CN113694213A - 负载基因诊断探针和/或抗肺纤维化药物的纳米制剂及其制备方法 - Google Patents

负载基因诊断探针和/或抗肺纤维化药物的纳米制剂及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN113694213A
CN113694213A CN202110960824.3A CN202110960824A CN113694213A CN 113694213 A CN113694213 A CN 113694213A CN 202110960824 A CN202110960824 A CN 202110960824A CN 113694213 A CN113694213 A CN 113694213A
Authority
CN
China
Prior art keywords
pulmonary fibrosis
preparation
nano
gcl
drug
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202110960824.3A
Other languages
English (en)
Inventor
常鑫
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jinzhou Medical University
Original Assignee
Jinzhou Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jinzhou Medical University filed Critical Jinzhou Medical University
Priority to CN202110960824.3A priority Critical patent/CN113694213A/zh
Publication of CN113694213A publication Critical patent/CN113694213A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4418—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof having a carbocyclic group directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cyproheptadine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
    • A61K47/6911—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a liposome
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
    • A61K49/0054—Macromolecular compounds, i.e. oligomers, polymers, dendrimers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0063—Preparation for luminescence or biological staining characterised by a special physical or galenical form, e.g. emulsions, microspheres
    • A61K49/0069—Preparation for luminescence or biological staining characterised by a special physical or galenical form, e.g. emulsions, microspheres the agent being in a particular physical galenical form
    • A61K49/0076—Preparation for luminescence or biological staining characterised by a special physical or galenical form, e.g. emulsions, microspheres the agent being in a particular physical galenical form dispersion, suspension, e.g. particles in a liquid, colloid, emulsion
    • A61K49/0084—Preparation for luminescence or biological staining characterised by a special physical or galenical form, e.g. emulsions, microspheres the agent being in a particular physical galenical form dispersion, suspension, e.g. particles in a liquid, colloid, emulsion liposome, i.e. bilayered vesicular structure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y20/00—Nanooptics, e.g. quantum optics or photonic crystals
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y30/00—Nanotechnology for materials or surface science, e.g. nanocomposites
