CN113773272B

CN113773272B - 千金二萜烷no供体衍生物及其制备方法和用途

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Publication number: CN113773272B
Application number: CN202111239344.4A
Authority: CN
Inventors: 陈丽霞; 李华; 王望; 孙德娟; 李雨桐; 杨月影
Original assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Current assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Priority date: 2021-10-25
Filing date: 2021-10-25
Publication date: 2023-03-31
Anticipated expiration: 2041-10-25
Also published as: CN113773272A

Abstract

一种千金二萜烷NO供体衍生物及其制备方法和用途，属于医药技术领域，涉及一种通式(I)或通式(II)千金二萜烷NO供体衍生物，其药学上可接受的盐和溶剂化物，以及含有该千金二萜烷NO供体衍生物的药物组合物。还涉及该化合物的制备方法以及在制备治疗和/或预防炎症药物中的应用。其中，通式(I)或通式(II)中的R如权利要求书和说明书所述。

Description

千金二萜烷NO供体衍生物及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种千金二萜烷NO供体衍生物及其制备方法和用途，具体涉及一种新的千金二萜烷NO供体衍生物、其药学上可接受的盐和溶剂化物，以及含有该千金二萜烷NO供体衍生物的药物组合物。还涉及该化合物的制备方法以及在制备治疗和/ 或预防炎症药物中的应用。

背景技术

非甾体类抗炎药(NSAID)是临床上广泛应用的具有解热镇痛、抗炎、抗风湿作用的药物。然而，严重的胃肠道不良反应限制了它们的应用。一氧化氮(NO)是内源性化合物，其具有明显的保护胃肠道粘膜，维持血管张力，抑制血小板、白细胞的聚集，防止血栓形成和改善血液循环的作用。研究表明，NO供体(即拥有释放NO能力的分子或基团)与NSAID偶联生成的一氧化氮供体非甾体类抗炎药(NO-NSAID)具有降低NSAID的不良反应(如胃肠道及心血管不良反应)和增加NSAID疗效的特点。

千金子为大戟科(Euphorbiaceae)大戟属(Euphorbia)植物续随子(Euphorbialathyris L.) 的干燥成熟种子。原产于欧洲中南部和俄罗斯南部，后引入我国，现广泛分布于全国各地。千金子是我国的传统中药材之一，始载于《蜀本草》，原名续随子。现代药理学研究表明，千金子具有致泻、抗肿瘤、抗肿瘤多药耐药、美白淡斑和镇痛抗炎等作用。近年来，国内外学者陆续报道了千金子中新的二萜类化学成分及其相应的药理学活性研究，研究结果表明千金子中的二萜类成分结构新颖丰富，具有潜在的药理学研究价值。

根据前期研究(Chem.Biodiversity 2020,17,e1900531；J.Nat.Prod.2019,82,756–764)，发现千金子中的千金二萜烷型化合物大戟因子L1和大戟因子L3具有明显的抗炎活性，并且对正常细胞基本没有毒性。在利用该优点的基础上，为了进一步提高千金二萜烷化合物的抗炎活性，设计一种千金二萜烷NO供体衍生物并验证其抗炎活性，具有研究意义。

发明内容

本发明的目的是寻找并开发具有良好抗炎活性的化合物，具体提供了一种千金二萜烷NO 供体衍生物及其制备方法和用途，其以大戟因子L1和L3为原料制得环氧续随子醇和续随子醇，再进行衍生，以得到抗炎活性更好的千金二萜烷NO供体衍生物以及含有该千金二萜烷 NO供体衍生物的药物组合物，并且研究发现，这些药物可用于制备治疗和/或预防炎症疾病的药物。

本发明的具体技术方案如下：

本发明提供了一种通式(I)或通式(II)所示的千金二萜烷NO供体衍生物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物：

其中，R为以下结构的一种：

X为O或NH。

本发明的部分千金二萜烷NO供体衍生物结构如下：

本发明进一步提供了上述部分千金二萜烷NO供体衍生物的制备方法，但不仅限于下述制备方法：

合成路线

方法1：苯硫基乙酸溶于冰醋酸和双氧水混合溶液，得到中间体1，再加入发烟硝酸，得到中间体2；中间体2和二醇在碱性条件下发生取代反应得到中间体3，中间体3与丁二酸酐反应得到中间体4，最后分别与续随子醇和环氧续随子醇发生酯化反应得到终产物。其中续随子醇和环氧续随子醇分别由大戟因子L3和大戟因子L1在碱性条件下水解得到。

方法2：中间体2与叔丁氧羰基保护的醇胺发生取代反应，然后用三氟乙酸脱保护得到中间体5，中间体5和丁二酸酐反应得到中间体6，最后分别与续随子醇和环氧续随子醇发生酯化反应得到终产物。

