CN113711012A - 免洗型化妆品组合物保护皮肤免受污染的功效的评估 - Google Patents
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Abstract
公开了一种确定化妆品组合物抑制大气污染物接触皮肤的功效的方法，其包括以下步骤：(i)用已知量的所述组合物填充已知尺寸的样品架，以在其中形成确定厚度的层，其中所述样品架适用于基于荧光的测定；(ii)在所述层上沉积已知量的模型细颗粒物，该模型细颗粒物至少在尺寸上类似于大气污染物，并且包含响应荧光显微镜的材料，该材料由波长
激发并发出辐射
其中
(iii)通过所述
辐照所述组合物和所述模型细颗粒物，并在一定时间段内多次记录在
处的荧光强度，其中所述模型细颗粒物与所述层相互作用；及(iv)通过下式确定在
处的荧光校正强度：校正强度＝记录强度/平均透射率，其中所述平均透射率是通过测量在
和
处的吸光度由Beer‑Lambert定律确定的所述组合物在
和
Description
技术领域
本发明涉及评估化妆品组合物功效的方法。更具体而言，本发明涉及评估免洗型化妆品组合物防止或抑制颗粒污染物接触皮肤的功效的方法。
背景技术
世界卫生组织(WHO)报告说，室外大气污染源自自然和人为来源。尽管自然污染源在干旱地区对大气的污染更易于造成森林大火和沙尘暴，但人类活动的贡献却远远超过自然污染源。
这些人类活动包括燃料燃烧、热力发电和工业设施(如制造工厂、矿山和炼油厂)。WHO将污染物分类为颗粒物、黑碳、地面臭氧和碳、氮和硫的氧化物。
颗粒物(PM)是由硫酸盐、硝酸盐、氨、氯化钠、碳、矿物粉尘和水组成的可吸入颗粒。直径小于10微米(PM10)的颗粒，包括小于2.5微米(PM2.5)的细颗粒，构成最大的风险。炭黑(烟灰)和粉尘(矿物质氧化物如铁氧化物等)包括许多这些尺寸范围内的颗粒物。
WHO将大气污染定义为任何会改变大气自然特征的化学、物理或生物物质对室内或室外环境的污染。美国环境保护署(EPA)和WHO总结了全球常见的大气污染物的范围。另外，有无数关于污染对人体皮肤的不良影响的报告和科学出版物。这些不利影响包括过早老化、产生细纹和皱纹、色斑、色素沉着、皮疹和炎症。
一些化妆品组合物声称通过形成保护层来防止、抑制或限制颗粒污染物接触人皮肤，即，它们可以部分或完全阻挡诸如颗粒、氧化物/超氧化物和气体之类的环境污染物接触人皮肤。配方科学家经常发现有必要以证据来证明这些主张。因此，一些制造商和研究人员发表了他们自己的测试/分析或验证给定组合物功效的方法。这种方法的目的是确定候选化妆品组合物的功效。有时，所述目的还可能是比较一种或多种组合物或活性成分如聚合物的功效。其中一些测试是在人类志愿者身上进行的。其他一些是在适当的皮肤等效物上进行的，例如塑料膜、活体皮肤等效物、
体外皮肤模型、离体皮肤等。尽管人体皮肤等效物是此类测试方法的一个组成部分，但选择适当的污染物也同样重要。但是，并非总是可以对真实污染物进行测试，因此经常使用模型污染物。
DE 43 40 827 C1(Aerochemica,1995)公开了一种针对化学物质和物质混合物的体外确定功效的方法和装置。在皮肤模拟膜(如硝酸纤维素、尼龙或PTFE)的预定表面上以定义好的量和厚度确定化妆品的阻隔作用。将有关的组合物施加到该膜上。随后，将所述膜夹在特定干试纸上，在保持与所述膜的平整接触的同时放置并拉伸试纸。然后，在所述化妆品层上施加一滴特定的污染物。根据制备的有效性，色是污染物可能会迅速渗透并触发试纸的颜色变化。通过经由统计分开的光纤束经由纤维将白光照射到所述试纸上来监视这种变化。其余约50％的接收器光纤吸收散射的光并将其引导至检测器。在这里进行信号滤波和放大，然后进行记录。例如，光电二极管接收来自光缆的光，放大器进行线性或对数放大(取决于试纸的颜色变化)，并将信号通过输出提供给记录仪。
DE 43 40 827 C1中公开的方法依赖于变色指示剂的使用，因此使用该方法可以知道何时变色，这给出了膜不再能够提供阻挡作用的时间点。
