CN113662978A - 一种治疗湿疹的青蒿精油、白茶精油及它们的组合物 - Google Patents

一种治疗湿疹的青蒿精油、白茶精油及它们的组合物 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种治疗湿疹的青蒿精油、白茶精油及它们的组合物。所述青蒿精油采用以下方法制备：采集新鲜青蒿嫩苗，取叶子，干燥，切成碎段，浸泡后开始蒸馏，料液比为1:(0.5‑2)，蒸馏时间为60‑90min。所述白茶精油采用以下方法制备：采集新鲜白茶嫩芽，于背光的室内在温度30‑35℃，湿度50％‑60％的条件下萎凋至减重率为40％‑60％，干燥，超临界CO2流体萃取。本发明证实所述青蒿精油、白茶精油及它们的组合物对皮肤湿疹模型小鼠的红斑、水肿、瘙痒等症状具有显著的缓解作用，能明显减轻小鼠耳肿胀程度，降低脾脏指数和血清炎症因子水平。

Description

一种治疗湿疹的青蒿精油、白茶精油及它们的组合物
技术领域
本发明涉及植物的精油提取，具体地说，涉及一种治疗湿疹的青蒿精油、白茶精油及它们的组合物。
背景技术
湿疹是一种具有明显渗出倾向的常见皮肤炎症反应，表现为红斑、丘疹、水疱、渗出(急性期)，浸润和肥厚(慢性期)，瘙痒剧烈，容易反复发作。现代医学认为湿疹是遗传、免疫、血液循环障碍、内分泌变化、神经因素等内因与环境、饮食、感染、药物等外因共同作用的结果。临床外用治疗湿疹主要采用糖皮质激素制剂、免疫抑制剂、抗菌药及止痒剂等西药，但存在具有依赖性、容易复发、副作用较大等弊端。
精油是从植物的叶子、花朵、种子、果实、根部、树皮、树脂、木心等部位以水蒸汽蒸馏法、有机溶剂萃取法、CO2超临界萃取法、冷压榨法、超声波法、酶提取法、微波萃取法、结晶法等方法提炼出来的，具有高浓度芳香和挥发性的物质。在医药、食品保健和化妆品行业被广泛应用。由于是天然产物，作为医药或化妆品具有不良反应少，健康安全的优势。
青蒿精油是从黄花蒿(Artemisia annua L.)中提取得到的挥发油。现代研究已证明青蒿挥发油具有抗菌，抗癌，抗病毒，抗炎，驱蚊，杀虫，抗氧化等活性。主要用途有治疗痤疮，抑制流感病毒，消炎、抗溃疡，局部刺激和强心，解热、止咳、祛痰、平喘和镇痛，并能作为保健食品，还可用于驱蚊虫。
白茶是中国茶类中的特殊珍品，属微发酵茶，其通过特殊工艺，将茶(Camelliasinensis(L.)O.Ktze.)中白茶树的叶和芽萎凋、烘焙(或阴干)、拣剔、复火，制作而成。白茶精油是从白茶茶叶和芽中提取得到的挥发油。目前关于白茶精油的功效的研究较少。
专利文献CN102883732A公开了一种治疗明显干燥的皮肤的方法，所述方法包括向所述明显干燥的皮肤局部地施用包含青蒿提取物和胺化合物组合物，其中所述明显干燥的皮肤为干燥病皮肤，其中所述皮肤以湿疹疾病状态为特征。一种特别合适的青蒿提取物为青蒿的水-二醇提取物并包含水和丁二醇。
专利文献CN102258094B公开了一种含天然植物或天然植物提取物的茶饮品，由重量百分含量的以下物质组成：50％～80％曼地亚红豆杉针叶、10％～20％含羞草全草、10％～30％绿茶叶。或者由曼地亚红豆杉针叶提取物45％～70％、含羞草全草提取物10％～20％、绿茶叶提取物20％～35％组成。该茶饮品不仅具有清热解毒、抗菌杀菌、祛火败毒、解表祛风、活血化瘀，除菌消炎、止痒祛癣的功效，还能有效预防和治疗牛皮癣、湿疹及皮肤瘙痒。专利文献CN105360389A公开了一种用于敛脾精凉茶的配方，由生地、苍术、绿茶，菊花，槡椹，枸杞子，五味子，桂园，山楂组成，是用于燥湿养阴凉茶的配方，主要是慢性肾炎肾病已久，肾阴虚而湿邪阻滞不化，出现阴虚挟湿的症状，腰膝酸软、口渴咽干、盗汗、潮热、苔黄厚腻、水肿、蛋白尿；慢性湿疹。
而目前未见如本申请防治皮肤湿疹效果显著的青蒿精油、白茶精油及它们的组合物产品。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种治疗湿疹的青蒿精油、白茶精油及它们的组合物，制备方法，以及用途。
第一方面，本发明提供了一种青蒿精油在制备治疗湿疹的药物中的应用，所述青蒿精油是采用以下方法制备的：采集新鲜青蒿嫩苗，取叶子，干燥，切成碎段，放入蒸馏设备，加入蒸馏水，料液比为1:(0.5-2)，浸泡后开始蒸馏，蒸馏时间为60-90min，得精油纯露混合液，用分离器分离，得青蒿精油。
