CN113789263A - 一种用于体外神经细胞网络多参数实时监测的多通道系统 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于体外神经细胞网络多参数实时监测的多通道系统,包括二氧化碳培养箱、微电极阵列芯片、细胞生长微区及信号检测装置;所述细胞生长微区固定在微电极阵列芯片上,固定有细胞生长微区的微电极阵列芯片放置于二氧化碳培养箱中,微电极阵列芯片周围设有信号检测电极,信号检测电极连接到信号检测装置。在微电极阵列芯片上固定细胞生长微区,将神经细胞接种于微区内后贴壁生长于微电极阵列芯片表面,在培养得到体外神经网络结构的同时通过对微电极阵列芯片的信号输出采集,实现神经网络多参数信号的监测,并可以通过对网络施加刺激等,实现神经网络的特性研究,可以保持神经细胞活性至少一周。
Description
技术领域
本发明涉及体外活神经细胞网络监测装置,特别涉及一种用于体外神经细胞网络多参数实时监测的多通道系统。
背景技术
脑作为人体活动的最高中枢,对于生命科学有着独特的意义,然而目前人类对于大脑机制的认知仍然局限于相对宏观的层面,对于细胞、分子水平的机制机理研究仍有较大空白。研究大脑神经细胞的功能和连通性需要多种信号结合分析。温度是最重要的生理参数之一,细胞温度在生命活动中起着重要的作用,温度影响着细胞内部大量的过程,从基因表达到蛋白质之间的相互作用均受其影响,因此可以通过监测细胞的温度来进行适当的温度控制,且细胞内的生化进程、细胞间的信息传递以及对外界生化干预的响应,都和细胞内的能量变化相关,直接表现出的就是温度的改变,故可以通过细胞测温来间接反应细胞内的情况。作为可兴奋细胞,神经细胞的兴奋可以由电信号的形式被观察和记录,因此对于神经细胞电压和电流信号的监测可以帮助神经细胞兴奋特性及编码机制的研究。细胞阻抗传感技术是将细胞培养和阻抗技术相结合,可在细胞培养的过程中对细胞的状态进行实时、连续地监测,能够及早发现细胞状态的变化,被认为是定量研究细胞行为最有前景的技术之一。
发明内容
发明目的:本发明目的是提供一种可实时监测体外神经网络动作电位、电流、温度及细胞-电极阻抗等参数监测和采集的装置。
技术方案:本发明所述的用于体外神经细胞网络多参数实时监测的多通道系统,包括二氧化碳培养箱、微电极阵列芯片、细胞生长微区及信号检测装置;
所述细胞生长微区固定在微电极阵列芯片上,固定有细胞生长微区的微电极阵列芯片放置于二氧化碳培养箱中,所述微电极阵列芯片周围设有信号检测电极,所述信号检测电极连接到信号检测装置。
进一步地,所述微电极阵列芯片集成有四种电极结构,分别为用于电流检测的开关电极、用于动作电位检测的微电极和参考电极、用于细胞-电极阻抗检测的叉指电极和用于温度测量的铂热电阻。所述细胞生长微区由PDMS加工而成。所述开关电极微6×6阵列结构,所述微电极微6×6阵列结构,所述参考电极为一个大面积电极,所述铂热电阻数量为4。所述体外神经细胞为神经元细胞、神经干细胞。
进一步地,所述硬件部分包括弹簧探针、电压放大和滤波电路、电压采集电路、电流检测电路、阻抗检测电路、电阻检测电路;弹簧探针用于将微电极阵列芯片外周测试点信号引出并输入到电路;电压放大和滤波电路用于对动作电位放大和滤波,以处理得到相对较好的动作电位波形;电压采集电路用于将处理得的动作电位由模拟信号转化为数字信号,以进行进一步处理和分析;电流检测电路用于测量开关电极所输出的神经细胞电流信号;阻抗检测电路用于检测和分析叉指电极输出的细胞-电极阻抗信号;电阻检测电路用于检测铂热电阻的阻值。所述软件部分包括烧录到嵌入式系统的部分和上位机。
进一步地,所述烧录到嵌入式系统的部分包括用于和电压信号采集的硬件ADC通讯的部分、用于将采集到的数据进行预处理的部分和将数据发送到上位机的部分。所述上位机通过Labview实现,用于将嵌入式系统发送的多参数信号进行处理后实时显示。
