CN113784735A

CN113784735A - 诊断肺癌的方法

Info

Publication number: CN113784735A
Application number: CN202080021597.1A
Authority: CN
Inventors: 劳拉·苏切克; 玛丽-伊芙·博利厄
Original assignee: Peptomic; Institucio Catalana de Recerca i Estudis Avancats ICREA; Fundacio Privada Institut dInvestigacio Oncologica Vall dHebron VHIO
Current assignee: Peptomic; Institucio Catalana de Recerca i Estudis Avancats ICREA; Fundacio Privada Institut dInvestigacio Oncologica Vall dHebron VHIO
Priority date: 2019-03-19
Filing date: 2020-03-19
Publication date: 2021-12-10
Also published as: US20230055103A1; BR112021018489A2; SG11202109065VA; EP3941533A1; TWI829893B; KR20220012225A; WO2020188023A1; IL286452A; MX2021011319A; ZA202107946B; EA202192551A1; JP2022526198A; TW202043254A; AU2020242967A1; CA3133041A1

Abstract

本发明涉及一种包含Omomyc或其功能等效变体和可检测标记物的缀合物用于通过肺部施用该缀合物来检测肺癌的诊断用途。本发明还涉及使用所述缀合物检测肺癌或对肺癌成像的方法、包括所述缀合物的试剂盒以及包括造影剂或显像剂的缀合物。

Description

诊断肺癌的方法

技术领域

本发明包括在诊断领域内，更具体地，包括在借助于一种特异性地积累在增殖细胞中的可示踪剂的肺癌体内诊断领域内。

背景技术

肺癌是全世界以及西班牙国内的高致死率的癌症之一，并且这种趋势是由于没有症状和缺乏具有高灵敏性的早期诊断方法导致的。

大多数患者在诊断之前已进入晚期，并且因此未能在早期接受治疗。两种常见的肺癌类型是小细胞肺癌(SCLC)(16.8％)和非小细胞肺癌(NSCLC)(80.4％)。非小细胞肺癌主要包括鳞状细胞癌、肺腺癌和大细胞肺癌，其中肺腺癌是最常见的肺癌(30％至65％)。肺癌的病因尚不清楚。

当前的医学研究集中于肺癌早期的诊断和治疗。从统计上讲，非小细胞肺癌早期患者的5年生存率高达80％，而非小细胞肺癌总的5年生存率仅为15％。因此，诊断和治疗肺癌早期很重要。

当前诊断肺癌的方法包括痰液细胞学检查、影像学检查、内窥镜检查和活检。痰液细胞学检查的灵敏度较低。通常用于肺癌的影像学检查方法包括X射线、CT、MRI(磁共振成像)、超声、核素成像、PET-CT(正电子发射断层扫描/计算机断层扫描)等。影像学检查方法不够灵敏，并且通常仅可见尺寸大于1cm的病灶。在内窥镜检查中，仅当肿瘤位于内窥镜可接近的气道中时，肿瘤才可见。低剂量胸部CT尽管是最公认的诊断方法，但灵敏度有限。像X射线检查一样，CT涉及电离辐射，其本身会导致癌症。

未显示典型症状的早期患者的诊断率仅为15％。传统的用于筛查肺癌的方法对于高风险人群是不足的，因为它们的特异性和灵敏度有限，繁重且成本高。这些传统方法不能显著地降低肺癌的死亡率。因此，需要用于筛查肺癌的替代或补充方法，以提高对早期肺癌的诊断率，并减少外科手术的次数以降低并发症的风险。

发明内容

在第一方面，本发明涉及一种缀合物，包括：

i)包含序列SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体，以及

ii)可检测标记物，

所述缀合物用于通过肺部施用所述缀合物来“体内(in vivo)”诊断有此需要的受试者的肺癌的方法。

在第二方面，本发明涉及一种用于检测受试者中肺癌细胞或对受试者中肺癌细胞成像的方法，包括：

i)鼻内施用缀合物，该缀合物包括：包含序列SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体以及可检测标记物；

ii)等待足够的时间以使所述缀合物进入增殖的肺细胞；以及

iii)通过将成像技术应用于受试者以检测所述缀合物在所述受试者中的积累部位来检测所述增殖的肺细胞，从而检测增殖部位或对增殖部位成像。

在第三方面，本发明涉及一种用于诊断肺癌的试剂盒，包括：

i)缀合物，包括：包含序列SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体、以及可检测标记物，

ii)用于鼻滴注或鼻吸入第i)项的所述缀合物的装置；以及

iii)用于包装第i)项和第ii)项的工具。

在第四方面，本发明涉及一种根据本发明第三方面的试剂盒在诊断肺癌或监测肺癌的进展或监测治疗效果中的用途。

在第五方面，本发明涉及一种缀合物，包括：

i)包含序列SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体，以及

ii)可检测标记物，选自由造影剂或显像剂组成的组。

附图说明

图1：鼻内施用后，Omomyc在KRas^G12D驱动的肺腺癌小鼠模型的肺中的分布。(A)在健康小鼠的肺中检测Omomyc-DFO-⁸⁹Zr的定量随着时间的变化，表示为注射剂量的百分比。示出了均值、S.D.和动物的数量。(B)来自用Omomyc小型(mini)蛋白处理的小鼠的肺组织的免疫荧光。特异性抗Omomyc抗体证实在施用4小时后肺细胞中Omomyc的存在。箭头表示核染色阳性。比例尺为10μm。右图示出了由白色虚线包围的区域的更高放大倍数。数字对应于由ImageJ计算的校正后的总细胞荧光。(C)鼻内施用2.37mg/kg Omomyc-DFO-⁸⁹Zr后24小时，荷瘤小鼠肺部的microPET/CT成像的3D渲染图。CT数据以灰度示出，并且Omomyc-DFO-⁸⁹ZrmicroPET数据以比色刻度尺示出(分析了n＝2只小鼠)。对于Omomyc-DFO-⁸⁹Zr摄取，数字对应于鼻内剂量(ID)的百分比/g。

图2：生物分布和药代动力学研究。将2mg/kg的Omomyc-DFO-⁸⁹Zr鼻内施用至健康对照组和荷瘤Kras^G12D小鼠。(A)鼻内施用于荷瘤小鼠24小时后获得的肺部影像。对于ID/Omomyc-DFO-⁸⁹Zr摄取，数字对应于ID的百分比/g。(B)鼻内施用于健康对照组24小时后获得的肺部影像。(C)在对已患有肺腺癌的小鼠鼻内施用后，每个时间点的Omomyc-DFO-⁸⁹Zr放射性离体(ex vivo)定量的生物分布。

图3：(A)用OmomycCPP-AF660处理(鼻内施用后4h)(1.4mg/kg，在30μL载体10mM乙酸钠中(pH 6.5))的肺部的离体荧光强度。比例尺为1cm。(B)单次施用OmomycCPP-AF660后24小时，该多肽在肺肿瘤中仍可检测到(FLI，荧光强度)。底图示出了相同的肺，其中肉眼可见的浅表肿瘤用圆圈标出。比例尺为1cm。

图4.静脉内施用2.68mg/kg的Omomyc-DFO-⁸⁹Zr后72小时的放射性离体定量的生物分布。注射剂量的百分比示出为每克指示组织。

具体实施方式

本发明涉及提供用于诊断和/或监测肺癌的新试剂。

除非另有定义，否则本文使用的所有技术术语与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同。

在本发明的一个方面的上下文中公开的所有实施方案也适用于本发明的其他方面。

本发明的缀合物的诊断用途

在此和本发明的每个其他方面提供的定义同样适用于整个发明。

如实施例中所公开，本发明的发明人已经证明，包含SEQ ID NO：1的多肽以及可检测标记物例如荧光标记物(AF660)或放射性同位素标记物(⁸⁹Zr)的缀合物当通过鼻内途径在体内施用时可以用作肺肿瘤示踪剂，因为它特异性地积累至癌细胞中，从而能够区分健康细胞和增殖细胞。出人意料的是，本发明的缀合物在肿瘤中积累达24小时，但却后从正常组织清除。

因此，在第一方面，本发明涉及一种缀合物，包括：

i)包含序列SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体，以及

ii)可检测标记物，

其用于通过肺部施用所述缀合物来“体内”诊断有此需要的受试者的肺癌的方法。

在另一方面，本发明涉及一种缀合物用于通过肺部施用所述缀合物来诊断或检测受试者的肺癌的用途，所述缀合物包括：

i)包含序列SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体，以及

ii)可检测标记物。

如本文所用，术语“缀合物”是指结合在一起以使每种化合物的功能保留在缀合物中的两种或更多种化合物。两种化合物的键合可以是物理或化学相互作用，优选是化学相互作用，更优选是离子键或共价键；更优选共价键。

术语“多肽”和“肽”在本文可互换使用，是指任何长度的氨基酸的聚合物。本发明的多肽可以包含修饰的氨基酸，并且可以被非氨基酸中断。在一个优选的实施方案中，该多肽仅由氨基酸形成。优选地，形成缀合物的(i)项的多肽的长度为80至500个氨基酸，更优选为80至300个氨基酸，更优选为80至250个氨基酸，更优选为80至150个，甚至更优选为80至130个氨基酸，优选90至130个氨基酸，优选不超过125个氨基酸，更优选不超过100个氨基酸。在一个优选的实施方案中，多肽的长度为90至98个氨基酸，优选为90至95个氨基酸，更优选为91个氨基酸。

术语“氨基酸”是指天然存在的氨基酸和非天然(合成)氨基酸，以及作用方式类似于天然存在的氨基酸的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。此外，术语“氨基酸”包括D-氨基酸和L-氨基酸(立体异构体)，优选L-氨基酸。

术语“天然氨基酸”或“天然存在的氨基酸”包括20种天然存在的氨基酸；通常在体内翻译后修饰的那些氨基酸，包括例如羟脯氨酸、磷酸丝氨酸和磷酸苏氨酸；以及其他不常见的氨基酸，包括但不限于2-氨基己二酸、羟基赖氨酸、异锁链素、正缬氨酸、正亮氨酸和鸟氨酸。

如本文所用，术语“非天然氨基酸”或“合成氨基酸”是指在位置“a”处被胺基取代并且在结构上与天然氨基酸相关的羧酸或其衍生物。修饰的或不常见的氨基酸的说明性、非限制性实例包括2-氨基己二酸、3-氨基己二酸、β-丙氨酸、2-氨基丁酸、4-氨基丁酸、6-氨基己酸、2-氨基庚酸、2-氨基异丁酸、3-氨基异丁酸、2-氨基庚二酸、2,4-二氨基丁酸、锁链素、2,2'-二氨基庚二酸、2,3-二氨基丙酸、N-乙基甘氨酸、N-乙基天冬酰胺、羟基赖氨酸、别羟基赖氨酸、3-羟基脯氨酸、4-羟基脯氨酸、异锁链素、别异亮氨酸、N-甲基甘氨酸、N-甲基异亮氨酸、6-N-甲基赖氨酸、N-甲基缬氨酸、正缬氨酸、正亮氨酸、鸟氨酸等。

本发明的多肽还可以包含非氨基酸部分，例如与肽连接的疏水部分(各种直链、带支链的、环、多环或杂环的烃和烃衍生物)；连接到化合物末端以减少降解的各种保护性基团。1991年的Green和Wuts的"Protecting Groups in Organic Synthesis"，John Wileyand Sons,第5章和第7章中描述了合适的保护性官能团。

可以包括存在于多肽中的化学(非氨基酸)基团以改善各种生理特性，诸如，降低的降解或清除率、降低的各种细胞泵的排斥力、改善各种施用方式、提高的特异性、增加的亲和力、提高的稳定性、生物利用度、溶解度、降低的毒性等。

“模拟物”包括模拟肽结构的化学结构并保留肽结构的功能特性的分子。设计肽类似物、衍生物和模拟物的方法是本领域已知的。

在一个实施方案中，缀合物的组分(i)是由序列SEQ ID NO：1组成的多肽或由SEQID NO：1的功能等效变体组成的多肽，优选地是由序列SEQ ID NO：1组成的多肽。SEQ IDNO：1对应于

TEENVKRRTHNVLERQRRNELKRSFFALRDQIPELENNEKAPKVVILKKATAYILSVQAETQKLISEIDLLRKQNEQLKHKLEQLRNSCA(SEQ ID NO:1)

序列SEQ ID NO：1的多肽对应于Omomyc蛋白序列。如本文所用，术语“Omomyc”是指由带有E61T、E68I、R74Q和R75N突变的Myc蛋白的bHLHZip结构域的突变形式组成的多肽(其中，突变位置的编号相对于与NCBI数据库中的登记号NP_002458所定义的多肽(2015年3月15日发布)的氨基酸365-454相对应的Myc区的序列)。下面显示了NCBI数据库中以登录号NP_002458提供的c-Myc的序列(SEQ ID NO：2)，其中Omomyc衍生的区域以下划线示出：

Omomyc还包含c-Myc的M2结构域，具有序列RQRRNELKRSF(SEQ ID NO：3)(参见Dangand Lee,Mol.Cell.Biol.,1988,8:4048-4054)(上面双下划线部分)，并且其对应于核定位信号。

Omomyc的特征在于，它显示出与所有三种致癌Myc蛋白(c-Myc、N-Myc和L-Myc)的增强的二聚能力。Omomyc可以衍生自本领域已知的任何Myc蛋白的bHLHZip结构域，前提是保留导致肿瘤抑制作用的突变。因此，可用于本发明的Omomyc可以来源于任何哺乳动物，包括但不限于家畜和农场动物(牛、马、猪、绵羊、山羊、狗、猫或啮齿动物)，灵长类动物和人类。优选地，Omomyc蛋白来源于人Myc蛋白(登录号NP_002458，2019年3月12日发布)。

如本文所用，术语“Myc”是指包括c-Myc、N-Myc和L-Myc的转录因子家族。Myc蛋白通过结合共有序列CACGTG(增强子盒序列或E盒并募集组蛋白乙酰转移酶或HAT)来启动许多基因的表达。但是，Myc也可以作为转录阻遏物。通过结合Miz-1转录因子并置换p300辅助激活剂，它可以抑制Miz-1靶基因的表达。Myc在控制DNA复制中也具有直接作用。

Myc b-HLH-LZ或Myc基本区螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链结构域是指决定Myc与Max蛋白二聚并与Myc靶基因结合的区域。该区域对应于人Myc的氨基酸365-454，并且其特征是通过环连接的两个α螺旋(Nair,S.K.,&Burley,S.K.,2003,Cell,112:193–205)。

在优选的实施方案中，缀合物的组分(i)是包含由以下所示的SEQ ID NO：4的多肽、由其组成的多肽或基本上由其组成的多肽：

在本文中，“基本上由……组成”是指指定分子将不包含任何会改变SEQ ID NO：4的活性的其他序列。

优选地，该多肽由SEQ ID NO：4组成。

术语“功能等效变体”是指相对于SEQ ID NO：1的多肽由一个或多个氨基酸的插入或添加和/或由一个或多个氨基酸的缺失和/或由于一个或多个氨基酸的保守性置换而得到的任何多肽，和/或由SEQ ID NO：1的多肽的化学修饰而得到的任何多肽，并且其基本上保留了SEQ ID NO：1的肿瘤示踪活性。优选地，功能等效变体是指相对于SEQ ID NO:1的多肽由一个或多个氨基酸的插入或添加和/或由一个或多个氨基酸的缺失和/或由一个或多个氨基酸的保守性置换而得到的任何多肽，并且其基本上保留了SEQ ID NO：1的肿瘤示踪活性；更优选地是指相对于SEQ ID NO：1的多肽由一个或多个氨基酸的插入或添加而得到的任何多肽。

技术人员将理解，肿瘤示踪活性的保留需要变体能够穿透到细胞中。因此，Omomyc的功能等效变体能够跨细胞膜转位。在将Omomyc的功能等效变体与细胞接触后，其能够转导所述细胞。应当理解，Omomyc的功能等效变体包含在天然Omomyc中发现的蛋白转导结构域或另一功能性蛋白转导结构域。因此，在优选的实施方案中，Omomyc的功能等效变体能够跨细胞膜转位。

在优选的实施方案中，如果多肽能够以SEQ ID NO：1的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％的效率转导靶细胞，则被认为是SEQ ID NO：1的功能等效变体。

用于确定多肽是否为SEQ ID NO：1的功能等效变体(就其跨细胞膜转位的能力而言)的合适测定包括用对该多肽特异的试剂标记细胞。本发明的多肽的检测可以通过使用Omomyc特异性抗体或用合适的荧光团标记的Omomyc，由共聚焦显微术、流式细胞术、或荧光显微术测定来进行。该检测还可以通过细胞分数放射自显影测定进行，以识别放射性标记的Omomyc。

另外，SEQ ID NO：1的功能等效变体也能够跨核被膜转位。在一个实施方案中，Omomyc的功能等效变体需要能够跨核被膜转位。在另一个实施方案中，Omomyc的功能等效变体不需要能够跨核被膜转位。

在优选的实施方案中，如果多肽能够以SEQ ID NO：1的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％的效率转位到靶肿瘤细胞的核中，则被认为是SEQ ID NO：1的功能等效变体。

用于确定多肽是否为功能等效变体(就其转位至核的能力而言)的合适测定包括用对上述公开的多肽特异的试剂和特异性标记细胞核的染料(如DAPI或Hoechst染料)对细胞进行双重标记。本发明的多肽的检测可以通过共聚焦显微术、流式细胞术、或通过荧光显微术来进行。