优选地，所述干燥的方式为60℃以下干燥2-5小时，所述碎段的大小为4-6mm，所述浸泡的时间为1-2h。
优选地，所述蒸馏的参数为：萃取温度90-96℃，冷凝管温度15-25℃。
优选地，所述青蒿其产地为河南。
第二方面，本发明提供了一种白茶精油在制备治疗湿疹的药物中的应用，所述白茶精油是采用以下方法制备的：采集新鲜白茶的嫩芽，在背光的室内整齐摊开至厚度为3-5cm，温度控制在30-35℃，湿度为50％-60％，萎凋至减重率为50％-60％，之后置入烘干机100-120℃烘干20-40min；将白茶干燥叶片粉碎，超临界CO2流体萃取，得白茶精油。
优选地，所述超临界CO2流体萃取的参数为：CO2流体流速0.5-2L/min，萃取温度42～50℃，萃取压力20～25MPa，分离温度50～60℃，分离压力4.5～5.5MPa，萃取时间1.5～2.5h。
优选地，所述超临界CO2流体萃取在开始时预浸润5-20min。
优选地，所述白茶干燥叶片被粉碎成10～20目粗粉。
第三方面，本发明提供了一种植物精油组合物在制备治疗湿疹的药物中的应用，所述植物精油组合物含有如上任一所述的青蒿精油和如上任一所述的白茶精油。
优选地，所述青蒿精油和白茶精油的比例为1:(0.01-20)。
本文中所述的青蒿精油是从菊科植物黄花蒿Artemisia annua L.中提取得到。所述的白茶精油是从山茶科植物毛白茶Camellia sinensis(L.)O.Ktze.提取得到。
本发明优点在于：
1、本发明发现青蒿精油和白茶精油对于皮肤湿疹模型小鼠的红斑、水肿、瘙痒等症状具有显著的缓解作用，能明显减轻小鼠耳肿胀程度，降低脾脏指数和血清炎症因子水平。
2、本发明发现青蒿精油、白茶精油的制备方法对于精油抗湿疹疗效均有一定的影响，在本发明的参数条件下制备得到的青蒿精油、白茶精油对于湿疹的疗效有所显著提升。
3、本发明考察了青蒿精油和白茶精油组合物对于皮肤湿疹模型小鼠的影响，发现给药后基本能完全改善疾病症状，效果十分突出。
附图说明
图1：青蒿精油的GC-MS分析的总离子流图。
图2：白茶精油的GC-MS分析的总离子流图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实施例1 本发明青蒿精油及其制备(一)
以河南地区的青蒿嫩苗为材料。
仪器：水封口式蒸馏釜，其设备构成是：
蒸馏釜：整体外观为圆柱形，球冠式釜底，上部开口为加料口；
鹅颈管：带有蒸馏釜上口的圆锥形盖子，连接冷凝器；
冷凝器：为铝质列管冷凝器，使蒸汽冷凝和冷却馏出液；
油水分离器：用铝材做成，既是接受馏出液的容器，又是精油与水的分离器。
提取精油工艺流程为：投料→加水→蒸馏→冷却→油水分离→精油→包装。
具体步骤如下：
采集河南地区5月份的新鲜青蒿嫩苗，除去茎及无用部位，将叶子洗净，滤干水分，置于电热恒温干燥箱中进行干燥，温度控制在60度以下，干燥时间为3h。用切割机将干燥青蒿切成4-6mm碎段，便于精油分子的挥发。将粉粹的青蒿叶置于蒸馏内槽中，加入等体积的屈臣氏蒸馏水，注于外蒸馏槽中，并将蒸馏槽置放于水槽之上，密封外蒸馏槽，浸泡1.5h后进行蒸馏。萃取温度90℃，冷凝管温度15-25℃，蒸馏时间75min，得精油纯露混合液，用分离器分离，得青蒿精油。
实施例2 本发明青蒿精油及其制备(二)
材料和仪器同实施例1。
具体步骤如下：
采集河南地区5月份的新鲜青蒿嫩苗，除去茎及无用部位，将叶子洗净，滤干水分，置于电热恒温干燥箱中进行干燥，温度控制在60度以下，干燥时间为3h。用切割机将干燥青蒿切成4-6mm碎段，便于精油分子的挥发。将粉粹的青蒿叶置于蒸馏内槽中，加入0.8倍体积的屈臣氏蒸馏水，注于外蒸馏槽中，并将蒸馏槽置放于水槽之上，密封外蒸馏槽，浸泡1.5h后进行蒸馏。萃取温度90℃，冷凝管温度15-25℃，蒸馏时间75min，得精油纯露混合液，用分离器分离，得青蒿精油。
实施例3 本发明青蒿精油及其制备(三)
材料和仪器同实施例1。
具体步骤如下：