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y40/00—Manufacture or treatment of nanostructures
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Condensed Matter Physics & Semiconductors (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Composite Materials (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Manufacturing & Machinery (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种负载基因诊断探针和/或抗肺纤维化药物的纳米制剂及其制备方法，同时负载有基因诊断探针和抗肺纤维化药物，基因诊断探针依赖于荧光能量共振转移原理实现对早期肺纤维化的诊断，并与抗肺纤维化协同调节II型肺泡上皮细胞的稳态平衡，达到诊疗协同治疗早期肺纤维化的目的。另一方面，利用一种含有活性氧（ROS）特异性敏感脂质片段的纳米制剂及其载体，借助ROS特异性敏感脂质片段促进抗肺纤维化药物的瞬时释放，实现诊疗协同调节早期肺纤维化的目的，进而为逆转早期肺纤维化的治疗提供了一种新的途径和策略。

Description

负载基因诊断探针和/或抗肺纤维化药物的纳米制剂及其制 备方法
技术领域
本发明公开了一种负载基因诊断探针和/或抗肺纤维化药物的纳米制剂及其制备方法。
背景技术
肺纤维化是一种肺功能进行性下降的慢性肺间质疾病，临床呈现高发病率和死亡率等特点。研究证实，II型肺泡上皮细胞(Alveolar epithelial cells，AEC II)异常损伤是造成肺纤维化发生与进展的关键病因。损伤AEC II胞内线粒体由于氧化应激失衡而分泌大量活性氧自由基(Reactive oxygen species，ROS)到胞质中，通过激活AECs II胞内多种半胱氨酸蛋白酶而刺激促炎因子白介素1β(Interleukin 1β，IL 1β)和白介素13(Interleukin 13，IL 13)在胞质过表达，造成损伤AECs II胞内炎症反应过度激活，其分泌到胞外后刺激肺泡巨噬细胞过度增殖、促进免疫反应异常激活，加速早期肺纤维化进程。目前，针对肺纤维化治疗出现了多种治疗剂，一方面是化学药物的开发，包括质固醇类药物、免疫抑制剂类、吡非尼酮和尼达尼布等；另一方面，通过开发纳米制剂提高药物在病灶部位蓄积量而提高疾病治效果。然而，两者均无法达到理想的治疗效果。
肺纤维化的病程复杂(分为早、中、晚期)、不同病程的病理机制有明显差异，早期以损伤AECs II稳态失衡及免疫反应过度激活为主；中晚期肺纤维化以MFs异常活化及ECM过度蓄积为主。所以，在无法诊断肺纤维化病程阶段的情况下，单纯抑制一条或几条病理通路的治疗策略会造成盲目性增加，治疗针对性降低，使处于不同病理阶段的肺纤维化病人无法得到对症治疗，易造成病情延误影响疾病治疗效果。因此，开发出能够精准识别肺纤维化不同阶段并进行针对性治疗的纳米制剂对于肺纤维化的逆转治疗具有重要作用。
发明内容
目的：为了克服肺纤维化治疗中病程难以诊断的临床问题，本发明公开了一种负载基因诊断探针和/或抗肺纤维化药物的纳米制剂及其制备方法。
技术方案：为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：
根据本发明的第一方面，提供一种用于负载基因诊断探针和抗肺纤维化药物的纳米制剂载体，所述纳米制剂载体包括X-mPEG、磷脂P、胆固醇C及修饰有ROS响应的敏感脂质片段L；
其中X为疏水段，X选自DSPE，DOPE，DPPE，DMPE；
P为阳离子脂质，选自DMG-PEG2000、Dlin-MC3-DMA、DOTMA、DOP-DEDA、 DC-Cholesterol、DOTAP、PEI及其衍生物、lipofectamine 2000；
修饰有ROS响应的敏感脂质片段L由疏水段L1、ROS敏感性基团L2和亲水段L3组成，疏水段L1选自DSPE、DOPE、DPPE，DMPE、PLGA、PLA、PCL、PAA、PLL、cholesterol； ROS敏感性基团L2选自硫醚键、聚丙烯硫醚、酮缩硫醇、含硒基团、草酸酯、苯硼酸及苯硼酸酯衍生物；亲水段L3选自聚乙二醇、环氧乙烯、环氧乙烷、泊洛沙姆、聚山梨酯80、乙二胺衍生物908、环糊精、聚山梨醇酯、聚乙烯醇。
在一些实施例中，所述抗肺纤维化药物包括疏水性抗肺纤维化药物和/或亲水性抗肺纤维化药物、具有抗肺纤维化功能的细胞因子、抗体、蛋白、生物活性分子；
优选地，抗肺纤维化药物Q选自吡非尼酮、尼达尼布、糖皮质激素、环磷酰胺、D-青霉胺、N-乙酰半胱氨酸、VAY 736、马西替坦、利妥昔单抗、类固醇、GLPG 1690、磺胺甲基异噁唑、塞卡替尼、FG 3019、二甲胺四环素、硫酸吗啡、GKT 137831、重组人穿透素2、BIBF 1120、齐留通、GC 1008、STX 100、阿奇霉素、IFN-γ、癸酸诺龙、波生坦、肾上腺皮质激素、霉酚酸酯、地纽福索、他唑巴坦、达那唑、氨曲南中的一种或几种。
在一些实施例中，基因诊断探针Y由荧光基团Y1、Y2和敏感性连接桥Y3组成，Y1，Y2分别独立地选自四甲基罗丹明、磺基罗丹明G、香豆素、绿色荧光蛋白及其同系物、吲哚乙酰氨基荧光素、四氯荧光素琥珀酰亚胺酯、荧光素、异硫氰酸荧光素，及其经化学修饰或改造后的衍生物；Y3是基于II肺泡上皮细胞内氧化应激微环境的病理响应型连接桥，选自醚键、聚丙烯硫醚、酮缩硫醇、含硒基团、草酸酯、苯硼酸及苯硼酸酯衍生物、腙键、亚胺键、肟键、酰胺键、缩醛、缩酮、乙烯基醚、原酸酯。
第二方面，提供一种纳米制剂，为所述的纳米制剂载体同时负载有抗肺纤维化药物Q和基因诊断探针Y，即GCL@QY；
或，为所述的纳米制剂载体负载基因诊断探针Y，即GCL@Y；
或，为所述的纳米制剂载体负载抗肺纤维化药物Q，GCL@Q。
在一些实施例中，所述抗肺纤维化药物Q为吡非尼酮。