Zhai等人在Contact Dermatitis,1996,35,92-96中公开了一种体内方法，用于测量皮肤防护霜对两种染料指示剂溶液的有效性：亚甲蓝的水溶液和油红的乙醇溶液，其是典型的亲水和亲脂性模型化合物。在不同的施加时间后，通过测量受保护的皮肤样本的氰基丙烯酸酯试纸中的染料来分析三种市售组合物。处理了6名正常志愿者(3名女性和3名男性，平均年龄26.8岁)的前臂弯曲表面。
Lademann等人在European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics,72(2009)600-604中披露了用于卵泡渗透分析及其通过屏障乳剂进行预防的两种体外模型的比较。在这项研究中，对屏障乳剂在预防花粉过敏原渗透到毛囊中的功效进行了研究。由于所使用的花粉过敏原具有潜在的致敏性，该研究是在体外条件下进行的。
WO 97/21097(RECH LVMH,1997)公开了使用由交联丙烯酸或甲基丙烯酸聚合物组成的聚合物材料作为模拟皮肤或粘膜屏障以确定局部药物或化妆品行为的试剂，所述聚合物是通过使分子量为50至900的单官能丙烯酸或甲基丙烯酸单体与具有至少两个可聚合双键的多官能丙烯酸或甲基丙烯酸聚合而制得的。具体而言，公开了使用所述聚合物来研究化妆品或皮肤病学产品的扩散并测量其防晒系数或闭塞特性，以及使用所述聚合物作为用于局部化妆品或药物尤其是皮肤病学组合物的载体。还公开了用于测量待测试产品的渗透和/或扩散的单元，其中将上述聚合物用作接收部分。
Puchalski M M等人在Fresenius J Anal Chem(1991)340:341-344中公开了荧光测定法中内部过滤器效果校正评估。在该公开中，提出了IFE校正可能受到难以准确评估的补偿不足或补偿过度的影响。因此，为了评估现有的IFE校正方法，将所得Stern-Volmer图的线性及其斜率与温度的相对变化作为标准。
Rieger T等人在Laser Phys.Lett.4,NO.1,72-76(2007)中公开了体内激光扫描显微镜用于评估隔离霜的应用。基于在去除隔离霜后进行的荧光显微镜检查，其公开了对荧光素钠在穿过隔离霜后对皮肤的渗透深度的评估。
US 2011/269239(Bayer Technology Services GMBH,2011)公开了一种用于自动进行化学、生化和生物分析的装置和方法。
制备了5％的亚甲蓝水溶液和5％的油红的乙醇溶液，并分别在零时间和4小时借助铝封闭室将其分别施加在未经处理的皮肤上和保护性霜预处理的皮肤上。在施加时间结束时，将乳膏去除。从1至4条连续对皮肤进行表面活检(SSB)。通过比色法(Chroma MeterCR 300)确定每个条中的污渍量，并且计算每个测量中1至4个条中的累积污渍量。所述累积量表示在每个时间点下每种溶液的渗透量，以及皮肤隔离霜的功效。
在British Journal of Dermatology(1989)120,655-6中公开了一种与Marks等人的方法有些相似的方法。
Nizard等人在H&PC Today,10(1)2015年1月/2月中公开了一种方法。在该方法中，将皮肤外植体在一块贴剂下暴露于32种污染物(27种重金属和5种碳氢化合物)中，作为污染损害的离体模型。作者的制剂据称可以防止污染损害(皮肤形态完整性评分)和脂质过氧化(通过丙二醛测量)。由于在所述含有污染物的贴剂之前将其制剂施加在外植体上，因此所述制剂形成了物理屏障。
Dow Corning公开了一种量化其产品
防止微粒粘附的保护程度的测试方法。在胶原蛋白上形成测试材料的薄膜，然后进行表面分析并进行炭黑重复分析。
另外，Dow Corning还公开了另一种测试方法，其中将测试材料涂覆在臭氧可通过其扩散的合成基底上。在另一端是容纳染料溶液的容器，该染料溶液在与臭氧接触时会变色。所述颜色的强度与测试材料提供的保护成反比。
BASF公开了一种离体模型，以确定其产品
对香烟烟雾的功效。该方法依赖于人类皮肤的器官型培养物，在人类皮肤上施用有关产品，然后暴露于烟气中。然后进行活检和共聚焦显微镜检查，以确定目标化合物所提供的保护程度。
Lipotec公开了用于其产品
的具有相似用途的类似方法。