采集河南地区5月份的新鲜青蒿嫩苗，除去茎及无用部位，将叶子洗净，滤干水分，置于电热恒温干燥箱中进行干燥，温度控制在60度以下，干燥时间为3h。用切割机将干燥青蒿切成4-6mm碎段，便于精油分子的挥发。将粉粹的青蒿叶置于蒸馏内槽中，加入2倍体积的屈臣氏蒸馏水，注于外蒸馏槽中，并将蒸馏槽置放于水槽之上，密封外蒸馏槽，浸泡1.5h后进行蒸馏。萃取温度90℃，冷凝管温度15-25℃，蒸馏时间75min，得精油纯露混合液，用分离器分离，得青蒿精油。
实施例4 本发明青蒿精油及其制备(四)
材料和仪器同实施例1。
具体步骤如下：
采集河南地区5月份的新鲜青蒿嫩苗，除去茎及无用部位，将叶子洗净，滤干水分，置于电热恒温干燥箱中进行干燥，温度控制在60度以下，干燥时间为3h。用切割机将干燥青蒿切成4-6mm碎段，便于精油分子的挥发。将粉粹的青蒿叶置于蒸馏内槽中，加入等体积的屈臣氏蒸馏水，注于外蒸馏槽中，并将蒸馏槽置放于水槽之上，密封外蒸馏槽，浸泡1.5h后进行蒸馏。萃取温度90℃，冷凝管温度15-25℃，蒸馏时间60min，得精油纯露混合液，用分离器分离，得青蒿精油。
实施例5 本发明青蒿精油及其制备(五)
材料和仪器同实施例1。
具体步骤如下：
采集河南地区5月份的新鲜青蒿嫩苗，除去茎及无用部位，将叶子洗净，滤干水分，置于电热恒温干燥箱中进行干燥，温度控制在60度以下，干燥时间为3h。用切割机将干燥青蒿切成4-6mm碎段，便于精油分子的挥发。将粉粹的青蒿叶置于蒸馏内槽中，加入等体积的屈臣氏蒸馏水，注于外蒸馏槽中，并将蒸馏槽置放于水槽之上，密封外蒸馏槽，浸泡1.5h后进行蒸馏。萃取温度90℃，冷凝管温度15-25℃，蒸馏时间90min，得精油纯露混合液，用分离器分离，得青蒿精油。
实施例6 本发明青蒿精油及其制备(六)
材料和仪器同实施例1。
具体步骤如下：
采集河南地区5月份的新鲜青蒿嫩苗，除去茎及无用部位，将叶子洗净，滤干水分，置于电热恒温干燥箱中进行干燥，温度控制在60度以下，干燥时间为5h。用切割机将干燥青蒿切成4-6mm碎段，便于精油分子的挥发。将粉粹的青蒿叶置于蒸馏内槽中，加入等体积的屈臣氏蒸馏水，注于外蒸馏槽中，并将蒸馏槽置放于水槽之上，密封外蒸馏槽，浸泡2h后进行蒸馏。萃取温度90℃，冷凝管温度15-25℃，蒸馏时间75min，得精油纯露混合液，用分离器分离，得青蒿精油。
实施例7 本发明青蒿精油及其制备(七)
材料和仪器同实施例1。
具体步骤如下：
采集河南地区5月份的新鲜青蒿嫩苗，除去茎及无用部位，将叶子洗净，滤干水分，置于电热恒温干燥箱中进行干燥，温度控制在60度以下，干燥时间为2h。用切割机将干燥青蒿切成4-6mm碎段，便于精油分子的挥发。将粉粹的青蒿叶置于蒸馏内槽中，加入等体积的屈臣氏蒸馏水，注于外蒸馏槽中，并将蒸馏槽置放于水槽之上，密封外蒸馏槽，浸泡1h后进行蒸馏。萃取温度96℃，冷凝管温度15-25℃，蒸馏时间75min，得精油纯露混合液，用分离器分离，得青蒿精油。
实施例8 本发明白茶精油及其制备(一)
以云南普洱地区大叶种白茶为材料。
仪器：主要设备是萃取器，由
Figure BDA0003289658010000051
不锈钢管制成，增压缓冲并为双层结构，内筒为不锈钢，外筒为黄铜，互相紧密配合。其设备构成包括：CO2钢瓶，干燥器，冷凝冰水浴，柱塞泵，增压缓冲瓶，恒温槽，预热管，.萃取器，冰水烧杯，沉积分离器，缓冲器，湿式流量计。
具体步骤如下：
在清晨6点到9点，手工采摘大小相当的一心二嫩叶，在背光的室内整齐摊开至厚度为3-5cm，温度控制在35℃，湿度为55％-60％，萎凋至减重率为50％-55％，之后置入烘干机110℃干燥30min。后将白茶叶片粉碎过10目筛得粗粉，用砂布袋装好已秤量好的茶叶粗粉，并装入萃取器中，封好顶盖。开启恒温槽电源。打开二氧化碳钢瓶阀门，使气体沿管线经过干燥器，冷却冷凝器(浸在冰水浴中)，柱塞泵，进入增压缓冲瓶。待增压缓冲瓶的压力大大超过实验压力后，打开阀门V1，使萃取器升压到实验压力，关阀门V1，让茶叶预浸润10min，超临界CO2流体萃取。CO2流体流速1L/min，萃取温度50℃，萃取压力25MPa，分离温度50℃，分离压力5.0MPa，萃取时间2h，得白茶精油。
实施例9 本发明白茶精油及其制备(二)
材料和仪器同实施例8。
具体步骤如下：
