CN113854304A - 用于防治番茄灰霉病的双载纳米农药制剂及其制备方法 - Google Patents

用于防治番茄灰霉病的双载纳米农药制剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种用于防治番茄灰霉病的双载纳米农药制剂的制备方法，所述方法包括：步骤a：采用啶酰菌胺、吡唑醚菌酯和囊壁材料制成油相，采用乳化剂制成水相，然后将油相加入到水相中，得到O/W型初乳液；步骤b：将步骤a中得到的初乳液通过高压均质进行细乳化，得到细乳液；步骤c：将步骤b中得到的细乳液搅拌，使有机溶剂挥发，得到双载纳米农药制剂。本发明进一步提供采用上述方法制备的双载纳米农药制剂。本发明制备的双载纳米农药制剂具有纳米级粒径，并具有良好的颗粒分散性、叶面浸润性能、缓释性能和储藏稳定性，有效利用率高，对于番茄灰霉病具有较好的防治效果。

Description

用于防治番茄灰霉病的双载纳米农药制剂及其制备方法
技术领域
本发明属于农药技术领域。具体地，本发明涉及一种用于防治番茄灰霉病的双载纳米农药制剂及其制备方法。
背景技术
番茄灰霉病是由灰葡萄孢菌侵染所致的一类对番茄危害严重的真菌性病害，主要发生在花期和结果期，在植株的叶片、茎秆、花穗及果实部位均可发生病害，一般可造成番茄减产10％-20％，严重时减产高达30-60％，给种植农户带来巨大的经济损失。为减少由番茄灰霉病造成的损失，需对其进行有效防控，当前对番茄灰霉病的防控主要从两方面进行，一方面是生态防治，即创造不利于致病菌流行的条件和及时清除病残体；另一方面是通过农药进行化学防治。
目前制备的用于防治番茄灰霉病的农药多集中在微米量级，在田间易流失，叶面浸润性能以及杀虫效果较差，而纳米农药制剂由于小尺寸效应和大比表面积，在提高农药叶面沉积与展布、增强生物活性方面具有明显的优势。然而制备纳米级的农药制剂在制备工艺上要求较高，特别是目前关于同时负载两种农药活性成分的双载纳米农药制剂的研究非常有限。
发明内容
针对上述问题，本发明的一个目的在于提供一种用于防治番茄灰霉病的双载纳米农药制剂的制备方法，采用该方法制备的双载纳米农药制剂具有纳米级粒径，并具有良好的颗粒分散性以及叶面浸润性能，有效利用率高，对于番茄灰霉病具有较好的防治效果。
本发明的另一个目的在于提供一种采用上述方法制备的用于防治番茄灰霉病的双载纳米农药制剂。
为达到上述目的，本发明提供一种用于防治番茄灰霉病的双载纳米农药制剂的制备方法，所述制备方法包括：
步骤a：采用啶酰菌胺、吡唑醚菌酯和囊壁材料制成油相，采用乳化剂制成水相，然后将油相加入到水相中，得到O/W型初乳液；
步骤b：将步骤a中得到的O/W型初乳液通过高压均质进行细乳化，得到细乳液；
步骤c：将步骤b中得到的细乳液搅拌，使有机溶剂挥发，得到双载纳米农药制剂。
在一些实施方案中，所述步骤a包括：将啶酰菌胺和吡唑醚菌酯溶解于有机溶剂中，加入囊壁材料，得到油相，将乳化剂溶解于水中得到水相，在乳化条件下将得到的油相滴加到水相中，得到O/W型初乳液。
在一些实施方案中，所述步骤a中，所述油相中啶酰菌胺的浓度为6.67-33.33g/L，优选20g/L；
优选地，所述步骤a中，所述油相中吡唑醚菌酯的浓度为3.33-16.67g/L，优选3.33g/L；
优选地，所述步骤a中，所述油相中囊壁材料的浓度为30g/L；
优选地，所述步骤a中，所述水相中乳化剂的浓度为10g/L；
优选地，所述步骤a中，所述油相中啶酰菌胺与吡唑醚菌酯的重量比为1:0.17-1:1.50，优选1:0.17；
优选地，所述步骤a中，所述油相中啶酰菌胺与囊壁材料的重量比为1:0.9-1:4.5，优选1:1.5；
优选地，所述步骤a中，啶酰菌胺与乳化剂的重量比为1:1.5-1:7.5，优选1:2.5。
在一些实施方案中，所述双载纳米农药制剂中啶酰菌胺的含量为17.49％，吡唑醚菌酯的含量为12.23％。
在一些实施方案中，所述乳化剂为农乳600、农乳700、聚乙烯醇、Tween-85和聚羧酸盐中的一种或多种；
优选地，所述乳化剂为农乳600、聚羧酸盐或其组合；
优选地，所述乳化剂为农乳600和聚羧酸盐的组合；优选地，农乳600与聚羧酸盐的重量比为1:3-3:1，优选1:1、1:2、2:1、1:3或3:1，更优选1:2。
在一些实施方案中，所述囊壁材料为聚乳酸；
优选地，所述有机溶剂为二氯甲烷。
在一些实施方案中，所述双载纳米农药制剂制成粉剂或水悬浮剂。
在一些实施方案中，所述步骤a中，在剪切乳化条件下将得到的油相滴加到水相中，得到O/W型初乳液；
所述在剪切乳化条件下为采用高速剪切机进行剪切乳化，所述高速剪切机的剪切转速为19000rpm，剪切乳化的时间为10min。
在一些实施方案中，所述步骤b中的高压均质采用高压均质机进行，所述高压均质包括：在300Pa的压力下高压均质6min，然后在600Pa的压力下高压均质6min，随后在900Pa的压力下高压均质6min；或者所述高压均质包括：在900Pa的压力下高压均质15min；
优选地，所述步骤c中采用电动搅拌器进行搅拌，搅拌速度为750rpm；搅拌时间为22h；优选地，所述电动搅拌器为悬臂搅拌器。
本发明进一步提供采用上述方法制备的用于防治番茄灰霉病的双载纳米农药制剂。
本发明选择啶酰菌胺与吡唑醚菌酯两种药剂作为协同增效组合，选择天然易降解高分子材料作为载体，根据两种药剂的不同理化性质，构建双载纳米农药制剂，通过调节各组分的配比以及制备工艺参数，可得到具有不同理化性质、形貌、粒径及结构的载药系统，可有效提高农药田间防控效果。
本发明将两种农药活性成分(啶酰菌胺与吡唑醚菌酯)负载在高分子纳米载体中，通过调节纳米载药系统的精细结构，实现活性成分的可控缓释，可有效降低农药的挥发、分解及向非靶标环境的流失，实现了农药的持续释放并维持较长时间的有效防控浓度，提高了农药利用率；同时纳米载药系统的表面效应和小尺寸效应可以显著提高生物活性，实现农药的减量施用。
