW-1055)
Figure BDA0003382854880001471
通过与HW-0984相同的方法合成HW-1055。计算值：m/z＝1114.06[M+2H]2+；测量值(ESI)：m/z＝1113.95[M+2H]2+。
实施例35
磺基SE-PEG6-SmTrip9 Pep693(HW-1042)
PEG6双磺基-SE
Figure BDA0003382854880001472
将双PEG6-酸(39mg，0.10mmol)溶解于无水DMF中，然后添加二异丙基乙胺(53mg，0.4mmol)和HATU(78mg，0.20mmol)。将混合物搅拌5分钟。同时，将N-羟基-2,5-二氧代吡咯烷-3-磺酸(40mg，0.20mmol)溶解于5ml DMSO中，然后逐滴添加至之前的溶液中。将混合物再搅拌一小时直到LC-MS显示酸消失。溶液直接用于下一步骤中。计算值：m/z＝735.13[M-]；测量值(ESI)：m/z＝735.04[M]。
磺基SE-PEG6-SmTrip9 Pep693(HW-1042)
Figure BDA0003382854880001481
将SmTrip9 Pep693(GRMLFRVTINSWR，20mg,0.013mmol)溶解于DMF中。然后将所述溶液添加至先前的PEG6双磺基-SE溶液中。然后将混合物再搅拌一小时并通过制备型HPLC直接纯化。计算值：m/z＝1089.02[M+2H]2+；测量值(ESI)：m/z＝1088.94[M+2H]2+。
实施例36
磺基SE-PEG6-SmTrip9 Pep929(HW-1052)
Figure BDA0003382854880001482
通过与HW-1042相同的方法合成HW-1052。计算值：m/z＝1180.10[M+2H]2+；测量值(ESI)：m/z＝1179.82[M+2H]2+。
实施例37
磺基SE-PEG6-SmTrip10 Pep692(HW-1053)
Figure BDA0003382854880001491
通过与HW-1042相同的方法合成HW-1053。计算值：m/z＝1052.03[M+2H]2+；测量值(ESI)：m/z＝1051.92[M+2H]2+。
实施例38
磺基SE-PEG6-SmTrip9 Pep895(HW-1043)
Figure BDA0003382854880001492
通过与HW-1042相同的方法合成HW-1043。计算值：m/z＝1082.55[M+2H]2+；测量值(ESI)：m/z＝1082.34[M+2H]2+。
实施例39
磺基SE-PEG3-SmTrip9 Pep938-TAMRA(HW-0992)
TAMRA-马来酰亚胺
Figure BDA0003382854880001493
将5-TAMRA(50mg，0.116mmol)溶解于DMF中。添加二异丙基乙胺(45mg，0.128mmol)，然后添加TSTU(38mg，0.128mmol)。将混合物搅拌20分钟，添加1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮(18mg，0.128mmol)，并将所得反应混合物再搅拌1小时，且直接通过制备型HPLC纯化。计算值：m/z＝553.20[M+H]+；测量值(ESI)：m/z＝553.40[M+H]+。
SmTrip9 Pep938-TAMRA
Figure BDA0003382854880001501
将TAMRA-马来酰亚胺(8mg，0.014mmol)溶解于DMF中。添加SmTrip9(Pep938)(GRMLFRVTINSWRC，25mg，0.014mmol)于PBS缓冲液(pH 7.4，200mM)中的溶液。将反应混合物搅拌两小时并通过制备型HPLC直接纯化。计算值：m/z＝1146.05[M+2H]2+；测量值(ESI)：m/z＝1146.33[M+2H]2+。
磺基SE-PEG3-SmTrip9 Pep938-TAMRA(HW-0992)
Figure BDA0003382854880001502
将SmTrip9 Pep938-TAMRA(8.5mg，0.0038mmol)溶解于DMF中。然后将所述溶液添加至如HW-0984的合成中所示制备的PEG3双磺基-SE中。将反应混合物搅拌两小时并通过制备型HPLC直接纯化。计算值：m/z＝901.05[M+3H]3+；测量值(ESI)：m/z＝901.20[M+3H]3+。
实施例40
磺基SE-PEG3-Strnd9(Pep937)-TAMRA(HW-0987)
Figure BDA0003382854880001511
通过与HW-0992相同的方法合成HW-0987。计算值：m/z＝814.03[M+3H]3+；测量值(ESI)：m/z＝814.40[M+3H]3+。
实施例41
磺基SE-PEG3-SmTrip9 Pep938-SA(HW-1050)
SmTrip9 Pep938-SA
Figure BDA0003382854880001512
将SmTrip9 Pep938(GRMLFRVTINSWR，26mg，0.015mmol)溶解于DMSO中。将1-(3-磺丙基)-2-乙烯基吡啶鎓氢氧化物内盐(3.40mg 0.015mmol)溶解于磷酸盐缓冲液(pH＝7.4，100mM)中并缓慢添加至肽溶液。将混合物再搅拌三小时并通过制备型HPLC直接纯化。计算值：m/z＝983.48[M+2H]2+；测量值(ESI)：m/z＝983.39[M+2H]2+。
磺基SE-PEG3-SmTrip9 Pep938-SA(HW-1050)
Figure BDA0003382854880001521
将SmTrip9 Pep938-SA(10mg，0.005mmol)溶解于DMF中。然后将所述溶液添加至如HW-0984中所示制备的PEG6双磺基-SE中。将反应混合物搅拌两小时并通过制备型HPLC直接纯化。计算值：m/z＝1254.05[M+2H]2+；测量值(ESI)：m/z＝1253.98[M+2H]2+。
以下示出用于合成PEG连接的肽磺基SE的代表性方案。
Figure BDA0003382854880001522
以下示出用于合成连接至荧光团的PEG连接的肽磺基SE的代表性方案。
Figure BDA0003382854880001531
实施例42
关于腔肠素衍生物JRW-1404和JRW-1482的性能研究复杂样品基质中的发光
图87展示源自复杂样品基质中的腔肠素衍生物底物JRW-1404和JRW-1482的发光。将100％血浆(12/28/18)、尿液(创新研究2/25/19)和人血清(2/11/19)样品在PBS中稀释至10％、20％、0％和80％。具有“0％”的样品是PBS。一式两份，将50μl的每种样品与50μl在PBS中稀释至0.4ng/ml的NanoLuc合并。将每种底物稀释至20μM PBS，然后将100μl的每种稀释的底物添加至NanoLuc/样品混合物。在
Figure BDA0003382854880001532
Discover板广度计上测量发光。
应理解前述具体实施方式和随附实施例仅是说明性的，并且不应视为对本公开的范围的限制，所述范围仅由随附权利要求和它们的等效物限定。
对所公开的实施方案的各种变化和修改对于本领域技术人员将是显而易见的。可在不背离本发明的精神和范围的情况下进行此类变化和修改，包括但不限于与本公开的化学结构、取代基、衍生物、中间体、合成、组合物、制剂或使用方法有关的那些变化和修改。
序列
以下多肽序列各自包含N-末端甲硫氨酸残基或相应的ATG密码子；缺乏N-末端甲硫氨酸残基或相应ATG密码子的多肽序列也在本文的范围内并且以引用的方式并入本文。
以下肽序列各自缺乏N-末端甲硫氨酸残基；包含N-末端甲硫氨酸残基的肽序列也在本文的范围内并且以引用的方式并入本文。
表2.示例性肽、二肽和多肽序列。
Figure BDA0003382854880001541
Figure BDA0003382854880001551
Figure BDA0003382854880001561
Figure BDA0003382854880001571
Figure BDA0003382854880001581
Figure BDA0003382854880001591
Figure BDA0003382854880001601
Figure BDA0003382854880001611
Figure BDA0003382854880001621
Figure BDA0003382854880001631
Figure BDA0003382854880001641
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Figure BDA0003382854880001671
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Figure BDA0003382854880001691
Figure BDA0003382854880001701
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Figure BDA0003382854880001721
Figure BDA0003382854880001731
Figure BDA0003382854880001741
Figure BDA0003382854880001751
Figure BDA0003382854880001761
Figure BDA0003382854880001771
Figure BDA0003382854880001781
Figure BDA0003382854880001791
Figure BDA0003382854880001801
Figure BDA0003382854880001811
Figure BDA0003382854880001821
Figure BDA0003382854880001831
Figure BDA0003382854880001841
Figure BDA0003382854880001851
Figure BDA0003382854880001861
Figure BDA0003382854880001871
Figure BDA0003382854880001881
Figure BDA0003382854880001891
Figure BDA0003382854880001901
Figure BDA0003382854880001911
Figure BDA0003382854880001921
Figure BDA0003382854880001931
Figure BDA0003382854880001941
Figure BDA0003382854880001951
Figure BDA0003382854880001961
Figure BDA0003382854880001971
Figure BDA0003382854880001981
Figure BDA0003382854880001991
Figure BDA0003382854880002001
表3.示例性肽序列。
Figure BDA0003382854880002002
Figure BDA0003382854880002011
Figure BDA0003382854880002021
Figure BDA0003382854880002031
Figure BDA0003382854880002041
Figure BDA0003382854880002051
Figure BDA0003382854880002061
Figure BDA0003382854880002071
表4.示例性荧光素酶碱基序列。
Figure BDA0003382854880002072
Figure BDA0003382854880002081
Figure BDA0003382854880002091
Figure BDA0003382854880002101
序列表
<110> 普洛麦格公司
<120> 用于使用生物发光检测分析物的组合物和方法
<130> PRMG-35851.601
<150> US 62/832052
<151> 2019-04-10
<160> 730
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 170
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 1
Met Phe Thr Leu Ala Asp Phe Val Gly Asp Trp Gln Gln Thr Ala Gly
1 5 10 15
Tyr Asn Gln Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Leu Ser Ser Leu Phe
20 25 30
Gln Ala Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Lys Val Val Leu Ser
35 40 45
Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ala Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu
50 55 60
Gly Leu Ser Gly Phe Gln Met Gly Leu Ile Glu Met Ile Phe Lys Val
65 70 75 80
Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Ile Ile Leu His Tyr Gly
85 90 95
Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly
100 105 110
Arg Pro Tyr Pro Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Gln Ile Thr Val
115 120 125
Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Tyr Asp Glu Arg Leu Ile
130 135 140
Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr
145 150 155 160
Gly Trp Arg Leu Cys Glu Asn Ile Leu Ala
165 170
<210> 2
<211> 147
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 2
Met Phe Thr Leu Ala Asp Phe Val Gly Asp Trp Gln Gln Thr Ala Gly
1 5 10 15
Tyr Asn Gln Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Leu Ser Ser Leu Phe
20 25 30
Gln Ala Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Lys Val Val Leu Ser
35 40 45
Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ala Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu
50 55 60
Gly Leu Ser Gly Phe Gln Met Gly Leu Ile Glu Met Ile Phe Lys Val
65 70 75 80
Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Ile Ile Leu His Tyr Gly
85 90 95
Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly
100 105 110
Arg Pro Tyr Pro Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Gln Ile Thr Val
115 120 125
Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Tyr Asp Glu Arg Leu Ile
130 135 140
Asn Pro Asp
145
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 3
Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn
1 5 10
<210> 4
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 4
Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Asn Ile Leu Ala
1 5 10
<210> 5
<211> 171
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 5
Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala
1 5 10 15
Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
20 25 30
Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu
35 40 45
Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr
50 55 60
Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys
65 70 75 80
Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr
85 90 95
Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe
100 105 110
Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr
115 120 125
Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu
130 135 140
Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val
145 150 155 160
Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala
165 170
<210> 6
<211> 148
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 6
Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala
1 5 10 15
Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
20 25 30
Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu
35 40 45
Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr
50 55 60
Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys
65 70 75 80
Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr
85 90 95
Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe
100 105 110
Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr
115 120 125
Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu
130 135 140
Ile Asn Pro Asp
145
<210> 7
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 7
Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Val
1 5 10
<210> 8
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 8
Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala
1 5 10
<210> 9
<211> 158
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 9
Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala
1 5 10 15
Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
20 25 30
Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Arg
35 40 45
Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr
50 55 60
Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys
65 70 75 80
Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr
85 90 95
Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Leu Asn Tyr Phe
100 105 110
Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr
115 120 125
Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu
130 135 140
Ile Thr Pro Asp Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn
145 150 155
<210> 10
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 10
Val Thr Gly Tyr Arg Leu Phe Glu Glu Ile Leu
1 5 10
<210> 11
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 11
Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
1 5 10
<210> 12
<211> 155
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 12
Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala
65 70 75 80
Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His
85 90 95
Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr
100 105 110
Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val
115 120 125
Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn
130 135 140
Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp
145 150 155
<210> 13
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 13
Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser
1 5 10
<210> 14
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 14
Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val Ser Gly Trp Arg
1 5 10 15
Leu Phe Lys Lys Ile Ser
20
<210> 15
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 15
Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
1 5 10
<210> 16
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 16
Gly Lys Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Trp Lys
1 5 10
<210> 17
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 17
Val Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
1 5 10
<210> 18
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 18
Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Arg Arg Ile Ser
1 5 10
<210> 19
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 19
Val Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Arg Arg Ile Ser
1 5 10
<210> 20
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 20
Gly Arg Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Trp Arg
1 5 10
<210> 21
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 21
Gly Lys Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Lys Trp Lys
1 5 10
<210> 22
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 22
Asp Lys Leu Leu Phe Thr Val Thr Ile Glu Lys Tyr Lys
1 5 10
<210> 23
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 23
Lys Lys Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Gln Lys Trp Lys
1 5 10
<210> 24
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 24
Gly Arg Leu Leu Phe Val Val Val Ile Glu Arg Tyr Arg
1 5 10
<210> 25
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 25
Arg Arg Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Gln Arg Trp Arg
1 5 10
<210> 26
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 26
Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Arg Arg Ile Ser Cys
1 5 10
<210> 27
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 27
Gly Arg Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Trp Arg Cys
1 5 10
<210> 28
<211> 513
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 28
atggtgttta ccttggcaga tttcgttgga gactggcaac agacagctgg atacaaccaa 60
gatcaagtgt tagaacaagg aggattgtct agtctgttcc aagccctggg agtgtcagtc 120
accccaatcc agaaagttgt gctgtctggg gagaatgggt taaaagctga tattcatgtc 180
atcatccctt acgagggact cagtggtttt caaatgggtc tgattgaaat gatcttcaaa 240
gttgtttacc cagtggatga tcatcatttc aagattattc tccattatgg tacactcgtt 300
attgacggtg tgacaccaaa catgattgac tactttggac gcccttaccc tggaattgct 360
gtgtttgacg gcaagcagat cacagttact ggaactctgt ggaacggcaa caagatctat 420
gatgagcgcc tgatcaaccc agatggttca ctcctcttcc gcgttactat caatggagtc 480
accggatggc gcctttgcga gaacattctt gcc 513
<210> 29
<211> 549
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 29
atgaaacatc accatcacca tcatgcgatc gccatggtct tcacactcga agatttcgtt 60
ggggactggc gacagacagc cggctacaac ctggaccaag tccttgaaca gggaggtgtg 120
tccagtttgt ttcagaatct cggggtgtcc gtaactccga tccaaaggat tgtcctgagc 180
ggtgaaaatg ggctgaagat cgacatccat gtcatcatcc cgtatgaagg tctgagcggc 240
gaccaaatgg gccagatcga aaaaattttt aaggtggtgt accctgtgga tgatcatcac 300
tttaaggtga tcctgcacta tggcacactg gtaatcgacg gggttacgcc gaacatgatc 360
gactatttcg gacggccgta tgaaggcatc gccgtgttcg acggcaaaaa gatcactgta 420
acagggaccc tgtggaacgg caacaaaatt atcgacgagc gcctgatcaa ccccgacggc 480
tccctgctgt tccgagtaac catcaacgga gtgaccggct ggcggctgtg cgaacgcatt 540
ctggcggtt 549
<210> 30
<211> 495
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 30
atggtcttca cactcgaaga tttcgttggg gactgggaac agacagccgc ctacaacctg 60
gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgctgc agaatctcgc cgtgtccgta 120
actccgatcc aaaggattgt ccggagcggt gaaaatgccc tgaagatcga catccatgtc 180
atcatcccgt atgaaggtct gagcgccgac caaatggccc agatcgaaga ggtgtttaag 240
gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgccctatgg cacactggta 300
atcgacgggg ttacgccgaa catgctgaac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360
gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaaca gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420
gacgagcgcc tgatcacccc cgacggctcc atgctgttcc gagtaaccat caacagccat 480
catcaccatc accac 495
<210> 31
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 31
gtgaccggct accggctgtt cgaggagatt ctg 33
<210> 32
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 32
gtgagcggct ggcggctgtt caagaagatt agc 33
<210> 33
<211> 148
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 33
Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala
1 5 10 15
Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
20 25 30
Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Arg
35 40 45
Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr
50 55 60
Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys
65 70 75 80
Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr
85 90 95
Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Leu Asn Tyr Phe
100 105 110
Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr
115 120 125
Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu
130 135 140
Ile Thr Pro Asp
145
<210> 34
<211> 444
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 34
atggtcttca cactcgaaga tttcgttggg gactgggaac agacagccgc ctacaacctg 60
gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgctgc agaatctcgc cgtgtccgta 120
actccgatcc aaaggattgt ccggagcggt gaaaatgccc tgaagatcga catccatgtc 180
atcatcccgt atgaaggtct gagcgccgac caaatggccc agatcgaaga ggtgtttaag 240
gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgccctatgg cacactggta 300
atcgacgggg ttacgccgaa catgctgaac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360
gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaaca gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420
gacgagcgcc tgatcacccc cgac 444
<210> 35
<211> 155
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 35
Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala
65 70 75 80
Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His
85 90 95
Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr
100 105 110
Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val
115 120 125
Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn
130 135 140
Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp
145 150 155
<210> 36
<211> 465
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 36
atgaaacatc accatcacca tcatgtcttc acactcgaag atttcgttgg ggactgggaa 60
cagacagccg cctacaacct ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgctg 120
cagaatctcg ccgtgtccgt aactccgatc caaaggattg tccggagcgg tgaaaatgcc 180
ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg tatgaaggtc tgagcgccga ccaaatggcc 240
cagatcgaag aggtgtttaa ggtggtgtac cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc 300
ctgccctatg gcacactggt aatcgacggg gttacgccga acatgctgaa ctatttcgga 360
cggccgtatg aaggcatcgc cgtgttcgac ggcaaaaaga tcactgtaac agggaccctg 420
tggaacggca acaaaattat cgacgagcgc ctgatcaccc ccgac 465
<210> 37
<211> 148
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 37
Met Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala
1 5 10 15
Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
20 25 30
Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg
35 40 45
Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr
50 55 60
Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys
65 70 75 80
Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr
85 90 95
Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe
100 105 110
Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr
115 120 125
Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu
130 135 140
Ile Thr Pro Asp
145
<210> 38
<211> 444
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 38
atggtcttca cactcgacga tttcgttggg gactgggaac agacagccgc ctacaacctg 60
gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgctgc agaatctcgc cgtgtccgta 120
actccgatca tgaggattgt ccggagcggt gaaaatgccc tgaagatcga catccatgtc 180
atcatcccgt atgaaggtct gagcgccgac caaatggccc agatcgaaga ggtgtttaag 240
gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgccctatgg cacactggta 300
atcgacgggg ttacgccgaa caagctgaac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360
gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaaca gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420
gacgagcgcc tgatcacccc cgac 444
<210> 39
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 39
ggctccatgc tgttccgagt aaccatcaac agc 33
<210> 40
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 40
gtgagcggct ggcggctgtt caagaagatt agc 33
<210> 41
<211> 148
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 41
Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala
1 5 10 15
Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
20 25 30
Phe Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu
35 40 45
Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr
50 55 60
Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys
65 70 75 80
Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr
85 90 95
Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asn Tyr Phe
100 105 110
Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr
115 120 125
Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu
130 135 140
Ile Thr Pro Asp
145
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<211> 444
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 42
atggtcttca cactcgaaga tttcgttggg gactgggaac agacagccgc ctacaacctg 60
gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgtttc agaatctcgc cgtgtccgta 120
actccgatcc aaaggattgt cctgagcggt gaaaatgccc tgaagatcga catccatgtc 180
atcatcccgt atgaaggtct gagcgccgac caaatggccc agatcgaaaa aatttttaag 240
gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgcactatgg cacactggta 300
atcgacgggg ttacgccgaa catgatcaac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360
gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaaca gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420
gacgagcgcc tgatcacccc cgac 444
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 43
Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Val
1 5 10
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<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 44
ggctccatgc tgttccgagt aaccatcaac 30
<210> 45
<211> 155
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 45
Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Gln Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala
65 70 75 80
Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His
85 90 95
Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr
100 105 110
Pro Asn Met Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val
115 120 125
Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn
130 135 140
Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp
145 150 155
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<211> 465
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 46
atgaaacatc accatcacca tcatgtcttc acactcgaag atttcgttgg ggactgggaa 60
cagacagccg cctacaacct ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgctg 120
cagaatctcg ccgtgtccgt aactccgatc caaaggattg tccggagcgg tgaaaatgcc 180
ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg tatgaaggtc tgagcgccga ccaaatggcc 240
cagatcgaag aggtgtttaa ggtggtgtac cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc 300
ctgccctatg gcacactggt aatcgacggg gttacgccga acatgctgaa ctatttcgga 360
cggccgtatg aaggcatcgc cgtgttcgac ggcaaaaaga tcactgtaac agggaccctg 420
tggaacggca acaaaattat cgacgagcgc ctgatcaccc ccgac 465
<210> 47
<211> 66
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 47
ggctccatgc tgttccgagt aaccatcaac agcgtgagcg gctggcggct gttcaagaag 60
attagc 66
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<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 48
Ser Ser Trp Lys Arg Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser
1 5 10 15
<210> 49
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 49
agcagctgga agcgcggctc catgctgttc cgagtaacca tcaacagc 48
<210> 50
<211> 155
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 50
Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala
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Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His
85 90 95
Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Asp Thr
100 105 110
Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Asp Gly Ile Ala Val
115 120 125
Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn
130 135 140
Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp
145 150 155
<210> 51
<211> 465
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 51
atgaaacatc accatcacca tcatgtcttc acactcgacg atttcgttgg ggactgggaa 60
cagacagccg cctacaacct ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgctg 120
cagaatctcg ccgtgtccgt aactccgatc atgaggattg tccggagcgg tgaaaatgcc 180
ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg tatgaaggtc tgagcgccga ccaaatggcc 240
cagatcgaag aggtgtttaa ggtggtgtac cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc 300
ctgccctatg gcacactggt aatcgacggg gatacgccga acaagctgaa ctatttcgga 360
cggccgtatg atggcatcgc cgtgttcgac ggcaaaaaga tcactgtaac agggaccctg 420
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<210> 52
<211> 155
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 52
Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
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Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His
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Pro Ser Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val
115 120 125
Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn
130 135 140
Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp
145 150 155
<210> 53
<211> 465
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 53
atgaaacatc accatcacca tcatgtcttc acactcgacg atttcgttgg ggactgggaa 60
cagacagccg cctacaacct ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgctg 120
cagaatctcg ccgtgtccgt aactccgatc atgaggattg tccggagcgg tgaaaatgcc 180
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tggaacggca acaaaattat cgacgagcgc ctgatcaccc ccgac 465
<210> 54
<211> 155
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 54
Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala
65 70 75 80
Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His
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Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr
100 105 110
Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Phe Ala Val
115 120 125
Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn
130 135 140
Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp
145 150 155
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<211> 465
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 55
atgaaacatc accatcacca tcatgtcttc acactcgacg atttcgttgg ggactgggaa 60
cagacagccg cctacaacct ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgctg 120
cagaatctcg ccgtgtccgt aactccgatc atgaggattg tccggagcgg tgaaaatgcc 180
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<211> 155
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 56
Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala
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Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His
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Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr
100 105 110
Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val
115 120 125
Cys Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn
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<211> 465
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 57
atgaaacatc accatcacca tcatgtcttc acactcgacg atttcgttgg ggactgggaa 60
cagacagccg cctacaacct ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgctg 120
cagaatctcg ccgtgtccgt aactccgatc atgaggattg tccggagcgg tgaaaatgcc 180
