CN113881634A - 一种原代成年灵长类动物海马神经干细胞团的培养方法 - Google Patents

一种原代成年灵长类动物海马神经干细胞团的培养方法 Download PDF

Info

Publication number
CN113881634A
CN113881634A CN202111207964.XA CN202111207964A CN113881634A CN 113881634 A CN113881634 A CN 113881634A CN 202111207964 A CN202111207964 A CN 202111207964A CN 113881634 A CN113881634 A CN 113881634A
Authority
CN
China
Prior art keywords
neural stem
stem cells
stem cell
hippocampal
adult primate
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202111207964.XA
Other languages
English (en)
Inventor
刘胜
郝赵哲
肖冬长
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhongshan Ophthalmic Center
Original Assignee
Zhongshan Ophthalmic Center
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhongshan Ophthalmic Center filed Critical Zhongshan Ophthalmic Center
Priority to CN202111207964.XA priority Critical patent/CN113881634A/zh
Publication of CN113881634A publication Critical patent/CN113881634A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0618—Cells of the nervous system
    • C12N5/0623—Stem cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/05—Inorganic components
    • C12N2500/10—Metals; Metal chelators
    • C12N2500/20—Transition metals
    • C12N2500/24—Iron; Fe chelators; Transferrin
    • C12N2500/25—Insulin-transferrin; Insulin-transferrin-selenium
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/46—Amines, e.g. putrescine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/10—Growth factors
    • C12N2501/11—Epidermal growth factor [EGF]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/10—Growth factors
    • C12N2501/115—Basic fibroblast growth factor (bFGF, FGF-2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/90—Polysaccharides
    • C12N2501/91—Heparin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
    • C12N2509/10—Mechanical dissociation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种原代成年灵长类动物海马神经干细胞团的培养方法，包括获取海马神经干细胞，将神经干细胞种植在1.25％的人工基底膜预先包被的六孔板内，每个孔内加入2mL的神经干细胞完全培养液培养，每隔两天进行半换液，连续培养四个月。本发明的优点包括：能够长期维持成年灵长类动物大脑海马类器官的自我增殖分化能力，能够成功培养出海马内的神经干细胞群，并能检测出海马类器官分化增殖情况，及分化增殖过程中产生的特异性的转录因子、不同类型的细胞群体及相关标志蛋白，为研究神经干细胞的发育、神经性疾病的病理学、神经细胞的再生机制提供了一个可靠的实验方法，为研究干细胞对体外药物反应提供了一个理想的体外系统。

