CN113640443A - 一种度鲁特韦液相色谱测定方法 - Google Patents
一种度鲁特韦液相色谱测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113640443A CN113640443A CN202111036806.2A CN202111036806A CN113640443A CN 113640443 A CN113640443 A CN 113640443A CN 202111036806 A CN202111036806 A CN 202111036806A CN 113640443 A CN113640443 A CN 113640443A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- dolutegravir
- mobile phase
- solution
- liquid chromatography
- peak
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 229960002542 dolutegravir Drugs 0.000 title claims abstract description 61
- RHWKPHLQXYSBKR-BMIGLBTASA-N dolutegravir Chemical compound C([C@@H]1OCC[C@H](N1C(=O)C1=C(O)C2=O)C)N1C=C2C(=O)NCC1=CC=C(F)C=C1F RHWKPHLQXYSBKR-BMIGLBTASA-N 0.000 title claims abstract description 61
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims abstract description 35
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 32
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 claims abstract description 24
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 15
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 9
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 7
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 claims abstract description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims abstract description 6
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims abstract description 5
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 47
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 33
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 32
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 22
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 21
- 239000013076 target substance Substances 0.000 claims description 13
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 7
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 7
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- LFVGISIMTYGQHF-UHFFFAOYSA-N ammonium dihydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].OP(O)([O-])=O LFVGISIMTYGQHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910000387 ammonium dihydrogen phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 6
- 239000012490 blank solution Substances 0.000 claims description 6
- 238000000105 evaporative light scattering detection Methods 0.000 claims description 6
- 235000019837 monoammonium phosphate Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 claims description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 4