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<211> 155
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 58
Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala
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Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val
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Phe Asp Gly Lys Lys Ile Ser Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn
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Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp
145 150 155
<210> 59
<211> 465
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 59
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<211> 155
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 60
Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
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Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
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145 150 155
<210> 61
<211> 465
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 61
atgaaacatc accatcacca tcatgtcttc acactcgacg atttcgttgg ggactgggaa 60
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<210> 62
<211> 465
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 62
atgaaacatc accatcacca tcatgtcttc acactcgacg atttcgttgg ggactgggaa 60
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tggaacggca acaaaattat cgacgagcgc ctgatcaccc ccgac 465
<210> 63
<211> 149
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<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 63
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1 5 10 15
Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
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Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg
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145
<210> 64
<211> 447
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 64
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gtgttcgacg gcaaaaagat cactaccaca gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420
gacgagcgcc tgatcacccc cgacggc 447
<210> 65
<211> 147
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 65
Met Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala
1 5 10 15
Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
20 25 30
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35 40 45
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115 120 125
Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu
130 135 140
Ile Thr Pro
145
<210> 66
<211> 441
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 66
atggtcttca cactcgacga tttcgttggg gactgggaac agacagccgc ctacaacctg 60
gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgctgc agaatctcgc cgtgtccgta 120
actccgatca tgaggattgt ccggagcggt gaaaatgccc tgaagatcga catccatgtc 180
atcatcccgt atgaaggtct gagcgccgac caaatggccc agatcgaaga ggtgtttaag 240
gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgccctatgg cacactggta 300
atcgacgggg ttacgccgaa caagctgaac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360
gtgttcgacg gcaaaaagat cactaccaca gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420
gacgagcgcc tgatcacccc c 441
<210> 67
<211> 146
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 67
Met Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala
1 5 10 15
Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
20 25 30
Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg
35 40 45
Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr
50 55 60
Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys
65 70 75 80
Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr
85 90 95
Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe
100 105 110
Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr
115 120 125
Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu
130 135 140
Ile Thr
145
<210> 68
<211> 438
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 68
atggtcttca cactcgacga tttcgttggg gactgggaac agacagccgc ctacaacctg 60
gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgctgc agaatctcgc cgtgtccgta 120
actccgatca tgaggattgt ccggagcggt gaaaatgccc tgaagatcga catccatgtc 180
atcatcccgt atgaaggtct gagcgccgac caaatggccc agatcgaaga ggtgtttaag 240
gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgccctatgg cacactggta 300
atcgacgggg ttacgccgaa caagctgaac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360
gtgttcgacg gcaaaaagat cactaccaca gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420
gacgagcgcc tgatcacc 438
<210> 69
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 69
Met Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala
1 5 10 15
Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
20 25 30
Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg
35 40 45
Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr
50 55 60
Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys
65 70 75 80
Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr
85 90 95
Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe
100 105 110
Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr
115 120 125
Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu
130 135 140
Ile Thr Pro Asp Gly Ser
145 150
<210> 70
<211> 450
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 70
atggtcttca cactcgacga tttcgttggg gactgggaac agacagccgc ctacaacctg 60
gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgctgc agaatctcgc cgtgtccgta 120
actccgatca tgaggattgt ccggagcggt gaaaatgccc tgaagatcga catccatgtc 180
atcatcccgt atgaaggtct gagcgccgac caaatggccc agatcgaaga ggtgtttaag 240
gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgccctatgg cacactggta 300
atcgacgggg ttacgccgaa caagctgaac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360
gtgttcgacg gcaaaaagat cactaccaca gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420
gacgagcgcc tgatcacccc cgacggcagc 450
<210> 71
<211> 164
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 71
Met Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala
1 5 10 15
Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu
20 25 30
Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Arg Ser
35 40 45
Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu
50 55 60
Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val
65 70 75 80
Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly
85 90 95
Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Leu Asn Tyr Phe Gly
100 105 110
Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val
115 120 125
Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile
130 135 140
Thr Pro Asp Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser His His
145 150 155 160
His His His His
<210> 72
<211> 495
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 72
atgttcacac tcgaagattt cgttggggac tgggaacaga cagccgccta caacctggac 60
caagtccttg aacagggagg tgtgtccagt ttgctgcaga atctcgccgt gtccgtaact 120
ccgatccaaa ggattgtccg gagcggtgaa aatgccctga agatcgacat ccatgtcatc 180
atcccgtatg aaggtctgag cgccgaccaa atggcccaga tcgaagaggt gtttaaggtg 240
gtgtaccctg tggatgatca tcactttaag gtgatcctgc cctatggcac actggtaatc 300
gacggggtta cgccgaacat gctgaactat ttcggacggc cgtatgaagg catcgccgtg 360
ttcgacggca aaaagatcac tgtaacaggg accctgtgga acggcaacaa aattatcgac 420
gagcgcctga tcacccccga cggctccatg ctgttccgag taaccatcaa cagccatcat 480
caccatcacc actaa 495
<210> 73
<211> 163
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 73
Met Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr
1 5 10 15
Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln
20 25 30
Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Arg Ser Gly
35 40 45
Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly
50 55 60
Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val
65 70 75 80
Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr
85 90 95
Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Leu Asn Tyr Phe Gly Arg
100 105 110
Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr
115 120 125
Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr
130 135 140
Pro Asp Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser His His His
145 150 155 160
His His His
<210> 74
<211> 492
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 74
atgacactcg aagatttcgt tggggactgg gaacagacag ccgcctacaa cctggaccaa 60
gtccttgaac agggaggtgt gtccagtttg ctgcagaatc tcgccgtgtc cgtaactccg 120
atccaaagga ttgtccggag cggtgaaaat gccctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc 180
ccgtatgaag gtctgagcgc cgaccaaatg gcccagatcg aagaggtgtt taaggtggtg 240
taccctgtgg atgatcatca ctttaaggtg atcctgccct atggcacact ggtaatcgac 300
ggggttacgc cgaacatgct gaactatttc ggacggccgt atgaaggcat cgccgtgttc 360
gacggcaaaa agatcactgt aacagggacc ctgtggaacg gcaacaaaat tatcgacgag 420
cgcctgatca cccccgacgg ctccatgctg ttccgagtaa ccatcaacag ccatcatcac 480
catcaccact aa 492
<210> 75
<211> 162
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 75
Met Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn
1 5 10 15
Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn
20 25 30
Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu
35 40 45
Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu
50 55 60
Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr
65 70 75 80
Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu
85 90 95
Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro
100 105 110
Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly
115 120 125
Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro
130 135 140
Asp Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser His His His His
145 150 155 160
His His
<210> 76
<211> 489
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 76
atgctcgaag atttcgttgg ggactgggaa cagacagccg cctacaacct ggaccaagtc 60
cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgctg cagaatctcg ccgtgtccgt aactccgatc 120
caaaggattg tccggagcgg tgaaaatgcc ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg 180
tatgaaggtc tgagcgccga ccaaatggcc cagatcgaag aggtgtttaa ggtggtgtac 240
cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc ctgccctatg gcacactggt aatcgacggg 300
gttacgccga acatgctgaa ctatttcgga cggccgtatg aaggcatcgc cgtgttcgac 360
ggcaaaaaga tcactgtaac agggaccctg tggaacggca acaaaattat cgacgagcgc 420
ctgatcaccc ccgacggctc catgctgttc cgagtaacca tcaacagcca tcatcaccat 480
caccactaa 489
<210> 77
<211> 161
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 77
Met Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu
20 25 30
Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn
35 40 45
Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser
50 55 60
Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro
65 70 75 80
Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val
85 90 95
Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr
100 105 110
Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr
115 120 125
Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp
130 135 140
Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser His His His His His
145 150 155 160
His
<210> 78
<211> 486
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 78
atggaagatt tcgttgggga ctgggaacag acagccgcct acaacctgga ccaagtcctt 60
gaacagggag gtgtgtccag tttgctgcag aatctcgccg tgtccgtaac tccgatccaa 120
aggattgtcc ggagcggtga aaatgccctg aagatcgaca tccatgtcat catcccgtat 180
gaaggtctga gcgccgacca aatggcccag atcgaagagg tgtttaaggt ggtgtaccct 240
gtggatgatc atcactttaa ggtgatcctg ccctatggca cactggtaat cgacggggtt 300
acgccgaaca tgctgaacta tttcggacgg ccgtatgaag gcatcgccgt gttcgacggc 360
aaaaagatca ctgtaacagg gaccctgtgg aacggcaaca aaattatcga cgagcgcctg 420
atcacccccg acggctccat gctgttccga gtaaccatca acagccatca tcaccatcac 480
cactaa 486
<210> 79
<211> 174
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 79
Met Phe Lys Lys Ile Ser Gly Ser Ser Gly Val Phe Thr Leu Glu Asp
1 5 10 15
Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val
20 25 30
Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser
35 40 45
Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys
50 55 60
Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln
65 70 75 80
Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp
85 90 95
His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly
100 105 110
Val Thr Pro Asn Met Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile
115 120 125
Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn
130 135 140
Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp Gly Ser Met
145 150 155 160
Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser His His His His His His
165 170
<210> 80
<211> 525
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 80
atgttcaaga agattagcgg ctcgagcggt gtcttcacac tcgaagattt cgttggggac 60
tgggaacaga cagccgccta caacctggac caagtccttg aacagggagg tgtgtccagt 120
ttgctgcaga atctcgccgt gtccgtaact ccgatccaaa ggattgtccg gagcggtgaa 180
aatgccctga agatcgacat ccatgtcatc atcccgtatg aaggtctgag cgccgaccaa 240
atggcccaga tcgaagaggt gtttaaggtg gtgtaccctg tggatgatca tcactttaag 300
gtgatcctgc cctatggcac actggtaatc gacggggtta cgccgaacat gctgaactat 360
ttcggacggc cgtatgaagg catcgccgtg ttcgacggca aaaagatcac tgtaacaggg 420
accctgtgga acggcaacaa aattatcgac gagcgcctga tcacccccga cggctccatg 480
ctgttccgag taaccatcaa cagccatcat caccatcacc actaa 525
<210> 81
<211> 173
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 81
Met Lys Lys Ile Ser Gly Ser Ser Gly Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe
1 5 10 15
Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu
20 25 30
Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val
35 40 45
Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile
50 55 60
Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met
65 70 75 80
Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His
85 90 95
His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val
100 105 110
Thr Pro Asn Met Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala
115 120 125
Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly
130 135 140
Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp Gly Ser Met Leu
145 150 155 160
Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser His His His His His His
165 170
<210> 82
<211> 522
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 82
atgaagaaga ttagcggctc gagcggtgtc ttcacactcg aagatttcgt tggggactgg 60
gaacagacag ccgcctacaa cctggaccaa gtccttgaac agggaggtgt gtccagtttg 120
ctgcagaatc tcgccgtgtc cgtaactccg atccaaagga ttgtccggag cggtgaaaat 180
gccctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc ccgtatgaag gtctgagcgc cgaccaaatg 240
gcccagatcg aagaggtgtt taaggtggtg taccctgtgg atgatcatca ctttaaggtg 300
atcctgccct atggcacact ggtaatcgac ggggttacgc cgaacatgct gaactatttc 360
ggacggccgt atgaaggcat cgccgtgttc gacggcaaaa agatcactgt aacagggacc 420
ctgtggaacg gcaacaaaat tatcgacgag cgcctgatca cccccgacgg ctccatgctg 480
ttccgagtaa ccatcaacag ccatcatcac catcaccact aa 522
<210> 83
<211> 172
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 83
Met Lys Ile Ser Gly Ser Ser Gly Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Gln Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala
65 70 75 80
Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His
85 90 95
Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr
100 105 110
Pro Asn Met Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val
115 120 125
Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn
130 135 140
Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp Gly Ser Met Leu Phe
145 150 155 160
Arg Val Thr Ile Asn Ser His His His His His His
165 170
<210> 84
<211> 519
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 84
atgaagatta gcggctcgag cggtgtcttc acactcgaag atttcgttgg ggactgggaa 60
cagacagccg cctacaacct ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgctg 120
cagaatctcg ccgtgtccgt aactccgatc caaaggattg tccggagcgg tgaaaatgcc 180
ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg tatgaaggtc tgagcgccga ccaaatggcc 240
cagatcgaag aggtgtttaa ggtggtgtac cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc 300
ctgccctatg gcacactggt aatcgacggg gttacgccga acatgctgaa ctatttcgga 360
cggccgtatg aaggcatcgc cgtgttcgac ggcaaaaaga tcactgtaac agggaccctg 420
tggaacggca acaaaattat cgacgagcgc ctgatcaccc ccgacggctc catgctgttc 480
cgagtaacca tcaacagcca tcatcaccat caccactaa 519
<210> 85
<211> 171
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 85
Met Ile Ser Gly Ser Ser Gly Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly
1 5 10 15
Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln
20 25 30
Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro
35 40 45
Ile Gln Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile
50 55 60
His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln
65 70 75 80
Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe
85 90 95
Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro
100 105 110
Asn Met Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe
115 120 125
Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys
130 135 140
Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp Gly Ser Met Leu Phe Arg
145 150 155 160
Val Thr Ile Asn Ser His His His His His His
165 170
<210> 86
<211> 516
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 86
atgattagcg gctcgagcgg tgtcttcaca ctcgaagatt tcgttgggga ctgggaacag 60
acagccgcct acaacctgga ccaagtcctt gaacagggag gtgtgtccag tttgctgcag 120
aatctcgccg tgtccgtaac tccgatccaa aggattgtcc ggagcggtga aaatgccctg 180
aagatcgaca tccatgtcat catcccgtat gaaggtctga gcgccgacca aatggcccag 240
atcgaagagg tgtttaaggt ggtgtaccct gtggatgatc atcactttaa ggtgatcctg 300
ccctatggca cactggtaat cgacggggtt acgccgaaca tgctgaacta tttcggacgg 360
ccgtatgaag gcatcgccgt gttcgacggc aaaaagatca ctgtaacagg gaccctgtgg 420
aacggcaaca aaattatcga cgagcgcctg atcacccccg acggctccat gctgttccga 480
gtaaccatca acagccatca tcaccatcac cactaa 516
<210> 87
<211> 170
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 87
Met Ser Gly Ser Ser Gly Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp
1 5 10 15
Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly
20 25 30
Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile
35 40 45
Gln Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His
50 55 60
Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile
65 70 75 80
Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys
85 90 95
Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn
100 105 110
Met Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp
115 120 125
Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile
130 135 140
Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp Gly Ser Met Leu Phe Arg Val
145 150 155 160
Thr Ile Asn Ser His His His His His His
165 170
<210> 88
<211> 513
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 88
atgagcggct cgagcggtgt cttcacactc gaagatttcg ttggggactg ggaacagaca 60
gccgcctaca acctggacca agtccttgaa cagggaggtg tgtccagttt gctgcagaat 120
ctcgccgtgt ccgtaactcc gatccaaagg attgtccgga gcggtgaaaa tgccctgaag 180
atcgacatcc atgtcatcat cccgtatgaa ggtctgagcg ccgaccaaat ggcccagatc 240
gaagaggtgt ttaaggtggt gtaccctgtg gatgatcatc actttaaggt gatcctgccc 300
tatggcacac tggtaatcga cggggttacg ccgaacatgc tgaactattt cggacggccg 360
tatgaaggca tcgccgtgtt cgacggcaaa aagatcactg taacagggac cctgtggaac 420
ggcaacaaaa ttatcgacga gcgcctgatc acccccgacg gctccatgct gttccgagta 480
accatcaaca gccatcatca ccatcaccac taa 513
<210> 89
<211> 158
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 89
Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala
65 70 75 80
Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His
85 90 95
Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr
100 105 110
Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val
115 120 125
Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn
130 135 140
Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp Gly Ser Met
145 150 155
<210> 90
<211> 477
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 90
atgaaacatc accatcacca tcatgtcttc acactcgacg atttcgttgg ggactgggaa 60
cagacagccg cctacaacct ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgctg 120
cagaatctcg ccgtgtccgt aactccgatc atgaggattg tccggagcgg tgaaaatgcc 180
ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg tatgaaggtc tgagcgccga ccaaatggcc 240
cagatcgaag aggtgtttaa ggtggtgtac cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc 300
ctgccctatg gcacactggt aatcgacggg gttacgccga acaagctgaa ctatttcgga 360
cggccgtatg aaggcatcgc cgtgttcgac ggcaaaaaga tcactaccac agggaccctg 420
tggaacggca acaaaattat cgacgagcgc ctgatcaccc ccgacggcag catgtaa 477
<210> 91
<211> 159
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 91
Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala
65 70 75 80
Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His
85 90 95
Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr
100 105 110
Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val
115 120 125
Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn
130 135 140
Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp Gly Ser Met Leu
145 150 155
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<211> 480
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 92
atgaaacatc accatcacca tcatgtcttc acactcgacg atttcgttgg ggactgggaa 60
cagacagccg cctacaacct ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgctg 120
cagaatctcg ccgtgtccgt aactccgatc atgaggattg tccggagcgg tgaaaatgcc 180
ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg tatgaaggtc tgagcgccga ccaaatggcc 240
cagatcgaag aggtgtttaa ggtggtgtac cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc 300
ctgccctatg gcacactggt aatcgacggg gttacgccga acaagctgaa ctatttcgga 360
cggccgtatg aaggcatcgc cgtgttcgac ggcaaaaaga tcactaccac agggaccctg 420
tggaacggca acaaaattat cgacgagcgc ctgatcaccc ccgacggcag catgctgtaa 480
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<211> 160
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 93
Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala
65 70 75 80
Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His
85 90 95
Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr
100 105 110
Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val
115 120 125
Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn
130 135 140
Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp Gly Ser Met Leu Phe
145 150 155 160
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<211> 483
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 94
atgaaacatc accatcacca tcatgtcttc acactcgacg atttcgttgg ggactgggaa 60
cagacagccg cctacaacct ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgctg 120
cagaatctcg ccgtgtccgt aactccgatc atgaggattg tccggagcgg tgaaaatgcc 180
ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg tatgaaggtc tgagcgccga ccaaatggcc 240
cagatcgaag aggtgtttaa ggtggtgtac cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc 300
ctgccctatg gcacactggt aatcgacggg gttacgccga acaagctgaa ctatttcgga 360
cggccgtatg aaggcatcgc cgtgttcgac ggcaaaaaga tcactaccac agggaccctg 420
tggaacggca acaaaattat cgacgagcgc ctgatcaccc ccgacggcag catgctgttc 480
taa 483
<210> 95
<211> 152
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 95
Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala
65 70 75 80
Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His
85 90 95
Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr
100 105 110
Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val
115 120 125
Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn
130 135 140
Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile
145 150
<210> 96
<211> 459
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 96
atgaaacatc accatcacca tcatgtcttc acactcgacg atttcgttgg ggactgggaa 60
cagacagccg cctacaacct ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgctg 120
cagaatctcg ccgtgtccgt aactccgatc atgaggattg tccggagcgg tgaaaatgcc 180
ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg tatgaaggtc tgagcgccga ccaaatggcc 240
cagatcgaag aggtgtttaa ggtggtgtac cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc 300
ctgccctatg gcacactggt aatcgacggg gttacgccga acaagctgaa ctatttcgga 360
cggccgtatg aaggcatcgc cgtgttcgac ggcaaaaaga tcactaccac agggaccctg 420
tggaacggca acaaaattat cgacgagcgc ctgatctaa 459
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<211> 151
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 97
Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala
65 70 75 80
Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His
85 90 95
Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr
100 105 110
Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val
115 120 125
Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn
130 135 140
Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu
145 150
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<211> 456
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 98
atgaaacatc accatcacca tcatgtcttc acactcgacg atttcgttgg ggactgggaa 60
cagacagccg cctacaacct ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgctg 120
cagaatctcg ccgtgtccgt aactccgatc atgaggattg tccggagcgg tgaaaatgcc 180
ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg tatgaaggtc tgagcgccga ccaaatggcc 240
cagatcgaag aggtgtttaa ggtggtgtac cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc 300
ctgccctatg gcacactggt aatcgacggg gttacgccga acaagctgaa ctatttcgga 360
cggccgtatg aaggcatcgc cgtgttcgac ggcaaaaaga tcactaccac agggaccctg 420
tggaacggca acaaaattat cgacgagcgc ctgtaa 456
<210> 99
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 99
Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala
65 70 75 80
Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His
85 90 95
Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr
100 105 110
Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val
115 120 125
Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn
130 135 140
Lys Ile Ile Asp Glu Arg
145 150
<210> 100
<211> 453
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 100
atgaaacatc accatcacca tcatgtcttc acactcgacg atttcgttgg ggactgggaa 60
cagacagccg cctacaacct ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgctg 120
cagaatctcg ccgtgtccgt aactccgatc atgaggattg tccggagcgg tgaaaatgcc 180
ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg tatgaaggtc tgagcgccga ccaaatggcc 240
cagatcgaag aggtgtttaa ggtggtgtac cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc 300
ctgccctatg gcacactggt aatcgacggg gttacgccga acaagctgaa ctatttcgga 360
cggccgtatg aaggcatcgc cgtgttcgac ggcaaaaaga tcactaccac agggaccctg 420
tggaacggca acaaaattat cgacgagcgc taa 453
<210> 101
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 101
Met Val Ala Ile Leu Trp His Glu Met Trp His Glu Gly Leu Glu Glu
1 5 10 15