Description

一种原代成年灵长类动物海马神经干细胞团的培养方法
技术领域
本发明涉及再生医学技术领域，尤其涉及神经干细胞培养技术。
背景技术
海马是哺乳类动物的中枢神经系统中的脑的一部分。又名海马回、海马区、大脑海马，海马位于大脑丘脑和内侧颞叶之间，属于边缘系统的一部分，主要负责长时记忆的存储转换和定向等功能。从20世纪初，科学家们就对海马在神经解剖学、生理学、行为学等等各种不同领域进行不断的研究，发现海马除了与某些记忆以及学习有着重要的关联，还与癫痫患者的发作、罹患阿尔兹海默氏症有关。以及，海马还可能因贫血、缺氧状态而受伤害。海马在解剖学以及机能构造上都是其它大脑皮质系统的研究样本。已知的关于中枢神经系统的突触传导的见解多受益于海马的研究。
Adult neural stem cells from the subventricular zone:a review of theneurosphere assay.Anat.Rec.296,1436-1452(2013)文章中提到：对14.5天龄的胚胎小鼠海马的神经干细胞进行纯化，在体外细胞培养基中培养，形成神经球，在体内外均有向其他神经细胞分化的潜能，但此文章培养针对的是啮齿类动物，且是胚胎小鼠的海马组织。另外在Single-cell study ofneural stem cells derived from human iPSC revealsdistinct progenitor populations with neurogenic and gliogenic potential.GenesCells 24,836-847(2019)，The spontaneous differentiation and chromosome loss iniPSCs of human trisomy 18syndrome.Cell Death Dis.8e3149(2017)两篇文章中，它们的培养对象分别来自人类诱导多能干细胞的神经干细胞和直接取的人类子宫内羊水中的多能干细胞，并非海马内的神经干细胞。
若能成功从灵长类动物海马中分离到神经干细胞，再体外培养形成神经球类器官，且能够长时间维持神经干细胞的增殖分化能力，将对研究神经干细胞的发育、神经性疾病的病理学、神经细胞的再生机制提供了一个可靠的实验方法，为研究干细胞对药物反应提供了一个理想的体外系统。
发明内容
本发明的目的在于提供一种原代成年灵长类动物海马神经干细胞团的培养方法，可以培养出成年猴的海马内潜在的多能神经干细胞，在体外形成一个自我更新的干细胞群，可分化为多种特异性的细胞类型，从而提供一个生理相关系统，即类器官系统。
为了达到上述目的本发明采用如下技术方案：
一种成年灵长类动物海马神经干细胞完全培养液，其成分包含DMEM/F12，25μg/ml胰岛素，50μg/ml转铁蛋白，1.28ng/ml黄体酮，16ng/ml腐胺，0.52μg/ml亚硒酸钠，20ng/mL重组人表皮生长因子，20ng/ml人碱性成纤维细胞生长因子，2μg/mL的肝素，0.5mg/ml原代细胞抗生素。
优选地，所述DMEM/F12是由DMEM和F12按照体积比例为1:1配制所得。
一种所述的成年灵长类动物海马神经干细胞完全培养液的制备方法，步骤如下：
首先配制干细胞基本培养基，其中包含DMEM/F12，25μg/ml胰岛素，50μg/ml转铁蛋白，1.28ng/ml黄体酮，16ng/ml腐胺，0.52μg/ml亚硒酸钠；然后在干细胞基本培养基内加入终浓度为20ng/mL的重组人表皮生长因子，终浓度为20ng/ml的人碱性成纤维细胞生长因子，终浓度为2μg/mL的肝素，终浓度为0.5mg/ml的原代细胞抗生素，得到成年灵长类动物海马神经干细胞完全培养液。
优选地，所述DMEM/F12是由DMEM和F12按照体积比例为1:1配制所得。
一种应用所述的培养基的原代成年灵长类动物海马神经干细胞团的培养方法，包括如下步骤：获取海马神经干细胞，将神经干细胞种植在由体积分数为1.25％的人工基底膜预先包被的六孔板内，每个孔内加入2mL的神经干细胞完全培养液培养，每隔两天进行半换液，连续培养四个月。
进一步地，所述获取海马神经干细胞的步骤包括：
(1)使用无菌手术刀和手术剪刀，从一只实验用的成年的灵长类动物身上摘取脑组织，海马组织被快速的切开，放入预冷的Hank's平衡盐溶液，用Hank's平衡盐溶液将海马组织冲洗5次，放入含有10毫升神经干细胞完全培养液的10cm的培养皿内，在5％的CO2，37℃细胞培养箱内培养30分钟。
(2)第1步完毕后，在立体式显微镜下去除海马中的脑膜，并将剩余的组织切成小块，首先用质量分数为0.25％胰蛋白酶EDTA将海马组织在37℃温度下酶解20分钟，然后再将消化液换成含有7.5mg/mL DNA酶I的40U/mL木瓜蛋白酶在37℃下继续消化30分钟,在酶解消化过程中，每10分钟轻轻摇晃一次组织悬液。