本发明装置在微电极阵列芯片上固定细胞生长微区,将神经细胞接种于微区内后贴壁生长于微电极阵列芯片表面,在培养得到体外神经网络结构的同时,可以通过对微电极阵列芯片的信号输出采集,实现神经网络多参数信号的监测,并可以通过对网络施加刺激等,实现神经网络的特性研究,整个过程无创进行,可以保持神经细胞活性至少一周。该装置可以解决目前脑科学研究过程中的一些局限,提供了一种体外神经网络的多参数整合分析的研究方法。
有益效果:本发明与现有技术相比,具有如下优势:本发明装置可以实时监测细胞的动作电位、电流、温度及细胞-电极阻抗等参数,操作简单,且可以实时显示动作电位信号以观察神经细胞的兴奋情况,时间分辨率和空间分辨率高,且系统工作稳定,结果可由上位机软件实时观察,便于使用。
附图说明
图1是系统结构示意图;
图2是微电极阵列芯片整体结构示意图;
图3是微电极阵列芯片各电极结构示意图,其中,(a)为开关电极,(b)为动作电位检测用微电极,(c)为叉指电极;
图4是神经细胞生长于芯片上的显微镜照片;
图5是通过系统检测到的神经细胞动作电位;
图6是通过铂热电阻及温度检测电路测量到的神经细胞温度曲线。
具体实施方式
本装置在使用时将神经细胞接种到包被过的铂热电阻上,在细胞的整个生长过程中可以实时测量细胞温度,时间可以保持7天以上,结果如图6所示。
请参阅附图1-6,本实施例用于体外神经细胞网络多参数实时监测的多通道系统,包括二氧化碳培养箱、微电极阵列芯片、细胞生长微区及信号检测装置;
细胞生长微区固定在微电极阵列芯片上,固定有细胞生长微区的微电极阵列芯片放置于二氧化碳培养箱中,微电极阵列芯片周围设有信号检测电极,信号检测电极连接到信号检测装置。
微电极阵列芯片集成有四种电极结构,分别为用于电流检测的开关电极、用于动作电位检测的微电极和参考电极、用于细胞-电极阻抗检测的叉指电极和用于温度测量的铂热电阻。细胞生长微区由PDMS加工而成。开关电极微6×6阵列结构,微电极微6×6阵列结构,参考电极为一个大面积电极,铂热电阻数量为4。体外神经细胞为神经元细胞、神经干细胞。
硬件部分包括弹簧探针、电压放大和滤波电路、电压采集电路、电流检测电路、阻抗检测电路、电阻检测电路;弹簧探针用于将微电极阵列芯片外周测试点信号引出并输入到电路;电压放大和滤波电路用于对动作电位放大和滤波,以处理得到相对较好的动作电位波形;电压采集电路用于将处理得的动作电位由模拟信号转化为数字信号,以进行进一步处理和分析;电流检测电路用于测量开关电极所输出的神经细胞电流信号;阻抗检测电路用于检测和分析叉指电极输出的细胞-电极阻抗信号;电阻检测电路用于检测铂热电阻的阻值。软件部分包括烧录到嵌入式系统的部分和上位机(4)。
烧录到嵌入式系统的部分包括用于和电压信号采集的硬件ADC通讯的部分、用于将采集到的数据进行预处理的部分和将数据发送到上位机的部分。上位机(4)通过Labview实现,将嵌入式系统发送的多参数信号进行处理后实时显示。
嵌入式系统为STM32F407。上位机基于Labview开发得到,包括数据处理和显示部分。
如图1所示,用于细胞培养及信号测量的微电极1:在接种神经细胞之前,通过固化PDMS将细胞生长微区构建在该芯片上,并进行生物包被促进细胞贴附,而后接种神经细胞;二氧化碳培养箱2:细胞在接种到芯片上后,放置到培养箱中进行培养;信号处理和采集部分3:包括硬件电路和烧录于嵌入式系统的采集和控制软件,在细胞培养一周左右得到良好的神经细胞网络结构后,可以用于网络中细胞动作电位、电流、细胞-电极阻抗和细胞温度的初步处理,且烧录于STM32中的软件用于控制整个系统工作实现相关功能,并将采集到的信号发送到上位机;上位机软件4:对STM32所发送的信号进行进一步处理和显示,帮助分析。
通过PDMS对微电极阵列芯片进行分区,利用多聚-L-赖氨酸对芯片进行包被后将神经细胞接种于电信号测量区的微电极上并培养得到神经细胞网络结构后,施加刺激观察到细胞的动作电位,细胞生长情况及动作电位如图4、图5所示。