- 238000010812 external standard method Methods 0.000 claims description 4
- 238000010606 normalization Methods 0.000 claims description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M perchlorate Inorganic materials [O-]Cl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 2
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 claims description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 abstract description 2
- 238000005220 pharmaceutical analysis Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- XPCTZQVDEJYUGT-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-2-methyl-4-pyrone Chemical compound CC=1OC=CC(=O)C=1O XPCTZQVDEJYUGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 4
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 4
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 4
- 229940124524 integrase inhibitor Drugs 0.000 description 3
- 239000002850 integrase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 3
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- HYMLWHLQFGRFIY-UHFFFAOYSA-N Maltol Natural products CC1OC=CC(=O)C1=O HYMLWHLQFGRFIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 2
- 229940043353 maltol Drugs 0.000 description 2
- BQVRPJBLLRHDAM-UHFFFAOYSA-N methyl 1-(2,2-dihydroxyethyl)-4-oxo-3-phenylmethoxypyridine-2-carboxylate Chemical compound O=C1C=CN(CC(O)O)C(C(=O)OC)=C1OCC1=CC=CC=C1 BQVRPJBLLRHDAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 206010013710 Drug interaction Diseases 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 229960003586 elvitegravir Drugs 0.000 description 1
- JUZYLCPPVHEVSV-LJQANCHMSA-N elvitegravir Chemical compound COC1=CC=2N([C@H](CO)C(C)C)C=C(C(O)=O)C(=O)C=2C=C1CC1=CC=CC(Cl)=C1F JUZYLCPPVHEVSV-LJQANCHMSA-N 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 238000003541 multi-stage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000010534 nucleophilic substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 229960004742 raltegravir Drugs 0.000 description 1
- CZFFBEXEKNGXKS-UHFFFAOYSA-N raltegravir Chemical compound O1C(C)=NN=C1C(=O)NC(C)(C)C1=NC(C(=O)NCC=2C=CC(F)=CC=2)=C(O)C(=O)N1C CZFFBEXEKNGXKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/74—Optical detectors
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明属于药物分析技术领域，尤其是一种度鲁特韦液相色谱测定方法，所述测定方法以USP‑L1型十八烷基键合硅胶XBridge C18作为固定相、流动相A酸性缓冲盐‑流动相B乙腈‑流动相C甲醇梯度洗脱为流动相、各峰分离度在2.0以上，理论塔板数2500以上的检测器对度鲁特韦制剂、原料药及中间体、杂质的含量进行测定；本发明中的度鲁特韦液相色谱测定方法使用二极管阵列检测器PD)，除了可以得到在指定波长246nm下的色谱图谱，包含保留时间、峰高、峰面积、面积百分比等。同时可以通过工作站软件显示峰纯度，提示色谱峰没有分离的情况，还可显示某单一峰的紫外光谱图，起到一定的鉴别作用。