本发明所述的千金二萜烷NO供体衍生物的药学上可接受的盐为千金二萜烷NO供体衍生物和盐类的混合物，其中，盐类为有机酸盐、无机酸盐、有机碱盐或无机碱盐中的一种，其中，有机酸盐中，采用的有机酸选用乙酸、甲磺酸、柠檬酸、富马酸、马来酸、乙醇酸、乳酸、水杨酸、琥珀酸、对甲苯磺酸、酒石酸、甲磺酸、丙二酸、硫辛酸中的一种或几种；无机酸盐中，采用的无机酸选用盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸中的一种或几种；有机碱盐中，有机碱选用葡甲胺和/或氨基葡萄糖；无机碱盐选用碱金属对应的化合物，如钠、钾、钡、钙、镁、锌的碱性化合物。

本发明的一种千金二萜烷NO供体衍生物，其抗炎性相比于原化合物大戟因子L3和大戟因子L1，以及续随子醇和环氧续随子醇有明显提高，表明NO供体可以明显提高千金二萜烷化合物的抗炎活性；其中活性最好的化合物对RAW264.7细胞生成NO的抑制活性是阳性对照地塞米松的20倍。

本发明还提供了一种药物组合物，是以上式(I)和(II)的千金二萜烷NO供体衍生物或其药学上可接受的盐作为活性成分。

本发明的一种药物组合物，具体的为千金二萜烷NO供体衍生物或其药学上可接受的盐可与药学上可接受的稀释剂、辅助剂、载体中的一种或几种混合，制成临床上需要的药用组合物。

当本发明的药物组合物应用于临床时，可将其配制成若干种剂型，如：口服制剂(如片剂，胶囊剂，锭剂，溶液或混悬液)；可注射的制剂(如可注射的溶液或混悬液，或者是可注射的干燥粉末，在注射前加入注射用水可立即使用)；局部制剂(如软膏或溶液)。用于本发明的药物组合物的载体是药学领域可得到的常见载体，包括：口服制剂用的粘合剂、润滑剂、崩解剂、助溶剂、稀释剂、稳定剂、悬浮剂、无色素、矫味剂等；可注射制剂用的防腐剂、加溶剂、稳定剂等；局部制剂用的基质、稀释剂、润滑剂、防腐剂等。药物制剂可以经口服或胃肠外方式(例如静脉内、皮下、腹膜内或局部)给药，如果某些药物在胃部条件下是不稳定的，可将其配制成肠衣片剂。

本发明的千金二萜烷NO供体衍生物或所述的药用组合物用于制备治疗和/或预防炎症药物中的应用。

本发明的千金二萜烷NO供体衍生物及其制备方法和用途，与最接近的现有技术相比，具有以下优点：

(1)首次提供了一种新的抗炎化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其抗炎活性更强，值得在临床推广使用。

(2)本发明进一步对部分千金二萜烷NO供体衍生物进行了对巨噬细胞NO生成的影响实验，实验结果表明本发明千金二萜烷NO供体衍生物对供试巨噬细胞NO生成有良好的抑制作用，部分千金二萜烷NO供体衍生物活性强于阳性对照药地塞米松，且对细胞未显示明显毒性，表现出良好的治疗指数，结果见表1。

(3)本发明上述千金二萜烷NO供体衍生物的制备工艺简单，药品纯度高、收率高、质量稳定，易于进行大规模生产。

附图说明

图1为实施例1制备的千金二萜烷NO供体衍生物1的¹H-NMR光谱图；

图2为实施例1制备的千金二萜烷NO供体衍生物1的¹³C-NMR光谱图；

图3为实施例2制备的千金二萜烷NO供体衍生物2的¹H-NMR光谱图；

图4为实施例2制备的千金二萜烷NO供体衍生物2的¹³C-NMR光谱图；

图5为部分产物在培养基中的亚硝酸盐积累图。

具体实施方式

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容做进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1

本实施例为千金二萜烷NO供体衍生物1的制备，千金二萜烷NO供体衍生物1的结构式为：

千金二萜烷NO供体衍生物1的制备方法如下：

续随子醇的合成：将大戟因子L3(5g，9.6mmol)在KOH的质量分数为5％的氢氧化钾/ 甲醇溶液(100mL)中在室温搅拌6小时。完成后，减压除去溶剂，并将残余物用乙酸乙酯溶解，用饱和食盐水和饱和碳酸钾溶液各洗涤3次，合并水相，用乙酸乙酯洗一次。洗过后的有机相合并后用无水硫酸钠干燥，旋干，开放硅胶柱色谱纯化，即可得到续随子醇，为白色固体(82％收率)。