GCL@QY的制备方法包括：将抗肺纤维化药物Q溶于有机溶剂或水溶液，将X-mPEG、磷脂P、胆固醇C及修饰有ROS响应的敏感脂质片段L溶于有机溶剂，通过薄膜分散法、注入法、超声波分散法或逆向蒸发法制备得到负载抗肺纤维化药物的纳米粒溶液GCL@Q；进一步地将基因诊断探针Y与负载抗肺纤维化药物的纳米粒溶液混合形成纳米制剂GCL@QY。
GCL@Y的制备方法包括：将X-mPEG、磷脂P、胆固醇C及修饰有ROS响应的敏感脂质片段L溶于有机溶剂，通过薄膜分散法、注入法、超声波分散法或逆向蒸发法制备得到纳米粒溶液；将基因诊断探针Y与纳米粒溶液混合形成纳米制剂GCL@Y。
GCL@Q的制备方法包括：将抗肺纤维化药物Q溶于有机溶剂或水溶液，X-mPEG、磷脂P、胆固醇C及修饰有ROS响应的敏感脂质片段L溶于有机溶剂，通过薄膜分散法、注入法、超声波分散法或逆向蒸发法制备得到的纳米制剂即为GCL@Q。
优选地，X-mPEG中，其中X的分子量范围为500-50000，PEG的分子量范围为100-20000。
在一些实施例中，所述纳米制剂中，负载抗肺纤维化药物Q的载药量在0.1％-20％之间，基因诊断探针的负载量为100％，纳米制剂的粒径大小在20nm-1000nm之间。
第三方面，提供所述的纳米制剂载体、所述的纳米制剂在诊断/制备治疗肺纤维化相关疾病药物中的应用。
第四方面，提供所述的纳米制剂在制备诊断/治疗肺纤维化相关疾病药物中的应用。
所述纳米制剂通过PEG实现脂质体在体内的长循环，更优选的，通过ROS敏感脂质片段L实现基因诊断探针Y与抗肺纤维化药物Q的快速释放，实现针对早期肺纤维化的精准诊疗。其中，含ROS敏感脂质片段L的纳米制剂能够在氧化应激微环境实现抗肺纤维化药物和基因诊断探针的瞬时释放；含敏感连接桥的基因诊断探针依赖于II型肺泡上皮细胞稳态失衡的病理环境实现早期肺纤维化的精确诊断，与瞬时释放的药物通过协同治疗的方式，实现纤维化的逆转治疗目的。
更优选的，所述抗肺纤维化药物Q为吡非尼酮。所述负载基因诊断探针Y和抗肺纤维化药物的纳米制剂同时负载有Y与吡非尼酮。当纳米制剂利用长循环到达肺部组织时，基因诊断探针Y利用损伤AECs II胞内氧化应激蛋白过表达实现早期肺纤维化的精确诊断，吡非尼酮通过抑制TGF-β过度蓄积的治疗策略为早期肺纤维化的逆转治疗提供了一种新的思路与方法。
根据本发明的另一方面，提供一种纳米制剂，为上述的纳米制剂载体负载有抗肺纤维化药物和/或基因诊断探针，包括GCL@QY、GCL@Y、GCL@Q。
1)抗肺纤维化药物：
吡非尼酮、尼达尼布、糖皮质激素、环磷酰胺、D-青霉胺、N-乙酰半胱氨酸、VAY736、马西替坦、利妥昔单抗、类固醇、GLPG 1690、磺胺甲基异噁唑、塞卡替尼、FG 3019、二甲胺四环素、硫酸吗啡、GKT 137831、重组人穿透素2、BIBF 1120、齐留通、GC 1008、STX 100、阿奇霉素、IFN-γ、癸酸诺龙、波生坦、肾上腺皮质激素、霉酚酸酯、地纽福索、他唑巴坦、达那唑、氨曲南中的一种或几种；2)抗肺纤维化药物：吡非尼酮、尼达尼布。
2)基因诊断探针
基因诊断探针(Y)由荧光基团Y1、Y2和敏感性连接桥Y3组成，Y1，Y2包含但不限于四甲基罗丹明、磺基罗丹明G、香豆素、绿色荧光蛋白及其同系物、吲哚乙酰氨基荧光素、四氯荧光素琥珀酰亚胺酯、荧光素、异硫氰酸荧光素，及经化学修饰或改造后的衍生物；Y3 是基于II肺泡上皮细胞内氧化应激微环境的病理响应型连接桥，包含但不限于醚键、聚丙烯硫醚、酮缩硫醇、含硒基团、草酸酯、苯硼酸及苯硼酸酯衍生物、腙键、亚胺键、肟键、酰胺键、缩醛、缩酮、乙烯基醚、原酸酯。
具体的，GCL@QY的制备方法如下：
步骤(1)首先将抗肺纤维化药物Q溶于有机溶剂或水溶液并充分溶解，X-mPEG、磷脂 P、胆固醇C及敏感脂质片段L溶于有机溶剂并充分溶解；
步骤(2)通过乙醇注入法、薄膜分散法或逆向蒸发法制备负载抗肺纤维化药物的纳米制剂；
步骤(3)将基因诊断探针Y溶于纳米制剂中形成GCL@QY。纳米制剂中的敏感性材料L能够响应损伤AEC II促进药物快速释放，并使药物迅速分布于胞质中并快速起效。
本发明的还制备了不含敏感脂质片段L、含抗肺纤维化药物Q的GC@Q，不含敏感脂质片段L、含抗肺纤维化药物Q和基因诊断探针Y的GC@QY，该纳米制剂的制备方式与上述方法相同。
反应中，加入的X-mPEG、磷脂P、胆固醇C及敏感脂质片段L的质量比为1:(5～50):(5～30)：(1～20)。
GCL@Y的制备方法如下：
步骤(1)首先将X-mPEG、磷脂P、胆固醇C及敏感脂质片段L溶于有机溶剂并充分溶解；
步骤(2)通过乙醇注入法、薄膜分散法或逆向蒸发法制备形成纳米制剂；
步骤(3)将基因诊断探针Y溶于纳米制剂中形成GCL@Y。纳米制剂中的敏感性材料L能够促进基因诊断探针在损伤AECs II胞质快速释放并实现早期肺纤维化诊断功能。
GCL@Q的制备方法如下：
步骤(1)首先将抗肺纤维化药物Q溶于有机溶剂和/或水溶剂，X-mPEG、磷脂P、胆固醇C及敏感脂质片段L溶于有机溶剂并充分溶解，即有机相；
步骤(2)通过乙醇注入法、薄膜分散法或逆向蒸发法制备负载抗肺纤维化药物的纳米制剂GCL@Q。纳米制剂中不含敏感性材料L，抗肺纤维化药物Q不能在损伤AEC II胞质瞬时释放。
GC@Y的制备方法如下：
步骤(1)首先将X-mPEG、磷脂P、胆固醇C及敏感脂质片段L溶于有机溶剂并充分溶解，即有机相；
步骤(2)通过乙醇注入法、薄膜分散法或逆向蒸发法制备不含抗肺纤维化药物的纳米制剂。纳米制剂中不含敏感性材料L和抗肺纤维化药物Q，含有基因诊断探针Y，该制剂能在损伤AEC II胞质实现早期肺纤维化的精确诊断，但该纳米制剂不含治疗药物，无法实现诊疗协同逆转肺纤维化的治疗目的。
GC@QY：
步骤(1)首先将抗肺纤维化药物Q溶于有机溶剂或水溶液并充分溶解，X-mPEG、磷脂 P、胆固醇C溶于有机溶剂并充分溶解；
步骤(2)通过乙醇注入法、薄膜分散法或逆向蒸发法制备负载抗肺纤维化药物的纳米制剂；
步骤(3)将基因诊断探针Y溶于纳米制剂中形成GCL@QY。纳米制剂中不含敏感性材料L，无法实现抗肺纤维化药物Q在损伤AEC II的瞬时释放。
GC@Y的制备方法如下：
步骤(1)首先将X-mPEG、磷脂P、胆固醇C溶于有机溶剂并充分溶解，即有机相；
步骤(2)通过乙醇注入法、薄膜分散法或逆向蒸发法制备不含抗肺纤维化药物的纳米制剂。纳米制剂中不含敏感性材料L和抗肺纤维化药物Q，含有基因诊断探针Y，该制剂能在损伤AEC II胞质实现早期肺纤维化的精确诊断，但该纳米制剂不含治疗药物，无法实现诊疗协同逆转肺纤维化的治疗目的。