与现有的农药相比，本发明提供的双载纳米农药制剂具有以下优势：
1.与现有常用的用于防治番茄灰霉病的农药相比，本发明制备的双载纳米农药制剂的粒径可达到300nm以下，颗粒分散性好且分布均匀，提高了农药与植物叶面的接触面积，增加了农药在植物叶面上的粘附性与渗透性，减少了农药流失，提高了农药的有效利用率，显著提高了对番茄灰霉病的防治效果；
2.本发明制备的双载纳米农药制剂在黄瓜和甘蓝叶片上的滞留量明显高于市售剂型，具有良好的叶面浸润性，从而增大了与叶面的接触面积，增强了与靶标部位的相互作用，提高了防治效果；
3.本发明制备的双载纳米农药制剂在不同温度下储存，均能够保持分散稳定均匀，粒径无显著变化，具有较好的储藏稳定性，从而有利于提高农药的利用率；
4.本发明制备的双载纳米农药制剂具有较好的缓释性，可有效降低农药的挥发、分解及向非靶标环境的流失，实现农药的持续释放并维持较长时间的有效防控浓度，释放出来的农药即被有效利用，室内药效实验及田间实验均表明，本发明制备的双载纳米农药制剂对番茄灰霉病的防效高于市售剂型；
5.与普通的农药相比，本发明的双载纳米农药制剂利用纳米载体材料独特的表面效应和小尺寸效应，通过包裹与吸附等方式负载药物，使本发明的双载纳米农药制剂中啶酰菌胺的载药量达到17.49％，吡唑醚菌酯的载药量达到12.23％；
6.本发明的双载纳米农药制剂采用均质乳化法制备，相对于传统的农药制剂的制备方法，本发明的制备方法在常温下进行，条件温和，乳化时间较短，极大地提高了生产效率，减少了设备损耗和能耗；且工艺相对简单，更易于操作且重复性好，有利于产业化；
7.本发明的双载纳米农药制剂的囊壁采用安全、低成本且可降解的高分子材料聚乳酸制成，有利于减少对环境的污染及降低生产成本。
附图说明
图1示出了本发明实施例制备的双载纳米农药制剂的扫描电子显微镜照片(图1a)、扫描电子显微镜粒径统计分布图(图1b)、透射电子显微镜照片(图1c)以及透射电子显微镜粒径统计分布图(图1d)；
图2示出了啶酰菌胺和吡唑醚菌酯标准品的标准曲线；
图3示出了本发明实施例制备的双载纳米农药制剂在不同温度下储藏后的平均粒径以及分散指数(PDI)随时间的变化；
图4示出了本发明实施例制备的双载纳米农药制剂在不同温度下储藏后的透射电子显微镜照片；
图5示出了本发明实施例制备的双载纳米农药制剂和市售啶酰菌胺/吡唑醚菌酯水分散粒剂在黄瓜和甘蓝叶片上的滞留量；
图6示出了采用本发明的双载纳米农药制剂施药3天和6天后灰霉菌落的生长状况；
图7示出了番茄植株的果实和叶片被灰霉菌所侵蚀的图片。
具体实施方式
以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药剂原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。
仪器
高速剪切机(NANOJ H10，ATS工业系统有限公司)
高压均质机(AH-100D，ATS工业系统有限公司)
悬臂搅拌器(EUROSTAR 60，IKA仪器设备有限公司)
扫描电子显微镜(SU-8010，东京日立公司)
透射电子显微镜(HT7700，东京日立公司)
动态光散射激光粒度仪(ZETASIZER NANO ZS90，英国马尔文仪器有限公司)
高效液相色谱仪(HPLC，1260，美国安捷伦科技公司)
实施例
实施例1双载纳米农药制剂的制备
将1.2g啶酰菌胺和0.6g吡唑醚菌酯溶解于60ml有机溶剂二氯甲烷中，加入1.8g囊壁材料聚乳酸，得到油相(油相中啶酰菌胺的浓度为20g/L，吡唑醚菌酯的浓度为10g/L，囊壁材料的浓度为30g/L)；将3g乳化剂(1.5g农乳600和1.5g聚羧酸盐)溶解于300ml水中得到水相(水相中乳化剂的浓度为10g/L)，采用高速剪切机在19000rpm的剪切转速下将得到的油相滴加到水相中，剪切乳化10min，得到O/W型初乳液。
采用高压均质机在300Pa的压力下将上述O/W型初乳液高压均质6min，然后在600Pa的压力下高压均质6min，随后在900Pa的压力下高压均质6min，得到细乳液。
采用悬臂搅拌器在750rpm的搅拌速度下将上述细乳液搅拌22h，使有机溶剂挥发，得到双载纳米农药制剂。
实施例2双载纳米农药制剂的制备
将1.2g啶酰菌胺和0.6g吡唑醚菌酯溶解于60ml有机溶剂二氯甲烷中，加入1.8g囊壁材料聚乳酸，得到油相(油相中啶酰菌胺的浓度为20g/L，吡唑醚菌酯的浓度为10g/L，囊壁材料的浓度为30g/L)；将3g乳化剂(2g农乳600和1g聚羧酸盐)溶解于300ml水中得到水相(水相中乳化剂的浓度为10g/L)，采用高速剪切机在19000rpm的剪切转速下将得到的油相滴加到水相中，剪切乳化10min，得到O/W型初乳液。
采用高压均质机在300Pa的压力下将上述O/W型初乳液高压均质6min，然后在600Pa的压力下高压均质6min，随后在900Pa的压力下高压均质6min，得到细乳液。
采用悬臂搅拌器在750rpm的搅拌速度下将上述细乳液搅拌22h，使有机溶剂挥发，得到双载纳米农药制剂。
实施例3双载纳米农药制剂的制备
将1.2g啶酰菌胺和0.6g吡唑醚菌酯溶解于60ml有机溶剂二氯甲烷中，加入1.8g囊壁材料聚乳酸，得到油相(油相中啶酰菌胺的浓度为20g/L，吡唑醚菌酯的浓度为10g/L，囊壁材料的浓度为30g/L)；将3g乳化剂(1g农乳600和2g聚羧酸盐)溶解于300ml水中得到水相(水相中乳化剂的浓度为10g/L)，采用高速剪切机在19000rpm的剪切转速下将得到的油相滴加到水相中，剪切乳化10min，得到O/W型初乳液。
采用高压均质机在300Pa的压力下将上述O/W型初乳液高压均质6min，然后在600Pa的压力下高压均质6min，随后在900Pa的压力下高压均质6min，得到细乳液。
