CN113679828A - 一种伤口清洗液及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于伤口清理技术领域，具体公开了一种伤口清洗液及其制备方法和应用，伤口清洗液包括菠萝蛋白酶和医药可接受的助剂，本发明的伤口清洗液，以菠萝蛋白酶为主要有效成分，充分利用菠萝蛋白酶强大的分解蛋白质的活性，将其用于分解血痂中的蛋白质成分，溶解血痂，可有效促进血痂的溶解脱落，提高术后清理血痂的效率，减少血痂清理的时间，且菠萝蛋白酶为纯天然植物蛋白酶，无高刺激性，对手术区域的伤口无不良影响。伤口清洗液应用于清理植发手术后植发区和取发区产生的血痂时，在不影响植发效果的基础上，可实现不对伤口造成任何不良影响，减少植发手术后头皮清洗的时间，有效提高清理血痂的效率。
Description
技术领域
本发明属于伤口清理技术领域，具体涉及一种伤口清洗液及其制备方法和应用。
背景技术
脱发问题是越来越严重的亚健康问题，脱发会严重地影响个人的心理状态和生活质量。由于科技发展，植发技术微创安全的方式受到了许多人的青睐，植发市场日益壮大。植发手术过程中植发区和取发区都会产生很多伤口，伤口在愈合过程中会产生许多血痂，后续血痂的清理存在很多不便，耗时长，目前尚缺少一种可以有效提高血痂清理效率的产品。
目前，用于清洗伤口的药品主要为：双氧水，碘液，酒精等，但这些清洗液虽然具有杀菌消毒的作用，均不具有加快血痂溶解，清洗植发术后血痂的作用。
菠萝蛋白酶是一种从菠萝水果皮，茎，芯等部分经生物技术制得的一种纯天然植物蛋白酶。菠萝蛋白酶是一种糖蛋白，由木糖、岩藻糖、甘露糖和N-乙酰葡糖胺组成。目前，菠萝蛋白酶主要用于食品加工、日化、医药、饲料、化妆品及香精等行业，尚未见菠萝蛋白酶外用存在不安全的报道，也无将其应用于的伤口的清洗中的相关报道。
发明内容
本发明提出一种伤口清洗液及其制备方法和应用，以解决现有技术中存在的一个或多个技术问题，至少提供一种有益的选择或创造条件。
为克服上述技术问题，本发明的第一方面提供了一种伤口清洗液。
具体的，一种伤口清洗液，所述伤口清洗液包括菠萝蛋白酶和医药可接受的助剂。
本发明的“菠萝蛋白酶”是指任何数量的目前可商购获得的菠萝蛋白酶粉末制剂，在菠萝蛋白酶分子中，巯基、氨基、色氨酸残基和组氨酸残基对于菠萝蛋白酶的催化活性起着关键作用。菠萝蛋白酶具有蛋白水解酶、非蛋白水解酶，且含有淀粉酶和纤维素酶的活性，因其由多种酶分子构成，故在催化底物上具有多样性，菠萝蛋白酶具有强大的分解蛋白质的能力，可以分解蛋白质、肽、脂和酰胺。伤口的血痂是由血小板和纤维蛋白凝结而成的物质，主要成分为蛋白质。本发明充分利用菠萝蛋白酶具有强大的分解蛋白质的能力的活性，将菠萝蛋白酶作为伤口清洗液的活性成分，可分解血痂中的蛋白质成分，溶解血痂，从而提高术后清血痂的效率，减少血痂清理的时间，且菠萝蛋白酶为纯天然植物蛋白酶，无高刺激性，对手术区域的伤口无不良影响。
作为上述方案的进一步改进，所述助剂包括渗透压调节剂和/或防腐剂。
具体的，渗透压调节剂主要作用是清洗液渗透压和pH值调节作用，使伤口清洗液的渗透压和pH值需要与人体相似，以实现无刺激性。防腐剂可以阻止微生物生长，保护伤品清洗液的质量，使其免受微生物污染，确保伤口清洗液的安全性。为保障伤口清洗液的品质，在其配方体系中添加一定量的防腐剂用于抑制微生物的生长和繁殖。