对续随子醇进行检测，核磁共振氢谱分析如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.98(dd,J＝ 10.5,1.1Hz,1H),5.04(t,J＝1.4Hz,1H),4.90(s,1H),4.46(s,1H),4.38(s,1H),4.30(q,J＝3.4Hz,1H),3.41(d,J＝3.6Hz,1H),3.32(d,J＝3.8Hz,1H),2.73(dd,J＝14.8,9.8Hz,1H),2.46(dd, J＝14.1,7.9Hz,1H),2.20(t,J＝3.5Hz,1H),2.10(ddd,J＝10.1,6.7,3.2Hz,1H),1.91(d,J＝1.2 Hz,3H),1.82–1.56(m,4H),1.33(dd,J＝10.5,8.3Hz,1H),1.14(d,J＝6.9Hz,3H),1.12(s,3H),1.10(s,3H)。

对续随子醇进行核磁分析，其核磁共振碳谱分析如下：¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ206.69,147.80,139.93,136.99,110.93,87.84,76.59,69.55,53.16,46.82,38.04,34.83,33.62,28.57,26.00,23.97,23.17,15.46,13.87,13.61。

中间体1和中间体2的合成：用冰醋酸(45mL)溶解苯硫基乙酸(13.4g)，再加入质量百分浓度为30％的过氧化氢溶液(16.2mL)，室温搅拌3小时后缓慢滴加发烟硝酸32mL,100℃反应4小时。结束后，向反应液中加入冰，有白色固体析出为中间体2，产率54％。

中间体3的合成：用四氢呋喃溶解中间体2，加入1mL丁炔二醇和50％NaOH水溶液，室温反应2小时。结束后，用水稀释反应体系并调pH为中性，用乙酸乙酯萃取3次，干燥，旋干，柱层析纯化得白色固体为中间体3，产率70％。

中间体4的合成：用二氯甲烷溶解中间体3，根据反应过程，依次加入1.1倍摩尔量(eq) 的丁二酸酐、1.1eq的三乙胺和0.1eq的DMAP，室温反应2-3小时。结束后，用二氯甲烷稀释反应体系，用饱和氯化铵溶液洗3次，有机相干燥旋干，得到的中间体4直接用于下一步反应。

用3mL二氯甲烷溶解中间体4(0.23mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI,44mg,0.23mmol),20分钟后，加入续随子醇(40mg,0.15mmol)和4-二甲氨基吡啶(DMAP,催化量)。室温反应8-10个小时。反应结束后，反应液用20％柠檬酸溶液洗一次，饱和食盐水洗一次。开放硅胶柱色谱纯化，即可得到最终产物千金二萜烷NO供体衍生物1，其为白色固体，收率95％。

对最终产物千金二萜烷NO供体衍生物1进行核磁共振氢谱分析，其氢谱图见图1，氢谱分析为：¹H NMR(400MHz,DMSO)δ8.07–7.98(m,2H),7.91(t,J＝7.5Hz,1H),7.76(t,J＝7.9Hz,2H),7.56(s,1H),6.01(d,J＝10.4Hz,1H),5.39(s,1H),5.25(s,2H),4.89–4.78(m,3H),4.60(s,1H),4.17–4.08(m,1H),3.98(dt,J＝6.8,3.2Hz,1H),2.94(dd,J＝13.1,9.4Hz,1H), 2.64–2.52(m,4H),2.29(dd,J＝10.4,3.3Hz,1H),2.21(dd,J＝13.5,6.3Hz,1H),1.95(ddd,J＝19.5,11.4,4.8Hz,2H),1.82(d,J＝15.5Hz,1H),1.75–1.64(m,1H),1.57(d,J＝9.2Hz,4H), 1.52–1.38(m,3H),1.13(s,3H),1.08(s,3H),1.00–0.94(m,4H)。

最终产物千金二萜烷NO供体衍生物1进行核磁共振碳谱分析，其核磁共振碳谱(图2) 分析如下：¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ200.80,171.82,158.49,149.95,137.43,136.72,134.99,130.53,128.83,111.15,88.67,84.46,79.82,78.79,66.82,59.53,54.52,52.35,51.80,48.30,38.24,35.37,33.58,31.15,29.48,29.15,28.99,26.81,25.84,20.38,16.67,14.70,12.74。通过图1 和图2确定，其结构为本实施例结构式所示，得到目标产物。

实施例2

本实施例为千金二萜烷NO供体衍生物2的制备，千金二萜烷NO供体衍生物2的结构式为：

千金二萜烷NO供体衍生物2的制备方法的具体操作及配比同实施例1，不同之处在于以下几点：

(1)环氧续随子醇的合成：将在KOH的质量百分含量为5％氢氧化钾/甲醇溶液(100mL) 中的大戟因子L1(5g，9.6mmol)在室温搅拌6小时。完成后，减压除去溶剂，并将残余物用乙酸乙酯溶解，分别用饱和食盐水和饱和碳酸钾溶液洗涤3次，水相用乙酸乙酯洗一次。有机相干燥，旋干，即可得到环氧续随子醇粗产物，为白色固体(82％收率)。