本发明公开了一种负载基因诊断探针和/或抗肺纤维化药物的纳米制剂及其制备方法，一种损伤AECs II响应型的敏感性材料L修饰的纳米制剂及其载体。其可在损伤AECsII胞质快速断裂实现抗肺纤维化药物Q的瞬时释放。同时，基因诊断探针Y依赖于损伤AECsII胞质稳态失衡实现早期肺纤维化的精确诊断。该纳米制剂的特点包括病理响应型诊断探针部分及损伤AECs II响应释放部分的脂质片段部分。所述化学药物负载成份为末端具有mPEG修饰的长循环脂质体，其可规避体内微环境实现纳米制剂在体内的长循环作用，基因诊断探针 Y在损伤AECs II稳态失衡条件下可精确诊断早期肺纤维化，敏感脂质片段L可以在能够响应损伤AECs II微环境促进抗肺纤维化药物Q在胞质的瞬时释放。
有益效果：本发明公开了一种负载基因诊断探针和/或抗肺纤维化药物的纳米制剂及其制备方法，具有以下优点：(1)用于负载基因诊断探针(Q)和抗肺纤维化药物(Q)的纳米制剂是具有双层或多层结构的纳米级载体，可以有效实现亲水性和/或疏水性药物的负载，该纳米载体中包含有两亲性嵌段共聚物X-mPEG，能够实现纳米制剂在生理环境的长循环效果，提高纳米制剂就在血液中的循环时间。(2)纳米制剂中的基因诊断探针Y依赖于损伤AECs II 胞质稳态失衡实现对早期肺纤维化的精确诊断，从而提高临床药物的治疗准确性及规范性。 (3)敏感性脂质片段L响应于损伤AECs II病理微环境实现药物在AECs II胞质的瞬时释放。此纳米制剂的应用可精确诊断早期肺纤维化并响应性释放抗肺纤维化药物，从而实现诊疗协同的治疗目的。通过基因诊断探针的作用，可准确诊断早期肺纤维化并实行针对性治疗，治疗中被瞬时释放的抗肺纤维化药物可以有效调控损伤AECs II胞质TGFβ分泌，抑制促纤维化反应的过度激活，从而达到阻断早期肺纤维化并实现逆转治疗的目的。基因诊断探针Y依赖于损伤AECs II胞质稳态失衡实现早期肺纤维化的精确诊断，同时，敏感性脂质片段L能够响应损伤AECs II微环境实现抗肺纤维化药物的瞬时释放，通过诊疗协同作用实现肺纤维化逆转治疗的目的。纳米制剂中包含基因诊断探针和抗肺纤维化药物，分别通过实现早期肺纤维化的精确诊断和抗肺纤维化药物瞬时释放两个层面，通过诊疗协同作用实现早期肺纤维化逆转治疗的目的。进一步的，本发明利用损伤AECs II胞质稳态失衡的病理特征，通过降解基因诊断探针敏感性连接桥实现早期肺纤维化的精确诊断，并通过敏感性脂质片段实现抗肺纤维化药物的瞬时释放，同时采用诊疗协同调控促纤维化通路的过度激活，为早期肺纤维化的精准诊断及抗肺纤维化药物的瞬时释放提供了一种新的方法和治疗策略。目前，利用两亲性嵌段磷脂或共聚物负载亲水和/或疏水性药物在临床及科学研究中得到了广泛的应用。另一方面，病理响应型释放的基团也在疾病治疗中得到了广泛的发展，如醚键、聚丙烯硫醚、酮缩硫醇、含硒基团、草酸酯、苯硼酸及苯硼酸酯衍生物、腙键、亚胺键、肟键、酰胺键、缩醛、缩酮、乙烯基醚、原酸酯等，本发明应用酮缩硫醇作为响应性功能基团通过与基因诊断探针共同作用达到诊疗协同逆转肺纤维化的目的。
本发明利用X-mPEG、磷脂P、胆固醇C及敏感脂质片段L负载基因诊断探针和/或抗肺纤维化药物的纳米制剂及其制备方法，一种合成敏感脂质片段L的病理响应型脂质片段修饰的纳米制剂及其载体，该纳米制剂所负载的基因诊断探针在损伤AECs II胞质稳态失衡的病理条件下能实现对早期肺纤维化的精确诊断，同时，敏感脂质片段L能响应性释放抗肺纤维化药物Q，两者通过诊疗协同作用快速阻断早期肺纤维化的进程，达到逆转治疗的目的。
附图说明
图1是根据本发明实施例中最佳制剂(GCL@QY)的制备流程示意图；
图2是根据本发明实施例中制剂GCL@QY和GC@QY中吡非尼酮的负载情况；
图3是根据本发明实施例中最佳制剂(GCL@QY)基因诊断探针Y最佳负载比例筛选；
图4是根据本发明实施例中最佳纳米制剂GCL@QY的粒径分布图；
图5是根据本发明实施例中制剂GCL@QY和GC@QY在不同浓度H2O2条件下吡非尼酮的释放速率；
图6是根据本发明实施例中基因诊断探针Y制剂在损伤AECs II细胞中的诊断灵敏度。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作更进一步的说明。
实施例1纳米制剂成份的合成及制备，如图1所示为GCL@QY纳米制剂制备的流程示意图：一、含有敏感脂质片段L、DSPE-mPEG、大豆卵磷脂(PC)及胆固醇的纳米粒的制备
1.含敏感脂质片段L负载基因诊断探针与抗肺纤维化药物的制备(GCL@QY)
首先将疏水性/亲水性抗肺纤维化药物Q溶于有机溶剂或水溶液中，将X-mPEG、磷脂P、胆固醇C及敏感脂质片段L溶于有机溶剂并充分混合。通过薄膜分散法、逆向蒸发法等制备负载抗肺纤维化药物的纳米制剂。其中，基因诊断探针Y在损伤AECs II胞质实现对早期肺纤维化的精确诊断；另一方面，敏感脂质片段L在损伤AECs II胞质响应性断裂实现药物Q 的瞬时释放，并通过诊疗协同的策略实现肺纤维化的逆转治疗。
本发明优选的应用薄膜分散法制备同时负载基因诊断探针和抗肺纤维化药物(吡非尼酮) 的纳米制剂。具体制备方法如下：
精密称取PC 8.5mg，DSPE-mPEG 7.5mg，胆固醇4.7mg，敏感脂质片段L 7.5mg，阳离子脂质P1mg和吡非尼酮1mg溶于3mL乙醇溶液中。在45℃水浴条件下将有机溶剂完全蒸发，此时圆底烧瓶形成薄膜。向圆底烧瓶中加入超纯水2mL，超声震荡10min后，该纳米制剂在超声破碎仪作用10min，在2500rpm转速下离心10min除去未包封的吡非尼酮。继续向纳米制剂中加入基因诊断探针10μL(0.5μg/μL)并在室温下静置4h后用于后续实验研究。
1)基因诊断探针：
基因诊断探针(Y)由荧光基团Y1、Y2和敏感性连接桥Y3组成，Y1，Y2包含但不限于四甲基罗丹明、磺基罗丹明G、香豆素、绿色荧光蛋白及其同系物、吲哚乙酰氨基荧光素、四氯荧光素琥珀酰亚胺酯、荧光素、异硫氰酸荧光素，及经化学修饰或改造后的衍生物；Y3 是基于II肺泡上皮细胞内氧化应激微环境的病理响应型连接桥，包含但不限于醚键、聚丙烯硫醚、酮缩硫醇、含硒基团、草酸酯、苯硼酸及苯硼酸酯衍生物、腙键、亚胺键、肟键、酰胺键、缩醛、缩酮、乙烯基醚、原酸酯。