Olivarius等人在Contact Dermatitis,1996,35,219-225中公开了一种依赖于结晶紫的颜色道方法，当结晶紫涂覆在皮肤上时，其可与角蛋白(角质层)牢固结合。当使用疏水性乳膏对皮肤进行预处理时，结晶紫水溶液的渗透会受到抑制，从而导致较少的结合和颜色变浅。通过比较测量的皮肤反射的强度，可以目视评估不同乳膏的相对功效。低的反射率表示高的结合。乳膏所提供的保护作用可由乳膏引起的附加抗色性(x-y)除以可获得的最大附加抗色性(100-y)计算得到。
尽管上文公开的方法可用，但仍需要一种稳健的方法来尽可能准确地确定大气中模型污染物在一段时间内的渗透动力学，从而确定据称可通过，在可能的程度上，在皮肤和污染物之间形成屏障而防止或至少延迟大气中的颗粒污染物与人体皮肤接触的化妆品组合物的功效。这种方法应允许在进行客观分析的同时，考虑到或照顾到由于可能干扰分析或产生假阳性结果的成分而导致的错误观察。因此，这种方法最适用于比较两种或多种化妆品组合物的功效，从而可以从该方法得出合理准确的推断。
本发明通过克服现有技术中的至少一个缺点、不足或局限性来满足需求。
发明内容
根据第一方面，公开了一种确定化妆品组合物抑制大气污染物接触皮肤的功效的方法，包括以下步骤：
(i)用已知量的所述组合物填充已知尺寸的样品架，以在其中形成确定
厚度的层，其中所述样品架适用于荧光测定；
(ii)在所述层上沉积已知量的模型细颗粒物，该模型细颗粒物至少在尺寸上类似于大气污染物，并且包含对荧光显微镜有响应的材料，该材料可由波长
的光激发并发出辐射
的光，其中
(iii)通过所述
的光辐照所述组合物和所述模型细颗粒物，并在一定时间段内多次记录在
处的荧光强度，其中所述模型细颗粒物与所述层相互作用；及
(iv)通过下式确定在
处的荧光校正强度
校正强度＝记录强度/平均透射率其中所述平均透射率是通过测量在
和
处的吸光度由Beer-Lambert定律确定的所述组合物在
和
处的透射率的平均值，其中所述校正强度与所述组合物的所述功效成反比。
附图说明
图1是“校准前”的图，对应于实施例的表3中所包含的数据。
图2是“校准后”的图，对应于表4中所包含的数据。
具体实施方式
如本文所使用的，术语“包括”涵盖术语“基本上由……组成”和“由……组成”。在使用术语“包含”时，所列出的步骤或选项不必穷举。除非另有说明，否则以“x到y”的格式所表示的数值范围应理解为包括x和y。在给出任何值或数量的范围时，可以将任何特定的上限值或数量与任何特定的下限值或数量相关联。除在实施例和比较实施例中，或另有明确说明外，所有数字均应理解为由单词“约”修饰。除非另有说明，否则本文包含的所有百分比和比率均以重量计。如本文中所使用的，除非另有说明，否则不定冠词“一个”或“一种”及其对应的定冠词“该”是指至少一个，或一个或多个。在上面的各个部分中提及的本发明的各种特征适当地适用于必要的其他部分。因此，一个部分中给出的特征可以与其他部分中给出的特征适当组合。添加的任何部分标题仅出于方便起见，无意以任何方式限制本公开。实施例旨在说明本发明，而不旨在将本发明限制于那些实施例本身。
术语“化妆品组合物”是指任何化妆品组合物。更具体而言，所述化妆品组合物是免洗型化妆品。本文所用的“免洗型”是指与清洁或冲洗型或润洗型组合物不同，施用于皮肤上且一段时间内不需要被洗掉或润洗的组合物。化妆品组合物是指其功效将通过本发明的方法确定的化妆品组合物。
优选，当所述化妆品组合物为免洗型化妆品组合物时，其为精华、护手霜、面霜、润肤露、化妆品组合物如粉底、唇膏、头发定型凝胶、头发定型霜和除臭剂以及止汗剂如滚动型或棒。因此，所述组合物可以是如上所述的多种形式。
术语“体外”是指本发明的方法不是在人类志愿者如在人类志愿者的前臂上进行。
术语“活性成分”是指包括在化妆品组合物中以抑制或防止颗粒污染物与人皮肤接触的任何成分，包括成膜聚合物。其非限制性实例包括硅氧烷聚合物和天然产物的提取物，如任何植物的根或叶的提取物。
人体皮肤就像天然的屏障一样，保护我们的身体免受外界影响。但是，有时在某些条件下，皮肤可能不能完全有效地执行此功能。有大量证据证实，大气污染物会影响人体皮肤的正常功能。至少在世界上某些国家或地区，颗粒污染物往往位居榜首。
配方科学家已经探索并继续探索更新和更有效的化妆品组合物，以保护皮肤免受颗粒污染物的侵害，包括可以抵抗、限制或防止此类污染物与皮肤接触的组合物或活性剂。然而，如在背景技术和现有技术的部分下详细讨论的，需要一种更稳健和可靠的方法来证明这种组合物的功效。本发明至少部分地解决了这种需求。