对产物核磁共振氢谱分析如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.66(d,J＝10.7Hz,1H),4.40(s,1H),4.28(dd,J＝6.3,3.1Hz,1H),3.81(s,1H),3.31(s,1H),3.01(dd,J＝14.4,9.6Hz,1H),2.68(d,J＝3.8Hz,1H),2.62(d,J＝4.1Hz,1H),2.56(d,J＝7.3Hz,1H),2.24(dd,J＝14.0, 6.4Hz,1H),2.12–2.02(m,1H),2.00–1.87(m,4H),1.82(s,1H),1.74–1.68(m,1H),1.44(dd,J＝11.0,8.5Hz,1H),1.30(dd,J＝15.7,10.2Hz,1H),1.17(d,J＝3.0Hz,6H),1.14(d,J＝6.8Hz, 3H),1.07(ddd,J＝12.1,8.5,3.3Hz,1H)。

对环氧续随子醇粗产物进行核磁共振碳谱分析，其核磁共振碳谱分析如下：¹³CNMR (101MHz,CDCl₃)δ202.98,144.37,136.38,88.42,78.89,66.67,60.77,54.31,53.43,48.23,37.66, 34.70,32.15,28.76,27.46,25.09,19.71,15.86,13.90,13.09。

将合成的中间体4和上述制备的环氧续随子醇进行反应，同实施例1，不同之处在于，仅仅用环氧续随子醇替代续随子醇，得到的最终产物为千金二萜烷NO供体衍生物2，为白色固体，收率为56％。

对千金二萜烷NO供体衍生物2进行核磁共振氢谱分析，其核磁共振氢谱(图3)如下：¹H NMR(400MHz,DMSO)δ8.31(s,1H),7.65(d,J＝8.0Hz,2H),7.60(d,J＝11.7Hz,1H),7.21(d, J＝8.0Hz,2H),6.24(d,J＝9.5Hz,1H),5.53(s,1H),4.20(d,J＝7.3Hz,2H),4.02(d,J＝6.8Hz,1H),3.92–3.82(m,1H),2.97(dd,J＝13.3,9.1Hz,1H),2.34(s,3H),2.08(dd,J＝15.4,7.4Hz, 2H),1.93(d,J＝15.4Hz,1H),1.75(s,5H),1.56(dd,J＝11.7,8.4Hz,1H),1.51–1.45(m,1H),1.42(t,J＝7.3Hz,5H),1.16(d,J＝13.7Hz,8H),0.90(d,J＝6.6Hz,4H)。

对千金二萜烷NO供体衍生物2进行核磁共振碳谱分析，其核磁共振碳谱(图4)分析如下：¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ200.67,171.80,171.71,158.49,150.12,145.81,137.44,136.70, 133.94,130.53,128.83,114.30,111.14,89.17,84.44,79.78,78.69,67.65,59.52,53.74,52.28,48.80,37.93,36.00,34.92,29.15,29.00,28.75,25.43,21.79,16.64,14.99,12.85。

通过图3和图4确定，其结构为本实施例结构式所示，得到目标产物。

实施例3

本实施例为千金二萜烷NO供体衍生物3的制备，千金二萜烷NO供体衍生物3的结构式为：

千金二萜烷NO供体衍生物3的制备方法，具体操作及配比同实施例1，不同之处在于在制备中间体4时，采用对苯二甲醇替代1,4-丁炔二醇。

合成的千金二萜烷NO供体衍生物3为白色固体，收率75％。

对本实施例制备的千金二萜烷NO供体衍生物3进行核磁共振氢谱分析如下：¹HNMR (400MHz,DMSO)δ8.04–7.95(m,2H),7.89(t,J＝7.5Hz,1H),7.73(t,J＝7.9Hz,2H),7.44(q,J＝8.2Hz,4H),6.01(d,J＝10.4Hz,1H),5.49(s,2H),5.39(s,1H),5.12(s,2H),4.85(s,1H),4.59 (s,1H),4.11(d,J＝7.1Hz,1H),4.00–3.95(m,1H),2.93(dt,J＝16.0,8.1Hz,1H),2.66–2.59(m,2H),2.60–2.52(m,2H),2.27(dd,J＝10.4,3.3Hz,1H),2.18(dd,J＝13.4,6.3Hz,1H),1.93 (dd,J＝16.4,7.4Hz,2H),1.79(d,J＝15.1Hz,1H),1.68(dd,J＝25.7,12.4Hz,1H),1.55(s,3H),1.44(ddd,J＝20.3,12.6,9.8Hz,2H),1.14(d,J＝6.5Hz,3H),1.09(s,3H),0.96(d,J＝6.7Hz, 3H)。

对千金二萜烷NO供体衍生物3的核磁共振碳谱分析如下：¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ200.69,172.34,171.85,159.13,145.82,137.62,137.29,136.63,134.45,133.94,130.50,128.81,128.74,128.45,114.28,111.03,89.18,78.68,72.61,67.66,65.66,53.75,48.80,37.92,35.99,34.79, 29.28,28.99,28.74,25.43,21.80,16.65,15.00,12.84。

