CN113747790A - 黄曲霉毒素生物防治组合物 - Google Patents

黄曲霉毒素生物防治组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN113747790A
CN113747790A CN202080022049.0A CN202080022049A CN113747790A CN 113747790 A CN113747790 A CN 113747790A CN 202080022049 A CN202080022049 A CN 202080022049A CN 113747790 A CN113747790 A CN 113747790A
Authority
CN
China
Prior art keywords
aspergillus
corn germ
corn
agricultural
toxigenic
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202080022049.0A
Other languages
English (en)
Inventor
P·梅塔
M·麦克兰德
P·科蒂
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
US Department of Agriculture USDA
Original Assignee
US Department of Agriculture USDA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by US Department of Agriculture USDA filed Critical US Department of Agriculture USDA
Publication of CN113747790A publication Critical patent/CN113747790A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/30—Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/34—Aspergillus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01P—BIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
    • A01P3/00—Fungicides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Fodder In General (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本文公开了一种黄曲霉毒素生物防治组合物，该黄曲霉毒素生物防治组合物包含作为营养物载体的玉米胚芽以及不产毒曲霉属菌株。本文还公开了制备和使用此类组合物的方法。

Description

黄曲霉毒素生物防治组合物
关于联邦权利的声明
本申请要求2019年4月2日提交的美国临时专利申请号62/828,453的优先权，该申请全文并入本文。
本发明根据协议No.FAIN 58-6054-8-008与美国农业部(USDA)合作进行。美国政府拥有本发明的某些权利。
本公开涉及组合物和方法，该组合物和方法包括使用玉米胚芽以利用不产毒的曲霉属(Aspergillus)基因型来控制作物上和环境中的产黄曲霉毒素的曲霉属基因型。
由植物病原体黄曲霉(Aspergillus flavus)产生的黄曲霉毒素是强效致癌物，其可污染许多谷物、豆类、坚果以及其他耕种的和非耕种的食物和饲料，以及环境。许多发达国家严格执行限制食品和饲料中黄曲霉毒素浓度的法规。许多天然存在的黄曲霉基因型不具有产生黄曲霉毒素的能力。这些不产生黄曲霉毒素的基因型通常称为“不产毒的”。局部不产毒基因型可用于取代作物上、土壤中和整个环境中的黄曲霉毒素生产者并因此降低其频率。事实上，限制作物中黄曲霉毒素污染的最有效的方法是通过使用此类有益的不产毒基因型。这种类型的黄曲霉毒素管理已在商业上用于许多国家，包括美国、意大利、尼日利亚和肯尼亚。
为了最好的管理，在产黄曲霉毒素真菌迅速增加之前，不产毒基因型必须在田间活跃生长。为了在农业田地中递送和支持有益不产毒真菌的活性成分的生长，将这些真菌包被在营养物供应载体诸如谷物谷粒(小麦、高粱、大麦)上。在施用后，当环境条件有利于黄曲霉(A.flavus)繁殖时，有益真菌在营养物载体上生长和繁殖。在该周期期间产生的孢子通过与取代黄曲霉毒素生产者并与之竞争而分散到作物并保护作物。快速的孢子形成以及在土壤、田间有机资源和作物表面上的散布对于不产毒基因型超出和取代有害的产黄曲霉毒素黄曲霉的最佳能力是必不可少的。为了最有效，不产毒基因型必须增加频率以成为黄曲霉群体的主要组分。在产黄曲霉毒素菌株开始迅速增加田间作物生物质和其他有机资源之前，通过不产毒菌株的生长和孢子产生最好地实现优势。有机资源在农业田地中的初始定植推动一种类型的建立者效应。因此，更快的孢子形成通过用有益的不产毒菌株覆盖土壤和作物表面来促进功效。然而，基于谷粒的生物防治产品可能需要几天来建立和形成孢子。此外，谷粒可在孢子产生之前被鸟类或昆虫食用。更慢且更少的孢子产生可影响总体产品效果。
由全谷粒制造迫使产品在物理上适形于谷粒。例如，大谷粒导致产品具有大粒度。大粒度意指在经处理的田地中每克较少的颗粒和少的真菌释放点。本发明包括胚芽纯化和颗粒分级，其允许随时间推移一致的产品尺寸以及粒度的谨慎管理以增强流动性并优化每质量产品颗粒的数量，并因此优化灵活性以管理递送到经处理的田地的每重量的颗粒的数量，以便优化目标作物的覆盖。
另外，用谷物谷粒(小麦、高粱、大麦)生产生物防治制剂涉及若干步骤。谷粒必须购买、运输到设施、储存、巴氏灭菌和冷却，然后用有益的不产毒孢子悬浮液包衣。这些步骤需要更多的劳动力、更多的制造空间、对设备的大量资本投资、以及更多的能量，这导致高操作成本。本文公开了一种有益的新型黄曲霉毒素生物防治组合物，该组合物实现有益的不产毒菌株的更快和更多孢子形成以用于黄曲霉毒素生物防治，同时有效地降低劳动力、成本、制造空间和/或能量消耗。
本文公开了一种农业生物防治组合物，该农业生物防治组合物包含营养物载体和不产毒菌株。在一些实施方案中，农业生物防治组合物包含曲霉属的不产毒菌株。在其他实施方案中，营养物载体包括玉米胚芽。在再一些其他实施方案中，营养物载体是玉米胚芽。在一些实施方案中，曲霉属的不产毒菌株为米曲霉(Aspergillus oryzae)菌株、黄曲霉菌株、酱油曲霉(Aspergillus sojae)菌株、属于一些其他曲霉属物种的菌株、不同的有益微生物或它们的混合物。在再一些另外实施方案中，曲霉属的不产毒菌株为米曲霉菌株、黄曲霉菌株、酱油曲霉菌株或它们的混合物。在又一些另外实施方案中，曲霉属的不产毒菌株为黄曲霉菌株。在又一些其他实施方案中，农业生物防治组合物还包含适于生物防治目的的一种或多种元素，诸如选自由以下各项组成的组的那些：载体剂、旨在保持曲霉属的不产毒菌株的活性和活力的试剂、铺展剂(散布剂)、粘结剂、渗透保护剂、粘合剂(粘着剂)、稳定剂、防止擦除的试剂、着色剂和防腐剂。
在一些实施方案中，农业生物防治组合物包含种子粘结剂以帮助曲霉属的不产毒菌株粘附到玉米胚芽。在另外的实施方案中，种子粘结剂包含聚合物，诸如与曲霉属的不产毒菌株的孢子形成目的相容的聚合物。在一些实施方案中，曲霉属的不产毒菌株包被在玉米胚芽的表面上。在一些实施方案中，通过使用聚合物来将曲霉属的不产毒菌株包被在玉米胚芽的表面上。
在一些实施方案中，玉米胚芽作为玉米湿磨过程的副产物产生。在其他实施方案中，玉米胚芽通过除湿磨之外的过程产生。在一些实施方案中，玉米胚芽通过不包括精磨、烘烤和/或汽蒸的过程产生。在一些实施方案中，所产生的玉米胚芽用筛分和/或其他手段进行尺寸分选。在一些实施方案中，使用一组指定尺寸的筛来移除较小的片和较大的片并提供期望尺寸的胚芽颗粒。
在一些实施方案中，农业生物防治组合物通过不包括以下步骤的过程产生：在所述玉米胚芽与曲霉属的不产毒菌株组合或包被有曲霉属的不产毒菌株之前，使玉米胚芽失活，对玉米胚芽进行精磨或轧制，通过烘烤对玉米胚芽进行灭菌，和/或对玉米胚芽进行冷却。在一些实施方案中，农业生物防治组合物基本上不含除曲霉属的不产毒菌株之外的真菌，并且基本上不含致病肠道菌。在一些实施方案中，与基本上由通过玉米湿磨过程产生的玉米胚芽组成的组合物相比，农业生物防治组合物包含等量或更少的细菌。
本文还公开了用于生产包含营养物载体和不产毒菌株的农业生物防治组合物的方法。一些实施方案涉及用于生产农业生物防治组合物的方法，该农业生物防治组合物基本上不含除曲霉属的不产毒菌株之外的真菌，并且基本上不含致病肠道菌。再一些实施方案涉及用于生产农业生物防治组合物的方法，与玉米湿磨过程相比，该农业生物防治组合物引入等量或更少的细菌。在一些实施方案中，该方法包括获得玉米胚芽。在一些实施方案中，该方法包括从玉米湿磨过程获得玉米胚芽。在其他实施方案中，该方法包括从除玉米湿磨过程之外的过程获得玉米胚芽。在甚至另外的实施方案中，该方法不包括对玉米胚芽进行精磨、烘烤和/或汽蒸。在其他实施方案中，该方法包括将玉米胚芽与曲霉属的不产毒菌株组合以产生农业生物防治组合物。在再一些实施方案中，该方法包括用曲霉属的不产毒菌株包被玉米胚芽。在一些实施方案中，该方法不包括在所述玉米胚芽与曲霉属的不产毒菌株组合或包被有曲霉属的不产毒菌株之前，使玉米胚芽失活，通过烘烤对玉米胚芽进行灭菌，和/或对玉米胚芽进行冷却的步骤。在又一些实施方案中，该方法包括筛分玉米胚芽以移除在玉米湿磨过程期间产生的碎片。在甚至另外的实施方案中，该方法包括用5号美国筛尺寸(5目)或6号美国筛尺寸(6目)筛分来移除较大的片和废料，和/或用7号美国筛尺寸(7目)或8号美国筛尺寸(8目)筛分以通过允许较小的片穿过所述筛来移除较小的片。在一些实施方案中，选择筛以提供有益于在期望的农业生物防治组合物中使用的任何期望粒度范围或粒度的营养物载体。在一些实施方案中，该方法还包括将筛分的玉米胚芽与曲霉属的不产毒菌株组合以产生农业生物防治组合物。在其他实施方案中，该方法包括将筛分的玉米胚芽用曲霉属的不产毒菌株包被以产生农业生物防治组合物。
在一些实施方案中，本文所述的农业生物防治组合物在适于曲霉属的不产毒菌株的孢子形成的条件下施用农业生物防治组合物后约48小时内支持曲霉属的不产毒菌株的快速孢子形成。在一些实施方案中，本文所述的农业生物防治组合物在孢子形成开始后36小时、48小时、60小时、72小时、84小时、96小时、108小时、120小时、132小时、144小时、156小时或168小时内提供比在相同条件下使用谷物作为营养物载体的组合物和方法多至少2倍的孢子。
本文还描述了用于控制农业植物或源自植物的农业产品中的黄曲霉毒素污染的方法。在一些实施方案中，该方法包括向植物、生长场所或植物产品施用黄曲霉毒素减少的有效量的本文所述农业生物防治组合物。
本文进一步描述了用于控制耕种区域中黄曲霉毒素污染的方法。在一些实施方案中，该方法包括向耕种区域施用黄曲霉毒素减少的有效量的本文所述农业生物防治组合物。
本文甚至进一步描述了用于降低在被一种或多种产毒曲霉属物种污染的区域中或存在受一种或多种产毒曲霉属物种污染的风险的一种或多种产毒曲霉属物种的农业生物防治的成本的方法。在一些实施方案中，该方法包括将黄曲霉毒素减少的有效量的本文所述农业生物防治组合物施用于耕种区域。
本文还描述了用于曲霉属的不产毒菌株的快速孢子形成的方法。在一些实施方案中，该方法包括获得玉米胚芽作为孢子形成的营养物载体，并将玉米胚芽与曲霉属的不产毒菌株组合以形成组合物。在一些实施方案中，该方法还包括在合适的条件下对曲霉属的不产毒菌株进行孢子形成。在一些实施方案中，与使用相同量的高粱谷粒作为营养物载体相比，该方法在约48小时内每克玉米胚芽产生多达至少2倍的孢子。