保持肿瘤示踪活性可能需要该变体能够与Myc和/或其专性配偶体(partner)p21/p22Max二聚并抑制Myc活性。在一个实施方案中，Omomyc的功能等效变体不需要与Myc和/或其专性配偶体p21/p22Max二聚并抑制Myc活性以保持肿瘤示踪活性。在另一个实施方案中，Omomyc的功能等效变体需要该变体能够与Myc和/或其专性配偶体p21/p22Max二聚并抑制Myc活性。

在一些实施方案中，本发明的多肽的功能等效变体的同源二聚化比Omomyc少，或不会因为二硫桥键的形成而被迫形成同源二聚体。

如本文所用，“较少的同源二聚化”涉及形成本发明的多肽的专性同源二聚体的能力较低，即使在还原条件下。在一个优选的实施方案中，该能力比形成Omomyc的同源二聚体的能力低至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％。如本文所用，还原条件涉及还原剂的存在，该还原剂是在氧化还原化学反应中向另一化学物质提供电子的化合物。还原剂的说明性的非限制性实例是DTT(二硫苏糖醇)、b-巯基乙醇或TCEP(三(2-羧乙基)膦)。同源二聚体的量在体外(invitro)可能是相同的，并且功能等效变体和Omomyc之间的差异仅存在于有异源二聚体配偶体的细胞中，其中不存在二硫键使得形成异源二聚体的可能性更高。

几种测定法可以用于确定肽的同源二聚化，例如用圆二色谱监测热变性的非限制性实例，因此可以通过折叠(folding)和热稳定性定量来检测二聚化。

合适的功能等效变体包括基本上由SEQ ID NO：1的多肽组成的多肽。在本文中，“基本上由……组成”是指指定分子将不包含会改变SEQ ID NO：1的活性的任何其他序列。

在一个优选的实施方案中，SEQ ID NO：1的功能等效变体是由相对于SEQ ID NO：1的多肽插入或添加一个或多个氨基酸而产生的多肽。在一个实施方案中，功能等效变体是由插入少于10个氨基酸、更优选少于5个氨基酸、更优选由插入一个氨基酸而产生的。在一个优选的实施方案中，是由插入一个氨基酸即蛋氨酸而产生的。

在另一个实施方案中，SEQ ID NO：1的功能等效变体是由相对于SEQ ID NO：1的多肽使一个或多个氨基酸缺失而产生的多肽。在一个实施方案中，功能等效变体是由使少于10个氨基酸、更优选少于5个氨基酸缺失而产生，更优选由一个氨基酸缺失而产生。

靶向肽的合适的功能变体是显示出相对于SEQ ID NO：1的肽显示出约大于25％的氨基酸序列一致性的一致性程度的那些变体，例如25％、30％、40％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％。使用本领域技术人员众所周知的计算机算法和方法确定两种多肽之间的一致性程度。优选使用如先前所述的BLASTP算法来确定两个氨基酸序列之间的一致性[BLAST Manual,Altschul,S.,et al.,NCBI NLM NIH Bethesda,Md.20894,Altschul,S.,et al.,J.Mol.Biol.1990；215:403-410]。在一个优选的实施方案中，通过SEQ ID NO：1的多肽的整个长度或其变体或两者的整个长度确定序列一致性。

本发明的多肽的功能等效变体还可以包括翻译后修饰，例如糖基化、乙酰化、异戊二烯基化、肉豆蔻酰基化、蛋白水解处理等。

靶向肽的合适的功能变体是其中本发明的多肽中的一个或多个位置含有保守性置换上述序列中存在的氨基酸的氨基酸。“保守性氨基酸置换”是由一种氨基酸替换为具有相似结构和/或化学性质的另一种氨基酸产生的。例如，以下六组每一个均包含彼此为保守性置换的氨基酸：1)丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)；4)精氨酸(R)、赖氨酸(K)；5)异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、蛋氨酸(M)、缬氨酸(V)；和6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)。这样的保守性氨基酸置换的选择在本领域普通技术人员的技术范围内，并且由例如Dordo等人(J.Mol.Biol,1999,217；721-739)和Taylor等人(J.Theor.Biol.,1986,119:205-218)所描述。

应当理解，Omomyc的功能等效变体在与源自人c-Myc的Omomyc中发现的突变E61T、E68I、R74Q和R75N相对应的位置处包含突变。其中所述突变必须在功能等效变体中发生的位置可以通过不同Myc序列的多序列比对来确定，并且可以通过比对与源自人c-Myc的Omomyc序列中的位置61、68、74和75相对应的那些位置来确定。在一个实施方案中，Omomyc的功能等效变体在对应于源自人c-Myc的Omomyc中发现的突变E61T、E68I、R74Q和R75N的位置处包含突变。

在另一个实施方案中，Omomyc的功能等效变体在对应于Omomyc序列中E61、E68、R74和R75的位置处包含突变，其中E61已突变为E61A或E61S，E68已突变为E68L、E68M或E68V，R74已突变为R74N，并且R75已突变为R75Q。

多序列比对是成对序列比对的扩展，一次合并超过两个序列。多比对方法比对给定查询集中的所有序列。优选的多序列比对程序(及其算法)是ClustalW、Clusal2W或ClustalW XXL(参见Thompson et al.(1994)Nucleic Acids Res 22:4673-4680)。如本文所述，一旦比较(比对)了来自不同生物体的c-Myc序列和来自变体的序列，本领域技术人员可以容易地识别每个序列中与在Omomyc中发现的E61T、E68I、R74Q和R75N位置相对应的位置，并在Omomyc变体中引入与源自人的c-Myc的Omomyc中发现的E61T、E68I、R74Q和R75N突变相对应的突变。

在一个优选的实施方案中，SEQ ID NO：1的功能等效变体包括具有一个或多个、优选具有所有以下特征的那些序列：与Myc二聚并抑制其活性的能力，跨细胞膜转位，向核转位，无法形成同源二聚体或相比Omomyc形成同源二聚体的能力降低。

用于确定多肽是否可以被视为Omomyc的功能等效变体的合适测定包括但不限于：

-测量多肽与Max和Myc形成二聚复合体的能力的测定，例如如Soucek等人(Oncogene,1998,17:2463-2472)所述的基于报告基因的表达的测定以及PLA(蛋白质连接测定)或免疫共沉淀。

-测量多肽结合DNA内的Myc/Max识别位点(CACGTG位点)的能力的测定，例如Soucek等人(同上)描述的电泳迁移率测定(EMSA)。

-测量抑制Myc诱导的反式激活的能力的测定，如Soucek等人(同上)所述的基于在Myc/Max特异的DNA结合位点的控制下的报告基因的表达的测定。

-基于多肽抑制表达myc致癌基因的细胞生长的能力的测定，如Soucek等人(同上)所述。

-测量多肽增强myc诱导的细胞凋亡能力的测定，例如Soucek等人(Oncogene,1998:17,2463-2472)所述的测定。此外，可以使用本领域中通常已知的用于评估细胞凋亡的任何测定，例如Hoechst染色、碘化丙啶(PI)或膜联蛋白V染色、锥虫蓝、DNA梯化/片段化和TUNEL。

-使用Omomyc特异性抗体或用合适的荧光团标记的Omomyc进行流式细胞术或荧光显微术分析。

-细胞分数放射自显影测定可识别放射性标记的Omomyc。

在一个优选的实施方案中，如果多肽在一种或多种上述测定中显示出天然Omomyc的活性的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％的活性，则认为该多肽是Omomyc的功能等效变体。

在一个具体实施方案中，SEQ ID NO：1的多肽的功能等效变体包含SEQ ID NO：1的多肽，其中SEQ ID NO：1的位置89处的残基X不是半胱氨酸。优选地，SEQ ID NO：1的位置89处的残基X是脂族氨基酸、或硫代氨基酸、或二羧酸氨基酸或其酰胺、或具有两个碱性基团的氨基酸、或芳族氨基酸、或环状氨基酸、或羟基化氨基酸。氨基酸更优选地选自丝氨酸、苏氨酸和丙氨酸，优选地选自丝氨酸和丙氨酸。

下表中公开了SEQ ID NO：1的合适的功能等效变体，其在SEQ ID NO：1的位置89处具有的残基X不是半胱氨酸。

因此，在一个优选的实施方案中，SEQ ID NO：1的多肽的功能等效变体选自由SEQID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9和SEQ IDNO：10组成的组。

在一个具体的实施方案中，根据本发明所述之用途的缀合物另外包含促进细胞摄取包含SEQ ID NO：1的多肽或SEQ ID NO：1的多肽的功能等效变体的化学部分。

在另一个实施方案中，根据本发明所述之用途的缀合物不包含促进细胞摄取包含SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体的化学部分。

术语“化学部分”是指包含至少一个碳原子的任何化合物。化学部分的实例包括但不限于任何富含疏水性氨基酸和疏水性化学部分的肽链。

在优选的实施方案中，根据本发明的缀合物包含至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、或更多个促进细胞摄取多肽或所述多肽的功能等效变体的化学部分。

在一个实施方案中，促进多肽被细胞摄取的化学部分是脂质或脂肪酸。

脂肪酸通常是包含碳链且在该链的末端具有酸性部分(例如，羧酸)的分子。脂肪酸的碳链可以具有任何长度，但是，优选地，碳链的长度为至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、或更多个碳原子、以及其中可衍生的任何范围。在某些实施方案中，碳链的长度在脂肪酸的链部分中为4至18个碳原子。在某些实施方案中，脂肪酸碳链可以包含奇数个碳原子，然而，在某些实施方案中，链中偶数个碳原子可能是优选的。在其碳链中仅包含单键的脂肪酸称为饱和脂肪酸，而在其链中包含至少一个双键的脂肪酸称为不饱和脂肪酸。脂肪酸可以是带支链的，尽管在本发明的优选实施方案中，它是无支链的。具体的脂肪酸包括但不限于亚油酸、油酸、棕榈酸、亚麻酸、硬脂酸、月桂酸、肉豆蔻酸、花生酸、棕榈油酸、花生四烯酸。

在一个优选的实施方案中，促进细胞摄取包含SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体的化学部分是细胞穿透肽序列，在这种情况下，缀合物将包括融合蛋白，所述融合蛋白包括包含SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体和细胞穿透肽序列。

术语“融合蛋白”涉及通过基因技术产生的蛋白，其由两个或更多个衍生自不同蛋白的功能域组成。融合蛋白可以通过常规方式获得，例如，通过编码所述融合蛋白的核苷酸序列在合适的细胞中的基因表达。应当理解，细胞穿透肽是指与形成包含SEQ ID NO：1的多肽或SEQ ID NO：1的功能等效变体的一部分的细胞穿透肽不同的细胞穿透肽。

术语“细胞穿透肽序列”在本说明书中与“CPP”、“蛋白转导结构域”或“PTD”互换使用。它是指可变长度的指导蛋白质在细胞内的运输的肽链。向细胞内的递送过程通常通过内吞作用发生，但也可以通过直接的膜转位将肽内化到细胞中。CPP通常具有氨基酸组成，其包含较高相对丰度的带正电荷的氨基酸(如赖氨酸或精氨酸)，或具有包含极性/带电氨基酸和非极性疏水性氨基酸交替模式的序列。

可以用于本发明的CPP的实例包括但不限于在果蝇触角足蛋白中发现的CPP(RQIKIWFQNRRMKWKK，SEQ ID NO:13)；单纯疱疹病毒1(HSV-1)VP22 DNA结合蛋白中发现的CPP(DAATATRGRSAASRPTERPRAPARSASRPRRPVE，SEQ ID NO：14)；Bac-7的CPP(RRIRPRPPRLPRPRPRPLPLPFPRPG；SEQ ID NO：15)；由氨基酸49-57(RKKRRQRRR，SEQ ID NO：16)组成的HIV-1TAT蛋白的CPP；由氨基酸48-60(GRKKRRQRRRTPQ，SEQ ID NO：17)组成的HIV-1TAT蛋白的CPP；由氨基酸47-57(YGRKKRRQRRR；SEQ ID NO：18)组成的HIV-1TAT蛋白的CPP；S413-PV肽的CPP(ALWKTLLKKVLKAPKKKRKV；SEQ ID NO：19)；穿膜肽(penetratin)的CPP(RQIKWFQNRRMKWKK；SEQ ID NO：20)；SynB1的CPP(RGGRLSYSRRRFSTSTGR；SEQ ID NO：21)；SynB3的CPP(RRLSYSRRRF；SEQ ID NO：22)；PTD-4的CPP(PIRRRKKLRRLK；SEQ ID NO：23)；PTD-5的CPP(RRQRRTSKLMKR；SEQ ID NO：24)、FHV Coat-(35-49)的CPP(RRRRNRTRRNRRRVR；SEQ ID NO：25)；BMV Gag-(7-25)的CPP(KMTRAQRRAAARRNRWTAR；SEQ ID NO：26)；HTLV-IIRex-(4-16)的CPP(TRRQRTRRARRNR；SEQ ID NO：27)；D-Tat的CPP(GRKKRRQRRRPPQ；SEQ IDNO：28)；R9-Tat(GRRRRRRRRRPPQ；SEQ ID NO：29)的CPP；MAP(KLALKLALKLALALKLA；SEQ IDNO：30)的CPP；SBP的CPP(MGLGLHLLVLAAALQGAWSQPKKKRKV；SEQ ID NO：31)；FBP的CPP(GALFLGWLGAAGSTMGAWSQPKKKRKV；SEQ ID NO：32)；MPG的CPP(ac-GALFLGFLGAAGSTMGAWSQPKKKRKV-cya；SEQ ID NO：33)；MPG(ENLS)的CPP(ac-GALFLGFLGAAGSTMGAWSQPKSKRKV-cya；SEQ ID NO：34)；Pep-1的CPP(ac-KETWWETWWTEWSQPKKKRKRK-cya；SEQ ID NO：35)；Pep-2的CPP(ac-KETWFETWFTEWSQPKKKRKRK-cya；SEQ ID NO：36)；具有结构RN(其中N介于4至17之间)的聚精氨酸序列；GRKKRRQRRR序列(SEQ ID NO：37)、RRRRRRLR序列(SEQ ID NO：38)、RRQRRTSKLMKR序列(SEQ ID NO：39)；转运肽(Transportan)GWTLNSAGYLLGKINLKALAALAKKIL(SEQ IDNO：40)；KALAWEAKLAKALAKALAKHLAKALAKALKCEA(SEQ ID NO：41)；RQIKIWFQNRRMKWKK(SEQID NO：42)；YGRKKRRQRRR序列(SEQ ID NO：43)；RKKRRQRR序列(SEQ ID NO：44)；YARAAARQARA序列(SEQ ID NO：45)；THRLPRRRRRR序列(SEQ ID NO：46)；GGRRARRRRRR序列(SEQ ID NO：47)。

在一个优选的实施方案中，所述细胞穿透肽不是SEQ ID NO：1中包含的内源性肽。

在一个优选的实施方案中，CPP是由氨基酸49-57(RKKRRQRRR，SEQ ID NO：16)组成的HIV-1TAT蛋白的CPP。在另一个优选的实施方案中，CPP是GRKKRRQRRR序列(SEQ ID NO：37)或RRRRRRLR(SEQ ID NO：38)。在另一个实施方案中，CPP是GRKKRRQRRR序列(SEQ ID NO：37)或RRRRRRRR(SEQ ID NO：65)。

在一些实施方案中，CPP是如WO2019/018898中所述的CPP，其内容通过引用整体并入本文。

在一个实施方案中，细胞穿透肽序列在本发明的多肽或所述多肽的功能等效变体的N-末端融合。在另一个实施方案中，细胞穿透肽在本发明的多肽或所述多肽的功能等效变体的C-末端融合。

在优选的实施方案中，除了在SEQ ID NO：1的多肽或所述多肽的功能等效变体中发现的自身细胞穿透肽外，本发明的缀合物或融合蛋白还包含至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个或更多个其他细胞穿透肽。

本发明合适的融合蛋白包括如下定义的多肽Omomyc*TAT和Omomyc*LZArg：

因此，在优选的实施方案中，融合蛋白是选自SEQ ID NO：11和12的多肽。

用于确定缀合物是否保留Omomyc的细胞膜转位能力的合适测定包括但不限于测量缀合物转导培养细胞的能力的测定。该测定基于使缀合物与培养细胞接触并检测在细胞内的位置中缀合物的存在。

在另一个优选的实施方案中，本发明的缀合物还包含另外的核定位信号。

如本文所用，术语“核定位信号”(NLS)是指长度为约4-20个氨基酸残基的氨基酸序列，其用于将蛋白质引导至核。典型地，核定位序列富含碱性氨基酸，并且示例性序列是本领域众所周知的(Gorlich D.(1998)EMBO 5.17:2721-7)。在一些实施方案中，NLS选自由以下组成的组：SV40大T抗原NLS(PKKKRKV，SEQ ID NO：48)；核质蛋白(Nucleoplasmin)NLS(KRPAATKKAGQ AKKKK，SEQ ID NO：49)；CBP80 NLS(RRRHSDENDGGQPHKRRK，SEQ ID NO：50)；HIV-I Rev蛋白NLS(RQARRNRRRWE，SEQ ID NO：51)；HTLV-I Rex(MPKTRRRPRRSQRKRPPT，SEQID NO：52)；hnRNP A NLS(NQSSNFGPMKGGNFGGRSSGPYGGGGQYFKPRNQGGY，SEQ ID NO：53)；rpL23a NLS(VHSHKKKKKKIRTSPTFTTPKTLRLRRQPKYPRKSAPRRNKLDHY，SEQ ID NO：54)。在本发明的一个实施方案中，核定位信号包含基序K(K/R)X(K/R)(SEQ ID NO：55)。