在清晨6点到9点，手工采摘大小相当的一心二嫩叶，在背光的室内整齐摊开至厚度为3-5cm，温度控制在35℃，湿度为55％-60％，萎凋至减重率为55％-60％，之后置入烘干机110℃干燥30min。后将白茶叶片粉碎过10目筛得粗粉，用砂布袋装好已秤量好的茶叶粗粉，并装入萃取器中，封好顶盖。开启恒温槽电源。打开二氧化碳钢瓶阀门，使气体沿管线经过干燥器，冷却冷凝器(浸在冰水浴中)，柱塞泵，进入增压缓冲瓶。待增压缓冲瓶的压力大大超过实验压力后，打开阀门V1，使萃取器升压到实验压力，关阀门V1，让茶叶预浸润10min，超临界CO2流体萃取。CO2流体流速1L/min，萃取温度50℃，萃取压力25MPa，分离温度50℃，分离压力5.0MPa，萃取时间2h，得白茶精油。
实施例10 本发明白茶精油及其制备(三)
材料和仪器同实施例8。
具体步骤如下：
在清晨6点到9点，手工采摘大小相当的一心二嫩叶，在背光的室内整齐摊开至厚度为3-5cm，温度控制在30℃，湿度为50％-55％，萎凋至减重率为50％-55％，之后置入烘干机120℃干燥20min。后将白茶叶片粉碎过10目筛得粗粉，用砂布袋装好已秤量好的茶叶粗粉，并装入萃取器中，封好顶盖。开启恒温槽电源。打开二氧化碳钢瓶阀门，使气体沿管线经过干燥器，冷却冷凝器(浸在冰水浴中)，柱塞泵，进入增压缓冲瓶。待增压缓冲瓶的压力大大超过实验压力后，打开阀门V1，使萃取器升压到实验压力，关阀门V1，让茶叶预浸润5min，超临界CO2流体萃取。CO2流体流速2L/min，萃取温度42℃，萃取压力20MPa，分离温度60℃，分离压力5.5MPa，萃取时间1.5h，得白茶精油。
实施例11 本发明白茶精油及其制备(四)
材料和仪器同实施例8。
具体步骤如下：
在清晨6点到9点，手工采摘大小相当的一心二嫩叶，在背光的室内整齐摊开至厚度为3-5cm，温度控制在32℃，湿度为50％-55％，萎凋至减重率为50％-55％，之后置入烘干机110℃干燥40min。后将白茶叶片粉碎过10目筛得粗粉，用砂布袋装好已秤量好的茶叶粗粉，并装入萃取器中，封好顶盖。开启恒温槽电源。打开二氧化碳钢瓶阀门，使气体沿管线经过干燥器，冷却冷凝器(浸在冰水浴中)，柱塞泵，进入增压缓冲瓶。待增压缓冲瓶的压力大大超过实验压力后，打开阀门V1，使萃取器升压到实验压力，关阀门V1，让茶叶预浸润20min，超临界CO2流体萃取。CO2流体流速1.5L/min，萃取温度42℃，萃取压力20MPa，分离温度60℃，分离压力5.5MPa，萃取时间1.5h，得白茶精油。
对比例1 青蒿精油对照及其制备
材料和仪器同实施例1。
具体步骤如下：
采集河南地区5月份的新鲜青蒿嫩苗，除去茎及无用部位，将叶子洗净，滤干水分，置于电热恒温干燥箱中进行干燥，温度控制在60度以下，干燥时间为3h。用切割机将干燥青蒿切成4-6mm碎段，便于精油分子的挥发。将粉粹的青蒿叶置于蒸馏内槽中，加入3倍体积的屈臣氏蒸馏水，注于外蒸馏槽中，并将蒸馏槽置放于水槽之上，密封外蒸馏槽，浸泡1.5h后进行蒸馏。萃取温度90℃，冷凝管温度15-25℃，蒸馏时间75min，得精油纯露混合液，用分离器分离，得青蒿精油。
对比例2 白茶精油对照及其制备
材料和仪器同实施例8。
具体步骤如下：
在清晨6点到9点，手工采摘大小相当的一心二嫩叶，在背光的室内整齐摊开至厚度为3-5cm，温度控制在35℃，湿度为55％-60％，萎凋至减重率为65％-70％，之后置入烘干机110℃干燥30min。后将白茶叶片粉碎过10目筛得粗粉，用砂布袋装好已秤量好的茶叶粗粉，并装入萃取器中，封好顶盖。开启恒温槽电源。打开二氧化碳钢瓶阀门，使气体沿管线经过干燥器，冷却冷凝器(浸在冰水浴中)，柱塞泵，进入增压缓冲瓶。待增压缓冲瓶的压力大大超过实验压力后，打开阀门V1，使萃取器升压到实验压力，关阀门V1，让茶叶预浸润10min，超临界CO2流体萃取。CO2流体流速1L/min，萃取温度50℃，萃取压力25MPa，分离温度50℃，分离压力5.0MPa，萃取时间2h，得白茶精油。
实施例12 青蒿精油的GC-MS分析
一、试剂与材料
实施例1制备的青蒿精油。
乙醚，分析纯。
二、实验仪器
Agilent 7000B三重四级杆气相质谱仪(美国安捷伦公司)。
三、成分分析
1GC-MS分析条件
(1)色谱条件色谱柱：HP-5ms(30m*0.25mm*0.25μm)；载气：高纯He；流速：1ml·min-1；进样口温度：250℃；分流比：10:1；升温程序：起始温度60℃，保持3min，然后以5℃/min的速度升温至300℃，保持20min。