本文还公开了用于利用作为玉米湿磨过程的副产物产生的玉米胚芽来产生农业生物防治组合物的方法，该农业生物防治组合物包含营养物载体和不产毒菌株。在一些实施方案中，该方法还包括筛分玉米胚芽以移除在玉米湿磨过程期间产生的碎片。在一些实施方案中，该方法还包括将筛分的玉米胚芽与曲霉属的不产毒菌株组合以产生农业生物防治组合物。
附图说明
图1A和图1B描绘了在31℃和100％湿度下72小时后，用于生物防治产品的不产毒黄曲霉基因型对胚芽(A)和高粱(B)的生长和孢子产生。
图2描绘了通过比浊法浊度单位(NTU)使用高粱和玉米胚芽测量的孢子收率比较。在接种后0-168小时进行测量。
图3描绘了通过NTU使用高粱和玉米胚芽以三次重复测量的平均孢子收率。在将生物防治产品置于有利于活性成分生长和释放的条件下之后0-168小时进行测量。
本文公开了玉米胚芽作为优异的营养物载体用于农业生物防治组合物中，该农业生物防治组合物还包含不产毒菌株并且用于防治黄曲霉毒素，从而产生比多种使用其他营养物载体(例如，谷物谷粒)的可商购获得的生物防治组合物更多的孢子。本文还描述了提供更有效的黄曲霉毒素减少的快速孢子形成的组合物和方法。作为淀粉制造的联产品产生并且进一步改善了流动性和产品质量(移除细粒、果皮以及外来物质和碎片)的玉米胚芽令人惊讶地允许快速孢子产生和释放，并且是非常好的营养物载体。此外，胚芽具有微生物学特征，监管者和食品工业均认为该微生物学特征对作物、环境和消费者是安全的。因此，在淀粉制造过程期间产生的玉米胚芽可以在分选以移除不期望的组分、改善颗粒均匀性和增加流动性之后改善以用于生产生物防治组合物。因此，本文描述了用于生产改善的胚芽产品的过程，该过程有利于农业生物防治组合物的生产并消除生产其他可商购获得的农业生物防治组合物通常所需的失活、烘烤灭菌、冷却步骤等。由于这些步骤(例如，失活、烘烤、冷却等)通常涉及用谷粒(例如，小麦、大麦或高粱)制成的生物防治产品，因此本文所述的方法显著降低了初始设备资本以及操作成本。使用本文所述的改善的玉米胚芽的组合物和方法还消除了采购、运输和储存谷粒的步骤，因为玉米胚芽是淀粉湿磨植物的联产品。
因此，本文描述了包含营养物载体和不产毒菌株的农业生物防治组合物。在一些实施方案中，生物防治组合物包含曲霉属的不产毒菌株和营养物载体。如本文所用，以下术语与“不产毒”同义：非产毒、非产黄曲霉毒素和非黄曲霉毒素。
曲霉属的不产毒菌株可用于取代作物上、土壤中和整个环境中的黄曲霉毒素生产者并因此降低其频率。可使用本领域已知的任何曲霉属的不产毒菌株，包括但不限于米曲霉菌株、黄曲霉菌株、酱油曲霉菌株、寄生曲霉(Aspergillusparasiticus)菌株或它们的混合物。在其他实施方案中，曲霉属的不产毒菌株为黄曲霉。在再一些实施方案中，曲霉属的不产毒菌株为米曲霉。在甚至另外的实施方案中，曲霉属的不产毒菌株为酱油曲霉。在又一些另外的实施方案中，曲霉属的不产毒菌株为寄生曲霉。
在一些实施方案中，不产毒黄曲霉菌株包括但不限于黄曲霉菌株AF36(NRRL18543)、CT3、K49(NRRL 30797)、La3279、La3304、Ka16127、Og0222、PKM03-N、ARS培养物保藏中心保藏号NRRL 50427、NRRL 50428、NRRL 50429、NRRL 50430、NRRL 50431、NRRL 18543(PrevailTM中的AF36，Arizona Cotton Research and Protection Council)、NRRL 21882(AflaGuardTM，Syngenta)，以及真菌遗传资源保藏中心(FGSC)保藏号FGSC A2223、FGSCA2220、FGSC A2226和FGSC A2229(即，FourSureTM中的四种不产毒基因型，Texas CornProducer’s Board)。
可使用的附加曲霉属物种和菌株在以下文献中有所描述：美国专利No.9011891、No.8637002、No.5171686、No.5294442、No.7361499、No.6306386和No.6027724，以及Ehrlich等人，(2004，Applied Microbiology&Biotechnology，第65卷，第473-478页)，Probst等人，(2010，Plant Disease，第95卷，第2期，第212-218页)，Brown等人，(1991，J.Food Protection，第54卷，第623-626页)，Cotty(1994a，Phytopathology，第84卷，第1270-1277页)，Cotty，P.J.(1994b，Mycopathologia，第125卷，第1 57-162页)，Probst等人(2011，Pant disease，第95卷，第212-218页)，Bandyopadhyay等人，(2016，WorldMycotoxin J，第9卷，第771-789页)，以及Mehl(2012，Ann.N.Y.Acad.Sci.第1273卷，第7-17页)，这些文献中的每一篇的相关且不矛盾的部分均全文以引用方式并入本文。
任何不产毒曲霉属物种和菌株均可用于本文所述的一种或多种农业生物防治组合物中。本文所述的方法和组合物已使用不产毒黄曲霉的不同的独特基因型成功地测试，并且在每种情况下，与基于谷粒的方法和组合物相比，使用本文所述的农业生物防治组合物可观察到更快的孢子形成。
在一些实施方案中，基于一种或多种因素选择曲霉属的不产毒素菌株，该因素包括但不限于田地的地理位置、环境条件、田地的微生物条件、田地的化学条件、地点的天气条件等。例如，可以特别选择曲霉属的不产毒菌株，因为它已经进化到在与讨论中的地理位置相关联的生长条件下茁壮成长。
此外，还存在在若干非洲国家充分注册的产品，这些国家包括尼日利亚、塞内加尔、布基纳法索、加纳和肯尼亚，其使用四种附加基因型的黄曲霉作为活性成分。这些产品被称为Aflasafe或具有国家特定代码的Aflasafe(例如，肯尼亚的Aflasafe KE01)。例如，Aflasafe NG01将包含所有四种基因型的包衣施用于高粱谷粒。NG01中的四种基因型在尼日利亚的生产玉蜀黍的区域中是地方性的，并且很好地适应那些区域。此外，还存在为若干其他国家开发的产品，这些产品处于农田间试验的第二年或第三年中，并且在改变农业田地中驻留的真菌群落方面都显示出良好的功效。这些附加产品中的每一种以与Aflasafe和黄曲霉AF36 Prevail相同的方式来制造。这些产品各自由原产自目标区域的黄曲霉的不产毒菌株组成，并且通过将由相等比例的所有四种分离株组成的分生孢子悬浮液包被到烘烤的高粱谷粒上来制造，如以下制造部分中所述。
用作生物防治产品中的活性成分的真菌可通过本领域技术人员熟知的一种或多种生理、表型、分子和/或基因型测试方法来表征。用于菌株表征的合适测试的例子包括但不限于基于随机扩增多态性DNA(RAPD)的表征、聚合酶链反应(PCR)测定/产物模式、DNA指纹分析、AFLP标记和简单序列重复(SSR)。
在一些实施方案中，针对特定生长区域和/或植物物种选择在任何特定农学或园艺情境中使用的不产毒曲霉属的最佳菌株。因此，可以根据本文所述的方法和组合物来选择已进化为在与其使用的地理位置相关联的生长条件下茁壮成长的生物防治菌株。一个实施方案涉及农业生物防治组合物，该农业生物防治组合物包含玉米胚芽、由玉米胚芽组成、或基本上由玉米胚芽组成，该玉米胚芽任选地被纯化，与适于特定生长区域的不产毒曲霉属相关联。
本文所述的方法和组合物预期用于所有丝状真菌，这些丝状真菌能够腐生地利用营养物并且以繁殖和散布的目的施用于农业田地和/或环境。这包括生物防治真菌，诸如木霉属物种(Trichoderma spp.)、白僵菌属物种(Beauveria spp.)、绿僵菌属物种(Metarhizium spp.)、曲霉属物种(Aspergillus spp.)，镰刀菌属物种(Fusarium spp.)、枝孢属物种(Cladosporium spp.)和许多其他已知而尚未描述的真菌。
玉米胚芽的味道通常是令人愉快的坚果味的并且富含油。以前，它主要用于提取玉蜀黍油和制造饲料添加物(例如，玉米胚芽粉)。在一些实施方案中，玉米胚芽在淀粉纯化过程中产生。在一些实施方案中，淀粉纯化过程是湿磨过程或干磨过程。在一些实施方案中，玉米胚芽可通过其他方法产生，诸如美国专利No.2459548、No.2282817、No.4341713、No.4495207、No.5297348和No.6899910中所述的那些方法，这些专利中的每个专利全文以引用方式并入本文。
玉米胚芽和湿磨过程
成熟玉米籽粒由四个主要部分构成，即胚乳、胚芽、果皮和梢帽。玉米胚芽或玉蜀黍胚芽是发芽以生长成植物的玉米的繁殖部分。如本文所用，玉米胚芽与玉米种子或玉米籽粒的胚和紧密相关联的组织同义。由于获得玉米胚芽的过程，用于本文所述方法和组合物中的玉米胚芽不能够发芽或生长成玉米植物，该玉米胚芽是本发明的组分。在一些实施方案中，玉米籽粒可能由于防止、抑制或以其他方式阻碍其发芽或生长能力的一种或多种物理、生理、表型、分子和/或基因型异常或缺陷而没有在加工之前发芽的能力。在一些实施方案中，用于制备本文所述的农业生物防治组合物的玉米胚芽得自玉米谷粒。在一些实施方案中，玉米胚芽作为玉米湿磨过程的联产品产生。玉米湿磨是将玉米籽粒破碎成其组成部分的过程。它使用水和一系列步骤来分离待用于各种产品的部分。该过程基于组分的物理分离，主要按重量和尺寸计，而一些化学品诸如含水二氧化硫(SO2)可用于某些步骤中(例如，在浸泡过程期间)。在一些实施方案中，在碾磨收获的玉米谷粒之前对其进行检查以消除污染的玉米谷粒。
在一些实施方案中，在碾磨收获的玉米谷粒之前对其进行清洁。清洁步骤用于按照形状、密度和磁力来筛分、分离颗粒以移除杂质。在一些实施方案中，可使用具有适当筛号的坞站测试仪来移除除玉米谷粒之外的颗粒，诸如玉米棒片、破碎的玉米、外来种子、金属片、叶片、污垢等。在一些实施方案中，通过干法、湿法或两者来清洁玉米。在一些实施方案中，使用NIR光谱仪分析经清洁的玉米谷粒。
在一个实施方案中，在碾磨之前水合玉米谷粒以使淀粉颗粒从蛋白质基质中松散并且使胚芽对碾磨具有弹性。胚芽密度减小并且籽粒软化，这使得碾磨更容易。在一些实施方案中，将二氧化硫(浓度在300ppm至2000ppm之间的范围内)和/或乳酸添加到水中。二氧化硫可弱化基质，从而允许淀粉颗粒干净地分离出来，而乳酸分解胚乳蛋白质基质并有助于更好地分离淀粉。乳酸或二氧化硫也降低pH，这与高温组合防止不期望的微生物的生长。在一些实施方案中，清洁的玉米谷粒用水浸泡在大罐中。在一些实施方案中，浸泡过程在约120°F至130°F的温度下进行。在一些实施方案中，浸泡过程持续约40小时。之后，可排出浸泡水。
在一些实施方案中，胚芽与玉米的其他部分分离。然后将已浸泡的玉米倒入研磨机中，该研磨机使玉米籽粒破碎并释放胚芽颗粒。在一些实施方案中，可使用诸如盘磨机之类的磨碎机。在其他实施方案中，研磨是缓慢的，并且用于研磨的元件是钝的以确保胚芽的完整移除。然后将该浆液送过一系列胚芽旋风分离器以将胚芽与剩余的纤维、谷蛋白和淀粉分离。胚芽颗粒比剩余的玉米组分轻，并且胚芽的较高级分将漂浮到胚芽旋风分离器的溢流。然后通过适当地调整系统的密度和胚芽旋风分离器的每一级上的溢流量来控制胚芽纯度(％油)。在一些实施方案中，胚芽分离步骤包括回收尽可能完整的胚芽。在一些实施方案中，使用一系列筛网、离心机和/或旋风分离器，将玉米胚芽与纤维、淀粉、蛋白质和水分离。在一些实施方案中，在湿磨操作期间，选择并分离包含胚芽(例如，全胚芽、基本上完整的胚芽和/或部分研磨的胚芽)的级分。然后将胚芽送过胚芽压机以将水分降低至50％。在一些实施方案中，然后将该胚芽送过胚芽烘干机，其中水分被降低到小于5％。这些烘干机通常在93.3℃(200°F)以上运行，并且胚芽在烘干机中的保留时间为20分钟-50分钟。烘干机中胚芽的高温有助于抑制微生物生长。然后将胚芽冷却到约37.8℃(100°F)并且储存。
应当指出的是，上述方法不是限制性的方法，并且可使用用于玉米的其他改进的湿磨过程或不同的碾磨过程。
