CN113788840B - 愈创木烷倍半萜多聚体与其药物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于药物技术领域，具体涉及到结构式(I)所示的愈创木烷倍半萜多聚体1‑4，其制备方法，及其药物组合物和在制备抗肝癌的药物中的应用。制备方法包括以二甲胺基‑阿格拉宾为原料经环氧异构化得到愈创木烷双烯体，双烯体与含有α，β‑不饱和‑γ‑内酯片段的倍半萜或其多聚物经Diels–Alder反应/脱保护制备得到愈创木烷倍半萜多聚体。所制备多聚体对人肝癌细胞株HepG2、Huh7和SK‑HEP‑1具有抑制活性，能够与可药用载体或赋型剂组成药物组合物，用于制备抗肝癌药物。

Description

愈创木烷倍半萜多聚体与其药物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于药物技术领域，具体地说，本发明涉及新的愈创木烷倍半萜多聚体，其制备方法，以其为活性成分的药物组合物，以及该类化合物及其药物组合物在制备抗肝癌药物中的应用。
背景技术
肝癌是常见恶性肿瘤之一，包括原发性肝癌和继发性肝癌，其中肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)占90％以上。在全球范围内，HCC发病率居恶性肿瘤发病的第6位，目前全球每年新发肝癌病例超过80万例，在我国的每年发病超46万例。肝癌有发病隐匿、潜伏期长、侵袭性强、容易转移等特征，且其恶性程度高，对于不可切除性或晚期疾病患者，5年存活率仅13％，我国每年有超42.2万人因肝癌死亡。目前临床上治疗肝癌药物主要有作用于酪氨酸激酶抑制剂的4个小分子合成药物：索拉菲尼，瑞格替尼，乐伐替尼；以及3个抗体类药物：纳武单抗，帕姆单抗和雷莫芦单抗。这些药物在临床上治疗肝癌方面发挥了显著的治疗作用，但仍存在客观缓解率较低(<20％)，对易产生耐药性、一些肝癌患者不耐受、毒副反应明显、价格昂贵等不足，其效果不能令人满意。
愈创木烷倍半萜多聚体是由两个或多个愈创木烷倍半萜单元连接而成的具有30-60个碳原子骨架的一类结构复杂的天然产物。生命体内负责细胞功能的大量蛋白质是以二聚体形式存在或者在介导某些信号通路之前需要通过二聚化来激活，同时靶向二聚体蛋白的两个单体是药物研究的一个重要策略。由于倍半萜二聚体具有同时作用于二聚体蛋白两个单体的潜力，因此，基于抗肝癌活性倍半萜，开展其多聚物的合成具有重要意义。
现有技术无愈创木烷多聚体1-4的报道，无愈创木烷多聚体1-4的合成方法的报道，没有愈创木烷多聚体1-4在制备或治疗肝癌药物中的应用的报道，也没有其作为有效成分的药物组合物的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新的愈创木烷多聚体1-4，其制备合成方法，以及其作为有效成分的药物组合物，同时提供愈创木烷多聚体1-4及其药物组合物在制备治疗或预防肝癌的药物中的应用。
为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：
结构式(I)所示的愈创木烷倍半萜多聚体1-4，
本发明还提供愈创木烷倍半萜多聚体的制备方法，该方法包括以二甲胺基-阿格拉宾为原料经环氧异构化得到愈创木烷双烯体，双烯体与含有α，β-不饱和-γ-内酯片段的倍半萜或其多聚体经Diels–Alder反应/脱二甲胺基制备得到愈创木烷倍半萜多聚体，
亲双烯体包括ludartin，含笑内酯等愈创木烷倍半萜或含有α，β不饱和内酯片段的愈创木烷倍半萜二聚体、三聚体。
愈创木烷倍半萜多聚体合成方法主要包括如下两个关键反应步骤：
反应步骤一：二甲胺基-阿格拉宾在适当的反应溶剂中与适当的异构化试剂作用反应得到双烯体，所述异构化试剂为2,2,6,6-四甲基哌啶基二乙基铝或二环基胺基铝或二异丙胺基二乙基铝或2,2,6,6-四甲基哌啶基二甲基铝，反应溶剂为甲苯或苯或乙醚或四氢呋喃；或者异构化试剂为一氯二茂钛，反应溶剂为甲苯或苯或乙醚或四氢呋喃。
