CN113712841B - 一种甘油葡萄糖苷在制备口腔护理产品中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种甘油葡萄糖苷在制备口腔护理产品中的应用，所述甘油葡萄糖苷的立体构型为2‑αGG。甘油葡萄糖苷可以抑制牙龈成纤维细胞分泌炎症因子如肿瘤坏死因子（TNF‑α）、白细胞介素‑8（IL‑8）；可显著降低神经元细胞动作电位释放频率和动作电位幅度，具有神经性抗敏功效。将所述甘油葡萄糖苷应用到口腔护理产品中，可以治疗或缓解牙周炎、缓解牙本质敏感等。

Description

一种甘油葡萄糖苷在制备口腔护理产品中的应用

技术领域

本发明涉及口腔护理产品领域，尤其涉及一种甘油葡萄糖苷在制备口腔护理产品中的应用。

背景技术

口腔疾病是影响人体健康的常见病、多发病。儿童乳牙患龋率、中年人群恒牙患龋率以及老年人群中全口无牙者比例较高，人群牙龈炎、牙石检出率也较高，口腔健康问题普遍存在。

牙周炎可激活牙周组织中的多种靶细胞合成、分泌各种细胞因子及炎症介质，参与牙周组织破坏。牙龈成纤维细胞是牙周组织中的主要细胞成分，可合成、分泌多种细胞因子及炎症介质，参与牙周组织破坏。

牙本质过敏症（Dentin hypersensitivity，DH）会引起短暂、尖锐的疼痛或不适，患病率为3%~73%，好发年龄段为20~40岁。牙齿发生敏感的原因多数是因为牙齿表面的牙本质小管由于多种原因（损伤，发育，化学物质腐蚀等）开放，使得外界的冷热刺激与化学刺激能够比较强烈的刺激到牙髓腔中的牙神经，引发不适。正常情况下，牙本质小管被釉质层或牙骨质层所覆盖，而当牙槽骨开裂或开窗、牙龈组织过分脆弱以及医源性因素（医源性因素主要有牙齿美白导致的敏感、牙齿预备后导致的敏感肌牙周基础治疗导致的敏感等）出现时，会去除根面牙骨质，牙本质小管便暴露出来，此时外界的冷热刺激与化学刺激能够比较强烈的刺激到牙髓腔中的牙神经，引发不适。目前，抗敏感机制基本上有两种：（1）在牙膏中添加乙酸锶，通过牙膏中含有的类似细微粒子的乙酸锶成分封闭牙本质小管，减弱甚至阻止牙本质小管中液体的流动变化进而舒缓牙敏感；使用充填材料，充填材料如树脂可覆盖堵塞牙本质小管，充填治疗对于重度磨耗引起的DH 有着良好的即刻和远期疗效，但是应用此种方法需要磨除掉部分健康牙本质。（2）还有一些含有钾离子配方的抗敏感牙膏，是通过阻碍神经信号传导的机制发挥作用，也就是让牙神经的敏感性降低，感受不到敏感刺激。

甘油葡萄糖苷（Glucosylglycerol）构型中2-αGG是植物密罗木、卷柏的主要活性成分，具有激活细胞并促进细胞再生的作用，能促进伤口愈合，组织修复。目前甘油葡萄糖苷（2-αGG）主要为化妆品和食品添加原料，在能够治疗牙周炎和缓解牙本质敏感的口腔护理产品中的应用为空白，甘油葡萄糖苷（2-αGG）在口腔护理产品中的应用探究将开拓一个新市场。

因此，现有技术还有待于改进和发展。

发明内容

鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种甘油葡萄糖苷在制备口腔护理产品中的应用，以治疗牙周炎和缓解牙本质敏感。

本发明的技术方案如下：

本发明提供一种甘油葡萄糖苷在制备口腔护理产品中的应用，所述甘油葡萄糖苷的立体构型为2-αGG。

可选地，所述口腔护理产品中所述甘油葡萄糖苷的质量含量为0.01%~10%。

可选地，所述口腔护理产品中所述甘油葡萄糖苷的质量含量为0.01%~5%。

可选地，所述口腔护理产品包括牙膏、牙粉、口腔喷雾或漱口水。

可选地，按质量百分数计，所述口腔喷雾包括以下组分：

甘油葡萄糖苷0.01%~2%、磷酸氢二钠0.001%~0.006%、三氯蔗糖0.002%~0.01%、纯水97.984%~99.987%。

有益效果：本发明提供了一种甘油葡萄糖苷在制备口腔护理产品中的应用，所述甘油葡萄糖苷的立体构型为2-αGG。所述立体构型为2-αGG的甘油葡萄糖苷可以抑制牙龈成纤维细胞分泌炎症因子如肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素-8（IL-8）；可显著降低神经元细胞动作电位释放频率和动作电位幅度，具有神经性抗敏功效。将所述甘油葡萄糖苷应用到口腔护理产品中，可以治疗牙周炎、缓解牙本质敏感等。