Description
技术领域
本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种度鲁特韦液相色谱测定方法。
背景技术
艾滋病是获得性免疫缺陷综合征(Acquired Immune Deficiency Syndrome，AIDS)的音译，它源于一种名为人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)的逆转录病毒，感染后破坏人体免疫系统，使得人体极易感染多种疾病或因各种并发症而死亡。2013年经FDA批准，拉替拉韦(Raltegravir，商品名为艾生特)作为第一代整合酶抑制剂进入临床，治疗效果突出，不良反应和药物相互作用都较少。随后另外两个整合酶抑制剂药物埃替格韦(Elvitegravir)和度鲁特韦(Dolutegravir)被批准上市，后续研究表明度鲁特韦更不易产生耐药性。因此，包括美国在内的许多医疗资源丰富的发达国家推荐使用含整合酶抑制剂的治疗方案作为一线抗病毒药物。2019年7月，世卫组织建议将度鲁特韦作为艾滋病首选治疗方案。日本科学家T.Yasukata等人报道以简单的麦芽酚(maltol)为起始原料，经亲核取代、消去、氧化、酯化等等多步反应合成了最终产物。合成步骤长，意味着更多的中间体及副产物可能最终会残留在终产物中，原料药的储存过程中、制剂生产过程中难免会发生降解或与辅料的相互作用，本发明一种度鲁特韦液相色谱测定方法可以很好地适用于度鲁特韦原料药、制剂的生产过程中的监控，控制产品的质量，包括含量、含中间体在内的固有杂质、降解产物等。
发明内容
本发明的目的在于：克服现有技术中的不足，提供一种以USP-L1型十八烷基键合硅胶(XBridge C18)作为固定相、酸性缓冲盐(流动相A)-乙腈(流动相B)-甲醇(流动相C)梯度洗脱为流动相、二极管阵列检测器(PDA)的液相色谱测定方法对度鲁特韦制剂、原料药及中间体的含量、纯度、有关物质进行测定的方法。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种度鲁特韦液相色谱测定方法，所述测定方法以USP-L1型十八烷基键合硅胶XBridge C18作为固定相、流动相A酸性缓冲盐-流动相B乙腈-流动相C甲醇梯度洗脱为流动相、各峰分离度在2.0以上，理论塔板数2500以上的检测器对度鲁特韦制剂、原料药及中间体、杂质的含量进行测定。
进一步的，所述测定方法包括以下步骤：
1)色谱条件：所述流动相的流速为0.5-2.0mL/min，柱温为30-50℃，
2)样品溶液配制：
纯度检测时取度鲁特韦制剂、原料药、中间体或中控反应液，加稀释液配制成目标物质浓度约0.2mg/mL的溶液作为样品溶液；
含量检测时精密称取度鲁特韦成品或中间体标准品，加稀释液配制成目标物质浓度约0.05mg/mL的溶液作为标准品溶液；精密称取度鲁特韦制剂、原料药、中间体或中控反应液，加稀释液配制成目标物质浓度约0.05mg/mL的溶液作为样品溶液；
(3)进样分析
以初始条件平衡仪器，待基线平衡后，分别进样空白溶液、标准品溶液和样品溶液各20μL，记录扣除空白峰的样品溶液图谱，以校正面积归一法计算纯度或杂质含量，其中F为某杂质的响应因子，当F在0.7～1.3时按F＝1，或以外标法计算目标物质的含量，其中P为标准的含量；
进一步的，所述步骤1)中所使用的的检测器选用二极管阵列检测器PDA、电喷雾检测器CAD和蒸发光散射检测器ELSD中的一种。
进一步的，所述步骤1)中梯度洗脱程序如下表：
| 时间/min | 流动相A％ | 流动相B％ | 流动相C％ |
| 0 | 70 | 15 | 15 |
| 13 | 40 | 15 | 35 |
| 16 | 30 | 25 | 45 |
| 25 | 30 | 25 | 45 |
。
进一步的，所述步骤2)中的稀释液由乙腈和水按体积比1：1配制而成。
进一步的，所述流动相A的pH值为3-6，酸性缓冲盐选用磷酸盐、乙酸盐、高氯酸盐中的一种，所述流动相B的乙腈为90％的乙腈水溶液，所述流动相C为纯甲醇。
进一步的，所述流动相A为20mmol/L磷酸二氢铵，用10％磷酸或氨水调节pH至5.8，柱温40℃，流速为1.0ml/min。
采用本发明中的技术方案的有益效果是：
本发明中的度鲁特韦液相色谱测定方法，本方法在检测最终产品时会把所有中间体、副产物、降解杂质等所有杂质定位(经杂质研究及多批产品检测确认不含有的除外)定位，确认均能有效分离(分离度R大于2.0)及定性定量。
本发明中的度鲁特韦液相色谱测定方法使用二极管阵列检测器(PDA)，除了可以得到在指定波长(246nm)下的色谱图谱，包含保留时间、峰高、峰面积、面积百分比等。同时可以通过工作站软件显示峰纯度，提示色谱峰没有分离的情况，还可显示某单一峰的紫外光谱图，起到一定的鉴别作用。
度鲁特韦原料药合成步骤长，各中间体及原料的pKa值差异明显，现有报道的分析方法都是多个色谱体系或多个方法体系适用不同的合成步骤。本发明一种度鲁特韦液相色谱测定方法，是一套通用的检测方法。适用于度鲁特韦研发、生产的全周期，该方法适用于度鲁特韦原料药及制剂生产全过程。
本发明中的度鲁特韦液相色谱测定方法，通用性强，适用各种规模的研发、生产机构用于度鲁特韦的研发、生产的样品检测，所涉及的仪器(检测器)、色谱柱、试剂耗材都是普及型易获得，可操作性强。
本发明一种度鲁特韦液相色谱测定方法，操作简便、结果准确。
附图说明
图1度鲁特韦及杂质的分离度图谱
图2度鲁特韦纯度检测样品图谱
图3度鲁特韦含量检测样品图谱