反应步骤二：双烯体在适当的条件下与含有α，β-不饱和-γ-内酯片段的亲双烯体经Diels–Alder反应/脱二甲胺基即制备得到倍半萜多聚体，所述Diels–Alder反应适当的条件为苯、甲苯、二甲苯、四氢呋喃为溶剂，双烯体与亲双烯体在加热条件下反应；或者2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚为抗氧化剂，苯、甲苯、二甲苯、四氢呋喃为溶剂，双烯体与亲双烯体在加热条件下反应；或者双烯体与亲双烯在无溶剂条件下室温反应；或者双烯体与亲双烯在无溶剂条件下加热反应。
根据上述合成方法，以ludartin为亲双烯体可制备得到化合物1，以含笑内酯为亲双烯体可制备得到化合物2，以倍半萜二聚体lavandiolide I为亲双烯体可制备得到倍半萜三聚体3，以倍半萜二聚体3为亲双烯体可制备得到倍半萜四聚体4。
本发明同时还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括上述的式(I)化合物1-4任其一种或任其组合和至少一种和药学上可接受的载体或赋型剂。
本发明提供的药物组合物，包括上述化合物1-4中的至少一种或任意组合和药学上可接受的载体或赋型剂。在本发明中，所述药学上可接受的载体或赋型剂优选为固体、半固体或液体稀释剂，填料以及药物制品辅剂。本发明对所述药学上可接受的载体或赋型剂没有特殊的限定，选用本领域熟知的、对人和动物无毒且惰性的药学上可接受的载体和/或赋型剂即可。
本发明对所述药物组合物的制备方法没有特殊的限定，直接将化合物1-4中的至少一种与药学上可接受的载体或赋型剂混合即可，本发明对所述混合的过程没有特殊的限定，选用本领域熟知的过程能够得到药物组合物即可。
本发明此外还提供了上述技术方案所述式(I)化合物1-4及其药物组合物在制备治疗或预防肝癌的药物中的应用。本发明对所述应用的方法没有特殊的限定，选用本领域熟知的方法即可。
在本发明中，当所述化合物或药物组合物用于制备治疗或预防肝癌药物时，所述组合物在药物中的含量优选为0.1～99％；在所述药物组合物中，所述化合物1-4中的至少一种在药物组合物中的含量优选为0.5～90％。本发明的药物组合物优选以单位体重服用量的形式使用。在本发明中，所制备的药物优选可经注射(静注、肌注)和口服两种形式给药。
与现有技术相比，本发明具备如下优益性：本发明提供了新的化合物愈创木烷多聚体1-4，其作为有效成分的药物组合物，同时提供了愈创木烷多聚体1-4及其药物组合物在制备治疗或预防肝癌的药物中的应用，并提供了以阿格拉宾为原料制备新的愈创木烷倍半萜多聚体的方法。该方法原料易得，易于操作，适于工业化生成。该方法具有较好的底物普适性，可用于愈创木烷二聚体，三聚体或四聚体的合成，为愈创木烷倍半萜多聚体的工业制备提供了新的合成方法。
附图说明：
图1为本发明愈创木烷倍半萜多聚体1-4的结构示意图。
具体实施方式
为了更好地理解本发明，下面结合附图，以本发明的具体实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限制本发明。
实施例1
以二甲胺基-阿格拉宾为原料制备双烯体。
方法1：双烯体的的制备。
氩气保护下，将二氯二茂钛(99.6mg,0.4mmol)溶于2mL严格脱氧的四氢呋喃，搅拌下向其中加入78mg锌粉(1.2mmol)，15min后当反应液颜色由红色变为绿色后向其中加入58.2mg二甲胺基-阿格拉宾(0.2mmol)，室温反应72h。使用5mL饱和碳酸氢钠淬灭反应，搅拌30min后乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，减压浓缩除去溶剂，粗产物经硅胶柱层析(三乙胺-乙酸乙酯-石油醚,1:20:80)分离得到45mg双烯体。
双烯体
分子式：C17H25NO3
分子量：291.39
性状：淡黄色粉末
旋光：[α]D 23-6.35(c 0.145,甲醇)；
IRνmax 3434,2934,1772,1458,1369,964cm-1；
HRMS(ESI,m/z):[M+H]+[C17H26NO3]+计算值293.1907,测试值293.1889.