采用悬臂搅拌器在750rpm的搅拌速度下将上述细乳液搅拌22h，使有机溶剂挥发，得到双载纳米农药制剂。
实施例4双载纳米农药制剂的制备
将1.2g啶酰菌胺和0.6g吡唑醚菌酯溶解于60ml有机溶剂二氯甲烷中，加入1.8g囊壁材料聚乳酸，得到油相(油相中啶酰菌胺的浓度为20g/L，吡唑醚菌酯的浓度为10g/L，囊壁材料的浓度为30g/L)；将3g乳化剂(2.25g农乳600和0.75g聚羧酸盐)溶解于300ml水中得到水相(水相中乳化剂的浓度为10g/L)，采用高速剪切机在19000rpm的剪切转速下将得到的油相滴加到水相中，剪切乳化10min，得到O/W型初乳液。
采用高压均质机在300Pa的压力下将上述O/W型初乳液高压均质6min，然后在600Pa的压力下高压均质6min，随后在900Pa的压力下高压均质6min，得到细乳液。
采用悬臂搅拌器在750rpm的搅拌速度下将上述细乳液搅拌22h，使有机溶剂挥发，得到双载纳米农药制剂。
实施例5双载纳米农药制剂的制备
将1.2g啶酰菌胺和0.6g吡唑醚菌酯溶解于60ml有机溶剂二氯甲烷中，加入1.8g囊壁材料聚乳酸，得到油相(油相中啶酰菌胺的浓度为20g/L，吡唑醚菌酯的浓度为10g/L，囊壁材料的浓度为30g/L)；将3g乳化剂(0.75g农乳600和2.25g聚羧酸盐)溶解于300ml水中得到水相(水相中乳化剂的浓度为10g/L)，采用高速剪切机在19000rpm的剪切转速下将得到的油相滴加到水相中，剪切乳化10min，得到O/W型初乳液。
采用高压均质机在300Pa的压力下将上述O/W型初乳液高压均质6min，然后在600Pa的压力下高压均质6min，随后在900Pa的压力下高压均质6min，得到细乳液。
采用悬臂搅拌器在750rpm的搅拌速度下将上述细乳液搅拌22h，使有机溶剂挥发，得到双载纳米农药制剂。
实施例6双载纳米农药制剂的制备
将1.2g啶酰菌胺和0.6g吡唑醚菌酯溶解于60ml有机溶剂二氯甲烷中，加入1.8g囊壁材料聚乳酸，得到油相(油相中啶酰菌胺的浓度为20g/L，吡唑醚菌酯的浓度为10g/L，囊壁材料的浓度为30g/L)；将3g乳化剂农乳600溶解于300ml水中得到水相(水相中乳化剂的浓度为10g/L)，采用高速剪切机在19000rpm的剪切转速下将得到的油相滴加到水相中，剪切乳化10min，得到O/W型初乳液。
采用高压均质机在300Pa的压力下将上述O/W型初乳液高压均质6min，然后在600Pa的压力下高压均质6min，随后在900Pa的压力下高压均质6min，得到细乳液。
采用悬臂搅拌器在750rpm的搅拌速度下将上述细乳液搅拌22h，使有机溶剂挥发，得到双载纳米农药制剂。
实施例7双载纳米农药制剂的制备
将1.2g啶酰菌胺和0.6g吡唑醚菌酯溶解于60ml有机溶剂二氯甲烷中，加入1.8g囊壁材料聚乳酸，得到油相(油相中啶酰菌胺的浓度为20g/L，吡唑醚菌酯的浓度为10g/L，囊壁材料的浓度为30g/L)；将3g乳化剂农乳700溶解于300ml水中得到水相(水相中乳化剂的浓度为10g/L)，采用高速剪切机在19000rpm的剪切转速下将得到的油相滴加到水相中，剪切乳化10min，得到O/W型初乳液。
采用高压均质机在300Pa的压力下将上述O/W型初乳液高压均质6min，然后在600Pa的压力下高压均质6min，随后在900Pa的压力下高压均质6min，得到细乳液。
采用悬臂搅拌器在750rpm的搅拌速度下将上述细乳液搅拌22h，使有机溶剂挥发，得到双载纳米农药制剂。
实施例8双载纳米农药制剂的制备
将1.2g啶酰菌胺和0.6g吡唑醚菌酯溶解于60ml有机溶剂二氯甲烷中，加入1.8g囊壁材料聚乳酸，得到油相(油相中啶酰菌胺的浓度为20g/L，吡唑醚菌酯的浓度为10g/L，囊壁材料的浓度为30g/L)；将3g乳化剂聚乙烯醇溶解于300ml水中得到水相(水相中乳化剂的浓度为10g/L)，采用高速剪切机在19000rpm的剪切转速下将得到的油相滴加到水相中，剪切乳化10min，得到O/W型初乳液。
采用高压均质机在300Pa的压力下将上述O/W型初乳液高压均质6min，然后在600Pa的压力下高压均质6min，随后在900Pa的压力下高压均质6min，得到细乳液。
采用悬臂搅拌器在750rpm的搅拌速度下将上述细乳液搅拌22h，使有机溶剂挥发，得到双载纳米农药制剂。
实施例9双载纳米农药制剂的制备
将1.2g啶酰菌胺和0.6g吡唑醚菌酯溶解于60ml有机溶剂二氯甲烷中，加入1.8g囊壁材料聚乳酸，得到油相(油相中啶酰菌胺的浓度为20g/L，吡唑醚菌酯的浓度为10g/L，囊壁材料的浓度为30g/L)；将3g乳化剂Tween-85溶解于300ml水中得到水相(水相中乳化剂的浓度为10g/L)，采用高速剪切机在19000rpm的剪切转速下将得到的油相滴加到水相中，剪切乳化10min，得到O/W型初乳液。
采用高压均质机在300Pa的压力下将上述O/W型初乳液高压均质6min，然后在600Pa的压力下高压均质6min，随后在900Pa的压力下高压均质6min，得到细乳液。
采用悬臂搅拌器在750rpm的搅拌速度下将上述细乳液搅拌22h，使有机溶剂挥发，得到双载纳米农药制剂。
实施例10双载纳米农药制剂的制备
将1.2g啶酰菌胺和0.6g吡唑醚菌酯溶解于60ml有机溶剂二氯甲烷中，加入1.8g囊壁材料聚乳酸，得到油相(油相中啶酰菌胺的浓度为20g/L，吡唑醚菌酯的浓度为10g/L，囊壁材料的浓度为30g/L)；将3g乳化剂聚羧酸盐溶解于300ml水中得到水相(水相中乳化剂的浓度为10g/L)，采用高速剪切机在19000rpm的剪切转速下将得到的油相滴加到水相中，剪切乳化10min，得到O/W型初乳液。