图4度鲁特韦杂质定量限图谱
图5度鲁特韦杂质线性范围图
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所使用的材料及试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径买到。
一种度鲁特韦液相色谱测定方法，所述测定方法以USP-L1型十八烷基键合硅胶XBridge C18作为固定相、流动相A酸性缓冲盐-流动相B乙腈-流动相C甲醇梯度洗脱为流动相、各峰分离度在2.0以上，理论塔板数2500以上的检测器对度鲁特韦制剂、原料药及中间体、杂质的含量进行测定。
本发明一种度鲁特韦液相色谱测定方法，本方法在检测最终产品时会把所有中间体、副产物、降解杂质等所有杂质定位(经杂质研究及多批产品检测确认不含有的除外)定位，确认均能有效分离(分离度R大于2.0)及定性定量(见图1)；
本发明一种度鲁特韦液相色谱测定方法，上述(2)样品溶液配制中，纯度检测时取度鲁特韦制剂、原料药及中间体或中控反应液适量，加稀释液配制成目标物质约0.2mg/mL的溶液作为供试品溶液(见图2)；
本发明一种度鲁特韦液相色谱测定方法，上述(2)样品溶液配制中，含量检测时标准品和样品的浓度约为0.05mg/mL(见图3)；
为了保证含量不超过0.1％的杂质能够准确检出，需要对样品做定量限(LOQ)检测，经试验最小定量浓度0.05％，信噪比S/N＞10，符合各国药典要求(见图4)；
同时因为不同阶段杂质含量不同，为验证方法可靠性，以度鲁特韦中酰胺杂质为例，取杂质对照品适量配制0.1％，0.5％，5.0％，10％系列浓度的试验溶液，结果峰面积与浓度呈良好的线性关系，相关系数R2＝0.99(见图5)。
该方法适用于度鲁特韦研发、生产过程中的中控、中间体及成品放行的检测，也适用于度鲁特韦相关制剂各剂型的检测，如含量、有关物质、溶出度等。
实施例1
1色谱条件摸索
仪器：岛津LC-20A，考察了二极管阵列检测器(PDA)、蒸发光散射(ELSD)、电喷雾(CAD)等检测器，最终选择PDA检测器，最佳波长246nm。
色谱柱：沃特世公司研制USP-L1型十八烷基键合硅胶(XBridge C18)作为固定相，型号：XBridge，150×4.6mm，粒径3.5μm。
流动相是以酸性缓冲盐(流动相A)-乙腈(流动相B)-甲醇(流动相C)梯度洗脱为流动相，其中流动相A考察了缓冲体系为磷酸盐、乙酸盐、高氯酸盐等，调节流动相A的pH值为3-6，流动相A的最佳组成为20mmol/L磷酸二氢铵，用10％磷酸或氨水调节pH至5.8，流动相B为90％乙腈水溶液，流动相C为纯甲醇，柱温考察了30、35、40、45、50℃，最佳柱温是35℃，流速考察了0.5、1.0、1.5、2.0mL/min，最佳流速选择1.0mL/min，梯度洗脱程序择优如下表：
| 时间/min | 流动相A％ | 流动相B％ | 流动相C％ |
| 0 | 70 | 15 | 15 |
| 13 | 40 | 15 | 35 |
| 16 | 30 | 25 | 45 |
| 25 | 30 | 25 | 45 |
2系统适用性
本方法获得的色谱图度鲁特韦主峰及杂质峰均能有效分离，分离度R大于2.0；主要峰的峰形良好，理论塔板数均大于2500；度鲁特韦杂质检出最低浓度为0.05％，信噪比≥3，系列浓度样品经测试符合线性关系，相关系数0.98；样品溶液稳定性试验显示24小时内主峰峰面积RSD小于2.0％，杂质谱及杂质含量没有明显变化。说明此方法分析度鲁特韦样品重现性好，响应灵敏，结果准确。
3样品溶液检测
纯度检测时取度鲁特韦原料药及中间体或中控反应液适量，加稀释液(乙腈:水＝50:50)配制成目标物质约0.2mg/mL的溶液作为样品溶液。
含量检测时精密称取度鲁特韦原料药及中间体标准品适量，加稀释液(乙腈:水＝50:50)配制成目标物质约0.05mg/mL的溶液作为标准品溶液。精密称取度鲁特韦原料药及中间体或中控反应液适量，加稀释液配制成目标物质约0.05mg/mL的溶液作为样品溶液。
进样分析：以初始条件平衡仪器，等基线平衡后，分别进样空白溶液和样品溶液20μL，记录扣除空白峰的样品溶液图谱，以校正面积归一法计算纯度或杂质含量，其中F为某杂质的响应因子，当F在0.7～1.3时按F＝1，或以外标法计算目标物质的含量，其中P为标准的含量。
实施例2度鲁特韦中间体有关物质的检查
1色谱条件
仪器：岛津LC-20A，采用二极管阵列检测器(PDA)，波长246nm；
色谱柱：沃特世XBridge C18，150×4.6mm，3.5μm；
柱温：35℃；
流速：1.0mL/min；
流动相A为20mmol/L磷酸二氢铵，用10％磷酸或氨水调节pH至5.8，流动相B为90％乙腈水溶液，流动相C为纯甲醇；
梯度洗脱程序如下表：
| 时间/min | 流动相A％ | 流动相B％ | 流动相C％ |
| 0 | 70 | 15 | 15 |
| 13 | 40 | 15 | 35 |
| 16 | 30 | 25 | 45 |
| 25 | 30 | 25 | 45 |
2样品溶液检测
取度鲁特韦中间体适量，加稀释液(乙腈:水＝50:50)配制成约0.2mg/mL的溶液作为样品溶液。移取适量该溶液用稀释液(乙腈:水＝50:50)稀释200倍，制成约0.001mg/mL的溶液作为对照溶液(0.5％)。
按上述色谱条件平衡仪器，基线平稳后分别进样20μL空白溶液(稀释液)、对照溶液、样品溶液。样品溶液中如果有杂质峰，单个杂质峰面积应不超过对照溶液峰面积(0.5％)，所有杂质峰面积总和应不超过对照溶液峰面积的两倍(1.0％)。
实施例3度鲁特韦原料药或度鲁特韦片有关物质检查
1色谱条件
仪器：岛津LC-20A，采用二极管阵列检测器(PDA)，波长246nm；
色谱柱：沃特世XBridge C18，150×4.6mm，3.5μm；