术语“颗粒污染物”，也称为颗粒物或PM，是指漂浮在空气中的固体和液滴的混合物。一些颗粒直接从特定来源释放，而另一些则是在大气中以复杂的化学反应形式形成的。合适的例子包括灰尘、污垢、烟灰或烟雾。颗粒污染物以粒径描述为：PM2.5和PM10，其大气动力学直径分别小于2.5μm和10μm。优选，在本发明的方法中，模型细颗粒物至少在尺寸上类似于PM2.5或PM10。
根据第一方面，公开了一种确定化妆品组合物抑制大气污染物接触皮肤的功效的方法。该方法包括，第一步，用已知量的所述组合物填充已知尺寸的样品架以在其中形成确定厚度的层，其中所述样品架适用于基于荧光的测定。
本发明的方法在样品架中进行。为了执行该方法，在样品架中填充已知量的组合物以在其中形成确定厚度的层。优选，所述量等于消费者通常在使用条件下施加的量。通常，化妆品组合物包含水，其他挥发性溶剂或油。在将所述组合物施用于皮肤后，水和其他挥发性溶剂会蒸发。另一方面，当所述组合物包含油时，所述油倾向于被皮肤吸收。最终，所述组合物变干，在皮肤上留下薄膜或层，这取决于施加的量或推荐的施加量，其范围可以从几微米至几千微米。因此，优选，所述已知的组合物量是足以在干燥12小时后在所述样品架中形成10至1000μm的层的量。进一步优选，所述已知的组合物的量为10至100μL。
优选，所述样品架的构造材料不会干扰所述荧光的测定。这对于确保数据以及由此得出的推论不是错误是必要的。优选，所述样品架的长度为0.5至2cm。进一步优选，所述样品架是具有布置成矩阵的多个样品孔的比色皿或微板，其中每个孔都可用作一个样品架。优选，所述样品架的构造材料是聚合物，更优选是聚苯乙烯。
下一步涉及在所述层上沉积已知量的模型细颗粒物，该颗粒物的至少在尺寸上类似于大气污染物，并且其包含对荧光显微镜有响应的材料，所述材料可由波长
激发并发出辐射
其中
如网站https://www.microscopyu.com/techniques/fluorescence/introduction-to-fluorescent-microscopy所披露的，荧光显微镜的基本功能是用所需的特定波长波段照射标本，然后从激发光中分离出弱得多的发射荧光。在正确配置的显微镜中，只有发射光才应到达眼睛或检测器，以使所产生的荧光结构在非常暗(或黑色)的背景下以高对比度叠加。检测极限通常由背景的暗度决定，激发光通常比发射的荧光亮几十万至一百万倍。
此外，如网站https://www.olympus-lifescience.com/en/microscope-resource/primer/lightandcolor/fluorexcitation/所披露的，为了确定特定荧光染料的发射光谱，确定最大吸收波长(通常与最大激发光相同)，然后在该波长激发所述荧光染料。典型荧光染料的吸收光谱是相对于测得的波长绘制的相对吸收强度的图。然后，使用单色仪(一种允许窄的光波带通过的设备)在整个发射波长系列上扫描荧光发射强度。在不同波长下测量荧光的相对强度以绘制发射光谱。给定荧光染料的激发光谱以类似的方式，通过在通过一组连续的波长激发荧光团的同时监视最大强度的波长的荧光发射来确定。选择最大发射，并且仅允许该波长的发射光通过检测器。在不同激发波长下诱导激发(通常是通过单色仪激发)，并测量随波长变化的发射荧光强度。其得到的结果是描绘了在激发波长的光谱上通过激发所产生的相对荧光强度的图或曲线。
优选，所述模型细颗粒物包括合成聚合物材料、天然聚合物材料、水不溶性盐、矿物、金属、合金、玻璃或其混合物。进一步优选，所述合成聚合物材料是聚酰胺、聚乙酸酯、聚酯、聚丙烯酸酯、聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、人造丝、聚氯乙烯或其混合物。进一步优选，所述天然聚合物材料是纤维素、再生纤维素、淀粉、微晶纤维素或其混合物。特别优选，所述模型细颗粒物为包含聚苯乙烯和荧光材料的珠粒形式，所述显微成像技术是荧光显微术。在这种情况下，优选所述模型细颗粒物的直径为200至800nm。这样可以容易地进行实验。进一步优选，所述荧光材料吸收并发射波长为400至800nm，更优选400至600nm的辐射。在这种情况下，优选所发射的辐射的荧光强度与激发辐射一起测量。