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ5.98-5.97(m,1H,H-2),5.35-5.33(m,1H,H-6),2.80-2.79(m,2H,H-3),2.70-2.66(m,1H,H-13a),2.50-2.47(m,1H,H-13b),2.40-2.35(m,1H,H-11),2.24-2.22(m,1H,H-7),2.16(s,6H,N-Me2),2.10(d,J＝1.5Hz,3H,H-15),2.03-1.88(m,4H,H-8a,H-8b,H-9a,H-9b),1.51(s,1H,H-14)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ177.9(C-12),151.1(C-4),136.9(C-1),135.1(C-5),124.1(C-2),82.9(C-6),70.5(C-10),58.5(C-13),49.7(C-7),45.8(N-Me2),45.5(C-3),44.8(C-11),40.1(C-9),30.8(C-14),26.2(C-8),14.9(C-15).
实施例2
愈创木烷倍半萜多聚体1(化合物1)的制备。
室温下，将双烯体(58mg,0.20mmol)和ludartin(59mg,0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷，减压浓缩除去溶剂后在50℃下无溶剂反应60h。将产物溶于5mL甲醇，向其中加入62μL碘甲烷(1mmol)，搅拌过夜后减压浓缩除去溶剂，加入5mL10％NaHCO3和5mL乙酸乙酯，将混合物转移到分液漏斗中，混合直至固体完全溶解。分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取(2×5mL)，合并有机相，减压浓缩除去溶液，粗产物经硅胶柱层析(乙酸乙酯-石油醚,25:75)分离得到化合物3(78mg，收率79％)。
化合物1
分子式：C30H36O6
分子量：492.61
性状：白色固体
熔点：147.9-149.3℃
旋光：[α]D 23 33.70(c 0.127,甲醇)
IRνmax3468,2948,1764,1446,1148,1010,543.8cm-1；
HRMS(ESI,m/z):[M+HCOO]-[C31H37O8]-计算值537.2494,测试值537.2462.
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.15(d,J＝3.5Hz,1H,H-11a),5.54(d,J＝10.0Hz,1H,H-6),6.15(d,J＝3.5Hz,1H,H-11b),3.59(dd,J＝10.0,10.0Hz,1H,H-6′),3.36(brs,1H,H-3′),3.04-3.01(m,2H,H-5′,H-2),2.69(brd,J＝17.5Hz,H-2′a),2.46-2.39(m,2H,H-2′b,H-7′),2.24(t,J＝13.5Hz,1H,H-9′b),2.15-2.10(m,2H,H-8a,H-13a′),2.03-1.97(m,2H,H-9a,H-9′b),1.84-1.75(m,3H,H-9b,H-8b,H-8′a),1.67(s,3H,H-14′),1.59(s,3H,H-15′),1.52-1.44(m,2H,H-13′,H-3a),1.48(s,3H,H-15),1.40(s,3H,H-14),1.36-1.31(m,2H,H-8′b,H-3b)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ180.3(C-12′),170.2(C-12),150.8(C-1),145.3(C-5),140.1(C-11),135.3(C-10′),133.4(C-1′),119.0(C-13),83.8(C-6),77.5(C-6′),72.7(C-10),67.3(C-4′),63.8(C-3′),60.2(C-4),56.2(C-11′),55.5(C-7′),53.5(C-3),51.8(C-5′),46.8(C-7),42.9(C-2),38.6(C-9),35.1(C-13′),33.8(C-9′),33.2(C-2′),27.6(C-14),25.9(C-8′),23.6(C-8),22.1(C-15′),19.3(C-14′),17.0(C-15)；
实施例3
愈创木烷倍半萜多聚体2(化合物2)的制备。
室温下，将双烯体III(58mg,0.20mmol)和含笑内酯(michelionlide,60mg,0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷，减压浓缩除去溶剂后在50℃下无溶剂反应60h。将产物溶于5mL甲醇，向其中加入62μL碘甲烷(1mmol)，搅拌过夜后减压浓缩除去溶剂，加入5mL10％NaHCO3和5mL乙酸乙酯，将混合物转移到分液漏斗中，混合直至固体完全溶解。分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取(2×5mL)，合并有机相，减压浓缩除去溶液，粗产物经硅胶柱层析(乙酸乙酯-石油醚,30:70)分离得到化合物2(64mg，收率65％)。
化合物2
分子式：C30H38O6
分子量：494.63
性状：白色固体
熔点：93.8-94.6℃
旋光：4.13(c 0.160,甲醇)
IRνmax3445,2943,1166,1452,1229,1003,675cm-1；
HRMS(ESI,m/z):[M+H]+[C30H39O6]+计算值495.2741,测试值495.2669.