(2)质谱条件模式：全扫描；转接口温度：250℃；离子源温度：230℃；电子能量：-70ev；扫描范围：30-400m/e；溶剂延迟：4min。
2供试品溶液的制备
精密吸取1μl精油样品，加乙醚定容至1ml制成供试品溶液，即得。
3测定法
精密吸取供试品溶液1μl，注入气相质谱仪，测定，即得。
4数据分析
将得到的样品GC/MS原始文件通过MassHunter Workstation Software(VersionB.04.00)进行分析得到各成分相应的保留时间及峰面积百分比，并通过数据库(NIST11.0)比对得到定性鉴别结果。
5测定结果
总离子流图如图1所示。主要成分分析结果表1所示。
表1 青蒿精油化学成分GC-MS分析结果
Figure BDA0003289658010000081
Figure BDA0003289658010000091
实施例13 白茶精油的GC-MS分析
一、试剂与材料
实施例8制备的白茶精油。
乙醚(分析纯)。
二、实验仪器
Agilent 7000B三重四级杆气相质谱仪(美国安捷伦公司)。
三、成分分析
1 GC-MS分析条件
(1)色谱条件色谱柱：HP-5ms(30m*0.25mm*0.25μm)；载气：高纯He；流速：1ml·min-1；进样口温度：250℃；分流比：10:1；升温程序：起始温度60℃，保持3min，然后以5℃/min的速度升温至300℃，保持20min。
(2)质谱条件模式：全扫描；转接口温度：250℃；离子源温度：230℃；电子能量：-70ev；扫描范围：30-400m/e；溶剂延迟：4min。
2供试品溶液的制备
精密吸取1μl精油样品，加乙醚定容至1ml制成供试品溶液，即得。
3测定法
精密吸取供试品溶液1μl，注入气相质谱仪，测定，即得。
4数据分析
将得到的样品GC/MS原始文件通过MassHunter Workstation Software(VersionB.04.00)进行分析得到各成分相应的保留时间及峰面积百分比，并通过数据库(NIST11.0)比对得到定性鉴别结果。
5测定结果
总离子流图如图2所示。主要成分分析结果表2所示。
表2 白茶精油化学成分GC-MS分析结果
Figure BDA0003289658010000092
Figure BDA0003289658010000101
实施例14 青蒿精油、白茶精油及组方精油对湿疹模型小鼠影响
1材料与方法
1.1实验动物
健康清洁级BALB/c小鼠，雌性，购自上海杰斯捷实验动物有限公司，许可证号码：SCXK(沪)2018-0004。
1.2试药与试剂
实施例1-3、对比例1的青蒿精油、实施例8-9、对比例2的白茶精油、实施例1青蒿精油与实施例8的白茶精油的组合物、丁酸氢化可的松软膏(天津金耀药业有限公司，国药准字H10940095)、TNF-α及IgE酶联免疫吸附测定(ELISA)检定试剂盒、2,4-二硝基氯苯(DNCB，Sigma公司)。
1.3仪器与设备
酶标分析仪Rayto RT-6100、倒置显微镜、电子天平、打耳器、离心机、水浴锅、-20度冰箱、4度冰箱、一次性吸管、1000μl、200μl、10μl等不同规格的枪及枪头、50ml、15ml及2ml离心管。
2实验方法
2.1模型制备
将各组小鼠于实验前一天背部使用脱毛膏脱毛，面积约为2×2cm。除正常组外，其余各组小鼠用7％DNCB的丙酮溶液100μL外涂于背部脱毛处致敏，5d后开始外涂0.5％DNCB溶液5μL于小鼠右耳内外侧进行激发，同时左耳外涂丙酮，每隔3d激发1次，共激发4次。正常组小鼠背部及右耳均以等量及同种方式涂抹丙酮溶液进行对照。若小鼠出现皮肤干燥、粗糙、增厚、红斑、结痂，躁动不安等行为即为造模成功。
2.2给药及分组
将77只BALB/c小鼠随机分为11组，包括正常组、模型组、阳性对照组、实施例1青蒿精油组、实施例2青蒿精油组、实施例3青蒿精油组、对比例1青蒿精油组、实施例8白茶精油组、实施例9白茶精油组、对比例2白茶精油组、组方精油组，每组7只。末次激发后，各精油组给予200μl的DMSO两倍稀释的精油涂抹背部脱毛处和右耳内外侧，并按摩3分钟促进吸收，阳性对照组给予0.1g的丁酸氢化可的松软膏涂抹。每日2次，连续10天。正常组和模型组给予溶媒DMSO代替治疗。