2)抗肺纤维化药物：吡非尼酮。
所述抗肺纤维化药物Q在纳米制剂中的载药量在0.1％-20％之间，基因诊断探针的负载量为100％，纳米制剂的粒径大小在20nm-1000nm之间。本实施例最佳制剂(GCL@QY)的纳米粒径分布均匀，形态均一。该纳米制剂双药的成功包载如图3所示，证明最佳纳米制剂GCL@QY可以同时负载基因诊断探针Y和抗肺纤维化药物Q，并通过诊疗协同的治疗策略实现肺纤维化的逆转治疗。本发明最佳纳米制剂的粒径分布如图4所示。
2.含敏感脂质片段L负载基因诊断探针或抗肺纤维化药物的制备
1)只负载吡非尼酮(GCL@Q)
精密称取PC 7.5mg、DSPE-mPEG 7.5mg、胆固醇5mg、敏感脂质片段L 7.5mg和吡非尼酮1mg，溶于3mL乙醇溶液并充分溶解。在45℃水浴条件下将有机溶剂完全蒸发，此时圆底烧瓶形成薄膜。向圆底烧瓶中加入超纯水2mL，超声震荡10min后，该纳米制剂在超声破碎仪中超声10min，在2500rpm转速下离心10min除去未包封的吡非尼酮即为纳米制剂GCL@Q，所述吡非尼酮在纳米制剂中的负载量为0.1％-20％之间。
2)只负载基因诊断探针(GCL@Y)
精密称取PC 7.5mg、DSPE-mPEG 7.5mg、胆固醇5mg、敏感脂质片段L 7.5mg和阳离子脂质P1mg溶于3mL乙醇溶液并充分溶解。在45℃水浴条件下将有机溶剂完全蒸发，此时圆底烧瓶形成薄膜。向圆底烧瓶中加入超纯水2mL，超声震荡10min后，该纳米制剂在超声破碎仪中超声10min向该纳米制剂中加入基因诊断探针10μL(0.5μg/μL)并在室温下静置4h即得到GCL@Y，所述基因诊断探针在纳米制剂中的负载量为100％。
二、不含敏感敏感脂质片段L、含有DSPE-mPEG，胆固醇及大豆卵磷脂的纳米粒的制备
1.不含敏感敏感脂质片段L的纳米制剂负载基因诊断探针和抗肺纤维化药物的制备(GC@QY)
将抗肺纤维化药物与载体材料X-mPEG、磷脂P及胆固醇C溶于有机溶剂并充分混合，通过薄膜分散法或逆向蒸发法制备负载基因诊断探针和抗肺纤维化药物但不含敏感脂质片段的纳米制剂。该纳米制剂在损伤AECs II无法实现药物的瞬时释放。
本发明优选的应用薄膜分散法制备负载基因诊断探针和抗肺纤维化药物(吡非尼酮)的纳米制剂。具体制备方法描述如下：
精密称取PC 7mg，DSPE-mPEG 7.5mg，胆固醇4.5mg，阳离子脂质P1mg及吡非尼酮1.2mg共溶于3mL乙醇溶液中。在45℃水浴条件下将有机溶剂完全蒸发，此时圆底烧瓶底部形成薄膜，将超纯水加入圆底烧瓶中，超声震荡10min后，该纳米制剂在超声破碎仪中超声10min，在2500rpm转速下离心10min除去未被包载的游离药。将基因诊断探针10μL(0.5 μg/μL)加入到纳米制剂中充分混合后室温静置4h即为GC@QY，该纳米制剂将用于后续实验。
1.不含敏感敏感脂质片段L的纳米制剂负载基因诊断探针或抗肺纤维化药物的制备
1)只负载吡非尼酮(GC@Q)
精密称取PC 8mg，DSPE-mPEG 7.6mg，胆固醇4.5mg和吡非尼酮1mg，共同溶于3mL乙醇溶液中。在45℃水浴条件下将有机溶剂完全挥发，圆底烧瓶中形成薄膜，将超纯水加入圆底烧瓶中，将其超声震荡10min后，在细胞破碎仪中继续破碎10min，2500rpm转速下离心10min除去未被包封的吡非尼酮即得到GC@Q。
2)只负载基因诊断探针(GC@Y)
精密称取PC 8.7mg，DSPE-mPEG 8mg，胆固醇5mg和阳离子脂质P1mg将载体材料溶于3mL乙醇溶液并充分溶解。在45℃水浴条件下将有机溶剂完全蒸发，圆底烧瓶底形成薄膜。将水相超纯水加入圆底烧瓶中，超声震荡10min后，继续在细胞破碎仪中破碎10min，即得到未包封吡非尼酮的纳米制剂。将基因诊断探针10μL(0.5μg/μL)加入到纳米制剂中充分混合后室温静置4h即得到GC@Y，该纳米制剂将用于后续实验。
所述抗肺纤维化药物M在纳米制剂中的载药量在0.1％-20％之间，基因诊断探针Y的负载率为100％，纳米制剂的粒径大小在20nm-1000nm之间。本发明的纳米制剂粒径分布均匀，形态均一。
实施例2纳米制剂对药物的负载情况
按照实施例1所述方法制备GCL@QY的纳米制剂，向纳米制剂中加入500μL乙醇溶液破乳后，应用紫外分光光度计对纳米制剂的载体材料和药物进行全波长扫描，波长范围是200 nm-800nm。同时对载体材料负载基因诊断探针进行了筛选，并应用琼脂糖凝胶电泳进行了表针，最终选择1：5的处方比例作为最优处方进行纳米制剂的制备，如图2所示。
本实施中吡非尼酮的负载情况如图3所示，通过薄膜分散法制备纳米制剂后加入乙醇破乳，然后应用紫外分光光度计检测纳米制剂在200nm-800nm之间的波谱吸收情况。结果显示制剂GCL@QY和GC@QY在320nm处有最大吸收峰，此吸收峰为抗肺纤维化药物吡非尼酮的最大吸收峰，因此证明抗肺纤维化药物吡非尼酮的成功包载。
实施例3最佳纳米制剂GCL@QY的粒径分布图
按照实施例1所述方法制备GCL@QY的纳米制剂后，应用马尔文粒径分析仪对 GCL@QY的粒径分布情况进行表征，溶液体积为2mL，检测循环数为13、并平行检测3次。
本实施例所测得的纳米制剂的释放曲线如图4所示，GCL@QY的粒径分布在10nm-1000 nm之间，该纳米制剂的平均粒径为100.4nm。该纳米制剂粒径分布均匀，形态均一，适用于后续的细胞实验和动物实验，也为将来的临床转化提供了可操作性。
实施例4纳米制剂在过氧化氢存在条件下的药物释放情况
按照实施例1所述方法制备GCL@QY、GCL@Q、GC@QY和GC@Q的纳米制剂。纳米制剂中过氧化氢浓度分别为10nM、100nM、1μM、10μM，每组3个平行对照，在37℃下考察各组制剂的药物释放情况，并分别在5min、15min、30min、2h、4h、12h、24h和 48h取出1mL释放介质，同时应用紫外分光光度计测定吡非尼酮的释放量。
本实施例所测得的纳米制剂的释放曲线如图5所示，考察敏感脂质L的病理响应性释放情况。在不含有敏感脂质L的对照组纳米制剂中，吡非尼酮在不同时间点的几乎不释放且存在突释；而含有敏感脂质L的纳米制剂组，吡非尼酮的能按照一定速率释放，且随着病理过氧化氢的浓度升高，释放速率逐渐加快，能达到病理响应性缓释的治疗目的。