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.15(d,J＝3.5Hz,1H,H-13a),5.53(d,J＝10.0Hz,1H,H-6),5.43(d,J＝3.5Hz,1H,H-13b),5.30(s,1H,-OH),3.75(dd,J＝10.5,10.5Hz,1H,H-6′),3.06-3.05(m,1H,H-2),2.83-2.82(m,1H,H-7),2.74(s,1H,-OH),2.66-2.64(m,1H,H-5′),2.40-2.35(m,2H,H-2′a,H-7),2.22-2.11(m,7H,H-2′b,H-9′a,H-9′b,H-13′a,H-8′a,H-8a,H-9a),1.86-1.73(m,5H,H-3′a,H-3′b,H-8′B,H-8b,H-9b),1.57(s,3H,H-14′),1.56-1.55(s,1H,H-3a),1.52-1.51(H-13′b),1.47(s,3H,H-15),1.41(s,3H,H-14),1.39-1.35(m,1H,H-3b)1.29(s,3H,H-15′)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ180.3(C-12′),170.2(C-12),151.0(C-1),145.2(C-2),140.2(C-11),132.8(C-1′),131.7(C-10′),119.0(C-13),83.7(C-6),81.2(C-6′),80.8(C-4′),72.7(C-10),60.6(C-4),58.3(C-5′),56.2(C-11′),53.9(C-3),51.7(C-7′),47.0(C-7),42.9(C-2),38.8(C-9),38.5(C-3′),35.3(C-2′),34.9(C-13′),29.9(C-9′),27.4(C-14),25.3(C-8′),23.6(C-8′),23.5(C-14′),23.3(C-15′),17.5(C-15).
实施例4
愈创木烷倍半萜多聚体3(化合物3)的制备。
室温下，将双烯体(58mg,0.20mmol)和lavandiolide I(118mg,0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷，减压浓缩除去溶剂后在50℃下无溶剂反应60h。将产物溶于5mL甲醇，向其中加入62μL碘甲烷(1mmol)，搅拌过夜后减压浓缩除去溶剂，加入5mL10％NaHCO3和5mL乙酸乙酯，将混合物转移到分液漏斗中，混合直至固体完全溶解。分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取(2×5mL)，合并有机相，减压浓缩除去溶液，粗产物经硅胶柱层析分离(乙酸乙酯-石油醚,40:60)得到化合物3(109mg，收率74％)。
化合物3
分子式：C45H54O9
分子量：838.92
性状：白色固体
熔点：137.9-139.2℃
旋光：α]D 24 66.93(c 0.150,甲醇)
IRνmax 3468,2939,1165,1452,1231,969,811cm-1；
HRMS(ESI,m/z):[M+HCOO]-calcd for[C46H55O11]-783.3750,found783.3697.