在另一个优选的实施方案中，NLS可以在包含SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体的缀合物或融合蛋白的N-末端或C-末端。

技术人员将理解，可以期望的是，根据本发明所述之用途的缀合物还包含一种或多种柔性肽，其连接包含SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体、细胞穿透肽序列和/或NLS。因此，在一个具体实施方案中，包含SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体直接连接到细胞穿透肽序列。在另一个具体实施方案中，包含SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体通过柔性肽连接至细胞穿透肽序列。在一个实施方案中，包含SEQ ID NO：1的多肽或其功能变体直接连接至NLS。在另一个实施方案中，包含SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体通过柔性肽连接至NLS。

在一个具体的实施方案中，根据本发明所述之用途的缀合物的多肽直接连接至细胞穿透肽序列和NLS。

在一个实施方案中，NLS是在Myc序列中内源地出现的NLS之一，例如M1肽(PAAKRVKLD，SEQ ID NO：56)或M2肽(RQRRNELKRSF，SEQ ID NO：57)。

在另一个实施方案中，另外的NLS是指与在包含SEQ ID NO：1的多肽中或在SEQ IDNO：1的功能等效变体中发现的内源性NLS不同的NLS。

在优选的实施方案中，根据本发明所述之用途的缀合物或融合蛋白除了在本发明的多肽或其功能等效变体中发现的内源性NLS外，还包含至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个NLS。

在另一个具体实施方案中，根据本发明所述之用途的缀合物的多肽通过第一柔性肽接头(flexible peptide linker)连接至细胞穿透肽序列，并通过第二柔性肽接头连接至NLS。

如本文所用，术语“柔性肽”、“间隔肽”或“接头肽”是指共价结合两个蛋白质或部分但不属于任一多肽的一部分的肽，允许一个相对于另一个移动，其不会对任一蛋白质或部分的功能产生实质性的有害影响。因此，柔性接头不影响多肽序列的肿瘤示踪活性、细胞穿透肽的细胞穿透活性或NLS的核定位能力。

柔性肽包含至少1个氨基酸、至少2个氨基酸、至少3个氨基酸、至少4个氨基酸、至少5个氨基酸、至少6个氨基酸、至少7个氨基酸、至少8个氨基酸酸、至少9个氨基酸、至少10个氨基酸、至少12个氨基酸、至少14个氨基酸、至少16个氨基酸、至少18个氨基酸、至少20个氨基酸、至少25个氨基酸、至少30个氨基酸、至少35个氨基酸、至少40个氨基酸、至少45个氨基酸、至少50个氨基酸、至少60个氨基酸、至少70个氨基酸、至少80个氨基酸、至少90个氨基酸，或大约100个氨基酸。在一些实施方案中，柔性肽允许一种蛋白质相对于另一种蛋白质移动，以增加蛋白质的溶解度和/或改善其活性。合适的接头区域包括聚甘氨酸区域，甘氨酸、脯氨酸和丙氨酸残基的组合的GPRRRR序列(SEQ ID NO：58)。

在一个甚至更优选的实施方案中，核定位信号选自由PKKKRKV(SEQ ID NO：48)、PAAKRVKLD(SEQ ID NO：56)和KRPAATKKAGQ AKKKK(SEQ ID NO：49)组成的组。

在一个具体的实施方案中，根据本发明所述之用途的缀合物包含与缀合物结合或与所述多肽或其融合蛋白或变体的C-末端或N-末端结构域结合的标签。所述标签通常是可以用于所述融合蛋白的分离或纯化的肽或氨基酸序列。因此，所述标签能够以高亲和力结合至一个或多个配体，例如亲和基质(如色谱载体和珠)的一个或多个配体。所述标签的实例是组氨酸标签(His-标签或HT)，例如包含6个组氨酸残基(His6或H6)的标签，其可以以高亲和力结合至镍(Ni²⁺)柱或钴(Co²⁺)柱。His-标签具有可以在使大多数蛋白质变性且破坏大多数蛋白质-蛋白质相互作用的条件下结合其配体的期望特征。因此，在诱饵蛋白参与的蛋白质-蛋白质相互作用被破坏后，它可以用于去除带有H6标签的诱饵蛋白。

用于分离或纯化缀合物或包含SEQ ID NO：1的多肽或其变体或融合蛋白的标签的其他说明性的非限制性实例包括Arg-标签；FLAG-标签(DYKDDDDK；SEQ ID NO：59)；Strep-标签(WSHPQFEK，SEQ ID NO：60)；能够由抗体识别的表位，例如c-myc-标签(由抗c-myc抗体识别)、HA标签(YPYDVPDYA，SEQ ID NO：61)、V5标签(GKPIPNPLLGLDST，SEQ ID NO：62)、SBP-标签、S-标签、钙调蛋白结合肽、纤维素结合结构域、甲壳素结合结构域、谷胱甘肽S-转移酶标签、麦芽糖结合蛋白、NusA、TrxA、DsbA、Avi-标签等(Terpe K.,Appl.Microbiol.Biotechnol.2003,60:523-525)；氨基酸序列如AHGHRP(SEQ ID NO：63)或PIHDHDHPHLVIHSGMTCXXC(SEQ ID NO：64)；β-半乳糖苷酶等。

如果需要，标签可以用于所述融合蛋白的分离或纯化。

在一个优选的实施方案中，根据本发明所述之用途的缀合物用于肺癌的诊断，其中所述肺癌是选自小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)的原发性肿瘤，或癌症转移。

包含序列SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体用于通过与可检测标记物缀合来制备诊断试剂。

在另一方面，本发明涉及根据本发明的第一方面的缀合物在制备诊断试剂中的用途。

在本发明的上下文中，术语“诊断试剂”应理解为包括经修饰的包含序列SEQ IDNO：1的多肽或其功能等效变体的试剂，从而可以在施用于个体后对其进行检测。

术语“可检测标记物”、“显像剂”、“成像化合物”和“造影剂”在本文中可互换使用，并且是指具有直接或间接被检测的能力的生物兼容性化合物，其使用通过增加图像的不同区域之间的“对比度”有助于区分图像的这些不同部分。它们是指原子、分子、化合物或其他物质，其通过本领域已知并在下文中描述的体内方法有助于诊断、检测或可视化与摄取包含SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体有关的癌症或其他病况。

根据本文所述的实施方案，可检测标记物可以包括但不限于放射性物质(例如，放射性同位素、放射性核素、放射性标记物或放射性示踪剂)、染料、造影剂、荧光化合物或分子、生物发光化合物或分子、酶和增强剂(例如顺磁离子)。另外，应注意，一些纳米颗粒(例如量子点和金属纳米颗粒(如下所述))也可能适合用作检测试剂。

在优选实施方案中，可检测标记物是放射性物质，优选放射性同位素。

根据本公开的实施方案，可以用作可检测标记物的放射性物质包括但不限于¹⁸F、³²P、³³P、⁴⁵Ti、⁴⁷Sc、⁵²Fe、⁵⁹Fe、⁶²Cu、⁶⁴Cu、⁶⁷Cu、⁶⁷Ga、⁶⁸Ga、⁷⁵Sc、⁷⁷As、⁸⁶Y、⁹⁰Y.⁸⁹Sr、⁸⁹Zr、⁹⁴Tc、⁹⁴Tc、⁹⁹mTc、⁹⁹Mo、¹⁰⁵Pd、¹⁰⁵Rh、¹¹¹Ag、¹¹¹In、¹²³I、¹²⁴I、¹²⁵I、¹³¹I、¹⁴²Pr、¹⁴³Pr、¹⁴⁹Pm、¹⁵³Sm、^154- ¹⁵⁸¹Gd、¹⁶¹Tb、¹⁶⁶Dy、¹⁶⁶Ho、¹⁶⁹Er、¹⁷⁵Lu、¹⁷⁷Lu、¹⁸⁶Re、¹⁸⁸Re、¹⁸⁹Re、¹⁹⁴Ir.¹⁹⁸Au、¹⁹⁹Au、²¹¹At、²¹¹Pb、²¹²Bi、²¹²Pb、²¹³Bi、²²³Ra和²²⁵Ac。根据本公开的实施方案，可以用作可检测标记物的顺磁离子包括但不限于过渡金属离子和镧系金属离子(例如，原子序数为6至9、21至29、42、43、44或57至71的金属)。这些金属包括Cr、V、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、La、Ce、Pr、Nd、Pm、Sm、Eu、Gd、Tb、Dy、Ho、Er、Tm、Yb和Lu的离子。在更优选的实施方案中，放射性物质或放射性同位素为⁸⁹Zr。

当可检测标记物是放射性金属或顺磁离子时，标记物可以与具有长尾的试剂反应，其中一个或者多个螯合基团附着于该长尾用于结合这些离子。在那种情况下，螯合基团可以共价地附着于包含SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效物。长尾可以是聚合物，例如聚赖氨酸、多糖、或其他具有能够结合至螯合基团以结合离子的侧基的衍生链或可衍生链。可以根据本公开使用的螯合基团的实例包括但不限于乙二胺四乙酸(EDTA)、二乙三胺五乙酸(DTPA)、DOTA、NOTA、NETA、卟啉、多胺、冠醚、双缩氨基硫脲、聚肟、DFO(去铁胺-马来酰亚胺)等基团。这些螯合物当与非放射性金属(例如锰、铁和钆)络合时可以用于MRI。大环螯合物如NOTA、DOTA和TETA可分别与多种金属和放射性金属(包括但不限于镓、钇和铜的放射性核素)一起使用。可以使用因稳定结合核素(例如用于RAIT的²²³Ra)而受到关注的其他环型螯合物(例如大环聚醚)。在某些实施方案中，螯合部分可以用于将PET成像试剂(例如AI-¹⁸F络合物或DFO-⁸⁹Zr)附着于用于PET分析的靶向分子。在一个优选的实施方案中，螯合基团是DFO。在一个更优选的实施方案中，缀合物是Omomyc-DFO-⁸⁹Zr。

根据本公开的实施方案，可以用作可检测标记物的酶包括但不限于辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖醛酸苷酶或β-内酰胺酶。这些酶可以与色原、荧光化合物或发光化合物结合使用以产生可检测的信号。

因此，术语“造影剂”包括用于增强图像质量的试剂，所述图像在不存在这种试剂的情况下仍然可以产生(例如，在MRI中就是这种情况)，以及作为产生图像的前提的试剂(例如，在核成像中就是这种情况)。合适的造影剂包括但不限于用于放射性核素成像、用于计算机断层扫描、用于拉曼光谱、用于磁共振成像(MRI)和用于光学成像的造影剂。

在本发明的上下文中，造影剂可以是本发明的缀合物的一部分，或者可以与本发明的缀合物一起施用，以便获得可以迭加例如用计算机断层扫描(CT)或磁共振成像(MRI)获取的图像的核医学图像，以产生特殊视图，这种做法称为图像融合或共配准。这些视图使得来自两种不同检查的信息能够在一张图像上关联在一起并进行解释，从而获得更精确的信息和更准确的诊断。在一个具体实施方案中，在能够同时进行两种成像检查的单光子发射计算机断层扫描/计算机断层扫描(SPECT/CT)和正电子发射断层扫描/计算机断层扫描(PET/CT)单元甚至PET/MRI中同时进行放射性核素标记的缀合物的检测和参考身体图像或截面的获取。

用于放射性核素成像的造影剂包括通常用正电子发射体(例如，¹¹C、¹³N、¹⁵O、¹⁸F、⁸²Rb、⁶²Cu和⁶⁸Ga)标记的放射性药物。SPECT放射性药物通常用正电子发射体如⁹⁴mTc、²⁰¹Tl和⁶⁷Ga标记。放射性核素成像模式(正电子发射断层扫描(PET)；单光子发射计算机断层扫描(SPECT))是诊断性截面成像技术，其绘制放射性核素标记的放射性示踪剂的位置和浓度。PET和SPECT可以用于定位和表征放射性核素。在PET中，当发射正电子的放射性缀合物移动通过人体时，可以监测该物质。与PET密切相关的是单光子发射计算机断层扫描或SPECT。两者之间的主要区别在于，SPECT使用发射低能量光子的放射性示踪剂代替了发射正电子的物质。

用于CT成像的造影剂包括例如碘化造影剂或溴化造影剂。这些试剂的实例包括碘酞酸盐(iothalamate)、碘海醇(iohexyl)、泛影酸盐(diatrizoate)、碘异酞醇(iopamidol)、乙碘油(ethiodol)和碘番酸盐(iopanoate)。钆试剂也已被报导用作CT造影剂。例如，钆喷酸盐(gadopentate)试剂已被用作CT造影剂。在本发明的上下文中，计算机断层扫描(CT)被认为是成像模式。通过从不同角度拍摄一系列X光片(有时超过一千片)，然后用计算机将其结合，CT使得能够建立身体任何部位的三维图像。计算机被程序设计为从任何角度和任何深度显示二维切片。在CT中，当初始CT扫描不具诊断性时，诸如本文所述的不透射线的造影剂可以协助识别和描绘软组织肿块。

用于光学成像的造影剂包括，例如、荧光素、荧光素衍生物、吲哚菁绿、俄勒冈绿、俄勒冈绿衍生物、若丹明绿、若丹明绿衍生物、曙红、赤藓红、得克萨斯红、得克萨斯红衍生物、孔雀石绿、纳米金磺基琥珀酰亚胺酯、级联蓝、香豆素衍生物、萘、吡啶恶唑衍生物、级联黄染料、达巴氧基(dapoxyl)染料和本文公开的各种其他荧光化合物。

在优选的实施方案中，造影剂是能够通过磁共振成像装置成像的化合物。可以通过磁共振成像装置成像的造影剂不同于在其他成像技术中使用的造影剂。它们的目的是帮助区分具有相同信号特性的组织成分，并缩短弛豫时间(这将在T1加权的自旋回波MR图像上产生更强的信号，而将在T2加权的图像上产生较弱的信号)。MRI造影剂的实例包括钆螯合物、锰螯合物、铬螯合物和铁颗粒。在一个具体实施方案中，MRI造影剂为¹⁹F。CT和MRI均提供有助于区分组织边界的解剖信息。与CT相比，MRI的缺点包括患者的耐受性较低，对起搏器和某些其他植入的金属装置有禁忌症以及与多种原因相关的伪影，其中最重要的是动态CT，在另一方面，动态CT速度快、耐受性好，且容易获得，但对比度分辨率低于MRI，并且需要碘化的造影剂和电离辐射。CT和MRI的一个缺点是两种成像模式都无法在细胞水平上提供功能信息。例如，两种模式都不能提供有关细胞活力的信息。磁共振成像(MRI)是一种比CT更新的成像模式，其使用高强度磁体和射频信号来生成图像。生物组织中最丰富的分子种类是水。水质子核的量子力学“自旋”最终在成像实验中产生信号。在MRI中，将待成像的样品置于强大的静磁场(1-12特斯拉)中，并用射频(RF)辐射脉冲激发自旋，从而在样品中产生净磁场。然后，各种磁场梯度和其他RF脉冲作用于自旋，以将空间信息编码为记录的信号。通过收集和分析这些信号，可以计算出通常(像CT图像一样)以二维切片形式显示的三维图像。

MRI造影剂包括金属络合物，所述金属选自由铬(III)、锰(II)、铁(III)、铁(II)、钴(II)、镍(II)、铜(II)、钕(III)、钐(III)、镱(III)、钆(III)、钒(II)、铽(III)、镝(III)、钬(III)和铒(III)组成的组。在一个优选的实施方案中，能够通过磁共振成像装置成像的化合物是钆基化合物。

如本文所用，术语“钆基化合物”是指，当就肺成像而使用时，可施用于受试者导致血管内增强的任何含钆的物质。在另一个实施方案中，含钆造影剂选自由钆、gadoliniumpentate和钆双胺(gadoliamide)组成的组。

将可检测标记物与包含序列SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体缀合有几种形式。在一个具体的实施方案中，缀合将通过马来酰亚胺介导的方法进行，即通过将马来酰亚胺-DFO(或其他螯合基团)与Omomyc结合，或使马来酰亚胺-AF660(或其他荧光团)与Omomyc结合，并且后者的马来酰亚胺与Omomyc的C-末端处的唯一的半胱氨酸残基反应。使用马来酰亚胺标记的标准程序进行该偶联反应。

例如，该化学标记步骤也可以通过其他化学试剂例如NHS-(通过游离胺进行标记)或例如二硫化偶联剂来进行。

通过体内成像模式(例如磁共振成像(MRI)、正电子发射断层扫描(PET)或microPET、计算机断层扫描(CT)、PET/CT组合成像器、冷电荷耦合器件(CCD)、相机光学成像、光学成像和单光子发射计算机断层扫描(SPECT)来检测根据本发明所述之用途的缀合物的存在、不存在、浓度、位置或特定分布。