实施例4

本实施例为千金二萜烷NO供体衍生物4的制备，千金二萜烷NO供体衍生物4的结构式为：

千金二萜烷NO供体衍生物4的制备方法，具体操作及配比同实施例3，不同之处在于，在制备最终千金二萜烷NO供体衍生物4时，采用中间体4和环氧续随子醇进行反应。

合成的千金二萜烷NO供体衍生物4为白色固体，收率76％。

对本实施例制备的千金二萜烷NO供体衍生物进行核磁共振氢谱分析如下：¹H NMR(400 MHz,DMSO)δ8.03–7.95(m,2H),7.89(t,J＝7.5Hz,1H),7.73(t,J＝7.9Hz,2H),7.56(d,J＝11.7Hz,1H),7.49–7.41(m,4H),6.14(d,J＝9.4Hz,1H),5.48(s,2H),5.37(s,1H),5.15(s,2H), 4.09(d,J＝6.8Hz,1H),3.89–3.80(m,1H),2.93(dd,J＝13.0,8.9Hz,1H),2.72–2.60(m,4H),2.45(d,J＝3.3Hz,1H),2.06(s,2H),1.86(dd,J＝27.9,12.5Hz,1H),1.73(s,3H),1.67(d,J＝ 14.8Hz,1H),1.58–1.40(m,2H),1.34(d,J＝8.6Hz,1H),1.15(d,J＝5.8Hz,3H),1.12(s,3H),0.92(d,J＝6.7Hz,3H),0.80(s,1H)。

千金二萜烷NO供体衍生物4的核磁共振碳谱分析如下：¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ200.81,172.38,172.03,159.13,149.96,137.61,137.33,136.64,134.44,130.51,128.83,128.74,128.50,111.03,88.68,78.79,72.61,66.78,65.71,59.32,54.50,51.82,48.32,38.24,35.35,33.57, 29.49,29.26,28.99,25.85,20.38,16.69,14.70,12.73。

实施例5

本实施例为千金二萜烷NO供体衍生物5的制备，千金二萜烷NO供体衍生物5的结构式为：

千金二萜烷NO供体衍生物5的制备方法，具体操作及配比同实施例1，不同之处在于，在制备中间体4时，采用的二乙二醇代替1,4-丁炔二醇。

合成的千金二萜烷NO供体衍生物5为白色固体，收率80％。

对本实施例制备的千金二萜烷NO供体衍生物5进行核磁共振氢谱分析如下：¹HNMR (400MHz,DMSO)δ8.06–7.99(m,2H),7.90(t,J＝7.5Hz,1H),7.75(t,J＝7.9Hz,2H),7.55(d,J＝11.6Hz,1H),6.13(d,J＝9.2Hz,1H),5.37(s,1H),4.57–4.47(m,2H),4.22–4.12(m,2H), 4.09–4.04(m,1H),3.88–3.76(m,3H),3.74–3.65(m,2H),2.92(d,J＝3.9Hz,1H),2.64–2.54(m,4H),2.44(d,J＝3.5Hz,1H),2.08(d,J＝15.6Hz,2H),1.86(s,1H),1.70(d,J＝19.8Hz,5H), 1.58–1.41(m,3H),1.33(d,J＝7.7Hz,1H),1.16(s,3H),1.10(d,J＝5.2Hz,4H),0.92(d,J＝6.6Hz,3H),0.82(m,1H)。

千金二萜烷NO供体衍生物5进行核磁共振碳谱分析如下：¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ200.82,172.53,171.99,159.35,149.97,137.74,136.61,134.99,130.48,128.77,110.96,88.67,78.79,71.29,68.85,68.23,66.73,63.89,59.31,54.50,51.81,48.31,38.23,35.35,33.57,29.47, 29.23,29.12,29.00,25.84,20.39,16.67,14.69,12.74。

实施例6

本实施例为千金二萜烷NO供体衍生物6的制备，千金二萜烷NO供体衍生物6的结构式为：

千金二萜烷NO供体衍生物6的制备方法，具体操作及配比同实施例5，不同之处在于，在制备最终千金二萜烷NO供体衍生物6时，采用中间体4和续随子醇进行反应。

合成的千金二萜烷NO供体衍生物6为白色固体，收率63％。

对本实施例制备的千金二萜烷NO供体衍生物6进行核磁共振氢谱分析如下：¹HNMR (400MHz,DMSO)δ8.02(dd,J＝8.4,1.1Hz,2H),7.90(dd,J＝10.7,4.3Hz,1H),7.75(t,J＝7.9Hz,2H),7.56(s,1H),5.99(d,J＝10.4Hz,1H),5.38(s,1H),4.85(s,1H),4.59(s,1H),4.55–4.49 (m,2H),4.16(dd,J＝10.2,5.8Hz,2H),4.09(d,J＝7.1Hz,1H),3.96(dt,J＝7.0,3.3Hz,1H),3.85–3.77(m,2H),3.72–3.65(m,2H),2.93(dd,J＝13.0,9.5Hz,1H),2.59–2.46(m,6H),2.23 (ddd,J＝19.4,11.6,4.5Hz,2H),1.93(d,J＝12.8Hz,2H),1.80(d,J＝15.4Hz,1H),1.74–1.62(m,1H),1.55(s,3H),1.52–1.35(m,2H),1.14(s,3H),1.08(s,3H),0.96(d,J＝6.7Hz,3H)。