实施例5考察基因诊断探针在损伤A549细胞中的转染水平
按照实施例1所述制备GCL@Y的纳米制剂。将A549细胞以2×105/孔种于六孔板培养皿中，并在37℃，5％CO2的细胞培养箱中培养过夜后，待A549细胞完全铺满细胞板后倒掉培养基，用PBS清洗培养板3次后加入负载基因诊断探针的制剂，在37℃，5％CO2的细胞培养箱中继续孵育12h后，吸取制剂培养基，用PBS清洗培养板三次后加入含10％血清的培养基1mL继续培养24h后用倒置荧光显微镜对不同时间点(24h、48h、96h)基因诊断探针的胞内转染情况进行评价。
本实施例所测得的基因诊断探针在损伤A549细胞的胞质转染情况。在损伤A549胞质中，当脂质材料与基因诊断探针的质量比为10：1，其具有最佳转染效率；若继续增加脂质材料的比例，会对细胞造成一定的毒性，随着转染时间的延长，转染效率逐渐提高。
实施例6考察基因诊断探针在损伤H1299细胞中的转染水平
按照实施例1所述制备GCL@Y的纳米制剂。将H1299细胞以2×105/孔种于六孔板培养皿中，并在37℃，5％CO2的细胞培养箱中培养过夜后，待H1299细胞完全铺满细胞板后倒掉培养基，用PBS清洗培养板3次后加入负载基因诊断探针的制剂，在37℃，5％CO2的细胞培养箱中继续孵育12h后，吸取制剂培养基，用PBS清洗培养板三次后加入含10％血清的培养基1mL继续培养24h后用倒置荧光显微镜对不同时间点(24h、48h、96h)基因诊断探针的胞内转染情况进行评价。
本实施例所测得的基因诊断探针在损伤H1299细胞的胞质转染情况。在损伤H1299胞质中，当脂质材料与基因诊断探针的质量比为20：1，其具有最佳转染效率；若继续增加脂质材料的比例，会对细胞造成明显的毒性，且随着时间的延长，转染效率逐渐提高。
实施例7考察基因诊断探针在损伤AECs II细胞中的诊断灵敏度
按照实施例1所述制备GCL@Y纳米制剂。将A549细胞以2×104/孔种于共聚焦皿中，待细胞铺满培养皿后加入包载基因诊断探针Y的制剂(2μg)，在37℃，5％CO2的细胞培养箱中继续孵育12h后，吸取制剂培养基，用PBS清洗培养板三次后加入含10％血清的培养基1mL继续培养24h后用激光共聚焦显微镜考察基因诊断探针在损伤AECs II细胞中的诊断灵敏度。
本实施例所测得的基因诊断探针的诊断灵敏度如图6所示。在正常AECs II细胞中基因诊断探针只显示红色，而在损伤AECs II胞内，基因诊断探针在胞质中出现了颜色变化，因此实现了对早期肺纤维化的精确诊断。
本发明利用两亲性嵌段磷脂或共聚物负载亲水和/或疏水性药物在临床及科学研究中得到了广泛的应用。同时，病理响应型释放的基团也在疾病治疗中得到了广泛的发展，如醚键、聚丙烯硫醚、酮缩硫醇、含硒基团、草酸酯、苯硼酸及苯硼酸酯衍生物、腙键、亚胺键、肟键、酰胺键、缩醛、缩酮、乙烯基醚、原酸酯等。本发明应用酮缩硫醇作为响应性功能基团通过与基因诊断探针共同作用达到诊疗协同逆转肺纤维化的目的。在上述实施例中，本发明利用DSPE-mPEG嵌段共聚物、敏感性脂质片段及大豆磷脂构建功能性脂质体负载具有疏水性或亲水性的药物，对于本领域技术人员来说，是清楚的。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种用于负载抗肺纤维化药物和/或基因诊断探针的纳米制剂载体，其特征在于：所述纳米制剂载体包括X-mPEG、磷脂P、胆固醇C及修饰有ROS响应的敏感脂质片段L；
其中X为疏水段，X选自DSPE，DOPE，DPPE，DMPE；
P为阳离子脂质，选自DMG-PEG2000、Dlin-MC3-DMA、DOTMA、DOP-DEDA、DC-Cholesterol、DOTAP、PEI及其衍生物、lipofectamine 2000；
修饰有ROS响应的敏感脂质片段L由疏水段L1、ROS敏感性基团L2和亲水段L3组成，疏水段L1选自DSPE、DOPE、DPPE，DMPE、PLGA、PLA、PCL、PAA、PLL、cholesterol；ROS敏感性基团L2选自硫醚键、聚丙烯硫醚、酮缩硫醇、含硒基团、草酸酯、苯硼酸及苯硼酸酯衍生物；亲水段L3选自聚乙二醇、环氧乙烯、环氧乙烷、泊洛沙姆、聚山梨酯80、乙二胺衍生物908、环糊精、聚山梨醇酯、聚乙烯醇。
2.根据权利要求1所述的纳米制剂载体，其特征在于：所述抗肺纤维化药物包括疏水性抗肺纤维化药物和/或亲水性抗肺纤维化药物、具有抗肺纤维化功能的细胞因子、抗体、蛋白、生物活性分子；
优选地，抗肺纤维化药物Q选自吡非尼酮、尼达尼布、糖皮质激素、环磷酰胺、D-青霉胺、N-乙酰半胱氨酸、VAY 736、马西替坦、利妥昔单抗、类固醇、GLPG 1690、磺胺甲基异噁唑、塞卡替尼、FG 3019、二甲胺四环素、硫酸吗啡、GKT 137831、重组人穿透素 2、BIBF 1120、齐留通、GC 1008、STX 100、阿奇霉素、IFN-γ、癸酸诺龙、波生坦、肾上腺皮质激素、霉酚酸酯、地纽福索、他唑巴坦、达那唑、氨曲南中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的纳米制剂载体，其特征在于：基因诊断探针Y由荧光基团Y1、Y2和敏感性连接桥Y3组成，Y1，Y2分别独立地选自四甲基罗丹明、磺基罗丹明G、香豆素、绿色荧光蛋白及其同系物、吲哚乙酰氨基荧光素、四氯荧光素琥珀酰亚胺酯、荧光素、异硫氰酸荧光素，及其经化学修饰或改造后的衍生物；Y3是基于II肺泡上皮细胞内氧化应激微环境的病理响应型连接桥，选自醚键、聚丙烯硫醚、酮缩硫醇、含硒基团、草酸酯、苯硼酸及苯硼酸酯衍生物、腙键、亚胺键、肟键、酰胺键、缩醛、缩酮、乙烯基醚、原酸酯。
4.一种纳米制剂，其特征在于：为权利要求1-3任一项所述的纳米制剂载体同时负载有抗肺纤维化药物Q和基因诊断探针Y，即GCL@QY；
或，为权利要求1-3任一项所述的纳米制剂载体负载基因诊断探针Y，即GCL@Y；
或，为权利要求1-3任一项所述的纳米制剂载体负载抗肺纤维化药物Q，GCL@Q。
5.根据权利要求4所述的纳米制剂，其特征在于：所述抗肺纤维化药物Q为吡非尼酮。
6.根据权利要求4所述的纳米制剂，其特征在于：