附图说明

图1为本发明实施例1中IL-8含量变化结果图。

图2为本发明实施例1中TNF-α含量变化结果图。

图3a为本发明实施例2中对照组电位变化结果图。

图3b为本发明实施例2中2-αGG十万倍稀释组的电位变化结果图。

图3c为本发明实施例2中2-αGG万倍稀释组的电位变化结果图。

图3d为本发明实施例2中2-αGG千倍稀释组的电位变化结果图。

图4为本发明实施例2中动作电位释放频率结果图。

图5为本发明实施例2中动作电位幅度结果图。

图6为本发明实施例2中最大去极化速度结果图。

具体实施方式

本发明提供一种甘油葡萄糖苷在制备口腔护理产品中的应用，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

甘油葡萄糖苷（Glucosylglycerol，GG），是由一分子甘油及一分子葡萄糖通过糖苷键连接而形成的糖苷类化合物，根据立体构型（α和β）及糖苷键连接位置不同，甘油葡萄糖苷有6种立体结构，包括2-αGG、2S-1-αGG、2R-1-αGG、2-βGG、2S-1-βGG和2R-1-βGG，其中仅有2-αGG及2-βGG为天然构型。其中，2-αGG具有多种生理活性，如激活并促进细胞再生、增强细胞活力、加快细胞代谢、增强细胞抗氧化能力、促进胶原蛋白合成、治疗糖尿病、促进益生菌生长等。然而，目前2-αGG主要为化妆品和食品添加原料，在口腔护理产品中的应用为空白。基于此，本发明实施例提供一种甘油葡萄糖苷在制备口腔护理产品中的应用，所述甘油葡萄糖苷的立体构型为2-αGG，所述甘油葡萄糖苷的化学结构式为：

。

本实施例中，所述立体构型为2-αGG的甘油葡萄糖苷可以抑制牙龈成纤维细胞分泌炎症因子TNF-α、IL-8；可显著降低神经元细胞动作电位释放频率和动作电位幅度，具有神经性抗敏功效。将所述甘油葡萄糖苷应用或者添加到口腔护理产品中，可以改善口腔牙龈、使得口腔牙龈得到舒缓以实现牙周炎的治疗、还可以缓解牙本质敏感。

在一种实施方式中，所述口腔护理产品中所述甘油葡萄糖苷的质量含量为0.01%~10%。当口腔护理产品中的甘油葡萄糖苷的质量含量为0.01%~10%，可以充分发挥甘油葡萄糖苷的抑制牙龈成纤维细胞分泌炎症因子TNF-α、IL-8，降低神经元细胞动作电位释放频率和动作电位幅度的功效。

在一种具体的实施方式中，所述口腔护理产品中所述甘油葡萄糖苷的质量含量为0.01%~5%。

在一种更为具体的实施方式中，所述口腔护理产品中所述甘油葡萄糖苷的质量含量为1%。

本发明并不限定所述口腔护理产品的形式或类型，在一种具体的实施方式中，所述口腔护理产品包括牙膏、牙粉、口腔喷雾或漱口水，但不限于此。也就是说，本实施方式中，所述口腔护理产品的形式或类型并不限于上述几种，凡是含有立体构型为2-αGG的甘油葡萄糖苷成分并可用于口腔舒缓、缓解牙本质敏感的产品都应属于本发明的保护范围，其他的产品形式，例如口香糖、含片等。

在一种更为具体的实施方式中，所述口腔护理产品为口腔喷雾。

在一种实施方式中，按质量百分数计，所述口腔喷雾包括以下组分：

甘油葡萄糖苷0.01%~2%、磷酸氢二钠0.001%~0.006%、三氯蔗糖0.002%~0.01%、纯水97.984%~99.987%。

本实施例中，所述口腔喷雾具有口腔舒缓，缓解牙本质敏感效果。

下面通过具体的实施例对本发明作进一步地说明。

以下实施例中，立体构型为2-αGG的甘油葡萄糖苷用2-αGG表示。

实施例1

（1）按4×10⁴个/孔的接种密度将牙龈成纤维细胞接种至24孔板培养板中，并放置在培养箱（37℃、5%CO₂）中孵育过夜。

（2）按照实验设计表表1进行配置受试物工作液，溶剂为培养基，其中NC组为阴性对照组（不加入药物），PC组中地塞米松的浓度为100μg/mL ，样品组中2-αGG的浓度为0.625%，诱导条件为IL-1α（1ng/mL）。

表1. 实验设计表

（3）当24孔板中细胞铺板率达到40%~50%时，根据表1实验设计中的组别，将上述不同的受试物工作液加入到孔板中进行分组给药及刺激，每孔给药量为1 mL，每组设3个复孔。然后在37℃，5%CO₂培养箱中继续培养24h。

（4）收集细胞培养上清液于塑料离心管（EP管）中，采用试剂盒进行 IL-8、TNF-α含量检测。

结果如下：

如图1所示，与NC组相比，PC组炎症因子IL-8含量显著降低（p<0.01），表明本次阳性对照检测有效。与NC组相比，2-αGG组炎症因子IL-8含量显著降低（p<0.01）。

其中，图1中，NC组上的“

”表示：NC组与BC组相比，p<0.01；

PC组上的“

”表示：PC组与NC组相比，p<0.01；

2-αGG组上的“

”表示：2-αGG组与NC组相比，p<0.01。

如图2所示，与NC组相比，PC组炎症因子TNF-α含量显著降低（p<0.01），表明本次阳性对照检测有效。与NC组相比，2-αGG组炎症因子TNF-α含量显著降低（p<0.05）。

其中，图2中，NC组上的“

”表示：NC组与BC组相比，p<0.01；

PC组上的“

”表示：PC组与NC组相比，p<0.01；

2-αGG组上的“

”表示：2-αGG组与NC组相比，p<0.05。

基于牙龈成纤维细胞，2-αGG在0.625%的浓度作用下，对IL-1α诱导产生的IL-8和TNF-α表现出显著抑制作用，说明2-αGG可以通过抑制炎症反应来发挥口腔舒缓作用，进而缓解或者治疗牙周炎。

实施例2

通过全细胞膜片钳对乳鼠背根神经节（DRG）神经元细胞进行电生理实验：

DRG神经元分离

1）取出生24h内的SD大鼠，放冰上麻醉，剪开背皮，取出脊柱，放入预冷的HBSS中，去除血液，及脊髓，充分暴露DRG；

2）解剖显微镜下用镊子将DRG取出，放入预冷的HBSS中，将所有DRG取出后，用镊剪将DRG上的神经剪掉；

3）将所有去除神经的DRG组织放入装有HBSS的离心管中，转入细胞间；

4）900r/min，离心3min，去除HBSS；

5）加入消化液，37℃，消化45min；

6）去除消化液，加入十几滴FBS，终止消化液作用，900r/min，离心3min，去除FBS；

7）加入1mL NB 培养基，用1mL移液器吹打组织块10-20次，静置2min，吸出细胞悬液，收集于一个新的离心管中；

8）重复步骤7）操作3-4次，收集所有细胞悬液于同一离心管中；

9）将收集的上清液细胞计数，按照实验要求接种于PLL包被过的24孔板中；

10）24h后更换纯化培养基；

11）72h后更换NB培养基。

细胞封接以无影灯为反射光源，在倒置显微镜下，DRG细胞全细胞记录的具体操作方法为：

调节微电极操纵器将带有正液压的记录用玻璃微电极置于挑选好的胞体形态完整、颜色较深、边缘清晰的细胞上，用微电极操纵器步进马达以大约2μm/次的步幅靠近并压到细胞正中间位置上。通过由膜片钳放大器（EPC10, HEKA,Germany）输出到探头的去极化试验脉冲（5mV），在电脑显示器（DELL）上监测封接情况。当遇到细胞胞体时，玻璃微电极的电阻增大，试验脉冲方波会出现类似踩气球样的弹性变化，此时改用负压吸引以高阻封接细胞后，通过继续施加负压完成破膜形成全细胞记录。

将玻璃微电极靠近获得的神经元细胞进行细胞封接，当形成全细胞封接后将记录模式调至电流钳，试验数据由EPC-10放大器（HEKA）进行采集并储存于PatchMaster（HEKA）软件中。当全细胞记录的AP稳定后开始给受试物，受试物由2-αGG以十万倍、万倍、千倍稀释制备得到，溶剂为培养基，然后依次进行给药，每个药物浓度作用至5 min（或者AP稳定）后进行洗脱，洗脱后测试下一个药物浓度。将铺有细胞的盖玻片置于倒置显微中的记录浴槽中，测试2-αGG以及不含2-αGG的外液（培养基）利用重力灌流的方法从低浓度到高浓度依次流经记录浴槽从而作用于细胞，在记录中利用真空泵进行液体交换。每一个细胞在不含2-αGG的外液中检测到的电流作为自己的对照组，独立重复检测多个细胞。

结果如下：

由图3a-3d及4、5、6可知，2-αGG在千倍稀释浓度下（1‰），可显著降低神经元细胞动作电位释放频率和动作电位幅度；并可浓度依赖性降低神经元细胞动作电位最大去极化速度（2-αGG浓度越大，神经元细胞动作电位最大去极化速度越小）。说明2-αGG在一定浓度范围内可抑制神经细胞兴奋，减少神经元细胞将神经信号传导到牙本质细胞，具有神经性抗敏功效，可缓解牙本质敏感。

其中，图4中，原料-1‰组上的“

”表示：原料-1‰组与对照组相比，p<0.01。

图5中，原料-1‰组上的“

”表示：原料-1‰组与对照组相比，p<0.05。

图6中，原料-0.01‰组上的“

”表示：原料-0.01‰组与对照组相比，p<0.05；

原料-0.1‰组上的“

”表示：原料-0.1‰组与对照组相比，p<0.05；

原料-1‰组上的“

”表示：原料-1‰组与对照组相比，p<0.01。

实施例3

以质量百分比计，将甘油葡萄糖苷1%、磷酸氢二钠0.005%、三氯蔗糖0.002%、纯水98.993%混合均匀，制备得到口腔舒敏喷雾。

招募60位有口腔炎症或牙齿敏感受试者进行消费者试用调查，30人为一组，一组志愿者使用含2-αGG的口腔舒敏喷雾，一组志愿者使用不含2-αGG的口腔喷雾，连续使用产品28天，进行评分测试。

打分值满分5分，其中，

5分：牙龈红肿消褪，口腔溃烂改善，牙齿敏感较为减缓；

4分：牙龈红肿有消褪，口腔溃烂有一定改善，牙齿敏感得到减缓，有明显改善；

3分：牙龈红肿有一定消褪，口腔溃烂有一点改善，牙齿敏感有一点减缓，有改善；

2分：牙龈红肿有一点消褪，口腔溃烂改善一般，牙齿敏感无减缓；

1分：牙龈红肿、口腔溃烂、牙齿敏感无改善。

结果如下：

表2. 口腔舒敏喷雾试用评分结果

消费者试用结果说明本发明中的含有2-αGG口腔舒缓喷雾具有口腔舒缓、缓解牙龈红肿、缓解牙本质敏感等效果。

综上所述，本发明提供了一种甘油葡萄糖苷在制备口腔护理产品中的应用，所述甘油葡萄糖苷的立体构型为2-αGG。所述立体构型为2-αGG的甘油葡萄糖苷可以抑制牙龈成纤维细胞分泌炎症因子如肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素-8（IL-8）；可显著降低神经元细胞动作电位释放频率和动作电位幅度，具有神经性抗敏功效。将所述甘油葡萄糖苷应用到口腔护理产品中，可以治疗牙周炎、缓解牙本质敏感等。

应当理解的是，本发明的应用不限于上述的举例，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims (3)

1.一种甘油葡萄糖苷在制备用于治疗牙周炎和/或缓解牙本质敏感的口腔护理产品中的应用，所述甘油葡萄糖苷的立体构型为2-αGG；

所述口腔护理产品中所述甘油葡萄糖苷的质量含量为0.01%~10%；所述口腔护理产品包括牙粉、口腔喷雾、漱口水、口香糖或含片。

2.根据权利要求1所述的甘油葡萄糖苷在制备用于治疗牙周炎和/或缓解牙本质敏感的口腔护理产品中的应用，其特征在于，所述口腔护理产品中所述甘油葡萄糖苷的质量含量为0.01%~5%。

3.根据权利要求1所述的甘油葡萄糖苷在制备用于治疗牙周炎和/或缓解牙本质敏感的口腔护理产品中的应用，其特征在于，按质量百分数计，所述口腔喷雾包括以下组分：

甘油葡萄糖苷0.01%~2%、磷酸氢二钠0.001%~0.006%、三氯蔗糖0.002%~0.01%、纯水97.984%~99.987%。

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