在一些实施方案中，用于制备本文所述的生物防治组合物的玉米胚芽作为碾磨过程的可流动部分产生。在一些实施方案中，碾磨过程的这样的可流动部分通过筛分过程与不可流动部分(例如，污染物)分离。在制备玉米胚芽的过程期间产生的一些部分支持孢子形成，而其他部分不支持孢子形成。在一些实施方案中，使用筛分过程将能够支持孢子形成的部分(即，可流动部分)与不能够支持孢子形成的部分(即，不可流动部分)分离。在一些实施方案中，筛分过程还用于移除不期望的碎片和废料，并且为特定应用提供具有期望尺寸的胚芽颗粒。流动性是颗粒状固体和粉末在从运输或储存容器排放期间流动的能力。流动性受材料的天然特性的影响，但也受若干相互作用的环境因素的影响，诸如材料水分、储存温度、粒度分布、相对湿度、时间、材料块的压实、运输期间的振动、整个储存过程的变化、材料的化学组成、以及流平剂的添加。在一些实施方案中，胚芽在用于制备生物防治组合物之前被进一步加工。在一些实施方案中，对产生的玉米胚芽进行筛分以移除在玉米湿磨过程期间产生的碎片，然后用曲霉属的不产毒菌株包被胚芽。在一些实施方案中，使用一组筛来移除较小的片和较大的片并提供期望尺寸的胚芽颗粒。在一些实施方案中，筛分步骤包括使用5号美国筛尺寸(5目)或6号美国筛尺寸来移除较大的片和废料，和/或使用7号美国筛尺寸(7目)或8号美国筛尺寸来通过允许较小的片穿过来移除较小的片。
然而，在一些实施方案中，较小的胚芽粒度有利于与施用方法的相容性和/或允许每磅更多的颗粒，并因此允许在施用后更多的生物防治不产毒菌株的分布点。还可将粒度更大或更小地调整，以便根据意图、目标作物和环境条件改变施用后保留在作物冠层中的产物的百分比。在一些实施方案中，将胚芽的纯化组分用作与丝状真菌和其他微生物的递送相容的设定尺寸的营养颗粒。一些实施方案允许将粒度调节到期望的参数，以便最佳地满足目标应用的目标。
除了筛分之外，还可使用其他工艺，诸如用于将不可流动部分(污染物)与可流动部分分离的任何廉价过程，诸如连续过程，只要选择对不产毒曲霉属菌株有营养的适当颗粒即可。
在一些实施方案中，通过如本文所述的过程获得的玉米胚芽具有可被诸如(环境保护局)EPA和美国农业部(USDA)之类的监管机构接受的微生物学特征。在一些实施方案中，胚芽不含不需要的真菌和细菌。例如，在生物防治之前，胚芽不含产毒曲霉属物种，不含除有益的不产毒曲霉属物种之外的真菌，并且不含致病肠道菌。在一些实施方案中，胚芽基本上不含不需要的真菌和细菌。如本文所用，术语“基本上不含”意指不需要的真菌和细菌的水平是不可检测的，或者低于由诸如EPA、食品与药品管理局(FDA)或USDA之类的监管机构设定的标准，或者是法律和/或法规所要求的。例如，在一些实施方案中，在足以确保美国食品安全现代化法案所要求的食品安全的条件下加工玉米胚芽。
由于通过本文所述的过程获得的玉米胚芽不是活的，并且其具有可接受的微生物学特征，与高粱或其他谷粒作为支持不产毒菌株生长的营养物来源不同，不必对玉米胚芽进行灭菌来杀死病原体或失活(例如，通过烘烤)。因此，本文所公开的用于制备玉米胚芽和用于制备生物防治组合物的方法不包括在将玉米胚芽与曲霉属的不产毒菌株组合或用曲霉属的不产毒菌株包被之前使玉米谷粒或玉米胚芽失活(例如，通过烘烤)、对玉米胚芽进行灭菌和/或对玉米胚芽冷却的步骤。
制剂
当谷粒(例如，高粱、小麦或大麦)用作营养物载体时，必须通过移除种皮(如在大麦中)或通过烘烤(如在高粱中)来进行失活，并用有益的不产毒曲霉属菌株的孢子包被谷粒，这导致生产成本、产品脆性和孢子粉尘的产生(导致可施用于田地的孢子材料的损失)。这也不可避免地导致孢子污染，因为对孢子去何处失去控制。本文所述的用于生产本文所述的农业生物防治组合物的方法不遭受这些问题。
不受任何特定理论的束缚，较快的孢子形成可用于农业生物防治组合物的功效。事实上，仅具有营养物来源并不一定意味着曲霉属菌株将快速产生孢子。本文所述的组合物和方法允许不产毒菌株快速地产生孢子，并进一步允许孢子能以足够均匀的粒度产生(例如，通过分馏/筛分过程产生)。本文所述的方法使得材料能够流动，具有更大的孢子收率和/或更快的孢子产生。另外，本文所述的方法允许以较低的成本生产生物防治组合物。
孢子应尽可能快地释放，以确保系统中的不产毒菌株的有效取代。使用作物谷粒(例如，小麦、高粱或大麦)的营养物载体经常被食用，因此与玉米胚芽相比具有较少的田间时间。此外，在快速释放孢子方面，玉米胚芽令人惊讶地比谷粒(例如，高粱)好得多。这是特别有利的，因为农民可能无法足够早地将生物防治产品施用于他们的田地以使高粱产品能够形成孢子，因此使用玉米胚芽的生物防治产品增加了成功防治田地中产毒曲霉属物种的可能性。
本公开的农业生物防治组合物可根据需要配制。在一些实施方案中，生物防治组合物包含一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种或更多种曲霉属的不产毒菌株，诸如黄曲霉的菌株。
该生物防治组合物还包含营养物载体。在一些实施方案中，营养物载体包含玉米胚芽。在一些实施方案中，营养物载体包含基本上纯的玉米胚芽。在一些实施方案中，营养物载体基本上由玉米胚芽组成。在一些实施方案中，营养物载体由玉米胚芽组成。
在一些实施方案中，营养物载体包含玉米胚芽。在一些实施方案中，营养物载体包含有效量的玉米胚芽，用于使不产毒曲霉属菌株(诸如不产毒黄曲霉菌株)快速形成孢子。如本文所用，术语“有效量”是指允许在孢子形成开始后约24小时、36小时、48小时、60小时、72小时、84小时、96小时、108小时、120小时、132小时、144小时、156小时或168小时内产生每克营养物载体约1×106、2×106、3×106、4×106、5×106、6×106、7×106、8×106、9×106、1×107、2×107、2×107、3×107、4×107、5×107、6×107、7×107、8×107、9×107、1×108、2×108、3×108、4×108、5×108、6×108、7×108、8×108、9×108、1×109、1×109、2×109、3×109、4×109、5×109、6×109、7×109、8×109、9×109或更多个孢子的玉米胚芽的量。
在一些实施方案中，营养物载体包含的玉米胚芽的量按重量测量为营养物载体的至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。
在一些实施方案中，本公开的营养物载体基本上由玉米胚芽组成。如本文所用，术语“基本上由...组成”意指营养物载体可包含不会实质上影响本文所公开的生物防治组合物特性的其他成分。例如，其他成分以不会实质上影响营养物载体诱导不产毒曲霉属菌株的快速孢子形成的能力的水平存在，使得在孢子形成开始后约24小时、36小时、48小时、60小时、72小时、84小时、96小时、108小时、120小时、132小时、144小时、156小时、168小时内产生每克营养物载体至少约1×106、2×106、3×106、4×106、5×106、6×106、7×106、8×106、9×106、1×107、2×107、2×107、3×107、4×107、5×107、6×107、7×107、8×107、9×107、1×108、2×108、3×108、4×108、5×108、6×108、7×108、8×108、9×108、1×109、1×109、2×109、3×109、4×109、5×109、6×109、7×109、8×109、9×109或更多个孢子。
在一些实施方案中，营养物载体由玉米胚芽组成。
玉米胚芽可通过本领域技术人员已知的任何方法产生。在一些实施方案中，在碾磨过程中产生的玉米胚芽可用作营养物载体以支持有益的不产毒曲霉属菌株的孢子形成和/或增殖。在一些实施方案中，使用湿磨过程中产生的玉米胚芽。在一些实施方案中，使用在除湿磨之外的过程中产生的玉米胚芽。
在一些实施方案中，用作本文所述农业生物防治组合物中营养物载体的玉米胚芽具有约3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％或更高，诸如约4％至5％、或约8％至10％的水分含量。
在一些实施方案中，本文所述的农业生物防治组合物在施用组合物之前或之后每千克包含约1×106、2×106、3×106、4×106、5×106、6×106、7×106、8×106、9×106、1×107、2×107、3×107、4×107、5×107、6×107、7×107、8×107、9×107、1×108、2×108、3×108、4×108、5×108、6×108、7×108、8×108、9×108、1×109、2×109、3×109、4×109、5×109、6×109、7×109、8×109、9×109、1×1010、2×1010、3×1010、4×1010、5×1010、6×1010、7×1010、8×1010、9×1010、1×1011、2×1011、3×1011、4×1011、5×1011、6×1011、7×1011、8×1011、9×1011、1×1012、2×1012、3×1012、4×1012、5×1012、6×1012、7×1012、8×1012、9×1012或更多个一种或多种不产毒曲霉属菌株的孢子。
在一些实施方案中，本文所述的农业生物防治组合物还包含粘结剂，诸如农业上可接受的粘结剂。在一些实施方案中，不产毒曲霉属菌株的孢子，特别是高质量的孢子，在相容的种子粘结剂(也称为种子包衣剂、种子粘着剂或包衣粘结剂)的帮助下附着到玉米胚芽。在一些实施方案中，种子粘结剂包含聚合物。合适的聚合物的示例是
Figure BDA0003267161450000141
Treating Solutions Green Polymer 3118，但是用于种子工业的许多聚合物和种子着色剂将同样良好地起作用。在一些实施方案中，聚合物以足够的量存在，以帮助孢子在整个胚芽表面上扩散、粘着到胚芽，并且在胚芽被包被后促进胚芽流动。
在一些实施方案中，种子粘结剂由一种或多种聚合物构成。在一些实施方案中，聚合物为合成聚合物、共聚物、天然生物聚合物或它们的组合。在一些实施方案中，将着色剂添加到聚合物中。
在一些实施方案中，用于本文所述的农业生物防治组合物中的聚合物为无毒聚合物。如本文所用，术语“无毒”意指聚合物对不产毒曲霉属菌株的活性没有任何负面影响或没有显著影响(例如，与没有聚合物的条件相比，不产毒曲霉属菌株的孢子形成速度不被聚合物减慢超过5％)。
在一些实施方案中，种子粘结剂包含通过相同单体的反应制备的聚合物。在一些实施方案中，种子粘结剂包含通过两种或更多种不同单体的反应制备的共聚物。在一些实施方案中，用于聚合物或共聚物的单体选自由以下各项组成的组：乙二醇、乙酸乙烯酯、乙烯醇、丙烯酸乙烯酯、丙烯酸羟乙酯、乙烯基吡咯烷酮、丙烯酸、丙烯酰胺和甲基丙烯酰胺。
在一些实施方案中，种子粘结剂包含一种或多种多糖。可用于本公开的生物防治组合物中的多糖包括但不限于淀粉、糊精、糖原、纤维素、半纤维素、聚右旋糖、菊粉、β-葡聚糖、果胶、车前子壳黏液、半乳甘露聚糖或树胶(例如，β-甘露聚糖、角豆、胡芦巴、瓜尔胶、塔拉胶、黄原胶、魔芋胶、阿拉伯树胶、刺梧桐树胶、黄蓍胶、阿拉伯木聚糖胶、结冷胶、以及它们的衍生物)、葡甘露聚糖、琼脂、琼脂胶、琼脂糖、藻酸盐、角叉菜胶、甲壳质、脱乙酰壳多糖、以及它们的混合物。
在一些实施方案中，种子粘结剂包含一种或多种纤维素，诸如羧甲基纤维素、羧乙基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、羟甲基丙基纤维素、糊精、麦芽糖糊精以及它们的混合物。
在一些实施方案中，种子粘结剂包含淀粉、改性淀粉以及它们的混合物，诸如衍生自玉米、糯玉米、小麦、木薯、蜡质木薯、马铃薯、高粱、水稻、糯米和植物基淀粉、面粉以及蛋白质(豆类)的那些。在一些实施方案中，改性淀粉包括但不限于阳离子淀粉、辛烯基琥珀酸酐淀粉、乙酰化淀粉、经环氧丙烷处理的淀粉、诸如与己二酸、三氯氧磷和表氯醇的交联淀粉。
在一些实施方案中，种子粘结剂包括脂肪、油、蛋白质、多糖、植物和动物产品的其他衍生物以及它们的混合物。