GCL@QY的制备方法包括：将抗肺纤维化药物Q溶于有机溶剂或水溶液， 将X-mPEG、磷脂P、胆固醇C及修饰有ROS响应的敏感脂质片段L溶于有机溶剂，通过薄膜分散法、注入法、超声波分散法或逆向蒸发法制备得到负载抗肺纤维化药物的纳米粒溶液；将基因诊断探针Y与负载抗肺纤维化药物的纳米粒溶液混合形成纳米制剂GCL@QY；
或，GCL@Y的制备方法包括：将X-mPEG、磷脂P、胆固醇C及修饰有ROS响应的敏感脂质片段L溶于有机溶剂，通过薄膜分散法、注入法、超声波分散法或逆向蒸发法制备得到纳米粒溶液；将基因诊断探针Y与纳米粒溶液混合形成纳米制剂GCL@Y；
或，GCL@Q的制备方法包括：将抗肺纤维化药物Q溶于有机溶剂或水溶液，X-mPEG、磷脂P、胆固醇C及修饰有ROS响应的敏感脂质片段L溶于有机溶剂，通过薄膜分散法、注入法、超声波分散法或逆向蒸发法制备得到的纳米制剂即为GCL@Q。
7.根据权利要求6所述的纳米制剂，其特征在于：X-mPEG中，其中X的分子量范围为500-50000，PEG的分子量范围为100-20000。
8.根据权利要求4-6任一项所述的纳米制剂，其特征在于：所述纳米制剂中，负载抗肺纤维化药物Q的载药量在0.1 %-20 %之间，基因诊断探针的负载量为100 %，纳米制剂的粒径大小在20 nm-1000 nm。
9.权利要求1-3任一项所述的纳米制剂载体在诊断/制备治疗肺纤维化相关疾病药物中的应用。
10.权利要求4-8任一项所述的纳米制剂在制备诊断/治疗肺纤维化相关疾病药物中的应用。
CN202110960824.3A 2021-08-20 2021-08-20 负载基因诊断探针和/或抗肺纤维化药物的纳米制剂及其制备方法 Pending CN113694213A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110960824.3A CN113694213A (zh) 2021-08-20 2021-08-20 负载基因诊断探针和/或抗肺纤维化药物的纳米制剂及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110960824.3A CN113694213A (zh) 2021-08-20 2021-08-20 负载基因诊断探针和/或抗肺纤维化药物的纳米制剂及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113694213A true CN113694213A (zh) 2021-11-26

Family

ID=78653690

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110960824.3A Pending CN113694213A (zh) 2021-08-20 2021-08-20 负载基因诊断探针和/或抗肺纤维化药物的纳米制剂及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113694213A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115245572A (zh) * 2022-07-28 2022-10-28 广州医科大学附属第三医院（广州重症孕产妇救治中心、广州柔济医院） 靶向抑制肝细胞pcsk9降低ldlc的仿生纳米颗粒材料及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005053642A1 (en) * 2003-12-04 2005-06-16 Pharmexa A/S Drug delivery vehicles and uses thereof
CN110339168A (zh) * 2019-07-26 2019-10-18 中国药科大学 一种负载抗肺纤维化药物和免疫调节剂的纳米制剂及其制备方法
CN110384681A (zh) * 2019-07-29 2019-10-29 中国药科大学 一种用于肺纤维化的纳米制剂及其制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005053642A1 (en) * 2003-12-04 2005-06-16 Pharmexa A/S Drug delivery vehicles and uses thereof
CN110339168A (zh) * 2019-07-26 2019-10-18 中国药科大学 一种负载抗肺纤维化药物和免疫调节剂的纳米制剂及其制备方法
CN110384681A (zh) * 2019-07-29 2019-10-29 中国药科大学 一种用于肺纤维化的纳米制剂及其制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JINCHAO LOU ET AL.: "Reactive Oxygen Species-Responsive Liposomes via Boronate-Caged Phosphatidylethanolamine", 《BIOCONJUGATE CHEM.》, vol. 31, no. 9, pages 2220 - 2230 *
YAWEI DU ET AL.: "Thioether Phosphatidylcholine Liposomes: A Novel ROS-Responsive Platform for Drug Delivery", 《ACS APPL. MATER. INTERFACES 》, vol. 11, no. 41, pages 37411 *
YUEJUN YAO ET AL.: "Reactive oxygen species (ROS)-responsive biomaterials mediate tissue microenvironments and tissue regeneration", 《 J. MATER. CHEM. B》, vol. 2019, no. 7, pages 5019 - 5037 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115245572A (zh) * 2022-07-28 2022-10-28 广州医科大学附属第三医院（广州重症孕产妇救治中心、广州柔济医院） 靶向抑制肝细胞pcsk9降低ldlc的仿生纳米颗粒材料及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Dymek et al. Liposomes as biocompatible and smart delivery systems–the current state