柱温：35℃；
流速：1.0mL/min；
流动相A为20mmol/L磷酸二氢铵，用10％磷酸或氨水调节pH至5.8，流动相B为90％乙腈水溶液，流动相C为纯甲醇；
梯度洗脱程序如下表：
| 时间/min | 流动相A％ | 流动相B％ | 流动相C％ |
| 0 | 70 | 15 | 15 |
| 13 | 40 | 15 | 35 |
| 16 | 30 | 25 | 45 |
| 25 | 30 | 25 | 45 |
2样品溶液检测
取度鲁特韦原料药适量，加稀释液(乙腈:水＝50:50)配制成每mL约含0.2mg度鲁特韦的溶液作为样品溶液。或取度鲁特韦片20片，精密称定，研细，精密称取适量加稀释液(乙腈:水＝50:50)配制成每mL约含0.2mg度鲁特韦的溶液作为样品溶液。按上述色谱条件平衡仪器，基线平稳后分别进样20μL空白溶液(稀释液)、样品溶液。记录扣除空白峰的样品溶液图谱，以校正面积归一法计算纯度或杂质含量，其中F为某杂质的响应因子，当F在0.7～1.3时按F＝1。
实施例4度鲁特韦原料药或度鲁特韦片含量检查
1色谱条件
仪器：岛津LC-20A，采用二极管阵列检测器(PDA)，波长246nm；
色谱柱：沃特世XBridge C18，150×4.6mm，3.5μm；
柱温：35℃；
流速：1.0mL/min；
流动相A为20mmol/L磷酸二氢铵，用10％磷酸或氨水调节pH至5.8，流动相B为90％乙腈水溶液，流动相C为纯甲醇；
梯度洗脱程序如下表：
| 时间/min | 流动相A％ | 流动相B％ | 流动相C％ |
| 0 | 70 | 15 | 15 |
| 13 | 40 | 15 | 35 |
| 16 | 30 | 25 | 45 |
| 25 | 30 | 25 | 45 |
2样品溶液检测
取度鲁特韦标准品适量，加稀释液配制成每mL约含0.05mg度鲁特韦的溶液作为标准品溶液。取度鲁特韦原料药适量，加稀释液配制成每mL约含0.05mg度鲁特韦的溶液作为样品溶液。或取度鲁特韦片20片，精密称定，研细，精密称取适量加稀释液配制成每mL约含0.1mg度鲁特韦的溶液作为样品溶液。按上述色谱条件平衡仪器，基线平稳后分别进样20μL空白溶液、标准溶液、样品溶液。记录扣除空白峰的标准溶液和样品溶液图谱，以外标法计算度鲁特韦原料药或度鲁特韦片中活性物质的含量，其中P为标准的含量。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明,任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的方法及技术内容作出些许的更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (7)
1.一种度鲁特韦液相色谱测定方法，其特征在于：所述测定方法以USP-L1型十八烷基键合硅胶XBridge C18作为固定相、流动相A酸性缓冲盐-流动相B乙腈-流动相C甲醇梯度洗脱为流动相、各峰分离度在2.0以上，理论塔板数2500以上的检测器对度鲁特韦制剂、原料药及中间体、杂质的含量进行测定。
2.根据权利要求1所述的一种度鲁特韦液相色谱测定方法，其特征在于：所述测定方法包括以下步骤：
1)色谱条件：所述流动相的流速为0.5-2.0mL/min，柱温为30-50℃，
2)样品溶液配制：
纯度检测时取度鲁特韦制剂、原料药、中间体或中控反应液，加稀释液配制成目标物质浓度约0.2mg/mL的溶液作为样品溶液；
含量检测时精密称取度鲁特韦成品或中间体标准品，加稀释液配制成目标物质浓度约0.05mg/mL的溶液作为标准品溶液；精密称取度鲁特韦制剂、原料药、中间体或中控反应液，加稀释液配制成目标物质浓度约0.05mg/mL的溶液作为样品溶液；
(3)进样分析
以初始条件平衡仪器，待基线平衡后，分别进样空白溶液、标准品溶液和样品溶液各20μL，记录扣除空白峰的样品溶液图谱，以校正面积归一法计算纯度或杂质含量，其中F为某杂质的响应因子，当F在0.7～1.3时按F＝1，或以外标法计算目标物质的含量，其中P为标准的含量；
3.根据权利要求2所述的一种度鲁特韦液相色谱测定方法，其特征在于：所述步骤1)中所使用的的检测器选用二极管阵列检测器PDA、电喷雾检测器CAD和蒸发光散射检测器ELSD中的一种。
4.根据权利要求2所述的一种度鲁特韦液相色谱测定方法，其特征在于：所述步骤1)中梯度洗脱程序如下表：
5.根据权利要求2所述的一种度鲁特韦液相色谱测定方法，其特征在于：所述步骤2)中的稀释液由乙腈和水按体积比1：1配制而成。
6.根据权利要求2所述的一种度鲁特韦液相色谱测定方法，其特征在于：所述流动相A的pH值为3-6，酸性缓冲盐选用磷酸盐、乙酸盐、高氯酸盐中的一种，所述流动相B的乙腈为90％的乙腈水溶液，所述流动相C为纯甲醇。
7.根据权利要求4所述的一种度鲁特韦液相色谱测定方法，其特征在于：所述流动相A为20mmol/L磷酸二氢铵，用10％磷酸或氨水调节pH至5.8，柱温40℃，流速为1.0ml/min。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111036806.2A CN113640443A (zh) | 2021-09-06 | 2021-09-06 | 一种度鲁特韦液相色谱测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111036806.2A CN113640443A (zh) | 2021-09-06 | 2021-09-06 | 一种度鲁特韦液相色谱测定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113640443A true CN113640443A (zh) | 2021-11-12 |