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.13(d,J＝3.5Hz,1H,H-13a),5.54-5.53(m,1H,H-3″),5.51(d,J＝10.0Hz,1H,H-6),5.42(d,J＝3.5Hz,1H,H-13b),5.38(d,J＝10.0Hz,1H,H-6′),3.97(dd,J＝10.0,10.0Hz,1H,H-6″),3.03-3.00(m,2H,H-2,H-2′),2.75-2.71(m,1H,H-2″a),2.59-2.54(m,1H,H-7′),2.37(brs,1H,-OH),2.30(dd,J＝12.5,3.5Hz,1H,H-13′a),2.18(dd,J＝12.5,3.5Hz,1H,H-13″a),2.14-2.07(m,3H,H-2″b,H-8a,H-9″a),2.01-1.95(m,3H,H-9″b,H-9′a,H-9a),1.92-1.87(m,5H,H-7″,H-8′a,H-15″),1.84-1.64(m,4H,H-8b,H-9b,H-8′b,H-9′b),1.60-1.55(m,2H,H-8″a,H-8″b),1.51-1.40(m,7H,H-13″b,H-3′b,H-13′b,H-3b,H-15′),1.39-1.26(m,14H,H-14″,H-14′,H-14,H-15,H-3b,H-3′b)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ181.3(C-12″),181.2(C-12′),170.3(C-12),151.4(C-1′),151.1(C-1),144.6(C-5),144.4(C-5′),140.8(C-4″),140.1(C-11),125.2(C-3″),119.0(C-13),84.1(C-6),81.5(C-6′),80.1(C-6″),72.4(C-1″′),72.3(C-10′),72.1(C-10),62.1(C-10″),60.5(C-4),60.4(C-4′),56.2(C-11′),55.6(C-11″),53.4(C-3),53.3(C-3′),52.6(C-5″),52.4(C-7″),47.0(C-7′),46.8(C-7),43.0(C-2),42.5(C-2′),39.5(C-9),39.2(C-2″),38.5(C-9′),35.1(C-13′),34.7(C-13″),32.8(C-9″),27.8(C-14),27.2(C-14′),23.9(C-8),22.6(C-14″),22.1(C-8′),20.9(C-8″),18.6(C-15″),17.6(C-15),17.4(C-15′).
实施例5
愈创木烷倍半萜多聚体4(化合物4)的制备。
室温下，将双烯体III(29mg,0.10mmol)和化合物3(88.6mg,0.12mmol)溶于2mL二氯甲烷，减压浓缩除去溶剂后在50℃下无溶剂反应60h。将产物溶于5mL甲醇，向其中加入31μL碘甲烷(0.5mmol)，搅拌过夜后减压浓缩除去溶剂，加入5mL10％NaHCO3和5mL乙酸乙酯，将混合物转移到分液漏斗中，混合直至固体完全溶解。分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取(2×5mL)，合并有机相，减压浓缩除去溶液，粗产物经硅胶柱层析(乙酸乙酯-石油醚,50:50)分离得到化合物4(54mg，收率55％)。
化合物4
分子式：C60H72O12
分子量：985.22
性状：白色固体
熔点：157.7-158.4℃
旋光：α]D 24 91.23(c 0.171,甲醇)
IRνmax 3468,2965,1760,1454,1164,1087,739cm-1
HRMS(ESI,m/z):[M+H-H2O]+calcd for[C60H71O11]-967.4996,found967.4965
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.14(d,J＝3.5Hz,1H,H-13a),5.55-5.54(m,1H,H-3″′),5.53(d,J＝11.0Hz,1H,H-6),5.43(d,J＝3.5Hz,1H,H-13b),5.37(d,J＝10.5Hz,2H,H-6′,H-6″),3.97(dd,J＝10.0,10.0Hz,1H,H-6″′),3.03-3.00(m,3H,H-2,H-2′,H-2″),2.80-2.72(m,3-H,H-7,H-2″′a,H-5″′),2.60-2.52(m,2H,H-7′,H-7″),2.40(brs,1H,-OH),2.32-2.26(m,3H,H-13′a,H-13″a,H-13″′a),2.18-2.05(m,3H,H-2″′b,H-9″′b,H-8a),2.02-1.96(m,4H,H-9″′b,H-9″a,H-9′a,H-9a),1.93-1.82(m,7H,H-7′,H-15″′,H-8″a,H-8′a,H-8b),1.78-1.63(m,5H,H-9″b,H-8″b,H-9″b,H-8′b,H-9′b,H-9b),1.60-1.40(m,11H,H-8″′a,H-8″′b,H-13″′b,H-3″a,H-13″b,H-3′a,H-13′b,H-3a,H-15″),1.39-1.27(m,21H,H-14″′,H-14″,H-14′,H-14,H-15,H-15′,H-3b,H-3′b,H-3″b)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ181.4(C-12″′),181.2(C-12″),181.2(C-12′),170.3(C-12),151.9(C-1″),151.4(C-1′),150.8(C-1),144.9(C-5),144.4(C-5′),143.8(C-5″),140.8(C-4″′),140.1(C-11),125.3(C-3″′),119.0(C-13),84.1(C-6),81.6(C-6″),81.6(C-6′),80.1(C-6″′),72.4(C-10″),72.3(C-10′),72.2(C-10),72.2(C-1″′),62.1(C-10″′),60.6(C-4″),60.6(C-4′),60.4(C-4),56.2(C-11″′),55.9(C-11″),55.6(C-11′),53.4(C-3),53.3(C-3′),52.9(C-3″),52.6(C-7″′),52.5(C-5″′),47.3(C-7″),47.0(C-7′),46.9(C-7),43.1(C-2),42.8(C-2′),42.5(C-2″),39.5(C-9″),39.4(C-9′),39.2(C-2″′),38.6(C-9),35.1(C-13″′),34.9(C-13″),34.7(C-13),32.9(C-9″′),28.0(C-14″),24.0(C-8),22.6(C-14″′),22.2(C-8″),21.6(C-8′),20.9(C-8″′),18.6(C-15″′),17.7(C-15″),17.6(C-15′),17.4(C-15).