作为上述方案的进一步改进，所述渗透压调节剂的pH值为6-8。具体的，将pH维持在6-8范围可以使菠萝蛋白酶发挥最大活性，过大或达小渗透压调节剂的pH值，均不利于菠萝蛋白酶发挥活性的发挥。
优选的，所述渗透压调节剂包括磷酸盐缓冲溶液或氯化钠。
优选的，所述防腐剂选自对羟基苯乙酮。具体的，对羟基苯乙酮是一种纯天然来源的成分，具有促进防腐功效和广谱抗菌活性，适用于各种类型的皮肤和头发护理。本发明采用适量的对羟基苯乙酮作为防腐剂，以有效保证伤口清洗液的质量。
作为上述方案的进一步改进，当采用磷酸盐缓冲溶液作为渗透压调节剂，所述伤口清洗液的组分包括：
菠萝蛋白酶 10-50mg/mL；
磷酸盐缓冲溶液 0.01-0.02M。
优选的，所述伤口清洗液的组分包括：
作为上述方案的进一步改进，当采用氯化钠作为渗透压调节剂，所述伤口清洗液的组分包括：
菠萝蛋白酶 10-50mg/mL；
氯化钠 0.85-0.90mg/mL。
优选的，所述伤口清洗液的组分包括：
作为上述方案的进一步改进，所述磷酸盐缓冲溶液包括：Na2HPO4和/或KHPO4。
优选的，所述磷酸盐缓冲溶液还包括NaCl和KCl。磷酸盐缓冲盐溶液中可以起到pH调节作用的组分有Na2HPO4和KH2PO4。
优选的，0.01M磷酸盐缓冲盐溶液的成分及含量如下：
本发明的第二方面提供了一种伤口清洗液的制备方法。
具体的，一种伤口清洗液的制备方法，包括以下步骤：将菠萝蛋白酶加入助剂中混合，制得伤口清洗液。
优选的，所述伤口清洗液的制备方法，包括以下步骤：先配制渗透压调节剂，并在其中加入防腐剂和水，得混合助剂；再将菠萝蛋白酶加入所述混合助剂中，摇晃均匀，制得伤口清洗液。
更优选的，伤口清洗液采用具有干湿分区放置的容器储存，将粉末状的菠萝蛋白酶置于干区，其它液态原料如渗透压调节剂、防腐剂等置于湿区，分开储存。并将其储存于干燥的环境中，粉末更容易保存，不容易滋生细菌，可以减少防腐剂的用量，安全性更高，且干燥条件有利于酶活性的维持，因此可以有效地保证伤口清洗液的作用。使用时，将粉末状与液态原料充分混合，即获得伤口清洗液。
本发明的第三方面提供了一种伤口清洗液的应用。
具体的，所述伤口清洗液在清理血痂中的应用。
本发明的上述技术方案相对于现有技术，至少具有如下技术效果或优点：
本发明的伤口清洗液，以菠萝蛋白酶为主要有效成分，充分利用菠萝蛋白酶强大的分解蛋白质的活性，将其用于分解血痂中的蛋白质成分，溶解血痂，可有效促进血痂的溶解脱落，提高术后清理血痂的效率，减少血痂清理的时间，且菠萝蛋白酶为纯天然植物蛋白酶，无高刺激性，对手术区域的伤口无不良影响。
本发明的伤口清洗液应用于清理植发手术后植发区和取发区产生的血痂时，在不影响植发效果的基础上，可实现不对伤口造成任何不良影响，减少植发手术后头皮清洗的时间，有效提高清理血痂的效率。
附图说明
图1为实施例2用牛奶测菠萝蛋白酶活性的结果图；
图2为实施例4大鼠血痂溶解实验的结果图；
图3为实施例5大鼠血痂清理步骤图；
图4为实施例5大鼠血痂清理结果图；
图5为实施例6伤口清洗液混合步骤图；
图6为实施例6伤口清洗液使用步骤图；
图7为实施例6伤口清洗液使用结果图。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明进行具体描述，以便于所属技术领域的人员对本发明的理解，有必要在此特别指出的是，实施例只是用于对本发明做进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员，根据上述发明内容对本发明作出的非本质性的改进和调整，应仍属于本发明的保护范围，同时，下述所提及的原料未详细说明的，均为市售产品，未详细提及的工艺步骤或制备方法均为本领域技术人员所知晓的工艺步骤或制备方法。
下述实施例中的实验动物为SD大鼠，购自于广东省医学实验动物中心；菠萝蛋白酶分别购买于中国索莱宝公司(型号B8290)，中国麦克林公司(型号B832358)，中国源叶生物公司(型号S10009)；酪蛋白，购买于中国酷来搏公司(型号CC3181)。
实施例1
本实施例采用酪蛋白测定菠萝蛋白酶的酶活性，具体如下：
蛋白酶在一定条件下不仅能够水解蛋白质中的肽键，也能够水解酰胺键和酯键，因此可用蛋白质或人工合成的酰胺及酯类化合物作为底物来测试蛋白酶的活力。本实施例选用酪蛋白为底物，测定蛋白酶水解肽键的活力。酪蛋白经菠萝蛋白酶作用后降解成酪氨酸，通过紫外-可见分光光度计测定溶液在275nm波长下的吸光度判断酪氨酸的生成量，从而测试酶的活力。其具体步骤如下：
(1)配制不同浓度不同公司的菠萝蛋白酶溶液：取相应量的菠萝蛋白酶粉末溶解于磷酸盐缓冲溶液(PBS)中。
(2)配制50mg/mL的酪蛋白溶液：准确称取酪蛋白，精确至0.001g，用适量0.5mol/LNaOH溶液湿润后，加入相应pH磷酸缓冲溶液少许，在沸水浴中边加热边搅拌，直至完全溶解，冷却至室温，加同种磷酸缓冲溶液至相当于欲配溶液总体积3/4，用0.5mol/L HCl溶液调节至所需pH后，转入相应容积的容量瓶中，用同种磷酸缓冲溶液稀释至刻度，于冰箱内贮存。
(3)取空白96孔板，在相应孔中依次加入所需溶液，每个样品三个复孔，并在37℃反应10min，反应后通过紫外-可见分光光度计测定溶液在275nm波长下的吸光度。
表1：不同浓度的菠萝蛋白酶溶液在275nm波长下的吸光度
由表1可知：实验组与对照组相比，实验组的溶液吸光度明显增大，说明菠萝蛋白酶具有分解蛋白质的活性，且浓度越大效果越明显。
表2：不同型号的菠萝蛋白酶溶液在275nm波长下的吸光度
由表2可知：实验组与对照组相比，实验组的溶液吸光度明显增大，说明三家公司的菠萝蛋白酶都可以明显地水解蛋白，都具有较高的酶活性。
实施例2
本实施例采用牛奶测定菠萝蛋白酶的酶活性，具体如下：
牛奶中蛋白质含量丰富，主要包括酪蛋白、乳白蛋白、乳球蛋白、乳铁蛋白和一些具重要生理功能的酶类，其中酪蛋白占蛋白总量的78.8％。蛋白酶可将牛奶中的蛋白质分解成分子量较小的肽类或氨基酸。因此可通过牛奶澄清度的变化直观地判断蛋白酶的活性。其具体步骤如下：
(1)配制菠萝蛋白酶溶液：菠萝蛋白酶粉末溶解于PBS中，配成20mg/mL的菠萝蛋白酶溶液，不同样品的溶液组成见表3。
(2)配置5％牛奶：脱脂奶粉溶解于PBS中，配成5％牛奶。
(3)取空白六孔板，按图1顺序，分别加入等体积的不同公司的菠萝蛋白酶溶液和PBS，每个孔中加入等体积的牛奶，37℃反应5min。
表3：不同样品的溶液组成
| 组别 | 样品编号 | 加入溶液 | 菠萝蛋白酶型号 |
| 对照组 | 3-0 | PBS+5％牛奶 | —— |
| 实验组 | 3-1 | 20mg/mL菠萝蛋白酶溶液+5％牛奶 | B832358 |
| 实验组 | 3-2 | 20mg/mL菠萝蛋白酶溶液+5％牛奶 | B8290 |
| 实验组 | 3-3 | 20mg/mL菠萝蛋白酶溶液+5％牛奶 | S10009 |
如图1所示，图中玻璃器皿的编号0、1、2、3分别对应于样品编号3-0、3-1、3-2、3-3，未编号的玻璃器皿为用于对比的空玻璃器皿。由图1可知：随着时间的延长，加入菠萝蛋白酶的液体均逐渐变清，说明三家公司的菠萝蛋白酶都可以明显地水解蛋白，都具有较高的酶活性。
实施例3
本实施例建立大鼠模拟植发创面模型，该模型建立的方法，具体包括以下步骤：
(1)用1％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉SD大鼠；
(2)用适量生理盐水皮内注射SD大鼠；
(3)用20mL注射器的针头穿刺大鼠背部，模拟植发创面；
(4)等待创面结痂用于后续实验。
实施例4
本实施例进行大鼠血痂溶解实验，其具体步骤如下：
(1)建立大鼠模拟植发创面模型三天后，取大鼠背部结痂区域的血痂；
(2)取形状大小相似的血痂分别作为对照组和实验组；
(3)血痂在37℃下用溶液浸泡10min，对照组的血痂用PBS浸泡，实验组的血痂用20mg/mL菠萝蛋白酶溶液浸泡，溶液的pH值为7。
(4)10min后观察血痂的溶解程度。
如图2所示，实验组与对照组相比，实验组的血痂在浸泡后明显变得透明软化，说明菠萝蛋白酶具有较好的溶解血痂作用。
实施例5
本实施例进行大鼠血痂清理实验，在同一只大鼠上，同时用生理盐水和菠萝蛋白酶溶液处理血痂，对比血痂的清理效果，其具体步骤如下：
(1)用1％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉SD大鼠；
(2)用适量生理盐水皮内注射SD大鼠；
(3)用20mL注射器的针头穿刺大鼠背部，模拟植发创面；
(4)三天后取大鼠背部结痂区域的血痂；
(5)将无菌纱布覆盖在创面上；
(6)将生理盐水或者20mg/mL菠萝蛋白酶溶液喷洒在纱布上使其浸湿，如图3所示，静置10min后，用纱布搽拭创面。
如图4所示，用菠萝蛋白酶溶液与生理盐水处理相比，经菠萝蛋白酶处理后，血痂更容易清理干净。
实施例6
本发明的伤口清洗液应用于清理植发手术后的血痂，具体步骤如下：
(1)采用可干湿分区储存，并带压力泵的容器，使用前用力按下泵头，用力摇晃，使粉末状的菠萝蛋白酶与液态的PBS、防腐剂和水充分混合，得伤口清洗液，伤口清洗液的pH值为7，如图5所示；
(2)在头皮上放置无菌纱布，将伤口清洗液均匀喷洒在纱布上使其充分浸湿，如图6所示；静置10min后用纱布搽拭头皮，并用温水清洗头皮。
如图7所示，使用伤口清洗液清理后的头皮，血痂基本溶解脱落，且清理过程简单，时间短。
实施例7
本实施例进行大鼠血痂溶解实验，本实施与实施例4相比不同之处在于：本实施例溶解血痂的溶液采用10mg/mL菠萝蛋白酶溶液浸泡，其他实验步骤与参数与实施例4相同。
实施例8
本实施例进行大鼠血痂溶解实验，本实施与实施例4相比不同之处在于：本实施例溶解血痂的溶液采用50mg/mL菠萝蛋白酶溶液浸泡，其他实验步骤与参数与实施例4相同。
实施例9
本实施例进行大鼠血痂溶解实验，本实施与实施例4相比不同之处在于：本实施例溶解血痂的溶液采用5mg/mL菠萝蛋白酶溶液浸泡，其他实验步骤与参数与实施例4相同。
实施例10
本实施例进行大鼠血痂溶解实验，本实施与实施例4相比不同之处在于：本实施例溶解血痂的溶液采用55mg/mL菠萝蛋白酶溶液浸泡，其他实验步骤与参数与实施例4相同。
实施例11
本实施例进行大鼠血痂溶解实验，本实施与实施例4相比不同之处在于：本实施例溶解血痂的溶液的pH值为6，其他实验步骤与参数与实施例4相同。
实施例12
本实施例进行大鼠血痂溶解实验，本实施与实施例4相比不同之处在于：本实施例溶解血痂的溶液的pH值为8，其他实验步骤与参数与实施例4相同。
实施例13
本实施例进行大鼠血痂溶解实验，本实施与实施例4相比不同之处在于：本实施例溶解血痂的溶液的pH值为5.5，其他实验步骤与参数与实施例4相同。
实施例14
本实施例进行大鼠血痂溶解实验，本实施与实施例4相比不同之处在于：本实施例溶解血痂的溶液的pH值为8.5，其他实验步骤与参数与实施例4相同。
血痂溶解效果评价：
将实施例4与实施例7-14的血痂溶解实验结果进行效果评价，并将评价结果划分为以下四个溶解等级：1级：血痂未软化，溶解效果较差；2级：血痂少部分软化，溶解效果一般；3级：血痂大部分软化，溶解效果较好；4级：血痂变得透明软化，溶解效果好，其效果评价结果如表4所示。
表4：实施例4与实施例7-14的血痂溶解实验结果对比表
| 血痂 | pH | 浓度(mg/mL) | 溶解级别 |
| 实施例4 | 7 | 20 | 4级 |
| 实施例7 | 7 | 10 | 3级 |
| 实施例8 | 7 | 50 | 3级 |
| 实施例9 | 7 | 5 | 1级 |
| 实施例10 | 7 | 55 | 2级 |
| 实施例11 | 6 | 20 | 3级 |
| 实施例12 | 8 | 20 | 3级 |
| 实施例13 | 5.5 | 20 | 2级 |
| 实施例14 | 8.5 | 20 | 1级 |
显然，上述实施例仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。
Claims (10)
1.一种伤口清洗液，其特征在于，所述伤口清洗液包括菠萝蛋白酶和医药可接受的助剂。
2.根据权利要求2所述的伤口清洗液，其特征在于，所述助剂包括渗透压调节剂和/或防腐剂。
3.根据权利要求3所述的伤口清洗液，其特征在于，所述渗透压调节剂的pH值为6-8。
4.根据权利要求2或3所述的伤口清洗液，其特征在于，所述渗透压调节剂包括磷酸盐缓冲溶液或氯化钠。
5.根据权利要求4所述的伤口清洗液，其特征在于，所述磷酸盐缓冲溶液包括：Na2HPO4和/或KHPO4。
6.根据权利要求2所述的伤口清洗液，其特征在于，所述防腐剂选自对羟基苯乙酮。
7.根据权利要求4所述的伤口清洗液，其特征在于，所述伤口清洗液的组分包括：
菠萝蛋白酶 10-50mg/mL；
磷酸盐缓冲溶液 0.01-0.02M。
8.根据权利要求4所述的伤口清洗液，其特征在于，所述伤口清洗液的组分包括：
菠萝蛋白酶 10-50mg/mL；
氯化钠 0.85-0.90mg/mL。
9.权利要求1至8所述的伤口清洗液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将菠萝蛋白酶加入助剂中混合，制得伤口清洗液。
10.权利要求1至8所述的伤口清洗液在清理血痂中的应用。
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