在一个甚至更优选的实施方案中，在施用缀合物之后通过mPET/mCT或PET/CT成像(优选mPET/mCT)来进行癌细胞的检测。

本发明还提供了多模式成像方法。本发明的某些实施方案涉及使用涉及测量多个信号的多成像模式来对受试者或受试者内的部位进行成像的方法。在某些实施方案中，多个信号由细胞上或细胞中的单个标记产生。如上所述，本领域普通技术人员已知的任何成像模式都可以应用于本发明成像方法的这些实施方案中。

在缀合物施用期间或之后的任何时间进行成像模式。例如，可以在施用本发明的缀合物期间(即，以帮助引导递送到特定位置)或者在此后的任何时间进行成像研究。

额外的成像模式可以与第一成像模式同时执行，或者在第一成像模式之后的任何时间执行。例如，可以在完成第一成像模式之后约1秒、约1小时、约1天或任何更长的时间段，或者在这些规定的时间之间的任何时间执行额外的成像模式。在本发明的某些实施方案中，多成像模式被同时执行，使得它们在使用缀合物之后同时开始。本领域普通技术人员会熟悉本发明所设想的各种成像模式的性能。

在本发明的成像方法的一些实施方案中，同一成像装置用于执行第一成像模式和第二成像模式。在其他实施方案中，不同的成像装置用于执行不同的成像模式。本领域普通技术人员会熟悉可用于执行本文所述的成像模式的成像装置。

本发明提供了使用一种或多种成像模式对细胞进行成像的方法。在一些实施方案中，根据本发明所述之用途的缀合物具有超过一种的可检测标记物或具有多个、相等或不同的可检测标记物，其与包含SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体连接。在其他实施方案中，缀合物与单个可检测标记物连接。在某些实施方案中，单个可检测标记物是多模式可检测标记物。

在一个优选的实施方案中，可检测标记物选自由以下组成的组：¹⁸F、³²P、³³P、⁴⁵Ti、⁴⁷Sc、⁵²Fe、⁵⁹Fe、⁶²Cu、⁶⁴Cu、⁶⁷Ga、⁶⁸Ga、⁷⁵Sc、⁷⁷As、⁸⁶Y、⁸⁹Sr、⁸⁹Zr、⁹⁴Tc、⁹⁴Tc、⁹⁹mTc、⁹⁹Mo、¹⁰⁵Pd、¹⁰⁵Rh、¹¹¹Ag、¹²³I、¹²⁴I、¹⁴²Pr、¹⁴³Pr、¹⁴⁹Pm、¹⁵³Sm、^154-1581Gd、¹⁶¹Tb、¹⁶⁶Dy、¹⁶⁶Ho、¹⁶⁹Er、¹⁷⁵Lu、¹⁸⁶Re、¹⁸⁹Re、¹⁹⁴Ir、¹⁹⁸Au、¹⁹⁹Au、²¹¹Pb、²¹²Bi、²¹²Pb、²²³Ra和²²⁵Ac。在更优选的实施方案中，放射性物质或放射性同位素为⁸⁹Zr。

在本发明的该方面的实施方案中，缀合物不包含细胞穿透肽序列。在另一个实施方案中，缀合物不包含促进细胞摄取SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体的化学部分。在本发明的缀合物的另一个实施方案中，缀合物不包含荧光标记物或放射性同位素，更优选地，缀合物不包含荧光素-马来酰亚胺(FITC)或选自由¹³¹I、⁹⁰Y、¹⁷⁷Lu、¹⁸⁸Re、⁶⁷Cu、²¹¹At、²¹³Bi、¹²⁵I和¹¹¹In组成的组的放射性同位素。在另一个实施方案中，本发明的缀合物不包含细胞穿透肽序列、荧光标记物或放射性同位素，更优选不包含荧光素-马来酰亚胺(FITC)，或选自由¹³¹I、⁹⁰Y、¹⁷⁷Lu、¹⁸⁸Re、⁶⁷Cu、²¹¹At、²¹³Bi、¹²⁵I和¹¹¹In组成的组的放射性同位素。

在另一个实施方案中，本发明的缀合物不包括荧光基团、生物素、PEG、氨基酸类似物、非天然氨基酸、磷酸基团、糖基基团、放射性同位素标记物、标签(例如组氨酸标签、Arg-标签、FLAG-标签、Strep-标签)、能够被抗体识别的表位(例如c-myc-标签、HA标签、V5标签、SBP-标签、S-标签、钙调蛋白结合肽、纤维素结合结构域、甲壳素结合结构域、谷胱甘肽S-转移酶标签、麦芽糖结合蛋白、NusA、TrxA、DsbA、Avi标签)、氨基酸序列(例如AHGHRP(SEQ IDNO：63)、或PIHDHDHPHLVIHSGMTCXXC(SEQ ID NO：64))、或β-半乳糖苷酶等。

术语“诊断”或“检测”在本文中被模糊地使用，并且是指对病理状况的存在或特征的识别。如本文所用，术语“诊断”既指尝试确定和/或识别受试者可能患有疾病的过程，即诊断程序，也指通过该过程所达成的意见，即诊断意见。这样，它也可以被认为是尝试将个人病况分类为单独的和不同的类别，从而可以做出有关治疗和预后的医学决定。如本领域技术人员将理解的，尽管对于待诊断的受试者来说，这样的诊断可能不是100％正确的，但它是优选的。然而，该术语要求统计学显著部分的受试者可以被识别为患有疾病，特别是本发明上下文中的增殖性疾病。本领域技术人员可以使用众所周知的不同统计评估工具，例如通过确定置信区间、p值确定、Student’s检验、Mann-Whitney等，来确定一方是否是统计学显著的。优选的置信区间为至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％。p值优选为0.05、0.025、0.001或更低。

在一个实施方案中，诊断方法包括：

a)对受试者肺部施用缀合物，所述缀合物包括包含序列SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体以及可检测标记物，以及

b)通过查看可检测标记物来检测所述患者中的肺肿瘤。

根据本发明所指的表述“诊断方法”是指该方法可以基本上由上述步骤组成或可以包括其他步骤。

如本文所用，表述“体内诊断”是指应用于人体或动物体的诊断方法。

就本发明的目的而言，诊断是识别肺癌的存在。

术语“肺癌”或“肺肿瘤”是指哺乳动物中以肺组织中细胞生长不受调节为特征的生理状况。术语肺癌是指任何肺癌，包括非小细胞肺癌和小细胞肺癌。在一个实施方案中，肺癌是非小细胞肺癌(NSCLC)。在另一个实施方案中，肺癌是小细胞肺癌(SCLC)。

本文使用的术语非小细胞肺癌(NSCLC)是指一组异质性疾病，将它们分组在一起是因为它们的预后和管理方法大致相同，并且根据世界卫生组织/国际肺癌研究协会的组织学分类(ravis WD et al.Histological typing of lung and pleural tumours.3rded.Berlin:Springer-Verlag,1999)，包括：

(i)鳞状细胞癌(SCC)，占NSCLC的30％至40％，始于较大的呼吸管，但生长较慢，这意味着这些肿瘤的大小在诊断时会有所不同。

(ii)腺癌，是NSCLC最常见的亚型，占NSCLC的50％至60％，其始于肺的气体交换表面附近，并且包括亚型细支气管肺泡癌，其对治疗的反应可能不同。

(iii)大细胞癌，是生长在肺表面附近的一种快速增长形式。它主要是排除性诊断，当进行更多研究时，通常将其重新分类为鳞状细胞癌或腺癌。

(iv)腺鳞癌，是一种包含鳞状细胞(排列在某些器官内的稀薄的扁平细胞)和腺样细胞两种类型的细胞的癌症。

(v)具有多形性、肉瘤样或肉瘤成分的癌。这是一组罕见的肿瘤，反映了组织学异质性的连续性以及上皮和间充质的分化。

(vi)类癌肿瘤，是一种生长缓慢的神经内分泌性肺肿瘤，始于能够响应于神经系统提供的刺激而释放激素的细胞。

(vii)唾腺型癌，始于位于肺大气道内的唾腺细胞。

(viii)未分类的癌症，包括不属于上述任何肺癌类别的癌症。

如本文所用，术语“受试者”或“患者”是指被分类为哺乳动物的所有动物，包括但不限于家畜和农场动物、灵长类动物和人类，例如人类、非人类灵长类动物、牛、马、猪、绵羊、山羊、狗、猫或啮齿动物。优选地，受试者是任何年龄或种族的人类男性或女性。

如本文所用，术语“原发性肿瘤”是指起源于其存在的位置或器官而并不是从另一位置转移到该位置的肿瘤。

在本发明的上下文中，“转移”被理解为癌症从其开始的器官向不同器官的增殖。它通常通过血液或淋巴系统发生。当癌细胞扩散并形成新的肿瘤时，后者被称为继发性或转移性肿瘤。形成继发性肿瘤的癌细胞与原始肿瘤的癌细胞相似。例如，如果乳腺癌扩散(转移)到肺，则继发性肿瘤由恶性乳腺癌细胞形成。肺部疾病是转移性乳腺癌，而不是肺癌。

在一个具体实施方案中，NSCLC选自肺鳞状细胞癌、大细胞肺癌和肺腺癌。

在一个甚至更优选的实施方案中，肺癌是腺癌。

在一个甚至更优选的实施方案中，肺腺癌是KRAS突变的腺癌。

KRAS是指Kirsten大鼠肉瘤病毒性致癌基因同源(KRAS)蛋白。对于NSCLC，KRAS突变主要(95％)发生在密码子12(>80％)和13处。最常见的密码子变体是KRAS-G12C突变，约占KRAS突变体NSCLC的39％。其他常见突变包括KRAS-G12V(18％至21％)和KRAS-G12D(17％至18％)变体。值得注意的是，吸烟者和从不吸烟者在KRAS中具有不同的突变谱和密码子变体谱。因此，在从不吸烟者中，转换突变(G>A)更为常见，而在前吸烟者或现吸烟者中，颠换突变(G>C或G>T)更为常见。在一个优选的实施方案中，KRAS突变腺癌是KRAS-G12D突变体。

如本文所用，术语小细胞肺癌(SCLC)是指具有独特且严格的形态学特征的小细胞的增殖，其包含致密的神经分泌颗粒，使该肿瘤伴有内分泌/副肿瘤综合征。大多数病例发生在较大的气道(初级和次级支气管)中。这些癌症生长迅速，并在病程的早期扩散。

在另一个实施方案中，根据本发明所述之用途的缀合物诊断的癌症是癌症转移。

本发明的缀合物的施用是肺部施用。

术语“肺部施用”是指将药物活性物质递送至肺部任何表面的任何施用方式。递送方式可以包括但不限于液体混悬液、干粉“散剂”或气雾剂。

“跨肺表面转运”是指穿透或渗透肺的内表面的任何穿过方式。这包括穿过通过任何肺表面(包括肺泡表面、细支气管表面)，以及穿过通过任何这些表面之间。优选地，该穿过通过肺泡表面。最优选地，该穿过通过肺泡表面上的II型细胞。穿过可以直接进入肺部组织进行局部作用，或者可以通过肺部组织进入循环系统进行全身作用。

在具体实施方案中，根据本发明所述之用途的缀合物鼻内施用。

在甚至更优选的实施方案中，鼻内施用是通过滴注。

在具体实施方案中，根据本发明所述之用途的缀合物通过鼻滴注、鼻吸入或口腔吸入施用；优选地通过鼻滴注或鼻吸入施用；更优选地通过鼻滴注施用。

“滴注”包括能够向哺乳动物鼻孔提供有效量的根据本发明所述之用途的缀合物的任何递送系统。代表性和非限制性形式包括滴剂，喷雾剂，散剂，气雾剂，薄雾剂，导管，管，注射器，用于霜剂、微粒剂、丸剂的施药器等。

本发明可以用各种鼻递送载体和/或载剂来实施。此类载体增加了缀合物在滴注入鼻孔后在鼻孔中的半衰期。这些载剂包括天然聚合物、半合成聚合物、合成聚合物、脂质体和半固体剂型。天然聚合物包括例如蛋白质和多糖。半合成聚合物是改性的天然聚合物，例如壳聚糖，它是天然多糖甲壳素的脱乙酰形式。合成聚合物包括，例如，树枝状聚合物、聚磷酸酯、聚乙二醇、聚(乳酸)、聚苯乙烯磺酸盐(PSSA)和聚(丙交酯乙交酯)。半固体剂型包括例如霜剂、软膏剂、凝胶剂和洗剂。这些载剂也可以用于微囊化缀合物或与缀合物共价连接。

在一个实施方案中，根据本发明所述之用途的缀合物包含载剂颗粒，或共价或非共价结合至载剂颗粒，其可以配制成散剂、喷雾剂、气雾剂、霜剂、凝胶剂等以应用于鼻孔。在一个实施方案中，缀合物被涂覆在可溶解的膜中的载剂颗粒核上，所述可溶解的膜可以包含粘膜粘着剂。载剂颗粒核可以是惰性的或可溶解的。

本发明还公开了包含根据本发明所述之用途的缀合物和药学上可接受的载剂的药物组合物，所述药学上可接受的载剂可以是例如散剂、霜剂或液体。药学上可接受的载剂包括无菌液体，例如水、油(包括石油、动物油、植物油、花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等)。合适的药物载剂在Remington's Pharmaceutical Sciences,18th Edition(56)中有描述，其通过引用并入本文。

用于鼻内和肺内施用的组合物的剂型优选为液体、混悬液或固体。混悬液是含有分散在液体载体中的固体颗粒的液体制剂。剂型优选为计量的。例如，计量的液滴/喷雾是指包括液滴/喷雾的分配器递送含有计量剂量(预定量)的根据本发明所述之用途的缀合物的液滴/喷雾。

鼻内施用途径的情况下，一种优选的剂型包括鼻滴剂。滴剂主要沉积在鼻子的后部，因此迅速移入鼻咽。滴剂的问题通常是如何精确控制药物的剂量，这对于缀合物的施用特别重要。

可以施用本发明所述之用途的缀合物的另一种鼻内剂型是鼻喷雾剂。鼻喷雾剂通常包含在非加压分配器中溶解或混悬在溶液或辅料(例如防腐剂、粘度调节剂、乳化剂、缓冲剂)混合物中的缀合物。鼻喷雾剂具有几个优点，包括递送装置的简洁、便利性、使用的简便性以及递送剂量为25pL至200pL的准确性。它们沉积在鼻前部，并通过粘膜纤毛间隙而缓慢进入鼻咽。本文所用的鼻喷雾剂可以是液体或混悬液。

另一种鼻内剂型是鼻气雾剂。鼻气雾剂与鼻喷雾剂的不同之处在于缀合物分配方法：在气雾剂中，由较高的压力来分配化合物，并通过阀门释放。在喷雾剂中，由于微型泵桶(micropump bucket)的用力推进而分配化合物，而小瓶中的压力类似于大气压。气雾剂具有与喷雾剂相似的优点。

替代地，根据本发明所述之用途的缀合物可以优选地通过鼻乳剂、软膏剂、凝胶剂、糊剂或霜剂施用。这些是应用于鼻粘膜的高粘度溶液或混悬液。

由于可以有效递送至鼻粘膜的组合物的体积有限，液体鼻内剂型通常较相应的静脉注射剂型具有较高的浓度。当物质溶解性差或以液体形式不稳定时，可以使用散剂来施用本发明所述之用途的缀合物。散剂的其他优点是它们不需要防腐剂，并且与液体制剂相比通常具有更高的稳定性。鼻内散剂应用的主要局限性在于其对鼻粘膜的刺激作用。

肺内施用的情况下，一种剂型是吸入气雾剂。吸入气雾剂通常在压力下包装，并含有根据本发明所述之用途的缀合物，其在阀门系统启动时被释放进入呼吸道，特别是肺中。释放的气雾剂在空气或其他气体中是细小固体颗粒(混悬液)或液滴(溶液)的胶体。因此，该气雾剂可以是溶液或混悬气雾剂。液滴或固体颗粒的直径优选小于100pm，更优选小于10pm，最优选小于1pm。

肺内施用的情况下，另一种剂型是吸入喷雾剂。吸入喷雾剂通常是水基的，并且不含任何推进剂。它们通过口服吸入将缀合物递送至肺。

雾化的吸入溶液和混悬液也可以用于通过肺内途径递送缀合物。雾化的吸入溶液和混悬液通常是水基制剂，其包含根据本发明所述之用途的缀合物。雾化的吸入溶液和混悬液通过口服吸入将缀合物递送至肺以产生全身作用，并与雾化器一起使用。

干粉吸入剂是气雾剂吸入的替代方法。缀合物通常包含在用于手动加载的胶囊中或吸入器内。干粉通常由吸入器通过口服吸入递送到肺部。本文所用的干粉可以配制成纯的。纯的制剂仅包含药物或基本仅包含药物，例如，作为喷雾干粉。本文所用的干粉也可以与诸如乳糖的载体一起配制。

优选地对肺内剂型进行计量，即以预定量递送至肺。

活性成分的剂量可以以每千克体重的以mg计的活性成分或每平方米体表的以mg计的活性成分表示。Reagan-Shaw S.的文章“Dose translation from animal to humanstudies revisited”，FASEB J 2007，22：659-661提供了用于将mg/kg转换为mg/m²的标准转换因子。

剂量(mg/kg)×K_m＝剂量(mg/m²)

该转换是将第一动物物种的剂量转换为第二动物物种的剂量(异位剂量(allometric)转换)的基础。因此，可以使用以下公式将以mg/kg计的动物剂量(AD)转换为以mg/kg计的人等效剂量(HED)：