种子粘结剂的更多示例可见于美国专利No.7213367、No.7189677、No.5363754、No.8273684、No.7989391、No.4349578、No.5876739、No.5763509、No.3728817、No.3671633、No.4881343、No.4853429、No.6605268、No.5737872、No.6156699、No.5849320、No.5994265、No.5344871、No.5374670、No.5506285、No.6209259、No.5163896、No.8881453、No.3905152、No.4994013、No.8931209、No.10160692、No.5967521、No.4067141、No.7223436，这些专利中的每个专利全文以引用方式并入本文。
除了玉米胚芽以外，还可在营养物载体中使用附加化合物，以增加孢子形成、减少擦除、改善流动性、改变外观、或提供其他有益效果。特别要关注的是能够增加初始阶段(诸如在农业生物防治组合物被置于适于孢子形成的条件下之后约2小时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、28小时、32小时、36小时、40小时、44小时、48小时、52小时、56小时、60小时、70小时或更长时间)内不产毒曲霉属菌株的孢子形成的化合物。在一些实施方案中，附加化合物包括玉米油或其他植物油，诸如大豆油或花生油。
在一些实施方案中，本文所述的农业生物防治组合物还包含渗透保护剂，诸如农业上可接受的渗透保护剂。在一些实施方案中，渗透保护剂选自但不限于甜菜碱、多元醇、糖和聚胺，诸如甘氨酸甜菜碱、脯氨酸、四氢嘧啶、羟基-四氢嘧啶、谷氨酸盐、胆碱邻硫酸盐、甘露糖醇、麦芽糖、海藻糖、甘油、山梨醇、以及它们的混合物。
在一些实施方案中，本文所述的农业生物防治组合物还包含粘合剂，诸如农业上可接受的粘合剂。在一些实施方案中，本文所述的种子粘结剂中的聚合物用于粘合剂的目的并减少擦除。
在一些实施方案中，本文所述的农业生物防治组合物还包含稳定剂和/或防腐剂，诸如农业上可接受的稳定剂和/或防腐剂。
在一些实施方案中，本文所述的农业生物防治组合物还包含着色剂，诸如农业上可接受的着色剂。
在一些实施方案中，本文所述的农业生物防治组合物的制剂为水分散制剂。在一些实施方案中，本文所述的农业生物防治组合物的制剂为可喷雾制剂。
包含不产毒曲霉属菌株的农业生物防治组合物的制剂的非限制性示例在美国专利No.5171686、No.5294442、No.6306386、No.9011891、No.9526240、No.8173179和No.8734862中有所描述。
在一些实施方案中，本文所述的农业生物防治组合物还包含着色剂。可以使用适于农业目的的任何着色剂。在一些实施方案中，农业着色剂选自由Sun Chemical、BASF、Clariant、Keystone Aniline(Milliken)、Chromatech Incorporated、SensientTechnologies、Aakash Chemicals、Organic Dyes and Pigments、AgriCoatings、ArrMaz、Retort Chemicals以及ER CHEM COLOR生产和销售的那些农业着色剂。在一些实施方案中，种子粘结剂已经含有颜色，因此不需要附加着色剂。
由于用于将曲霉属物种的不产毒菌株施用于土壤的某些制剂可被EPA认为是生物杀虫剂，因此在此类情况下，制剂将在商业使用前向EPA注册。因此，在一些实施方案中，本公开的制剂以EPA可接受的水平包含化学品。
使用本文所述的农业生物防治组合物的方法
使用高粱、小麦、大麦或其他谷粒作为不产毒基因型的营养物来源具有不可避免的缺点，因为必须进行灭菌以杀死与谷粒相关联的病原体，然后通过烘烤使其失活，然后在筒仓中冷却。另外，当高粱或谷粒用于农业生物防治制剂中并且该制剂分布在田地中(例如，通过喷雾)时，谷粒将在田地中生长并与所关注的农业植物竞争。由于农民不想担心高粱或其他谷粒取代所关注的农业植物，因此必须在用有益的曲霉属菌株包被谷粒之前对高粱谷粒进行灭菌(例如，通过烘烤)和冷却。通过用玉米胚芽代替谷粒，有可能避免谷物所需的所有上述灭菌、冷却等加工步骤，因为玉米胚芽不是活的并且基本上不含有害病原体，尤其是当玉米胚芽通过广泛使用的过程诸如湿磨生产时。使用玉米胚芽要便宜得多，因为与高粱或大麦相比，需要非常少的加工步骤，并且材料已经由玉米淀粉设施产生，农业生物防治组合物的生产和使用对于该玉米淀粉设施可能是有利的。因此，使用玉米胚芽降低了制造的资本成本并因此降低了生产农业生物防治组合物的成本。这对于鼓励农民将农业生物防治组合物施用到他们的田地并每年保持这样做以降低作物中的黄曲霉毒素和整个生产区域的环境是非常重要的。
本文所述的农业生物防治组合物可用于被产毒曲霉属污染的任何区域中，或用于易受曲霉属感染的任何植物(例如，作物或其他农业上重要的植物)。此类植物包括但不限于谷物谷粒(例如，小麦、燕麦、水稻、玉米、大麦、高粱、黑麦、粟、黑小麦、苋菜、荞麦和藜麦)、豆类(例如，鹰嘴豆、黄豆、豌豆、小扁豆、羽扇豆和牧豆)、木本坚果(例如，橡子、山毛榉、面包坚果、烛果、栗子、deeknut、榛子、杏仁、Lola坚果、异叶瓶木、蒙刚果、棕榈坚果、karuka、红bopple坚果、杏、腰果、槟榔、婆罗洲牛脂坚果、橄榄坚果、腰果、椰子、加蓬坚果、山核桃、jack坚果、面包坚果、pekea坚果、开心果和胡桃)、无花果、花生、辣椒和棉花。
在一些实施方案中，将本文所述农业生物防治组合物的组分诸如玉米胚芽、聚合物等加工成有机农业的应用中可接受的。有机农业是整体系统，其被设计用于优化农业生态系统内不同社区(包括土壤生物体、植物、牲畜和人)的生产力和适应性。有机农业的主要目标是开发可持续且与环境一致的企业。有机物生产的一般原理包括保护环境、最小化土壤退化和侵蚀、减少污染、优化生物生产力并促进健康的良好状态、通过优化土壤内的生物活性的条件来维持长期的土壤育性、维持系统内的生物多样性、在企业内尽可能最大程度地回收利用材料和资源，提供促进健康并且满足牲畜的行为需要的注意力集中的护理，制备有机产品，强调仔细的加工和处理方法，以便在生产的所有阶段保持产品的有机完整性和生命质量，并且依赖于本地组织的农业系统中的可再生资源。
在一些实施方案中，将本文所述的农业生物防治组合物与农业植物的种子混合，并且在将混合物用于或饲喂给人或动物之前将混合物储存在容器(例如，种子筒仓)中。这将控制储存的种子中的毒性曲霉属物种的感染，并延长储存时间。
在一些实施方案中，本文所述的农业生物防治组合物在农业植物的种子种植在易受或潜在地易受毒性曲霉属物种感染的区域之前、期间或之后被施用于该区域。在一些实施方案中，将本文所述的农业生物防治组合物喷洒在田地上以防止毒性曲霉属物种在植物上扎根。在一些实施方案中，将本文所述的农业生物防治组合物施用于植物已经生长的土壤，以控制土壤或空气或其他植物中的毒性曲霉属物种，并减少目标植物中的黄曲霉毒素含量。
在一些实施方案中，在耕种植物之前(例如，当植物的种子置于用于耕种该植物的区域中时；当外植体被置于该区域中时；当进行接枝时；当植物被转移到该区域时，当生长季节到来时、当休眠植物再生时等)，将本文所述的农业生物防治组合物施用到用于耕种所关注的植物的区域。在一些实施方案中，在植物被耕种前约4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、24小时、28小时、32小时、36小时、40小时、44小时、48小时、60小时、70小时、80小时、90小时、100小时、1周、2周、3周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、1.5年、2年、3年或更长时间，本文所述的农业生物防治组合物可施用于该区域。在一些实施方案中，生物防治组合物可在植物被耕种之前施用多于一次，诸如在植物被耕种之前施用约两次、三次、四次、五次、六次或更多次。
在一些实施方案中，当耕种所关注的植物时，将本文所述的农业生物防治组合物施用到用于耕种该植物的区域。
在一些实施方案中，在耕种所关注的植物之后，将本文所述的农业生物防治组合物施用到用于耕种该植物的区域。在一些实施方案中，在植物被耕种后约1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、24小时、28小时、32小时、36小时、40小时、44小时、48小时、60小时、70小时、80小时、90小时、100小时、1周、2周、3周、4周、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、1.5年、2年、3年、4年、5年、6年、7年或更长时间，本文所述的农业生物防治组合物可施用于该区域。在一些实施方案中，本文所述的农业生物防治组合物可在植物被耕种后施用多于一次，诸如在植物被耕种后施用约两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、或更多次。在一些实施方案中，根据作物物候将本文所述的农业生物防治组合物施用于田地。例如，在一些实施方案中，对于多年生树或作物，本文所述的农业生物防治组合物可每半年施用、每年施用、一年施用两次、一年施用三次、一年施用四次、一年施用五次、一年施用六次、或更多次，或根据需要施用。在一些实施方案中，本文所述的农业生物防治组合物可在有益于真菌生长的期间施用，诸如具有温暖温度和/或高水分含量的月份(例如，在北半球中从五月至八月)。不希望受任何特定理论的束缚，在应用于田地并吸收水分后，不产毒菌株完全或部分定植于该区域，并且丰富的孢子形成提供足以实现不产毒菌株的竞争优势的接种水平。
一些实施方案涉及控制植物、植物的一部分、植物的产品等中的黄曲霉毒素污染的方法。在一些实施方案中，该方法包括使用本文所述的农业生物防治组合物。在一些实施方案中，与未用本文所述的农业生物防治组合物处理的植物中的黄曲霉毒素含量相比，该方法能够将植物中、植物的一部分中或植物的产品中的黄曲霉毒素含量减少至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、600倍、700倍、800倍、900倍、1000倍、或更多倍。在一些实施方案中，当使用相同量的组合物时，与用另一种农业生物组合物(诸如使用谷粒作为营养物载体的生物组合物)处理的植物中的黄曲霉毒素含量相比，该方法能够将植物中、植物的一部分中或植物的产品中的黄曲霉毒素含量减少至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、600倍、700倍、800倍、900倍、1000倍、或更多倍。
又一些实施方案涉及控制作物相关产品或动物产品(其中动物食用被污染的作物作为饲料)诸如肉、肉产品、乳和乳产品中黄曲霉毒素污染的方法。该方法包括使用本文所述的农业生物防治组合物。黄曲霉毒素通过受污染的牛饲料(例如，玉米植物)转移到乳中，并且含有0.5份每十亿份黄曲霉毒素的乳导致乳被倒掉。在一些实施方案中，该方法包括在将种子种植在田地中或喂予人或动物之前、期间和之后，将本文所述的农业生物防治组合物施用于生长牛饲料的田地，或将生物防治组合物与种子和农业植物混合，该种子和农业植物的至少一部分将用作牛饲料。在一些实施方案中，与来自未用本文所述的农业生物防治组合物处理的植物所饲养的动物的动物产品中的黄曲霉毒素含量相比，该方法能够将动物产品中的黄曲霉毒素含量减少至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、600倍、700倍、800倍、900倍、1000倍、或更多倍。在一些实施方案中，当使用相同量的组合物时，与来源于用另一种生物组合物(诸如使用谷粒作为营养物载体的生物组合物)处理的植物所饲养的动物的动物产品中的黄曲霉毒素含量相比，该方法能够将动物产品中的黄曲霉毒素含量减少至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、600倍、700倍、800倍、900倍、1000倍、或更多倍。