Family
ID=78425061
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111036806.2A Pending CN113640443A (zh) | 2021-09-06 | 2021-09-06 | 一种度鲁特韦液相色谱测定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113640443A (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108101838A (zh) * | 2017-12-18 | 2018-06-01 | 安徽唯诗杨信息科技有限公司 | 一种度鲁特韦中间体的合成方法及其有关物质检测方法 |
| WO2020202598A1 (ja) * | 2019-04-02 | 2020-10-08 | 旭化成株式会社 | セルロース粉末、錠剤及び錠剤の製造方法 |
-
2021
- 2021-09-06 CN CN202111036806.2A patent/CN113640443A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108101838A (zh) * | 2017-12-18 | 2018-06-01 | 安徽唯诗杨信息科技有限公司 | 一种度鲁特韦中间体的合成方法及其有关物质检测方法 |
| WO2020202598A1 (ja) * | 2019-04-02 | 2020-10-08 | 旭化成株式会社 | セルロース粉末、錠剤及び錠剤の製造方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| CHANTELLE BENNETTO-HOOD 等: "A sensitive HPLC-MS/MS method for the determination of dolutegravir in human plasma", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B》 * |
| 孙宝丹 等: "UPLC法测定度鲁特韦有关物质含量", 《中国药物评价》 * |
| 熊婧 等: "反相高效液相色谱法测定度鲁特韦钠的平衡溶解度", 《药物分析杂志》 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106990185B (zh) | 一种同时测定血浆中六种酪氨酸激酶抑制剂浓度的方法 | |
| CN107064350B (zh) | 一种枸橼酸托法替布疑似基因毒性杂质的检测方法 | |
| CN111487354B (zh) | 一种检测头孢克肟相关杂质的方法 | |
| CN112782311B (zh) | 一种富马酸丙酚替诺福韦中l-丙氨酸异丙酯的hplc测定方法 | |
| CN111855842B (zh) | 一种奥扎格雷钠有关物质的检测方法及应用 | |
| CN111257486A (zh) | 检测血液中5种精神药物和主要代谢产物的方法及试剂盒 | |
| CN113049699A (zh) | 一种联苯酸酐及其相关物质的检测方法及应用 | |
| CN113514584A (zh) | 一种对食品中非法添加的托拉塞米进行定性、定量检测的方法及应用 | |
| CN109387587B (zh) | 一种l-2-氨基-5-胍基戊酸对映异构体的检测方法 | |
| CN113640443A (zh) | 一种度鲁特韦液相色谱测定方法 | |
| CN116699013A (zh) | 一种分离检测磷酸奥司他韦口崩片中相关杂质的方法 | |
| CN115524408B (zh) | 恩曲他滨丙酚替诺福韦片复方制剂中有关物质的检测方法 | |
| CN111103383A (zh) | 一种液质联用同时测定人血浆中内源性皮质醇、皮质酯酮、雄烯二酮、睾酮浓度的方法 | |
| CN110824074A (zh) | 用高效液相色谱检测替格瑞洛有关物质的方法 | |
| CN112763622B (zh) | 一种液相色谱测定法匹拉韦的方法 | |
| CN115372522A (zh) | 一种检测醋酸阿比特龙含量的方法 | |
| CN110095554B (zh) | 高效液相色谱分析米力农有关物质的方法 | |
| CN109270178B (zh) | 一种高效液相色谱法分离测定度他雄胺软胶囊中度他雄胺及有关物质的方法 | |
| CN109342579B (zh) | 一种润肠通便中药的hplc指纹图谱检测方法 | |
| CN113866318A (zh) | 一种(6-氨基吡啶-2-基)(1-甲基哌啶-4-基)甲酮双盐酸盐的检测方法 | |
| CN115032284A (zh) | 一种分离检测咀嚼片中有关物质的方法 | |
| CN111024861A (zh) | 一种莱特莫韦及含莱特莫韦的制剂中有关物质的检测方法 | |
| Kathiresan et al. | Analytical method development and validation of losartan potassium tablet by RP-HPLC | |
| CN115856144B (zh) | 一种氟康唑原料药及注射液中三甲基碘化亚砜杂质的检测方法 | |
| CN116068081B (zh) | 一种检测氟尿嘧啶注射液中氟乙醛的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20211112 |