Meng et al. Loading of water-insoluble celastrol into niosome hydrogels for improved topical permeation and anti-psoriasis activity
Chen et al. Astragaloside IV-loaded nanoparticle-enriched hydrogel induces wound healing and anti-scar activity through topical delivery
RU2598627C2 (ru) Композиции на основе наночастиц с улучшенным проникновением через слизистые оболочки
US7521066B2 (en) Pharmaceutical and diagnostic compositions containing nanoparticles useful for treating targeted tissues and cells
Yamashita et al. A novel bubble liposome and ultrasound-mediated gene transfer to ocular surface: RC-1 cells in vitro and conjunctiva in vivo
CN114042147B (zh) 靶向调控线粒体呼吸链的微纳水凝胶微球及其制备与应用
Li et al. Milk-derived exosomes as a promising vehicle for oral delivery of hydrophilic biomacromolecule drugs
CN110403917A (zh) 一种人工外泌体、其制备方法及应用
CN113694213A (zh) 负载基因诊断探针和/或抗肺纤维化药物的纳米制剂及其制备方法
Zhang et al. GSH-triggered size increase of porphyrin-containing nanosystems for enhanced retention and photodynamic activity
Liu et al. Amplification of oxidative stress via intracellular ROS production and antioxidant consumption by two natural drug-encapsulated nanoagents for efficient anticancer therapy
Ding et al. Targeted delivery of LM22A-4 by cubosomes protects retinal ganglion cells in an experimental glaucoma model
Verma et al. Promising antifungal potential of engineered non-ionic surfactant-based vesicles: in vitro and in vivo studies
CN114903858A (zh) 载迷迭香酸纳米微粒在制备具有肾脏靶向功能的药物方面的应用
Ma et al. A potential polymeric nanogel system for effective delivery of chlorogenic acid to target collagen-induced arthritis
CN117100878A (zh) 一种抗炎载药缓释制剂、制备方法及其应用
Sherpa et al. Liposomal drug delivery system: Method of preparations and applications
Shi et al. Arginine-glycine-aspartic acid-anchored curcumin-based nanotherapeutics inhibit pyroptosis-induced cytokine release syndrome for in vivo and in vitro sepsis applications
CN110279660A (zh) 复方脂质乳膏及其制备方法
CN113171466A (zh) 一种用于治疗急性肺损伤的复合物及其制备方法与应用
Xiang et al. Construction of a novel amphiphilic peptide paclitaxel rod micelle: Demonstrating that the nano-delivery system shape can affect the cellular uptake efficiency of paclitaxel and improve the therapeutic efficacy for breast cancer
CN113975224B (zh) 一种用于表皮脱敏治疗的离子液体-反相胶束载药递释系统及其制备方法和应用
RU2803055C2 (ru) Лечение резистентного острого эндофтальмита с помощью квантовых точек
CN107115297A (zh) 一种负载双药的杂合前药纳米组合物及其制备方法与应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination