CN113717900A

CN113717900A - 一株发酵乳杆菌及其应用

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Publication number: CN113717900A
Application number: CN202111175711.9A
Authority: CN
Inventors: 黄菊青; 林斌; 王�琦; 官雪芳; 赖呈纯; 高慧颖; 李洁; 赖恭梯
Original assignee: Institute of Agricultural Engineering Technology of Fujian Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Xiamen Yuanzhidao Biotech Co ltd
Priority date: 2021-10-09
Filing date: 2021-10-09
Publication date: 2021-11-30
Anticipated expiration: 2041-10-09
Also published as: CN113717900B

Abstract

本发明公开了一株发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)，所述菌株保藏名称为发酵乳杆菌B153，于2018年9月10日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.16454。本发明还公开了该发酵乳杆菌在制备抑制创伤弧菌药物、保健食品或普通食品中的应用，在降解偶氮类人工合成色素中的应用，以及在制备低植酸产品中的应用。本发明提供的发酵乳杆菌B153具有很强的耐酸耐胆盐能力和较高的植酸酶活力，能够显著抑制致病菌创伤弧菌的生长；该菌株能够显著降解偶氮类人工合成食用色素。因此，本发明提供的发酵乳杆菌B153具有较高的社会应用价值。

Description

一株发酵乳杆菌及其应用

技术领域

本发明涉及微生物菌株及其应用技术领域，具体涉及一株发酵乳杆菌及其应用。

背景技术

植酸即肌醇六磷酸，又称六磷酸肌醇，由一分子肌醇与六分子磷酸结合而成，是植物体内磷的主要储存形式（占总磷的18%~88%）。植酸在禾谷类、豆科作物中广泛存在，也是植物体内的主要抗营养因子。植酸盐形式的磷不容易可被单胃动物利用，并会导致集约化地区畜牧生产磷污染的问题。植酸与必需膳食矿物质和蛋白质之间的相互作用被认为是限制谷物和豆类对人体和动物营养价值的主要因素之一。植酸可与多价阳离子结合，形成不溶性的复合物，降低了无机盐与微量元素的生物利用率，继而引起人体和动物相应的金属营养元素缺乏症。在动物消化道的酸性条件下，植酸可与二价金属离子(Zn²⁺、Cu²⁺、Fe²⁺、Mn² ⁺、Ca²⁺等阳离子)、带正电的蛋白质、氨基酸发生反应，生成植酸—金属阳离子的络合物、植酸•蛋白质、植酸•金属阳离子•蛋白质（氨基酸）的复合物，上述络合物或复合物不仅基团之间的亲和力强，且其本身难以溶解，不仅影响磷的利用率，同时还影响矿物元素、蛋白质、氨基酸的利用率，甚至对淀粉酶、脂肪酶的活性均有抑制作用。因此，科学家们尝试通过植酸酶来水解膳食植酸以提高膳食营养素的利用率并减少动物中磷的排泄量。自然界中微生物是植酸酶的主要来源，科学家们从自然界中发现了多种产植酸酶的微生物，如细菌（假单胞菌、枯草芽孢杆菌）、霉菌（黑曲霉、米曲霉）和真菌等。然而，目前为止所获得的产植酸酶微生物大部分来源于土壤，并有少部分来自动物肠道，国内外尚未见到来源于人类母乳的产植酸酶微生物的相关报道。

创伤弧菌广泛分布在海水中，创伤弧菌可从牡蛎等海产品中分离得到。该菌主要通过伤口接触海水造成感染，也可经口感染。经伤口感染时可导致蜂窝织炎及骨髓炎等多种炎症，经口感染时常迅速导致菌血症或败血症。感染本菌后如不及时治疗，病死率很高。目前，对于这些致病菌主要还是采用抗生素进行抑菌治疗，但是抗生素存在耐药性的问题，因此，开发能够有效抑制创伤弧菌生长的非抗生素类产品具有重要意义。

偶氮类合成色素因合成工艺简单、成本低、染色性能突出等优点，被广泛的应用在食品、药品和化妆品等领域。其种类有很多，熟知的有苏丹红、柠檬黄、日落黄、柠檬黄、苋菜红、胭脂红和诱惑红等。目前已有不少研究发现了偶氮类色素的毒性作用，如使肝细胞生长异常，影响酯酶同工酶的表达，以及致突变作用等，因此多数偶氮色素已被禁止添加到食物中。我国2014年最新颁布的《食品添加剂使用标准（GB276 0-2014）》中对允许使用的柠檬黄、日落黄、柠檬黄、苋菜红、胭脂红和诱惑红等11种偶氮类色素在食品中的限量及使用范围做了明确的规定，严禁超量或超范围添加。

发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum）是我国批准的可用于普通食品的菌种之一。发酵乳杆菌广泛存在于人体口腔及肠道，发酵乳制品和植物原料发酵物等诸多环境中，它具有乳杆菌属调节肠道和增强免疫力等益生功能，其代谢产生的细菌素具有优良的抑菌性能。目前，发酵乳杆菌的益生功能及其在食品、医疗保健等领域发挥的作用已受到食品届内学者的高度重视。目前为止，行业内未见来源于人类母乳的高产植酸酶的发酵乳杆菌，也未见将发酵乳杆菌开发用于抑制特定致病菌创伤弧菌的药物、保健食品或普通食品的相关报道，亦未见将发酵乳杆菌用于降解偶氮类人工合成食用色素的相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供一株发酵乳杆菌及其应用，开发了一株能够产植酸酶，还能够显著抑制创伤弧菌生长，且能够降解偶氮类人工合成食用色素的菌株。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一株发酵乳杆菌，所述菌株保藏名称为发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum）B153，于2018年9月10日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.16454。保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。

本发明提供的发酵乳杆菌B153分离自人类母乳，菌落特征为：在MRS平板培养基上培养24~48 h后，菌落呈圆形，乳白色，表面光滑、隆起，边缘整齐，不透明，菌体呈杆状，大小为0.3~0.6 × 1.0~3.0 μm；能够生长的pH值为4.0~9.0，最适生长pH为6.0，能够生长的温度为20~45℃，最适生长温度40℃；能够利用的糖类包括：L-阿拉伯糖、核糖、D-半乳糖、D-葡萄糖、D-果糖、D-甘露糖、甘露醇、山梨醇、α-甲基-D-吡喃甘露醇苷、N-乙酰葡萄糖胺、苦杏仁苷、熊果苷、七叶苷柠檬酸铁、水杨苷（柳醇）、D-纤维二糖、D-麦芽糖、D-乳糖、D-密二糖、D-蔗糖、海藻糖、D-松三糖、D-棉子糖、D-龙胆二糖、D-塔格糖、D-土伦糖和葡萄糖酸盐；能够分泌白氨酸芳胺酶、缬氨酸芳胺酶、胱氨酸芳胺酶、酸性磷酸酶、萘酚-AS-BI-磷酸水解酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、N-乙酰-葡萄糖胺酶、酯酶、类脂肪酶和类脂酶。该菌株能够产植酸酶，并显著抑制致病菌创伤弧菌的生长，还能够降解偶氮类人工合成食用色素。

本发明所述的发酵乳杆菌在制备抑制创伤弧菌药物、保健食品或普通食品中的应用；所述药物、保健食品或普通食品中所含发酵乳杆菌B153的活菌数为1.0×10⁶-5.0×10¹¹cfu/mL或1.0×10⁶-5.0×10¹¹cfu/g，优选活菌数为2.0×10⁶-2.0×10⁸cfu/mL或2.0×10⁶-2.0×10⁸cfu/g，最优选活菌数为2.0×10⁷ cfu/mL或2.0×10⁷ cfu/g。

本发明所述的发酵乳杆菌在制备低植酸产品中的应用：所述产品中所含发酵乳杆菌B153的活菌数为1.0×10⁶-5.0×10¹¹cfu/mL或1.0×10⁶-5.0×10¹¹cfu/g。

本发明所述的发酵乳杆菌在降解偶氮类人工合成食用色素的应用，具体是将所述发酵乳杆菌B153添加到含有偶氮类人工合成食用色素的培养基中，所述基质中所含发酵乳杆菌B153的活菌数为1.0×10⁶~5.0×10¹⁰ cfu/mL或1.0×10⁶~5.0×10¹⁰ cfu/g，优选活菌数为活菌数为1.0 ×10⁶~ 1.0×10⁹ cfu/mL或1.0 ×10⁶~ 1.0×10⁹ cfu/g，最优选活菌数1.0×10⁹cfu/mL或1.0×10⁹cfu/g。

本发明的有益效果在于：本发明提供的发酵乳杆菌B153分离自人类母乳，安全性高，该菌株能够产植酸酶，为低植酸产品的制备提供了新的选择；该菌株能够显著抑制致病菌创伤弧菌的生长；该菌株还能够降解偶氮类人工合成食用色素，为偶氮类人工合成食用色素的降解制剂提供了新的选择。因此，本发明提供的发酵乳杆菌B153具有较高的社会应用价值。

附图说明

图1为发酵乳杆菌B153的菌落形态。

图2为发酵乳杆菌B153的扫描电镜图。

图3为发酵乳杆菌B153在不同温度下的生长曲线。

图4为发酵乳杆菌B153在不同pH值下的生长曲线。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，若未特别指明，实施例中的培养基及实验条件均为常规培养基和实验条件。实施例中所用的试验材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1 发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum）B153的分离与鉴定

1、菌株分离

从一名来自中国的健康妇女获取母乳，将获取的新鲜初乳置于超净工作台中用无菌的PBS溶液（浓度为10 mM）稀释，将未稀释的乳汁和稀释5倍的乳汁分别分配到BBL平板培养基中，在37℃下恒温厌氧培养，直至菌落出现，用接种针挑取边缘生长良好的细菌，接种于新的BBL平板培养基上，待新接种的菌长成菌落后，再挑取其边缘的内生菌划线培养，如此反复得到纯化，直到得到单菌落，命名其为菌株B153。

其中BBL平板培养基配方为：蛋白胨15.0 g/L、酵母粉2.0 g/L、葡萄糖20.0 g/L、可溶性淀粉0.5 g/L、NaCl 5.0 g/L、半胱氨酸 10.0 mL/L、西红柿浸出液 400 mL/L、吐温80 1.0 mL/L、肝提取液80.0 mL/L、琼脂20.0 g/L、蒸馏水520 mL/L，pH值为6.0，在121℃灭菌20 min。

2、菌株鉴定

（1）菌落及菌体的形态观察：将菌株B153在MRS平板培养基上进行划线培养，在37℃恒温厌氧培养24~48 h后，菌落呈圆形，乳白色，表面光滑、隆起，边缘整齐，不透明，菌落形态见图1。在扫描电子显微镜下观察，菌体呈杆状，大小为0.3~0.6 × 1.0~3.0 μm，其扫描电镜图为图2。

其中MRS平板培养基配方为：胰蛋白胨10.0 g/L、牛肉粉5.0 g/L、酵母粉4.0 g/L、葡萄糖20.0 g/L、吐温80 1.0 mL/L、K₂HPO₄•3H₂O 1.5 g/L、无水乙酸钠3.0 g/L、柠檬酸铵2.0 g/L、MgSO₄•7H₂O 0.2 g/L、MnSO₄•H₂O 0.04 g/L，琼脂15.0 g/L。pH值为6.0，在121℃灭菌20 min。

（2）菌株B153的生长特征观察：将B153菌液（浓度为1.0×10⁷ cfu/mL）按体积比3.0%的接种量接种于MRS液体培养基中，置于不同温度（10℃-50℃）下厌氧培养24 h，发现菌株在10℃或50℃下基本不能生长，在30℃~40℃环境下生长良好，最适生长温度为40℃（见图3）；置于不同初始pH值（2.0~12.0）环境下厌氧培养24 h，发现菌株在pH值范围为3.0~11.0的环境中菌株能够生长，最适生长pH值为6.0（见图4）。

（3）菌株B153的分子生物学鉴定：采用细菌全基因组快速抽提试剂盒（购自天根生化科技(北京)有限公司），提取菌株B153的全基因组，通过选用细菌16S rDNA通用引物27F和1492R进行PCR，然后测序分析。通用引物27F和1492R核苷酸序列如下：

27F（SEQ ID No.1）：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’

1492R（SEQ ID No.2）：5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’

测序结果经BLAST比对，鉴定该菌株为发酵乳杆菌，基因序列如SEQ ID No.3所示，命名为：发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum）B153，于2018年9月10日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.16454。保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。

实施例2 发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum）B153的耐酸及耐胆盐能力

将活化好的菌株制成悬液，取1.0 mL菌悬液（浓度为2.0×10⁸ cfu/mL）分别接种至9.0 mL的pH为2.0、2.5、3.0或胆盐浓度为1.0、2.0、3.0 g/L的MRS液体培养基中，37℃厌氧培养4 h，分别在0 h和4 h平板计数法测定活菌数，计算存活率（%）。

存活率（%）=（4 h的活菌数/0 h的活菌数）×100。

表1发酵乳杆菌HLX37的耐酸耐胆盐能力

表1显示，发酵乳杆菌B153在pH为2.0、2.5、3.0和3.5条件下的4 h存活率分别为56.9%±1.8%、94.5%±3.3%、94.9%±2.9%和108.0%±6.4%，说明其具有非常强的耐酸能力。同时，发酵乳杆菌B153在1.0、2.0、3.0和4.0 g/L胆盐浓度下的存活率分别达101.9%±5.1%、67.7%±2.7%、39.6%±1.5%和39.1%±1.2%，说明其具有较强的耐胆盐能力。已知人体胃部的pH范围基本在2.0~3.0，微生物随食物或唾液进入胃部以后，大多数会被胃酸杀死，只有少数耐酸的微生物才能存活下来进入小肠。小肠是人体胆固醇合成和吸收的重要场所，同时也是乳酸菌发挥其降胆固醇作用的主要部位，但肠道内的胆盐（浓度范围0.3~3.0g/L）对微生物的生长也具有一定的抑制作用。因此，乳酸菌要在体内发挥降胆固醇功效，要求其能够耐受胃肠道的低pH和小肠中的胆汁盐等逆境。本研究发现，发酵乳杆菌B153在pH为2.5~3.0环境下的存活率仍能达到90%以上，且在1.0~4.0 g/L胆盐浓度范围内也能够生长。以上数据结果表明发酵乳杆菌B153具有较强的耐酸耐胆盐能力，能够顺利通过胃酸环境到达肠内并在肠内存活。

实施例3 发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum）B153对糖类的利用性

应用API50CHL 试剂盒（Biomerieux，法国）检测实施例1中分离的菌株B153对糖类的利用性，结果（表2）显示：本发明发酵乳杆菌B153能够利用L-阿拉伯糖、核糖、D-半乳糖、D-葡萄糖、D-果糖、D-甘露糖、甘露醇、山梨醇、α-甲基-D-吡喃甘露醇苷、N-乙酰葡萄糖胺、苦杏仁苷、熊果苷、七叶苷柠檬酸铁、水杨苷（柳醇）、D-纤维二糖、D-麦芽糖、D-乳糖、D-密二糖、D-蔗糖、海藻糖、D-松三糖、D-棉子糖、D-龙胆二糖、D-塔格糖、D-土伦糖和葡萄糖酸盐。

表2 应用API50CHL 试剂盒检测菌株B153对糖类的利用性结果

备注：+表示阳性结果，说明菌株能够利用受试底物；-表示阴性结果，说明菌株不能利用受试底物。

实施例4 发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum）B153的酶活性

应用APIZYM 试剂盒（Biomerieux，法国）检测实施例1 中分离的菌株B153的酶活性，结果（表3）显示：本发明发酵乳杆菌B153能够分泌白氨酸芳胺酶、缬氨酸芳胺酶、胱氨酸芳胺酶、酸性磷酸酶、萘酚-AS-BI-磷酸水解酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、N-乙酰-葡萄糖胺酶、酯酶、类脂肪酶和类脂酶。

表3 应用APIZYM 试剂盒检测B153的酶活性结果

备注：分值0-1表示为阴性反应；分值2表示反应微弱；分值为3-5表示阳性反应；颜色越深，分值越高。

实施例5 发酵乳杆菌B153的植酸酶活力

实验方法：取100 μL活化好的B153菌液（浓度为：2.0 × 10⁷ cfu/mL）接种于5 mL的MRS培养基中，于第0 h、6 h、12 h、24 h、36 h、48 h和72 h取菌株培养液，离心（12000 g，10 min，4℃），收集上清液，采用《GBT18634-2009饲用植酸酶活性的测定-分光光度法》测定植酸酶活力，植酸酶活力单位(U)定义是以37℃下每小时生成1 μmol无机磷所需的酶量为一个活力单位。

实验结果如下：

表4 发酵乳杆菌B153在不同培养时间下的植酸酶活力

表4结果显示，发酵乳杆菌B153是一株能够产植酸酶的乳酸菌；随着培养时间的增加，发酵乳杆菌B153的植酸酶活力呈先增加后下降的变化趋势，在培养第24 h时，发酵乳杆菌B153的植酸酶活力达到最大，为3.14±0.26 U /mL。

实施例6 发酵乳杆菌B153对创伤弧菌生长的抑制试验

实验方法：以创伤弧菌（浓度为：1.0×10⁶ cfu/mL）为指示菌，涂布于LB琼脂平板上，用无菌打孔器在平板上打直径为6 mm的加样孔，每组设置3个重复；在孔中加入100 μL的B153菌液（浓度为2.0×10⁷ cfu/mL），于37℃生化培养箱中培养24 h。观察并记录抑菌圈大小。

实验结果如下：

表5 本发明发酵乳杆菌B153对创伤弧菌的抗菌活性

表5结果显示，B153菌液对创伤弧菌的显抑菌圈大小为1.4 cm，表明发酵乳杆菌B153对创伤弧菌的生长具有明显的抑制效果。

实施例7 发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum）B153在降解日落黄色素中的应用

实验方法：将菌株B153（菌体浓度为1.0×10⁷ cfu/mL）按体积比5%的接种量分别接种于MRS液体培养基中，置于37℃下厌氧培养24 h后，离心收集菌体沉淀，经适当稀释调整，使菌体浓度分别为1.0×10⁹ cfu/mL、1.0×10⁸ cfu/mL、1.0×10⁷ cfu/mL和1.0×10⁶cfu/mL，同时根据《食品添加剂使用标准（GB276 0-2014）》规定，日落黄色素在食品中的最大允许使用量为0.05 g/kg，设置日落黄色素在含B153菌体的MRS液体培养基中的浓度分别为0.05、0.025和0.0125 g/L，于不同培养时间（3 h ~ 48 h）下取培养液，与1.5 g/L乙酸铵溶液按1：1比例稀释，在480 nm下测吸光值，按照下述公式计算降解率。

实验结果如下：

表6 不同培养时间下发酵乳杆菌B153菌株对日落黄色素的降解效果

表6结果显示，发酵乳杆菌B153菌株对日落黄色素有一定的降解效果，在培养时间为48 h，菌体浓度为1.0×10⁹ cfu/mL，日落黄色素浓度为0.05 g/L时，B153菌株对日落黄色素的降解率达58.82%。

实施例8 发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum）B153在降解柠檬黄色素中的应用

实验方法：将菌株B153（菌体浓度为1.0×10⁷ cfu/mL）按体积比5%的接种量分别接种于MRS液体培养基中，置于37℃下厌氧培养24 h后，离心收集菌体沉淀，经适当稀释调整，使菌体浓度分别为1.0×10⁹ cfu/mL、1.0×10⁸ cfu/mL、1.0×10⁷ cfu/mL和1.0×10⁶cfu/mL，同时根据《食品添加剂使用标准（GB276 0-2014）》规定，柠檬黄色素在食品中的最大允许使用量为0.05 g/kg，设置柠檬黄色素在含B153菌体的MRS液体培养基中的浓度分别为0.05、0.025和0.0125 g/L，于不同培养时间（3 h ~ 48 h）下取培养液，与1.5 g/L乙酸铵溶液按1：1比例稀释，在426 nm下测吸光值，按照下述公式计算降解率。

实验结果如下：

表7 不同培养时间下发酵乳杆菌B153菌株对柠檬黄色素的降解效果

表7结果显示，发酵乳杆菌B153菌株对柠檬黄色素具有一定的降解效果，在培养时间为48 h，菌体浓度为1.0×10⁹ cfu/mL，柠檬黄色素浓度为0.05 g/L时，B153菌株对柠檬黄色素的降解率达40.95%。

实施例9 发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum）B153在降解苋菜红色素中的应用

实验方法：将菌株B153（菌体浓度为1.0×10⁷ cfu/mL）按体积比5%的接种量分别接种于MRS液体培养基中，置于37℃下厌氧培养24 h后，离心收集菌体沉淀，经适当稀释调整，使菌体浓度分别为1.0×10⁹ cfu/mL、1.0×10⁸ cfu/mL、1.0×10⁷ cfu/mL和1.0×10⁶cfu/mL，同时根据《食品添加剂使用标准（GB276 0-2014）》规定，苋菜红色素在食品中的最大允许使用量为0.025 g/kg，设置苋菜红色素在含B153菌体的MRS液体培养基中的浓度分别为0.025、0.0125和0.00625 g/L，于不同培养时间（3 h ~ 48 h）下取培养液，与1.5 g/L乙酸铵溶液按1：1比例稀释，在518 nm下测吸光值，按照下述公式计算降解率。

实验结果如下：

表8 不同培养时间下发酵乳杆菌B153菌株对苋菜红色素的降解效果

表8结果显示，发酵乳杆菌B153菌株对苋菜红色素具有明显的降解效果，在培养时间为24 h、36 h和48 h，菌体浓度为1.0×10⁹ cfu/mL，苋菜红色素浓度为0.025 g/L时，B153菌株对苋菜红色素的降解率超过50%，分别为58.09%、69.29%和74.07%。

实施例10 发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum）B153在降解胭脂红色素中的应用

实验方法：将菌株B153（菌体浓度为1.0×10⁷ cfu/mL）按体积比5%的接种量分别接种于MRS液体培养基中，置于37℃下厌氧培养24 h后，离心收集菌体沉淀，经适当稀释调整，使菌体浓度分别为1.0×10⁹ cfu/mL、1.0×10⁸ cfu/mL、1.0×10⁷ cfu/mL和1.0×10⁶cfu/mL，同时根据《食品添加剂使用标准（GB276 0-2014）》规定，胭脂红色素在食品中的最大允许使用量为0.05g /kg，设置胭脂红色素在含B153菌体的MRS液体培养基中的浓度分别为0.05、0.025和0.0125 g/L，于不同培养时间（3 h ~ 48 h）下取培养液，与1.5 g/L乙酸铵溶液按1：1比例稀释，在505 nm下测吸光值，按照下述公式计算降解率。

实验结果如下：

表9 不同培养时间下发酵乳杆菌B153菌株对胭脂红色素的降解效果

表9结果显示，发酵乳杆菌B153菌株对苋菜红色素具有明显的降解效果，在培养时间为24 h、36 h和48 h，菌体浓度为1.0×10⁹ cfu/mL，胭脂红色素浓度为0.05 g/L时，B153菌株对苋菜红色素的降解率超过50%，分别为57.90%、63.55%和72.18%。

实施例11 发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum）B153在降解诱惑红色素中的应用

实验方法：将菌株B153（菌体浓度为1.0×10⁷ cfu/mL）按体积比5%的接种量分别接种于MRS液体培养基中，置于37℃下厌氧培养24 h后，离心收集菌体沉淀，经适当稀释调整，使菌体浓度分别为1.0×10⁹ cfu/mL、1.0×10⁸ cfu/mL、1.0×10⁷ cfu/mL和1.0×10⁶cfu/mL，同时根据《食品添加剂使用标准（GB276 0-2014）》规定，诱惑红色素在食品中的最大允许使用量为0.025 g/kg，设置诱惑红色素在含B153菌体的MRS液体培养基中的浓度分别为0.025、0.0125和0.00625 g/L，于不同培养时间（3 h ~ 48 h）下取培养液，与1.5 g/L乙酸铵溶液按1：1比例稀释，在500 nm下测吸光值，按照下述公式计算降解率。

实验结果如下：

表10 不同培养时间下发酵乳杆菌B153菌株对诱惑红色素的降解效果

表10结果显示，发酵乳杆菌B153菌株对诱惑红色素具有一定的降解效果，在培养时间为48 h，菌体浓度为1.0×10⁹ cfu/mL，诱惑红色素浓度为0.025 g/L时，B153菌株对诱惑红色素的降解率为50.93%。

综上所述，本发明提供的发酵乳杆菌B153具有很强的耐酸耐胆盐能力、较高的植酸酶活力、对致病菌创伤弧菌的生长具有明显的抑制作用，该菌株对偶氮类人工合成使用色素（柠檬黄、日落黄、柠檬黄、苋菜红、胭脂红和诱惑红）具有一定的降解效果。鉴于发酵乳杆菌是我国批准的可用于普通食品的菌种之一，且分离自人类母乳，安全性很高，所以本发明提供的发酵乳杆菌B153具有很高的实际应用价值。

以上仅是本发明的若干个具体实施例。

本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 福建省农业科学院农业工程技术研究所

<120> 一株发酵乳杆菌及其应用

<130>

<160> 3

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

agagtttgat cctggctcag 20

<210> 2

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

ggttaccttg ttacgactt 19

<210> 3

<211> 1378

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

aacgagtggc ggacgggtga gtaacacgta ggtaacctgc ccagaagcgg gggacaacat 60

ttggaaacag atgctaatac cgcataacag cgttgttcgc atgaacaacg cttaaaagat 120

ggcttctcgc tatcacttct ggatggacct gcggtgcatt agcttgttgg tggggtaatg 180

gcctaccaag gcgatgatgc atagccgagt tgagagactg atcggccaca atgggactga 240

gacacggccc atactcctac gggaggcagc agtagggaat cttccacaat gggcgcaagc 300

ctgatggagc aacaccgcgt gagtgaagaa gggtttcggc tcgtaaagct ctgttgttaa 360

agaagaacac gtatgagagt aactgttcat acgttgacgg tatttaacca gaaagtcacg 420

gctaactacg tgccagcagc cgcggtaata cgtaggtggc aagcgttatc cggatttatt 480

gggcgtaaag agagtgcagg cggttttcta agtctgatgt gaaagccttc ggcttaaccg 540

gagaagtgca tcggaaactg gataacttga gtgcagaaga gggtagtgga actccatgtg 600

tagcggtgga atgcgtagat atatggaaga acaccagtgg cgaaggcggc tacctggtct 660

gcaactgacg ctgagactcg aaagcatggg tagcgaacag gattagatac cctggtagtc 720

catgccgtaa acgatgagtg ctaggtgttg gagggtttcc gcccttcagt gccggagcta 780

acgcattaag cactccgcct ggggagtacg accgcaaggt tgaaactcaa aggaattgac 840

gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga agctacgcga agaaccttac 900

caggtcttga catcttgcgc caaccctaga gatagggcgt ttccttcggg aacgcaatga 960

caggtggtgc atggtcgtcg tcagctcgtg tcgtgagatg ttgggttaag tcccgcaacg 1020

agcgcaaccc ttgttactag ttgccagcat taagttgggc actctagtga gactgccggt 1080

gacaaaccgg aggaaggtgg ggacgacgtc agatcatcat gccccttatg acctgggcta 1140

cacacgtgct acaatggacg gtacaacgag tcgcgaactc gcgagggcaa gcaaatctct 1200

taaaaccgtt ctcagttcgg actgcaggct gcaactcgcc tgcacgaagt cggaatcgct 1260

agtaatcgcg gatcagcatg ccgcggtgaa tacgttcccg ggccttgtac acaccgcccg 1320

tcacaccatg agagtttgta acacccaaag tcggtggggt aacctttagg agccagcc 1378

Claims

1.一株发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum）B153，其特征在于：所述菌株于2018年9月10日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为：CGMCC No.16454。

2.根据权利要求1所述的发酵乳杆菌，其特征在于：所述菌株的形态特征为：在MRS平板培养基上培养24~48 h后，菌落呈圆形，乳白色，表面光滑、隆起，边缘整齐，不透明；菌体呈杆状，大小为0.3~0.6 × 1.0~3.0 μm。

3.一种如权利要求1所述的发酵乳杆菌在制备抑制创伤弧菌药物、保健食品或普通食品中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物、保健食品或普通食品中所含发酵乳杆菌B153的活菌数为1.0×10⁶-5.0×10¹¹ cfu/mL或1.0×10⁶-5.0×10¹¹ cfu/g。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物、保健食品或普通食品中所含发酵乳杆菌B153的活菌数为2.0×10⁶-2.0×10⁸cfu/mL或2.0×10⁶-2.0×10⁸cfu/g。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物、保健食品或普通食品中所含发酵乳杆菌B153的活菌数为2.0×10⁷ cfu/mL或2.0×10⁷ cfu/g。

7.一种如权利要求1所述的发酵乳杆菌在制备低植酸产品中的应用。

8.一种如权利要求1所述的发酵乳杆菌在降解偶氮类人工合成色素中的应用。