(3)酶解消化后，在组织悬液中加入等体积的神经干细胞完全培养液轻轻混合，然后在离心机中以180g/min的速度离心5分钟，除去上清液，往沉淀中加入新鲜神经干细胞培养基。用巴斯德吸管轻轻研磨组织悬液，再用70μm的过滤器过滤，得到神经干细胞。
本发明还提供所述的培养方法得到的神经干细胞团在研究神经干细胞的发育、神经性疾病的病理学、神经细胞的再生机制中的应用。
本发明还提供所述的培养方法得到的神经干细胞团在研究体外的药物反应中的应用。
本发明的优点包括：通过原代培养技术，实现体外培养实验用的成年的灵长类动物类器官，方便我们在体外研究观察成年灵长类动物大脑海马神经干细胞的增殖与分化，即海马类器官的培养与发育过程，随时监测成年灵长类动物海马神经干细胞的生长过程中的分子水平快速连续的变化过程，为研究神经干细胞的发育、神经性疾病的病理学、神经细胞的再生机制提供了一个可靠的实验方法，为研究干细胞对药物反应提供了一个理想的体外系统。成年灵长类动物海马类器官的培养可能为提供自体和同种异体细胞疗法带来可行性，在再生医学领域也拥有巨大的潜力。在精准医学应用中，由患者自身干细胞生成的类器官，也被证明为有价值的诊断工具。患者衍生的类器官可被用来进行体外的药物反应，为患者的疾病提供个体化治疗方案。因此培养出海马类器官能够便于科研工作者为各种神经退行性疾病的研究及治疗神经性疾病药物的研制开发提供实验基础。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本申请的一部分，并不构成对本发明的不当限定，在附图中：
图1是成功培养的成年灵长类动物大脑海马神经干细胞团实验图。
具体实施方式
下面将结合附图以及具体实施例来详细说明本发明，在此以本发明的示意性实施例及说明用来解释本发明，但并不作为对本发明的限定。
成年灵长类动物海马神经干细胞完全培养液的配制
首先配制50mL的干细胞基本培养基，其成分包含由DMEM和F12按体积比例为1:1配制所得的DMEM/F12,25μg/ml胰岛素，50μg/ml转铁蛋白，1.28ng/ml黄体酮，16ng/ml腐胺，0.52μg/ml亚硒酸钠。然后在干细胞基本培养基内加入终浓度为20ng/mL的重组人表皮生长因子(R&D Systems,Minneapolis,MN)，终浓度为20ng/ml的人碱性成纤维细胞生长因子bFGF(R&D Systems)，终浓度为2μg/mL的肝素，终浓度为0.5mg/ml的原代细胞抗生素。
神经干细胞的获取：
1.使用无菌手术刀和手术剪刀，从一只成年的猴子身上摘取脑组织，海马组织被快速的切开，放入预冷的Hank's平衡盐溶液。用Hank's平衡盐溶液将海马组织冲洗5次，放入含有10毫升神经干细胞完全培养液的10cm的培养皿内，在5％的CO2，37℃细胞培养箱内培养30分钟。
2.第1步完毕后，在立体式显微镜下去除海马中的脑膜，并将剩余的组织切成小块，首先用质量分数为0.25％胰蛋白酶EDTA将海马组织在37℃温度下酶解20分钟，然后再将消化液换成含有7.5mg/mL DNA酶I的40U/mL木瓜蛋白酶在37℃下继续消化30分钟,在酶解消化过程中，每10分钟轻轻摇晃一次组织悬液。
3.酶解消化后，在组织悬液中加入等体积的神经干细胞完全培养液轻轻混合，然后在离心机中以180g/min的速度离心5分钟，除去上清液，往沉淀中加入新鲜神经干细胞培养基。用巴斯德吸管轻轻研磨组织悬液，再用70μm的过滤器过滤。得到神经干细胞。
神经干细胞培养：
将神经干细胞种植在由体积分数为1.25％的人工基底膜(基质胶)预先包被的六孔板内，每个孔内加入2mL的神经干细胞完全培养液培养。每隔两天进行半换液，连续培养四个月。观察到神经球是由新鲜分裂的细胞形成的，对6988个神经球细胞的scRNA-seq分析揭示了神经球的增殖能力和多能性，图1显示了本发明成功培养的成年海马神经干细胞团。在UMAP可视化中，我们发现了一个表达增殖标记物MKI67和RGL cycle标记物HMGB2的活跃增殖群体，及四个月内类器官增殖分化出的不同的细胞类型。证实了成年灵长类动物海马类器官的存在。
本发明的优点包括：高度模拟了体内神经祖细胞的生长发育环境，能够长期维持成年灵长类动物大脑海马类器官的自我增殖分化能力，能够成功培养出海马内的神经干细胞群，并能检测出海马类器官分化增殖情况，及分化增殖过程中产生的特异性的转录因子、不同类型的细胞群体及相关标志蛋白，为首次体外捕捉成年灵长类动物神经发生的实验。
以上对本发明实施例所提供的技术方案进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明实施例的原理以及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只适用于帮助理解本发明实施例的原理；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明实施例，在具体实施方式以及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。

Claims (8)

1.一种成年灵长类动物海马神经干细胞完全培养液，其特征在于：
其成分包含DMEM/F12，25μg/ml胰岛素，50μg/ml转铁蛋白，1.28ng/ml黄体酮，16ng/ml腐胺，0.52μg/ml亚硒酸钠，20ng/mL重组人表皮生长因子，20ng/ml人碱性成纤维细胞生长因子，2μg/mL的肝素，0.5mg/ml原代细胞抗生素。
2.如权利要求1所述的成年灵长类动物海马神经干细胞完全培养液，其特征在于：
所述DMEM/F12是由DMEM和F12按照体积比例为1:1配制所得。
3.一种如权利要求1所述的成年灵长类动物海马神经干细胞完全培养液的制备方法，其特征在于：
步骤如下：
首先配制干细胞基本培养基，其中包含DMEM/F12，25μg/ml胰岛素，50μg/ml转铁蛋白，1.28ng/ml黄体酮，16ng/ml腐胺，0.52μg/ml亚硒酸钠；然后在干细胞基本培养基内加入终浓度为20ng/mL的重组人表皮生长因子，终浓度为20ng/ml的人碱性成纤维细胞生长因子，终浓度为2μg/mL的肝素，终浓度为0.5mg/ml的原代细胞抗生素，得到成年灵长类动物海马神经干细胞完全培养液。
4.根据权利要求3所述的成年灵长类动物海马神经干细胞完全培养液的制备方法，其特征在于：
所述DMEM/F12是由DMEM和F12按照体积比例为1:1配制所得。
5.一种应用如权利要求1所述的培养基的原代成年灵长类动物海马神经干细胞团的培养方法，其特征在于：
包括如下步骤：获取海马神经干细胞，将神经干细胞种植在由体积分数为1.25％的人工基底膜预先包被的六孔板内，每个孔内加入2mL的神经干细胞完全培养液培养，每隔两天进行半换液，连续培养四个月。
6.根据权利要求5所述的培养方法，其特征在于：
所述获取海马神经干细胞的步骤包括：
(1)使用无菌手术刀和手术剪刀，从一只实验用的成年的灵长类动物身上摘取脑组织，海马组织被快速的切开，放入预冷的Hank's平衡盐溶液，用Hank's平衡盐溶液将海马组织冲洗5次，放入含有10毫升神经干细胞完全培养液的10cm的培养皿内，在5％的CO2，37℃细胞培养箱内培养30分钟。
(2)第1步完毕后，在立体式显微镜下去除海马中的脑膜，并将剩余的组织切成小块，首先用质量分数为0.25％胰蛋白酶EDTA将海马组织在37℃温度下酶解20分钟，然后再将消化液换成含有7.5mg/mL DNA酶I的40U/mL木瓜蛋白酶在37℃下继续消化30分钟,在酶解消化过程中，每10分钟轻轻摇晃一次组织悬液。
(3)酶解消化后，在组织悬液中加入等体积的神经干细胞完全培养液轻轻混合，然后在离心机中以180g/min的速度离心5分钟，除去上清液，往沉淀中加入新鲜神经干细胞培养基。用巴斯德吸管轻轻研磨组织悬液，再用70μm的过滤器过滤，得到神经干细胞。
7.如权利要求5-6任一所述的培养方法得到的神经干细胞团在研究神经干细胞的发育、神经性疾病的病理学、神经细胞的再生机制中的应用。
8.如权利要求5-6任一所述的培养方法得到的神经干细胞团在研究体外的药物反应中的应用。
CN202111207964.XA 2021-10-18 2021-10-18 一种原代成年灵长类动物海马神经干细胞团的培养方法 Pending CN113881634A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111207964.XA CN113881634A (zh) 2021-10-18 2021-10-18 一种原代成年灵长类动物海马神经干细胞团的培养方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111207964.XA CN113881634A (zh) 2021-10-18 2021-10-18 一种原代成年灵长类动物海马神经干细胞团的培养方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113881634A true CN113881634A (zh) 2022-01-04

Family

ID=79003271

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111207964.XA Pending CN113881634A (zh) 2021-10-18 2021-10-18 一种原代成年灵长类动物海马神经干细胞团的培养方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113881634A (zh)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5753506A (en) * 1996-05-23 1998-05-19 Cns Stem Cell Technology, Inc. Isolation propagation and directed differentiation of stem cells from embryonic and adult central nervous system of mammals
US20030211087A1 (en) * 2000-01-18 2003-11-13 Goldman Steven A. Neutral progenitor cells from hippocampal tissue and a method for isolating and purifying them
CN104818251A (zh) * 2015-05-20 2015-08-05 妙顺（上海）生物科技有限公司 成年大鼠海马神经元体外分离培养方法
CN107574151A (zh) * 2017-11-01 2018-01-12 冯世庆 海马神经干细胞、神经元分离培养方法
CN111254115A (zh) * 2018-12-03 2020-06-09 北京银丰鼎诚生物工程技术有限公司 一种适合大规模培养临床级神经干细胞的培养基制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5753506A (en) * 1996-05-23 1998-05-19 Cns Stem Cell Technology, Inc. Isolation propagation and directed differentiation of stem cells from embryonic and adult central nervous system of mammals
US20030211087A1 (en) * 2000-01-18 2003-11-13 Goldman Steven A. Neutral progenitor cells from hippocampal tissue and a method for isolating and purifying them
CN104818251A (zh) * 2015-05-20 2015-08-05 妙顺（上海）生物科技有限公司 成年大鼠海马神经元体外分离培养方法
CN107574151A (zh) * 2017-11-01 2018-01-12 冯世庆 海马神经干细胞、神经元分离培养方法
CN111254115A (zh) * 2018-12-03 2020-06-09 北京银丰鼎诚生物工程技术有限公司 一种适合大规模培养临床级神经干细胞的培养基制备方法

Non-Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YUE FENG等: "Biological properties of neural progenitor cells isolated from the hippocampus of adult cynomolgus monkeys", 《CHINESE MEDICAL JOURNAL》 *
吴秀云等: "一种改良大鼠海马神经元原代培养的方法", 《青岛大学医学院学报》 *
吴迪等: "食蟹猴脑室下区成体神经前体细胞培养及鉴定", 《中华神经医学杂志》 *
孙鹏等: "人胚海马神经干细胞体外培养及分化研究", 《中华神经外科杂志》 *
季丽莉等: "联合应用EGF和NGF对成年大鼠海马神经干细胞分化的影响", 《解剖科学进展》 *
张弩等: "成年大鼠神经干细胞的体外培养和鉴定", 《浙江创伤外科》 *
赵春礼等: "人胚胎海马神经干细胞体外培养方法的建立", 《首都医科大学学报》 *
赵湘辉编: "《神经生物学实用实验技术》", 31 July 2012, 第四军医大学出版社 *
颜孙兴等: "食蟹猴神经干细胞的培养与分化", 《中国组织工程研究与临床康复》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Kalra et al. Stem cell: basics, classification and applications
Freimark et al. Use of encapsulated stem cells to overcome the bottleneck of cell availability for cell therapy approaches
US20050014255A1 (en) Stem cells for clinical and commercial uses
CN106754668B (zh) 一种干细胞培养液及注射液
EP3196298B1 (en) Method for inducing three-dimensional osteogenic differentiation of stem cells using hydrogel
CN103484432A (zh) 一种诱导神经干/祖细胞分化为少突胶质前体细胞的诱导培养基及其诱导方法和用途
CN102102090A (zh) 一种非接触共培养诱导干细胞体外定向分化的方法
CN111534477B (zh) 小鼠肺组织原代上皮干细胞球培养方法
Scibona et al. Expansion processes for cell-based therapies
CN106479977B (zh) 人源iPS干细胞体外定向分化为神经细胞的试剂盒及方法
Roberts et al. Improved expansion of equine cord blood derived mesenchymal stromal cells by using microcarriers in stirred suspension bioreactors
CN115011560A (zh) 一种脑胶质瘤类器官、培养基及培养方法
CN107429233B (zh) 神经系统细胞的制造方法
CN112852709B (zh) 小鼠肺类器官培养方法
KR20210011975A (ko) 생물반응기에서 세포 배양을 위한 시스템
CN105754943B (zh) 一种裸鼹鼠海马神经元培养方法
CN113881634A (zh) 一种原代成年灵长类动物海马神经干细胞团的培养方法
CN105695409A (zh) 一种裸鼹鼠少突胶质前体细胞培养方法
CN112592883B (zh) 一种小鼠胰腺类器官培养基及其应用
RU2477752C1 (ru) Способ стимуляции дифференцировки стволовых клеток печени in vitro в тканеспецифичном направлении
US20150093761A1 (en) Differentiation and amplification method for inducing human neural stem/progenitor cells to differentiate into oligodendrocyte progenitor cells and application thereof
Huang et al. Recent advances in engineering hydrogels for niche biomimicking and hematopoietic stem cell culturing
CN106520697B (zh) 一种裸鼹鼠drg神经元培养方法
NZ583510A (en) Stem cells derived from the carotid body and uses thereof
Letcher et al. Adult neural stem cells: isolation and propagation

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20220104

RJ01 Rejection of invention patent application after publication