其中每个物种的K_m如表1所示。

特别地，根据FDA的基于体表面积的剂量换算指南(Guidance for Industry,Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials forTherapeutics in Adult Healthy Volunteers,U.S.Department of Health and HumanServices,Food and Drug Administration,Center for Drug Evaluation and Research(CDER)，July 2005，见表1)，本文提及的剂量可以针对任何哺乳动物更改。

在一个优选的实施方案中，根据本发明所述之用途的缀合物的剂量范围为0.5mg/kg至10mg/kg，更优选1mg/kg至5mg/kg，并且更优选2mg/kg至3mg/kg。在一个优选的实施方案中，缀合物的剂量为2.37±0.5mg/kg，优选为2mg/kg，更优选为2.37mg/kg。在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述之用途的缀合物的剂量范围为0.04mg/Kg至0.8mg/Kg，更优选为0.08mg/Kg至0.4mg/Kg，并且更优选为0.16mg/Kg至0.24mg/Kg。在一个优选的实施方案中，缀合物的剂量为0.19±0.5mg/kg，优选为0.16mg/kg，更优选为0.19mg/kg。可选地，根据本发明所述之用途的缀合物的剂量范围为1.48mg/m²至30mg/m²，更优选为3mg/m²至14.8mg/m²，并且更优选为5.9mg/m²至8.8mg/m²。在一个优选的实施方案中，缀合物的剂量为7±0.5mg/m²，优选为5.92mg/m²，更优选为7.03mg/m²。

在一个优选的实施方案中，在将缀合物施用至有此需要的受试者后30分钟至96小时、优选30分钟至48小时，对缀合物进行检测。在一个实施方案中，在将缀合物施用于有此需要的受试者后至少30分钟、至少1小时、至少2小时、至少3小时、至少4小时、至少5小时、至少6小时、至少7小时、至少8小时、至少9小时、至少10小时、至少11小时、至少12小时、至少13小时、至少14小时、至少15小时、至少16小时、至少17小时小时、至少18小时、至少19小时、至少20小时、至少21小时、至少22小时、至少23小时、至少24小时、至少25小时、至少26小时、至少27小时小时、至少28小时、至少29小时、至少30小时、至少35小时、至少40小时、至少45小时、至少48小时、至少54小时、至少60小时、至少66小时、至少72小时、至少78小时、至少84小时、至少90小时、至少96小时，对缀合物进行检测。在一个优选的实施方案中，施用后，优选地鼻内施用后，在选自30分钟、1小时、4小时、24小时和48小时的时间处对缀合物进行检测。

在一个优选的实施方案中，在诊断步骤之后，至少再施用一次缀合物，以监测肺癌的进展或监测对患有肺癌的受试者实施的治疗的效果。

在本发明的上下文中，“监测肺癌的进展”是指了解肺癌的大小和/或程度是否相对于先前的测量有减小或增大。

在本发明的上下文中，“监测对受试者实施的治疗的效果”是指了解施用于患有肺癌的受试者的治疗是否减小了肺癌的大小和/或范围，并且因此是有效的；或肺癌的大小和/或范围是否已增加或并未减少，并且因此是无效的。用于治疗肺癌的疗法是本领域技术人员众所周知的。

在另一方面，本发明涉及包含序列SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体在制备诊断试剂中的用途。

在另一方面，本发明涉及缀合物在制备诊断剂中的用途，其中，该缀合物包括包含序列SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体以及可检测标记物。

本发明的诊断和检测方法

在另一方面，本发明涉及一种用于检测受试者中肺肿瘤的诊断方法，包括：

i)经肺部途径施用缀合物，所述缀合物包括：包含序列SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体、以及可检测标记物，

ii)等待足够的时间以使所述缀合物进入增殖的肺细胞中，

iii)通过将成像技术应用于受试者以检测所述缀合物在所述受试者中的积累部位来检测所述增殖的肺细胞，从而检测增殖部位或者对增殖部位成像，以及

iv)如果检测到特异性标记物，则识别出肺肿瘤。

在另一方面，本发明涉及一种用于诊断和治疗怀疑患有肺癌的受试者的方法，其中，所述方法包括：

ii)等待足够的时间以使所述缀合物进入增殖的肺细胞中，

iii)通过将成像技术应用于受试者以检测所述缀合物在所述受试者中的积累部位来检测所述增殖的肺细胞，从而检测增殖部位或者对增殖部位成像，

iv)如果检测到特异性标记物，则识别出肺肿瘤，以及

v)对识别出患有肺癌的受试者施用选自外科手术切除肺肿瘤和/或施用化学疗法和/或放射疗法的治疗。

如本文所用，术语“治疗”是指在临床症状出现之前或之后进行治疗以控制疾病进展。疾病进展的控制被理解为有益的或期望的临床结果，包括但不限于症状的减轻、疾病的持续时间的缩短、病理病况的稳定(特别是避免额外的损害)、延缓疾病的进展、改善病理病况和(部分和完全)缓解。疾病进展的控制还涉及与未应用治疗的预期存活相比，存活延长。

如本文所用，表述“缀合物的积累部位”是指肺部施用后Omomyc或其功能等效变体所在的部位。积累部位的可视化是通过缀合物的标记物形成部分来实现的。

如本文所用，表述“增殖部位”是指癌症所在的部位，即增殖细胞所在的部位。

如本文所用，表述“手术切除”是指手术切除肺癌组织和一些周围组织。肺可以被完全或部分切除。部分切除肺的两种常用方法是但不限于开胸手术和微创手术。患有癌症的患者的示例性肺外科切除术包括但不限于肺叶切除术、肺段切除术、楔形切除术或肺切除术。

术语“化学疗法”一词是指使用药物来破坏癌细胞。药物通常经口服或静脉内途径施用。有时，化学疗法与放射疗法一起使用。化学疗法是指使用用于治疗癌症的抗肿瘤药物的治疗或将超过一种的这些药物组合成细胞毒性标准化治疗方案的治疗。在本发明的上下文中，术语“化学疗法”包括任何抗肿瘤剂，包括用于治疗肺癌以及相关进程例如血管生成或转移的小尺寸有机分子、肽、寡核苷酸等。合适的化学治疗剂包括但不限于烷化剂[例如顺铂、卡铂、奥沙利铂、BBR3464、苯丁酸氮芥、氮芥(Chlormethine)、环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑、卡莫司汀、福莫司汀、洛莫司汀、链脲佐菌素、白消安、达卡巴嗪、氮芥(Mechlorethamine)、甲苄肼、替莫唑胺、硫代TPA、乌拉莫司汀等]；抗代谢药[例如，嘌呤(硫唑嘌呤、巯嘌呤)、嘧啶(卡培他滨、阿糖胞苷、氟尿嘧啶、吉西他滨)、叶酸(甲氨蝶呤、培美曲塞、雷替曲塞)等]；长春花生物碱[例如，长春新碱、长春花碱、长春瑞滨、长春地辛等]；紫杉烷类[例如，紫杉醇、多西他赛、BMS-247550等]；蒽环类药物[例如，柔红霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、米托蒽醌、戊柔比星、博来霉素、羟基脲(Hydroxyurea)、丝裂霉素等]；拓扑异构酶抑制剂[例如，托扑替康、伊立替康、依托泊苷、替尼泊苷等]；单克隆抗体[例如，阿仑单抗、贝伐单抗、西妥昔单抗、吉妥珠单抗、帕尼单抗、利妥昔单抗、曲妥珠单抗等]；光敏剂[例如，氨基乙酰丙酸、氨基戊酮酸甲酯、卟吩姆钠、维替泊芬等]；酪氨酸激酶抑制剂[例如，伊马替尼]；表皮生长因子受体抑制剂[例如，埃罗替尼、吉非替尼等]；FPT酶抑制剂[例如，FTI(Rl 15777、SCH66336、L-778、123)等]；KDR抑制剂[例如，SU6668、PTK787等]；蛋白酶体抑制剂[例如，PS341等]；TS/DNA合成抑制剂[例如，ZD9331、雷替曲塞(ZD 1694、Tomudex)、ZD9331、5-FU等]；S-腺苷-甲硫氨酸脱羧酶抑制剂[例如，SAM468A等]；DNA甲基化剂[例如，TMZ等]；DNA结合剂[例如，PZA等]；结合和灭活O-6-烷基鸟嘌呤AGT的试剂[例如，BG]；c-ra/-l反义寡脱氧核苷酸[例如，ISIS-5132(CGP-69846A)]；肿瘤免疫疗法；甾体和/或非甾体抗炎药[例如，皮质类固醇、COX-2抑制剂]；免疫检查点抑制剂(PD-L1抑制剂，如阿特珠单抗或durvalumab；或PD-1抑制剂，如纳武单抗、派姆单抗；或CTLA-4抑制剂，如易普利姆玛)；或其他试剂，例如，阿利维A酸、六甲蜜胺、安吖啶、阿那格雷、三氧化二砷、天冬酰胺酶、贝沙罗汀、硼替佐米、塞来昔布、达沙替尼、地尼白介素(Denileukin Diftitox)、雌莫司汀、羟基脲(Hydroxycarbamide)、伊马替尼、喷司他丁、马索罗酚、米托坦、培门冬酶和维甲酸。

铂基化合物特别适用于治疗肺癌，包括但不限于卡铂、顺铂[顺式二氨二氯铂(CDDP)]、奥沙利铂、异丙铂、奈达铂、四硝酸三铂、四铂、沙铂(JM216)、JM118[顺式氨二氯](II)]、JM149[顺式氨二氯(环己胺)反式二羟基铂(IV)]、JM335[反式氨二氯二羟基铂(IV)]、反铂、ZD0473、顺式，反式，顺式-Pt(NH3)C6H11NH2)(OOCC3H7)2Cl、苹果酸-1,2-二氨基环己基铂(II)、5-磺基水杨酸-反式-(1,2-二氨基环己烷)铂(II)(SSP)、聚-[(反式-1,2-二氨基环己烷)铂]-羧基淀粉(POLY-PLAT)和4-羟基-磺酰基苯乙酸酯(反式-1,2-二氨基环己烷)铂(II)(SAP)等。在一个具体的实施方案中，铂基化合物选自卡铂、顺铂和奥沙利铂；优选顺铂。

用于治疗肺癌(特别是NSCLC)的合适组合可以是但不限于铂基化合物和有丝分裂抑制剂(例如，顺铂-紫杉醇、顺铂-多西他赛(CI-TA方案)、卡铂-紫杉醇、卡铂-多西他赛、奥沙利铂-紫杉醇、顺铂-长春瑞滨、卡铂-长春瑞滨、顺铂-长春地辛、奥沙利铂-长春瑞滨)；铂基化合物和抗代谢物(例如，顺铂-吉西他滨、卡铂-吉西他滨、奥沙利铂-吉西他滨)；铂基化合物、有丝分裂抑制剂和抗VEGF药物(例如，顺铂-多西他赛-贝伐单抗)；铂基化合物、抗代谢物和抗VEGF药物(例如，顺铂-吉西他滨-贝伐单抗)。其他合适的组合是顺铂-依托泊苷、卡铂-依托泊苷、顺铂-替尼泊苷、顺铂-长春地辛、顺铂-替拉扎明、ZD0473-长春瑞滨、ZD0473-紫杉醇、ZD0473-吉西他滨、顺铂-依托泊苷-丝裂霉素C、顺铂-紫杉醇-吉西他滨、顺铂-多柔比星-5-氟尿嘧啶(AFP)、顺铂-环磷酰胺-博来霉素(CBP)、顺铂-长春地辛-丝裂霉素C(MVP)、环磷酰胺-多柔比星-顺铂(CISCA)、顺铂-阿霉素(CA)、顺铂-氟尿嘧啶(CF)、顺铂-吉西他滨-长春瑞滨(CGV方案)、以及紫杉醇然后顺铂-吉西他滨-长春瑞滨(T-CGV方案)。

在一个优选的实施方案中，化学治疗剂是Omomyc，特别是包含序列SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体，优选在本发明第一方面的上下文中公开的或在专利申WO2014/180889A1和WO2018/011433A1中公开的。

术语“放射疗法”是指提供可以破坏快速分裂细胞或缓解症状的辐射的疗法。可以对患者施用任何类型的辐射，只要辐射剂量是患者能够耐受的，且没有不可接受的负面副作用。合适类型的放射疗法包括例如电离(电磁)放射疗法(例如，X射线或伽马射线)或粒子束放射疗法(例如，高线性能量放射)。

在另一方面，本发明涉及一种用于在受试者中检测肺癌细胞或对肺癌细胞成像的方法，包括：

i)鼻内施用缀合物，该缀合物包括：包含序列SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体、以及可检测标记物，

ii)等待足够的时间以使所述缀合物进入增殖的肺细胞中，

iii)通过将成像技术应用于受试者以检测所述缀合物在所述受试者中的积累部位来检测所述增殖的肺细胞，从而检测增殖部位或者对增殖部位成像。

“检测”是指确定样品中分析物的存在、不存在或量，并且可以包括量化样品中的分析物的量或样品中每个细胞中的分析物的量。

在另一方面，本发明涉及一种使用缀合物对肺癌成像的方法，该缀合物包括：

i)包含序列SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体，以及

ii)可检测标记物，

其中，所述缀合物经肺部途径施用。

在本发明的诊断用途的上下文中公开的所有实施方案也适用于本发明的诊断和检测方法。

本发明的缀合物的监测用途

在另一方面，本发明涉及一种用于监测受试者的肺癌进展的方法，该方法包括：

i)肺部施用缀合物，所述缀合物包括：包含序列SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体、以及可检测标记物；

ii)等待足够的时间以使所述缀合物进入增殖的肺细胞中；以及

iii)通过将成像技术应用于受试者以检测所述缀合物在所述受试者中的积累部位来检测所述增殖的肺细胞，从而检测增殖部位或者对增殖部位成像；

iv)将在iii)中获得的积累部位与在先前测量中获得的积累部位进行比较，

其中，与所述先前测量相比，所述积累部位显著减少或没有改变，表明肺癌没有在进展中，或

其中，与所述先前测量相比，所述积累部位显著增加，表明肺癌正在进展中。

如本文所用，表述“监测肺癌进展”是指对于被诊断患有肺癌的患者，确定疾病的进展或预测临床病况或疾病的可能进程和结果(例如，恶化、部分恢复或完全恢复)。患者的预后通常通过评估指示疾病的有利或不利进程或结果的疾病因素或症状来进行。应理解，术语预后不一定是指以100％准确度预测病况的进程或结果的能力。相反，技术人员会理解，术语“预后”是指某个进程或结果发生的可能性增加。在本发明的上下文中，监测肺癌进展是指使用成像来评估肺肿瘤是在缩小还是在生长。

根据该方面，比较本发明的缀合物在第一时间段(第一受试者样品)的积累部位和在第二时间段(第二受试者样品)的积累部位，使得能够对肺癌进展进行监测。第二受试者样品可以在第二时间段(即在第一时间段之后的任何时间，例如，第一受试者样品之后一天、一周、一个月、两个月、三个月、一年、两年或更长时间)第一测量所来源的患有肺癌的同一受试者。

在具体的实施方案中，在受试者接受治疗(例如化学疗法、放射疗法或手术)之前采集第一受试者样品，并且在治疗之后采集第二受试者样品。在另一个具体的实施方案中，在受试者开始/接受治疗(例如化学疗法、放射疗法或手术)之后采集第一个受试者样品，并且随后在治疗过程中的不同时间段采集第二受试者样品。因此，如果肺癌进展或预后不良，则应设计进一步疗法以治疗所述受试者的所述疾病。

获得能够定位缀合物的积累部位的图像的方法和量化积累部位或计算肿瘤的尺寸或质量的方法是本领域技术人员已知的。肺部施用所述缀合物后，在肿瘤部位积累的缀合物的量将指示肿瘤大小。在同一患者中进行的连续扫描中积累随时间的比较与疾病进展相关。

一旦测量了不同时间段(第一受试者样品和第二受试者样品)的受试者样品中的积累部位，就需要确定第二受试者样品中的积累部位与第一受试者样品中的积累部位相比是否有显著增加、减少或没有变化。这是通过比较第一积累位点和第二积累位点来完成的。

在本发明的上下文中，当研究中的第二受试者样品中的积累部位相对于第一受试者样品中的积累部位减少至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，至少100％(即不存在)时，则认为第二受试者样品中的积累部位相对于第一受试者样品中积累位点的减少是显著减少。

在本发明的上下文中，当研究中的第二受试者样品中的积累部位相对于第一受试者样品中的积累部位增加至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，至少100％、至少110％、至少120％、至少130％、至少140％、至少150％或更多时，则认为第二受试者样品中的积累部位相对于第一受试者样品中积累位点的增加是显著增加。

类似地，当研究中的第二受试者样品中的积累部位表明积累部位在两次测量之间基本恒定时，则认为第二受试者样品中的积累位点相对于第一受试者样品没有变化。例如，恒定的积累表示第一测量不超过105％、不超过104％、不超过103％、不超过102％、不超过101％、不低于99％、不低于98％、不低于97％、不低于97％、不低于96％或不低于95％。

因此，第二受试者样品相对于第一受试者样品的显著增加表明肺癌正在进展中(即，其预后不良)；因此，应该改变施用于研究中的受试者的疗法，并且应该设计一种新疗法来治疗所述受试者的肺癌。相反，如果第二受试者样品相对于第一受试者样品没有实现显著增加，或者甚至第二受试者样品相对于第一受试者样品实现了显著减少，则肺癌不处于进展(即，没有预后不良)。