Ala Ser Arg Leu Tyr Phe Gly Glu Arg Asn Val Lys Gly Met Phe Glu
20 25 30
Val Leu Glu Pro Leu His Ala Met Met Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu
35 40 45
Lys Glu Thr Ser Phe Asn Gln Ala Tyr Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala
50 55 60
Gln Glu Trp Cys Arg Lys Tyr Met Lys Ser Gly Asn Val Lys Asp Leu
65 70 75 80
Thr Gln Ala Trp Asp Leu Tyr Tyr His Val Phe Arg Arg Ile Ser Gly
85 90 95
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ser Ser Gly Gly Ala Ile
100 105 110
Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
115 120
<210> 102
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 102
atggtggcca tcctctggca tgagatgtgg catgaaggcc tggaagaggc atctcgtttg 60
tactttgggg aaaggaacgt gaaaggcatg tttgaggtgc tggagccctt gcatgctatg 120
atggaacggg gcccccagac tctgaaggaa acatccttta atcaggccta tggtcgagat 180
ttaatggagg cccaagagtg gtgcaggaag tacatgaaat cagggaatgt caaggacctc 240
acccaagcct gggacctcta ttatcatgtg ttccgacgaa tcagtggtgg ttcaggtggt 300
ggcgggagcg gtggctcgag cagcggtgga gcgatcgtga gcggctggcg gctgttcaag 360
aagattagct aa 372
<210> 103
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 103
Met Val Ala Ile Leu Trp His Glu Met Trp His Glu Gly Leu Glu Glu
1 5 10 15
Ala Ser Arg Leu Tyr Phe Gly Glu Arg Asn Val Lys Gly Met Phe Glu
20 25 30
Val Leu Glu Pro Leu His Ala Met Met Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu
35 40 45
Lys Glu Thr Ser Phe Asn Gln Ala Tyr Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala
50 55 60
Gln Glu Trp Cys Arg Lys Tyr Met Lys Ser Gly Asn Val Lys Asp Leu
65 70 75 80
Thr Gln Ala Trp Asp Leu Tyr Tyr His Val Phe Arg Arg Ile Ser Gly
85 90 95
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ser Ser Gly Gly Ala Ile
100 105 110
Val Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
115 120 125
<210> 104
<211> 378
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 104
atggtggcca tcctctggca tgagatgtgg catgaaggcc tggaagaggc atctcgtttg 60
tactttgggg aaaggaacgt gaaaggcatg tttgaggtgc tggagccctt gcatgctatg 120
atggaacggg gcccccagac tctgaaggaa acatccttta atcaggccta tggtcgagat 180
ttaatggagg cccaagagtg gtgcaggaag tacatgaaat cagggaatgt caaggacctc 240
acccaagcct gggacctcta ttatcatgtg ttccgacgaa tcagtggtgg ttcaggtggt 300
ggcgggagcg gtggctcgag cagcggtgga gcgatcgtta gcgttagcgg ctggcgcctg 360
ttcaagaaga tcagctaa 378
<210> 105
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 105
Met Val Ala Ile Leu Trp His Glu Met Trp His Glu Gly Leu Glu Glu
1 5 10 15
Ala Ser Arg Leu Tyr Phe Gly Glu Arg Asn Val Lys Gly Met Phe Glu
20 25 30
Val Leu Glu Pro Leu His Ala Met Met Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu
35 40 45
Lys Glu Thr Ser Phe Asn Gln Ala Tyr Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala
50 55 60
Gln Glu Trp Cys Arg Lys Tyr Met Lys Ser Gly Asn Val Lys Asp Leu
65 70 75 80
Thr Gln Ala Trp Asp Leu Tyr Tyr His Val Phe Arg Arg Ile Ser Gly
85 90 95
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ser Ser Gly Gly Ala Ile
100 105 110
Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser His His His His His
115 120 125
His
<210> 106
<211> 390
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 106
atggtggcca tcctctggca tgagatgtgg catgaaggcc tggaagaggc atctcgtttg 60
tactttgggg aaaggaacgt gaaaggcatg tttgaggtgc tggagccctt gcatgctatg 120
atggaacggg gcccccagac tctgaaggaa acatccttta atcaggccta tggtcgagat 180
ttaatggagg cccaagagtg gtgcaggaag tacatgaaat cagggaatgt caaggacctc 240
acccaagcct gggacctcta ttatcatgtg ttccgacgaa tcagtggtgg ttcaggtggt 300
ggcgggagcg gtggctcgag cagcggtgga gcgatcgtga gcggctggcg gctgttcaag 360
aagattagcc atcatcacca tcaccactaa 390
<210> 107
<211> 131
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 107
Met Val Ala Ile Leu Trp His Glu Met Trp His Glu Gly Leu Glu Glu
1 5 10 15
Ala Ser Arg Leu Tyr Phe Gly Glu Arg Asn Val Lys Gly Met Phe Glu
20 25 30
Val Leu Glu Pro Leu His Ala Met Met Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu
35 40 45
Lys Glu Thr Ser Phe Asn Gln Ala Tyr Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala
50 55 60
Gln Glu Trp Cys Arg Lys Tyr Met Lys Ser Gly Asn Val Lys Asp Leu
65 70 75 80
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85 90 95
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ser Ser Gly Gly Ala Ile
100 105 110
Val Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser His His His
115 120 125
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<211> 396
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 108
atggtggcca tcctctggca tgagatgtgg catgaaggcc tggaagaggc atctcgtttg 60
tactttgggg aaaggaacgt gaaaggcatg tttgaggtgc tggagccctt gcatgctatg 120
atggaacggg gcccccagac tctgaaggaa acatccttta atcaggccta tggtcgagat 180
ttaatggagg cccaagagtg gtgcaggaag tacatgaaat cagggaatgt caaggacctc 240
acccaagcct gggacctcta ttatcatgtg ttccgacgaa tcagtggtgg ttcaggtggt 300
ggcgggagcg gtggctcgag cagcggtgga gcgatcgtta gcgtgagcgg ctggcggctg 360
ttcaagaaga ttagccatca tcaccatcac cactaa 396
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<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 109
Met Lys His His His His His His Val Ala Ile Leu Trp His Glu Met
1 5 10 15
Trp His Glu Gly Leu Glu Glu Ala Ser Arg Leu Tyr Phe Gly Glu Arg
20 25 30
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35 40 45
Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu Lys Glu Thr Ser Phe Asn Gln Ala Tyr
50 55 60
Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala Gln Glu Trp Cys Arg Lys Tyr Met Lys
65 70 75 80
Ser Gly Asn Val Lys Asp Leu Thr Gln Ala Trp Asp Leu Tyr Tyr His
85 90 95
Val Phe Arg Arg Ile Ser Gly Gly Ser Gly Gly Val Ser Gly Trp Arg
100 105 110
Leu Phe Lys Lys Ile Ser
115
<210> 110
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 110
atgaaacatc accatcacca tcatgtggcc atcctctggc atgagatgtg gcatgaaggc 60
ctggaagagg catctcgttt gtactttggg gaaaggaacg tgaaaggcat gtttgaggtg 120
ctggagccct tgcatgctat gatggaacgg ggcccccaga ctctgaagga aacatccttt 180
aatcaggcct atggtcgaga tttaatggag gcccaagagt ggtgcaggaa gtacatgaaa 240
tcagggaatg tcaaggacct cacccaagcc tgggacctct attatcatgt gttccgacga 300
atcagtggtg gttcaggtgg tgtgagcggc tggcggctgt tcaagaagat tagctaa 357
<210> 111
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 111
Met Lys His His His His His His Val Ala Ile Leu Trp His Glu Met
1 5 10 15
Trp His Glu Gly Leu Glu Glu Ala Ser Arg Leu Tyr Phe Gly Glu Arg
20 25 30
Asn Val Lys Gly Met Phe Glu Val Leu Glu Pro Leu His Ala Met Met
35 40 45
Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu Lys Glu Thr Ser Phe Asn Gln Ala Tyr
50 55 60
Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala Gln Glu Trp Cys Arg Lys Tyr Met Lys
65 70 75 80
Ser Gly Asn Val Lys Asp Leu Thr Gln Ala Trp Asp Leu Tyr Tyr His
85 90 95
Val Phe Arg Arg Ile Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
100 105 110
Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
115 120
<210> 112
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 112
atgaaacatc accatcacca tcatgtggcc atcctctggc atgagatgtg gcatgaaggc 60
ctggaagagg catctcgttt gtactttggg gaaaggaacg tgaaaggcat gtttgaggtg 120
ctggagccct tgcatgctat gatggaacgg ggcccccaga ctctgaagga aacatccttt 180
aatcaggcct atggtcgaga tttaatggag gcccaagagt ggtgcaggaa gtacatgaaa 240
tcagggaatg tcaaggacct cacccaagcc tgggacctct attatcatgt gttccgacga 300
atcagtggtg gttcaggtgg tggcgggagc ggtggcgtga gcggctggcg gctgttcaag 360
aagattagct aa 372
<210> 113
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 113
Met Lys His His His His His His Val Ala Ile Leu Trp His Glu Met
1 5 10 15
Trp His Glu Gly Leu Glu Glu Ala Ser Arg Leu Tyr Phe Gly Glu Arg
20 25 30
Asn Val Lys Gly Met Phe Glu Val Leu Glu Pro Leu His Ala Met Met
35 40 45
Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu Lys Glu Thr Ser Phe Asn Gln Ala Tyr
50 55 60
Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala Gln Glu Trp Cys Arg Lys Tyr Met Lys
65 70 75 80
Ser Gly Asn Val Lys Asp Leu Thr Gln Ala Trp Asp Leu Tyr Tyr His
85 90 95
Val Phe Arg Arg Ile Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Ser Ser Gly Gly Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
115 120 125
<210> 114
<211> 387
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 114
atgaaacatc accatcacca tcatgtggcc atcctctggc atgagatgtg gcatgaaggc 60
ctggaagagg catctcgttt gtactttggg gaaaggaacg tgaaaggcat gtttgaggtg 120
ctggagccct tgcatgctat gatggaacgg ggcccccaga ctctgaagga aacatccttt 180
aatcaggcct atggtcgaga tttaatggag gcccaagagt ggtgcaggaa gtacatgaaa 240
tcagggaatg tcaaggacct cacccaagcc tgggacctct attatcatgt gttccgacga 300
atcagtggtg gttcaggtgg tggcgggagc ggtggctcga gcagcggtgg agtgagcggc 360
tggcggctgt tcaagaagat tagctaa 387
<210> 115
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 115
Met Lys His His His His His His Val Ala Ile Leu Trp His Glu Met
1 5 10 15
Trp His Glu Gly Leu Glu Glu Ala Ser Arg Leu Tyr Phe Gly Glu Arg
20 25 30
Asn Val Lys Gly Met Phe Glu Val Leu Glu Pro Leu His Ala Met Met
35 40 45
Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu Lys Glu Thr Ser Phe Asn Gln Ala Tyr
50 55 60
Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala Gln Glu Trp Cys Arg Lys Tyr Met Lys
65 70 75 80
Ser Gly Asn Val Lys Asp Leu Thr Gln Ala Trp Asp Leu Tyr Tyr His
85 90 95
Val Phe Arg Arg Ile Ser Gly Gly Ser Gly Gly Val Ser Val Ser Gly
100 105 110
Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
115 120
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<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 116
atgaaacatc accatcacca tcatgtggcc atcctctggc atgagatgtg gcatgaaggc 60
ctggaagagg catctcgttt gtactttggg gaaaggaacg tgaaaggcat gtttgaggtg 120
ctggagccct tgcatgctat gatggaacgg ggcccccaga ctctgaagga aacatccttt 180
aatcaggcct atggtcgaga tttaatggag gcccaagagt ggtgcaggaa gtacatgaaa 240
tcagggaatg tcaaggacct cacccaagcc tgggacctct attatcatgt gttccgacga 300
atcagtggtg gttcaggtgg tgttagcgtt agcggctggc gcctgttcaa gaagatcagc 360
taa 363
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<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 117
Met Lys His His His His His His Val Ala Ile Leu Trp His Glu Met
1 5 10 15
Trp His Glu Gly Leu Glu Glu Ala Ser Arg Leu Tyr Phe Gly Glu Arg
20 25 30
Asn Val Lys Gly Met Phe Glu Val Leu Glu Pro Leu His Ala Met Met
35 40 45
Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu Lys Glu Thr Ser Phe Asn Gln Ala Tyr
50 55 60
Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala Gln Glu Trp Cys Arg Lys Tyr Met Lys
65 70 75 80
Ser Gly Asn Val Lys Asp Leu Thr Gln Ala Trp Asp Leu Tyr Tyr His
85 90 95
Val Phe Arg Arg Ile Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
100 105 110
Val Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
115 120 125
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
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atgaaacatc accatcacca tcatgtggcc atcctctggc atgagatgtg gcatgaaggc 60
ctggaagagg catctcgttt gtactttggg gaaaggaacg tgaaaggcat gtttgaggtg 120
ctggagccct tgcatgctat gatggaacgg ggcccccaga ctctgaagga aacatccttt 180
aatcaggcct atggtcgaga tttaatggag gcccaagagt ggtgcaggaa gtacatgaaa 240
tcagggaatg tcaaggacct cacccaagcc tgggacctct attatcatgt gttccgacga 300
atcagtggtg gttcaggtgg tggcgggagc ggtggcgtta gcgttagcgg ctggcgcctg 360
ttcaagaaga tcagctaa 378
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<211> 130
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 119
Met Lys His His His His His His Val Ala Ile Leu Trp His Glu Met
1 5 10 15
Trp His Glu Gly Leu Glu Glu Ala Ser Arg Leu Tyr Phe Gly Glu Arg
20 25 30
Asn Val Lys Gly Met Phe Glu Val Leu Glu Pro Leu His Ala Met Met
35 40 45
Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu Lys Glu Thr Ser Phe Asn Gln Ala Tyr
50 55 60
Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala Gln Glu Trp Cys Arg Lys Tyr Met Lys
65 70 75 80
Ser Gly Asn Val Lys Asp Leu Thr Gln Ala Trp Asp Leu Tyr Tyr His
85 90 95
Val Phe Arg Arg Ile Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Ser Ser Gly Gly Val Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys
115 120 125
Ile Ser
130
<210> 120
<211> 393
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 120
atgaaacatc accatcacca tcatgtggcc atcctctggc atgagatgtg gcatgaaggc 60
ctggaagagg catctcgttt gtactttggg gaaaggaacg tgaaaggcat gtttgaggtg 120
ctggagccct tgcatgctat gatggaacgg ggcccccaga ctctgaagga aacatccttt 180
aatcaggcct atggtcgaga tttaatggag gcccaagagt ggtgcaggaa gtacatgaaa 240
tcagggaatg tcaaggacct cacccaagcc tgggacctct attatcatgt gttccgacga 300
atcagtggtg gttcaggtgg tggcgggagc ggtggctcga gcagcggtgg agttagcgtt 360
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 121
Met Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Ser Ser Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Val Gln Val Glu
20 25 30
Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro Lys Arg Gly Gln Thr
35 40 45
Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp Gly Lys Lys Phe Asp
50 55 60
Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe Met Leu Gly Lys Gln
65 70 75 80
Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala Gln Met Ser Val Gly
85 90 95
Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr
100 105 110
Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr Leu Val Phe Asp Val
115 120 125
Glu Leu Leu Lys Leu Glu
130
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<211> 405
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 122
atgggctcca tgctgttccg agtaaccatc aacagctcga gttcaggtgg tggcgggagc 60
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aagaaatttg attcctcccg ggacagaaac aagcccttta agtttatgct aggcaagcag 240
gaggtgatcc gaggctggga agaaggggtt gcccagatga gtgtgggtca gagagccaaa 300
ctgactatat ctccagatta tgcctatggt gccactgggc acccaggcat catcccacca 360
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<211> 136
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 123
Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe
1 5 10 15
Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu
20 25 30
Asp Gly Lys Lys Phe Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys
35 40 45
Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val
50 55 60
Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp
65 70 75 80
Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala
85 90 95
Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Gly Gly Ser Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ser Ser Gly Gly Ala Ile Gly Ser Met
115 120 125
Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser
130 135
<210> 124
<211> 408
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 124
atgggagtgc aggtggaaac catctcccca ggagacgggc gcaccttccc caagcgcggc 60
cagacctgcg tggtgcacta caccgggatg cttgaagatg gaaagaaatt tgattcctcc 120
cgggacagaa acaagccctt taagtttatg ctaggcaagc aggaggtgat ccgaggctgg 180
gaagaagggg ttgcccagat gagtgtgggt cagagagcca aactgactat atctccagat 240
tatgcctatg gtgccactgg gcacccaggc atcatcccac cacatgccac tctcgtcttc 300
gatgtggagc ttctaaaact ggaaggtggt tcaggtggtg gcgggagcgg tggctcgagc 360
agcggtggag cgatcggctc catgctgttc cgagtaacca tcaacagc 408
<210> 125
<211> 165
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 125
Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala
1 5 10 15
Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
20 25 30
Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Arg
35 40 45
Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr
50 55 60
Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys
65 70 75 80
Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr
85 90 95
Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Leu Asn Tyr Phe
100 105 110
Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr
115 120 125
Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu
130 135 140
Ile Thr Pro Asp Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser His
145 150 155 160
His His His His His
165
<210> 126
<211> 498
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 126
atggtcttca cactcgaaga tttcgttggg gactgggaac agacagccgc ctacaacctg 60
gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgctgc agaatctcgc cgtgtccgta 120
actccgatcc aaaggattgt ccggagcggt gaaaatgccc tgaagatcga catccatgtc 180
atcatcccgt atgaaggtct gagcgccgac caaatggccc agatcgaaga ggtgtttaag 240
gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgccctatgg cacactggta 300
atcgacgggg ttacgccgaa catgctgaac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360
gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaaca gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420
gacgagcgcc tgatcacccc cgacggctcc atgctgttcc gagtaaccat caacagccat 480
catcaccatc accactaa 498
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 127
Asn Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser Asn
1 5 10
<210> 128
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 128
Asn Val Thr Gly Tyr Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser Asn
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 129
Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser Asn
1 5 10
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 130
Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser Asn
1 5 10
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<211> 10
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<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 131
Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser Asn
1 5 10
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 132
Val Thr Gly Tyr Arg Leu Phe Glu Lys Ile Ser
1 5 10
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 133
Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
1 5 10
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<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 134
Val Ser Gly Trp Arg Leu
1 5
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<223> 合成
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Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe
1 5
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<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
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Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 137
Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys
1 5
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<220>
<223> 合成
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Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile
1 5 10
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<211> 11
<212> PRT
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<220>
<223> 合成
<400> 139
Val Ser Gly Trp Arg Leu Tyr Lys Lys Ile Ser
1 5 10
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 140
Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val Ser Gly Trp Ala
1 5 10 15
Leu Phe Lys Lys Ile Ser
20
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<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 141
Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val Thr Gly Tyr Arg
1 5 10 15
Leu Phe Glu Glu Ile Leu
20
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<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 142
Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Ser Ser Trp Lys Arg
1 5 10 15
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 143
Val Ser Gly Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
1 5 10
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 144
Val Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
1 5 10
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<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 145
Ser Ser Trp Lys Arg Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser
1 5 10 15
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<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 146
Ser Ser Trp Lys Arg Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser
1 5 10
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 147
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1 5 10 15
Ser
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<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 148
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1 5 10 15
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 149
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1 5 10 15
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<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 150
Ser Ser Trp Lys Arg Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val
1 5 10 15
<210> 151
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 151
Ser Ser Trp Lys Arg Asp Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn
1 5 10 15
Ser Val
<210> 152
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 152
Ser Ser Trp Lys Arg Pro Asp Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile
1 5 10 15
Asn Ser Val
<210> 153
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 153
Ser Ser Trp Lys Arg Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val
1 5 10 15
Ser
<210> 154
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 154
Ser Ser Trp Lys Arg Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val Ser
1 5 10 15
<210> 155
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 155
Ser Ser Trp Lys Arg Asp Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn
1 5 10 15
Ser Val Ser
<210> 156
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 156
Ser Ser Trp Lys Arg Pro Asp Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile
1 5 10 15
Asn Ser Val Ser
20
<210> 157
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 157
Ser Ser Trp Lys Arg Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn
1 5 10 15
<210> 158
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 158
Ser Ser Trp Lys Arg Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile
1 5 10
<210> 159
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 159
Ser Ser Trp Lys Arg Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn
1 5 10
<210> 160
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 160
Ser Ser Trp Lys Arg Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn
1 5 10
<210> 161
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 161
Ser Ser Trp Lys Arg Asp Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn
1 5 10 15
<210> 162
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 162
Ser Ser Trp Lys Arg Pro Asp Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile
1 5 10 15
Asn
<210> 163
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 163
Ser Ser Trp Lys Arg Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile
1 5 10
<210> 164
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 164
Ser Ser Trp Lys Arg Met Leu Phe Arg Val Thr Ile
1 5 10
<210> 165
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 165
Ser Ser Trp Lys Arg Asp Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile
1 5 10 15
<210> 166
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 166
Ser Ser Trp Lys Arg Pro Asp Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile
1 5 10 15
<210> 167
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 167
Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser Val Phe Thr Leu
1 5 10 15
<210> 168
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 168
Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser Val Phe Thr
1 5 10
<210> 169
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 169
Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser Val Phe
1 5 10
<210> 170
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 170
Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser Val
1 5 10
<210> 171
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 171
Val Ser Gly Trp Arg Leu Cys Lys Lys Ile Ser
1 5 10
<210> 172
<211> 22
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<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 172
Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser Gly Ser Met Leu Phe
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Asn Ser
20
<210> 173
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 173
Ser Ser Trp Lys Arg Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser
1 5 10
<210> 174
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 174
Ser Ser Trp Lys Arg Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser
1 5 10
<210> 175
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 175
Ser Ser Trp Lys Arg Arg Val Thr Ile Asn Ser
1 5 10
<210> 176
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 176
Ser Ser Trp Lys Arg Thr Pro Asp Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr
1 5 10 15
Ile Asn Ser
<210> 177
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 177
Ser Ser Trp Lys Arg Ile Thr Pro Asp Gly Ser Met Leu Phe Arg Val
1 5 10 15
Thr Ile Asn Ser
20
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<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 178
Ser Ser Trp Lys Arg Leu Ile Thr Pro Asp Gly Ser Met Leu Phe Arg
1 5 10 15
Val Thr Ile Asn Ser
20
<210> 179
<211> 16
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<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 179
Ser Ser Arg Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Trp Lys
1 5 10 15
<210> 180
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 180
Ser Lys Arg Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Trp Ser
1 5 10 15
<210> 181
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 181
Ser Trp Arg Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser
1 5 10
<210> 182
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 182
Ser Ser Arg Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Trp Lys
1 5 10
<210> 183
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 183
Ser Ser Trp Lys Arg Gly Ser Met Leu Tyr Arg Val Thr Ile Asn Ser
1 5 10 15
<210> 184
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 184
Ser Ser Trp Lys Arg Gly Ser Met Leu Trp Arg Val Thr Ile Asn Ser
1 5 10 15
<210> 185
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 185
Ser Ser Trp Lys Arg Gly Ser Met Leu His Arg Val Thr Ile Asn Ser
1 5 10 15
<210> 186
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 186
Ser Ser Trp Lys Arg Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser
1 5 10 15
<210> 187
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 187
Ser Ser Trp Lys Arg Gly Ser Lys Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser
1 5 10 15
<210> 188
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 188
Ser Ser Trp Lys Arg Gly Ser Arg Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser
1 5 10 15
<210> 189
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 189
Ser Ser Trp Lys Arg Gly Ser Phe Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser
1 5 10 15
<210> 190
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 190
Ser Ser Trp Lys Arg Gly Ser Trp Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser
1 5 10 15
<210> 191
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 191