实施例6
本发明提供的愈创木烷倍半萜多聚体1-4(化合物1-4)对肝癌细胞株的细胞毒活性。
1.材料和方法
1.1材料
肝癌细胞株(HepG2,Huh7和SK-HEP-1)购自上海纪宁生物科技有限公司；培养基(Dulbecco's Modified Eagle Medium,DMEM)购自Thermo Fisher Scientific(苏州，中国)；血清(fetal bovine serum,FBS)购自Life Technologies(NY,USA)；RPMI-1640购自ThermoFisher Biochemical Products(北京，中国)。
1.2仪器
Flex Station 3台式多功能酶标仪(Bio-RAD 680,美国)；分析天平(AG135,Metler Toledo，中国)；恒温箱(DHP-9082,上海)。
1.3实验过程
1).取对数期生长的肝癌细胞，弃去旧培养基，用PBS清洗两遍，弃去PBS；
2).用0.25％的胰蛋白酶消化细胞，在显微镜下观察到细胞轮廓加深并有变圆趋势时，迅速吸去胰蛋白酶；
3)用含10％FBS的DMEM完全培养基终止消化并重悬细胞，取10μL细胞悬液，用细胞计数仪计数，并用培养基调整细胞浓度至1×104/mL，接种在96孔板上，每孔加入100μL细胞悬液，在37℃，5％CO2的培养箱中孵育24h，使细胞贴壁；
4).吸去培养基，将稀释好的样品加入板中，每孔加入100μL，每个浓度设置3个复孔，培养箱中继续孵育48h；
5).吸去培养基，加入配好的MTT溶液(1mg/mL)，每孔加入100μL，培养箱中孵育4h；
6).吸去MTT溶液，加入二甲亚砜，每孔加入100μL，培养箱中孵育10min；
7).使用酶标仪在490nm波长下测量吸光度值，通过公式：抑制率＝(阴性－实验组)/(阴性－空白组)×100％计算细胞抑制率，并用统计软件GraphPad prism 5计算IC50，实验重复3次。
2.结果
化合物1-4对三株肝癌细胞(HepG2,Huh7和SK-HEP-1)的细胞毒活性如表3所示，所有化合物均对三株肝癌细胞具有一定的细胞毒活性，IC50值在6.2～40.4μM之间。其中三聚体类化合物3活性最好，对三株肝癌细胞的IC50值分别为6.2,6.8,7.2μM，优于阳性药物索拉菲尼。
表3.化合物1-4对三株肝癌细胞的抑制活性结果
3.结论
以上结果表明新的愈创木烷倍半萜多聚体1-4对三株肝癌细胞(HepG2,Huh7和SK-HEP-1)均具有细胞毒性，可作为药物用于治疗或预防肝癌疾病或相关的疾病。
制剂实施例：
在以下制剂实施例中，选择常规试剂，并按照现有常规方法进行制剂制备，本应用例仅体现本发明所述愈创木烷倍半萜多聚体1-4中的至少一种能够制备成不同的制剂，对具体试剂和操作不作具体限定：
1.将愈创木烷倍半萜多聚体1-4中的至少一种或任意组合，用二甲亚砜溶解后，按常规方法加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液，所述注射液的浓度为0.5～5mg/mL。
2.将愈创木烷倍半萜多聚体1-4中的至少一种或任意组合，用二甲亚砜溶解后，将其溶于无菌注射用水中，搅拌使其溶解，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于安瓿中，低温冷冻干燥后无菌熔封，得粉针剂。
3.将愈创木烷倍半萜多聚体1-4中的至少一种或任意组合，按其与赋形剂质量比为9:1的比例加入赋形剂，制成粉剂。
4.将愈创木烷倍半萜多聚体1-4中的至少一种或任意组合，按其与赋形剂质量比为5:1的比例加入赋形剂，制粒压片。