在另一方面，本发明涉及一种用于监测患有肺癌的受试者对疗法的反应的方法，该方法包括：

iv)将在iii)中获得的积累部位与在施用该疗法之前的先前测量中获得的积累部位进行比较，

其中，与所述先前测量相比，所述积累部位显著减少或没有改变，表明施用于受试者的该疗法是有效的，或

其中，与所述先前测量相比，所述积累部位显著增加，表明施用于受试者的该疗法是无效的。

本发明中使用的表述“监测对疗法的反应”涉及确定患有肺癌的受试者对施用于所述受试者的疗法的反应的可能性。在肺癌治疗中，可以使用多种治疗来尝试消除或控制癌症。用于肺癌的治疗可能涉及主动监测、手术切除、化学疗法、放射疗法或某些组合。哪个选项最好取决于许多因素。由于所有治疗都会具有明显的副作用，因此治疗讨论通常侧重于平衡疗法的目标与生活方式改变的风险。

因此，在这方面，在施用疗法之前采集第一受试者样品，在受试者已经开始/接受治疗(例如化学疗法、手术或放射疗法)之后采集第二受试者样品。该方法允许对先前被诊断患有肺癌的选定受试者的特定治疗进行评估。因此，如果该疗法对治疗所述受试者的肺癌无效(患者没有好转)，则应改变所述疗法并且应设计新疗法以治疗所述受试者的肺癌。根据这些方法可以很容易地跟踪新治疗的进程。相反，如果患者正在好转，则可以维持当前的疗法。

先前已经定义了积累部位“显著减少”、“显著增加”或“没有变化”。

在本发明的上下文中，当施用于受试者的疗法使得本发明的缀合物在患有肺癌并用所述疗法治疗的受试者的肺中的积累减少时，即当施用之后所有可测量的病变会减少或消除时，该施用于受试者的疗法是有效的。理想情况下，应在每次评估时测量所有单维或二维可测量的病变。在一个优选的实施方案中，患者可以表现出完全反应或部分反应。

在一个实施方案中，完全反应意味着通过两个单独的评估确定的所有临床可检测的恶性疾病完全消失。

在另一个实施方案中，部分反应是指所有可测量疾病的最长垂直直径的乘积总和(sum of the products of the longest perpendicular diameters)相对于基线的减少，可评估疾病没有进展，并且没有任何新病变出现，如通过两次连续评估确定的。在一个实施方案中，部分反应可以是减少至少5％。更优选地，部分反应意味着减少50％或更多。

在本发明的上下文中，当施用于受试者的疗法无助于减少本发明的缀合物在患有肺癌并用所述疗法治疗的受试者的肺中积累时，即当施用之后所有可测量的病变都增加时，该施用于受试者的疗法是无效的。

在另一方面，本发明涉及一种缀合物在监测肺癌进展或监测患有肺癌的受试者对疗法的反应的方法中的用途，其中，所述缀合物包括：包含序列SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体、以及可检测标记物。在一个具体的实施方案中，缀合物经肺部施用。

在另一方面，本发明提供了一种用于治疗患有肺癌的受试者的方法，该方法包括施用选自外科手术切除肺癌和/或施用化学疗法和/或放射疗法的治疗，其中，所述受试者通过本文所述的诊断、检测、成像方法来识别。

在另一方面，本发明提供了一种用于治疗患有肺癌的受试者的方法，该方法包括施用选自外科手术切除肺癌和/或施用化学疗法和/或放射疗法的治疗，其中通过本文所述的监测方法评估受试者中肺癌的进展。

本发明的试剂盒

在另一方面，本发明涉及一种用于诊断肺癌的试剂盒，包括：

i)缀合物，包括：包含序列SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体，以及可检测标记物，

ii)用于鼻滴注或鼻吸入第i)项的所述缀合物的装置；以及

iii)包装第i)和ii)项的工具。

在另一方面，本发明涉及根据本发明的试剂盒在诊断肺癌或监测肺癌进展或监测治疗效果中的用途。

本发明还包括试剂盒，该试剂盒包括一种包含根据本发明所述之用途的缀合物的组合物，该试剂盒与用于该组合物的合适的递送装置或施药器相关，所述递送装置或施药器，例如：导管，管，喷雾器，注射器，雾化器，或用于霜剂、微粒剂、丸剂、散剂、液体、凝胶剂等的施药器。

在本发明的上下文中，用于鼻内递送的装置包括喷雾泵系统、用于递送滴剂的吸液管、定量喷雾泵、鼻加压定量吸入器、粉末喷雾系统、呼吸致动的粉末吸入器和鼻粉末吹入器。鼻内递送装置可以填充有单剂量或多剂量的鼻内制剂。

使用肺内途径，可以用定量吸入器施用缀合物。定量吸入器(MDI)提供缀合物的细雾，其空气动力学粒度通常小于5pm。

替代地，干粉吸入器可以用于肺内递送缀合物。干粉吸入器提供单剂量或多剂量的散剂。

用于肺内递送的另一种装置是包括超声喷雾器和空气喷射式喷雾器的喷雾器。在超声喷雾器中，超声波是在超声喷雾器室中由陶瓷压晶体管在电激发时的振动形成的。这会在溶液表面生成气雾剂云。由空气喷射式喷雾器产生的气雾剂是在压缩空气被迫通过孔口时产生的。液体可以从垂直喷嘴中被抽回(伯努利效应)以与空气射流混合，然后使用挡板将其雾化以促进气雾剂云的形成。

在本发明的前述方面的上下文中公开的所有实施方案也适用于本发明的试剂盒。

本发明的缀合物

在另一方面，本发明涉及一种缀合物，包括：

i)包含序列SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体，以及

ii)可检测标记物，优选地选自由造影剂或显像剂组成的组。

在本发明该方面的优选实施方案中，缀合物不包括细胞穿透肽序列。在另一个优选的实施方案中，缀合物不包括促进细胞摄取SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体的化学部分。在本发明的缀合物的另一个优选实施方案中，缀合物不包括荧光标记物或放射性同位素，更优选地，缀合物不包括荧光素-马来酰亚胺(FITC)或选自由¹³¹I、⁹⁰Y、¹⁷⁷Lu、¹⁸⁸Re、⁶⁷Cu、²¹¹At、²¹³Bi、¹²⁵I和¹¹¹In构成的组的放射性同位素。在一个优选的实施方案中，本发明的缀合物不包括细胞穿透肽序列、荧光标记物或放射性同位素，更优选不包括荧光素-马来酰亚胺(FITC)或选自由¹³¹I、⁹⁰Y、¹⁷⁷Lu、¹⁸⁸Re、⁶⁷Cu、²¹¹At、²¹³Bi、¹²⁵I和¹¹¹In构成的组的放射性同位素。

在另一个实施方案中，本发明的缀合物不包括荧光基团、生物素、PEG、氨基酸类似物、非天然氨基酸、磷酸基团、糖基基团、放射性同位素标记物、标签(例如组氨酸标签、Arg-标签、FLAG-标签、Strep-标签)，能够被抗体识别的表位(例如c-myc-标签、HA标签、V5标签、SBP标签、S标签)、钙调蛋白结合肽、纤维素结合结构域、甲壳素结合结构域、谷胱甘肽S-转移酶标签、麦芽糖结合蛋白、NusA、TrxA、DsbA、Avi-标签、氨基酸序列(例如AHGHRP(SEQ IDNO：63)或PIHDHDHPHLVIHSGMTCXXC(SEQ ID NO：64))或β-半乳糖苷酶等。

在一个优选的实施方案中，造影剂或显像剂选自由以下组成的组：¹⁸F、³²P、³³P、⁴⁵Ti、⁴⁷Sc、⁵²Fe、⁵⁹Fe、⁶²Cu、⁶⁴Cu、⁶⁷Ga、⁶⁸Ga、⁷⁵Sc、⁷⁷As、⁸⁶Y、⁸⁹Sr、⁸⁹Zr、⁹⁴Tc、⁹⁴Tc、⁹⁹mTc、⁹⁹Mo、¹⁰⁵Pd、¹⁰⁵Rh、¹¹¹Ag、¹²³I、¹²⁴I、¹⁴²Pr、¹⁴³Pr、¹⁴⁹Pm、¹⁵³Sm、^154-1581Gd、¹⁶¹Tb、¹⁶⁶Dy、¹⁶⁶Ho、¹⁶⁹Er、¹⁷⁵Lu、¹⁸⁶Re、¹⁸⁹Re、¹⁹⁴Ir、¹⁹⁸Au、¹⁹⁹Au、²¹¹Pb、²¹²Bi、²¹²Pb、²²³Ra和²²⁵Ac。在一个更优选的实施方案中，放射性物质或放射性同位素为⁸⁹Zr。

在本发明的前述方面的上下文中公开的所有实施方案也适用于本发明的缀合物。

除非另有说明，否则本文所用的所有术语应以本领域已知的普通含义来理解。在本申请中使用的某些术语的其他更具体的定义如下所述，并且旨在在整个说明书和发明申请专利范围中统一应用，除非另外明确列出的定义提供了更广泛的定义。在整个说明书和发明申请专利范围中，词“包括”和该词的变体并不旨在排除其他技术特征、添加剂、组分或步骤。此外，词“包括”涵盖“由……组成”的情况。在阅读本说明书后，本发明的其他目的、优点和特征对于本领域技术人员将变得显而易见，或者可以通过实施本发明而获悉。此外，本发明涵盖本文描述的具体和特定实施方案的所有可能的组合。

在本说明书和所附的发明申请专利范围中，单数形式的不定冠词(“a”,“an”)和定冠词(“the”)包括了复数的所指物，除非上下文中另有明确规定。不定冠词(术语“a”或“an”)以及术语“一个或多个”和“至少一个”在本文中可以互换使用。此外，在本文中使用的“和/或”应被视为具有或不具有另外一个的两个指定特征或组件/组分中的每一个的具体公开。因此，在本文中在诸如“A和/或B”之类的短语中使用的术语“和/或”旨在包括“A和B”、“A或B”、“A”(单独)和“B”(单独)。同样地，在诸如“A、B和/或C”的短语中使用的术语“和/或”旨在包括以下方面中的每个：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。在整个说明书和发明申请专利范围中结合数值使用的术语“约”表示本领域技术人员熟悉并可接受的精度区间。通常，这种精度区间为±15％。除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本公开的相关领域的普通技术人员通常理解的相同含义。单位、前缀和符号以其国际单位制(SI)接受的形式表示。数值范围包括定义范围的数值。除非另有说明，否则氨基酸序列以从氨基至羧基的方向从左至右书写。本文提供的标题不是对本公开的各个方面或方面的限制，可以通过整体参考说明书来获得本发明的各个方面。相应地，下面直接定义的术语通过参考整个说明书得到更完整地定义。

本发明将通过以下实施例来描述，这些实施例应被认为仅是说明性的，而不是对本发明的范围的限制。

实施例

方法

Omomyc的生产、纯化和标记

逆转录Omomyc肽序列(SEQ ID NO:1)，对其进行优化密码子以在大肠杆菌(E.coli)中表达，在N末端添加蛋氨酸，在pET3a表达载体(Novagen)中克隆，并使用从J.-F.Naud et al.2003.J Mol Biol,326:1577-1595；F.-O.and Mcduff et al.2009.J MolRecognit,22:261-269中所述的Max°纯化方案改编的方案从BL21(DE3)阿拉伯糖-可诱导的

细菌菌株进行纯化。获得的纯化的构建体是SEQ ID NO:4的多肽。通过质谱法和蛋白质印迹分析来确认每个纯化的构建体的身份。根据制造商的指示来进行

660部分(Invitrogen)或去铁胺(deferoxamin)部分(Macrocyclics)与Omomyc的唯一的C-末端半胱氨酸残基的马来酰亚胺的缀合。通过阳离子交换，然后通过尺寸排阻色谱法，从游离的标记试剂中纯化出共价修饰的肽，并通过质谱分析、SDS-PAGE和紫外光谱确认完整的标记和纯度。对于体内施用，使用ToxinEraser^TM Endotoxin RemovalKit(Genscript)进行了额外的纯化步骤，以去除内毒素。使用

LAL ChromogenicEndotoxin Quantification Kit(Thermo Scientific)定量内毒素浓度。缓冲液交换是在Amicon Ultra-15(MerckMillipore)中进行的，排出限为3kDa。

对于Omomyc-DFO的放射性标记，从BV Cyclotron VU(Amsterdam,TheNetherlands)获得了⁸⁹Zr(T_1/2＝78.4h,β⁺＝22.6％；1M草酸中提供～2.7GBq/mL)。用1M的草酸将对应于74MBq的所需体积的⁸⁹Zr-草酸溶液调整为总体积200μL；加入90μL 2M Na₂CO₃，并在室温下孵育3分钟。加入1mL 0.5M HEPES和710μL Omomyc-DFO(2.17mg/mL)，并在室温下在旋转振荡器上孵育60分钟；pH检测为7.0-7.5。将反应混合物上样至预平衡的PD-10柱，并用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗脱为500μL的级分。在剂量校准器(IBC，VeenstraInstruments)中测量收集的级分。用0.02M柠檬酸盐缓冲液(pH 5.0)：乙腈(9：1)作为洗脱液，在ITLC试纸条上(150-771型，Biodex)采用实时薄层色谱(ITLC)进行质量控制。通过在人血清(HS)、PBS和DTPA(50mM)中于37℃孵育24小时来研究Omomyc-DFO-⁸⁹Zr的稳定性。通过如上所述的ITLC测定放射化学纯度。假设在尺寸排阻色谱后Omomyc-DFO-⁸⁹Zr缀合物几乎完全回收，本研究中使用的Omomyc-DFO-⁸⁹Zr的放射化学产率、纯度和比活度分别>98％、>99％和34MBq/mg。因此，该化合物无需进一步纯化即可使用。在37℃的HS和PBS中进行的稳定性研究表明，超过99％的放射性示踪剂在24小时后仍保持完好；而在DTPA中于37℃孵育24小时后，超过96％的放射性示踪剂保持完好，这证明Omomyc-DFO-⁸⁹Zr构成了用于体内研究的合适的探测剂。

药代动力学和生物分布研究

为了通过microPET/CT进行药代动力学和生物分布研究，从JANVIER LABS购买了8周龄的雌性FVB/NRj小鼠。根据国家动物保护指南以及经CIEMAT地区动物护理委员会和动物伦理委员会的批准进行了实验。将小鼠安置在CIEMAT的动物设施中。

对于鼻内施用研究，从诱导室中取出一组接受异氟烷麻醉的5只小鼠，并立即通过移取30μl Omomyc-DFO-⁸⁹Zr(2.9±0.4MBq，2.37±0.5mg Omomyc-DFO/kg体重)到鼻外缘上进行鼻内施用。注射后48小时，在异氟烷麻醉状态下在O₂中通过颈脱位使小鼠安乐死，并立即通过心脏穿刺收集血液。对于生物分布研究，通过如下所述的PET/mCT成像在指定的时间点对小鼠进行成像。对于生物分布研究，切取器官组织，湿称重并用γ射线计数器(2470Wizard²，PerkinElmer)进行放射性计数，同时还对注射剂量的标准样品进行放射性计数。应用Grubbs测试以检测全局数据集中一个离群动物的存在，并丢弃该离群数据。

对于静脉内施用研究，对一组带有已建立的H1975细胞皮下异种移植物(平均大小430mm³)的5只Balb/c-裸鼠在尾静脉施用Omomyc-DFO-⁸⁹Zr(3.2±0.1MBq，2.62±0.3mgOmomyc-DFO/kg体重)。注射后72小时，在采用氧气中的异氟烷的麻醉状态下通过颈脱位使小鼠安乐死，并立即通过心脏穿刺收集血液。对于生物分布研究，通过如下所述的PET/mCT成像在指定的时间点对小鼠成像。最终，在施用后48小时，切取器官组织，湿称重，并用γ射线计数器(2470Wizard²，PerkinElmer)进行放射性计数，同时还对注射剂量的标准样品进行放射性计数。

对于生物分布和肺腺癌治疗研究，每个时间点和病况随机分配至少5只小鼠，并在腺-CRE感染后16周开始治疗。用吸入的异氟烷(AbbVie Farmaceutica S.L.U.)麻醉动物，并鼻内施用总体积30μL的1.4mg/kg的单剂量OmomycCPP-AF660或载体(10mM乙酸钠，pH6.5)，并在指定的时间点处以安乐死。收集组织，并立即通过

Spectrum成像分别使用663nm和690nm波长进行激发和发射将荧光可视化。使用Living

.3.1软件(PerkinElmer)获取并分析荧光信号的测量值。

microPET/CT成像

在鼻内滴注后，立即用小动物Argus PET-CT扫描仪(SEDECAL,Madrid,Spain)扫描小鼠。在注射后的各个时间点(30分钟、4小时、24小时和48小时)对吸入2-2.5％异氟烷麻醉的小鼠进行了PET研究(能量窗口400-700KeV和20分钟静态采集)和CT(电压45kV，电流150μA，8次发射(shots)，360投影和标准分辨率)。使用2D-OSEM(有序子集期望最大化(OrderedSubset Expectation Maximization))算法(16个子集和两次迭代算法)重建PET图像，并进行随机散点校正。通过扫描包含已知活性⁸⁹Zr的圆柱形模体预定的校准因子用于将计数/像素/秒转换为kBq/cm³。PET图像中人工绘制的感兴趣区(ROI)(鼻内递送、口腔和口咽区、食道和肠道)或使用CT解剖学指南从PET图像中选择的ROI(针对肺、肝和肾脏)用于通过将区域中获得的平均示踪剂浓度(kBq/cm³)除以总ID(kBq)来确定以ID的百分比/g组织为单位的平均放射性示踪剂积累(衰减校正至注射时)。通过将获得的平均示踪剂浓度(kBq/cm³)乘以ROI体积(cm³)，计算出ROI中的注射剂量的百分比。通过比较最终扫描(48小时)与动物被安乐死后对器官的直接测定，还确定了针对肺、肾和肝脏的单独的图像校准因子。这些校准因子用于将从PET成像获得的ID的百分比/g标准化为注射后不同时间点的活性浓度。使用图像分析软件ITK-SNAP(www.itksnap.org)分析图像。

免疫组织化学

通过颈脱位使小鼠安乐死。切取肺，并通过气管先后用PBS和3.7％PFA灌注，固定过夜，转移至70％乙醇中并包埋在石蜡中。将切片切成4微米厚，并用H&E染色以进行病理检查。对于抗Omomyc免疫组织化学，通过在0.01M柠檬酸盐缓冲液(pH 6.0)中在400W微波中加热20分钟来进行抗原修复。在3％BSA中封闭45分钟并在PBS中洗涤后，将切片与最终浓度为0.02mg/mL的兔抗Omomyc多克隆第一抗体(亲和纯化并针对对MYC表位的识别进行选择)在4℃孵育过夜。PBS洗涤后，将切片与以1/200稀释的山羊抗兔IgG(H+L)–

488缀合物(Thermo Fisher Scientific A-11008)孵育，并用以1/10000稀释的DAPI(LifeTechnologies D1306)染色，用水洗涤一次，并用荧光封片介质(Dako S3023)封片。

小鼠

通过Transnetyx对KRas^LSL-G12D/+小鼠进行基因分型，雄性和雌性中肺肿瘤的产生如前人所述(E.L.Jackson.2001.Genes&Development,15:3243-3248)。将动物饲养在混合的C57BL/6J x FVBN背景中。每个时间点和情况随机分配至少5只小鼠，并在Adeno-Cre感染后16周开始治疗(进行了两次生物学重复实验)。动物通过吸入的异氟烷(AbbVieFarmaceutica S.L.U.)麻醉，并且鼻内施用总体积为30μL的Omomyc或载体(10mM醋酸钠，pH6.5)。

统计分析

所有分析和图形均使用GraphPad Prism 5软件进行。使用D’Agostino-Pearson检验评估了每个组的数据的正态分布。对于正态分布的数据，使用Student t-检验或ANOVA(参数)分析样本平均值的差异，对于非正态分布的数据，则使用Mann-Whitney或Kruskal-Wallis检验进行分析。使用F检验计算各组方差的差异。

实施例1：在肺腺癌的小鼠模型中，直接经肺部施用后，Omomyc小型蛋白主要定位于肺肿瘤中。

为了评估Omomyc小型蛋白在体内的潜在诊断效用，发明人首先分析了鼻内施用(i.n.)后其组织分布，鼻内施用是先前已被证明能够在小鼠中直接经肺部递送大分子制剂的技术。发明人首先将去铁胺-马来酰亚胺(DFO)基团共价连接到Omomyc，并用⁸⁹Zr对其进行放射性标记，然后通过离体放射计数来测量在健康小鼠中的生物分布和药代动力学特性(图1A)。平均来说，8％的Omomyc-DFO-⁸⁹Zr剂量(2.37mg/kg)在鼻内施用后(30分钟内)很容易到达肺部，并在那里存留超过48小时(图1A)。使用特异性抗Omomyc抗体的免疫荧光证实，在鼻内滴注后4小时，在治疗小鼠的肺上皮内检测到未标记的Omomyc小型蛋白(未标记的Omomyc小型蛋白在治疗小鼠的肺上皮内的部分核定位)(图1B)。为了确认该方法可以应用于荷肺腺癌的小鼠，发明人使用表征良好的KRas^LSL-G12D/+诱导的肺腺癌小鼠模型(E.L.Jackson.2001.Genes&Development,15:3243-3248)重复了该程序。小鼠的mPET/mCT成像显示在鼻内滴注后24小时，Omomyc-DFO-⁸⁹Zr主要位于肺肿瘤中(图1C)。尽管尚不清楚这种优先肿瘤保留的确切原因，但可能与通常在癌症中观察到的肿瘤血管或代谢改变有关。

在进一步的实验中，在AdCre诱导后18周，将2mg/kg的Omomyc-DFO-⁸⁹Zr经鼻内施用于荷瘤Kras^G12D小鼠。鼻内施用后24小时获得图像(图2A)，我们可以看到在荷瘤小鼠中在24小时时存在的肽与肿瘤有共同的定位(图2A)，而在无肿瘤的小鼠中，同一时间点的肺分布在整个肺部更为分散(图2B)。图2A中的数字表示Omomyc-DFO-⁸⁹Zr的浓度，其中较高的数字对应于缀合物的较高浓度。图2B显示了健康对照的肺部的扩散性和非特异性标记的过度曝光的图像，因此未显示定量结果。此外，与健康小鼠相比，荷瘤小鼠中分配到肺部的总量优于健康小鼠，尽管个体间存在高度的变异性(图2C)。

使用能够通过IVIS

进行离体成像的不同标记物(这次使用荧光探针AF660代替放射性标记物)进行了相同的实验。用1.4mg/kg的OmomycCPP-AF660单次处理后4小时(图3A)，在小鼠的肺部中检测到荧光信号。鼻内施用后24小时，虽然大部分OmomycCPP-AF660已从正常组织中清除，但在肺肿瘤中仍可明确地观察到(图3B)。再次，给小鼠鼻内施用后，荧光信号与肿瘤有共同的定位(图3)。

实施例2：在荷肺肿瘤的小鼠中静脉内施用Omomyc后的生物分布。

五只荷肺的小鼠静脉内施用29.1mg/kg的Omomyc-DFO，注射后72小时进行PET/CT成像。如图4所示，与其他组相比，肺部中的Omomyc摄取没有显著增加。该结果证明了当直接向肺施用时，Omomyc作为肺肿瘤示踪剂的特异性。

序列表

<110> 瓦尔希伯伦私人肿瘤研究基金会

卡塔兰研究和高级研究院

佩普托米克公司

<120> 诊断肺癌的方法

<130> P17441TW00

<150> EP19382195.6

<151> 2019-03-19

<160> 65

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 90

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> 重组蛋白

<400> 1

Thr Glu Glu Asn Val Lys Arg Arg Thr His Asn Val Leu Glu Arg Gln

1 5 10 15

Arg Arg Asn Glu Leu Lys Arg Ser Phe Phe Ala Leu Arg Asp Gln Ile

20 25 30

Pro Glu Leu Glu Asn Asn Glu Lys Ala Pro Lys Val Val Ile Leu Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Ala Tyr Ile Leu Ser Val Gln Ala Glu Thr Gln Lys Leu

50 55 60

Ile Ser Glu Ile Asp Leu Leu Arg Lys Gln Asn Glu Gln Leu Lys His

65 70 75 80

Lys Leu Glu Gln Leu Arg Asn Ser Cys Ala

85 90

<210> 2

<211> 454

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 2

Met Asp Phe Phe Arg Val Val Glu Asn Gln Gln Pro Pro Ala Thr Met

1 5 10 15

Pro Leu Asn Val Ser Phe Thr Asn Arg Asn Tyr Asp Leu Asp Tyr Asp

20 25 30

Ser Val Gln Pro Tyr Phe Tyr Cys Asp Glu Glu Glu Asn Phe Tyr Gln

35 40 45

Gln Gln Gln Gln Ser Glu Leu Gln Pro Pro Ala Pro Ser Glu Asp Ile

50 55 60

Trp Lys Lys Phe Glu Leu Leu Pro Thr Pro Pro Leu Ser Pro Ser Arg

65 70 75 80

Arg Ser Gly Leu Cys Ser Pro Ser Tyr Val Ala Val Thr Pro Phe Ser

85 90 95

Leu Arg Gly Asp Asn Asp Gly Gly Gly Gly Ser Phe Ser Thr Ala Asp

100 105 110

Gln Leu Glu Met Val Thr Glu Leu Leu Gly Gly Asp Met Val Asn Gln

115 120 125

Ser Phe Ile Cys Asp Pro Asp Asp Glu Thr Phe Ile Lys Asn Ile Ile

130 135 140

Ile Gln Asp Cys Met Trp Ser Gly Phe Ser Ala Ala Ala Lys Leu Val

145 150 155 160

Ser Glu Lys Leu Ala Ser Tyr Gln Ala Ala Arg Lys Asp Ser Gly Ser

165 170 175

Pro Asn Pro Ala Arg Gly His Ser Val Cys Ser Thr Ser Ser Leu Tyr

180 185 190

Leu Gln Asp Leu Ser Ala Ala Ala Ser Glu Cys Ile Asp Pro Ser Val

195 200 205

Val Phe Pro Tyr Pro Leu Asn Asp Ser Ser Ser Pro Lys Ser Cys Ala

210 215 220

Ser Gln Asp Ser Ser Ala Phe Ser Pro Ser Ser Asp Ser Leu Leu Ser

225 230 235 240

Ser Thr Glu Ser Ser Pro Gln Gly Ser Pro Glu Pro Leu Val Leu His

245 250 255

Glu Glu Thr Pro Pro Thr Thr Ser Ser Asp Ser Glu Glu Glu Gln Glu

260 265 270

Asp Glu Glu Glu Ile Asp Val Val Ser Val Glu Lys Arg Gln Ala Pro

275 280 285

Gly Lys Arg Ser Glu Ser Gly Ser Pro Ser Ala Gly Gly His Ser Lys

290 295 300

Pro Pro His Ser Pro Leu Val Leu Lys Arg Cys His Val Ser Thr His

305 310 315 320

Gln His Asn Tyr Ala Ala Pro Pro Ser Thr Arg Lys Asp Tyr Pro Ala

325 330 335

Ala Lys Arg Val Lys Leu Asp Ser Val Arg Val Leu Arg Gln Ile Ser

340 345 350

Asn Asn Arg Lys Cys Thr Ser Pro Arg Ser Ser Asp Thr Glu Glu Asn

355 360 365

Val Lys Arg Arg Thr His Asn Val Leu Glu Arg Gln Arg Arg Asn Glu

370 375 380

Leu Lys Arg Ser Phe Phe Ala Leu Arg Asp Gln Ile Pro Glu Leu Glu

385 390 395 400

Asn Asn Glu Lys Ala Pro Lys Val Val Ile Leu Lys Lys Ala Thr Ala

405 410 415

Tyr Ile Leu Ser Val Gln Ala Glu Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu

420 425 430

Asp Leu Leu Arg Lys Arg Arg Glu Gln Leu Lys His Lys Leu Glu Gln

435 440 445

Leu Arg Asn Ser Cys Ala

450

<210> 3

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> 重组蛋白

<400> 3

Arg Gln Arg Arg Asn Glu Leu Lys Arg Ser Phe

1 5 10

<210> 4

<211> 91

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> 重组蛋白

<400> 4

Met Thr Glu Glu Asn Val Lys Arg Arg Thr His Asn Val Leu Glu Arg

1 5 10 15

Gln Arg Arg Asn Glu Leu Lys Arg Ser Phe Phe Ala Leu Arg Asp Gln

20 25 30

Ile Pro Glu Leu Glu Asn Asn Glu Lys Ala Pro Lys Val Val Ile Leu

35 40 45

Lys Lys Ala Thr Ala Tyr Ile Leu Ser Val Gln Ala Glu Thr Gln Lys

50 55 60

Leu Ile Ser Glu Ile Asp Leu Leu Arg Lys Gln Asn Glu Gln Leu Lys

65 70 75 80

His Lys Leu Glu Gln Leu Arg Asn Ser Cys Ala

85 90

<210> 5

<211> 90

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> 重组蛋白

<220>

<221> 变体

<222> (89)..(89)

<223> Xaa可以为除半胱氨酸外的任何氨基酸

<400> 5

Thr Glu Glu Asn Val Lys Arg Arg Thr His Asn Val Leu Glu Arg Gln

1 5 10 15

Arg Arg Asn Glu Leu Lys Arg Ser Phe Phe Ala Leu Arg Asp Gln Ile

20 25 30

Pro Glu Leu Glu Asn Asn Glu Lys Ala Pro Lys Val Val Ile Leu Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Ala Tyr Ile Leu Ser Val Gln Ala Glu Thr Gln Lys Leu

50 55 60

Ile Ser Glu Ile Asp Leu Leu Arg Lys Gln Asn Glu Gln Leu Lys His

65 70 75 80

Lys Leu Glu Gln Leu Arg Asn Ser Xaa Ala

85 90

<210> 6

<211> 91

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> 重组蛋白

<220>

<221> 变体

<222> (90)..(90)

<223> Xaa可以为除半胱氨酸外的任何氨基酸

<400> 6

Met Thr Glu Glu Asn Val Lys Arg Arg Thr His Asn Val Leu Glu Arg

1 5 10 15

Gln Arg Arg Asn Glu Leu Lys Arg Ser Phe Phe Ala Leu Arg Asp Gln

20 25 30

Ile Pro Glu Leu Glu Asn Asn Glu Lys Ala Pro Lys Val Val Ile Leu

35 40 45

Lys Lys Ala Thr Ala Tyr Ile Leu Ser Val Gln Ala Glu Thr Gln Lys

50 55 60

Leu Ile Ser Glu Ile Asp Leu Leu Arg Lys Gln Asn Glu Gln Leu Lys

65 70 75 80

His Lys Leu Glu Gln Leu Arg Asn Ser Xaa Ala

85 90

<210> 7

<211> 90

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> 重组蛋白

<400> 7

Thr Glu Glu Asn Val Lys Arg Arg Thr His Asn Val Leu Glu Arg Gln

1 5 10 15

Arg Arg Asn Glu Leu Lys Arg Ser Phe Phe Ala Leu Arg Asp Gln Ile

20 25 30

Pro Glu Leu Glu Asn Asn Glu Lys Ala Pro Lys Val Val Ile Leu Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Ala Tyr Ile Leu Ser Val Gln Ala Glu Thr Gln Lys Leu

50 55 60

Ile Ser Glu Ile Asp Leu Leu Arg Lys Gln Asn Glu Gln Leu Lys His

65 70 75 80

Lys Leu Glu Gln Leu Arg Asn Ser Ser Ala

85 90

<210> 8

<211> 91

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> 重组蛋白

<400> 8

Met Thr Glu Glu Asn Val Lys Arg Arg Thr His Asn Val Leu Glu Arg

1 5 10 15

Gln Arg Arg Asn Glu Leu Lys Arg Ser Phe Phe Ala Leu Arg Asp Gln

20 25 30

Ile Pro Glu Leu Glu Asn Asn Glu Lys Ala Pro Lys Val Val Ile Leu

35 40 45

Lys Lys Ala Thr Ala Tyr Ile Leu Ser Val Gln Ala Glu Thr Gln Lys

50 55 60

Leu Ile Ser Glu Ile Asp Leu Leu Arg Lys Gln Asn Glu Gln Leu Lys

65 70 75 80

His Lys Leu Glu Gln Leu Arg Asn Ser Ser Ala

85 90

<210> 9

<211> 90

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> 重组蛋白

<400> 9

Thr Glu Glu Asn Val Lys Arg Arg Thr His Asn Val Leu Glu Arg Gln

1 5 10 15

Arg Arg Asn Glu Leu Lys Arg Ser Phe Phe Ala Leu Arg Asp Gln Ile

20 25 30

Pro Glu Leu Glu Asn Asn Glu Lys Ala Pro Lys Val Val Ile Leu Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Ala Tyr Ile Leu Ser Val Gln Ala Glu Thr Gln Lys Leu