Ser Ser Trp Lys Arg Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Ser Ile Asn Ser
1 5 10 15
<210> 192
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 192
Ser Ser Trp Lys Arg Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Gln Ile Asn Ser
1 5 10 15
<210> 193
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 193
Ser Ser Trp Lys Arg Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Asn Ile Asn Ser
1 5 10 15
<210> 194
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 194
Ser Ser Trp Lys Arg Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser
1 5 10 15
Cys
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 195
Cys Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
1 5 10
<210> 196
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 196
Ser Ser Trp Lys Arg Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser
1 5 10 15
Lys
<210> 197
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 197
Lys Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
1 5 10
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<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 198
Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg
1 5 10 15
Leu Cys Glu Asn Ile Leu Ala
20
<210> 199
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 199
Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Val Gly Val Thr Gly Trp
1 5 10 15
Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala
20
<210> 200
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 200
Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
1 5 10
<210> 201
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 201
Asn Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
1 5 10
<210> 202
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 202
Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
1 5
<210> 203
<211> 501
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 203
atggtgagcg gctggcggct gttcaagaag attagccacc atcaccatca ccatcatcac 60
ttcacactcg acgatttcgt tggggactgg gaacagacag ccgcctacaa cctggaccaa 120
gtccttgaac agggaggtgt gtccagtttg ctgcagaatc tcgccgtgtc cgtaactccg 180
atcatgagga ttgtccggag cggtgaaaat gccctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc 240
ccgtatgaag gtctgagcgc cgaccaaatg gcccagatcg aagaggtgtt taaggtggtg 300
taccctgtgg atgatcatca ctttaaggtg atcctgccct atggcacact ggtaatcgac 360
ggggttacgc cgaacaagct gaactatttc ggacggccgt atgaaggcat cgccgtgttc 420
gacggcaaaa agatcactac cacagggacc ctgtggaacg gcaacaaaat tatcgacgag 480
cgcctgatca cccccgacta a 501
<210> 204
<211> 166
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 204
Met Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser His His His His
1 5 10 15
His His His His Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln
20 25 30
Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser
35 40 45
Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile
50 55 60
Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile
65 70 75 80
Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val
85 90 95
Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu
100 105 110
Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn
115 120 125
Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys
130 135 140
Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu
145 150 155 160
Arg Leu Ile Thr Pro Asp
165
<210> 205
<211> 510
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 205
atgaaacatc accatcacca tcatgtgagc ggctggcggc tgttcaagaa gattagcggc 60
agctccggtt tcacactcga cgatttcgtt ggggactggg aacagacagc cgcctacaac 120
ctggaccaag tccttgaaca gggaggtgtg tccagtttgc tgcagaatct cgccgtgtcc 180
gtaactccga tcatgaggat tgtccggagc ggtgaaaatg ccctgaagat cgacatccat 240
gtcatcatcc cgtatgaagg tctgagcgcc gaccaaatgg cccagatcga agaggtgttt 300
aaggtggtgt accctgtgga tgatcatcac tttaaggtga tcctgcccta tggcacactg 360
gtaatcgacg gggttacgcc gaacaagctg aactatttcg gacggccgta tgaaggcatc 420
gccgtgttcg acggcaaaaa gatcactacc acagggaccc tgtggaacgg caacaaaatt 480
atcgacgagc gcctgatcac ccccgactaa 510
<210> 206
<211> 169
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 206
Met Lys His His His His His His Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys
1 5 10 15
Lys Ile Ser Gly Ser Ser Gly Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp
20 25 30
Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly
35 40 45
Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile
50 55 60
Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His
65 70 75 80
Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile
85 90 95
Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys
100 105 110
Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn
115 120 125
Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp
130 135 140
Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile
145 150 155 160
Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp
165
<210> 207
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 207
atggtggcca tcctctggca tgagatgtgg catgaaggcc tggaagaggc atctcgtttg 60
tactttgggg aaaggaacgt gaaaggcatg tttgaggtgc tggagccctt gcatgctatg 120
atggaacggg gcccccagac tctgaaggaa acatccttta atcaggccta tggtcgagat 180
ttaatggagg cccaagagtg gtgcaggaag tacatgaaat cagggaatgt caaggacctc 240
acccaagcct gggacctcta ttatcatgtg ttccgacgaa tcagtggtgg ttcaggtggt 300
ggcgggagcg gtggctcgag cagcggtgga gtgagcggct ggcggctgtt caagaagatt 360
agctaa 366
<210> 208
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 208
Met Val Ala Ile Leu Trp His Glu Met Trp His Glu Gly Leu Glu Glu
1 5 10 15
Ala Ser Arg Leu Tyr Phe Gly Glu Arg Asn Val Lys Gly Met Phe Glu
20 25 30
Val Leu Glu Pro Leu His Ala Met Met Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu
35 40 45
Lys Glu Thr Ser Phe Asn Gln Ala Tyr Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala
50 55 60
Gln Glu Trp Cys Arg Lys Tyr Met Lys Ser Gly Asn Val Lys Asp Leu
65 70 75 80
Thr Gln Ala Trp Asp Leu Tyr Tyr His Val Phe Arg Arg Ile Ser Gly
85 90 95
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ser Ser Gly Gly Val Ser
100 105 110
Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
115 120
<210> 209
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 209
atggtggcca tcctctggca tgagatgtgg catgaaggcc tggaagaggc atctcgtttg 60
tactttgggg aaaggaacgt gaaaggcatg tttgaggtgc tggagccctt gcatgctatg 120
atggaacggg gcccccagac tctgaaggaa acatccttta atcaggccta tggtcgagat 180
ttaatggagg cccaagagtg gtgcaggaag tacatgaaat cagggaatgt caaggacctc 240
acccaagcct gggacctcta ttatcatgtg ttccgacgaa tcagtggtgg ttcaggtggt 300
ggcgggagcg gtggctcgag cagcggtgga gttagcgtta gcggctggcg cctgttcaag 360
aagatcagct aa 372
<210> 210
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 210
Met Val Ala Ile Leu Trp His Glu Met Trp His Glu Gly Leu Glu Glu
1 5 10 15
Ala Ser Arg Leu Tyr Phe Gly Glu Arg Asn Val Lys Gly Met Phe Glu
20 25 30
Val Leu Glu Pro Leu His Ala Met Met Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu
35 40 45
Lys Glu Thr Ser Phe Asn Gln Ala Tyr Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala
50 55 60
Gln Glu Trp Cys Arg Lys Tyr Met Lys Ser Gly Asn Val Lys Asp Leu
65 70 75 80
Thr Gln Ala Trp Asp Leu Tyr Tyr His Val Phe Arg Arg Ile Ser Gly
85 90 95
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ser Ser Gly Gly Val Ser
100 105 110
Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
115 120
<210> 211
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 211
atgggagtgc aggtggaaac catctcccca ggagacgggc gcaccttccc caagcgcggc 60
cagacctgcg tggtgcacta caccgggatg cttgaagatg gaaagaaatt tgattcctcc 120
cgggacagaa acaagccctt taagtttatg ctaggcaagc aggaggtgat ccgaggctgg 180
gaagaagggg ttgcccagat gagtgtgggt cagagagcca aactgactat atctccagat 240
tatgcctatg gtgccactgg gcacccaggc atcatcccac cacatgccac tctcgtcttc 300
gatgtggagc ttctaaaact ggaaggtggt tcaggtggtg gcgggagcgg tggctcgagc 360
agcggtgga 369
<210> 212
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 212
Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe
1 5 10 15
Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu
20 25 30
Asp Gly Lys Lys Phe Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys
35 40 45
Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val
50 55 60
Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp
65 70 75 80
Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala
85 90 95
Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Gly Gly Ser Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ser Ser Gly Gly
115 120
<210> 213
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 213
Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val
1 5 10
<210> 214
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 214
Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val Ser
1 5 10
<210> 215
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 215
Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val Ser Gly
1 5 10
<210> 216
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 216
Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val Ser Gly Trp
1 5 10
<210> 217
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 217
Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val Ser Gly Trp Lys
1 5 10
<210> 218
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 218
Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val Ser Gly Trp Arg
1 5 10
<210> 219
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 219
Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val Ser Gly
1 5 10
<210> 220
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 220
Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val Ser Gly Trp
1 5 10 15
<210> 221
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 221
Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val Ser Gly Trp Arg
1 5 10 15
<210> 222
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 222
Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val Ser Gly Trp Lys
1 5 10 15
<210> 223
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 223
Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Trp Lys
1 5 10
<210> 224
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 224
Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Trp Lys
1 5 10
<210> 225
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 225
Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Trp Lys
1 5 10
<210> 226
<211> 11
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<213> 人工序列(Artificial sequence)
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<223> 合成
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<223> 合成
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1 5 10 15
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Gly
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1 5 10 15
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1 5 10 15
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1 5 10 15
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<223> 合成
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Ser Ser Trp Lys Arg Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser
1 5 10 15
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<211> 21
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<213> 人工序列(Artificial sequence)
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<223> 合成
<400> 247
Ser Ser Trp Lys Arg Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser
1 5 10 15
Val Ser Gly Trp Lys
20
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<211> 16
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<223> 合成
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<210> 249
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 249
Ser Ser Trp Lys Arg Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Lys Ile Asn Ser
1 5 10 15
<210> 250
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 250
Ser Ser Trp Lys Arg Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Arg Ile Asn Ser
1 5 10 15
<210> 251
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 251
Ser Ser Trp Lys Arg Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Trp Ile Asn Ser
1 5 10 15
<210> 252
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 252
Ser Ser Lys Arg Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Trp Ser Val
1 5 10 15
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 253
Ser Ser Lys Arg Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Trp Ser Val
1 5 10 15
Ser
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<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 254
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1 5 10 15
<210> 255
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 255
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1 5 10 15
<210> 256
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 256
Ser Ser Lys Arg Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Trp Ser
1 5 10
<210> 257
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 257
Lys Arg Ser Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Trp Ser
1 5 10
<210> 258
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 258
Gly Ser Met Lys Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Trp Lys
1 5 10
<210> 259
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 259
Gly Ser Met Leu Phe Arg Lys Thr Ile Asn Ser Trp Lys
1 5 10
<210> 260
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 260
Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Lys Asn Ser Trp Lys
1 5 10
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<211> 11
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<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 261
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1 5 10
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 262
Gly Ser Met Lys Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Trp Lys
1 5 10
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 263
Gly Ser Met Lys Phe Arg Val Thr Ile Trp Lys
1 5 10
<210> 264
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 264
Gly Arg Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Trp Lys
1 5 10
<210> 265
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 265
Gly Arg Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Trp Lys
1 5 10
<210> 266
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 266
Gly Ser Met Arg Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Trp Lys
1 5 10
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 267
Gly Ser Met Arg Phe Arg Val Thr Ile Trp Lys
1 5 10
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 268
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1 5 10
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 269
Gly Asp Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Trp Lys
1 5 10
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 270
Gly Ser Met Asp Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Trp Lys
1 5 10
<210> 271
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 271
Gly Ser Met Asp Phe Arg Val Thr Ile Trp Lys
1 5 10
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 272
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<211> 13
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<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 273
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1 5 10
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 274
Gly Ser Met Glu Phe Arg Val Thr Ile Trp Lys
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 275
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 276
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 277
Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Trp Ser Lys
1 5 10
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 278
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1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 279
Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Trp Lys Lys
1 5 10
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
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<223> 合成
<400> 280
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1 5 10
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 281
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1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 282
Met Leu Phe Val Thr Ile Asn Ser Val
1 5
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 283
Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val Ser
1 5 10
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 284
Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn
1 5 10
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 285
Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 286
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1 5
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<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 287
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1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 288
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<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 289
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1 5 10 15
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<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 290
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1 5 10 15
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20
<210> 291
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 291
Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Gly Val Ser Gly Trp
1 5 10 15
Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
20
<210> 292
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 292
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1 5 10
<210> 293
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 293
Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val Ser Gly Val Ser
1 5 10 15
Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
20 25
<210> 294
<211> 148
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 294
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1 5 10 15
Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
20 25 30
Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr
115 120 125
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130 135 140
Ile Thr Pro Asp
145
<210> 295
<211> 444
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 295
atggtcttca cactcgacga tttcgttggg gactgggaac agacagccgc ctacaacctg 60
gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgctgc agaatctcgc cgtgtccgta 120
actccgatca tgaggattgt ccggagcggt gaaaatgccc tgaagatcga catccatgtc 180
atcatcccgt atgaaggtct gagcgccgac caaatggccc agatcgaaga ggtgtttaag 240
gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgccctatgg cacactggta 300
atcgacgggg ttacgccgaa caagctgaac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360
gtgttcgacg gcaaaaagat cactaccaca gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420
gacgagcgcc tgatcacccc cgac 444
<210> 296
<211> 148
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 296
Met Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala
1 5 10 15
Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
20 25 30
Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg
35 40 45
Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr
50 55 60
Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys
65 70 75 80
Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr
85 90 95
Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe
100 105 110
Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr
115 120 125
Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu
130 135 140
Ile Thr Pro Asp
145
<210> 297
<211> 444
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 297
atggtcttca cactcgaaga tttcgttggg gactgggaac agacagccgc ctacaacctg 60
gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgctgc agaatctcgc cgtgtccgta 120
actccgatcc aaaggattgt ccggagcggt gaaaatgccc tgaagatcga catccatgtc 180
atcatcccgt atgaaggtct gagcgccgac caaatggccc agatcgaaga ggtgtttaag 240
gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgccctatgg cacactggta 300
atcgacgggg ttacgccgaa catgctgaac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360
gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaaca gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420
gacgagcgcc tgatcacccc cgac 444
<210> 298
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 298
Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
1 5 10
<210> 299
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 299
Asn Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
1 5 10
<210> 300
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 300
Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
1 5
<210> 301
<211> 23
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<213> 人工序列(Artificial sequence)
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<211> 11
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<223> 合成
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<211> 11
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<213> 人工序列(Artificial sequence)
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<211> 11
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<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 341
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1 5 10
<210> 342
<211> 634
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 342
Met Lys His His His His His His Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Ile
1 5 10 15
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His Gln Phe Lys Cys Thr His Glu Gly Glu Gly Lys Pro Tyr Glu Gly
35 40 45
Lys Gln Thr Asn Arg Ile Lys Val Val Glu Gly Gly Pro Leu Pro Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Ile Lys Tyr Pro Ala Asp Leu Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ser Phe Pro
85 90 95
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100 105 110
Leu Thr Ala Thr Gln Asp Thr Ser Leu Gln Asp Gly Glu Leu Ile Tyr
115 120 125
Asn Val Lys Val Arg Gly Val Asn Phe Pro Ala Asn Gly Pro Val Met
130 135 140
Gln Lys Lys Thr Leu Gly Trp Glu Pro Ser Thr Glu Thr Met Tyr Pro
145 150 155 160
Ala Asp Gly Gly Leu Glu Gly Arg Cys Asp Lys Ala Leu Lys Leu Val
165 170 175
Gly Gly Gly His Leu His Val Asn Phe Lys Thr Thr Tyr Lys Ser Lys
180 185 190
Lys Pro Val Lys Met Pro Gly Val His Tyr Val Asp Arg Arg Leu Glu
195 200 205
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210 215 220
Ala Val Ala Arg Tyr Ser Asn Leu Gly Gly Gly Phe Thr Leu Glu Asp
225 230 235 240
Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val
245 250 255
Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser
260 265 270
Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys
275 280 285
Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln
290 295 300
Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp
305 310 315 320
His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly
325 330 335
Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile
340 345 350
Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn
355 360 365
Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu
370 375 380
Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu
385 390 395 400
Arg Ile Leu Ala Arg His Glu Leu Ile Lys Glu Asn Met Arg Ser Lys
405 410 415
Leu Tyr Leu Glu Gly Ser Val Asn Gly His Gln Phe Lys Cys Thr His
420 425 430
Glu Gly Glu Gly Lys Pro Tyr Glu Gly Lys Gln Thr Asn Arg Ile Lys
435 440 445
Val Val Glu Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ala Phe Asp Ile Leu Ala Thr
450 455 460
His Phe Met Tyr Gly Ser Lys Val Phe Ile Lys Tyr Pro Ala Asp Leu
465 470 475 480
Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ser Phe Pro Glu Gly Phe Thr Trp Glu Arg
485 490 495
Val Met Val Phe Glu Asp Gly Gly Val Leu Thr Ala Thr Gln Asp Thr
500 505 510
Ser Leu Gln Asp Gly Glu Leu Ile Tyr Asn Val Lys Val Arg Gly Val
515 520 525
Asn Phe Pro Ala Asn Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Thr Leu Gly Trp
530 535 540
Glu Pro Ser Thr Glu Thr Met Tyr Pro Ala Asp Gly Gly Leu Glu Gly
545 550 555 560
Arg Cys Asp Lys Ala Leu Lys Leu Val Gly Gly Gly His Leu His Val
565 570 575
Asn Phe Lys Thr Thr Tyr Lys Ser Lys Lys Pro Val Lys Met Pro Gly
580 585 590
Val His Tyr Val Asp Arg Arg Leu Glu Arg Ile Lys Glu Ala Asp Asn
595 600 605
Glu Thr Tyr Val Glu Gln Tyr Glu His Ala Val Ala Arg Tyr Ser Asn
610 615 620
Leu Gly Gly Gly Met Asp Glu Leu Tyr Lys
625 630
<210> 343
<211> 1902
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<220>
<223> 合成
<400> 343
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cggtctaaac tgtacctcga gggctccgtc aatgggcacc agtttaagtg tacccacgag 120
ggtgagggaa agccctatga ggggaagcag acaaaccgca tcaaggtcgt cgaaggggga 180
cccctcccgt ttgcctttga tatcttggct actcacttta tgtacggaag caaagttttc 240
ataaagtatc ctgccgacct tcctgattat tttaaacagt catttcccga gggtttcaca 300
tgggaaaggg tcatggtgtt tgaggatgga ggcgtgctca ctgcaactca ggacacctca 360
ctgcaggacg gcgagctgat ctacaatgtg aaggtccggg gtgtaaactt ccctgccaac 420
gggcctgtaa tgcagaagaa gaccctggga tgggagccgt ccaccgaaac catgtaccct 480
gctgatggtg ggctggaggg ccgatgtgac aaggctctga agctcgttgg aggtggtcat 540
ttgcacgtaa atttcaagac aacttacaag agcaaaaaac ccgtaaaaat gcccggggtt 600
cattacgttg acagaaggct tgaacgcata aaggaagctg ataacgagac atacgtggag 660
cagtacgagc acgccgttgc ccggtactca aacctggggg gtggctttac actggaggat 720
tttgtgggag attggagaca gacagccggc tacaatctgg atcaggtgct ggaacaagga 780
ggagtgtctt ctctgtttca gaatctggga gtgagcgtga cacctatcca gaggatcgtg 840
ctgtctggcg agaatggact gaagatcgat attcacgtga tcatccccta cgaaggcctg 900
tctggagacc agatgggcca gattgagaag atcttcaaag tggtgtatcc tgtggacgat 960
caccacttca aggtgatcct gcactacggc accctggtga ttgatggagt gacacctaac 1020
atgatcgact acttcggaag accttacgag ggaatcgccg tgttcgacgg aaagaagatc 1080
accgtgacag gaacactgtg gaatggaaac aagatcatcg acgagcggct gatcaaccct 1140
gatggatctc tgctgttcag agtgaccatc aacggagtga caggatggag actgtgcgag 1200
agaattctgg ctagacatga gctaatcaag gaaaatatga gaagtaagct atacttagag 1260
gggtccgtca acggtcacca gtttaaatgc actcatgaag gtgaggggaa accttatgaa 1320
ggtaagcaga ctaatcgaat aaaagtggtc gagggcggtc ctctgccatt cgctttcgat 1380
attctggcca ctcactttat gtatgggtct aaggtcttta ttaaataccc cgctgatttg 1440
ccagactact ttaaacagtc cttccctgaa ggattcacat gggagcgggt gatggtgttc 1500
gaggatggag gcgttcttac tgcaactcag gatacttcct tgcaagacgg ggaactgatc 1560
tacaacgtta aggtccgcgg cgtcaatttc ccagccaatg gtccagtgat gcagaagaaa 1620
accttggggt gggagccctc aacggagaca atgtaccctg cggacggcgg gcttgagggt 1680
agatgtgata aggcattgaa actcgtcggg ggcggccacc ttcatgtgaa tttcaagact 1740
acatataaaa gtaaaaaacc agtcaagatg cctggagtgc actacgtgga tcgtaggttg 1800
gagaggataa aagaagccga caacgaaact tatgtagagc aatatgagca cgccgtggct 1860
cgttattcca acttgggcgg aggaatggat gaactgtaca ag 1902
<210> 344
<211> 622
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 344