采用高压均质机在300Pa的压力下将上述O/W型初乳液高压均质6min，然后在600Pa的压力下高压均质6min，随后在900Pa的压力下高压均质6min，得到细乳液。
采用悬臂搅拌器在750rpm的搅拌速度下将上述细乳液搅拌22h，使有机溶剂挥发，得到双载纳米农药制剂。
实施例11双载纳米农药制剂的制备
将0.4g啶酰菌胺和0.6g吡唑醚菌酯溶解于60ml有机溶剂二氯甲烷中，加入1.8g囊壁材料聚乳酸，得到油相(油相中啶酰菌胺的浓度为6.67g/L，吡唑醚菌酯的浓度为10g/L，囊壁材料的浓度为30g/L)；将3g乳化剂(1g农乳600和2g聚羧酸盐)溶解于300ml水中得到水相(水相中乳化剂的浓度为10g/L)，采用高速剪切机在19000rpm的剪切转速下将得到的油相滴加到水相中，剪切乳化10min，得到O/W型初乳液。
采用高压均质机在300Pa的压力下将上述O/W型初乳液高压均质6min，然后在600Pa的压力下高压均质6min，随后在900Pa的压力下高压均质6min，得到细乳液。
采用悬臂搅拌器在750rpm的搅拌速度下将上述细乳液搅拌22h，使有机溶剂挥发，得到双载纳米农药制剂。
实施例12双载纳米农药制剂的制备
将0.8g啶酰菌胺和0.6g吡唑醚菌酯溶解于60ml有机溶剂二氯甲烷中，加入1.8g囊壁材料聚乳酸，得到油相(油相中啶酰菌胺的浓度为13.33g/L，吡唑醚菌酯的浓度为10g/L，囊壁材料的浓度为30g/L)；将3g乳化剂(1g农乳600和2g聚羧酸盐)溶解于300ml水中得到水相(水相中乳化剂的浓度为10g/L)，采用高速剪切机在19000rpm的剪切转速下将得到的油相滴加到水相中，剪切乳化10min，得到O/W型初乳液。
采用高压均质机在300Pa的压力下将上述O/W型初乳液高压均质6min，然后在600Pa的压力下高压均质6min，随后在900Pa的压力下高压均质6min，得到细乳液。
采用悬臂搅拌器在750rpm的搅拌速度下将上述细乳液搅拌22h，使有机溶剂挥发，得到双载纳米农药制剂。
实施例13双载纳米农药制剂的制备
将1.6g啶酰菌胺和0.6g吡唑醚菌酯溶解于60ml有机溶剂二氯甲烷中，加入1.8g囊壁材料聚乳酸，得到油相(油相中啶酰菌胺的浓度为26.67g/L，吡唑醚菌酯的浓度为10g/L，囊壁材料的浓度为30g/L)；将3g乳化剂(1g农乳600和2g聚羧酸盐)溶解于300ml水中得到水相(水相中乳化剂的浓度为10g/L)，采用高速剪切机在19000rpm的剪切转速下将得到的油相滴加到水相中，剪切乳化10min，得到O/W型初乳液。
采用高压均质机在300Pa的压力下将上述O/W型初乳液高压均质6min，然后在600Pa的压力下高压均质6min，随后在900Pa的压力下高压均质6min，得到细乳液。
采用悬臂搅拌器在750rpm的搅拌速度下将上述细乳液搅拌22h，使有机溶剂挥发，得到双载纳米农药制剂。
实施例14双载纳米农药制剂的制备
将2g啶酰菌胺和0.6g吡唑醚菌酯溶解于60ml有机溶剂二氯甲烷中，加入1.8g囊壁材料聚乳酸，得到油相(油相中啶酰菌胺的浓度为33.33g/L，吡唑醚菌酯的浓度为10g/L，囊壁材料的浓度为30g/L)；将3g乳化剂(1g农乳600和2g聚羧酸盐)溶解于300ml水中得到水相(水相中乳化剂的浓度为10g/L)，采用高速剪切机在19000rpm的剪切转速下将得到的油相滴加到水相中，剪切乳化10min，得到O/W型初乳液。
采用高压均质机在300Pa的压力下将上述O/W型初乳液高压均质6min，然后在600Pa的压力下高压均质6min，随后在900Pa的压力下高压均质6min，得到细乳液。
采用悬臂搅拌器在750rpm的搅拌速度下将上述细乳液搅拌22h，使有机溶剂挥发，得到双载纳米农药制剂。
实施例15双载纳米农药制剂的制备
将1.2g啶酰菌胺和0.2g吡唑醚菌酯溶解于60ml有机溶剂二氯甲烷中，加入1.8g囊壁材料聚乳酸，得到油相(油相中啶酰菌胺的浓度为20g/L，吡唑醚菌酯的浓度为3.33g/L，囊壁材料的浓度为30g/L)；将3g乳化剂(1g农乳600和2g聚羧酸盐)溶解于300ml水中得到水相(水相中乳化剂的浓度为10g/L)，采用高速剪切机在19000rpm的剪切转速下将得到的油相滴加到水相中，剪切乳化10min，得到O/W型初乳液。
采用高压均质机在300Pa的压力下将上述O/W型初乳液高压均质6min，然后在600Pa的压力下高压均质6min，随后在900Pa的压力下高压均质6min，得到细乳液。
采用悬臂搅拌器在750rpm的搅拌速度下将上述细乳液搅拌22h，使有机溶剂挥发，得到双载纳米农药制剂。
实施例16双载纳米农药制剂的制备
将1.2g啶酰菌胺和0.4g吡唑醚菌酯溶解于60ml有机溶剂二氯甲烷中，加入1.8g囊壁材料聚乳酸，得到油相(油相中啶酰菌胺的浓度为20g/L，吡唑醚菌酯的浓度为6.67g/L，囊壁材料的浓度为30g/L)；将3g乳化剂(1g农乳600和2g聚羧酸盐)溶解于300ml水中得到水相(水相中乳化剂的浓度为10g/L)，采用高速剪切机在19000rpm的剪切转速下将得到的油相滴加到水相中，剪切乳化10min，得到O/W型初乳液。
采用高压均质机在300Pa的压力下将上述O/W型初乳液高压均质6min，然后在600Pa的压力下高压均质6min，随后在900Pa的压力下高压均质6min，得到细乳液。
采用悬臂搅拌器在750rpm的搅拌速度下将上述细乳液搅拌22h，使有机溶剂挥发，得到双载纳米农药制剂。
实施例17双载纳米农药制剂的制备
将1.2g啶酰菌胺和0.8g吡唑醚菌酯溶解于60ml有机溶剂二氯甲烷中，加入1.8g囊壁材料聚乳酸，得到油相(油相中啶酰菌胺的浓度为20g/L，吡唑醚菌酯的浓度为13.33g/L，囊壁材料的浓度为30g/L)；将3g乳化剂(1g农乳600和2g聚羧酸盐)溶解于300ml水中得到水相(水相中乳化剂的浓度为10g/L)，采用高速剪切机在19000rpm的剪切转速下将得到的油相滴加到水相中，剪切乳化10min，得到O/W型初乳液。