在一些实施方案中，本文所述的农业生物防治组合物能够降低田地中生长的植物中、植物产品中、动物中、动物产品中或环境中黄曲霉毒素的总含量和/或一种或多种特定黄曲霉毒素(诸如黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素M1、黄曲霉毒素M2、黄曲霉毒素Q1、黄曲霉毒醇、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2)的含量。有关黄曲霉毒素生物合成，参见以下文献：Ehrlich等人，(2005，Joumal ofApplied Microbiology，第99卷，第3期，第518-527页)，Kusumoto等人，(2000，Current Genetics，第37卷，第104-111页)，Tominaga等人，(2006，Applied&Environmental Microbiology，第72卷，第484-490页)，Chang等人，(1995，Molecular&General Genetics，第248卷，第270-277页)，Lee等人，(2006，AppliedMicrobiology&Biotechnology，第72卷，第2期，第339-345页)，以及Wen等人，(2004，Applied and Environmental Microbiology，第6卷，第3192-3198页)。
一般来讲，淀粉制造厂从附近的农民购买玉米。农业生物防治组合物是可有助于保护制造厂周围区域的广域管理工具，确保玉米或其他目标作物不含毒素。这也可降低运输成本。因此，本公开提供了控制淀粉制造厂周围的耕种区域中的黄曲霉毒素污染的方法。例如，耕种区域距淀粉制造厂约0英里、1英里、2英里、3英里、4英里、5英里、10英里、15英里、20英里、25英里、30英里、35英里、40英里、45英里、50英里、55英里、60英里、70英里、80英里、90英里、100英里或更长。
再一些实施方案涉及快速产生曲霉属物种(诸如不产毒曲霉属菌株)的孢子的方法。在一些实施方案中，该方法包括获得玉米胚芽作为孢子形成的营养物载体，以及将玉米胚芽与曲霉属菌株混合或组合。在一些实施方案中，曲霉属菌株为孢子或活性细胞的形式。在一些实施方案中，曲霉属菌株附着到玉米胚芽的表面。在一些实施方案中，曲霉属菌株例如通过粘结剂或聚合物包被在玉米胚芽的表面上或施用到玉米胚芽的表面。在一些实施方案中，该方法还包括在合适的条件下(例如，在适当的温度和水分下)对曲霉属的菌株进行孢子形成。
在一些实施方案中，本文所述的方法使得曲霉属菌株(例如，不产毒菌株)的孢子能够在短时间段内快速产生。例如，在合适的条件下，在孢子形成开始后(例如，当将本文所述农业生物防治组合物置于合适的条件下时)约24小时、36小时、48小时、60小时、72小时、84小时、96小时、108小时、120小时、132小时、144小时、156小时或、168小时内，该方法产生每克营养物载体约1×106、2×106、3×106、4×106、5×106、6×106、7×106、8×106、9×106、1×107、2×107、2×107、3×107、4×107、5×107、6×107、7×107、8×107、9×107、1×108、2×108、3×108、4×108、5×108、6×108、7×108、8×108、9×108、1×109、1×109、2×109、3×109、4×109、5×109、6×109、7×109、8×109、9×109或更多个孢子。在一些实施方案中，组合物的孢子收率可以通过本领域已知的那些方式以完全相同的方式定量。例如，在合适的高湿度(例如，约100％相对湿度)下的标准温育周期之后，从营养物载体洗涤孢子。孢子悬浮液的分生孢子浓度可用浊度计测量并用比浊法浊度单位(NTU)与CFU曲线计算。在一些实施方案中，平均孢子收率超过每克营养物载体约2×109个孢子-2.5×109个孢子。
与使用谷粒作为曲霉属菌株(诸如基于水稻、小麦、高粱、大麦等的那些曲霉属菌株)的营养物载体的组合物和方法相比，本文所述的组合物和方法能够更快地产生曲霉属菌株(例如，不产毒曲霉属菌株)的孢子。例如，在一些实施方案中，在孢子形成开始后约24小时、36小时、48小时、60小时、72小时、84小时、96小时、108小时、120小时、132小时、144小时、156小时、168小时，与在诸如可商购获得的产品(包括但不限于
Figure BDA0003267161450000221
知FOURSURETM)中的那些的相同条件下使用谷粒作为营养物载体的组合物和方法相比，本文所述的组合物和方法提供至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、1.1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、1.6倍、1.7倍、1.8倍、1.9倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、5.5倍、6倍、6.5倍、7倍、7.5倍、8倍、8.5倍、9倍、9.5倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、35倍、40倍、45倍、50倍、55倍、60倍、65倍、70倍、75倍、80倍、85倍、90倍、95倍、100倍或更多的孢子。
有益效果
现有的黄曲霉毒素生物防治组合物是基于谷粒的生物防治组合物，其在用有益的不产毒菌株包被之前需要烘烤和冷却。与现有组合物(例如，使用小麦、高粱或大麦作为营养物载体)相比，本文所述的组合物和方法实现以下有益效果：
1.本文所述的组合物和方法提供每克营养物载体更高的孢子收率。全球大多数生物防治组合物使用高粱作为营养物载体(例如由IITA和USDA开发的
Figure BDA0003267161450000231
)。还使用小麦和大麦(例如，由USDA开发并由Syngenta分销的
Figure BDA0003267161450000232
以及由ArizonaCotton Research and Protection Council分销的
Figure BDA0003267161450000233
)。与这些组合物和相关的制造过程相比，本文所述的农业生物防治组合物每克营养物载体产生更多的孢子。例如，与包含高粱作为营养物载体的组合物相比，本文所述的农业生物防治组合物在48小时内每克包含玉米胚芽的营养物载体产生更多的孢子。因此，本文所述的农业生物防治组合物确保在产黄曲霉毒素菌株快速增加之前，在田地中不产毒基因型活跃地生长。由于有益的不产毒曲霉属菌株在施用后快速孢子形成，大量的不产毒孢子产生并通过置换黄曲霉毒素生产者并与黄曲霉毒素生产者竞争来保护作物。此外，在产生最佳量的孢子之前，快速孢子形成减少了对营养物载体的损害或通过鸟类、哺乳动物(例如，啮齿动物)或昆虫捕食而移除营养物载体。
2.由于本文所述农业生物防治组合物中包含的玉米胚芽可通过玉米湿磨过程产生，该玉米湿磨过程是完善的淀粉纯化过程，其包括在高温下浸泡和干燥，因此本公开的组合物具有可靠的微生物学特征(例如，胚芽上的微生物)。例如，组合物不包含不需要的真菌和细菌(例如，肠道菌)，或仅包含极低水平的不需要的真菌或细菌，这将不会引起关注(例如，不可检测，或满足EPA所设定的要求)。
3.当生产玉米胚芽以制备本文所述农业生物防治组合物时，本文所述的组合物和方法仅需要尺寸分选和包被设备。由于不需要谷粒储存和烘烤设备，因此本文所述的组合物和方法导致较少的资本投资。由于使用胚芽作为营养物载体需要较少的能量和劳动力，因此成本也较低。
4.本文所述的组合物和方法需要较低的起始成本和较少的劳动力，从而导致非常低的生产成本。例如，需要很少的人来进行制造和质量控制。较低成本鼓励农民先行施用生物防治产品，这改变了真菌群体，导致黄曲霉素的广域减少。这对于必须从整个区域抽取作物的加工或制造厂尤其重要。此外，由于包装是成本最密集的部分，因此批量包装在一些实施方案中是可接受的。
5.本文所述的组合物和方法使得用于制造本文所述的农业生物防治组合物的过程能够比现有的生物防治剂制造过程更有效，更简单，并且需要更少的能量。例如，在本文所述的制造过程中不需要精磨、烘烤或汽蒸步骤，这导致较低的实用成本。
6.本文描述的组合物可以在需要黄曲霉毒素管理的农业社区附近生产和使用，包括向淀粉制造设施提供玉米植物的那些农业社区。例如，在许多位置存在淀粉植物。本文所述的组合物可作为玉米湿磨过程的副产物在淀粉植物内或淀粉植物附近直接产生，并且直接施用于产生玉米的区域，这继而降低了运输成本。
7.制备和使用本文所述的组合物不产生附加废物。例如，以与使用未分选的胚芽相似的方式，将移除的材料用于生产油和饲料。此外，不产生壳并且不产生由谷物清洁产生的材料。由于玉米胚芽已经由淀粉制造厂作为联产品产生，因此无需进一步加工或极少加工即可使用。
8.制备和使用本文所述的组合物不使用可直接食用的食物。例如，玉米胚芽一般不是可直接食用的食物，并且必须提取以制备油加饲料。这与小麦、大麦和高粱(这三者在一些地区都用作食物)不同，因为即使使用非常少的小麦、大麦或高粱的谷粒，使用者、NGO和政府实体也可能抱怨用于生产生物防治产品的食品质量谷粒。
9.在某些实施方案中，玉米胚芽作为淀粉制造过程的联产品产生，其仅可由淀粉植物供应。因此，本文所述的过程导致本文所述的生物防治组合物可用于其中存在淀粉制造厂的区域。
在一些实施方案中，本发明包括胚芽纯化和颗粒分级，其允许随时间推移一致的产品尺寸以及粒度的谨慎管理以增强流动性并优化每质量产品颗粒的数量，并因此优化灵活性以管理递送到经处理的田地的每重量的颗粒的数量，以便优化目标作物的覆盖。
此外，与包含谷粒作为营养物载体的现有商业生物防治组合物相比，本文所述的组合物和方法使得有益的不产毒曲霉属菌株能够更快且更大程度地孢子形成以用于黄曲霉毒素生物防治，同时有效地减少劳动力和成本。例如，含有谷物谷粒(例如，小麦、高粱、大麦等)的生物防治组合物需要若干步骤。特别地，谷粒必须购买、运输到设施、储存、巴氏灭菌和冷却，然后用有益的不产毒孢子悬浮液包衣。这些步骤需要更多的劳动力，对设备、空间的大量资本投资，并且由于能量使用而导致更高的操作成本。然而，生产本文所述农业生物防治组合物不需要这些步骤。
概括地说，使用胚芽作为营养物载体简化了制造过程，这现在仅需要分级和包衣设备，使其效率更高并且劳动密集性更低。虽然生物防治技术确保了安全的食品，但基于胚芽的制剂通过使用联产品增加了该技术的可持续性，从而降低了能量成本，消除了浪费，并且使产品更有效。总体而言，使用胚芽通过消除或最小化设备和能量成本降低了生物防治产品的成本，同时通过更快和更多的孢子形成有助于更有效的产品。
定义
对“一个实施方案”、“实施方案”、“一个示例”和“示例”的引用指示如此描述的实施方案或示例可包括特定特征、结构、特性、性质、元件或限制，但并非每个实施方案或示例都必须包括该特定特征、结构、特性、性质、元件或限制。此外，短语“在一个实施方案中”的重复使用不一定是指相同的实施方案，但是它可以是相同的实施方案。
如本文所用，术语“约”是指参考数字加或减10％或5％。
短语“基本上由...组成”意指组合物或方法可包括附加成分和/或步骤，但只有在附加成分和/或步骤不在实质上改变受权利要求书保护的组合物或方法的基本特性和新颖特性的情况下。
如本文所用，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数指代物，除非上下文另外明确指出。例如，术语“化合物”或“至少一种化合物”可包括多种化合物，包括它们的混合物。
词语“示例性”在本文中用来指“用作示例、实例或例证”。被描述为“示例性”的任何实施方案不一定被理解为比其他实施方案优选或有利，并且/或者从其他实施方案中排除特征的结合。
词语“任选地”在本文中用于意指“在一些实施方案中提供而在其他实施方案中不提供”。本发明的任何具体实施方案可包括多个“任选的”特征，除非此类特征有冲突。
本公开的某些实施方案在以下实施例中进一步描述。应当理解，这些实施例仅以例证的方式给出。通过以上讨论和这些实施例，本领域的技术人员可确定基本特性，并且在不脱离其精神和范围的情况下，可对本发明的实施方案作出各种变化和修改以使其适用于各种用途和条件。因此，除了本文所示和所述的那些之外，根据前面的描述，本发明的实施方案的各种修改对于本领域的技术人员而言将是显而易见的。此类修改也旨在落入所附权利要求的范围内。