Met Lys His His His His His His Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Ile
1 5 10 15
Lys Glu Asn Met Arg Ser Lys Leu Tyr Leu Glu Gly Ser Val Asn Gly
20 25 30
His Gln Phe Lys Cys Thr His Glu Gly Glu Gly Lys Pro Tyr Glu Gly
35 40 45
Lys Gln Thr Asn Arg Ile Lys Val Val Glu Gly Gly Pro Leu Pro Phe
50 55 60
Ala Phe Asp Ile Leu Ala Thr His Phe Met Tyr Gly Ser Lys Val Phe
65 70 75 80
Ile Lys Tyr Pro Ala Asp Leu Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ser Phe Pro
85 90 95
Glu Gly Phe Thr Trp Glu Arg Val Met Val Phe Glu Asp Gly Gly Val
100 105 110
Leu Thr Ala Thr Gln Asp Thr Ser Leu Gln Asp Gly Glu Leu Ile Tyr
115 120 125
Asn Val Lys Val Arg Gly Val Asn Phe Pro Ala Asn Gly Pro Val Met
130 135 140
Gln Lys Lys Thr Leu Gly Trp Glu Pro Ser Thr Glu Thr Met Tyr Pro
145 150 155 160
Ala Asp Gly Gly Leu Glu Gly Arg Cys Asp Lys Ala Leu Lys Leu Val
165 170 175
Gly Gly Gly His Leu His Val Asn Phe Lys Thr Thr Tyr Lys Ser Lys
180 185 190
Lys Pro Val Lys Met Pro Gly Val His Tyr Val Asp Arg Arg Leu Glu
195 200 205
Arg Ile Lys Glu Ala Asp Asn Glu Thr Tyr Val Glu Gln Tyr Glu His
210 215 220
Ala Val Ala Arg Tyr Ser Asn Leu Gly Gly Gly Phe Thr Leu Glu Asp
225 230 235 240
Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val
245 250 255
Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser
260 265 270
Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys
275 280 285
Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln
290 295 300
Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp
305 310 315 320
His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly
325 330 335
Val Thr Pro Asn Met Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile
340 345 350
Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn
355 360 365
Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp Gly Ser Met
370 375 380
Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Arg His Glu Leu Ile Lys Glu Asn
385 390 395 400
Met Arg Ser Lys Leu Tyr Leu Glu Gly Ser Val Asn Gly His Gln Phe
405 410 415
Lys Cys Thr His Glu Gly Glu Gly Lys Pro Tyr Glu Gly Lys Gln Thr
420 425 430
Asn Arg Ile Lys Val Val Glu Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ala Phe Asp
435 440 445
Ile Leu Ala Thr His Phe Met Tyr Gly Ser Lys Val Phe Ile Lys Tyr
450 455 460
Pro Ala Asp Leu Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ser Phe Pro Glu Gly Phe
465 470 475 480
Thr Trp Glu Arg Val Met Val Phe Glu Asp Gly Gly Val Leu Thr Ala
485 490 495
Thr Gln Asp Thr Ser Leu Gln Asp Gly Glu Leu Ile Tyr Asn Val Lys
500 505 510
Val Arg Gly Val Asn Phe Pro Ala Asn Gly Pro Val Met Gln Lys Lys
515 520 525
Thr Leu Gly Trp Glu Pro Ser Thr Glu Thr Met Tyr Pro Ala Asp Gly
530 535 540
Gly Leu Glu Gly Arg Cys Asp Lys Ala Leu Lys Leu Val Gly Gly Gly
545 550 555 560
His Leu His Val Asn Phe Lys Thr Thr Tyr Lys Ser Lys Lys Pro Val
565 570 575
Lys Met Pro Gly Val His Tyr Val Asp Arg Arg Leu Glu Arg Ile Lys
580 585 590
Glu Ala Asp Asn Glu Thr Tyr Val Glu Gln Tyr Glu His Ala Val Ala
595 600 605
Arg Tyr Ser Asn Leu Gly Gly Gly Met Asp Glu Leu Tyr Lys
610 615 620
<210> 345
<211> 1866
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 345
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cggtctaaac tgtacctcga gggctccgtc aatgggcacc agtttaagtg tacccacgag 120
ggtgagggaa agccctatga ggggaagcag acaaaccgca tcaaggtcgt cgaaggggga 180
cccctcccgt ttgcctttga tatcttggct actcacttta tgtacggaag caaagttttc 240
ataaagtatc ctgccgacct tcctgattat tttaaacagt catttcccga gggtttcaca 300
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ctgcaggacg gcgagctgat ctacaatgtg aaggtccggg gtgtaaactt ccctgccaac 420
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ttcgttgggg actgggaaca gacagccgcc tacaacctgg accaagtcct tgaacaggga 780
ggtgtgtcca gtttgctgca gaatctcgcc gtgtccgtaa ctccgatcca aaggattgtc 840
cggagcggtg aaaatgccct gaagatcgac atccatgtca tcatcccgta tgaaggtctg 900
agcgccgacc aaatggccca gatcgaagag gtgtttaagg tggtgtaccc tgtggatgat 960
catcacttta aggtgatcct gccctatggc acactggtaa tcgacggggt tacgccgaac 1020
atgctgaact atttcggacg gccgtatgaa ggcatcgccg tgttcgacgg caaaaagatc 1080
actgtaacag ggaccctgtg gaacggcaac aaaattatcg acgagcgcct gatcaccccc 1140
gacggctcca tgctgttccg agtaaccatc aacagcagac atgagctaat caaggaaaat 1200
atgagaagta agctatactt agaggggtcc gtcaacggtc accagtttaa atgcactcat 1260
gaaggtgagg ggaaacctta tgaaggtaag cagactaatc gaataaaagt ggtcgagggc 1320
ggtcctctgc cattcgcttt cgatattctg gccactcact ttatgtatgg gtctaaggtc 1380
tttattaaat accccgctga tttgccagac tactttaaac agtccttccc tgaaggattc 1440
acatgggagc gggtgatggt gttcgaggat ggaggcgttc ttactgcaac tcaggatact 1500
tccttgcaag acggggaact gatctacaac gttaaggtcc gcggcgtcaa tttcccagcc 1560
aatggtccag tgatgcagaa gaaaaccttg gggtgggagc cctcaacgga gacaatgtac 1620
cctgcggacg gcgggcttga gggtagatgt gataaggcat tgaaactcgt cgggggcggc 1680
caccttcatg tgaatttcaa gactacatat aaaagtaaaa aaccagtcaa gatgcctgga 1740
gtgcactacg tggatcgtag gttggagagg ataaaagaag ccgacaacga aacttatgta 1800
gagcaatatg agcacgccgt ggctcgttat tccaacttgg gcggaggaat ggatgaactg 1860
tacaag 1866
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<211> 611
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 346
Met Lys His His His His His His Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Ile
1 5 10 15
Lys Glu Asn Met Arg Ser Lys Leu Tyr Leu Glu Gly Ser Val Asn Gly
20 25 30
His Gln Phe Lys Cys Thr His Glu Gly Glu Gly Lys Pro Tyr Glu Gly
35 40 45
Lys Gln Thr Asn Arg Ile Lys Val Val Glu Gly Gly Pro Leu Pro Phe
50 55 60
Ala Phe Asp Ile Leu Ala Thr His Phe Met Tyr Gly Ser Lys Val Phe
65 70 75 80
Ile Lys Tyr Pro Ala Asp Leu Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ser Phe Pro
85 90 95
Glu Gly Phe Thr Trp Glu Arg Val Met Val Phe Glu Asp Gly Gly Val
100 105 110
Leu Thr Ala Thr Gln Asp Thr Ser Leu Gln Asp Gly Glu Leu Ile Tyr
115 120 125
Asn Val Lys Val Arg Gly Val Asn Phe Pro Ala Asn Gly Pro Val Met
130 135 140
Gln Lys Lys Thr Leu Gly Trp Glu Pro Ser Thr Glu Thr Met Tyr Pro
145 150 155 160
Ala Asp Gly Gly Leu Glu Gly Arg Cys Asp Lys Ala Leu Lys Leu Val
165 170 175
Gly Gly Gly His Leu His Val Asn Phe Lys Thr Thr Tyr Lys Ser Lys
180 185 190
Lys Pro Val Lys Met Pro Gly Val His Tyr Val Asp Arg Arg Leu Glu
195 200 205
Arg Ile Lys Glu Ala Asp Asn Glu Thr Tyr Val Glu Gln Tyr Glu His
210 215 220
Ala Val Ala Arg Tyr Ser Asn Leu Gly Gly Gly Phe Thr Leu Asp Asp
225 230 235 240
Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val
245 250 255
Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser
260 265 270
Val Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys
275 280 285
Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln
290 295 300
Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp
305 310 315 320
His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly
325 330 335
Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile
340 345 350
Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn
355 360 365
Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp Arg His Glu
370 375 380
Leu Ile Lys Glu Asn Met Arg Ser Lys Leu Tyr Leu Glu Gly Ser Val
385 390 395 400
Asn Gly His Gln Phe Lys Cys Thr His Glu Gly Glu Gly Lys Pro Tyr
405 410 415
Glu Gly Lys Gln Thr Asn Arg Ile Lys Val Val Glu Gly Gly Pro Leu
420 425 430
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435 440 445
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450 455 460
Phe Pro Glu Gly Phe Thr Trp Glu Arg Val Met Val Phe Glu Asp Gly
465 470 475 480
Gly Val Leu Thr Ala Thr Gln Asp Thr Ser Leu Gln Asp Gly Glu Leu
485 490 495
Ile Tyr Asn Val Lys Val Arg Gly Val Asn Phe Pro Ala Asn Gly Pro
500 505 510
Val Met Gln Lys Lys Thr Leu Gly Trp Glu Pro Ser Thr Glu Thr Met
515 520 525
Tyr Pro Ala Asp Gly Gly Leu Glu Gly Arg Cys Asp Lys Ala Leu Lys
530 535 540
Leu Val Gly Gly Gly His Leu His Val Asn Phe Lys Thr Thr Tyr Lys
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Ser Lys Lys Pro Val Lys Met Pro Gly Val His Tyr Val Asp Arg Arg
565 570 575
Leu Glu Arg Ile Lys Glu Ala Asp Asn Glu Thr Tyr Val Glu Gln Tyr
580 585 590
Glu His Ala Val Ala Arg Tyr Ser Asn Leu Gly Gly Gly Met Asp Glu
595 600 605
Leu Tyr Lys
610
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
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catcacttta aggtgatcct gccctatggc acactggtaa tcgacggggt tacgccgaac 1020
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<211> 401
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<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
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Met Lys His His His His His His Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly
1 5 10 15
Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln
20 25 30
Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp Gly Ser Met Leu Phe Arg
145 150 155 160
Val Thr Ile Asn Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ser Gly Glu Leu Ile
165 170 175
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180 185 190
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210 215 220
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Ile Lys Tyr Pro Ala Asp Leu Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ser Phe Pro
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275 280 285
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Ala Asp Gly Gly Leu Glu Gly Arg Cys Asp Lys Ala Leu Lys Leu Val
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Lys
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<220>
<223> 合成
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<220>
<223> 合成
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1 5 10 15
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115 120 125
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Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp Gly Ser Met Leu Phe Arg
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Val Thr Ile Asn Ser Arg His Glu Leu Ile Lys Glu Asn Met Arg Ser
165 170 175
Lys Leu Tyr Leu Glu Gly Ser Val Asn Gly His Gln Phe Lys Cys Thr
180 185 190
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Leu Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ser Phe Pro Glu Gly Phe Thr Trp Glu
245 250 255
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275 280 285
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
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<220>
<223> 合成
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Met Lys His His His His His His Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp Gly Gly Ser Gly Gly Ser
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Ser Gly Glu Leu Ile Lys Glu Asn Met Arg Ser Lys Leu Tyr Leu Glu
165 170 175
Gly Ser Val Asn Gly His Gln Phe Lys Cys Thr His Glu Gly Glu Gly
180 185 190
Lys Pro Tyr Glu Gly Lys Gln Thr Asn Arg Ile Lys Val Val Glu Gly
195 200 205
Gly Pro Leu Pro Phe Ala Phe Asp Ile Leu Ala Thr His Phe Met Tyr
210 215 220
Gly Ser Lys Val Phe Ile Lys Tyr Pro Ala Asp Leu Pro Asp Tyr Phe
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Lys Gln Ser Phe Pro Glu Gly Phe Thr Trp Glu Arg Val Met Val Phe
245 250 255
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260 265 270
Gly Glu Leu Ile Tyr Asn Val Lys Val Arg Gly Val Asn Phe Pro Ala
275 280 285
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<220>
<223> 合成
<400> 353
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<210> 354
<211> 384
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 354
Met Lys His His His His His His Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly
1 5 10 15
Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln
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Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe
85 90 95
Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro
100 105 110
Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe
115 120 125
Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys
130 135 140
Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp Arg His Glu Leu Ile Lys
145 150 155 160
Glu Asn Met Arg Ser Lys Leu Tyr Leu Glu Gly Ser Val Asn Gly His
165 170 175
Gln Phe Lys Cys Thr His Glu Gly Glu Gly Lys Pro Tyr Glu Gly Lys
180 185 190
Gln Thr Asn Arg Ile Lys Val Val Glu Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ala
195 200 205
Phe Asp Ile Leu Ala Thr His Phe Met Tyr Gly Ser Lys Val Phe Ile
210 215 220
Lys Tyr Pro Ala Asp Leu Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ser Phe Pro Glu
225 230 235 240
Gly Phe Thr Trp Glu Arg Val Met Val Phe Glu Asp Gly Gly Val Leu
245 250 255
Thr Ala Thr Gln Asp Thr Ser Leu Gln Asp Gly Glu Leu Ile Tyr Asn
260 265 270
Val Lys Val Arg Gly Val Asn Phe Pro Ala Asn Gly Pro Val Met Gln
275 280 285
Lys Lys Thr Leu Gly Trp Glu Pro Ser Thr Glu Thr Met Tyr Pro Ala
290 295 300
Asp Gly Gly Leu Glu Gly Arg Cys Asp Lys Ala Leu Lys Leu Val Gly
305 310 315 320
Gly Gly His Leu His Val Asn Phe Lys Thr Thr Tyr Lys Ser Lys Lys
325 330 335
Pro Val Lys Met Pro Gly Val His Tyr Val Asp Arg Arg Leu Glu Arg
340 345 350
Ile Lys Glu Ala Asp Asn Glu Thr Tyr Val Glu Gln Tyr Glu His Ala
355 360 365
Val Ala Arg Tyr Ser Asn Leu Gly Gly Gly Met Asp Glu Leu Tyr Lys
370 375 380
<210> 355
<211> 1152
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 355
atgaaacatc accatcacca tcatttcaca ctcgacgatt tcgttgggga ctgggaacag 60
acagccgcct acaacctgga ccaagtcctt gaacagggag gtgtgtccag tttgctgcag 120
aatctcgccg tgtccgtaac tccgatcatg aggattgtcc ggagcggtga aaatgccctg 180
aagatcgaca tccatgtcat catcccgtat gaaggtctga gcgccgacca aatggcccag 240
atcgaagagg tgtttaaggt ggtgtaccct gtggatgatc atcactttaa ggtgatcctg 300
ccctatggca cactggtaat cgacggggtt acgccgaaca agctgaacta tttcggacgg 360
ccgtatgaag gcatcgccgt gttcgacggc aaaaagatca ctaccacagg gaccctgtgg 420
aacggcaaca aaattatcga cgagcgcctg atcacccccg acagacatga gctaatcaag 480
gaaaatatga gaagtaagct atacttagag gggtccgtca acggtcacca gtttaaatgc 540
actcatgaag gtgaggggaa accttatgaa ggtaagcaga ctaatcgaat aaaagtggtc 600
gagggcggtc ctctgccatt cgctttcgat attctggcca ctcactttat gtatgggtct 660
aaggtcttta ttaaataccc cgctgatttg ccagactact ttaaacagtc cttccctgaa 720
ggattcacat gggagcgggt gatggtgttc gaggatggag gcgttcttac tgcaactcag 780
gatacttcct tgcaagacgg ggaactgatc tacaacgtta aggtccgcgg cgtcaatttc 840
ccagccaatg gtccagtgat gcagaagaaa accttggggt gggagccctc aacggagaca 900
atgtaccctg cggacggcgg gcttgagggt agatgtgata aggcattgaa actcgtcggg 960
ggcggccacc ttcatgtgaa tttcaagact acatataaaa gtaaaaaacc agtcaagatg 1020
cctggagtgc actacgtgga tcgtaggttg gagaggataa aagaagccga caacgaaact 1080
tatgtagagc aatatgagca cgccgtggct cgttattcca acttgggcgg aggaatggat 1140
gaactgtaca ag 1152
<210> 356
<211> 155
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 356
Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Leu Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala
65 70 75 80
Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His
85 90 95
Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr
100 105 110
Pro Asn Met Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val
115 120 125
Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn
130 135 140
Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp
145 150 155
<210> 357
<211> 465
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 357
atgaaacatc accatcacca tcatgtcttc acactcgaag atttcgttgg ggactgggaa 60
cagaccgccg cctacaacct ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgctg 120
cagaatctcg ccgtgtccgt aactccgatc ctaaggattg tccggagcgg tgaaaatgcc 180
ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg tatgaaggtc tgagcgccga ccaaatggcc 240
cagatcgaag aggtgtttaa ggtggtgtac cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc 300
ctgccctatg gcacactggt aatcgacggg gttacgccga acatgctgaa ctatttcgga 360
cggccgtatg aaggcatcgc cgtgttcgac ggcaaaaaga tcactgtaac agggaccctg 420
tggaacggca acaaaattat cgacgagcgc ctgatcaccc ccgac 465
<210> 358
<211> 396
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 358
atgaaacatc accatcacca tcatgtcttc acactcgacg atttcgttgg ggactgggaa 60
cagacagccg cctacaacct ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgctg 120
cagaatctcg ccgtgtccgt aactccgatc atgaggattg tccggagcgg tgaaaatgcc 180
ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg tatgaaggtc tgagcgccga ccaaatggcc 240
cagatcgaag aggtgtttaa ggtggtgtac cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc 300
ctgccctatg gcacactggt aatcgacggg gttacgccga acaagctgaa ctatttcgga 360
cggccgtatg aaggcatcgc cgtgttcgac ggctaa 396
<210> 359
<211> 131
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 359
Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala
65 70 75 80
Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His
85 90 95
Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr
100 105 110
Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val
115 120 125
Phe Asp Gly
130
<210> 360
<211> 654
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 360
gggagctccg gtggtggcgg gagcggaggt ggaggctcga gcggtatgac gtataagtta 60
atccttaatg gtaaaacatt gaaaggcgag acaactactg aagctgttga tgctgctact 120
gcagaaaaag tcttcaaaca atacgctaac gacaacggtg ttgacggtga atggacttac 180
gacgatgcga cgaaaacctt tacggtcacc gaaaaaccag aagtgatcga tgcgtctgaa 240
ttaacaccag ccgtgacaac ttacaaactt gttattaatg gtaaaacatt gaaaggcgaa 300
acaactactg aggctgttga tgctgctact gcagagaagg tgttcaaaca atatgcgaat 360
gacaacggtg ttgacggtga gtggacttac gacgatgcga ctaagacctt tacagttact 420
gaaaaaccag aagtgatcga tgcgtctgag ttaacaccag ccgtgacaac ttacaaactt 480
gttattaatg gtaaaacatt gaaaggcgaa acaactacta aagcagtaga cgcagaaact 540
gcggagaagg ccttcaaaca atacgctaac gacaacggtg ttgatggtgt ttggacttat 600
gatgatgcca caaaaacctt tacggtaact gagcatcatc accatcacca ctaa 654
<210> 361
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 361
Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Met
1 5 10 15
Thr Tyr Lys Leu Ile Leu Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr Thr
20 25 30
Thr Glu Ala Val Asp Ala Ala Thr Ala Glu Lys Val Phe Lys Gln Tyr
35 40 45
Ala Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Glu Trp Thr Tyr Asp Asp Ala Thr
50 55 60
Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu Lys Pro Glu Val Ile Asp Ala Ser Glu
65 70 75 80
Leu Thr Pro Ala Val Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr
85 90 95
Leu Lys Gly Glu Thr Thr Thr Glu Ala Val Asp Ala Ala Thr Ala Glu
100 105 110
Lys Val Phe Lys Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Glu Trp
115 120 125
Thr Tyr Asp Asp Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu Lys Pro Glu
130 135 140
Val Ile Asp Ala Ser Glu Leu Thr Pro Ala Val Thr Thr Tyr Lys Leu
145 150 155 160
Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr Thr Thr Lys Ala Val
165 170 175
Asp Ala Glu Thr Ala Glu Lys Ala Phe Lys Gln Tyr Ala Asn Asp Asn
180 185 190
Gly Val Asp Gly Val Trp Thr Tyr Asp Asp Ala Thr Lys Thr Phe Thr
195 200 205
Val Thr Glu His His His His His His
210 215
<210> 362
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 362
atgaaacatc accatcacca tcatgtcttc acactcgacg atttcgttgg ggactgggaa 60
cagacagccg cctacaacct ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgctg 120
cagaatctcg ccgtgtccgt aactccgatc atgaggattg tccggagcgg tgaaaatgcc 180
ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg tatgaaggtc tgagcgccga ccaaatggcc 240
cagatcgaag aggtgtttaa ggtggtgtac cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc 300
ctgccctatg gcacactggt aatcgacggg gttacgccga acaagctgaa ctatttcgga 360
taa 363
<210> 363
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 363
Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala
65 70 75 80
Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His
85 90 95
Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr
100 105 110
Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly
115 120
<210> 364
<211> 396
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 364
atgaaacatc accatcacca tcatgtcttc acactcgacg atttcgttgg ggactgggaa 60
cagacagccg cctacaacct ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgctg 120
cagaatctcg ccgtgtccgt aactccgatc atgaggattg tccggagcgg tgaaaatgcc 180
ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg tatgaaggtc tgagcgccga ccaaatggcc 240
cagatcgaag aggtgtttaa ggtggtgtac cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc 300
ctgccctatg gcacactggt aatcgacggg gttacgccga acaagctgaa ctatttcgga 360
cggccgtatg aaggcatcgc cgtgttcgac ggctaa 396
<210> 365
<211> 131
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 365
Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala
65 70 75 80
Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His
85 90 95
Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr
100 105 110
Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val
115 120 125
Phe Asp Gly
130
<210> 366
<211> 423
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 366
atgaaacatc accatcacca tcatgtcttc acactcgacg atttcgttgg ggactgggaa 60
cagacagccg cctacaacct ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgctg 120
cagaatctcg ccgtgtccgt aactccgatc atgaggattg tccggagcgg tgaaaatgcc 180
ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg tatgaaggtc tgagcgccga ccaaatggcc 240
cagatcgaag aggtgtttaa ggtggtgtac cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc 300
ctgccctatg gcacactggt aatcgacggg gttacgccga acaagctgaa ctatttcgga 360
cggccgtatg aaggcatcgc cgtgttcgac ggcaaaaaga tcactaccac agggaccctg 420
taa 423
<210> 367
<211> 140
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 367
Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala
65 70 75 80
Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His
85 90 95
Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr
100 105 110
Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val
115 120 125
Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu
130 135 140
<210> 368
<211> 432
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 368
atgaaacatc accatcacca tcatgtcttc acactcgacg atttcgttgg ggactgggaa 60
cagacagccg cctacaacct ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgctg 120
cagaatctcg ccgtgtccgt aactccgatc atgaggattg tccggagcgg tgaaaatgcc 180
ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg tatgaaggtc tgagcgccga ccaaatggcc 240
cagatcgaag aggtgtttaa ggtggtgtac cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc 300
ctgccctatg gcacactggt aatcgacggg gttacgccga acaagctgaa ctatttcgga 360
cggccgtatg aaggcatcgc cgtgttcgac ggcaaaaaga tcactaccac agggaccctg 420
tggaacggct aa 432
<210> 369
<211> 143
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 369
Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala
65 70 75 80
Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His
85 90 95
Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr
100 105 110
Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val
115 120 125
Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly
130 135 140
<210> 370
<211> 483
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 370
atggtttccg tgagcggctg gcggctgttc aagaagatta gcttcacact cgacgatttc 60
gttggggact gggaacagac agccgcctac aacctggacc aagtccttga acagggaggt 120
gtgtccagtt tgctgcagaa tctcgccgtg tccgtaactc cgatcatgag gattgtccgg 180
agcggtgaaa atgccctgaa gatcgacatc catgtcatca tcccgtatga aggtctgagc 240
gccgaccaaa tggcccagat cgaagaggtg tttaaggtgg tgtaccctgt ggatgatcat 300
cactttaagg tgatcctgcc ctatggcaca ctggtaatcg acggggttac gccgaacaag 360
ctgaactatt tcggacggcc gtatgaaggc atcgccgtgt tcgacggcaa aaagatcact 420
accacaggga ccctgtggaa cggcaacaaa attatcgacg agcgcctgat cacccccgac 480
taa 483
<210> 371
<211> 160
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 371
Met Val Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser Phe Thr
1 5 10 15
Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu
20 25 30
Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu
35 40 45
Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn
50 55 60
Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser
65 70 75 80
Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro
85 90 95
Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val
100 105 110
Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr
115 120 125
Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr
130 135 140
Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp
145 150 155 160
<210> 372
<211> 495
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 372
atggtttccg tgagcggctg gcggctgttc aagaagatta gcggcagctc cggtttcaca 60
ctcgacgatt tcgttgggga ctgggaacag acagccgcct acaacctgga ccaagtcctt 120
gaacagggag gtgtgtccag tttgctgcag aatctcgccg tgtccgtaac tccgatcatg 180
aggattgtcc ggagcggtga aaatgccctg aagatcgaca tccatgtcat catcccgtat 240
gaaggtctga gcgccgacca aatggcccag atcgaagagg tgtttaaggt ggtgtaccct 300
gtggatgatc atcactttaa ggtgatcctg ccctatggca cactggtaat cgacggggtt 360
acgccgaaca agctgaacta tttcggacgg ccgtatgaag gcatcgccgt gttcgacggc 420
aaaaagatca ctaccacagg gaccctgtgg aacggcaaca aaattatcga cgagcgcctg 480
atcacccccg actaa 495
<210> 373
<211> 164
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 373
Met Val Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser Gly Ser
1 5 10 15
Ser Gly Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala
20 25 30
Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
35 40 45
Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg
50 55 60
Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr
65 70 75 80
Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys
85 90 95
Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr
100 105 110
Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe
115 120 125
Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr
130 135 140
Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu
145 150 155 160
Ile Thr Pro Asp
<210> 374
<211> 507
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 374
atggtttccg tgagcggctg gcggctgttc aagaagatta gcggctcgag cggtggctcg 60
agcggtttca cactcgacga tttcgttggg gactgggaac agacagccgc ctacaacctg 120
gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgctgc agaatctcgc cgtgtccgta 180
actccgatca tgaggattgt ccggagcggt gaaaatgccc tgaagatcga catccatgtc 240
atcatcccgt atgaaggtct gagcgccgac caaatggccc agatcgaaga ggtgtttaag 300
gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgccctatgg cacactggta 360
atcgacgggg ttacgccgaa caagctgaac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 420
gtgttcgacg gcaaaaagat cactaccaca gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 480
gacgagcgcc tgatcacccc cgactaa 507
<210> 375
<211> 168
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 375
Met Val Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser Gly Ser
1 5 10 15
Ser Gly Gly Ser Ser Gly Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp
20 25 30
Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly
35 40 45
Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met
50 55 60
Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val