采用高压均质机在300Pa的压力下将上述O/W型初乳液高压均质6min，然后在600Pa的压力下高压均质6min，随后在900Pa的压力下高压均质6min，得到细乳液。
采用悬臂搅拌器在750rpm的搅拌速度下将上述细乳液搅拌22h，使有机溶剂挥发，得到双载纳米农药制剂。
实施例18双载纳米农药制剂的制备
将1.2g啶酰菌胺和1g吡唑醚菌酯溶解于60ml有机溶剂二氯甲烷中，加入1.8g囊壁材料聚乳酸，得到油相(油相中啶酰菌胺的浓度为20g/L，吡唑醚菌酯的浓度为16.67g/L，囊壁材料的浓度为30g/L)；将3g乳化剂(1g农乳600和2g聚羧酸盐)溶解于300ml水中得到水相(水相中乳化剂的浓度为10g/L)，采用高速剪切机在19000rpm的剪切转速下将得到的油相滴加到水相中，剪切乳化10min，得到O/W型初乳液。
采用高压均质机在300Pa的压力下将上述O/W型初乳液高压均质6min，然后在600Pa的压力下高压均质6min，随后在900Pa的压力下高压均质6min，得到细乳液。
采用悬臂搅拌器在750rpm的搅拌速度下将上述细乳液搅拌22h，使有机溶剂挥发，得到双载纳米农药制剂。
实施例19双载纳米农药制剂的制备
将1.2g啶酰菌胺和0.2g吡唑醚菌酯溶解于60ml有机溶剂二氯甲烷中，加入1.8g囊壁材料聚乳酸，得到油相(油相中啶酰菌胺的浓度为20g/L，吡唑醚菌酯的浓度为3.33g/L，囊壁材料的浓度为30g/L)；将3g乳化剂(1g农乳600和2g聚羧酸盐)溶解于300ml水中得到水相(水相中乳化剂的浓度为10g/L)，采用高速剪切机在19000rpm的剪切转速下将得到的油相滴加到水相中，剪切乳化10min，得到O/W型初乳液。
采用高压均质机在900Pa的压力下将上述O/W型初乳液高压均质15min，得到细乳液。
采用悬臂搅拌器在750rpm的搅拌速度下将上述细乳液搅拌22h，使有机溶剂挥发，得到双载纳米农药制剂。
测试1乳化剂对双载纳米农药制剂的影响
分别将实施例1-19制备的双载纳米农药制剂用水稀释至0.5％(W/W)，超声震荡分散均匀，通过动态光散射激光粒度仪在室温状态下测定双载纳米农药制剂的水合粒径、分散指数(PDI)和zeta电位，每个样品平行测试3次，取平均值。
表1：本发明实施例制备的双载纳米农药制剂的粒径、分散指数(PDI)和zeta电位
Figure BDA0003333234340000151
Figure BDA0003333234340000161
表1列出了本发明实施例制备的双载纳米农药制剂的粒径、分散指数(PDI)和zeta电位，对测试数据进行对比分析，可得出以下结论：
1.乳化剂对双载纳米农药制剂的影响
实施例6-10采用不同的乳化剂(实施例6采用农乳600作为乳化剂；实施例7采用农乳700作为乳化剂；实施例8采用聚乙烯醇作为乳化剂；实施例9采用Tween-85作为乳化剂；实施例10采用聚羧酸盐作为乳化剂，其中实施例6-10的制备方法中除了乳化剂种类不同外，其余均相同)制备双载纳米农药制剂。从表1可以看出，采用农乳700、聚乙烯醇和Tween-85作为乳化剂制备的双载纳米农药制剂的粒径均大于400nm，而采用农乳600和聚羧酸盐制备的双载纳米农药制剂的粒径均在300nm以下，说明乳化剂的种类对双载纳米农药制剂的粒径影响较大。PDI值大于0.3表明颗粒粒径大小不均一，其中采用农乳700、聚乙烯醇和Tween-85作为乳化剂制备的双载纳米农药制剂的PDI值均大于0.3，表明采用农乳700、聚乙烯醇和Tween-85作为乳化剂制备的双载纳米农药制剂的纳米粒子的粒径不均一；而采用农乳600和聚羧酸盐作为乳化剂制备的双载纳米农药制剂的PDI值均小于0.3，表明采用农乳600和聚羧酸盐作为乳化剂制备的双载纳米农药制剂的粒径小且分散均匀。综合考虑粒径和PDI，优选农乳600、聚羧酸盐或其组合作为乳化剂制备本发明的双载纳米农药制剂。
2.乳化剂配比对双载纳米农药制剂的影响
实施例1-5分别制备了农乳600与聚羧酸盐的重量配比为1:1、2:1、1:2、3:1和1:3的双载纳米农药制剂(实施例1-5的制备方法中除了农乳600与聚羧酸盐的重量配比不同外，其余均相同)。通过对比实施例1-5的测试数据(参见表1)可知，采用不同配比的农乳600与聚羧酸盐制备的双载纳米农药制剂的粒径均小于300nm，PDI均小于0.3，说明采用不同配比的农乳600和聚羧酸盐均可制备出粒径小且分散均匀的双载纳米农药制剂，但采用不同配比的农乳600与聚羧酸盐制备的双载纳米农药制剂的粒径及分散指数不同，说明农乳600与聚羧酸盐的配比对双载纳米农药制剂的粒径有影响。双载纳米农药制剂中农乳600为非离子型表面活性剂，其可以附着在纳米粒子表面形成吸附层产生位阻效应，从而可有效防止纳米粒子的聚集；聚羧酸盐为阴离子型表面活性剂，可提供足够的电荷通过静电排斥力来维持纳米粒子的稳定。从表1中看出，当农乳600与聚羧酸盐的比例为1:2(实施例3)和1:3(实施例5)时，所制备的双载纳米农药制剂的粒径均较小(分别为273.8nm、270.3nm)，但当农乳600与聚羧酸盐的比例为1:2时，所制备的双载纳米农药制剂的PDI最小，表明粒径分布均一稳定，并且zeta电位的绝对值最大，表明纳米粒子之间静电斥力较大，显示出优越的物理稳定性。因此综合考虑粒径、PDI和zeta电位，本发明优选农乳600与聚羧酸盐的重量配比为1:2制备双载纳米农药制剂。
3.油相中啶酰菌胺的浓度对双载纳米农药制剂的影响
实施例11、12、3、13、14分别制备了油相中啶酰菌胺的浓度为6.67g/L、13.33g/L、20.00g/L、26.67g/L和33.33g/L的双载纳米农药制剂(实施例11、12、3、13、14的制备方法中除了油相中啶酰菌胺的浓度不同外，其余均相同)。通过对比实施例11、12、3、13、14的测试数据(参见表1)可知，当油相中啶酰菌胺的浓度为20g/L时(实施例3)，双载纳米农药制剂的粒径(273.8nm)以及PDI(0.057)最小，粒径分散均一，因此本申请优选油相中啶酰菌胺的浓度为20g/L。
4.油相中吡唑醚菌酯的浓度对双载纳米农药制剂的影响
实施例15、16、3、17、18分别制备了油相中吡唑醚菌酯的浓度为3.33g/L、6.67g/L、10.00g/L、13.33g/L和16.67g/L的双载纳米农药制剂(实施例15、16、3、17、18的制备方法中除了油相中吡唑醚菌酯的浓度不同外，其余均相同)。通过对比实施例15、16、3、17、18的测试数据(参见表1)可知，当油相中吡唑醚菌酯的浓度为3.33g/L时(实施例15)，双载纳米农药制剂的粒径最小，且PDI小于0.3，粒径分散均一，因此本申请优选油相中吡唑醚菌酯的浓度为3.33g/L。
5.高压均质条件对双载纳米农药制剂的影响
实施例15和19分别采用不同的高压均质条件制备双载纳米农药制剂(实施例15和19的制备方法中除了高压均质参数不同外，其余均相同)，其中实施例15的高压均质条件为：在300Pa的压力下高压均质6min，然后在600Pa的压力下高压均质6min，随后在900Pa的压力下高压均质6min；实施例19的高压均质条件为：在900Pa的压力下高压均质15min。通过对比实施例15、19的测试数据(参见表1)可知，实施例15制备的双载纳米农药制剂的粒径较小，PDI小于0.3，粒径分散均一。因此本申请优选高压均质条件为：在300Pa的压力下高压均质6min，然后在600Pa的压力下高压均质6min，随后在900Pa的压力下高压均质6min。
测试2双载纳米农药制剂的形貌表征
分别采用扫描电子显微镜和透射电子显微镜对实施例3制备的双载纳米农药制剂的形貌和内部结构进行表征，结果如图1所示。图1示出了本发明实施例制备的双载纳米农药制剂的扫描电子显微镜照片(图1a)、扫描电子显微镜粒径统计分布图(图1b)、透射电子显微镜照片(图1c)以及透射电子显微镜粒径统计分布图(图1d)。从图1a和1c中看出，本发明制备的双载纳米农药制剂为外表光滑、形貌规则的球状，双载纳米农药制剂颗粒的粒径大小分布均一，且粒子之间无团聚，分散性良好。图1b和图1d为采用Nano Measurer 1.2.5软件分别对图1a和图1c中的纳米颗粒粒径进行统计分析而得到的粒径分布图，结果显示双载纳米农药制剂颗粒的平均粒径接近270nm，与动态光散射激光粒度仪测得的水合粒径273.8nm(表1)相同。由此进一步证实，本发明制备的双载纳米农药制剂呈现出粒径小且分散均一，形貌规则的特点，可提高农药分散性能从而提高农药利用率。
测试3双载纳米农药制剂的药效成分测定
采用HPLC外标法测定本发明实施例17制备的双载纳米农药制剂的药效成分含量。具体步骤如下：
分别称取啶酰菌胺和吡唑醚菌酯标准品配制标准溶液，将高效液相色谱仪(HPLC)测量的两种农药活性成分(啶酰菌胺和吡唑醚菌酯)的特征峰峰面积与相应浓度进行线性拟合，得到啶酰菌胺和吡唑醚菌酯标准品的标准曲线(如图2a和图2b所示；图2a为吡唑醚菌酯标准品的标准曲线，图2b为啶酰菌胺标准品的标准曲线)。啶酰菌胺的线性方程为：y＝38.64366x+6.26667，R2＝0.9999；吡唑醚菌酯的线性方程为：y＝36.39293x+14.57917，R2＝0.9999，表明在适当的浓度范围内啶酰菌胺和吡唑醚菌酯的特征峰峰面积与相应浓度间显示出良好的对应关系，可准确地测定双载纳米农药制剂中啶酰菌胺和吡唑醚菌酯的含量。
通过破坏双载纳米农药制剂的结构来测定双载纳米农药制剂中两种有效成分(啶酰菌胺和吡唑醚菌酯)的含量。向双载纳米农药制剂中加入二氯甲烷进行破壁，用乙腈定容，然后用0.22μm滤膜进行过滤，用高效液相色谱仪对悬浮剂中的药物浓度进行测定，啶酰菌胺和吡唑醚菌酯两种有效成分的色谱条件如下：
啶酰菌胺：C18反相柱，流动相为甲醇-水(体积比为30:70)，流速为1.0mL/min，检测波长为235nm，柱温为25℃，进样量为10μL。
吡唑醚菌酯：C18反相柱，流动相为乙腈-水(体积比为80:20)，流速为0.8mL/min，检测波长为285nm，柱温为25℃，进样量为10μL。
通过高效液相色谱仪测试得到啶酰菌胺的保留时间为7.9min，吡唑醚菌酯的保留时间为7.3min。根据啶酰菌胺和吡唑醚菌酯标准品的标准曲线计算得到本发明实施例17制备的双载纳米农药制剂中啶酰菌胺的含量为17.49％，吡唑醚菌酯的含量为12.23％。
测试4双载纳米农药制剂的储藏稳定性分析
依据NY/T 1427-2016《农药常温贮存稳定性试验通则》、GB/T19136-2003《农药热储稳定性测定方法》和GB/T 19137-2003《农药低温稳定性测定方法》对本发明实施例3制备的双载纳米农药制剂的储存稳定性进行评估。具体如下：将双载纳米农药制剂置于磨口试管中封口密封，设置3个平行试样，分别在0℃(0±2℃)下储存7天，25℃(25±2℃)和54℃(54±2℃)下储存14天，在固定时间间隔取出，然后采用动态光散射激光粒度仪对双载纳米农药制剂的粒径以及PDI进行测量，以评估其物理储藏稳定性。
图3a、图3b和图3c分别示出了本发明实施例3制备的双载纳米农药制剂在0℃、25℃和54℃下储藏的平均粒径以及分散指数(PDI)随时间的变化(其中柱状图代表粒径的变化，曲线代表PDI的变化)。从图3可知，本发明的双载纳米农药制剂在0℃、25℃和54℃下储存后，平均粒径保持稳定，整个储存过程中平均粒径无显著性变化。在不同温度储存过程中双载纳米农药制剂的PDI均小于0.3，说明颗粒分布范围较窄，保持分散稳定均匀。由此证明，本发明的双载纳米农药制剂在不同温度下储存，均能够保持分散稳定均匀，粒径无显著变化，具有较好的储藏稳定性，从而有利于提高农药的利用率。