该装置的信号传输过程为:神经细胞的信号由MEA连接到外周测试点,经弹簧探针输出到硬件电路。输入到硬件电路的动作电位信号经由放大、滤波和模数转换后得到相应数字信号;温度信号由电阻测量电路检测到铂热电阻阻值;电流信号由电流测量电路进行检测得到神经细胞电流;细胞-电极阻抗信号由阻抗测量电路检测得到,以上四种信号由STM32进行采集并发送到上位机进行进一步处理和显示。
本装置的使用方法如下:
将PDMS固化加工到微电极阵列芯片上并进行生物包被,将原代神经细胞接种于微电极阵列芯片上放入培养箱进行培养,三天进行半换液,一周左右得到良好的神经网络结构后可以进行信号监测。使用时对系统进行供电,在上位机中连接到系统即可实时观察各参数情况,可以用于神经细胞生长过程中的细胞状态分析和记录,也可以用于分析生长后的神经网络在生物、物理、化学等外界刺激下所做出的反应,用于生物传感器的研究,或用于神经编码机制的探究。
Claims (10)
1.一种用于体外神经细胞网络多参数实时监测的多通道系统,其特征在于:包括二氧化碳培养箱、微电极阵列芯片、细胞生长微区及信号检测装置;
所述细胞生长微区固定在微电极阵列芯片上,固定有细胞生长微区的微电极阵列芯片放置于二氧化碳培养箱中,所述微电极阵列芯片周围设有信号检测电极,所述信号检测电极连接到信号检测装置。
2.根据权利要求1所述的用于体外神经细胞网络多参数实时监测的多通道系统,其特征在于:所述微电极阵列芯片集成有四种电极结构,分别为用于电流检测的开关电极、用于动作电位检测的微电极和参考电极、用于细胞-电极阻抗检测的叉指电极和用于温度测量的铂热电阻。
3.根据权利要求1所述的用于体外神经细胞网络多参数实时监测的多通道系统,其特征在于:所述细胞生长微区由PDMS加工而成。
4.根据权利要求1所述的用于体外神经细胞网络多参数实时监测的多通道系统,其特征在于:所述开关电极微6×6阵列结构,所述微电极微6×6阵列结构,所述参考电极为一个大面积电极,所述铂热电阻数量为4。
5.根据权利要求1所述的用于体外神经细胞网络多参数实时监测的多通道系统,其特征在于:所述信号检测装置包括硬件部分、软件部分和嵌入式系统,所述嵌入式系统为STM32。
6.根据权利要求5所述的用于体外神经细胞网络多参数实时监测的多通道系统,其特征在于:所述硬件部分包括弹簧探针、电压放大和滤波电路、电压采集电路、电流检测电路、阻抗检测电路、电阻检测电路;弹簧探针用于将微电极阵列芯片外周测试点信号引出并输入到电路;电压放大和滤波电路用于对动作电位放大和滤波,以处理得到相对较好的动作电位波形;电压采集电路用于将处理得的动作电位由模拟信号转化为数字信号,以进行进一步处理和分析;电流检测电路用于测量开关电极所输出的神经细胞电流信号;阻抗检测电路用于检测和分析叉指电极输出的细胞-电极阻抗信号;电阻检测电路用于检测铂热电阻的阻值。
7.根据权利要求5所述的用于体外神经细胞网络多参数实时监测的多通道系统,其特征在于:所述软件部分包括烧录到嵌入式系统的部分和上位机(4)。
8.根据权利要求7所述的用于体外神经细胞网络多参数实时监测的多通道系统,其特征在于:所述烧录到嵌入式系统的部分包括用于和电压信号采集的硬件ADC通讯的部分、用于将采集到的数据进行预处理的部分和将数据发送到上位机的部分。
9.根据权利要求7所述的用于体外神经细胞网络多参数实时监测的多通道系统,其特征在于:所述上位机(4)通过Labview实现,将嵌入式系统发送的多参数信号进行处理后实时显示。
10.根据权利要求1所述的用于体外神经细胞网络多参数实时监测的多通道系统,其特征在于:所述体外神经细胞为神经元细胞、神经干细胞。
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