2.3观察指标
2.3.1耳廓变应评分
于末次给药后从水肿、红斑、抓痕几个方面进行小鼠右耳评分。评分标准见表3。
表3 耳廓变应评分标准
Figure BDA0003289658010000111
2.3.2耳廓厚度及质量变化
末次给药后2h，剪下大鼠双耳，用直径0.8cm的皮肤打孔器分别在左右耳中部部位打孔，分别记录左右耳片的厚度、质量，计算左右耳片厚度差和质量差。
2.3.3脾脏指数检测
小鼠称重后处死，摘取小鼠的脾脏并称质量(mg)，计算脾脏指数。脾脏指数＝脾质量(mg)/体质量(g)。
2.3.4生化指标检测
小鼠眼眶取血，分离血清，按照ELISA试剂盒说明书测定血清中IgE和TNF-a的水平。
2.4统计学处理
采用SPSS 20.0软件对数据进行统计学分析，数据以平均数±标准差表示，多组均数比较采用One-way ANOVA方法，组间两两比较方差齐时选择LSD法，方差不齐时选择Dunnett’s T3法。以P＜0.05为差异具有统计学意义。
3实验结果
3.1各组小鼠耳变应评分
在给药结束后对小鼠耳变应情况进行评分，结果表明，相比于正常组，模型组小鼠的耳变应评分显著升高(P＜0.01)。与模型组相比，治疗后各给药组的耳变应评分均有所降低，表明均在一定程度上对于小鼠湿疹有所改善，其中除对比例1青蒿精油组与模型组小鼠相比差异具有显著性(P＜0.05)以外，其余各组与模型组的差异均达到极显著水平(P＜0.01)。实施例1青蒿精油组、实施例8白茶精油组和组方精油组小鼠耳变应评分显著低于阳性药物组小鼠(P＜0.05或P＜0.01)。实施例1-3青蒿精油组小鼠耳变应评分均显著低于对比例1青蒿精油组(P＜0.01)。实施例8-9白茶精油组小鼠耳变应评分均显著低于对比例2白茶精油组(P＜0.01)。组方精油组小鼠耳变应评分均显著低于其余各给药组(P＜0.05或P＜0.01)。
表4 各组小鼠耳变应评分比较(
Figure BDA0003289658010000121
n＝7)
Figure BDA0003289658010000122
Figure BDA0003289658010000131
注：模型组vs.正常组，**P＜0.01；各给药组vs.模型组，#P＜0.05，##P＜0.01；各精油给药组vs.阳性药物组，△P＜0.05，△△P＜0.01；实施例1-3青蒿精油组vs.对比例1青蒿精油组，▲▲P＜0.01；实施例8-9白茶精油组vs.对比例2白茶精油组，&&P＜0.01；单方精油组vs.组方精油组，$P＜0.05，$$P＜0.01。
3.2各组小鼠耳廓厚度及质量
与正常组比较，模型组小鼠的耳重量差显著增加(P＜0.01)；各给药组与模型组比较，小鼠的耳重量差均出现显著的下降(P＜0.01)；各精油给药组与阳性药物组小鼠比较，组方精油组小鼠耳重量差显著小于阳性药物组小鼠(P＜0.01)，实施例8白茶精油组小鼠耳重量差也显著小于阳性药物组小鼠(P＜0.05)，实施例1青蒿精油组、实施例2青蒿精油组、实施例9白茶精油组小鼠耳重量差与阳性药物组小鼠相比差异不显著(P>0.05)，实施例3青蒿精油组小鼠耳重量差显著大于阳性药物组小鼠(P＜0.05)，对比例1青蒿精油组、对比例2白茶精油组小鼠耳重量差也均显著大于阳性药物组小鼠(P＜0.01)；实施例1-3青蒿精油组小鼠的耳重量差均小于对比例1青蒿精油组小鼠耳重量差，差异有统计学意义(P＜0.01)；实施例8-9白茶精油组小鼠的耳重量差均小于对比例2白茶精油组小鼠耳重量差，差异有统计学意义(P＜0.01)；组方精油组小鼠耳重量差小于实施例8白茶精油组，差异也有统计学意义(P＜0.05)。
与正常组比较，模型组小鼠的耳肿胀厚度显著增加(P＜0.01)；各给药组与模型组比较，除对比例2白茶精油组以外，其余各给药组小鼠的耳肿胀厚度均出现显著的下降(P＜0.01)；各精油给药组与阳性药物组小鼠比较，组方精油组小鼠耳肿胀厚度显著小于阳性药物组小鼠(P＜0.01)，实施例1青蒿精油组、实施例8白茶精油组和实施例9白茶精油组小鼠耳肿胀厚度与阳性药物组小鼠相比差异不显著(P>0.05)，其余各给药组小鼠耳肿胀厚度均显著大于阳性药物组小鼠(P＜0.05或P＜0.01)；实施例1-3青蒿精油组小鼠的耳肿胀厚度均小于对比例1青蒿精油组小鼠耳肿胀厚度，差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)；实施例8-9白茶精油组小鼠的耳肿胀厚度均小于对比例2白茶精油组小鼠耳肿胀厚度，差异有统计学意义(P＜0.01)；组方精油组小鼠耳肿胀厚度小于实施例8白茶精油组，差异也有统计学意义(P＜0.05)。
表5 各组小鼠耳重量差和耳肿胀厚度(
Figure BDA0003289658010000132
n＝7)
Figure BDA0003289658010000133
Figure BDA0003289658010000141
注：模型组vs.正常组，**P＜0.01；各给药组vs.模型组，##P＜0.01；各精油给药组vs.阳性药物组，△P＜0.05，△△P＜0.01；实施例1-3青蒿精油组vs.对比例1青蒿精油组，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；实施例8-9白茶精油组vs.对比例2白茶精油组，&&P＜0.01；实施例8白茶精油组vs.组方精油组，$P＜0.05。
3.3各组小鼠脾脏指数
与正常组比较，模型组小鼠的脾脏指数明显增加，差异有统计学意义(P＜0.01)；与模型组相比，各给药组小鼠脾脏指数均有所下降，其中除对比例1青蒿精油组和对比例2白茶精油组以外，其余各给药组小鼠脾脏指数均明显下降，具有显著性差异(P＜0.01)；实施例1-3青蒿精油组小鼠的脾脏指数均小于对比例1青蒿精油组小鼠脾脏指数，差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)；实施例8-9白茶精油组小鼠的耳肿胀厚度均小于对比例2白茶精油组小鼠耳肿胀厚度，差异有统计学意义(P＜0.05)。
表6 各组小鼠脾脏指数(
Figure BDA0003289658010000142
n＝7)
Figure BDA0003289658010000143
Figure BDA0003289658010000151
注：模型组vs.正常组，**P＜0.01；各给药组vs.模型组，##P＜0.01；实施例1-3青蒿精油组vs.对比例1青蒿精油组，△P＜0.05，△△P＜0.01；实施例8-9白茶精油组vs.对比例2白茶精油组，▲P＜0.05。
3.4各组小鼠血清IgE和TNF-a水平
与正常组比较，模型组小鼠的血清IgE水平显著升高(P＜0.01)；各给药组与模型组比较，小鼠的血清IgE水平均显著下降，除对比例2白茶精油组外差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05)；各精油给药组与阳性药物组小鼠比较，组方精油组小鼠血清IgE水平显著低于阳性药物组小鼠(P＜0.05)，实施例1-3青蒿精油组、实施例8-9白茶精油组小鼠血清IgE水平与阳性药物组小鼠差异不显著(P>0.05)，对比例1青蒿精油组、对比例2白茶精油组小鼠血清IgE水平显著高于阳性药物组小鼠(P＜0.01)；实施例1-3青蒿精油组小鼠的血清IgE水平均低于对比例1青蒿精油组小鼠血清IgE水平，差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05)；实施例8-9白茶精油组小鼠的血清IgE水平均低于对比例2白茶精油组小鼠血清IgE水平，差异有统计学意义(P＜0.01)；组方精油组小鼠血清IgE水平低于实施例1青蒿精油组和实施例8白茶精油组，差异均有统计学意义(P＜0.05)。
与正常组比较，模型组小鼠的血清TNF-a水平显著升高(P＜0.01)；各给药组与模型组比较，小鼠的血清TNF-a水平均显著下降，除对比例1青蒿精油组外差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05)；各精油给药组与阳性药物组小鼠比较，组方精油组小鼠血清TNF-a水平显著低于阳性药物组小鼠(P＜0.01)，实施例1-2青蒿精油组、实施例8-9白茶精油组小鼠血清TNF-a水平与阳性药物组小鼠差异不显著(P>0.05)，实施例3青蒿精油组、对比例1青蒿精油组、对比例2白茶精油组小鼠血清TNF-a水平显著高于阳性药物组小鼠(P＜0.01)；实施例1-3青蒿精油组小鼠的血清TNF-a水平均低于对比例1青蒿精油组小鼠血清TNF-a水平，差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05)；实施例8-9白茶精油组小鼠的血清TNF-a水平均低于对比例2白茶精油组小鼠血清TNF-a水平，差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05)；组方精油组小鼠血清TNF-a水平低于实施例1青蒿精油组和实施例8白茶精油组，差异也有统计学意义(P＜0.01)。