图4a、图4b分别示出了本发明实施例3制备的双载纳米农药制剂在0℃、25℃下储藏后的透射电子显微镜照片。由图4可知，在0℃和25℃的储藏温度下，本发明的双载纳米农药制剂的形貌表现为均一规则的圆球，颗粒间没有聚集，具有良好的稳定性。
测试5双载纳米农药制剂的叶面滞留量测定
农药在作物叶片上的滞留量是影响农药对靶标病虫害有效利用率的关键因素之一。本发明采用浸渍-称重法测定实施例3制备的双载纳米农药制剂在黄瓜和甘蓝叶片上的滞留量，以去离子水为空白对照，市售啶酰菌胺/吡唑醚菌酯水分散粒剂(BPWDG)(巴斯夫欧洲公司)为实验对照组，参照市售剂型的田间喷施浓度(60克/亩)，每组实验独立重复5次。具体操作为：采集新鲜的黄瓜、甘蓝叶片，用规则打孔器制备大小均一的叶片，用便捷式叶面积测量仪测量叶片面积S(cm2)；在药液中放置一把尖头镊子，置于精确度为千分之一的电子天平上记录质量为M0；将叶片完全浸入药液20s，垂直取出后悬置30s，待不再有药液滴落时，记录此时镊子和药液的质量为M1。黄瓜、甘蓝叶片滞留量(Retention，R)的计算公式为：R(mg/cm2)＝(M0-M1)/S。
本发明的双载纳米农药制剂在黄瓜和甘蓝叶片上的滞留量结果如图5所示。从图5中看出，本发明的双载纳米农药制剂(BPNC)、市售啶酰菌胺/吡唑醚菌酯水分散粒剂(BPWDG)在黄瓜叶片上的滞留量分别为51.3±0.9mg/cm2和41.1±0.6mg/cm2，表明本发明的双载纳米农药制剂在黄瓜叶片上的滞留量明显高于市售啶酰菌胺/吡唑醚菌酯水分散粒剂(BPWDG)在黄瓜叶片上的滞留量。甘蓝叶片由于表面的蜡质层而表现出疏水性质，使得农药在甘蓝叶片上的滞留量明显低于黄瓜叶片的滞留量，本发明的双载纳米农药制剂(BPNC)、市售啶酰菌胺/吡唑醚菌酯水分散粒剂(BPWDG)在甘蓝叶片上的滞留量分别为31.5±0.9mg/cm2和25.6±0.9mg/cm2，表明本发明的双载纳米农药制剂在甘蓝叶片上的滞留量明显高于市售啶酰菌胺/吡唑醚菌酯水分散粒剂(BPWDG)在甘蓝叶片上的滞留量。通过SPSS21.0方差分析得到，本发明的双载纳米农药制剂(BPNC)在黄瓜和甘蓝叶片上的滞留量与市售啶酰菌胺/吡唑醚菌酯水分散粒剂(BPWDG)相比均存在显著性差异(如图5中的“**”所示，“**”表示P<0.01时，两者差异极显著)，表明本发明的双载纳米农药制剂具有良好的叶面浸润性。这是因为一方面本发明通过优化选择双载纳米农药制剂的各组分(如乳化剂等)、组分配比以及操作工艺参数提高了农药的润湿和分散作用；另一方面，本发明的双载纳米农药制剂具有纳米级的粒径，纳米化的粒子使得单位面积上的粒子数量增加，与叶面的接触面积增大，增强了与靶标部位的相互作用，从而提高了本发明的双载纳米农药制剂在作物叶片上的滞留量，提高了药物防效。
测试6双载纳米农药制剂的室内药效评估
将本发明实施例3制备的双载纳米农药制剂进行室内生物活性检验。将双载纳米农药制剂设置380mg/L、760mg/L、1140mg/L和1520mg/L四个不同浓度梯度，以市售啶酰菌胺/吡唑醚菌酯水分散粒剂(BPWDG)为实验对照组，将药液均匀地喷施到番茄叶片上，分别在3天和6天后，采集番茄叶片，背面朝上，叶柄用脱脂棉包裹保湿，置于铺有湿滤纸的150mm培养皿中，每个小叶片接种一枚直径为5mm的灰霉菌饼，24℃光照培养2天后，采用十字交叉法测量病斑直径，计算相对防效。
图6示出了采用本发明的双载纳米农药制剂施药3天(图6a)和6天(图6b)后灰霉菌落的生长状况。通过对菌落直径的统计分析来评估药剂对番茄灰霉病的防效，结果如表2所示。从表2可知，本发明的双载纳米农药制剂在用药3天后，在380mg/L、760mg/L、1140mg/L和1520mg/L浓度下对番茄灰霉病的防效分别为74.24％、87.73％、92.73％和93.41％；本发明的双载纳米农药制剂在用药6天后，在380mg/L、760mg/L、1140mg/L和1520mg/L浓度下对番茄灰霉病的防效分别为74.22％、83.00％、81.71％和91.80％，表明随着浓度的升高，双载纳米农药制剂对番茄灰霉病的相对防效逐渐升高。在380mg/L浓度下用药3天后，本发明的双载纳米农药制剂和市售啶酰菌胺/吡唑醚菌酯水分散粒剂(BPWDG)对番茄灰霉病的防效分别为74.24％和68.41％；在380mg/L浓度下用药6天后，本发明的双载纳米农药制剂和市售啶酰菌胺/吡唑醚菌酯水分散粒剂(BPWDG)对番茄灰霉病的防效分别为74.22％、67.41％，表明在相同浓度下，本发明的双载纳米农药制剂对番茄灰霉病的相对防效高于市售啶酰菌胺/吡唑醚菌酯水分散粒剂。
表2 本发明的双载纳米农药制剂和市售剂型施药3天和6天后对番茄灰霉病的防效
Figure BDA0003333234340000231
测试7双载纳米农药制剂的田间药效评估
为验证双载纳米农药制剂对番茄灰霉病的防治效果和安全性，设计田间药效实验。本实验参照杀菌剂防治蔬菜灰霉病田间药效试验准则(GB/T 17980.28-2000)和试验药剂药量进行。实验在日光温室中进行，番茄品种为普罗旺斯，亩定植3000株，2018年9月16日定植。从图7可清晰地看到在番茄植株的果实和叶片上都有较为严重的灰霉菌感染(图7中椭圆形标记处)，我们在间隔时间段内分别调查药剂对番茄叶片和果实的防效，探究本发明的双载纳米农药制剂对番茄灰霉病的田间药效。实验采用本发明实施例3制备的双载纳米农药制剂(BPNC)和对照药剂市售啶酰菌胺/吡唑醚菌酯水分散粒剂(BPWDG)进行，本发明的双载纳米农药制剂(BPNC)的浓度为1140mg/L，对照药剂BPWDG的浓度为380mg/L，每组药剂处理面积22m2，每组处理用药液量为2L(每公顷的用药液量为约900L)。