对千金二萜烷NO供体衍生物6进行核磁共振碳谱分析如下：¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ200.66,172.50,171.79,159.35,151.32,145.82,137.74,136.59,133.95,130.47,128.77,114.24,110.96,89.16,78.68,71.28,68.84,68.23,67.54,63.85,53.74,48.80,37.91,35.99,34.84,29.25, 29.16,29.00,28.74,25.43,21.78,16.64,14.99,12.85。

实施例7

本实施例为千金二萜烷NO供体衍生物7的制备，千金二萜烷NO供体衍生物7的结构式为：

千金二萜烷NO供体衍生物7的制备方法，具体操作及配比同实施例1，不同之处在于以下几点：

中间体5的合成：用四氢呋喃溶解中间体2，加入1mL丁炔二醇和50％NaOH水溶液，室温反应2小时。结束后，用水稀释反应体系并调pH为中性，用乙酸乙酯萃取3次，干燥，旋干，柱层析纯化得白色固体，产率70％。用二氯甲烷溶解产物后，加入三氟乙酸，冰浴下反应30分钟，结束后，旋出多余的三氟乙酸和溶剂，得到淡黄色固体为中间体5。

中间体5替代实施例1的中间体3，用二氯甲烷溶解中间体5，依次加入1.1eq的丁二酸酐、1.1eq的三乙胺和0.1eq的DMAP，室温反应2-3小时。结束后，用二氯甲烷稀释反应体系，用饱和氯化铵溶液洗3次，有机相干燥旋干，得到的中间体6替代实施例1中的中间体 4，直接用于下一步反应。

合成的千金二萜烷NO供体衍生物7为白色固体，收率67％。

对本实施例制备的千金二萜烷NO供体衍生物7进行核磁共振氢谱分析如下：¹HNMR (400MHz,DMSO)δ8.18(t,J＝5.4Hz,1H),8.08–7.99(m,2H),7.89(t,J＝7.4Hz,1H),7.74(t,J＝7.9Hz,2H),7.55(s,1H),6.00(d,J＝10.4Hz,1H),5.36(s,1H),4.84(s,1H),4.58(s,1H),4.40 (t,J＝5.4Hz,2H),4.14(d,J＝6.1Hz,1H),4.00(s,1H),3.48(dd,J＝5.2,3.1Hz,2H),2.95(dd,J＝13.0,9.3Hz,1H),2.67(s,1H),2.45–2.33(m,2H),2.28(dd,J＝10.4,3.1Hz,1H),2.20(dd,J＝ 13.5,6.3Hz,1H),1.93(d,J＝10.9Hz,2H),1.81–1.60(m,2H),1.55(s,3H),1.45(ddd,J＝20.2,12.5,9.8Hz,2H),1.23(s,1H),1.13(s,3H),1.04(s,3H),0.97(d,J＝6.7Hz,3H)。

对千金二萜烷NO供体衍生物7进行核磁共振碳谱分析如下：¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ200.70,178.02,172.13,159.34,145.91,137.66,136.58,133.99,130.47,128.90,128.81,114.15,111.04,89.23,78.72,70.20,68.03,53.84,48.88,37.86,36.76,36.03,30.44,29.65,28.99,28.75, 28.54,25.45,21.76,16.59,15.00,12.86。

实施例8

本实施例为千金二萜烷NO供体衍生物8的制备，千金二萜烷NO供体衍生物8的结构式为：

千金二萜烷NO供体衍生物8的制备方法，具体操作及配比同实施例7，不同之处在于，在制备最终千金二萜烷NO供体衍生物8时，采用中间体6和续随子醇进行反应。

合成的千金二萜烷NO供体衍生物8为白色固体，收率58％。

对本实施例制备的千金二萜烷NO供体衍生物8进行核磁共振氢谱分析如下：¹HNMR (400MHz,DMSO)δ8.21(t,J＝5.5Hz,1H),8.10–8.00(m,2H),7.90(t,J＝7.5Hz,1H),7.76(t,J＝7.9Hz,2H),7.55(d,J＝11.7Hz,1H),6.14(d,J＝9.3Hz,1H),5.35(s,1H),4.42(t,J＝5.4Hz, 2H),4.12(d,J＝6.4Hz,1H),3.87(s,1H),3.50(dt,J＝10.0,5.1Hz,2H),2.95(dd,J＝12.9,9.0Hz,1H),2.55–2.39(m,4H),2.15–2.02(m,2H),1.87(d,J＝16.0Hz,1H),1.77(s,1H),1.73(s, 3H),1.66(d,J＝13.8Hz,1H),1.59–1.42(m,2H),1.35(d,J＝7.8Hz,1H),1.15(s,3H),1.08(s,3H),0.94(d,J＝6.6Hz,3H),0.83(dd,J＝23.4,10.1Hz,1H)。