65 70 75 80
Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu
85 90 95
Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val
100 105 110
Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Lys
115 120 125
Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly
130 135 140
Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile
145 150 155 160
Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp
165
<210> 376
<211> 519
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 376
atggtttccg tgagcggctg gcggctgttc aagaagatta gcggctcgag cggtggctcg 60
agcggtggct cgagcggttt cacactcgac gatttcgttg gggactggga acagacagcc 120
gcctacaacc tggaccaagt ccttgaacag ggaggtgtgt ccagtttgct gcagaatctc 180
gccgtgtccg taactccgat catgaggatt gtccggagcg gtgaaaatgc cctgaagatc 240
gacatccatg tcatcatccc gtatgaaggt ctgagcgccg accaaatggc ccagatcgaa 300
gaggtgttta aggtggtgta ccctgtggat gatcatcact ttaaggtgat cctgccctat 360
ggcacactgg taatcgacgg ggttacgccg aacaagctga actatttcgg acggccgtat 420
gaaggcatcg ccgtgttcga cggcaaaaag atcactacca cagggaccct gtggaacggc 480
aacaaaatta tcgacgagcg cctgatcacc cccgactaa 519
<210> 377
<211> 172
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 377
Met Val Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser Gly Ser
1 5 10 15
Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly Phe Thr Leu Asp Asp Phe
20 25 30
Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu
35 40 45
Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val
50 55 60
Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile
65 70 75 80
Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met
85 90 95
Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His
100 105 110
His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val
115 120 125
Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala
130 135 140
Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly
145 150 155 160
Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp
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<211> 531
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 378
atggtttccg tgagcggctg gcggctgttc aagaagatta gcggctcgag cggtggctcg 60
agcggtggct cgagcggtgg ctcgagcggt ttcacactcg acgatttcgt tggggactgg 120
gaacagacag ccgcctacaa cctggaccaa gtccttgaac agggaggtgt gtccagtttg 180
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atcctgccct atggcacact ggtaatcgac ggggttacgc cgaacaagct gaactatttc 420
ggacggccgt atgaaggcat cgccgtgttc gacggcaaaa agatcactac cacagggacc 480
ctgtggaacg gcaacaaaat tatcgacgag cgcctgatca cccccgacta a 531
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<211> 176
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 379
Met Val Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser Gly Ser
1 5 10 15
Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly Phe Thr
20 25 30
Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu
35 40 45
Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu
50 55 60
Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn
65 70 75 80
Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser
85 90 95
Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro
100 105 110
Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val
115 120 125
Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr
130 135 140
Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr
145 150 155 160
Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp
165 170 175
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 380
atggtttccg tgagcggctg gcggctgttc aagaagatta gcggctcgag cggtggctcg 60
agcggtggct cgagcggtgg ctcgagcggt ggctcgagcg gtttcacact cgacgatttc 120
gttggggact gggaacagac agccgcctac aacctggacc aagtccttga acagggaggt 180
gtgtccagtt tgctgcagaa tctcgccgtg tccgtaactc cgatcatgag gattgtccgg 240
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gccgaccaaa tggcccagat cgaagaggtg tttaaggtgg tgtaccctgt ggatgatcat 360
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accacaggga ccctgtggaa cggcaacaaa attatcgacg agcgcctgat cacccccgac 540
taa 543
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<211> 180
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 381
Met Val Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser Gly Ser
1 5 10 15
Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser
20 25 30
Ser Gly Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala
35 40 45
Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
50 55 60
Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg
65 70 75 80
Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr
85 90 95
Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys
100 105 110
Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr
115 120 125
Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe
130 135 140
Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr
145 150 155 160
Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu
165 170 175
Ile Thr Pro Asp
180
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<211> 537
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 382
atggtgagcg gctggcggct gttcaagaag attagcggct cgagcggtgg ctcgagcggt 60
ggctcgagcg gtggctcgag cggtggctcg agcggtttca cactcgacga tttcgttggg 120
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agtttgctgc agaatctcgc cgtgtccgta actccgatca tgaggattgt ccggagcggt 240
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gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc gacgagcgcc tgatcacccc cgactaa 537
<210> 383
<211> 178
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 383
Met Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser Gly Ser Ser Gly
1 5 10 15
Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly
20 25 30
Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr
35 40 45
Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln
50 55 60
Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly
65 70 75 80
Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly
85 90 95
Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val
100 105 110
Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr
115 120 125
Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg
130 135 140
Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr
145 150 155 160
Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr
165 170 175
Pro Asp
<210> 384
<211> 486
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 384
atggtcttca cactcgacga tttcgttggg gactgggaac agacagccgc ctacaacctg 60
gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgctgc agaatctcgc cgtgtccgta 120
actccgatca tgaggattgt ccggagcggt gaaaatgccc tgaagatcga catccatgtc 180
atcatcccgt atgaaggtct gagcgccgac caaatggccc agatcgaaga ggtgtttaag 240
gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgccctatgg cacactggta 300
atcgacgggg ttacgccgaa caagctgaac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360
gtgttcgacg gcaaaaagat cactaccaca gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420
gacgagcgcc tgatcacccc cgacgtttcc gtgagcggct ggcggctgtt caagaagatt 480
agctaa 486
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<211> 161
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 385
Met Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala
1 5 10 15
Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
20 25 30
Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg
35 40 45
Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr
50 55 60
Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys
65 70 75 80
Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr
85 90 95
Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe
100 105 110
Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr
115 120 125
Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu
130 135 140
Ile Thr Pro Asp Val Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile
145 150 155 160
Ser
<210> 386
<211> 498
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 386
atggtcttca cactcgacga tttcgttggg gactgggaac agacagccgc ctacaacctg 60
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<211> 165
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 387
Met Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala
1 5 10 15
Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
20 25 30
Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg
35 40 45
Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr
50 55 60
Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys
65 70 75 80
Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr
85 90 95
Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe
100 105 110
Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr
115 120 125
Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu
130 135 140
Ile Thr Pro Asp Gly Ser Ser Gly Val Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu
145 150 155 160
Phe Lys Lys Ile Ser
165
<210> 388
<211> 510
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 388
atggtcttca cactcgacga tttcgttggg gactgggaac agacagccgc ctacaacctg 60
gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgctgc agaatctcgc cgtgtccgta 120
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<211> 169
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<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 389
Met Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala
1 5 10 15
Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
20 25 30
Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg
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Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe
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Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu
130 135 140
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Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
165
<210> 390
<211> 504
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 390
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<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 391
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115 120 125
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165
<210> 392
<211> 501
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 392
atggtttccg tgagcggctg gcggctgttc aagaagatta gcttcacact cgacgatttc 60
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cactttaagg tgatcctgcc ctatggcaca ctggtaatcg acggggttac gccgaacaag 360
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<211> 166
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 393
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20 25 30
Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu
35 40 45
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50 55 60
Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser
65 70 75 80
Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro
85 90 95
Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val
100 105 110
Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr
115 120 125
Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr
130 135 140
Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp
145 150 155 160
His His His His His His
165
<210> 394
<211> 513
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 394
atggtttccg tgagcggctg gcggctgttc aagaagatta gcggcagctc cggtttcaca 60
ctcgacgatt tcgttgggga ctgggaacag acagccgcct acaacctgga ccaagtcctt 120
gaacagggag gtgtgtccag tttgctgcag aatctcgccg tgtccgtaac tccgatcatg 180
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gaaggtctga gcgccgacca aatggcccag atcgaagagg tgtttaaggt ggtgtaccct 300
gtggatgatc atcactttaa ggtgatcctg ccctatggca cactggtaat cgacggggtt 360
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<211> 170
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 395
Met Val Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser Gly Ser
1 5 10 15
Ser Gly Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala
20 25 30
Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
35 40 45
Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg
50 55 60
Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr
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Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys
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Ile Thr Pro Asp His His His His His His
165 170
<210> 396
<211> 525
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 396
atggtttccg tgagcggctg gcggctgttc aagaagatta gcggctcgag cggtggctcg 60
agcggtttca cactcgacga tttcgttggg gactgggaac agacagccgc ctacaacctg 120
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actccgatca tgaggattgt ccggagcggt gaaaatgccc tgaagatcga catccatgtc 240
atcatcccgt atgaaggtct gagcgccgac caaatggccc agatcgaaga ggtgtttaag 300
gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgccctatgg cacactggta 360
atcgacgggg ttacgccgaa caagctgaac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 420
gtgttcgacg gcaaaaagat cactaccaca gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 480
gacgagcgcc tgatcacccc cgaccatcac catcaccatc attaa 525
<210> 397
<211> 174
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 397
Met Val Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser Gly Ser
1 5 10 15
Ser Gly Gly Ser Ser Gly Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp
20 25 30
Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly
35 40 45
Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met
50 55 60
Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val
65 70 75 80
Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu
85 90 95
Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val
100 105 110
Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Lys
115 120 125
Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly
130 135 140
Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile
145 150 155 160
Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp His His His His His His
165 170
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<211> 537
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 398
atggtttccg tgagcggctg gcggctgttc aagaagatta gcggctcgag cggtggctcg 60
agcggtggct cgagcggttt cacactcgac gatttcgttg gggactggga acagacagcc 120
gcctacaacc tggaccaagt ccttgaacag ggaggtgtgt ccagtttgct gcagaatctc 180
gccgtgtccg taactccgat catgaggatt gtccggagcg gtgaaaatgc cctgaagatc 240
gacatccatg tcatcatccc gtatgaaggt ctgagcgccg accaaatggc ccagatcgaa 300
gaggtgttta aggtggtgta ccctgtggat gatcatcact ttaaggtgat cctgccctat 360
ggcacactgg taatcgacgg ggttacgccg aacaagctga actatttcgg acggccgtat 420
gaaggcatcg ccgtgttcga cggcaaaaag atcactacca cagggaccct gtggaacggc 480
aacaaaatta tcgacgagcg cctgatcacc cccgaccatc accatcacca tcattaa 537
<210> 399
<211> 178
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 399
Met Val Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser Gly Ser
1 5 10 15
Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly Phe Thr Leu Asp Asp Phe
20 25 30
Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu
35 40 45
Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val
50 55 60
Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile
65 70 75 80
Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met
85 90 95
Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His
100 105 110
His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val
115 120 125
Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala
130 135 140
Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly
145 150 155 160
Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp His His His His
165 170 175
His His
<210> 400
<211> 549
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 400
atggtttccg tgagcggctg gcggctgttc aagaagatta gcggctcgag cggtggctcg 60
agcggtggct cgagcggtgg ctcgagcggt ttcacactcg acgatttcgt tggggactgg 120
gaacagacag ccgcctacaa cctggaccaa gtccttgaac agggaggtgt gtccagtttg 180
ctgcagaatc tcgccgtgtc cgtaactccg atcatgagga ttgtccggag cggtgaaaat 240
gccctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc ccgtatgaag gtctgagcgc cgaccaaatg 300
gcccagatcg aagaggtgtt taaggtggtg taccctgtgg atgatcatca ctttaaggtg 360
atcctgccct atggcacact ggtaatcgac ggggttacgc cgaacaagct gaactatttc 420
ggacggccgt atgaaggcat cgccgtgttc gacggcaaaa agatcactac cacagggacc 480
ctgtggaacg gcaacaaaat tatcgacgag cgcctgatca cccccgacca tcaccatcac 540
catcattaa 549
<210> 401
<211> 182
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 401
Met Val Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser Gly Ser
1 5 10 15
Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly Phe Thr
20 25 30
Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu
35 40 45
Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu
50 55 60
Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn
65 70 75 80
Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser
85 90 95
Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro
100 105 110
Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val
115 120 125
Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr
130 135 140
Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr
145 150 155 160
Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp
165 170 175
His His His His His His
180
<210> 402
<211> 555
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 402
atggtgagcg gctggcggct gttcaagaag attagcggct cgagcggtgg ctcgagcggt 60
ggctcgagcg gtggctcgag cggtggctcg agcggtttca cactcgacga tttcgttggg 120
gactgggaac agacagccgc ctacaacctg gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc 180
agtttgctgc agaatctcgc cgtgtccgta actccgatca tgaggattgt ccggagcggt 240
gaaaatgccc tgaagatcga catccatgtc atcatcccgt atgaaggtct gagcgccgac 300
caaatggccc agatcgaaga ggtgtttaag gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt 360
aaggtgatcc tgccctatgg cacactggta atcgacgggg ttacgccgaa caagctgaac 420
tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc gtgttcgacg gcaaaaagat cactaccaca 480
gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc gacgagcgcc tgatcacccc cgaccatcac 540
catcaccatc attaa 555
<210> 403
<211> 184
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 403
Met Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser Gly Ser Ser Gly
1 5 10 15
Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly
20 25 30
Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr
35 40 45
Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln
50 55 60
Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly
65 70 75 80
Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly
85 90 95
Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val
100 105 110
Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr
115 120 125
Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg
130 135 140
Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr
145 150 155 160
Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr
165 170 175
Pro Asp His His His His His His
180
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<211> 561
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 404
atggtttccg tgagcggctg gcggctgttc aagaagatta gcggctcgag cggtggctcg 60
agcggtggct cgagcggtgg ctcgagcggt ggctcgagcg gtttcacact cgacgatttc 120
gttggggact gggaacagac agccgcctac aacctggacc aagtccttga acagggaggt 180
gtgtccagtt tgctgcagaa tctcgccgtg tccgtaactc cgatcatgag gattgtccgg 240
agcggtgaaa atgccctgaa gatcgacatc catgtcatca tcccgtatga aggtctgagc 300
gccgaccaaa tggcccagat cgaagaggtg tttaaggtgg tgtaccctgt ggatgatcat 360
cactttaagg tgatcctgcc ctatggcaca ctggtaatcg acggggttac gccgaacaag 420
ctgaactatt tcggacggcc gtatgaaggc atcgccgtgt tcgacggcaa aaagatcact 480
accacaggga ccctgtggaa cggcaacaaa attatcgacg agcgcctgat cacccccgac 540
catcaccatc accatcatta a 561
<210> 405
<211> 186
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 405
Met Val Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser Gly Ser
1 5 10 15
Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser
20 25 30
Ser Gly Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala
35 40 45
Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
50 55 60
Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg
65 70 75 80
Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr
85 90 95
Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys
100 105 110
Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr
115 120 125
Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe
130 135 140
Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr
145 150 155 160
Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu
165 170 175
Ile Thr Pro Asp His His His His His His
180 185
<210> 406
<211> 507
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 406
atgaaacatc accatcacca tcatgtcttc acactcgacg atttcgttgg ggactgggaa 60
cagacagccg cctacaacct ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgctg 120
cagaatctcg ccgtgtccgt aactccgatc atgaggattg tccggagcgg tgaaaatgcc 180
ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg tatgaaggtc tgagcgccga ccaaatggcc 240
cagatcgaag aggtgtttaa ggtggtgtac cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc 300
ctgccctatg gcacactggt aatcgacggg gttacgccga acaagctgaa ctatttcgga 360
cggccgtatg aaggcatcgc cgtgttcgac ggcaaaaaga tcactaccac agggaccctg 420
tggaacggca acaaaattat cgacgagcgc ctgatcaccc ccgacgtttc cgtgagcggc 480
tggcggctgt tcaagaagat tagctaa 507
<210> 407
<211> 168
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 407
Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala
65 70 75 80
Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His
85 90 95
Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr
100 105 110
Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val
115 120 125
Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn
130 135 140
Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp Val Ser Val Ser Gly
145 150 155 160
Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
165
<210> 408
<211> 519
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 408
atgaaacatc accatcacca tcatgtcttc acactcgacg atttcgttgg ggactgggaa 60
cagacagccg cctacaacct ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgctg 120
cagaatctcg ccgtgtccgt aactccgatc atgaggattg tccggagcgg tgaaaatgcc 180
ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg tatgaaggtc tgagcgccga ccaaatggcc 240
cagatcgaag aggtgtttaa ggtggtgtac cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc 300
ctgccctatg gcacactggt aatcgacggg gttacgccga acaagctgaa ctatttcgga 360
cggccgtatg aaggcatcgc cgtgttcgac ggcaaaaaga tcactaccac agggaccctg 420
tggaacggca acaaaattat cgacgagcgc ctgatcaccc ccgacggctc gagcggtgtt 480
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<210> 409
<211> 172
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 409
Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala
65 70 75 80
Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His
85 90 95
Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr
100 105 110
Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val
115 120 125
Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn
130 135 140
Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp Gly Ser Ser Gly Val
145 150 155 160
Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
165 170
<210> 410
<211> 525
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 410
atgaaacatc accatcacca tcatgtcttc acactcgacg atttcgttgg ggactgggaa 60
cagacagccg cctacaacct ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgctg 120
cagaatctcg ccgtgtccgt aactccgatc atgaggattg tccggagcgg tgaaaatgcc 180
ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg tatgaaggtc tgagcgccga ccaaatggcc 240
cagatcgaag aggtgtttaa ggtggtgtac cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc 300
ctgccctatg gcacactggt aatcgacggg gttacgccga acaagctgaa ctatttcgga 360
cggccgtatg aaggcatcgc cgtgttcgac ggcaaaaaga tcactaccac agggaccctg 420
tggaacggca acaaaattat cgacgagcgc ctgatcaccc ccgacggctc gagcggtggc 480
tcgagcggtg tgagcggctg gcggctgttc aagaagatta gctaa 525
<210> 411
<211> 174
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 411
Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala
65 70 75 80
Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His
85 90 95
Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr
100 105 110
Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val
115 120 125
Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn
130 135 140
Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp Gly Ser Ser Gly Gly
145 150 155 160
Ser Ser Gly Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
165 170
<210> 412
<211> 531
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 412
atgaaacatc accatcacca tcatgtcttc acactcgacg atttcgttgg ggactgggaa 60
cagacagccg cctacaacct ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgctg 120
cagaatctcg ccgtgtccgt aactccgatc atgaggattg tccggagcgg tgaaaatgcc 180
ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg tatgaaggtc tgagcgccga ccaaatggcc 240
cagatcgaag aggtgtttaa ggtggtgtac cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc 300
ctgccctatg gcacactggt aatcgacggg gttacgccga acaagctgaa ctatttcgga 360
cggccgtatg aaggcatcgc cgtgttcgac ggcaaaaaga tcactaccac agggaccctg 420
tggaacggca acaaaattat cgacgagcgc ctgatcaccc ccgacggctc gagcggtggc 480
tcgagcggtg tttccgtgag cggctggcgg ctgttcaaga agattagcta a 531
<210> 413
<211> 176
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 413
Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala
65 70 75 80
Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His
85 90 95
Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr
100 105 110
Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val
115 120 125
Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn
130 135 140
Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp Gly Ser Ser Gly Gly
145 150 155 160
Ser Ser Gly Val Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
165 170 175
<210> 414
<211> 498
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 414
atggtcttca cactcgaaga tttcgttggg gactgggaac agacagccgc ctacaacctg 60
gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgctgc agaatctcgc cgtgtccgta 120
actccgatcc aaaggattgt ccggagcggt gaaaatgccc tgaagatcga catccatgtc 180
atcatcccgt atgaaggtct gagcgccgac caaatggccc agatcgaaga ggtgtttaag 240
gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgccctatgg cacactggta 300
atcgacgggg ttacgccgaa catgctgaac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360
gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaaca gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420
gacgagcgcc tgatcacccc cgacggctcc atgctgttcc gagtaaccat caacagccat 480
catcaccatc accactaa 498
<210> 415
<211> 165
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 415
Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala
1 5 10 15
Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
20 25 30
Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Arg
35 40 45
Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr
50 55 60
Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys
65 70 75 80
Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr
85 90 95
Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Leu Asn Tyr Phe
100 105 110
Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr
115 120 125
Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu
130 135 140
Ile Thr Pro Asp Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser His
145 150 155 160
His His His His His
165
<210> 416
<211> 501
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 416
atggtgagcg gctggcggct gttcaagaag attagccacc atcaccatca ccatcatcac 60
ttcacactcg acgatttcgt tggggactgg gaacagacag ccgcctacaa cctggaccaa 120
gtccttgaac agggaggtgt gtccagtttg ctgcagaatc tcgccgtgtc cgtaactccg 180
atcatgagga ttgtccggag cggtgaaaat gccctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc 240
ccgtatgaag gtctgagcgc cgaccaaatg gcccagatcg aagaggtgtt taaggtggtg 300
taccctgtgg atgatcatca ctttaaggtg atcctgccct atggcacact ggtaatcgac 360
ggggttacgc cgaacaagct gaactatttc ggacggccgt atgaaggcat cgccgtgttc 420
gacggcaaaa agatcactac cacagggacc ctgtggaacg gcaacaaaat tatcgacgag 480
cgcctgatca cccccgacta a 501
<210> 417
<211> 166
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 417
Met Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser His His His His
1 5 10 15
His His His His Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln
20 25 30
Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser
35 40 45
Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile
50 55 60
Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile
65 70 75 80
Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val
85 90 95
Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu
100 105 110
Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn
115 120 125
Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys
130 135 140
Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu
145 150 155 160
Arg Leu Ile Thr Pro Asp
165
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<211> 510
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<213> 人工序列(Artificial sequence)
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ctggaccaag tccttgaaca gggaggtgtg tccagtttgc tgcagaatct cgccgtgtcc 180
gtaactccga tcatgaggat tgtccggagc ggtgaaaatg ccctgaagat cgacatccat 240
gtcatcatcc cgtatgaagg tctgagcgcc gaccaaatgg cccagatcga agaggtgttt 300
aaggtggtgt accctgtgga tgatcatcac tttaaggtga tcctgcccta tggcacactg 360
gtaatcgacg gggttacgcc gaacaagctg aactatttcg gacggccgta tgaaggcatc 420
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<211> 169
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 419
Met Lys His His His His His His Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys
1 5 10 15
Lys Ile Ser Gly Ser Ser Gly Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp
20 25 30
Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly
35 40 45
Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile
50 55 60
Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His
65 70 75 80
Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile
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Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys
100 105 110
Val Ile Leu Pro Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn
115 120 125
Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp
130 135 140
Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile
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Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp
165
<210> 420
<211> 507
<212> DNA
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<220>
<223> 合成
<400> 420
atggtgagcg gctggcggct gttcaagaag attagcggca gctccggttt cacactcgac 60
gatttcgttg gggactggga acagacagcc gcctacaacc tggaccaagt ccttgaacag 120
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gtccggagcg gtgaaaatgc cctgaagatc gacatccatg tcatcatccc gtatgaaggt 240
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aacaagctga actatttcgg acggccgtat gaaggcatcg ccgtgttcga cggcaaaaag 420
atcactacca cagggaccct gtggaacggc aacaaaatta tcgacgagcg cctgatcacc 480
cccgaccatc accatcacca tcattaa 507
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<211> 168
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
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Met Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser Gly Ser Ser Gly
1 5 10 15
Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr
20 25 30
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Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
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Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg
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Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr
130 135 140
Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr
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Pro Asp His His His His His His
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<211> 498
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
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atggtcttca cactcgaaga tttcgttggg gactgggaac agacagccgc ctacaacctg 60
gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgctgc agaatctcgc cgtgtccgta 120
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atcatcccgt atgaaggtct gagcgccgac caaatggccc agatcgaaga ggtgtttaag 240
gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgccctatgg cacactggta 300
atcgacgggg ttacgccgaa catgctgaac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360
gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaaca gggaccctgt ggaacgagaa caaaattatc 420
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catcaccatc accactaa 498
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 423
Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala
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Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Glu Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu
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165
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<211> 498
<212> DNA
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<223> 合成
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成
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Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Met Val Arg
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His His His His His
165
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<211> 498
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
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<220>
<223> 合成
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<223> 合成
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<220>
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成
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cagacagccg cctacaacct ggaccaagtc cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgctg 120
cagaatctcg ccgtgtccgt aactccgatc atgaggattg tccggagcgg tgaaaatgcc 180
ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg tatgaaggtc tgagcgccga ccaaatggcc 240
cagatcgaag aggtgtttaa ggtggtgtac cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc 300
ctgccctatg gcacactggt aatcgac 327
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Met Lys His His His His His His Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val
1 5 10 15
Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr
35 40 45
Pro Ile Met Arg Ile Val Arg Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp
50 55 60
Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala
65 70 75 80
Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His
85 90 95
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1 5 10 15
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Leu Phe Lys Lys Ile Ser
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1 5 10 15
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Gly Ser Met Lys Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Trp Lys Val Glu Gly
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Tyr Arg Leu Phe Glu Lys Ile Ser
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Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile
20 25 30
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20
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<400> 522
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<400> 524
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1 5 10 15
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<400> 526
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1 5 10 15
Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
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<400> 527
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<220>
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<400> 531
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Leu Phe Lys Lys Ile
20
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<220>
<223> 合成
<400> 532
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20 25
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 533
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1 5 10 15
Leu Phe Lys Lys Ile Ser
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<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
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<220>
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Leu Phe Lys Lys Ile Ser
20
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<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 536
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1 5 10 15
Tyr Arg Leu Phe Glu Arg Glu Ser
20
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<220>
<223> 合成
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1 5 10 15
Leu Phe Glu Lys Glu Ser
20
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Asp
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1 5 10 15
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20 25 30
Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp Gly Ser
35 40 45
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<212> PRT
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<211> 11
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<212> PRT
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<400> 608
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<212> PRT
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<400> 609
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<212> PRT
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<400> 613
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<212> PRT
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<400> 614
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<212> PRT
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<220>
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<400> 615
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1 5 10
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 616
Gly Lys Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Trp Lys
1 5 10
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 617
Gly Lys Met Leu Phe Lys Val Thr Ile Asn Ser Trp Lys
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 618
Gly Lys Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Gln Ser Trp Lys
1 5 10
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<220>
<223> 合成
<400> 703
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1 5 10 15
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100 105 110
Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr
115 120 125
Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu
130 135 140
Ile Thr Pro Asp Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val
145 150 155 160
Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
165 170
<210> 704
<211> 170
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 704
Met Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala
1 5 10 15
Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
20 25 30
Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg
35 40 45
Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr
50 55 60
Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys
65 70 75 80
Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr
85 90 95
Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe
100 105 110
Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr
115 120 125
Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu
130 135 140
Ile Thr Pro Asp Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val
145 150 155 160
Thr Gly Tyr Arg Leu Phe Glu Glu Ile Leu
165 170
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<211> 102
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 705
Met Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala
1 5 10 15
Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
20 25 30
Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg
35 40 45
Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr
50 55 60
Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys
65 70 75 80
Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr
85 90 95
Gly Thr Leu Val Ile Asp
100
<210> 706
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 706
Met Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala
1 5 10 15
Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
20 25 30
Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg
35 40 45
Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr
50 55 60
Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys
65 70 75 80
Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr
85 90 95
Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe
100 105 110
Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly
115 120
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<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 707
Met Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala
1 5 10 15
Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
20 25 30
Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg
35 40 45
Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr
50 55 60
Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys
65 70 75 80
Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr
85 90 95
Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe
100 105 110
Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr
115 120 125
Thr Thr Gly Thr Leu
130
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<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 708
Met Val Phe Thr Leu Asp Asp Phe Val Gly Asp Trp Glu Gln Thr Ala
1 5 10 15
Ala Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu
20 25 30
Leu Gln Asn Leu Ala Val Ser Val Thr Pro Ile Met Arg Ile Val Arg
35 40 45
Ser Gly Glu Asn Ala Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr
50 55 60
Glu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Met Ala Gln Ile Glu Glu Val Phe Lys
65 70 75 80
Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu Pro Tyr
85 90 95
Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe
100 105 110
Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr
115 120 125
Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu
130 135 140
Ile Thr Pro Asp
145
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<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 709
Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly
1 5 10 15
Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp
20 25 30
Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp Gly Ser
35 40 45
Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe
50 55 60
Lys Lys Ile Ser
65
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<211> 46
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 710
Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile
1 5 10 15
Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr
20 25 30
Ile Asn Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile Ser
35 40 45
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 711
Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp Gly
1 5 10 15
Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu
20 25 30
Phe Lys Lys Ile Ser
35
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<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 712
Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val Ser Gly Trp Arg
1 5 10 15
Leu Phe Lys Lys Ile Ser
20
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<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 713
Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly
1 5 10 15
Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp
20 25 30
Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp Gly Ser
35 40 45
Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val Thr Gly Tyr Arg Leu Phe
50 55 60
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65
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<211> 46
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 714
Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile
1 5 10 15
Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr
20 25 30
Ile Asn Ser Val Thr Gly Tyr Arg Leu Phe Glu Glu Ile Leu
35 40 45
<210> 715
<211> 37
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 715
Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp Gly
1 5 10 15
Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val Thr Gly Tyr Arg Leu
20 25 30
Phe Glu Glu Ile Leu
35
<210> 716
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 716
Gly Ser Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Val Thr Gly Tyr Arg
1 5 10 15
Leu Phe Glu Glu Ile Leu
20
<210> 717
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 717
Gly Val Thr Pro Asn Lys Leu Asn Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly
1 5 10 15
Ile Ala Val Phe Asp Gly
20
<210> 718
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 718
Lys Lys Ile Thr Thr Thr Gly Thr Leu
1 5
<210> 719
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 719
Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Thr Pro Asp
1 5 10 15
<210> 720
<211> 297
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 720
Met Ala Glu Ile Gly Thr Gly Phe Pro Phe Asp Pro His Tyr Val Glu
1 5 10 15
Val Leu Gly Glu Arg Met His Tyr Val Asp Val Gly Pro Arg Asp Gly
20 25 30
Thr Pro Val Leu Phe Leu His Gly Asn Pro Thr Ser Ser Tyr Val Trp
35 40 45
Arg Asn Ile Ile Pro His Val Ala Pro Thr His Arg Cys Ile Ala Pro
50 55 60
Asp Leu Ile Gly Met Gly Lys Ser Asp Lys Pro Asp Leu Gly Tyr Phe
65 70 75 80
Phe Asp Asp His Val Arg Phe Met Asp Ala Phe Ile Glu Ala Leu Gly
85 90 95
Leu Glu Glu Val Val Leu Val Ile His Asp Trp Gly Ser Ala Leu Gly
100 105 110
Phe His Trp Ala Lys Arg Asn Pro Glu Arg Val Lys Gly Ile Ala Phe
115 120 125
Met Glu Phe Ile Arg Pro Ile Pro Thr Trp Asp Glu Trp Pro Glu Phe
130 135 140
Ala Arg Glu Thr Phe Gln Ala Phe Arg Thr Thr Asp Val Gly Arg Lys
145 150 155 160
Leu Ile Ile Asp Gln Asn Val Phe Ile Glu Gly Thr Leu Pro Met Gly
165 170 175
Val Val Arg Pro Leu Thr Glu Val Glu Met Asp His Tyr Arg Glu Pro
180 185 190
Phe Leu Asn Pro Val Asp Arg Glu Pro Leu Trp Arg Phe Pro Asn Glu
195 200 205
Leu Pro Ile Ala Gly Glu Pro Ala Asn Ile Val Ala Leu Val Glu Glu
210 215 220
Tyr Met Asp Trp Leu His Gln Ser Pro Val Pro Lys Leu Leu Phe Trp
225 230 235 240
Gly Thr Pro Gly Val Leu Ile Pro Pro Ala Glu Ala Ala Arg Leu Ala
245 250 255
Lys Ser Leu Pro Asn Cys Lys Ala Val Asp Ile Gly Pro Gly Leu Asn
260 265 270
Leu Leu Gln Glu Asp Asn Pro Asp Leu Ile Gly Ser Glu Ile Ala Arg
275 280 285
Trp Leu Ser Thr Leu Glu Ile Ser Gly
290 295
<210> 721
<211> 582
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 721
atgaaacatc accatcacca tcatgtcaga tcatcttctc gaaccccgag tgacaagcct 60
gtagcccatg ttgtagcaaa ccctcaagct gaggggcagc tccagtggct gaaccgccgg 120
gccaatgccc tcctggccaa tggcgtggag ctgagagata accagctggt ggtgccatca 180
gagggcctgt acctcatcta ctcccaggtc ctcttcaagg gccaaggctg cccctccacc 240
catgtgctcc tcacccacac catcagccgc atcgccgtct cctaccagac caaggtcaac 300
ctcctctctg ccatcaagag cccctgccag agggagaccc cagagggggc tgaggccaag 360
ccctggtatg agcccatcta tctgggaggg gtcttccagc tggagaaggg tgaccgactc 420
agcgctgaga tcaatcggcc cgactatctc gactttgccg agtctgggca ggtctacttt 480
gggatcattg ccctgtcgag ttcaggtggt ggcgggagcg gtggagggag cagcggtgga 540
gtttccgtga gcggctggcg gctgttcaag aagattagct aa 582
<210> 722
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 722
Met Lys His His His His His His Val Arg Ser Ser Ser Arg Thr Pro
1 5 10 15
Ser Asp Lys Pro Val Ala His Val Val Ala Asn Pro Gln Ala Glu Gly
20 25 30
Gln Leu Gln Trp Leu Asn Arg Arg Ala Asn Ala Leu Leu Ala Asn Gly
35 40 45
Val Glu Leu Arg Asp Asn Gln Leu Val Val Pro Ser Glu Gly Leu Tyr
50 55 60
Leu Ile Tyr Ser Gln Val Leu Phe Lys Gly Gln Gly Cys Pro Ser Thr
65 70 75 80
His Val Leu Leu Thr His Thr Ile Ser Arg Ile Ala Val Ser Tyr Gln
85 90 95
Thr Lys Val Asn Leu Leu Ser Ala Ile Lys Ser Pro Cys Gln Arg Glu
100 105 110
Thr Pro Glu Gly Ala Glu Ala Lys Pro Trp Tyr Glu Pro Ile Tyr Leu
115 120 125
Gly Gly Val Phe Gln Leu Glu Lys Gly Asp Arg Leu Ser Ala Glu Ile
130 135 140
Asn Arg Pro Asp Tyr Leu Asp Phe Ala Glu Ser Gly Gln Val Tyr Phe
145 150 155 160
Gly Ile Ile Ala Leu Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
165 170 175
Ser Ser Gly Gly Val Ser Val Ser Gly Trp Arg Leu Phe Lys Lys Ile
180 185 190
Ser
<210> 723
<211> 696
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 723
atgggcaaga tgctgttccg agtaaccatc aacagctgga aggggagctc cggtggtggc 60
gggagcggag gtggaggctc gagcggtatg acgtataagt taatccttaa tggtaaaaca 120
ttgaaaggcg agacaactac tgaagctgtt gatgctgcta ctgcagaaaa agtcttcaaa 180
caatacgcta acgacaacgg tgttgacggt gaatggactt acgacgatgc gacgaaaacc 240
tttacggtca ccgaaaaacc agaagtgatc gatgcgtctg aattaacacc agccgtgaca 300
acttacaaac ttgttattaa tggtaaaaca ttgaaaggcg aaacaactac tgaggctgtt 360
gatgctgcta ctgcagagaa ggtgttcaaa caatatgcga atgacaacgg tgttgacggt 420
gagtggactt acgacgatgc gactaagacc tttacagtta ctgaaaaacc agaagtgatc 480
gatgcgtctg agttaacacc agccgtgaca acttacaaac ttgttattaa tggtaaaaca 540
ttgaaaggcg aaacaactac taaagcagta gacgcagaaa ctgcggagaa ggccttcaaa 600
caatacgcta acgacaacgg tgttgatggt gtttggactt atgatgatgc cacaaaaacc 660
tttacggtaa ctgagcatca tcaccatcac cactaa 696
<210> 724
<211> 231
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 724
Met Gly Lys Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Ser Trp Lys Gly Ser
1 5 10 15
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Met Thr Tyr
20 25 30
Lys Leu Ile Leu Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr Thr Thr Glu
35 40 45
Ala Val Asp Ala Ala Thr Ala Glu Lys Val Phe Lys Gln Tyr Ala Asn
50 55 60
Asp Asn Gly Val Asp Gly Glu Trp Thr Tyr Asp Asp Ala Thr Lys Thr
65 70 75 80
Phe Thr Val Thr Glu Lys Pro Glu Val Ile Asp Ala Ser Glu Leu Thr
85 90 95
Pro Ala Val Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys
100 105 110
Gly Glu Thr Thr Thr Glu Ala Val Asp Ala Ala Thr Ala Glu Lys Val
115 120 125
Phe Lys Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Glu Trp Thr Tyr
130 135 140
Asp Asp Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu Lys Pro Glu Val Ile
145 150 155 160
Asp Ala Ser Glu Leu Thr Pro Ala Val Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile
165 170 175
Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala
180 185 190
Glu Thr Ala Glu Lys Ala Phe Lys Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val
195 200 205
Asp Gly Val Trp Thr Tyr Asp Asp Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr
210 215 220
Glu His His His His His His
225 230
<210> 725
<211> 693
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 725
atggacaaga tgctgttccg agtaaccatc aacaagtgga aggggagctc cggtggtggc 60
gggagcggag gtggaggctc gagcggtatg acgtataagt taatccttaa tggtaaaaca 120
ttgaaaggcg agacaactac tgaagctgtt gatgctgcta ctgcagaaaa agtcttcaaa 180
caatacgcta acgacaacgg tgttgacggt gaatggactt acgacgatgc gacgaaaacc 240
tttacggtca ccgaaaaacc agaagtgatc gatgcgtctg aattaacacc agccgtgaca 300
acttacaaac ttgttattaa tggtaaaaca ttgaaaggcg aaacaactac tgaggctgtt 360
gatgctgcta ctgcagagaa ggtgttcaaa caatatgcga atgacaacgg tgttgacggt 420
gagtggactt acgacgatgc gactaagacc tttacagtta ctgaaaaacc agaagtgatc 480
gatgcgtctg agttaacacc agccgtgaca acttacaaac ttgttattaa tggtaaaaca 540
ttgaaaggcg aaacaactac taaagcagta gacgcagaaa ctgcggagaa ggccttcaaa 600
caatacgcta acgacaacgg tgttgatggt gtttggactt atgatgatgc cacaaaaacc 660
tttacggtaa ctgagcatca tcaccatcac cac 693
<210> 726
<211> 231
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 726
Met Asp Lys Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Lys Trp Lys Gly Ser
1 5 10 15
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Met Thr Tyr
20 25 30
Lys Leu Ile Leu Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr Thr Thr Glu
35 40 45
Ala Val Asp Ala Ala Thr Ala Glu Lys Val Phe Lys Gln Tyr Ala Asn
50 55 60
Asp Asn Gly Val Asp Gly Glu Trp Thr Tyr Asp Asp Ala Thr Lys Thr
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Pro Ala Val Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys
100 105 110
Gly Glu Thr Thr Thr Glu Ala Val Asp Ala Ala Thr Ala Glu Lys Val
115 120 125
Phe Lys Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Glu Trp Thr Tyr
130 135 140
Asp Asp Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu Lys Pro Glu Val Ile
145 150 155 160
Asp Ala Ser Glu Leu Thr Pro Ala Val Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile
165 170 175
Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala
180 185 190
Glu Thr Ala Glu Lys Ala Phe Lys Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val
195 200 205
Asp Gly Val Trp Thr Tyr Asp Asp Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr
210 215 220
Glu His His His His His His
225 230
<210> 727
<211> 693
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 727
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ttgaaaggcg agacaactac tgaagctgtt gatgctgcta ctgcagaaaa agtcttcaaa 180
caatacgcta acgacaacgg tgttgacggt gaatggactt acgacgatgc gacgaaaacc 240
tttacggtca ccgaaaaacc agaagtgatc gatgcgtctg aattaacacc agccgtgaca 300
acttacaaac ttgttattaa tggtaaaaca ttgaaaggcg aaacaactac tgaggctgtt 360
gatgctgcta ctgcagagaa ggtgttcaaa caatatgcga atgacaacgg tgttgacggt 420
gagtggactt acgacgatgc gactaagacc tttacagtta ctgaaaaacc agaagtgatc 480
gatgcgtctg agttaacacc agccgtgaca acttacaaac ttgttattaa tggtaaaaca 540
ttgaaaggcg aaacaactac taaagcagta gacgcagaaa ctgcggagaa ggccttcaaa 600
caatacgcta acgacaacgg tgttgatggt gtttggactt atgatgatgc cacaaaaacc 660
tttacggtaa ctgagcatca tcaccatcac cac 693
<210> 728
<211> 231
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 728
Met Asp Lys Leu Leu Phe Thr Val Thr Ile Glu Lys Tyr Lys Gly Ser
1 5 10 15
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Met Thr Tyr
20 25 30
Lys Leu Ile Leu Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr Thr Thr Glu
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
Glu Thr Ala Glu Lys Ala Phe Lys Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val
195 200 205
Asp Gly Val Trp Thr Tyr Asp Asp Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr
210 215 220
Glu His His His His His His
225 230
<210> 729
<211> 693
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 729
atgaagaaga tgctgttccg agtaaccatc cagaagtgga aggggagctc cggtggtggc 60
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ttgaaaggcg agacaactac tgaagctgtt gatgctgcta ctgcagaaaa agtcttcaaa 180
caatacgcta acgacaacgg tgttgacggt gaatggactt acgacgatgc gacgaaaacc 240
tttacggtca ccgaaaaacc agaagtgatc gatgcgtctg aattaacacc agccgtgaca 300
acttacaaac ttgttattaa tggtaaaaca ttgaaaggcg aaacaactac tgaggctgtt 360
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gagtggactt acgacgatgc gactaagacc tttacagtta ctgaaaaacc agaagtgatc 480
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ttgaaaggcg aaacaactac taaagcagta gacgcagaaa ctgcggagaa ggccttcaaa 600
caatacgcta acgacaacgg tgttgatggt gtttggactt atgatgatgc cacaaaaacc 660
tttacggtaa ctgagcatca tcaccatcac cac 693
<210> 730
<211> 231
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<220>
<223> 合成
<400> 730
Met Lys Lys Met Leu Phe Arg Val Thr Ile Gln Lys Trp Lys Gly Ser
1 5 10 15
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Met Thr Tyr
20 25 30
Lys Leu Ile Leu Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr Thr Thr Glu
35 40 45
Ala Val Asp Ala Ala Thr Ala Glu Lys Val Phe Lys Gln Tyr Ala Asn
50 55 60
Asp Asn Gly Val Asp Gly Glu Trp Thr Tyr Asp Asp Ala Thr Lys Thr
65 70 75 80
Phe Thr Val Thr Glu Lys Pro Glu Val Ile Asp Ala Ser Glu Leu Thr
85 90 95
Pro Ala Val Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys
100 105 110
Gly Glu Thr Thr Thr Glu Ala Val Asp Ala Ala Thr Ala Glu Lys Val
115 120 125
Phe Lys Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Glu Trp Thr Tyr
130 135 140
Asp Asp Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu Lys Pro Glu Val Ile
145 150 155 160
Asp Ala Ser Glu Leu Thr Pro Ala Val Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile
165 170 175
Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala
180 185 190
Glu Thr Ala Glu Lys Ala Phe Lys Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val
195 200 205
Asp Gly Val Trp Thr Tyr Asp Asp Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr
210 215 220
Glu His His His His His His
225 230

Claims (177)

1.一种组合物，所述组合物包含：
发光底物；以及
目标分析物结合剂，所述目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和生物发光复合物的多肽组分或生物发光复合物的肽组分中的一者。
2.如权利要求1所述的组合物，其中所述目标分析物结合剂的所述多肽组分包含：
与SEQ ID NO:5的至少60％序列同一性；
与SEQ ID NO:9的至少60％序列同一性；或
与SEQ ID NO:12的至少60％序列同一性。
3.如权利要求1所述的组合物，其中所述目标分析物结合剂的所述肽组分包含：
与SEQ ID NO:10的至少60％序列同一性；
与SEQ ID NO:11的至少60％序列同一性；
与SEQ ID NO:13的至少60％序列同一性；或
与SEQ ID NO:14的至少60％序列同一性。
4.如权利要求1至3中任一项所述的组合物，所述组合物还包含所述生物发光复合物的互补肽或多肽组分；
其中所述目标分析物结合剂和所述生物发光复合物的所述互补肽或多肽组分在目标分析物存在下形成生物发光分析物检测复合物。
5.如权利要求4所述的组合物，其中包含所述发光底物的组合物和所述目标分析物结合剂合并成干燥制剂，并且所述生物发光复合物的所述互补肽或多肽组分构成液体制剂，
其中所述液体制剂添加至所述干燥制剂并且在所述目标分析物存在下在再水合后形成所述生物发光分析物检测复合物。
6.如权利要求4所述的组合物，其中包含所述发光底物的组合物、所述目标分析物结合剂和所述生物发光复合物的所述互补肽或多肽组分合并成干燥制剂；
其中所述干燥制剂在所述目标分析物存在下在再水合后形成所述生物发光分析物检测复合物。
7.如权利要求1至6中任一项所述的组合物，其中所述互补肽或多肽组分包含在所述目标分析物存在下形成所述生物发光分析物检测复合物的第二目标分析物结合元件。
8.如权利要求1至7中任一项所述的组合物，其中所述目标分析物结合剂的所述多肽组分包含与SEQ ID NO:6的至少60％序列同一性，并且其中所述生物发光复合物的所述互补肽或多肽组分包含与SEQ ID NO:10的至少60％序列同一性。
9.如权利要求1至7中任一项所述的组合物，其中所述目标分析物结合剂的所述多肽组分包含与SEQ ID NO:6的至少60％序列同一性，并且其中所述生物发光复合物的所述互补肽或多肽组分包含与SEQ ID NO:14的至少60％序列同一性。
10.一种包含干燥制剂的组合物，所述干燥制剂包含：
(a)第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含第一目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:9具有至少60％序列同一性的多肽组分；以及
(b)第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含第二目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:10具有至少60％序列同一性的互补肽组分。
11.如权利要求10所述的组合物，其中所述干燥制剂还包含发光底物。
12.如权利要求10或11所述的组合物，所述组合物还包含含有所述目标分析物的液体制剂。
13.一种包含干燥制剂的组合物，所述干燥制剂包含：
(a)第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含第一目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:12具有至少60％序列同一性的多肽组分；以及
(b)第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含第二目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:14具有至少60％序列同一性的互补肽组分。
14.如权利要求13所述的组合物，其中所述干燥制剂还包含发光底物。
15.如权利要求13或14所述的组合物，所述组合物还包含含有所述目标分析物的液体制剂。
16.一种包含干燥制剂的组合物，所述干燥制剂包含：
(a)第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含第一目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:13具有至少60％序列同一性的肽组分；
(b)第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含第二目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的互补肽组分；以及
(c)与SEQ ID NO:12具有至少60％序列同一性的互补多肽组分。
17.如权利要求16所述的组合物，其中所述干燥制剂还包含发光底物。
18.如权利要求16或17所述的组合物，所述组合物还包含含有所述目标分析物的液体制剂。
19.一种组合物，所述组合物包含：
(a)包含第一目标分析物结合剂的干燥制剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:9具有至少60％序列同一性的多肽组分；以及
(b)包含第二目标分析物结合剂的液体制剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11具有至少60％序列同一性的互补肽组分。
20.一种组合物，所述组合物包含：
(a)包含第一目标分析物结合剂的干燥制剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11具有至少60％序列同一性的肽组分；以及
(b)包含第二目标分析物结合剂的液体制剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:9具有至少60％序列同一性的互补多肽组分。
21.一种组合物，所述组合物包含：
(a)包含第一目标分析物结合剂的干燥制剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:12具有至少60％序列同一性的多肽组分；以及
(b)包含第二目标分析物结合剂的液体制剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:14具有至少60％序列同一性的互补肽组分。
22.如权利要求19至21所述的组合物，其中所述干燥制剂还包含发光底物。
23.如权利要求19至21所述的组合物，其中所述液体制剂还包含发光底物。
24.如权利要求19至21所述的组合物，其中所述液体制剂还包含含有目标分析物的样品，并且其中在所述目标分析物存在下在将所述干燥制剂和所述液体制剂合并后形成生物发光分析物检测复合物。
25.如权利要求1至4中任一项所述的组合物，所述组合物还包含所述生物发光复合物的第二互补肽或多肽组分，
其中所述目标分析物结合剂、所述生物发光复合物的所述第一互补肽或多肽组分和所述生物发光复合物的所述第二互补肽或多肽组分在目标分析物存在下形成生物发光分析物检测复合物。
26.如权利要求25所述的组合物，其中包含所述目标分析物结合剂的组合物构成干燥制剂，并且其中所述生物发光复合物的所述第一互补肽或多肽组分和所述第二互补肽或多肽构成液体制剂；
其中所述液体制剂添加至所述干燥制剂并且在所述目标分析物存在下在再水合后形成所述生物发光分析物检测复合物。
27.如权利要求25所述的组合物，其中包含所述目标分析物结合剂的组合物和所述第一或所述第二互补肽或多肽组分合并成干燥制剂，并且其中不存在于所述干燥制剂中的所述第一或所述第二互补肽或多肽组分构成液体制剂；
其中所述液体制剂添加至所述干燥制剂并且在所述目标分析物存在下在再水合后形成所述生物发光分析物检测复合物。
28.如权利要求25所述的组合物，其中所述目标分析物结合剂、所述第一互补肽或多肽组分和所述第二互补肽或多肽组分合并成干燥制剂，所述干燥制剂在所述目标分析物存在下在再水合后形成所述生物发光分析物检测复合物。
29.如权利要求25至27所述的组合物，其中所述干燥制剂还包含发光底物。
30.如权利要求25至27所述的组合物，其中所述液体制剂还包含发光底物。
31.如权利要求25至27所述的组合物，其中所述液体制剂还包含含有目标分析物的样品，并且其中在所述目标分析物存在下在将所述干燥制剂和所述液体制剂合并后形成生物发光分析物检测复合物。
32.如权利要求25至31中任一项所述的组合物，其中所述第一或所述第二互补肽或多肽组分包含第二目标分析物结合元件，所述第二目标分析物结合元件在所述目标分析物存在下在再水合后形成所述生物发光分析物检测复合物。
33.如权利要求25至32中任一项所述的组合物，其中所述目标分析物结合剂的所述多肽组分包含与SEQ ID NO:12的至少60％序列同一性，并且其中所述生物发光复合物的所述第一或所述第二互补肽或多肽组分包含与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15的至少60％序列同一性。
34.一种组合物，所述组合物包含：
(a)包含第一目标分析物结合剂的干燥制剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:12具有至少60％序列同一性的多肽组分；以及
(b)包含第二目标分析物结合剂的液体制剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的互补肽组分；和
与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的第二互补肽组分。
35.一种组合物，所述组合物包含：
(a)干燥制剂，所述干燥制剂包含第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:12具有至少60％序列同一性的多肽组分；和第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的互补肽组分；以及
(b)液体制剂，所述液体制剂包含与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的第二互补肽组分。
36.一种组合物，所述组合物包含：
(a)干燥制剂，所述干燥制剂包含第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:12具有至少60％序列同一性的多肽组分；和与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的互补肽组分；以及
(b)包含第二目标分析物结合剂的液体制剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的互补肽组分。
37.一种组合物，所述组合物包含：
(a)干燥制剂，所述干燥制剂包含第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:13具有至少60％序列同一性的肽组分；和第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的互补肽组分；以及
(b)液体制剂，所述液体制剂包含与SEQ ID NO:12具有至少60％序列同一性的互补多肽组分。
38.一种组合物，所述组合物包含：
(a)干燥制剂，所述干燥制剂包含与SEQ ID NO:12具有至少60％序列同一性的互补多肽组分；以及
(b)液体制剂，所述液体制剂包含第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:13具有至少60％序列同一性的肽组分；和第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的互补肽组分。
39.一种包含干燥制剂的组合物，所述干燥制剂包含第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:13具有至少60％序列同一性的肽组分；第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:15具有至少60％序列同一性的互补肽组分；以及与SEQ ID NO:12具有至少60％序列同一性的互补多肽组分。
40.如权利要求34至39所述的组合物，其中所述干燥制剂还包含发光底物。
41.如权利要求34至39所述的组合物，其中所述液体制剂还包含发光底物。
42.如权利要求34至39所述的组合物，其中所述液体制剂还包含含有目标分析物的样品，并且其中在所述目标分析物存在下在将所述干燥制剂和所述液体制剂合并后形成生物发光分析物检测复合物。
43.如权利要求1至42中任一项所述的组合物，其中与仅由所述目标分析物结合剂和所述发光底物产生的生物发光信号相比，当所述目标分析物结合剂接触所述生物发光复合物的所述互补肽或多肽组分中的一者或多者时，在所述发光底物存在下产生的生物发光信号显著增加。
44.如权利要求1至43中任一项所述的组合物，其中所述目标分析物是目标抗体。
45.如权利要求1至44中任一项所述的组合物，其中所述目标分析物结合剂包含非特异性地结合至抗体的元件。
46.如权利要求1至44中任一项所述的组合物，其中所述目标分析物结合剂包含特异性地结合至抗体的元件。
47.如权利要求44所述的组合物，其中所述目标抗体是针对病原体、毒素或治疗性生物制剂的抗体。
48.如权利要求1至47中任一项所述的组合物，其中目标分析物结合元件选自由以下组成的组：抗体、多克隆抗体、单克隆抗体、重组抗体、抗体片段、蛋白A、蛋白A的Ig结合结构域、蛋白G、蛋白G的Ig结合结构域、蛋白A/G、蛋白A/G的Ig结合结构域、蛋白L、蛋白L的Ig结合结构域、蛋白M、蛋白M的Ig结合结构域、寡核苷酸探针、肽核酸、DARPin、适体、affimer、蛋白质结构域和纯化的蛋白质。
49.如权利要求1至48中任一项所述的组合物，其中所述发光底物选自腔肠素、腔肠素-h、腔肠素-h-h、furimazine和其他腔肠素类似物或衍生物。
50.如权利要求1至49中任一项所述的组合物，所述组合物还包含聚合物。
51.如权利要求50所述的组合物，其中所述聚合物是天然存在的生物聚合物。
52.如权利要求51所述的组合物，其中所述天然存在的生物聚合物选自普鲁兰多糖、海藻糖、麦芽糖、纤维素、葡聚糖以及它们的任何组合。
53.如权利要求51所述的组合物，其中所述天然存在的生物聚合物是普鲁兰多糖。
54.如权利要求50所述的组合物，其中所述聚合物是环状糖聚合物或其衍生物。
55.如权利要求54所述的组合物，其中所述聚合物是羟丙基β-环糊精。
56.如权利要求50所述的组合物，其中所述聚合物是合成聚合物。
57.如权利要求56所述的组合物，其中所述合成聚合物选自聚苯乙烯、聚(甲基)丙烯酸酯以及它们的任何组合。
58.如权利要求56所述的组合物，其中所述合成聚合物是包含至少一个聚(环氧丙烷)嵌段和至少一个聚(环氧乙烷)嵌段的嵌段共聚物。
59.如权利要求58所述的组合物，其中所述合成聚合物是泊洛沙姆188。
60.如权利要求1-59中任一项所述的组合物，其中所述组合物还包含缓冲剂、表面活性剂、还原剂、盐、自由基清除剂、螯合剂、蛋白质或它们的任何组合。
61.如权利要求60所述的组合物，其中所述表面活性剂选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40和聚山梨醇酯80。
62.如权利要求1至61中任一项所述的组合物，其中所述组合物与分析物检测平台结合使用以检测样品中的分析物。
63.如权利要求62所述的组合物，其中所述样品选自血液、血清、血浆、尿液、粪便、脑脊液、间质液、唾液、组织样品、水样品、土壤样品、植物样品、食物样品、饮料样品、油和工业流体样品。
64.一种检测样品中的分析物的方法，所述方法包括将权利要求1至63所述的组合物中的任一者与包含目标分析物的样品合并。
65.如权利要求64所述的方法，其中检测所述样品中的所述目标分析物包括检测从分析物检测复合物产生的生物发光信号。
66.如权利要求65所述的方法，所述方法还包括定量从所述分析物检测复合物产生的生物发光信号。
67.如权利要求66所述的方法，其中从所述分析物检测复合物产生的所述生物发光信号与所述分析物的浓度成比例。
68.如权利要求1至67中任一项所述的组合物，其中与单独在溶液中的组分相比，所述组合物的所述组分中的一者或多者在所述组合物内表现出增强的稳定性。
69.一种侧流检测系统，所述侧流检测系统包括：
包括检测区域和对照区域的分析膜，其中所述检测区域包括固定至所述检测区域的第一目标分析物结合剂；
结合垫，所述结合垫包括第二目标分析物结合剂；以及
样品垫；并且
其中当在样品中检测到目标分析物时，所述第一目标分析物结合剂和所述第二目标分析物结合剂在至少一个检测区域中形成生物发光分析物检测复合物。
70.如权利要求69所述的系统，其中所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件并且是非发光的，并且其中所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和生物发光多肽。
71.如权利要求70所述的系统，其中所述生物发光多肽与SEQ ID NO:5具有至少60％序列同一性。
72.如权利要求69所述的系统，其中所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和生物发光复合物的多肽组分，并且所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和生物发光复合物的肽组分，其中与仅由所述第一目标分析物结合剂和发光底物产生的生物发光信号相比，当所述第一目标分析物结合剂接触所述第二目标分析物结合剂时，在所述发光底物存在下产生的生物发光信号显著增加。
73.如权利要求69所述的系统，其中所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和生物发光复合物的肽组分，并且所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和生物发光复合物的多肽组分，其中与仅由所述第一目标分析物结合剂和发光底物产生的生物发光信号相比，当所述第一目标分析物结合剂接触所述第二目标分析物结合剂时，在所述发光底物存在下产生的生物发光信号显著增加。
74.如权利要求72或权利要求73所述的系统，其中生物发光复合物的所述多肽组分与SEQ ID NO:6具有至少60％序列同一性，并且其中生物发光复合物的所述肽组分与SEQ IDNO:10具有至少60％序列同一性。
75.如权利要求72或权利要求73所述的系统，其中生物发光复合物的所述多肽组分与SEQ ID NO:12具有至少60％序列同一性，并且其中生物发光复合物的所述肽组分与SEQ IDNO:14具有至少60％序列同一性。
76.如权利要求69所述的系统，其中所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和三联生物发光复合物的第一肽组分，并且所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和所述三联生物发光复合物的第二肽组分，其中与仅由(i)所述第一目标分析物结合剂、所述第二目标分析物结合剂和/或所述三联生物发光复合物的多肽组分和(ii)发光底物产生的生物发光信号相比，当所述第一目标分析物结合剂接触所述第二目标分析物结合剂和所述多肽组分时，在所述发光底物存在下产生的生物发光信号显著增加。
77.如权利要求76所述的系统，其中三联生物发光复合物的所述第一肽组分与SEQ IDNO:11具有至少60％序列同一性，其中三联生物发光复合物的所述第一肽组分与SEQ IDNO:13具有至少60％序列同一性，并且其中三联生物发光复合物的所述多肽组分与SEQ IDNO:12具有至少60％序列同一性。
78.如权利要求69-77中任一项所述的系统，其中所述目标分析物是目标抗体。
79.如权利要求78所述的系统，其中所述第一目标分析物结合剂包含非特异性地结合至抗体的元件。
80.如权利要求79所述的系统，其中所述第二目标分析物结合剂包含特异性地结合至所述目标抗体的元件。
81.如权利要求78所述的系统，其中所述目标抗体是针对病原体、毒素或治疗性生物制剂的抗体。
82.如权利要求69至77中任一项所述的系统，其中目标分析物结合元件选自由以下组成的组：抗体、多克隆抗体、单克隆抗体、重组抗体、抗体片段、蛋白A、蛋白A的Ig结合结构域、蛋白G、蛋白G的Ig结合结构域、蛋白A/G、蛋白A/G的Ig结合结构域、蛋白L、蛋白L的Ig结合结构域、蛋白M、蛋白M的Ig结合结构域、寡核苷酸探针、肽核酸、DARPin、适体、affimer、蛋白质结构域和纯化的蛋白质。
83.如权利要求69至82中任一项所述的系统，所述系统还包括发光底物。
84.如权利要求83所述的系统，其中所述发光底物选自腔肠素、腔肠素-h、腔肠素-h-h、furimazine和其他腔肠素类似物或衍生物。
85.如权利要求69至84中任一项所述的系统，其中所述发光底物作为组合物的一部分施加至所述系统，所述组合物包含所述发光底物和选自普鲁兰多糖、海藻糖、麦芽糖、纤维素、葡聚糖、聚苯乙烯、聚(甲基)丙烯酸酯以及它们的任何组合的聚合物。
86.如权利要求69至84中任一项所述的系统，其中所述组合物施加至所述样品垫、所述结合垫、所述检测区域和所述对照区域中的至少一者。
87.如权利要求69至86中任一项所述的系统，其中所述分析膜包括多个检测区域，其中每个检测区域包括包含不同目标分析物结合元件的不同目标分析物结合剂。
88.如权利要求69至87中任一项所述的系统，其中所述系统还包括用于检测或定量来自所述分析物检测复合物的生物发光信号的装置。
89.一种包含至少一种目标分析物结合剂的结合垫，其中所述至少一种目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和以下中的一者：
包含与SEQ ID NO:5的至少60％序列同一性的生物发光多肽；
包含与SEQ ID NO:9的至少60％序列同一性的多肽；
包含与SEQ ID NO:10的至少60％序列同一性的肽；
包含与SEQ ID NO:11的至少60％序列同一性的肽；
包含与SEQ ID NO:13的至少60％序列同一性的肽；
包含与SEQ ID NO:12的至少60％序列同一性的多肽；
包含与SEQ ID NO:14的至少60％序列同一性的肽；或
能够被来自刺虾荧光素酶的能量转移激活的荧光团。
90.如权利要求89所述的结合垫，所述目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和以下中的一者：
SEQ ID NO:5的生物发光多肽；
SEQ ID NO:9的多肽；
SEQ ID NO:10的肽；
SEQ ID NO:11的肽；
SEQ ID NO:13的肽；
SEQ ID NO:12的多肽；
SEQ ID NO:14的肽；或
能够被来自刺虾荧光素酶的能量转移激活的荧光团。
91.如权利要求89或90所述的结合垫，所述结合垫还包括发光底物。
92.如权利要求91所述的结合垫，其中所述发光底物选自腔肠素、腔肠素-h、腔肠素-h-h、furimazine和其他腔肠素类似物或衍生物。
93.如权利要求91所述的结合垫，其中所述发光底物作为组合物的一部分包含在所述结合垫之上或之内，所述组合物包含所述发光底物和选自普鲁兰多糖、海藻糖、麦芽糖、纤维素、葡聚糖、聚苯乙烯、聚(甲基)丙烯酸酯以及它们的任何组合的聚合物。
94.如权利要求91所述的结合垫，其中所述发光底物作为组合物的一部分包含在所述结合垫之上或之内，所述组合物包含所述发光底物和减少自发光的物质。
95.如权利要求94所述的结合垫，其中减少自发光的所述物质是ATT、ATT的衍生物、或硫脲。
96.一种分析膜，所述分析膜包括检测区域和对照区域，其中所述检测区域包括固定至所述检测区域的至少一种目标分析物结合剂，并且其中所述至少一种目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和以下中的一者：
包含与SEQ ID NO:5的至少60％序列同一性的生物发光多肽；
包含与SEQ ID NO:9的至少60％序列同一性的多肽；
包含与SEQ ID NO:10的至少60％序列同一性的肽；
包含与SEQ ID NO:11的至少60％序列同一性的肽；
包含与SEQ ID NO:13的至少60％序列同一性的肽；
包含与SEQ ID NO:12的至少60％序列同一性的多肽；
包含与SEQ ID NO:14的至少60％序列同一性的肽；或
能够被来自刺虾荧光素酶的能量转移激活的荧光团。
97.如权利要求96所述的分析膜，所述目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和以下中的一者：
SEQ ID NO:5的生物发光多肽；
SEQ ID NO:9的多肽；
SEQ ID NO:10的肽；
SEQ ID NO:11的肽；
SEQ ID NO:13的肽；
SEQ ID NO:12的多肽；
SEQ ID NO:14的肽；或
能够被来自刺虾荧光素酶的能量转移激活的荧光团。
98.如权利要求96所述的分析膜，所述分析膜还包括多个检测区域，其中每个检测区域包括包含不同目标分析物结合元件的不同目标分析物结合剂。
99.如权利要求97或98所述的分析膜，所述分析膜还包括发光底物。
100.如权利要求97所述的分析膜，其中所述发光底物选自腔肠素、腔肠素-h、腔肠素-h-h、furimazine和其他腔肠素类似物或衍生物。
101.如权利要求99所述的分析膜，其中所述发光底物作为组合物的一部分可逆地缀合至所述结合垫，所述组合物包含所述发光底物和选自普鲁兰多糖、海藻糖、麦芽糖、纤维素、葡聚糖、聚苯乙烯、聚(甲基)丙烯酸酯以及它们的任何组合的聚合物。
102.如权利要求99所述的分析膜，其中所述发光底物作为组合物的一部分包含在所述结合垫之上或之内，所述组合物包含所述发光底物和减少自发光的物质。
103.如权利要求99所述的分析膜，其中减少自发光的所述物质是ATT、ATT的衍生物、或硫脲。
104.一种固相检测平台，所述固相检测平台包括检测区域，其中所述检测区域包括缀合至所述检测区域的至少一种目标分析物结合剂，并且其中所述至少一种目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和以下中的一者：
包含与SEQ ID NO:5的至少60％序列同一性的生物发光多肽；
包含与SEQ ID NO:9的至少60％序列同一性的多肽；
包含与SEQ ID NO:10的至少60％序列同一性的肽；
包含与SEQ ID NO:11的至少60％序列同一性的肽；
包含与SEQ ID NO:13的至少60％序列同一性的肽；
包含与SEQ ID NO:12的至少60％序列同一性的多肽；
包含与SEQ ID NO:14的至少60％序列同一性的肽；或
能够被来自刺虾荧光素酶的能量转移激活的荧光团。
105.如权利要求104所述的检测平台，其中所述目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和以下中的一者：
SEQ ID NO:5的生物发光多肽；
SEQ ID NO:9的多肽；
SEQ ID NO:10的肽；
SEQ ID NO:11的肽；
SEQ ID NO:13的肽；
SEQ ID NO:12的多肽；
SEQ ID NO:14的肽；或
能够被来自刺虾荧光素酶的能量转移激活的荧光团。
106.如权利要求104所述的检测平台，其中所述检测平台包括：
缀合至所述检测区域的第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:6的至少60％序列同一性的多肽；以及
施加至所述检测区域的第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:10的至少60％序列同一性的肽。
107.如权利要求106所述的检测平台，其中所述检测平台包括：
缀合至所述检测区域的第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:10的至少60％序列同一性的多肽；以及
施加至所述检测区域的第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:6的至少60％序列同一性的肽。
108.如权利要求106所述的检测平台，其中所述检测平台包括：
缀合至所述检测区域的第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:11的至少60％序列同一性的肽；
施加至所述检测区域的第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:13的至少60％序列同一性的肽；以及
施加至所述检测区域的包含与SEQ ID NO:12的至少60％序列同一性的多肽。
109.如权利要求106所述的检测平台，其中所述检测平台包括：
缀合至所述检测区域的第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:6的至少60％序列同一性的多肽；以及
施加至所述检测区域的第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与ID NO:14的至少60％序列同一性的多肽。
110.如权利要求106所述的检测平台，其中所述检测平台包括：
缀合至所述检测区域的第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:14的至少60％序列同一性的多肽；以及
施加至所述检测区域的第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:6的至少60％序列同一性的多肽。
111.如权利要求106所述的检测平台，其中所述检测平台包括：
缀合至所述检测区域的第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:5具有至少60％序列同一性的生物发光多肽；以及
施加至所述检测区域的第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和能够被来自所述生物发光多肽的能量转移激活的荧光团。
112.如权利要求106所述的检测平台，其中所述检测平台包括：
施加至所述检测区域的第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:5具有至少60％序列同一性的生物发光多肽；以及
缀合至所述检测区域的第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和能够被来自所述生物发光多肽的能量转移激活的荧光团。
113.如权利要求106所述的检测平台，所述检测平台还包括多个检测区域，其中每个检测区域包括包含不同目标分析物结合元件的不同目标分析物结合剂。
114.如权利要求106所述的检测平台，所述检测平台还包括对照区域。
115.如权利要求106所述的检测平台，所述检测平台还包括发光底物。
116.如权利要求115所述的检测平台，其中所述发光底物选自腔肠素、腔肠素-h、腔肠素-h-h、furimazine和其他腔肠素类似物或衍生物。
117.如权利要求115所述的检测平台，其中所述发光底物作为组合物的一部分可逆地缀合至所述结合垫，所述组合物包含所述发光底物和选自普鲁兰多糖、海藻糖、麦芽糖、纤维素、葡聚糖、聚苯乙烯、聚(甲基)丙烯酸酯以及它们的任何组合的聚合物。
118.如权利要求115所述的检测平台，其中所述发光底物作为组合物的一部分包含在所述结合垫之上或之内，所述组合物包含所述发光底物和减少自发光的物质。
119.如权利要求118所述的分析膜，其中减少自发光的所述物质是ATT、ATT的衍生物、或硫脲。
120.一种溶液相检测平台，所述溶液相检测平台包括至少一个检测容器和冻干片(冻干饼状物)，其中所述冻干饼状物包含目标分析物结合剂，所述目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和以下中的一者：
包含与SEQ ID NO:5的至少60％序列同一性的生物发光多肽；
包含与SEQ ID NO:9的至少60％序列同一性的多肽；
包含与SEQ ID NO:10的至少60％序列同一性的肽；
包含与SEQ ID NO:11的至少60％序列同一性的肽；
包含与SEQ ID NO:13的至少60％序列同一性的肽；
包含与SEQ ID NO:12的至少60％序列同一性的多肽；
包含与SEQ ID NO:14的至少60％序列同一性的肽；或
能够被来自刺虾荧光素酶的能量转移激活的荧光团。
121.如权利要求120所述的检测平台，其中所述目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和以下中的一者：
SEQ ID NO:5的生物发光多肽；
SEQ ID NO:9的多肽；
SEQ ID NO:10的肽；
SEQ ID NO:11的肽；
SEQ ID NO:13的肽；
SEQ ID NO:12的多肽；
SEQ ID NO:14的肽；或
能够被来自刺虾荧光素酶的能量转移激活的荧光团。
122.如权利要求120所述的检测平台，其中所述冻干饼状物包含：
第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:6的至少60％序列同一性的多肽；以及
第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:10的至少60％序列同一性的肽。
123.如权利要求120所述的检测平台，其中所述冻干饼状物包含：
第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:11的至少60％序列同一性的肽；
第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:13的至少60％序列同一性的肽；以及
包含与SEQ ID NO:12的至少60％序列同一性的多肽。
124.如权利要求120所述的检测平台，其中所述冻干饼状物包含：
第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与SEQ ID NO:6的至少60％序列同一性的多肽；以及
第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和包含与ID NO:14的至少60％序列同一性的多肽。
125.如权利要求120所述的检测平台，其中所述冻干饼状物包含：
第一目标分析物结合剂，所述第一目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和与SEQ ID NO:5具有至少60％序列同一性的生物发光多肽；以及
第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和能够被来自所述生物发光多肽的能量转移激活的荧光团。
126.如权利要求120所述的检测平台，其中所述检测平台包括96孔微量滴定板，所述微量滴定板包括多个检测容器；以及包含不同目标分析物结合元件的至少两种不同的目标分析物结合剂。
127.如权利要求120所述的检测平台，其中所述冻干饼状物包含发光底物。
128.如权利要求127所述的检测平台，其中所述发光底物选自腔肠素、腔肠素-h、腔肠素-h-h、furimazine和其他腔肠素类似物或衍生物。
129.如权利要求127所述的检测平台，其中所述冻干饼状物包含发光底物和选自普鲁兰多糖、海藻糖、麦芽糖、纤维素、葡聚糖、聚苯乙烯、聚(甲基)丙烯酸酯以及它们的任何组合的聚合物。
130.如权利要求127所述的检测平台，其中所述发光底物作为组合物的一部分包含在所述结合垫之上或之内，所述组合物包含所述发光底物和减少自发光的物质。
131.如权利要求120所述的分析膜，其中减少自发光的所述物质是ATT、ATT的衍生物、或硫脲。
132.如权利要求120所述的检测平台，所述检测平台还包括至少一种样品。
133.如权利要求132所述的检测平台，其中所述样品选自血液、血清、血浆、尿液、粪便、脑脊液、间质液、唾液、组织样品、水样品、土壤样品、植物样品、食物样品、饮料样品、油和工业流体样品。
134.一种使用权利要求1所述的侧流测定系统检测样品中的分析物的方法，所述方法包括：
将样品施加至所述样品垫上；
促进所述样品从所述样品垫流动至所述结合垫，然后从所述结合垫流动至所述分析膜上的所述检测区域和所述对照区域；
其中当在所述样品中检测到所述目标分析物时，所述第一目标分析物结合剂、所述第二目标分析物结合剂和所述目标分析物在所述至少一个检测区域中形成所述分析物检测复合物。
135.如权利要求134所述的方法，其中所述样品选自血液、血清、血浆、尿液、粪便、脑脊液、间质液、组织和唾液。
136.如权利要求134所述的方法，其中所述样品选自水样品、土壤样品、植物样品、食物样品、饮料样品、油和工业流体样品。
137.如权利要求134所述的方法，其中检测所述样品中的所述目标分析物包括检测从所述分析物检测复合物产生的生物发光信号。
138.如权利要求134所述的方法，其中所述方法还包括定量从所述分析物检测复合物产生的生物发光信号。
139.如权利要求134所述的方法，其中所述方法还包括基于所述分析物的所述检测将从其获得所述样品的受试者诊断为患有或未患疾病。
140.一种使用权利要求34所述的固相检测平台检测样品中的分析物的方法，所述方法包括：
使样品暴露于检测区域和对照区域；
其中当在所述样品中检测到所述目标分析物时，所述至少一种目标分析物结合剂和所述至少一种目标分析物在所述至少一个检测区域中形成分析物检测复合物。
141.如权利要求140所述的方法，其中所述样品选自血液、血清、血浆、尿液、粪便、脑脊液、间质液、组织和唾液。
142.如权利要求140所述的方法，其中所述样品选自水样品、土壤样品、植物样品、食物样品、饮料样品、油和工业流体样品。
143.如权利要求140所述的方法，其中检测所述样品中的所述目标分析物包括检测从所述分析物检测复合物产生的生物发光信号。
144.如权利要求140所述的方法，其中所述方法还包括定量从所述分析物检测复合物产生的生物发光信号。
145.如权利要求140所述的方法，其中所述方法还包括基于所述分析物的所述检测将从其获得所述样品的受试者诊断为患有或未患疾病。
146.一种产生用于生物发光测定中的基底的方法，所述方法包括：
将溶液施加到基底上，所述溶液包含至少一种目标分析物结合剂，所述至少一种目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和生物发光复合物的多肽组分或生物发光复合物的肽组分中的一者；以及
干燥含有所述溶液的所述基底。
147.如权利要求146所述的方法，其中所述溶液还包含所述生物发光复合物的互补肽或多肽组分；其中所述目标分析物结合剂和所述生物发光复合物的所述互补肽或多肽组分在目标分析物存在下形成生物发光分析物检测复合物。
148.如权利要求146或权利要求147所述的方法，其中所述溶液包含蛋白质缓冲剂和至少一种赋形剂。
149.如权利要求146至148中任一项所述的方法，其中所述溶液包含发光底物。
150.如权利要求146至149中任一项所述的方法，其中所述基底是W-903纸、FTA纸、FTAElute纸、FTA DMPK纸、Ahlstrom A-226纸、M-TFN纸、FTA纸、FP705纸、Bode DNA收集纸、硝化纤维素纸、尼龙纸、纤维素纸、Dacron纸、棉纸和聚酯纸或它们的组合。
151.如权利要求146至150中任一项所述的方法，其中所述基底是包括塑料、尼龙、金属或其组合的网。
152.如权利要求146至151中任一项所述的方法，其中干燥含有所述溶液的所述基底包括在约30℃至40℃的温度下干燥介于约30分钟与2小时之间的时间段。
153.如权利要求146至152中任一项所述的方法，其中干燥含有所述溶液的所述基底包括冻干和/或冷冻所述基底。
154.如权利要求146至153中任一项所述的方法，所述方法还包括将所述至少一种目标分析物结合剂和/或所述生物发光复合物的所述互补肽或多肽组分干燥到第一基底上，并且将所述发光底物干燥到第二基底上。
155.如权利要求146至154中任一项所述的方法，其中在含有所述溶液的所述基底暴露于所述目标分析物时产生生物发光信号，并且其中所述生物发光信号与所述目标分析物的浓度成比例。
156.如权利要求146至155中任一项所述的方法，其中当在所述基底上干燥时，所述至少一种目标分析物结合剂和/或所述生物发光复合物的所述互补肽或多肽组分表现出增强的稳定性。
157.一种组合物，所述组合物包含：
发光底物；
目标分析物结合剂，所述目标分析物结合剂包含目标分析物结合元件和生物发光复合物的多肽组分；以及
所述生物发光复合物的互补多肽组分；
其中所述目标分析物结合剂和所述生物发光复合物的所述互补多肽组分能够在目标分析物存在下形成生物发光分析物检测复合物。
158.如权利要求157所述的组合物，其中所述组合物还包含第二目标分析物结合剂，所述第二目标分析物结合剂包含第二目标分析物结合元件和生物发光复合物的第二多肽组分。
159.如权利要求157或158所述的组合物，其中所述第一目标分析物结合剂和所述第二目标分析物结合剂结合同一目标分析物的不同部分。
160.如权利要求157至159中任一项所述的组合物，其中所述生物发光复合物的所述第一多肽组分和所述第二多肽组分结合所述生物发光复合物的所述互补多肽组分以在所述目标分析物存在下形成生物发光分析物检测复合物。
161.如权利要求157至160中任一项所述的组合物，其中所述第一多肽组分和所述第二多肽组分与能够与卤代烷烃底物形成共价键的经修饰脱卤素酶连接。
162.如权利要求157至161中任一项所述的组合物，其中所述第一目标分析物结合元件和所述第二目标分析物结合元件包含卤代烷烃底物。
163.如权利要求157至162中任一项所述的组合物，其中所述第一目标分析物结合剂和所述第二目标分析物结合剂的所述第一多肽组分或所述第二多肽组分包含：
与SEQ ID NO:10的至少60％序列同一性；
与SEQ ID NO:11的至少60％序列同一性；
与SEQ ID NO:13的至少60％序列同一性；或
与SEQ ID NO:15的至少60％序列同一性。
164.如权利要求157至163中任一项所述的组合物，其中所述互补多肽组分包含：
与SEQ ID NO:6的至少60％序列同一性；
与SEQ ID NO:9的至少60％序列同一性；或
与SEQ ID NO:12的至少60％序列同一性。
165.如权利要求157至164中任一项所述的组合物，其中所述目标分析物结合元件选自由以下组成的组：抗体、多克隆抗体、单克隆抗体、重组抗体、抗体片段、蛋白A、蛋白A的Ig结合结构域、蛋白G、蛋白G的Ig结合结构域、蛋白A/G、蛋白A/G的Ig结合结构域、蛋白L、蛋白L的Ig结合结构域、蛋白M、蛋白M的Ig结合结构域、寡核苷酸探针、肽核酸、DARPin、适体、affimer、蛋白质结构域和纯化的蛋白质。
166.如权利要求157至165中任一项所述的组合物，其中所述目标分析物是抗体，并且其中所述第一目标分析物结合剂的所述目标分析物结合元件包含由所述抗体识别的抗原，并且其中所述第二目标分析物结合剂的所述目标分析物结合元件包含Fc结合区。
167.如权利要求157至166中任一项所述的组合物，其中所述第一目标分析物结合剂和/或所述第二目标分析物结合剂还包含与所述生物发光复合物的所述第一多肽组分和/或所述第二多肽组分偶联的荧光团。
168.如权利要求157至167中任一项所述的组合物，其中所述组合物的一种或多种组分呈冻干片(冻干饼状物)形式，所述冻干片当在溶液中复原时能够形成生物发光复合物以检测和/或定量所述目标分析物。
169.如权利要求157至168中任一项所述的组合物，其中所述组合物构成能够检测和/或定量所述目标分析物的溶液相检测平台。
170.如权利要求157至169中任一项所述的组合物，其中所述多肽组分和所述发光底物呈冻干片(冻干饼状物)形式，所述冻干片当在溶液中复原时能够形成生物发光复合物以检测和/或定量所述目标分析物。
171.一种检测样品中的分析物的方法，所述方法包括将权利要求157至170所述的组合物中的任一者与包含目标分析物的样品合并。
172.如权利要求171所述的方法，其中检测所述样品中的所述目标分析物包括检测从分析物检测复合物产生的生物发光信号。
173.如权利要求172所述的方法，所述方法还包括定量从所述分析物检测复合物产生的生物发光信号。
174.如权利要求173所述的方法，其中从所述分析物检测复合物产生的所述生物发光信号与所述分析物的浓度成比例。
175.如权利要求157所述的组合物，其中所述发光底物选自腔肠素、腔肠素-h、腔肠素-h-h、furimazine和其他腔肠素类似物或衍生物。
176.如权利要求170所述的组合物，其中所述冻干饼状物还包含用于减少自发光的物质。
177.如权利要求176所述的组合物，其中用于减少自发光的所述物质是ATT、ATT的衍生物或类似物、或硫脲。
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WO (1) WO2020210658A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114231401A (zh) * 2022-02-21 2022-03-25 北京芯迈微生物技术有限公司 一种核酸检测试剂盒及检测方法

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112022010153A2 (pt) * 2019-11-27 2022-08-09 Promega Corp Peptídeos, ácido nucleico, polipeptídeo, composição, complexo bioluminescente, métodos, dipeptídeo, sistema e kit
WO2023028175A1 (en) * 2021-08-24 2023-03-02 Kaya17 Inc. System and method for detecting presence of a target bioparticle in a sample via a vertical flow assay
CN113786873B (zh) * 2021-08-31 2022-09-23 广西横县张一元饮品有限公司 一种用于食品安全检测的试管
WO2023200703A1 (en) * 2022-04-15 2023-10-19 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Creatinine lateral flow assay devices and methods of production and use thereof
GB2619059A (en) * 2022-05-26 2023-11-29 Univ Leeds Innovations Ltd Split reporter complex

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140194325A1 (en) * 2012-12-12 2014-07-10 Promega Corporation Recognition of cellular target binding by a bioactive agent using intracellular bioluminescence resonance energy transfer
US20140348747A1 (en) * 2013-03-15 2014-11-27 Promega Corporation Activation of bioluminescence by structural complementation

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3423290A (en) * 1966-08-03 1969-01-21 Nasa Lyophilized reaction mixtures
US6045254A (en) * 1996-12-26 2000-04-04 M.L.I.S. Projects Ltd. Container having two or more compartments
US7118878B1 (en) * 2000-06-09 2006-10-10 Promega Corporation Method for increasing luminescence assay sensitivity
AU2003300008B2 (en) * 2002-12-23 2007-04-05 Promega Corporation Improved luciferase-based assays
US7829347B2 (en) * 2005-08-31 2010-11-09 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Diagnostic test kits with improved detection accuracy
CA2659773A1 (en) * 2006-02-21 2007-08-30 Nanogen, Inc. Methods and compositions for analyte detection
JP6814132B2 (ja) * 2014-09-12 2021-01-13 プロメガ コーポレイションＰｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ 内部タンパク質タグ
EP3254113A4 (en) * 2015-02-05 2018-06-27 Promega Corporation Luciferase-based thermal shift assays
WO2017143323A1 (en) * 2016-02-19 2017-08-24 Insight Instruments, Inc. Assay systems for point of care detection of ocular analytes
US10634680B2 (en) * 2016-04-26 2020-04-28 University Of Utah Research Foundation Target-binding activated split reporter systems for analyte detection and related components and methods
JP6990369B2 (ja) * 2017-05-19 2022-02-03 国立大学法人 熊本大学 遺伝性腎疾患アルポート症候群治療薬に係る評価系

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140194325A1 (en) * 2012-12-12 2014-07-10 Promega Corporation Recognition of cellular target binding by a bioactive agent using intracellular bioluminescence resonance energy transfer
US20140348747A1 (en) * 2013-03-15 2014-11-27 Promega Corporation Activation of bioluminescence by structural complementation

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANDREW S. DIXON ET AL: "NanoLuc Complementation Reporter Optimized for Accurate Measurement of Protein Interactions in Cells", ACS CHEMICAL BIOLOGY, vol. 11, no. 2, pages 400 - 408, XP055715353, DOI: 10.1021/acschembio.5b00753 *
KENTARO OH-HASHI ET AL: "Application of a novel HiBiT peptide tag for monitoring ATF4 protein expression in Neuro2a cells", BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS REPORTS, vol. 12, pages 40 - 45, XP055607272, DOI: 10.1016/j.bbrep.2017.08.002 *
LIN XUE ET AL: "Bioluminescent Antibodies for Point-of-Care Diagnostics", ANGEWANDTE CHEMIE INTERNATIONAL EDITION, vol. 56, no. 25, pages 7112 - 7116, XP055527910, DOI: 10.1002/anie.201702403 *
SCHWINN MARIE K ET AL: "Antibody-free detection of cellular neddylation dynamics of Cullin1", ANALYTICAL BIOCHEMISTRY, vol. 555, pages 67 - 72, XP085418421, DOI: 10.1016/j.ab.2018.05.002 *
YUKI OHMURO-MATSUYAMA ET AL: "Homogeneous Noncompetitive Luminescent lmmunodetection of Small Molecules by Ternary Protein Fragment Complementation", ANALYTICAL CHEMISTRY, vol. 90, no. 5, pages 3001 - 3004, XP055653694, DOI: 10.1021/acs.analchem.7b05140 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114231401A (zh) * 2022-02-21 2022-03-25 北京芯迈微生物技术有限公司 一种核酸检测试剂盒及检测方法
CN114231401B (zh) * 2022-02-21 2022-05-03 北京芯迈微生物技术有限公司 一种核酸检测试剂盒及检测方法

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