表7 各组小鼠血清IgE和TNF-a水平(
Figure BDA0003289658010000152
n＝7)
Figure BDA0003289658010000153
Figure BDA0003289658010000161
注：正常组vs.模型组，**P＜0.01；各给药组vs.模型组，##P＜0.01；各精油给药组vs.阳性药物组，△P＜0.05，△△P＜0.01；实施例1-3青蒿精油组vs.对比例1青蒿精油组，▲▲P＜0.01；实施例8-9白茶精油组vs.对比例2白茶精油组，&&P＜0.01；实施例1青蒿精油组和实施例8白茶精油组vs.组方精油组，$P＜0.05，$$P＜0.01。
4结论
(1)青蒿精油、白茶精油、青蒿精油和白茶精油的组合物外涂均能有效减轻湿疹小鼠模型症状，降低脾脏指数和炎症程度。
(2)青蒿精油制备过程中，水蒸气蒸馏的加水量影响青蒿精油对湿疹的活性；白茶精油制备过程中，萎凋方式影响白茶精油对湿疹的活性。
(3)青蒿精油和白茶精油组合使用治疗湿疹，能够提高疗效。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种青蒿精油在制备治疗湿疹的药物中的应用，其特征在于，所述青蒿精油是采用以下方法制备的：采集新鲜青蒿嫩苗，取叶子，干燥，切成碎段，放入蒸馏设备，加入蒸馏水，料液比为1:(0.5-2)，浸泡后开始蒸馏，蒸馏时间为60-90min，得精油纯露混合液，用分离器分离，得青蒿精油。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述干燥的方式为60℃以下干燥2-5小时，所述碎段的大小为4-6mm，所述浸泡的时间为1-2h。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述蒸馏的参数为：萃取温度90-96℃，冷凝管温度15-25℃。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述青蒿其产地为河南。
5.一种白茶精油在制备治疗湿疹的药物中的应用，其特征在于，所述白茶精油是采用以下方法制备的：采集新鲜白茶的嫩芽，在背光的室内整齐摊开至厚度为3-5cm，温度控制在30-35℃，湿度为50％-60％，萎凋至减重率为50％-60％，之后置入烘干机100-120℃烘干20-40min；将白茶干燥叶片粉碎，超临界CO2流体萃取，得白茶精油。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述超临界CO2流体萃取的参数为：CO2流体流速0.5-2L/min，萃取温度42～50℃，萃取压力20～25MPa，分离温度50～60℃，分离压力4.5～5.5MPa，萃取时间1.5～2.5h。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述超临界CO2流体萃取在开始时预浸润5-20min。
8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述白茶干燥叶片被粉碎成10～20目粗粉。
9.一种植物精油组合物在制备治疗湿疹的药物中的应用，其特征在于，所述植物精油组合物含有权利要求1-4任一所述的青蒿精油和权利要求5-8任一所述的白茶精油。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述青蒿精油和白茶精油的比例为1:(0.01-20)。
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