下一步涉及通过用
辐照所述样品和所述模型细颗粒物，并在一定时间段内多次记录
处的荧光强度，在此期间所述模型细颗粒物与所述层相互作用。
多次包括至少多于一次的测量。
优选，所述组合物的已知量是，在干燥12小时后，足以在所述样品架中形成10至1000μm的层的量。所述组合物的已知量优选为10至100μL。
为了尽可能模拟现实情况，所述模型颗粒物的量应足以模拟此类条件。因此，优选在所述层上沉积1至10μL所述模型细颗粒物。所述液滴悬浮液的直径应小于包含化妆品组合物的样品架的长度，以防止所述悬浮液在边缘泄漏，在边缘处所述组合物有可能会从所述样品架上脱落。
所述颗粒物的浓度为0.03至2.6％，优选0.05至0.5％。
根据本发明，特别优选所述模型细颗粒物为包含聚苯乙烯和荧光材料的珠粒形式，所述显微成像技术为荧光显微术，且所述与人类皮肤等效物为人造皮肤。特别优选的材料是荧光探针，其是带有荧光标签的聚苯乙烯基颗粒(直径1μm)，Ex.Polysciences Inc。
酶标仪(也称为微孔板酶标仪或微孔板光度计)是用于检测微量滴定板中样品的生物学、化学或物理事件的仪器。它们被广泛用于制药和生物技术行业以及学术机构的研究、药物发现、生物测定验证、质量控制和制造过程中。样品反应可以在6至1536孔格式的微量滴定板中进行分析。学术研究实验室或临床诊断实验室中最常用的微孔板格式是96孔(8×12矩阵)，每个孔的典型反应体积为100至200μL。当通量(每天处理的样品数量)和每个样品的测定成本为关键参数时，通常使用较高密度的微孔板(384孔或1536孔微孔板)进行筛选，每个孔的典型测定体积为5至50μL。微孔板检测的常见检测模式是吸光度、荧光强度、发光、时间分辨荧光和荧光偏振。
荧光检测技术已经与酶标仪一起广泛使用。在这类仪器中，第一光学系统(激发系统)使用特定波长(由光学滤镜或单色仪选择)辐照样品。照射的结果是，样品发射光(发出荧光)。第二个光学系统(发射系统)收集所发射的光，将其与激发光分离(使用滤光片或单色仪系统)，并使用光检测器如光电倍增管(PMT)测量该信号。
特别优选，所述规定时间为1至3000分钟。在这种情况下，强度随时间变化的曲线图的斜率(k)在线性增加的范围内表示该候选化妆品组合物的短期功效，而所述曲线图达到平稳状态则表示其长期功效。
有必要能够尽可能准确地确定大气中模型污染物在一段时间内的渗透动力学(速度)，从而可以确定据称可以通过在皮肤和污染物之间在一定程度上形成屏障来防止或至少延迟颗粒状大气污染物与人皮肤接触的化妆品组合物的短期功效和长期功效。通常，在将免洗型化妆品组合物施用于皮肤上一段时间之后，该组合物会在皮肤上形成一个层，其可执行所述的功能。当此类化妆品旨在作为对环境污染物如PM2.5的屏障时，在初始阶段，所述层可防止或抵抗污染物与皮肤的接触。但是，经过一段时间后，所述污染物可能会进入该层中，然后移向皮肤。所述层将在一定程度上抵抗该运动，这取决于所述组合物的性质和其中活性成分(如果有的话)如成膜聚合物的功效。最终，所述污染物甚至可能穿过所述层并与皮肤建立接触。
为了获得有关长期和短期功效的数据，从T＝0开始，以每2至10分钟的间隔采集数据。在这种情况下，T起始和T结束之间数据的线性拟合的斜率(k)表示所述模型细颗粒物进入所述层的渗透速度，其中T起始是荧光强度开始增加的时间，T结束是荧光强度达到平稳状态的时间。使用该信息，可以容易且正确地将有效组合物与非有效组合物区分开，或甚至将不太有效组合物与更有效或非常有效的组合物区分开。
然而，如先前所公开的，所述荧光强度容易受到经常存在于化妆品组合物中的一些化妆品成分的影响，非穷举的例子包括有机防晒剂、成膜聚合物、有色成分如颜料、和油性成分如脂肪酸或脂肪醇。
任何方法都应允许在考虑或照顾可能存在干扰分析或产生假阳性结果的成分而导致的错误观察结果的同时，进行客观分析。
因此，本发明的发明人发现，可以通过下式得到在
处的荧光校正强度。
校正强度＝记录强度/平均透射率
术语“平均透射率”是指由Beer-Lambert定律确定的在
和
处测得的所述组合物的透射率的平均值。
与所记录的荧光强度相比，校正强度是所述组合物功效的更好且技术上更可靠的指标，因为可能干扰观察结果或数据的成分干扰被最小化了。