实施例
实施例1
黄曲霉毒素生物防治组合物的生产
在湿磨过程期间分离玉米胚芽，这赋予胚芽可靠的微生物学特性，这是由包括浸泡和干燥的完善的淀粉纯化过程产生的。胚芽不具有不需要的真菌，并且不需要进行巴氏灭菌，从而降低了设备和能量成本。清洁该胚芽以移除不支持真菌生长的杂质(果皮等)，并且筛分(7目)以便以适当尺寸移除碎片。用有益的不产毒曲霉属菌株和聚合物(TreatingSolutions Green Polymer 3118，Milliken&Co.)包被该经清洁、筛分的胚芽以产生黄曲霉毒素生物防治组合物。
实施例2
黄曲霉毒素生物防治组合物在促进孢子形成方面的功效
将作为营养物载体的玉米胚芽与作为营养物载体的高粱进行比较，以便评估促进不产毒曲霉属菌株的孢子形成的能力。基本上，将相同量的不产毒曲霉属菌株接种至玉米胚芽或高粱。在适于孢子形成的条件下温育48小时后，检查并记录孢子形成状态，直到7天。如表1和图1所示的结果清楚地表明，与高粱相比，在玉米胚芽表面上产生了多得多的孢子(表示为比浊法浊度单位(NTU))。
Figure BDA0003267161450000271
接下来，将高粱和玉米胚芽用作营养物载体，以测试它们促进不产毒曲霉属菌株的孢子形成的能力。每一者接种有相同量的不产毒曲霉属菌株，重复三次。在接种后0-168小时内，将诱导孢子的量测量为比浊法浊度单位(NTU)。如表2A以及图2和图3所示的结果再次证实玉米胚芽与高粱相比从早期(例如接种后48小时内)产生多得多的孢子。表2B证明玉米胚芽胜过高粱。
Figure BDA0003267161450000272
Figure BDA0003267161450000273
Figure BDA0003267161450000281
1.NRRL真菌保藏于ARS培养物保藏中心，FGSC真菌保藏于真菌遗传学信息中心。
2.AF36 Prevail(Arizona Cotton Research and Protection Council商标)中包含的不产毒基因型。
3.
Figure BDA0003267161450000282
(Syngenta)的不产毒基因型(AFLA-GUARD为Circle-One Global，Inc.的注册商标)。
4.
Figure BDA0003267161450000283
(Texas Corn Producers Board)中包含等量的不产毒基因型(FOURSURE是Texas Com Producers Board的注册商标)。
实施例3
黄曲霉毒素生物防治组合物在降低玉蜀黍谷粒中黄曲霉毒素含量方面的功效
实验室测试中AflaPak的不产毒黄曲霉菌株的功效
在对成熟玉蜀黍籽粒的实验室研究中评估AflaPak中黄曲霉菌株的功效。本研究中使用的测定类型还反映了当黄曲霉毒素落在成熟作物上时或当在成熟后存在高湿度和高温时在田地中出现的黄曲霉毒素的增加。这种类型的测定法还反映了在已经收获作物并将水分含量高于15％的玉蜀黍运输、储存或甚至混合到饲料中并饲喂(即，在乳品场中)之后相关的功效。
使用用于黄曲霉的不产毒基因型的初始筛选的相同方法进行实验室测试，该黄曲霉的不产毒基因型目前在肯尼亚的农田中使用，其中黄曲霉毒素对人类的最严重影响是已知的。该方法的细节在以下文献中：Probst等人，2011(“Identification of atoxigenicAspergillus flavus isolates to reduce aflatoxin contamination of maize inKenya.”Plant Disease，第95卷，第2期，第212-218页)。对玉蜀黍的实验室测试的结果和统计分析在表3中示出。表3显示AflaPak中的黄曲霉菌株减少了由分离自巴基斯坦玉蜀黍的所有四种高产黄曲霉毒素真菌菌株(PKM31-H、PKM30-G、PKM11-L和PKM62-D)引起的黄曲霉毒素污染。
Figure BDA0003267161450000291
遵循以下文献中的程序来对全玉蜀黍籽粒执行两种测试：Probst等人，2011，以及Probst和CottV，2012。值是四次重复的平均值。所有真菌均分离自巴基斯坦生产的玉蜀黍。PKM31-H、PKM30-G、PKM11-L和PKM03-N属于黄曲霉的L-菌株形态型。PKM62-D属于黄曲霉的S-菌株形态型。AflaPak中的菌株缺失黄曲霉毒素生物合成所需的基因，因此它是不产毒基因型。不产毒意指其不具有产生黄曲霉毒素的能力并且可用于减轻黄曲霉毒素。
本公开的编号的实施方案
本公开所设想的主题在以下编号的实施方案中陈述：
1.一种农业生物防治组合物，该农业生物防治组合物包含曲霉属的不产毒菌株和营养物载体，其中营养物载体包括玉米胚芽。
2.根据实施方案1所述的农业生物防治组合物，其中组合物还包含选自由以下各项组成的组的一种或多种元素：载体剂、旨在保持曲霉属的不产毒菌株的活性和活力的试剂、铺展剂(散布剂)、粘结剂、渗透保护剂、粘合剂(粘着剂)、稳定剂、防止擦除的试剂、着色剂和防腐剂。
3.根据实施方案1或2所述的农业生物防治组合物，其中组合物还包含种子粘结剂，该种子粘结剂任选地包含聚合物。
4.根据实施方案3所述的农业生物防治组合物，其中种子粘结剂包被在玉米胚芽的表面上。
5.根据实施方案3或4中任一项所述的农业生物防治组合物，其中聚合物包括颜料。
6.根据实施方案1-5中任一项所述的农业生物防治组合物，其中曲霉属的不产毒菌株包被在玉米胚芽的表面上。
7.根据实施方案1-6中任一项所述的农业生物防治组合物，其中玉米胚芽作为玉米湿磨过程的副产物产生。
8.根据实施方案1-7中任一项所述的农业生物防治组合物，其中组合物通过不包括以下步骤的过程产生：使玉米胚芽失活，对玉米胚芽进行精磨或轧制，通过烘烤对玉米胚芽进行灭菌，和/或对玉米胚芽进行冷却。
9.根据实施方案1-8中任一项所述的农业生物防治组合物，其中用筛分和/或其他手段对玉米胚芽进行尺寸分选。
10.根据实施方案9所述的农业生物防治组合物，其中使用一组指定尺寸的筛来移除较小的片和较大的片并提供期望尺寸的胚芽颗粒。
11.根据实施方案10所述的农业生物防治组合物，其中7号或8号美国筛用于保持期望的尺寸并允许较小的片通过，并且6号美国筛用于保持较大的不期望片和废料。
12.根据实施方案1-11中任一项所述的农业生物防治组合物，其中玉米胚芽通过除湿磨之外的过程产生。
13.根据实施方案1-12中任一项所述的农业生物防治组合物，其中与基本上由通过玉米湿磨过程产生的玉米胚芽组成的组合物相比，该组合物(i)基本上不含除曲霉属的不产毒菌株之外的真菌，并且基本上不含致病肠道菌，或者(ii)包含等量或更少的细菌。
14.根据实施方案1-13中任一项所述的农业生物防治组合物，其中玉米胚芽通过不包括精磨、烘烤和/或汽蒸的过程产生。
15.一种用于生产农业生物防治组合物的方法，该方法包括：
(1)获得玉米胚芽；以及
(2)将玉米胚芽与曲霉属的不产毒菌株组合以产生农业生物防治组合物。
16.根据实施方案15所述的方法，其中玉米胚芽作为玉米湿磨过程的副产物产生。
17.根据实施方案15或16所述的方法，其中将玉米胚芽筛分以移除碎片。
18.根据实施方案17所述的方法，其中使用5号美国筛尺寸(5目)或6号美国筛尺寸(6目)以移除较大的片和废料，并且使用7号美国筛尺寸(7目)或8号美国筛尺寸(8目)以移除较小的片并且允许较小的片穿过。
19.根据实施方案15-18中任一项所述的方法，其中该方法包括：
(1)产生玉米胚芽作为玉米湿磨过程的副产物；
(2)筛分步骤(1)中产生的玉米胚芽以移除碎片；以及
(3)将筛分的玉米胚芽与曲霉属的不产毒菌株组合以产生农业生物防治组合物。
20.根据实施方案1-14中任一项所述的组合物或根据实施方案15-19中任一项所述的方法，其中在将农业生物防治组合物置于适于曲霉属的不产毒素菌株的孢子形成的条件下之后约48小时内，农业生物防治组合物支持曲霉属的不产毒菌株的孢子形成比高粱多2倍。
21.根据实施方案1-14中任一项所述的组合物或根据实施方案15-20中任一项所述的方法，其中曲霉属的不产毒菌株为米曲霉菌株、黄曲霉菌株、酱油曲霉菌株或它们的混合物。
22.根据实施方案15-21中任一项所述的方法，其中该方法不包括在所述玉米胚芽与曲霉属的不产毒菌株组合或包被有曲霉属的不产毒菌株之前，使玉米胚芽失活，通过烘烤对玉米胚芽进行灭菌，和/或对玉米胚芽进行冷却的步骤。
23.根据实施方案15-22中任一项所述的方法，其中农业生物防治组合物基本上不含除曲霉属的不产毒菌株之外的真菌，并且基本上不含致病肠道菌，或者其中该方法引入与玉米湿磨过程相比等量或更少的细菌。
24.一种用于控制农业植物或源自所述植物的农业产品中的黄曲霉毒素污染的方法，该方法包括将黄曲霉毒素减少的有效量的(i)根据实施方案1-14或20-21中任一项所述或(ii)通过根据实施方案15-23中任一项所述的方法产生的农业生物防治组合物施用于植物、生长场所或植物产品。
25.根据实施方案24所述的方法，其中农业生物防治组合物为水分散性颗粒状制剂。
26.一种用于控制耕种区域中的黄曲霉毒素污染的方法，该方法包括将施用于耕种区域的黄曲霉毒素减少的有效量的(i)根据实施方案1-14或20-23中任一项所述或(ii)通过根据实施方案15-23中任一项所述的方法产生的农业生物防治组合物施用于植物、生长场所或植物产品。
27.根据实施方案1-14或20-23中任一项所述的组合物或根据实施方案15-26中任一项所述的方法，其中营养物载体基本上由玉米胚芽组成。
28.根据实施方案26或27所述的方法，其中耕种区域靠近淀粉制造厂。
29.一种用于降低在被一种或多种产毒曲霉属物种污染的区域中或存在受一种或多种产毒曲霉属物种污染的风险的一种或多种产毒曲霉属物种的农业生物防治的成本的方法，该方法包括将黄曲霉毒素减少的有效量的(i)根据实施方案1-14、20-23、或27中任一项所述，或(ii)通过根据实施方案15-23或27中任一项所述的方法产生的农业生物防治组合物施用于所述区域。
30.一种用于曲霉属的不产毒菌株的快速孢子形成的方法，该方法包括：
(1)获得玉米胚芽作为不产毒菌株的营养物载体；
(2)将玉米胚芽与曲霉属的不产毒菌株组合以产生农业生物防治组合物；以及
(3)在合适的条件下对曲霉属的不产毒菌株进行孢子形成，其中与使用相同量的高粱谷粒作为营养物载体相比，该方法在约48小时内每克玉米胚芽产生多至少2倍的孢子。
31.一种利用玉米湿磨过程的副产物的方法，该方法包括：
(1)产生玉米胚芽作为玉米湿磨过程的副产物；
(2)筛分步骤(1)中产生的玉米胚芽以移除碎片；以及
(3)将筛分的玉米胚芽与曲霉属的不产毒菌株组合以产生农业生物防治组合物。
出于所有目的，将本文引用的所有参考文献、文章、出版物、专利、专利公布和专利申请全文以引用方式并入本文。然而，提及本文引用的任何参考文献、文章、出版物、专利、专利公布和专利申请并不应当被视为确认或任何形式的建议，即它们构成有效的现有技术或形成世界上任何国家的公知常识的一部分。
除非另有定义，否则本文的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。尽管与本文所述的那些方法和材料类似或等同的任何方法和材料都可用于本发明的实践或测试，但本文描述了优选的方法和材料。出于所有目的，所有引用的出版物、专利和专利公布都全文以引用方式并入本文。
本文所讨论的出版物仅是为了它们在本专利申请的提交日期之前的公开内容而提供的。本文中的任何内容都不应理解为承认本发明无权凭借先前的发明先于此类出版物。
虽然已经结合本发明的特定实施方案描述了本发明，但是应当理解，能够进行进一步的修改，并且本申请旨在覆盖总体上遵循本发明的原理的本发明的任何变型、用途或改编，并且包括在本发明所属领域内的已知或惯例实践内的与本公开的此类偏离，并且可以应用于在上文中阐述的并且如下在所附权利要求的范围内的基本特征。