用药时期为灰霉病零星发生时，将病叶和病果摘除后开始用药，本发明的双载纳米农药制剂(BPNC)仅喷雾施用一次，施药时间为2019年1月28日，对照药剂BPWDG喷雾施用四次，施药时间分别为1月28日、2月10日、2月21日和3月1日。药剂施用后5天、14天、24天、30天分别调查各组药剂处理的发病情况，记录病叶和病果数，并计算防效。
各组药剂对番茄灰霉病的防效结果如表3所示。从表3看出，本发明的双载纳米农药制剂(BPNC)在1140mg/L下喷雾施用1次后5-30天，对番茄灰霉病叶片和果实的防效均在80％以上，优于对照市售药剂BPWDG在380mg/L下施用3次对番茄灰霉病的防治效果。30天后，本发明的双载纳米农药制剂(BPNC)对番茄灰霉病的防治效果仍保持在80％以上，整体优于对照市售药剂BPWDG对番茄灰霉病的防治效果。
总体来看，本发明的双载纳米农药制剂在1140mg/L下喷雾施用1次后对番茄灰霉病的防效相当于对照市售药剂在380mg/L下施用3次对番茄灰霉病的防效，在相同剂量下减少了用药次数，节省了至少两次用药的人工成本，持效期可达30天。由此表明，本发明的双载纳米农药制剂相比于市售药剂具有更好的缓释能力以及杀虫效果。
表3 各组药剂对番茄灰霉病的防效结果
Figure BDA0003333234340000241
尽管本文中已经示出并描述了本发明的优选实施方案，但对于本领域技术人员显而易见的是这些实施方案仅以示例的方式提供。本领域技术人员在不脱离本发明的情况下现将想到多种变化、改变和替代。应当理解本文中所述的本发明实施方案的各种替代方案可用于实施本发明。目的在于以下述权利要求限定本发明的范围，并由此涵盖这些权利要求范围内的方法和结构及其等同项。

Claims (10)

1.一种用于防治番茄灰霉病的双载纳米农药制剂的制备方法，所述制备方法包括：
步骤a：采用啶酰菌胺、吡唑醚菌酯和囊壁材料制成油相，采用乳化剂制成水相，然后将油相加入到水相中，得到O/W型初乳液；
步骤b：将步骤a中得到的O/W型初乳液通过高压均质进行细乳化，得到细乳液；
步骤c：将步骤b中得到的细乳液搅拌，使有机溶剂挥发，得到双载纳米农药制剂。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤a包括：将啶酰菌胺和吡唑醚菌酯溶解于有机溶剂中，加入囊壁材料，得到油相，将乳化剂溶解于水中得到水相，在乳化条件下将得到的油相滴加到水相中，得到O/W型初乳液。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤a中，所述油相中啶酰菌胺的浓度为6.67-33.33g/L，优选20g/L；
优选地，所述步骤a中，所述油相中吡唑醚菌酯的浓度为3.33-16.67g/L，优选3.33g/L；
优选地，所述步骤a中，所述油相中囊壁材料的浓度为30g/L；
优选地，所述步骤a中，所述水相中乳化剂的浓度为10g/L；
优选地，所述步骤a中，所述油相中啶酰菌胺与吡唑醚菌酯的重量比为1:0.17-1:1.50，优选1:0.17；
优选地，所述步骤a中，所述油相中啶酰菌胺与囊壁材料的重量比为1:0.9-1:4.5，优选1:1.5；
优选地，所述步骤a中，啶酰菌胺与乳化剂的重量比为1:1.5-1:7.5，优选1:2.5。
4.根据上述权利要求中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述双载纳米农药制剂中啶酰菌胺的含量为17.49％，吡唑醚菌酯的含量为12.23％。
5.根据上述权利要求中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述乳化剂为农乳600、农乳700、聚乙烯醇、Tween-85和聚羧酸盐中的一种或多种；
优选地，所述乳化剂为农乳600、聚羧酸盐或其组合；
优选地，所述乳化剂为农乳600和聚羧酸盐的组合；优选地，农乳600与聚羧酸盐的重量比为1:3-3:1，优选1:1、1:2、2:1、1:3或3:1，更优选1:2。
6.根据上述权利要求中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述囊壁材料为聚乳酸；
优选地，所述有机溶剂为二氯甲烷。
7.根据上述权利要求中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述双载纳米农药制剂制成粉剂或水悬浮剂。
8.根据上述权利要求中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤a中，在剪切乳化条件下将得到的油相滴加到水相中，得到O/W型初乳液；
所述在剪切乳化条件下为采用高速剪切机进行剪切乳化，所述高速剪切机的剪切转速为19000rpm，剪切乳化的时间为10min。
9.根据上述权利要求中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤b中的高压均质采用高压均质机进行，所述高压均质包括：在300Pa的压力下高压均质6min，然后在600Pa的压力下高压均质6min，随后在900Pa的压力下高压均质6min；或者所述高压均质包括：在900Pa的压力下高压均质15min；
优选地，所述步骤c中采用电动搅拌器进行搅拌，搅拌速度为750rpm；搅拌时间为22h；优选地，所述电动搅拌器为悬臂搅拌器。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的制备方法制备的用于防治番茄灰霉病的双载纳米农药制剂。
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