所述校正强度与所述组合物的功效成反比，即，如果所述组合物足够有效，则已沉积在所述层上的模型细颗粒物的运动或逐渐渗透将是最小的，因为所述层将作为有效的屏障，防止所述颗粒物的进入。在这种情况下，所述发射的辐射源(即所述模型细颗粒物)将远离探测器。因此，所记录的强度会更弱。另一方面，如果述是组合物不够有效，那么已经沉积在所述层上的模型细颗粒物的运动或逐渐渗透将不会在很大程度上受限，因为所述组合物的层将不能作为有效的屏障，以防止所述模型细颗粒物进入。在这种情况下，所述发射的辐射源(即所述模型细颗粒物)将更靠近检测器。因此，所记录的强度将相对更强。
优选，所述步骤(i)至(iv)也用参考化妆品组合物进行，其中所述组合物的所述功效是所述化妆品组合物与所述参考化妆品组合物的功效之间的差异。术语“参考化妆品组合物”是指包含最少成分且，如果需要的话，不含例如成膜聚合物成分的组合物。
图3显示了荧光强度的典型时间曲线。
阶段1被认为是乳膏表面和模型污染物逐渐相互作用的时候。然后，进入第二阶段，模型污染物开始渗透或进入所述乳膏层。随着更多的模型颗粒进入该层，它们越来越靠近下面的荧光检测器，因此荧光的总强度开始增加。最终，该渗透过程达到平衡，荧光强度达到平稳。该过程，第三阶段，被认为是化妆品组合物的长期功效。第二阶段用于指示所述组合物的功效。
在阶段2，所述强度以线性方式增加。因此，可以使用线性拟合来很好地拟合该阶段。更高/更大的斜率等同于更快的渗透，并且表明所述薄膜不是很好的阻挡层。将包含最少成分的简化制剂用作参考。该参考制剂被认为提供了最小的屏障。阻挡的功效计算如下：
阻挡功效＝1–k化妆品组合物/k参考化妆品组合物
本发明的方法可用于确定化妆品组合物整体或所述组合物中一种或多种活性成分的功效。优选，所述成分是成膜聚合物，如有机硅树脂。
优选，本发明的方法可用于区分第一组合物和第二组合物的功效，或者可用于区分两种或多种成分的功效，以选择一种而不是另一种。在这种情况下，步骤(i)至(iv)首先对第一组合物或第一成分(视情况而定)进行，然后再对第二组合物重复所述步骤以比较功效。
这种演示对于任何消费者促销活动或在诸如购物中心、超级市场或消费者博览会中的消费者演示都是有用的。所述演示还可能对获得支持和广告有用。
化妆品组合物
所关注的组合物可以直接施用于皮肤上。或者，它可以通过各种透皮递送系统如本领域已知的透皮贴剂递送。例如，对于局部给药，可以通过已知的方法将活性成分以化妆品可接受的形式配制成溶液、凝胶、洗剂、软膏、乳膏、悬浮液、糊剂、擦剂、粉剂、药酒、气雾剂、贴剂等。所述组合物可以是化妆品领域中用于局部施用于人类的常见各种形式中的任何形式。
可以将所述组合物制成各种各样的产品类型，包括但不限于溶液、悬浮液、洗剂、乳膏、凝胶、调色剂、棒、喷雾剂、软膏、糊剂、泡沫、粉末、摩丝、条、贴剂、电动力的贴剂、水凝胶、成膜产品、面部和皮肤面膜、粉底等化妆品。这些产品类型可包含几种化妆品可接受的载体、包括但不限于溶液、悬浮液、乳剂如微乳液和纳米乳液、凝胶、固体和脂质体。
可以将所述组合物配制成包含水性或有机溶剂，例如50至90重量％的化妆品可接受的水性或有机溶剂的溶液。适用的有机溶剂的例子包括：丙二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、甘油、1,2,4-丁三醇和山梨糖醇酯。
可以由这样的溶液可以制成洗剂。所述洗剂通常包含约1％至约20重量％的润肤剂和50至90重量％的水。
可以由溶液配制的另一种产品是乳膏。乳膏通常包含5至50重量％的润肤剂和45至85重量％的水。
本文所述的组合物也可以配制成乳液。如果载体是乳液，则1至10重量％的所述载体包含乳化剂。乳化剂可以是非离子的、阴离子的或阳离子的。
水包油型和油包水型的单乳液皮肤护理制剂，如洗剂和乳膏，在本领域中是众所周知的，并且可用于本文所述的组合物和方法中。多相乳液组合物，如水包油包水型或油包水包油型，也可用于本文所述的组合物和方法中。通常，这样的单相或多相乳液包含水、润肤剂和乳化剂作为基本成分。