5.将愈创木烷倍半萜多聚体1-4中的至少一种或任意组合，按常规口服液制备方法制成口服液。
6.将愈创木烷倍半萜多聚体1-4中的至少一种或任意组合，按其与赋形剂质量比为5:1的比例加入赋形剂，制成胶囊。
7.将愈创木烷倍半萜多聚体1-4中的至少一种或任意组合，按其与赋形剂质量比为5:1的比例加入赋形剂，制成颗粒剂。
由以上实施例可知，本发明提供了一类愈创木烷倍半萜多聚体，它们的制备方法和应用，药物组合物及其应用。本发明提供的新的愈创木烷倍半萜多聚体1-4对肝癌细胞具有细胞毒活性，能够与可药用载体或赋型剂组成药物组合物，能够用于制备抗肝癌药物。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进，这些改进也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.结构式(I)所示的愈创木烷倍半萜多聚体1-4，
2.权利要求1所述的愈创木烷倍半萜多聚体的制备方法，该方法包括以二甲胺基-阿格拉宾为原料，经环氧异构化得到愈创木烷双烯体，双烯体与亲双烯体即含有α，β-不饱和-γ-内酯片段的倍半萜或其多聚体经Diels–Alder反应/脱二甲胺基制备得到愈创木烷倍半萜多聚体，所述作为亲双烯体的愈创木烷倍半萜为ludartin、含笑内酯、含有α，β不饱和-γ-内酯片段的愈创木烷倍半萜二聚体、三聚体，
3.根据权利要求2所述的愈创木烷倍半萜多聚体的制备方法，其特征在于所述的制备方法主要包括如下两个关键反应步骤：
反应步骤一：二甲胺基-阿格拉宾在适当的反应溶剂中与适当的异构化试剂作用反应得到双烯体，所述异构化试剂为2,2,6,6-四甲基哌啶基二乙基铝或二环基胺基铝或二异丙胺基二乙基铝或2,2,6,6-四甲基哌啶基二甲基铝，反应溶剂为甲苯或苯或乙醚或四氢呋喃；或者异构化试剂为一氯二茂钛，反应溶剂为甲苯或苯或乙醚或四氢呋喃；
反应步骤二：双烯体在适当的条件下与含有α，β-不饱和-γ-内酯片段的亲双烯体经Diels–Alder反应/脱二甲胺基即制备得到倍半萜多聚体，所述Diels–Alder反应适当的条件为苯、甲苯、二甲苯、四氢呋喃为溶剂，双烯体与亲双烯体在加热条件下反应；或者2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚为抗氧化剂，苯、甲苯、二甲苯、四氢呋喃为溶剂，双烯体与亲双烯体在加热条件下反应；或者双烯体与亲双烯在无溶剂条件下室温反应；或者双烯体与亲双烯在无溶剂条件下加热反应。
4.根据权利要求2所述的愈创木烷倍半萜多聚体的制备方法，其特征在于，以ludartin为亲双烯体经Diels-Alder反应制备化合物1。
5.根据权利要求2所述的愈创木烷倍半萜多聚体的制备方法，其特征在于，以含笑内酯为亲双烯体经Diels-Alder反应制备化合物2。
6.根据权利要求2所述的愈创木烷倍半萜多聚体的制备方法，其特征在于，以倍半萜二聚体lavandiolide I为亲双烯体经Diels-Alder反应制备倍半萜三聚体3。
7.根据权利要求2所述的愈创木烷倍半萜多聚体的制备方法，其特征在于，以倍半萜三聚体3为亲双烯体经Diels-Alder反应制备倍半萜四聚体4。
8.权利要求1所述的愈创木烷倍半萜多聚体1-4在制备治疗或预防肝癌的药物中的应用。
9.包含权利要求1所述的愈创木烷倍半萜多聚体1-4的至少一种或任意组合和药学上可接受的载体或赋型剂的药物组合物。
10.权利要求9所述的药物组合物在制备治疗或预防肝癌的药物中的应用。
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