Claims (23)

1.一种农业生物防治组合物，所述农业生物防治组合物包含曲霉属的不产毒菌株和营养物载体，其中所述营养物载体包括玉米胚芽。
2.根据权利要求1所述的农业生物防治组合物，其中所述组合物还包含选自由以下各项组成的组的一种或多种元素：载体剂、旨在保持曲霉属的不产毒菌株的活性和活力的试剂、铺展剂(散布剂)、粘结剂、渗透保护剂、粘合剂(粘着剂)、稳定剂、防止擦除的试剂、着色剂和防腐剂。
3.根据权利要求1或2所述的农业生物防治组合物，其中所述组合物还包含种子粘结剂，所述种子粘结剂任选地包含聚合物。
4.根据权利要求1-4中任一项所述的农业生物防治组合物，其中所述曲霉属的不产毒菌株包被在所述玉米胚芽的表面上。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的农业生物防治组合物，其中所述玉米胚芽作为玉米湿磨过程的副产物产生。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的农业生物防治组合物，其中所述组合物通过不包括以下步骤的过程产生：使所述玉米胚芽失活，对所述玉米胚芽进行精磨或轧制，通过烘烤对所述玉米胚芽进行灭菌，和/或对所述玉米胚芽进行冷却。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的农业生物防治组合物，其中与基本上由通过玉米湿磨过程产生的玉米胚芽组成的组合物相比，所述组合物(i)基本上不含除所述曲霉属的不产毒菌株之外的真菌，并且基本上不含致病肠道菌，或者(ii)包含等量或更少的细菌。
8.一种用于生产农业生物防治组合物的方法，所述方法包括：
(1)获得玉米胚芽；以及
(2)将所述玉米胚芽与曲霉属的不产毒菌株组合以产生所述农业生物防治组合物。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述玉米胚芽作为玉米湿磨过程的副产物产生。
10.根据权利要求8或9所述的方法，其中将所述玉米胚芽筛分以移除不期望尺寸的片。
11.根据权利要求8-10中任一项所述的方法，其中所述方法包括：
(1)产生玉米胚芽作为玉米湿磨过程的副产物；
(2)筛分步骤(1)中产生的所述玉米胚芽以移除碎片；
(3)将所筛分的玉米胚芽与曲霉属的不产毒菌株组合以产生所述农业生物防治组合物。
12.根据权利要求1-7中任一项所述的组合物或根据权利要求8-11中任一项所述的方法，其中在将所述农业生物防治组合物置于适于所述曲霉属的不产毒素菌株的孢子形成的条件下之后约48小时内，所述农业生物防治组合物支持所述曲霉属的不产毒菌株的孢子形成比高粱多2倍。
13.根据权利要求1-7中任一项所述的组合物或根据权利要求8-12中任一项所述的方法，其中所述曲霉属的不产毒菌株为米曲霉菌株、黄曲霉菌株、酱油曲霉菌株或它们的混合物。
14.根据权利要求8-13中任一项所述的方法，其中所述方法不包括在所述玉米胚芽与所述曲霉属的不产毒菌株组合或包被有所述曲霉属的不产毒菌株之前，使所述玉米胚芽失活，通过烘烤对所述玉米胚芽进行灭菌，和/或对所述玉米胚芽进行冷却的步骤。
15.根据权利要求8-14中任一项所述的方法，其中所述农业生物防治组合物基本上不含除所述曲霉属的不产毒菌株之外的真菌，并且基本上不含致病肠道菌，或者其中所述方法引入与所述玉米湿磨过程相比等量或更少的细菌。
16.一种用于控制农业植物或源自所述植物的农业产品中的黄曲霉毒素污染的方法，所述方法包括将黄曲霉毒素减少的有效量的根据权利要求1-8或12-13中任一项所述的农业生物防治组合物施用于植物、生长场所或植物产品。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述农业生物防治组合物为水分散性颗粒状制剂。
18.一种用于控制耕种区域中的黄曲霉毒素污染的方法，所述方法包括向耕种区域施用黄曲霉毒素减少的有效量的根据权利要求1-8或12-13中任一项所述的农业生物防治组合物。
19.根据权利要求1-8或12-13中任一项所述的组合物或根据权利要求9-18中任一项所述的方法，其中所述营养物载体基本上由玉米胚芽组成。
20.根据权利要求18或19所述的方法，其中所述耕种区域靠近淀粉制造厂。
21.一种用于降低在被一种或多种产毒曲霉属物种污染的区域中或存在受一种或多种产毒曲霉属物种污染的风险的一种或多种产毒曲霉属物种的农业生物防治的成本的方法，所述方法包括向所述区域施加黄曲霉毒素减少的有效量的根据权利要求1-8、12-13或19中任一项所述的农业生物防治组合物。
22.一种用于曲霉属的不产毒菌株的快速孢子形成的方法，所述方法包括：
(1)获得玉米胚芽作为不产毒菌株的营养物载体；
(2)将所述玉米胚芽与所述曲霉属的不产毒菌株组合以产生农业生物防治组合物；以及
(3)在合适的条件下对所述曲霉属的不产毒菌株进行孢子形成，其中与使用相同量的高粱谷粒作为所述营养物载体相比，所述方法在约48小时内每克所述玉米胚芽产生多至少2倍的孢子。
23.一种利用玉米湿磨过程的副产物的方法，所述方法包括：
(1)产生玉米胚芽作为所述玉米湿磨过程的副产物；
(2)筛分步骤(1)中产生的所述玉米胚芽以移除碎片；以及
(3)将所筛分的玉米胚芽与曲霉属的不产毒菌株组合以产生农业生物防治组合物。
CN202080022049.0A 2019-04-02 2020-03-30 黄曲霉毒素生物防治组合物 Pending CN113747790A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962828453P 2019-04-02 2019-04-02
US62/828,453 2019-04-02
PCT/US2020/025767 WO2020205764A1 (en) 2019-04-02 2020-03-30 Aflatoxin biocontrol composition

