CN113720957A - 小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草有效成分的鉴别方法 - Google Patents

小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草有效成分的鉴别方法 Download PDF

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Abstract

本申请公开了一种小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草有效成分的鉴别方法,包括以下步骤:对照药材溶液的制备;供试品溶液的制备;空白溶剂准备;取相同点液量的所述对照药材溶液、所述供试品溶液和空白溶剂,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以展开剂展开后,烘干薄层板;所述晾干的薄层板上喷显色剂二硝基苯肼后,烘干至斑点显色;所述薄层板上的供试品色谱与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。本申请所述的小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草有效成分鉴别方法,主斑点清晰,另外两个斑点颜色较浅,斑点间无干扰。本申请为鱼腥草在其他复方药剂中的鉴别,特别是鱼腥草组分含量较少的复方药剂,奠定了理论基础和实验依据。

Description

小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草有效成分的鉴别方法
技术领域
本申请涉及药材的鉴别领域,特别涉及一种小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草有效成分的鉴别方法。
背景技术
小儿肺热咳喘颗粒为11味中药的复方制剂,含有的药材有:麻黄、苦杏仁、生石膏、甘草、金银花、连翘、知母、黄芩、板蓝根、麦冬、鱼腥草。此制剂具有清热解毒、宣肺止咳、化痰平喘的功能,主要用于感冒、支气管炎、喘息性支气管炎、支气管肺炎属痰热壅肺证者。
其中的鱼腥草具有清热解毒,消痈排脓,利尿通淋的作用。用于肺痈吐脓,痰热喘咳,热痢,热淋,痈肿疮毒。对其化学成分进行研究显示,鱼腥草含有的主要成分有:挥发性成分、黄酮类、有机酸、甾醇类、生物碱、维生素、水溶性多糖、金属元素及盐类。其中,挥发性成分主要有甲基正壬酮、乙酸龙脑酯、乙酸香叶酯、柠檬烯、月桂烯、月桂醛、癸酰乙醛(即鱼腥草素)等,另外,鱼腥草还含有氯化钾、硫酸钾等盐类成分。
吴艳霞等人研究发现鱼腥草中挥发油的主要化学成分及含量为:甲基正壬酮(23.56%)、癸酸(15.65%)、4-松油醇(13.97%)、乙酸龙脑酯(9.95%) 和乙酸香叶酯(4.56%)等。鱼腥草中的挥发性成分以甲基正壬酮含量最多,而麻黄、苦杏仁、生石膏、甘草、金银花、连翘、知母、黄芩、板蓝根、麦冬中未见甲基正壬酮成分的报道。因此本申请选用甲基正壬酮作为小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草有效成分进行鉴别。
发明内容
鉴以此,本申请提出一种小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草有效成分的鉴别方法,以提供一种鱼腥草含量低的复方药剂中鱼腥草有效成分的鉴别方法。
本申请的技术方案是这样实现的:
一种小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草有效成分的鉴别方法,所述鉴别方法包括以下步骤:
(1)对照药材溶液的制备:取鱼腥草药材粉碎,依次经过过筛、加乙醚、浸渍、滤过,药渣用乙醚洗涤,合并滤液得乙醚液;将乙醚液中加入碳酸氢钠溶液,离心静置分层,获得第一上清液;再在所述第一上清液中加入稀硫酸溶液,离心静置分层,获得第二上清液作为对照药材溶液;
(2)供试品溶液的制备:取小儿肺热咳喘颗粒研磨,依次经过过筛、加乙醚、浸渍、滤过,药渣用乙醚洗涤,合并滤液得乙醚液;将乙醚液中加入碳酸氢钠溶液,离心静置分层,获得第一上清液;再在所述第一上清液中加入稀硫酸溶液,离心静置分层,获得第二上清液作为供试品溶液;
(3)空白溶剂准备:所述空白溶剂为乙醚、碳酸氢钠溶液和稀硫酸溶液的混合液;
(4)取相同点液量的所述对照药材溶液、所述供试品溶液和空白溶剂,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以展开剂展开后,烘干薄层板;
(5)在步骤(4)所述晾干的薄层板上喷显色剂二硝基苯肼后,烘干至斑点显色;所述薄层板上的供试品色谱与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。所述显色剂二硝基苯肼的配置方法是50ml质量浓度为30%高氯酸中溶解 12g的2,4-二硝基苯肼制成的显色剂。
进一步的技术方案是,步骤(1)和(2)中所述过筛为过3、4或5号筛。
进一步的技术方案是,步骤(1)、(2)和(3)中的碳酸氢钠溶液浓度相同,所述碳酸氢钠溶液浓度为5%-8%,所述碳酸氢钠溶液的体积为3-5ml。
进一步的技术方案是,步骤(1)、(2)和(3)中稀硫酸溶液浓度相同,所述稀硫酸溶液浓度为0.5%-1%,所述稀硫酸溶液的体积为3-5ml。
进一步的技术方案是,所述步骤(1)中鱼腥草药材用量为5-10g,所述加乙醚的乙醚用量为30-60ml,浸渍时间为24-48h;所述药渣用乙醚洗涤两次,每次乙醚用量为20ml。
进一步的技术方案是,所述所述步骤(2)中小儿肺热咳喘颗粒用量为 50-100g,所述加乙醚的乙醚用量为300-600ml,浸渍时间为24-48h;所述药渣用乙醚洗涤两次,每次乙醚用量为200ml。
进一步的技术方案是,所述步骤(3)中乙醚的体积为70-100ml。
进一步的技术方案是,所述所述步骤(1)和(2)中离心的转速为 4000-8000rpm,离心时间为2-5min。
进一步的技术方案是,所述步骤(4)中展开剂成分的体积比为:环己烷: 乙酸乙酯=1:1。
本申请通过乙醚浸渍和洗涤,将鱼腥草药材和小儿肺热咳喘颗粒中的挥发性成分提取到乙醚液中;加碳酸氢钠溶液到乙醚液的目的是除去鱼腥草挥发性成分中的癸酸等酸性成分和小儿肺热咳喘颗粒中其他药材的挥发性酸性成分,加稀硫酸溶液到第一上清液中的目的是除去鱼腥草挥发性成分和小儿肺热咳喘颗粒中其他药材的挥发性中的碱性成分,以降低鉴别甲基正壬酮的干扰,提高鉴别甲基正壬酮的准确性。
本申请选用显色剂二硝基苯肼的目的是二硝基苯肼与酮基能够反应生成有色的物质,从而能够准确地从鱼腥草和小儿肺热咳喘颗粒的挥发性成分中鉴别出甲基正壬酮。
与现有技术相比,本申请的有益效果是:
(1)本申请所述鉴别方法能够鉴别小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草有效成分,由于小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草组分含量低,而且鱼腥草中区别于其他中药组分的挥发性成分甲基正壬酮、月桂醛、癸酰乙醛等含量也低,因此,本申请所述的鉴别方法不同于单一鱼腥草有效成分的鉴别方法。
(2)由于不同产地的鱼腥草不同部位的挥发性成分含量不同,故本申请选用显色剂二硝基苯肼鉴定鱼腥草中甲基正壬酮更准确。
(3)本申请所述的小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草有效成分鉴别方法,主斑点清晰,另外两个斑点颜色较浅,斑点间无干扰。本申请为鱼腥草在其他复方药剂中的鉴别,特别是鱼腥草组分含量较少的复方药剂,奠定了理论基础和实验依据。
具体实施方式
为了更好理解本申请技术内容,下面提供具体实施例,并对本申请做进一步的说明。
本申请提到的3、4或5号筛,根据2015年中国药典标准药筛规格,R40/3 系列,3号筛的筛孔内径为355μm±13μm,目号为50目;4号筛的筛孔内径为 250μm±9.9μm,目号为65目;5号筛的筛孔内径为180μm±7.6μm,目号为 80目。
实施例1
一种小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草有效成分的鉴别方法,所述鉴别方法包括以下步骤:
(1)对照药材溶液的制备:取鱼腥草药材粉碎,依次经过过筛、加乙醚、浸渍、滤过,药渣用乙醚洗涤,合并滤液得乙醚液;将乙醚液中加入碳酸氢钠溶液,离心静置分层,获得第一上清液;再在所述第一上清液中加入稀硫酸溶液,离心静置分层,获得第二上清液作为对照药材溶液;
(2)供试品溶液的制备:取小儿肺热咳喘颗粒研磨,依次经过过筛、加乙醚、浸渍、滤过,药渣用乙醚洗涤,合并滤液得乙醚液;将乙醚液中加入碳酸氢钠溶液,离心静置分层,获得第一上清液;再在所述第一上清液中加入稀硫酸溶液,离心静置分层,获得第二上清液作为供试品溶液;
(3)空白溶剂准备:所述空白溶剂为乙醚、碳酸氢钠溶液和稀硫酸溶液的混合液;
(4)取相同点液量的所述对照药材溶液、所述供试品溶液和空白溶剂,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以展开剂展开后,晾干薄层板;
(5)在步骤(4)所述晾干的薄层板上喷显色剂二硝基苯肼后,晾干至斑点显色;所述薄层板上的供试品色谱与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。所述显色剂二硝基苯肼的配置方法是50ml质量浓度为30%高氯酸中溶解 12g的2,4-二硝基苯肼制成的显色剂。
步骤(1)和(2)中所述过筛为过3筛;步骤(1)、(2)和(3)中的碳酸氢钠溶液浓度相同,所述碳酸氢钠溶液浓度为5%,所述碳酸氢钠溶液的体积为3ml。步骤(1)、(2)和(3)中稀硫酸溶液浓度相同,所述稀硫酸溶液浓度为0.5%,所述稀硫酸溶液的体积为3ml。
所述步骤(1)中鱼腥草药材用量为5g,所述加乙醚的乙醚用量为30ml,浸渍时间为24h;所述药渣用乙醚洗涤两次,每次乙醚用量为20ml。所述步骤 (2)中小儿肺热咳喘颗粒用量为50g,所述加乙醚的乙醚用量为300ml,浸渍时间为24h;所述药渣用乙醚洗涤两次,每次乙醚用量为200ml。所述步骤(3) 中乙醚的体积为70ml。所述离心的转速为4000rpm,离心时间为5min。
所述步骤(4)中所述点液量为9uL;展开剂成分的体积比为:环己烷:乙酸乙酯=1:1。
实施例2
一种小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草有效成分的鉴别方法,所述鉴别方法包括以下步骤:
(1)对照药材溶液的制备:取鱼腥草药材粉碎,依次经过过筛、加乙醚、浸渍、滤过,药渣用乙醚洗涤,合并滤液得乙醚液;将乙醚液中加入碳酸氢钠溶液,离心静置分层,获得第一上清液;再在所述第一上清液中加入稀硫酸溶液,离心静置分层,获得第二上清液作为对照药材溶液;
(2)供试品溶液的制备:取小儿肺热咳喘颗粒研磨,依次经过过筛、加乙醚、浸渍、滤过,药渣用乙醚洗涤,合并滤液得乙醚液;将乙醚液中加入碳酸氢钠溶液,离心静置分层,获得第一上清液;再在所述第一上清液中加入稀硫酸溶液,离心静置分层,获得第二上清液作为供试品溶液;
(3)空白溶剂准备:所述空白溶剂为乙醚、碳酸氢钠溶液和稀硫酸溶液的混合液;
(4)取相同点液量的所述对照药材溶液、所述供试品溶液和空白溶剂,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以展开剂展开后,晾干薄层板;
(5)在步骤(4)所述晾干的薄层板上喷显色剂二硝基苯肼后,晾干至斑点显色;所述薄层板上的供试品色谱与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。所述显色剂二硝基苯肼的配置方法是50ml质量浓度为30%高氯酸中溶解 12g的2,4-二硝基苯肼制成的显色剂。
步骤(1)和(2)中所述过筛为过4号筛;步骤(1)、(2)和(3)中的碳酸氢钠溶液浓度相同,所述碳酸氢钠溶液浓度为8%,所述碳酸氢钠溶液的体积为5ml。步骤(1)、(2)和(3)中稀硫酸溶液浓度相同,所述稀硫酸溶液浓度为1%,所述稀硫酸溶液的体积为5ml。
所述步骤(1)中鱼腥草药材用量为10g,所述加乙醚的乙醚用量为60ml,浸渍时间为48h;所述药渣用乙醚洗涤两次,每次乙醚用量为20ml。所述步骤 (2)中小儿肺热咳喘颗粒用量为100g,所述加乙醚的乙醚用量为600ml,浸渍时间为48h;所述药渣用乙醚洗涤两次,每次乙醚用量为200ml。所述步骤(3) 中乙醚的体积为100ml。所述离心的转速为8000rpm,离心时间为2min。
所述步骤(4)中所述点液量为9uL;展开剂成分的体积比为:环己烷:乙酸乙酯=1:1。
实施例3
一种小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草有效成分的鉴别方法,所述鉴别方法包括以下步骤:
(1)对照药材溶液的制备:取鱼腥草药材粉碎,依次经过过筛、加乙醚、浸渍、滤过,药渣用乙醚洗涤,合并滤液得乙醚液;将乙醚液中加入碳酸氢钠溶液,离心静置分层,获得第一上清液;再在所述第一上清液中加入稀硫酸溶液,离心静置分层,获得第二上清液作为对照药材溶液;
(2)供试品溶液的制备:取小儿肺热咳喘颗粒研磨,依次经过过筛、加乙醚、浸渍、滤过,药渣用乙醚洗涤,合并滤液得乙醚液;将乙醚液中加入碳酸氢钠溶液,离心静置分层,获得第一上清液;再在所述第一上清液中加入稀硫酸溶液,离心静置分层,获得第二上清液作为供试品溶液;
(3)空白溶剂准备:所述空白溶剂为乙醚、碳酸氢钠溶液和稀硫酸溶液的混合液;
(4)取相同点液量的所述对照药材溶液、所述供试品溶液和空白溶剂,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以展开剂展开后,晾干薄层板;
(5)在步骤(4)所述晾干的薄层板上喷显色剂二硝基苯肼后,晾干至斑点显色;所述薄层板上的供试品色谱与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。所述显色剂二硝基苯肼的配置方法是50ml质量浓度为30%高氯酸中溶解 12g的2,4-二硝基苯肼制成的显色剂。
步骤(1)和(2)中所述过筛为过5号筛;步骤(1)、(2)和(3)中的碳酸氢钠溶液浓度相同,所述碳酸氢钠溶液浓度为6%,所述碳酸氢钠溶液的体积为4ml。步骤(1)、(2)和(3)中稀硫酸溶液浓度相同,所述稀硫酸溶液浓度为0.8%,所述稀硫酸溶液的体积为4ml。
所述步骤(1)中鱼腥草药材用量为7g,所述加乙醚的乙醚用量为50ml,浸渍时间为36h;所述药渣用乙醚洗涤两次,每次乙醚用量为20ml。所述步骤 (2)中小儿肺热咳喘颗粒用量为70g,所述加乙醚的乙醚用量为500ml,浸渍时间为36h;所述药渣用乙醚洗涤两次,每次乙醚用量为200ml。所述步骤(3) 中乙醚的体积为90ml。所述离心的转速为6000rpm,离心时间为3min。
所述步骤(4)中所述点液量为10uL;展开剂成分的体积比为:环己烷:乙酸乙酯=1:1。
由实施例1-3进行研究,结果显示(见表1):供试品与鱼腥草对照药材的对应色谱位置,主斑点清晰(即甲基正壬酮),主斑点下方有两个颜色较浅的斑点(推断为月桂醛和癸酰乙醛),颜色较浅的原因主要是鱼腥草中月桂醛和癸酰乙醛含量较少。
对比例1
没有使用碳酸氢钠溶液及碳酸氢钠溶液加入乙醚液中离心静置分层的步骤,其他与实施例1相同。具体为:
一种小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草有效成分的鉴别方法,所述鉴别方法包括以下步骤:
(1)对照药材溶液的制备:取鱼腥草药材粉碎,依次经过过筛、加乙醚、浸渍、滤过,药渣用乙醚洗涤,合并滤液得乙醚液;在所述乙醚液中加入稀硫酸溶液,离心静置分层,获得第二上清液作为对照药材溶液;
(2)供试品溶液的制备:取小儿肺热咳喘颗粒研磨,依次经过过筛、加乙醚、浸渍、滤过,药渣用乙醚洗涤,合并滤液得乙醚液;在所述乙醚液中加入稀硫酸溶液,离心静置分层,获得第二上清液作为供试品溶液;
(3)空白溶剂准备:所述空白溶剂为乙醚和稀硫酸溶液的混合液;
(4)取相同点液量的所述对照药材溶液、所述供试品溶液和空白溶剂,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以展开剂展开后,晾干薄层板;
(5)在步骤(4)所述晾干的薄层板上喷显色剂二硝基苯肼后,晾干至斑点显色;所述薄层板上的供试品色谱与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
步骤(1)和(2)中所述过筛为过3筛;步骤(1)、(2)和(3)中稀硫酸溶液浓度相同,所述稀硫酸溶液浓度为0.5%,所述稀硫酸溶液的体积为3ml。
所述步骤(1)中鱼腥草药材用量为5g,所述加乙醚的乙醚用量为30ml,浸渍时间为24h;所述药渣用乙醚洗涤两次,每次乙醚用量为20ml。所述步骤 (2)中小儿肺热咳喘颗粒用量为50g,所述加乙醚的乙醚用量为300ml,浸渍时间为24h;所述药渣用乙醚洗涤两次,每次乙醚用量为200ml。所述步骤(3) 中乙醚的体积为70ml。所述离心的转速为4000rpm,离心时间为5min。
所述步骤(4)中所述点液量为9uL;展开剂成分的体积比为:环己烷:乙酸乙酯=1:1。
对比例2
没有使用稀硫酸溶液及稀硫酸溶液加入第一上清液中离心静置分层的步骤,其他与实施例1相同。其他与实施例1相同。
通过实施例1与对比例1-2进行研究,结果显示(见表1):鱼腥草对照药材色谱中主斑点清晰,而供试品色谱中对应位置主斑点有长拖尾,另外两个斑点也有轻微拖尾,原因应该是供试品溶液没有进行加入碳酸氢钠溶液除去挥发性酸性成分,也没有进行加入稀硫酸溶液除去挥发性碱性成分,从而造成供试品对应位置斑点有拖尾现象。
对比例3
展开剂成分的体积比为:环己烷:乙酸乙酯=9:1。其他步骤与实施例1相同。结果显示(见表1):对比例3的供试品色谱与鱼腥草对照药材色谱主斑点相应的位置上,主斑点颜色很浅,其他两斑点颜色更浅,几乎看不到。
对比例4
显色剂二硝基苯肼的配置方法为:2g的2,4-二硝基苯肼溶于15ml摩尔浓度为10mol/L的浓硫酸中,把所得溶液缓缓注入150ml95%乙醇中,用水稀释至500ml。其他步骤与实施例1相同。结果显示(见表1):对比例3的供试品色谱与鱼腥草对照药材色谱主斑点相应的位置上,斑点颜色很浅,而另外两斑点颜色更浅,几乎看不到。因此,实施例1中所述显色剂二硝基苯肼的配置方法更适合用于小儿肺热咳喘颗粒鱼腥草中含量较少的有效成分的鉴别。
表1
Figure RE-GDA0003337734560000111
Figure RE-GDA0003337734560000121
实验例
将专利申请号为CN201810544136.7,专利申请名称为一种4克装小儿肺热咳喘颗粒的制备方法制备的小儿肺热咳喘颗粒,通过本申请所述的鱼腥草有效成分家别方法进行鉴别,结果显示:供试品与鱼腥草对照药材的对应色谱位置,主斑点清晰,主斑点下方有两个颜色较浅的斑点,斑点间无干扰。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草有效成分的鉴别方法,其特征在于:所述鉴别方法包括以下步骤:
(1)对照药材溶液的制备:取鱼腥草药材粉碎,依次经过过筛、加乙醚、浸渍、滤过,药渣用乙醚洗涤,合并滤液得乙醚液;将乙醚液中加入碳酸氢钠溶液,离心静置分层,获得第一上清液;再在所述第一上清液中加入稀硫酸溶液,离心静置分层,获得第二上清液作为对照药材溶液;
(2)供试品溶液的制备:取小儿肺热咳喘颗粒研磨,依次经过过筛、加乙醚、浸渍、滤过,药渣用乙醚洗涤,合并滤液得乙醚液;将乙醚液中加入碳酸氢钠溶液,离心静置分层,获得第一上清液;再在所述第一上清液中加入稀硫酸溶液,离心静置分层,获得第二上清液作为供试品溶液;
(3)空白溶剂准备:所述空白溶剂为乙醚、碳酸氢钠溶液和稀硫酸溶液的混合液;
(4)取相同点液量的所述对照药材溶液、所述供试品溶液和空白溶剂,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以展开剂展开后,烘干薄层板;
(5)在步骤(4)所述晾干的薄层板上喷显色剂二硝基苯肼后,烘干至斑点显色;所述薄层板上的供试品色谱与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
2.根据权利要求1所述的一种小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草有效成分的鉴别方法,其特征在于:步骤(1)和(2)中所述过筛为过3、4或5号筛。
3.根据权利要求1所述的一种小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草有效成分的鉴别方法,其特征在于:步骤(1)、(2)和(3)中的碳酸氢钠溶液浓度相同,所述碳酸氢钠溶液浓度为5%-8%,所述碳酸氢钠溶液的体积为3-5ml。
4.根据权利要求1所述的一种小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草有效成分的鉴别方法,其特征在于:步骤(1)、(2)和(3)中稀硫酸溶液浓度相同,所述稀硫酸溶液浓度为0.5%-1%,所述稀硫酸溶液的体积为3-5ml。
5.根据权利要求1所述的一种小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草有效成分的鉴别方法,其特征在于:所述步骤(1)中鱼腥草药材用量为5-10g,所述加乙醚的乙醚用量为30-60ml,浸渍时间为24-48h;所述药渣用乙醚洗涤两次,每次乙醚用量为20ml。
6.根据权利要求1所述的一种小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草有效成分的鉴别方法,其特征在于:所述所述步骤(2)中小儿肺热咳喘颗粒用量为50-100g,所述加乙醚的乙醚用量为300-600ml,浸渍时间为24-48h;所述药渣用乙醚洗涤两次,每次乙醚用量为200ml。
7.根据权利要求1所述的一种小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草有效成分的鉴别方法,其特征在于:所述步骤(3)中乙醚的体积为70-100ml。
8.根据权利要求1所述的一种小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草有效成分的鉴别方法,其特征在于:所述步骤(1)和(2)中离心的转速为4000-8000rpm,离心时间为2-5min。
9.根据权利要求1所述的一种小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草有效成分的鉴别方法,其特征在于:所述步骤(4)中展开剂成分的体积比为:环己烷:乙酸乙酯=1:1。
10.根据权利要求1所述的一种小儿肺热咳喘颗粒中鱼腥草有效成分的鉴别方法,其特征在于:所述步骤(5)中显色剂二硝基苯肼的配置方法为:50ml质量浓度为30%高氯酸中溶解12g的2,4-二硝基苯肼制成的显色剂。
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