50 55 60

Ile Ser Glu Ile Asp Leu Leu Arg Lys Gln Asn Glu Gln Leu Lys His

65 70 75 80

Lys Leu Glu Gln Leu Arg Asn Ser Ala Ala

85 90

<210> 10

<211> 91

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> 重组蛋白

<400> 10

Met Thr Glu Glu Asn Val Lys Arg Arg Thr His Asn Val Leu Glu Arg

1 5 10 15

Gln Arg Arg Asn Glu Leu Lys Arg Ser Phe Phe Ala Leu Arg Asp Gln

20 25 30

Ile Pro Glu Leu Glu Asn Asn Glu Lys Ala Pro Lys Val Val Ile Leu

35 40 45

Lys Lys Ala Thr Ala Tyr Ile Leu Ser Val Gln Ala Glu Thr Gln Lys

50 55 60

Leu Ile Ser Glu Ile Asp Leu Leu Arg Lys Gln Asn Glu Gln Leu Lys

65 70 75 80

His Lys Leu Glu Gln Leu Arg Asn Ser Ala Ala

85 90

<210> 11

<211> 101

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> 重组蛋白

<400> 11

Met Thr Glu Glu Asn Val Lys Arg Arg Thr His Asn Val Leu Glu Arg

1 5 10 15

Gln Arg Arg Asn Glu Leu Lys Arg Ser Phe Phe Ala Leu Arg Asp Gln

20 25 30

Ile Pro Glu Leu Glu Asn Asn Glu Lys Ala Pro Lys Val Val Ile Leu

35 40 45

Lys Lys Ala Thr Ala Tyr Ile Leu Ser Val Gln Ala Glu Thr Gln Lys

50 55 60

Leu Ile Ser Glu Ile Asp Leu Leu Arg Lys Gln Asn Glu Gln Leu Lys

65 70 75 80

His Lys Leu Glu Gln Leu Arg Asn Ser Cys Ala Gly Arg Lys Lys Arg

85 90 95

Arg Gln Arg Arg Arg

100

<210> 12

<211> 99

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> 重组蛋白

<400> 12

Met Thr Glu Glu Asn Val Lys Arg Arg Thr His Asn Val Leu Glu Arg

1 5 10 15

Gln Arg Arg Asn Glu Leu Lys Arg Ser Phe Phe Ala Leu Arg Asp Gln

20 25 30

Ile Pro Glu Leu Glu Asn Asn Glu Lys Ala Pro Lys Val Val Ile Leu

35 40 45

Lys Lys Ala Thr Ala Tyr Ile Leu Ser Val Gln Ala Glu Thr Gln Lys

50 55 60

Leu Ile Ser Glu Ile Asp Leu Leu Arg Lys Gln Asn Glu Gln Leu Lys

65 70 75 80

His Lys Leu Glu Gln Leu Arg Asn Ser Cys Ala Arg Arg Arg Arg Arg

85 90 95

Arg Leu Arg

<210> 13

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> 果蝇触角足蛋白中发现的CPP序列

<400> 13

Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys

1 5 10 15

<210> 14

<211> 34

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> 单纯疱疹病毒1（HSV-1）VP22 DNA结合蛋白中发现的CPP序列

<400> 14

Asp Ala Ala Thr Ala Thr Arg Gly Arg Ser Ala Ala Ser Arg Pro Thr

1 5 10 15

Glu Arg Pro Arg Ala Pro Ala Arg Ser Ala Ser Arg Pro Arg Arg Pro

20 25 30

Val Glu

<210> 15

<211> 24

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> Bac-7的CPP序列

<400> 15

Arg Arg Ile Arg Pro Arg Pro Pro Arg Leu Pro Arg Pro Arg Pro Arg

1 5 10 15

Pro Leu Pro Phe Pro Arg Pro Gly

20

<210> 16

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> HIV-1 TAT蛋白的CPP序列(氨基酸 49-57)

<400> 16

Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg

1 5

<210> 17

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> HIV-1 TAT蛋白的CPP序列(氨基酸 48-60)

<400> 17

Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Thr Pro Gln

1 5 10

<210> 18

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> HIV-1 TAT蛋白的CPP序列(氨基酸 47-57)

<400> 18

Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg

1 5 10

<210> 19

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> S413-PV 肽的CPP序列

<400> 19

Ala Leu Trp Lys Thr Leu Leu Lys Lys Val Leu Lys Ala Pro Lys Lys

1 5 10 15

Lys Arg Lys Val

20

<210> 20

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> 穿膜肽的CPP序列

<400> 20

Arg Gln Ile Lys Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys

1 5 10 15

<210> 21

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> SynB1的CPP序列

<400> 21

Arg Gly Gly Arg Leu Ser Tyr Ser Arg Arg Arg Phe Ser Thr Ser Thr

1 5 10 15

Gly Arg

<210> 22

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> SynB3的CPP序列

<400> 22

Arg Arg Leu Ser Tyr Ser Arg Arg Arg Phe

1 5 10

<210> 23

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> PTD-4的CPP序列

<400> 23

Pro Ile Arg Arg Arg Lys Lys Leu Arg Arg Leu Lys

1 5 10

<210> 24

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> PTD-5的CPP序列

<400> 24

Arg Arg Gln Arg Arg Thr Ser Lys Leu Met Lys Arg

1 5 10

<210> 25

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> FHV COat的CPP序列(氨基酸 35-49)

<400> 25

Arg Arg Arg Arg Asn Arg Thr Arg Arg Asn Arg Arg Arg Val Arg

1 5 10 15

<210> 26

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> BMV Gag的CPP序列 (氨基酸7-25)

<400> 26

Lys Met Thr Arg Ala Gln Arg Arg Ala Ala Ala Arg Arg Asn Arg Trp

1 5 10 15

Thr Ala Arg

<210> 27

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> HTLV-II Rex 的CPP序列(氨基酸 4-16)

<400> 27

Thr Arg Arg Gln Arg Thr Arg Arg Ala Arg Arg Asn Arg

1 5 10

<210> 28

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> D-Tat的CPP序列

<400> 28

Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Pro Pro Gln

1 5 10

<210> 29

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> R9-Tat的的CPP序列

<400> 29

Gly Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Pro Gln

1 5 10

<210> 30

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> MAP的CPP序列

<400> 30

Lys Leu Ala Leu Lys Leu Ala Leu Lys Leu Ala Leu Ala Leu Lys Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 31

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> SBP的CPP序列

<400> 31

Met Gly Leu Gly Leu His Leu Leu Val Leu Ala Ala Ala Leu Gln Gly

1 5 10 15

Ala Trp Ser Gln Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val

20 25

<210> 32

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> FBP的CPP序列

<400> 32

Gly Ala Leu Phe Leu Gly Trp Leu Gly Ala Ala Gly Ser Thr Met Gly

1 5 10 15

Ala Trp Ser Gln Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val

20 25

<210> 33

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> MPG的CPP序列

<400> 33

Gly Ala Leu Phe Leu Gly Phe Leu Gly Ala Ala Gly Ser Thr Met Gly

1 5 10 15

Ala Trp Ser Gln Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val

20 25

<210> 34

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> MPG(ENLS)的CPP序列

<400> 34

Gly Ala Leu Phe Leu Gly Phe Leu Gly Ala Ala Gly Ser Thr Met Gly

1 5 10 15

Ala Trp Ser Gln Pro Lys Ser Lys Arg Lys Val

20 25

<210> 35

<211> 21

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> Pep-1的CPP序列

<400> 35

Lys Glu Thr Trp Trp Glu Thr Trp Trp Thr Glu Trp Ser Gln Pro Lys

1 5 10 15

Lys Lys Arg Lys Val

20

<210> 36

<211> 21

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> Pep-2的CPP序列

<400> 36

Lys Glu Thr Trp Phe Glu Thr Trp Phe Thr Glu Trp Ser Gln Pro Lys

1 5 10 15

Lys Lys Arg Lys Val

20

<210> 37

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> CPP序列

<400> 37

Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg

1 5 10

<210> 38

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> CPP 序列

<400> 38

Arg Arg Arg Arg Arg Arg Leu Arg

1 5

<210> 39

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> CPP 序列

<400> 39

Arg Arg Gln Arg Arg Thr Ser Lys Leu Met Lys Arg

1 5 10

<210> 40

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> 转运肽

<400> 40

Gly Trp Thr Leu Asn Ser Ala Gly Tyr Leu Leu Gly Lys Ile Asn Leu

1 5 10 15

Lys Ala Leu Ala Ala Leu Ala Lys Lys Ile Leu

20 25

<210> 41

<211> 33

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> CPP序列

<400> 41

Lys Ala Leu Ala Trp Glu Ala Lys Leu Ala Lys Ala Leu Ala Lys Ala

1 5 10 15

Leu Ala Lys His Leu Ala Lys Ala Leu Ala Lys Ala Leu Lys Cys Glu

20 25 30

Ala

<210> 42

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> CPP序列

<400> 42

Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys

1 5 10 15

<210> 43

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> CPP序列

<400> 43

Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg

1 5 10

<210> 44

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> CPP序列

<400> 44

Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg

1 5

<210> 45

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> CPP序列

<400> 45

Tyr Ala Arg Ala Ala Ala Arg Gln Ala Arg Ala

1 5 10

<210> 46

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> CPP序列

<400> 46

Thr His Arg Leu Pro Arg Arg Arg Arg Arg Arg

1 5 10

<210> 47

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> CPP序列

<400> 47

Gly Gly Arg Arg Ala Arg Arg Arg Arg Arg Arg

1 5 10

<210> 48

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> SV40 大T抗原的NLS 序列

<400> 48

Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val

1 5

<210> 49

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> 核质蛋白的NLS序列

<400> 49

Lys Arg Pro Ala Ala Thr Lys Lys Ala Gly Gln Ala Lys Lys Lys Lys

1 5 10 15

<210> 50

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> CBP80的NLS序列

<400> 50

Arg Arg Arg His Ser Asp Glu Asn Asp Gly Gly Gln Pro His Lys Arg

1 5 10 15

Arg Lys

<210> 51

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> HIV-I Rev 蛋白的NLS序列

<400> 51

Arg Gln Ala Arg Arg Asn Arg Arg Arg Trp Glu

1 5 10

<210> 52

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> HTLV-I Rex的NLS序列

<400> 52

Met Pro Lys Thr Arg Arg Arg Pro Arg Arg Ser Gln Arg Lys Arg Pro

1 5 10 15

Pro Thr

<210> 53

<211> 37

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> hnRNP A的NLS

<400> 53

Asn Gln Ser Ser Asn Phe Gly Pro Met Lys Gly Gly Asn Phe Gly Gly

1 5 10 15

Arg Ser Ser Gly Pro Tyr Gly Gly Gly Gly Gln Tyr Phe Lys Pro Arg

20 25 30

Asn Gln Gly Gly Tyr

35

<210> 54

<211> 43

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> rpL23a的NLS

<400> 54

Val His Ser His Lys Lys Lys Lys Ile Arg Thr Ser Pro Thr Phe Thr

1 5 10 15

Thr Pro Lys Thr Leu Arg Leu Arg Arg Gln Pro Lys Tyr Pro Arg Lys

20 25 30

Ser Ala Pro Arg Arg Asn Lys Leu Asp His Tyr

35 40

<210> 55

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> NLS序列

<220>

<221> 变体

<222> (2)..(2)

<223> /代替="R或K"

<220>

<221> 变体

<222> (3)..(3)

<223> Xaa可以是任何天然氨基酸

<220>

<221> 变体

<222> (4)..(4)

<223> /代替="R或K"

<400> 55

Lys Xaa Xaa Xaa

1

<210> 56

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> M1 肽(Myc NLS)

<400> 56

Pro Ala Ala Lys Arg Val Lys Leu Asp

1 5

<210> 57

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> M2 肽 (Myc NLS)

<400> 57

Arg Gln Arg Arg Asn Glu Leu Lys Arg Ser Phe

1 5 10

<210> 58

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> 柔性肽

<400> 58

Gly Pro Arg Arg Arg Arg

1 5

<210> 59

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> FLAG-标签

<400> 59

Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys

1 5

<210> 60

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> Strep-标签

<400> 60

Trp Ser His Pro Gln Phe Glu Lys

1 5

<210> 61

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> HA-标签

<400> 61

Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala

1 5

<210> 62

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> V5 标签

<400> 62

Gly Lys Pro Ile Pro Asn Pro Leu Leu Gly Leu Asp Ser Thr

1 5 10

<210> 63

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> 肽标签

<400> 63

Ala His Gly His Arg Pro

1 5

<210> 64

<211> 21

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> 肽标签

<220>

<221> misc_feature

<222> (19)..(20)

<223> Xaa可以是任何天然氨基酸

<400> 64

Pro Ile His Asp His Asp His Pro His Leu Val Ile His Ser Gly Met

1 5 10 15

Thr Cys Xaa Xaa Cys

20

<210> 65

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<220>

<223> CPP

<400> 65

Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg

1 5

Claims

1.一种缀合物，包括：

i)包含序列SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体，以及

ii)可检测标记物，

其用于通过肺部施用所述缀合物对有此需要的受试者进行肺癌的体内诊断的方法。

2.根据权利要求1所述之用途的缀合物，其中，SEQ ID NO：1的功能等效变体选自由SEQID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9和SEQ IDNO：10组成的组。

3.根据权利要求1至2中任一项所述之用途的缀合物，其中，所述可检测标记物选自由¹⁸F、³²P、³³P、⁴⁵Ti、⁴⁷Sc、⁵²Fe、⁵⁹Fe、⁶²Cu、⁶⁴Cu、⁶⁷Ga、⁶⁸Ga、⁷⁵Sc、⁷⁷As、⁸⁶Y、⁸⁹Sr、⁸⁹Zr、⁹⁴Tc、⁹⁴Tc、⁹⁹mTc、⁹⁹Mo、¹⁰⁵Pd、¹⁰⁵Rh、¹¹¹Ag、¹²³I、¹²⁴I、¹⁴²Pr、¹⁴³Pr、¹⁴⁹Pm、¹⁵³Sm、¹⁵⁴-¹⁵⁸¹Gd、¹⁶¹Tb、¹⁶⁶Dy、¹⁶⁶Ho、¹⁶⁹Er、¹⁷⁵Lu、¹⁸⁶Re、¹⁸⁹Re、¹⁹⁴Ir、¹⁹⁸Au、¹⁹⁹Au、²¹¹Pb、²¹²Bi、²¹²Pb、²²³Ra和²²⁵Ac和⁸⁹Zr组成的组。

4.根据权利要求1至3中任一项所述之用途的缀合物，其中，癌细胞的检测在施用所述缀合物后通过mPET/mCT成像进行。

5.根据权利要求1至4中任一项所述之用途的缀合物，其中，所述肺癌是选自小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)的原发性肿瘤，或者是癌症转移。

6.根据权利要求1至5中任一项所述之用途的缀合物，其中，所述肺癌是腺癌。

7.根据权利要求6所述之用途的缀合物，其中，所述肺腺癌是KRAS突变腺癌。

8.根据权利要求1至7中任一项所述之用途的缀合物，其中，所述缀合物的检测在将所述缀合物施用至有此需要的受试者后30分钟至96小时之间进行。

9.根据权利要求1至8中任一项所述之用途的缀合物，其中，所述肺部施用通过鼻滴注、鼻吸入或口腔吸入进行。

10.根据权利要求1至9中任一项所述之用途的缀合物，其中，所述缀合物的剂量范围为0.04mg/Kg至0.8mg/Kg、或1.48mg/m²至30mg/m²，更优选为0.19mg/kg或7mg/m²。

11.根据权利要求1至10中任一项所述之用途的缀合物，其中，在诊断步骤之后，将所述缀合物再施用至少一次以监测肺癌的进展或施用至患有肺癌的受试者的疗法的效果。

12.一种用于检测受试者中的肺癌细胞或者用于对受试者中的肺癌细胞成像的方法，包括：

iii)通过将成像技术应用于所述受试者以检测所述缀合物在所述受试者中的积累部位来检测所述增殖的肺细胞，从而检测增殖部位或者对增殖部位成像。

13.一种用于诊断肺癌的试剂盒，包括：

i)缀合物，包括：包含序列SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体、以及可检测标记物；

ii)用于肺部施用第i)项的所述缀合物的装置；以及

iii)用于包装第i)项和第ii)项的工具。

14.一种根据权利要求13所述的试剂盒在用于诊断肺癌或用于监测肺癌的进展或用于监测治疗的效果的用途。

15.一种缀合物，包括：

i)包含序列SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体，以及

ii)可检测标记物，选自由造影剂或显像剂组成的组。

16.一种用于检测受试者肺肿瘤的诊断方法，包括：

i)经肺部途径施用缀合物，所述缀合物包括：包含序列SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体、以及可检测标记物；

ii)等待足够的时间以使所述缀合物进入增殖的肺细胞中；

iii)通过将成像技术应用于所述受试者以检测所述缀合物在所述受试者中的积累部位来检测所述增殖的肺细胞，从而检测增殖部位或者对增殖部位成像；以及

iv)如果检测到特异性标记物，则识别出肺肿瘤。

17.一种诊断和治疗疑似患有肺癌的受试者的方法，其中，所述方法包括：

ii)等待足够的时间以使所述缀合物进入增殖的肺细胞中；

iii)通过将成像技术应用于所述受试者以检测所述缀合物在所述受试者中的积累部位来检测所述增殖的肺细胞，从而检测增殖部位或者对增殖部位成像；

iv)如果检测到特异性标记物，则识别出肺肿瘤；以及

v)对识别患有肺癌的受试者施用选自手术切除肺肿瘤和/或施用化学疗法和/或放射疗法的治疗。

18.一种用于监测受试者的肺癌进展的方法，所述方法包括：

iv)将在iii)中获得的积累部位与先前测量中获得的积累部位进行比较；

19.一种用于监测患有肺癌的受试者对疗法的反应的方法，所述方法包括：

iv)将在iii)中获得的积累部位与在施用所述疗法前的先前测量中获得的积累部位进行比较；

20.包括包含序列SEQ ID NO：1的多肽或其功能等效变体以及可检测标记物的缀合物在监测肺癌进展或监测患有肺癌的受试者对疗法的反应的方法中的用途。

21.根据权利要求20所述的用途，其中，所述缀合物经肺部施用。

22.一种治疗患有肺癌的受试者的方法，包括施用选自手术切除肺肿瘤和/或施用化学疗法和/或放射疗法的治疗，其中，所述受试者通过权利要求16的诊断方法或通过权利要求12的检测或成像方法来识别。

23.一种治疗患有肺癌的受试者的方法，包括施用选自手术切除肺肿瘤和/或施用化学疗法和/或放射疗法的治疗，其中，通过权利要求18或19的监测方法来评估所述受试者的肺癌进展。