对本实施例制备的千金二萜烷NO供体衍生物8进行核磁共振碳谱分析如下：¹³CNMR (101MHz,DMSO)δ200.76,172.42,172.14,159.35,149.99,137.67,136.59,135.02,130.47,128.89,111.03,88.76,78.84,70.22,66.53,59.33,54.51,51.91,48.40,38.15,37.94,35.38,33.61, 30.41,29.64,29.47,28.98,25.83,20.35,16.60,14.70,12.73。

实施例9

本实施例为千金二萜烷NO供体衍生物9的制备，千金二萜烷NO供体衍生物9的结构式为：

千金二萜烷NO供体衍生物9的制备方法，具体操作及配比同实施例1，不同之处在于：

在制备中间体3时，采用1,4丁二醇代替1,4-丁炔二醇。

合成的千金二萜烷NO供体衍生物9为白色固体，收率62％。

对本实施例制备的千金二萜烷NO供体衍生物9进行核磁共振氢谱分析如下：¹HNMR (400MHz,DMSO)δ8.02(dd,J＝8.4,1.1Hz,2H),7.90(dd,J＝10.7,4.3Hz,1H),7.76(t,J＝7.9 Hz,2H),7.55(s,1H),6.00(d,J＝10.5Hz,1H),5.39(s,1H),4.85(s,1H),4.59(s,1H),4.41(t,J＝6.1Hz,2H),4.08(dd,J＝11.8,6.2Hz,3H),3.97(dt,J＝6.9,3.3Hz,1H),2.94(dd,J＝13.1,9.4 Hz,1H),2.56(dt,J＝9.6,3.8Hz,4H),2.28(dd,J＝10.4,3.3Hz,1H),2.20(dd,J＝13.6,6.1Hz,1H),1.94(d,J＝12.9Hz,2H),1.80(dd,J＝14.5,6.0Hz,4H),1.68(dd,J＝14.5,6.6Hz,3H),1.60 –1.53(m,4H),1.44(ddd,J＝20.3,12.5,9.8Hz,3H),1.13(s,3H),1.06(s,3H),0.97(d,J＝6.0Hz, 4H)。

对本实施例制备的千金二萜烷NO供体衍生物9进行核磁共振碳谱分析如下：¹³CNMR (101MHz,DMSO)δ172.47,171.87,159.32,145.82,137.69,136.61,133.96,130.51,128.77,114.25,110.94,89.17,78.70,71.54,63.94,54.64,53.75,48.80,37.92,35.98,29.28,28.99,28.73, 25.42,25.06,24.94,21.78,16.61,15.00,12.85。

实施例10

本实施例为千金二萜烷NO供体衍生物10的制备，千金二萜烷NO供体衍生物10的结构式为：

千金二萜烷NO供体衍生物10的制备方法，具体操作及配比同实施例9，不同之处在于，在制备最终千金二萜烷NO供体衍生物10时，采用中间体4和环氧续随子醇进行反应。

合成的千金二萜烷NO供体衍生物10为白色固体，收率61％。

对本实施例制备的千金二萜烷NO供体衍生物10进行核磁共振氢谱分析如下：¹HNMR (400MHz,DMSO)δ8.98(s,1H),7.97(d,J＝7.7Hz,2H),7.70(d,J＝8.1Hz,2H),7.53(t,J＝7.9Hz,2H),7.40(d,J＝7.4Hz,1H),7.26(d,J＝8.0Hz,2H),6.16(d,J＝9.0Hz,1H),5.50(s,1H), 4.93(s,1H),4.68(s,1H),4.07(dd,J＝28.9,17.9Hz,2H),2.96(s,1H),2.40–2.34(m,4H),2.29(d,J＝8.1Hz,1H),2.09–1.82(m,4H),1.59(s,3H),1.47(ddd,J＝22.5,16.4,10.8Hz,3H),1.19 (d,J＝9.0Hz,2H),1.15(s,3H),1.12(s,3H),0.94(d,J＝6.7Hz,3H)。

对本实施例制备的千金二萜烷NO供体衍生物10进行核磁共振碳谱分析如下：¹³CNMR (101MHz,DMSO)δ201.07,162.25,153.60,145.79,139.27,138.38,133.46,130.03,129.63,128.78,127.74,119.62,114.48,113.80,89.38,78.76,66.93,54.31,49.07,38.12,36.07,29.01, 28.78,26.81,25.55,21.94,21.38,16.73,15.07,12.92。

应用例

本发明部分产物对RAW264.7细胞生成NO的影响研究

将RAW264.7细胞接种在96孔板中，并用不同浓度(0-100μM)的千金二萜烷NO供体衍生物处理3小时，然后与LPS(1μg/mL)一起温育24小时。将具有或不具有LPS的DMSO 作为媒介物对照或模型对照处理。使用Griess试剂在540nm下用酶标仪测量培养基中的亚硝酸盐积累。计算千金二萜烷NO供体衍生物处理组的抑制率(％)并测定IC₅₀值以评价NO 抑制活性。以地塞米松为阳性对照药。

其中，上述实施例1～实施例10制备的千金二萜烷NO供体衍生物抑制RAW264.7细胞 NO生成IC₅₀值表见表1。

表1.千金二萜烷NO供体衍生物抑制RAW264.7细胞NO生成IC₅₀值表

从表中可以发现，水解后的续随子醇和环氧续随子醇的抗炎活性弱于对应的大戟因子，所有千金二萜烷NO供体衍生物的抗炎活性都有明显提高。

以环氧续随子醇为原料得到的衍生物，抗炎活性提高更明显，千金二萜烷NO供体衍生物6具有最好的抑制活性，其活性强度是阳性对照地塞米松的21倍。

本发明部分产物在RAW264.7细胞中释放NO的影响研究

将RAW264.7细胞接种在96孔板中，并用0.5μM的不同化合物处理3小时，然后温育24小时。将不具有LPS的DMSO作为空白对照处理。使用Griess试剂在540nm下用酶标仪测量培养基中的亚硝酸盐积累，见图5。

从图5中可以发现，与空白对照相比，LPS的刺激使RAW264.7细胞产生炎症反应，产生大量一氧化氮；续随子醇和衍生物3在0.5μM的浓度下不会在细胞中释放一氧化氮；衍生物6可以释放少量的一氧化氮，在0.5μM的浓度下可以发挥抗炎作用。对比衍生物3和衍生物6可以发现，一氧化氮供体和续随子醇之间的连接子(linker)也会影响一氧化氮的释放，进而影响抗炎活性。

以上具体实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims

1.通式(I)或通式(II)所示的千金二萜烷NO供体衍生物、或其药学上可接受的盐：

其中，R为以下结构的一种：

X为O或NH；

R为以下结构：

X为O。

2.通式(I)或通式(II)所示的千金二萜烷NO供体衍生物、或其药学上可接受的盐，其选自以下结构中的一种：

/>

3.权利要求1或2所述的通式(I)或通式(II)所示的千金二萜烷NO供体衍生物、或其药学上可接受的盐，其特征在于，千金二萜烷NO供体衍生物的药学上可接受的盐为千金二萜烷NO供体衍生物和盐类的混合物，其中，盐类为有机酸盐、无机酸盐、有机碱盐或无机碱盐中的一种。

4.权利要求1所述的千金二萜烷NO供体衍生物的制备方法，其特征在于，包括以下制备方法：

苯硫基乙酸溶于冰醋酸和双氧水混合溶液，得到中间体1，再加入发烟硝酸，得到中间体2；中间体2和二醇在碱性条件下发生取代反应得到中间体3，中间体3与丁二酸酐反应得到中间体4，最后分别与续随子醇和环氧续随子醇发生酯化反应得到终产物；

5.根据权利要求4所述的千金二萜烷NO供体衍生物的制备方法，其特征在于，其中续随子醇和环氧续随子醇分别由大戟因子L3和大戟因子L1在碱性条件下水解得到。

6.权利要求1所述的千金二萜烷NO供体衍生物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

苯硫基乙酸溶于冰醋酸和双氧水混合溶液，得到中间体1，再加入发烟硝酸，得到中间体2；中间体2与叔丁氧羰基保护的乙醇胺发生取代反应，然后用三氟乙酸脱保护得到中间体5，中间体5和丁二酸酐反应得到中间体6，最后分别与续随子醇和环氧续随子醇发生酯化反应得到终产物；

7.一种药物组合物，其特征在于，是权利要求1-3任意一项通式(I)或通式(II)所示的千金二萜烷NO供体衍生物或其药学上可接受的盐作为活性成分。

8.一种药物组合物，其特征在于，为权利要求1-3任意一项通式(I)或通式(II)所示的千金二萜烷NO供体衍生物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的稀释剂、辅助剂、载体中的一种或几种混合，制成临床上需要的药用组合物。

9.权利要求1-3任意一项所述的通式(I)或通式(II)所示的千金二萜烷NO供体衍生物、或其药学上可接受的盐，或权利要求7或8所述的药用组合物在制备治疗和/或预防炎症药物中的应用。