本文描述的组合物也可以配制成凝胶(如使用合适的胶凝剂的水性、醇、醇/水或油性凝胶)。用于水和/或醇凝胶的适用的胶凝剂包括但不限于天然树胶、丙烯酸和丙烯酸酯聚合物及共聚物，以及纤维素衍生物(如羟甲基纤维素和羟丙基纤维素)。用于油(如矿物油)的适用的胶凝剂包括但不限于氢化的丁烯/乙烯/苯乙烯共聚物和氢化的乙烯/丙烯/苯乙烯共聚物。这种凝胶通常包含0.1至5重量％的胶凝剂。
其他适用的固体/液体试剂可包括维生素及其衍生物。本发明的组合物可以包含维生素作为所需的活性物质。示例性的维生素是维生素A(视黄醇)以及视黄醇酯(如视黄醇棕榈酸酯和视黄醇丙酸酯)、维生素B2、维生素B3(烟酰胺)、维生素B6、维生素C、维生素D、维生素E、叶酸和生物素。也可以使用所述维生素的衍生物。例如，维生素C衍生物包括抗坏血酸四异棕榈酸酯、抗坏血酸磷酸镁和抗坏血酸糖苷。维生素E的衍生物包括生育酚乙酸酯、生育三烯酚、生育酚棕榈酸酯和生育酚亚油酸酯。也可以使用DL-泛醇及其衍生物。当存在于所述组合物中时，维生素的总量可以在0.001至10％的范围内。
防晒剂也可以作为固体/液体试剂包括在组合物中。特别优选的材料是，例如，苯基苯并咪唑磺酸(Ensulizole)、水杨酸乙基己基酯(水杨酸辛酯)、对甲氧基肉桂酸乙基己基酯，可作为Parsol MCX.RTM获得，Avobenzene，可作为Parsol
获得，以及二苯酮-3，也称为
辛二烯也是适用的。当存在时，防晒剂的量通常可以为0.1至30重量％。
适用的油包括酯、甘油三酸酯、烃和有机硅。这些可以是单一材料或一种或多种材料的混合物。它们通常可以占0.5至90重量％。
可用于本文所述的组合物中的表面活性剂的实例包括烷基硫酸钠如月桂基硫酸钠和肉豆蔻基硫酸钠、N-酰基肌氨酸钠如N-月桂酰基肌氨酸钠和N-肉豆蔻基肌氨酸钠、十二烷基苯磺酸盐、氢化椰子油脂肪酸单甘油酯硫酸钠、十二烷基磺基乙酸钠和N-酰基谷氨酸盐如N-棕榈酰基谷氨酸盐、N-甲基酰基牛磺酸钠盐、N-甲基酰基丙氨酸钠盐、α-烯烃磺酸钠和二辛基磺基琥珀酸钠；N-烷基氨基甘油如N-月桂基-二氨基-乙基甘油和N-肉豆蔻基二氨基乙基甘油、N-烷基-N-羧甲基铵甜菜碱和2-烷基-1-羟乙基咪唑啉甜菜碱钠；聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯烷基芳基醚、聚氧乙烯羊毛脂醇、聚氧乙烯甘油单脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯、高级脂肪酸甘油酯、脱水山梨醇脂肪酸酯、Pluronic型表面活性剂、聚氧乙烯山梨糖醇单脂肪酸酯如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯和聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯。本领域技术人员已知的乳化剂型表面活性剂可用于本文所述的组合物中。
根据所述组合物的类型，所述表面活性剂可以以4至90％的含量使用。
另外，所述组合物可以包含治疗剂、载体、佐剂等。一些特定的其他试剂可包括类维生素A；抗氧化剂；羟基酸；脂肪酸、可接受的天然氨基酸或羟烷基酸的无毒金属盐；植物提取物、水杨酸、角质层分离剂、络合剂、着色剂和香料成分。
现在将通过以下非限制性实施例详细描述本发明。
实施例
实施例1：
对四种不同的化妆品免洗型组合物实施本发明的方法。制备简化的化妆品组合物用作参考。
包装上所公开的组合物配方如下：
表1
将来自Polysciences的
YG羧酸盐微球(2.5％的水悬浮液)用作PM2.5模型，其是标称直径为0.5μm的羧基改性单分散聚苯乙烯颗粒。其
为441nm，
为486nm。
测量室由Corning
48孔透明TC处理的多孔板(产品编号3548)改造。所述多孔板由平底聚苯乙烯材料制成，每个孔的生长面积为0.95cm2。在样品制备步骤中，通过多通道移液器将80μL的样品护肤产品乳膏注入每个孔中，在水平面上进行离心(3000RPM，5分钟)以使所述乳膏表面光滑并除去空气。将样品在通风橱中于室温放置八小时。在测量之前，在时刻T＝0，通过移液器在所述层上添加一滴模型污染物悬浮液(3μL)。
所述测量持续约3小时。可以同时测量所有24个孔中的样品乳膏产品，每隔5分钟记录每个孔的总荧光随时间的变化。
当所述模型污染物穿透样品乳膏层时，总荧光强度随时间增加。使用线性拟合来描述时间依赖性荧光强度的增加。所述线性拟合的斜率用于指示所述模型污染物穿过所述层的渗透速度。所述化妆品组合物抑制大气污染物(在本实验中为所述模型)接触皮肤的功效与所述斜率成正比。
吸光度和透射率值列于表2。
表2
荧光强度的观察结果(校准前)列于表3，校准后的结果示于表4。
表3
表4(校准后)
表3和表4中包含的数据和观察结果分别在图1和图2中以图形方式给出。图1是校准前的图，对应于表3中的数据。图2是校准后的图，对应于表4中的数据。
这些图清楚地表明，在校准之前，组合物1、2、3和4的作用之间的差异不像图2中那样明显。此外，根据图1，看上去组合物1的功效优于参考化妆品组合物。然而，这不是事实，因为在校准之后，化妆品组合物1的阻挡功效几乎与参考化妆品组合物的阻挡功效相同。
表5总结了与阻挡功效有关的[计算]数据。
表5
| 组合物的详情 | 斜率 | 阻挡功效 |
| 参考组合物 | 171.2 | 0 |
| 组合物1 | 159.5 | 6.8％ |
| 组合物2 | 82.5 | 51.8％ |
| 组合物3 | 2.2 | 98.7％ |
| 组合物4 | 12.5 | 92.7％ |
表5中的数据清楚地表明了与参考化妆品组合物相比测试化妆品组合物的性能如何。
Claims (13)
1.确定化妆品组合物抑制大气污染物接触皮肤的功效的方法，其包括以下步骤：
(i)用已知量的所述组合物填充已知尺寸的样品架，以在其中形成确定厚度的层，其中所述样品架适用于基于荧光的测定；
(ii)在所述层上沉积已知量的模型细颗粒物，该模型细颗粒物至少在尺寸上类似于大气污染物，并且包含响应荧光显微镜的材料，该材料由波长
激发并发出辐射
其中
(iii)通过所述
辐照所述组合物和所述模型细颗粒物，并在一定时间段内多次记录在
处的荧光强度，在所述时间段内所述模型细颗粒物与所述层相互作用；及
(iv)通过下式确定在
处的荧光校正强度
校正强度＝记录强度/平均透射率
其中所述平均透射率是通过测量在
和
处的吸光度由Beer-Lambert定律确定的所述组合物在
和
处的透射率的平均值，其中所述校正强度与所述组合物的所述功效成反比。
2.根据权利要求1所述的方法，其中也对参考化妆品组合物实施所述步骤，其中所述组合物的所述功效是所述化妆品组合物与所述参考化妆品组合物的功效之间的差异。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述模型细颗粒物至少在尺寸上类似于PM2.5或PM10。
4.根据权利要求1至3之一所述的方法，其中所述基于荧光的测定是荧光显微镜或荧光光谱法。
5.根据权利要求1至4之一所述的方法，其中所述一定时间段是1至3000分钟。
6.根据权利要求1至5之一所述的方法，其中强度对时间的曲线的斜率(k)在线性增加的范围内表示所述候选化妆品组合物的短期功效，该曲线达到平稳状态的性质表示其长期功效。
7.根据权利要求6所述的方法，其中从T＝0开始，以每2至10分钟的间隔采集数据。
8.根据权利要求6或7所述的方法，其中T起始和T结束之间的数据的线性拟合的斜率(k)表示所述模型细颗粒物进入所述层中的穿透速度，其中T起始是荧光强度开始增加的时刻，T结束是荧光强度达到平稳状态的时刻。
9.根据权利要求6至9之一所述的方法，其中使用下式由所述斜率(k)计算阻挡功效的程度
阻挡功效＝1–k化妆品组合物/k参考化妆品组合物，
其中所述阻挡功效表示所述化妆品组合物与所述参考化妆品组合物相比更好的程度。
10.根据权利要求1至9之一所述的方法，其中所述模型细颗粒物包括合成聚合物材料、天然聚合物材料、水不溶性盐、矿物、金属、合金、玻璃或其混合物。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述模型细颗粒物是包含聚苯乙烯和荧光材料的珠粒形式。
12.根据权利要求1至11之一所述的方法，其中所述组合物的所述已知量是足以在干燥12小时后在所述样品架中形成10至1000μm的层的量。
13.根据权利要求1至12之一所述的方法，其中所述样品架是具有以矩阵状布置的多个样品孔的比色皿或微板，其中每个孔都用作样品架。
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