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113747790A true CN113747790A (zh) 2021-12-03

Family

ID=70465350

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202080022049.0A Pending CN113747790A (zh) 2019-04-02 2020-03-30 黄曲霉毒素生物防治组合物

Country Status (9)

Country Link
US (1) US20220167629A1 (zh)
EP (1) EP3945829A1 (zh)
JP (1) JP7551645B2 (zh)
CN (1) CN113747790A (zh)
AU (1) AU2020253410A1 (zh)
BR (1) BR112021018702A2 (zh)
CA (1) CA3134549A1 (zh)
MX (1) MX2021011650A (zh)
WO (1) WO2020205764A1 (zh)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7361499B1 (en) * 2005-01-11 2008-04-22 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculute Non-aflatoxigenic Aspergillus flavus isolates
US20100223693A1 (en) * 2009-02-18 2010-09-02 Southern Illinois University Carbondale Methods of using plants containing the gdha gene
CN101842476A (zh) * 2007-08-31 2010-09-22 美国农业部 用于递送生物防治真菌以减少黄曲霉毒素的水分散性制剂
WO2014191917A1 (en) * 2013-05-27 2014-12-04 Universita' Cattolica Del Sacro Cuore Non-toxigenic strain of aspergillus flavus
CN104789480A (zh) * 2015-03-10 2015-07-22 浙江大学 不产黄曲霉毒素的黄曲霉菌株和混合菌群及其应用
CN105231138A (zh) * 2015-10-26 2016-01-13 合肥刘老四调味品厂 一种乳酸发酵黄豆酱

Family Cites Families (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2282817A (en) 1941-01-08 1942-05-12 Musher Foundation Inc Treatment of refined wet processed corn germ oil
US2459548A (en) 1944-12-06 1949-01-18 Allied Mills Inc Corn germ removal
US3671633A (en) 1971-05-10 1972-06-20 American Cyanamid Co Process for tabletting acetazolamide
US3728817A (en) 1971-05-28 1973-04-24 Moews Seed Co Preventing shedding of pollen by applying binder to corn tassels
US3905152A (en) 1974-07-02 1975-09-16 Minnesota Mining & Mfg Coated seeds
JPS5213812A (en) 1975-07-11 1977-02-02 Hayashibara Biochem Lab Production of coated seed
US4349578A (en) 1977-09-09 1982-09-14 A. E. Staley Manufacturing Company Condensed vegetable seed solubles animal feed ingredient
JPS5596092A (en) * 1979-01-13 1980-07-21 Higeta Shoyu Kk Production of seed malt
GB2074183B (en) 1980-04-18 1983-10-05 Cpc International Inc Process for obtaining corn oil from corn germs and corn oil thus obtained
US4495207A (en) 1982-10-25 1985-01-22 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Production of food-grade corn germ product by supercritical fluid extraction
US5763509A (en) 1985-03-18 1998-06-09 The Board Of Regents Of The University Of Nebraska Binder containing plant protein and densified refuse fuel cubes made using same and methods of making them
US5374670A (en) 1985-03-18 1994-12-20 The Board Of Regents Of The University Of Nebraska Binders, method of making and using binders and structures made using binders
US5153242A (en) 1985-03-18 1992-10-06 The Board Of Regents Of The University Of Nebraska Composition board including plant protein in binder
JPS63198903A (ja) 1987-02-14 1988-08-17 大日精化工業株式会社 種子用着色剤
US4881343A (en) 1987-02-14 1989-11-21 Dainichiseika Color & Chemicals Mfg. Co. Ltd. Seed colorant
US4994013A (en) 1988-07-28 1991-02-19 Best Industries, Inc. Pellet for a radioactive seed
US5171686A (en) 1989-11-29 1992-12-15 The United States Of America As Represented By The United States Department Of Agriculture Use of native Aspergillus flavus strains to prevent aflatoxin contamination
US5363754A (en) 1991-09-03 1994-11-15 Grainco Queensland Co-Operative Association Limited Apparatus for preparing animal feedstuff from cotton seed
US5297348A (en) 1993-03-01 1994-03-29 The French Oil Mill Machinery Company Process and apparatus for efficiently drying wet-milled corn germ and other materials
DE4442255A1 (de) * 1994-11-28 1996-05-30 Bayer Ag Schädlingsbekämpfungsmittel
US5876739A (en) 1996-06-13 1999-03-02 Novartis Ag Insecticidal seed coating
US5849320A (en) 1996-06-13 1998-12-15 Novartis Corporation Insecticidal seed coating
US5737872A (en) 1996-08-07 1998-04-14 National Research Council Of Canada Formulation for synthetic seed
US6209259B1 (en) 1997-07-11 2001-04-03 Encap, Llc Seeding treatments
US6156699A (en) 1997-11-13 2000-12-05 Rhone-Poulenc Ag Company Inc. Process for the production of coated, singulated seed
US5967521A (en) 1997-11-14 1999-10-19 Hellings; Deborah Non-toxic, edible, and biodegradable skeet and method of making the same
US5994265A (en) 1998-03-18 1999-11-30 Barclay; Stu Seed coating composition of gypsum with molybdenum
US6027724A (en) 1998-07-06 2000-02-22 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Non-toxigenic strain of Aspergillus oryzae and Aspergillus sojae for biocontrol of toxigenic fungi
KR19990068298A (ko) 1999-03-12 1999-09-06 정명우 장미씨기름을함유하는치약조성물
US6306386B1 (en) 1999-07-26 2001-10-23 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Biological control formulations containing spores of nontoxigenic strains of fungi for toxin control of food crops
TWI283165B (en) 2000-04-18 2007-07-01 Incotec Japan Co Ltd Rice seed coated with an agricultural chemical
US6746698B2 (en) 2000-07-06 2004-06-08 Grain Processing Corporation Animal feed, method for preparing animal feed, and method for feeding an animal
BR0308607B1 (pt) 2002-03-26 2013-07-16 método de produzir um polímero de ureia-formaldeído em partículas
US6899910B2 (en) 2003-06-12 2005-05-31 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Processes for recovery of corn germ and optionally corn coarse fiber (pericarp)
US7846463B2 (en) * 2005-05-11 2010-12-07 Grain Processing Corporation Pest control composition and method
US7989391B2 (en) 2006-10-26 2011-08-02 E. I. Du Pont De Nemours And Company Seed coating composition
US8931209B2 (en) 2007-12-11 2015-01-13 Aquasmart Enterprises, Llc Seed-delivered, soil-amendment method and composition
US8881453B2 (en) 2007-12-11 2014-11-11 Aquasmart Enterprises, Llc Seed-borne, soil amendment method and composition
US8173179B1 (en) 2009-02-10 2012-05-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Granular bioplastic biocontrol composition
US8637002B2 (en) 2011-01-19 2014-01-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Non-toxigenic strains of Aspergillus flavus for control of aflatoxin contamination in crops
PL2713750T3 (pl) 2011-05-26 2022-07-11 Syngenta Participations Ag Stabilizowane dyspergowalne w wodzie granulaty do biologicznego zwalczania
WO2015145221A1 (en) 2014-03-27 2015-10-01 Immelman Andre A micronized composition
US9526240B2 (en) 2014-05-13 2016-12-27 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Sprayable dispersed starch-based bioplastic formulation to control pests

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7361499B1 (en) * 2005-01-11 2008-04-22 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculute Non-aflatoxigenic Aspergillus flavus isolates
CN101842476A (zh) * 2007-08-31 2010-09-22 美国农业部 用于递送生物防治真菌以减少黄曲霉毒素的水分散性制剂
US20100223693A1 (en) * 2009-02-18 2010-09-02 Southern Illinois University Carbondale Methods of using plants containing the gdha gene
WO2014191917A1 (en) * 2013-05-27 2014-12-04 Universita' Cattolica Del Sacro Cuore Non-toxigenic strain of aspergillus flavus
CN104789480A (zh) * 2015-03-10 2015-07-22 浙江大学 不产黄曲霉毒素的黄曲霉菌株和混合菌群及其应用
CN105231138A (zh) * 2015-10-26 2016-01-13 合肥刘老四调味品厂 一种乳酸发酵黄豆酱

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ZUZANA HRUSKA ET AL: "Temporal Effects on Internal Fluorescence Emissions Associated with Aflatoxin Contamination from Corn Kernel Cross-Sections Inoculated with Toxigenic and Atoxigenic Aspergillus flavus", 《FRONTIERS IN MICROBIOLOGY》 *

Also Published As

Publication number Publication date
WO2020205764A1 (en) 2020-10-08
MX2021011650A (es) 2022-02-21
JP7551645B2 (ja) 2024-09-17
BR112021018702A2 (pt) 2021-11-23
US20220167629A1 (en) 2022-06-02
EP3945829A1 (en) 2022-02-09
AU2020253410A1 (en) 2021-10-28
CA3134549A1 (en) 2020-10-08
JP2022528530A (ja) 2022-06-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3076791B1 (en) Methods for improving corn yield
CN110582205A (zh) 内生植物组合物和用于改进植株性状的方法
CN111432631A (zh) 内生植物组合物和用于改进植株性状的方法
Suleiman et al. Effects of deterioration parameters on storage of maize
Joseph et al. Effectiveness of Pseudomonas species in the management of tomato early blight pathogen Alternaria solani
Carrasco et al. Commercial cultivation techniques of mushrooms
Zanon et al. Aflatoxins and fumonisins in maize under a climate change scenario. Biocontrol strategies at the pre-harvest stage
CN113747790A (zh) 黄曲霉毒素生物防治组合物
Sutthisa et al. Development of Trichoderma formulation and application to control durian anthracnose disease
Gummert et al. Management options, technologies and strategies for minimised mycotoxin contamination of rice
Nguyen et al. Yield evaluation of king oyster mushroom (Pleurotus eryngii) on wheat straw mix substrates
Joshi et al. Assessment of biological efficiency of Pleurotus Sajor-caju, P. florida, P. citrinopileatus and Hypsizygus
Del Ponte et al. Fusarium head blight and deoxynivalenol accumulation in wheat inoculated at developmental stages from flowering through grain maturation
Sarka et al. Production of Button Mushroom (Agaricus bisporus), Pharmacological Applications and Pest Management
Perera et al. ECO-FRIENDLY MANAGEMENT COMMON LAB CONTAMINANT Trichoderma spp IN OYSTER MUSHROOM PRODUCTION USING AGRO-BASED INDUSTRY’S BY-PRODUCTS
CN107981331A (zh) 大麦嫩叶姜汁粉及其加工工艺
Kumar et al. Pre-Harvest Management of Aflatoxin Contamination in Groundnut Through Biocontrol Products
JP2019097476A (ja) キノコ用のｐｋｅ培地の製造方法と、この方法で製造したｐｋｅ培地。
Mohapatra et al. Influence of substrate pasteurization, bag dimensions and organic supplement practices on yield and yield attributing parameters of Indian oyster mushroom, Pleurotus pulmonarius
Gohole et al. Mycotoxin Contamination of Risks Due to Handling Practices of indigenous Chicken Feeds in Kenya
Pakeerthan ECO-FRIENDLY MANAGEMENT COMMON LAB CONTAMINANT Trichoderma spp IN OYSTER MUSHROOM PRODUCTION USING AGROBASED INDUSTRY’S BY-PRODUCTS
Kermasha Effect of Fermentation Oyster Mushrooms (Pleurotus ostreatus) on Grain Barly contaminated with Fungus exudate toxins Fusarium sporotrichioides and the inhibition growth and Degradation Toxins produced by it
Paica et al. Toxigenic fungi of Aspergillus genus and corn crop vulnerability to infection produced by these
KARE Biocontrol agents to reduce aflatoxins in nuts: inoculum dynamic studies, varietal resistance to the pathogen, and characterization of the population of Aspergillus spp. section Flavi in Spain
Petrovà et al. Microscopic filamentous fungi occurrence in plant pollen from nontraditional plant species

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination