CN113621605A - 磁珠-核酸复合体洗涤液及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及体外诊断核酸检测领域,提供了一种新的磁珠‑核酸复合体洗涤液及应用。本洗涤液由粘度介于1000~50000cs之间的硅油构成。本应用包括将粘度介于1000~50000cs之间的硅油作为磁珠法全自动提取核酸模板的洗涤液。上述硅油作为洗涤液,能够有效的分隔裂解液和扩增液,避免裂解液下渗。而且,不会发生磁珠滞留,能够解决磁珠临界损失问题,避免影响传送到扩增液的核酸模板数量。
Description
技术领域
本发明涉及体外诊断核酸检测领域,具体是一种新的磁珠-核酸复合体洗涤液以及应用。
背景技术
磁珠法是核酸检测使用的一种核酸自动提取方法。磁珠法是利用外置磁体和试管内的磁珠的磁吸作用,用外置磁体驱动磁珠在试管内运动,实现磁珠-核酸复合体从裂解液到洗涤液,再从洗涤液到扩增液的运动,从而实现核酸模板自动提取。
磁珠法核酸自动提取中,洗涤液除了去除磁珠-核酸复合体残留的裂解液和样本液,还起到分隔裂解液和扩增液的作用。现有磁珠法核酸自动提取中,存在以下问题:1、容易发生裂解液下渗问题;2、磁珠容易残留在两种液体组分的临界面,即存在磁珠临界损失问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种磁珠-核酸复合体洗涤液及应用,以至少在一定程度解决相关技术存在的上述问题。
发明人研究发现,使用合适粘度的硅油作为磁珠法核酸自动提取中洗涤液,能够有效分隔裂解液和扩增液同时能够解决磁珠临界损失问题,所以提出本专利申请。本发明采用的技术方案如下:
一种磁珠-核酸复合体洗涤液,所述磁珠-核酸复合体洗涤液由粘度介于1000~50000cs之间的硅油构成。其中,硅油的粘度可以是1000~50000cs之间的任意数值,例如1000cs、2000cs、2500cs、3000cs、4000cs、5500cs、6000cs、7000cs、8000cs、9000cs、10000cs、12000cs、13000cs、15000cs、16000cs、18000cs、20000cs、21000cs、23000cs、25000cs、28000cs、30000cs、33000cs、35000cs、37000cs、40000cs、43000cs、45000cs、48000cs、49000cs、50000cs。
硅油粘度优选介于3000~30000cs之间。
硅油粘度还优选介于5000~20000cs之间。
本发明还提供了将粘度介于1000~50000cs之间的硅油作为磁珠法全自动提取核酸模板的洗涤液的应用。
在上述应用中,所述硅油被填装于试管内的裂解液和扩增液之间。
在上述应用中,优选地,所述硅油的深度介于30~60mm之间。
与现有技术相比,本发明至少具有以下有益效果:
经实验,上述粘度区间的硅油作为洗涤液,能够有效的分隔裂解液和扩增液,避免裂解液下渗。而且,不会发生磁珠滞留,能够解决磁珠临界损失问题,避免影响传送到扩增液的核酸模板数量。
附图说明
图1为采用常规洗涤液的分隔效果图;
图2为采用硅油洗涤液的分隔效果图;
图3为采用常规洗涤液的扩增曲线图;
图4为采用硅油作为洗涤液的扩增曲线图;
图5至图7为采用不同粘度的硅油作为洗涤液的扩增曲线图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明做进一步说明。
实施例一:磁珠-核酸复合体洗涤液
磁珠-核酸复合体洗涤液由粘度介于1000~50000cs之间的硅油构成。其中,硅油的粘度可以是1000~50000cs之间的任意数值,例如1000cs、2000cs、2500cs、3000cs、4000cs、5500cs、6000cs、7000cs、8000cs、9000cs、10000cs、12000cs、13000cs、15000cs、16000cs、18000cs、20000cs、21000cs、23000cs、25000cs、28000cs、30000cs、33000cs、35000cs、37000cs、40000cs、43000cs、45000cs、48000cs、49000cs、50000cs。硅油粘度优选介于3000~30000cs之间。硅油粘度还优选介于5000~20000cs之间。
其中,硅油的粘度对洗涤效果和分隔效果存在影响。具体影响如下:当粘度过大时,会导致磁珠在硅油中滞留,影响传送到扩增液中的核酸模板数量,进而会导致扩增效果差,结果不稳定;当粘度过小时,硅油无法在试管中长时间停留,硅油上移,裂解液下渗混入扩增液中导致扩增酶变性失活。
实施例二:
硅油作为磁珠法全自动提取核酸模板的洗涤液的应用。其中,硅油的粘度可以是1000~50000cs之间的任意数值,例如1000cs、2000cs、2500cs、3000cs、4000cs、5500cs、6000cs、7000cs、8000cs、9000cs、10000cs、12000cs、13000cs、15000cs、16000cs、18000cs、20000cs、21000cs、23000cs、25000cs、28000cs、30000cs、33000cs、35000cs、37000cs、40000cs、43000cs、45000cs、48000cs、49000cs、50000cs。硅油粘度优选介于3000~30000cs之间。硅油粘度还优选介于5000~20000cs之间。
在上述应用中,所述硅油被填装于试管内的裂解液和扩增液之间,硅油充当洗涤液除去磁珠-核酸复合体残留的裂解液和样本液。
在上述应用中,所述硅油的深度优选介于30~60mm之间。
实施例三:常规洗涤液和硅油洗涤液的洗涤效果对比实验
常规洗涤液实验:裂解液和洗涤液采用全式金EC601通用型试剂盒,扩增液采用菲鹏公司的MD027扩增液,洗涤效果如图1所示。
硅油洗涤液实验:
裂解液采用全式金EC601通用型试剂盒,扩增液采用菲鹏公司的MD027扩增液,洗涤液采用粘度为15000cs的硅油,洗涤效果如图2所示。
裂解液采用全式金EC601通用型试剂盒,扩增液采用菲鹏公司的MD027扩增液,分别用粘度为5000cs、8000cs、12000cs、20000cs、30000cs、40000cs的硅油作为洗涤液,洗涤效果如图2所示。
图1和图2的试管中,上层为裂解液,下层为扩增液,中间为洗涤液。由图1可见,上层裂解液有不同程度的下渗,底部扩增液中、以及洗涤液和扩增液的临界面均有磁珠残留。由图2可见,裂解液没有明显下渗,扩增液内和两层临界面没有磁珠残留。可见,相比常规洗涤液,上述硅油洗涤液具有良好的分隔效果,能够有效避免裂解液下渗混入扩增液导致扩增酶变性失活;同时,磁珠在硅油洗涤液中无滞留,因此不会影响传送到扩增液的核酸模板数量,因此,上述硅油洗涤液替代传统的核酸洗涤液,实现裂解液和扩增液的分隔同时解决了磁珠的临界损失问题。
实施例四:扩增效果的对比实验
常规洗涤液扩增实验:裂解液和洗涤液采用全式金EC601通用型试剂盒,扩增液采用菲鹏公司的MD027扩增液,使用布氏杆菌为比较样本,扩增曲线如图3所示,其中,纵坐标为荧光强度,横坐标为循环数,ROX为阴性参照。
硅油洗涤液扩增实验:裂解液采用全式金EC601通用型试剂盒,扩增液采用菲鹏公司的MD027扩增液,洗涤液采用粘度为15000cs的硅油,使用布氏杆菌为比较样本,扩增曲线如图4所示,其中,纵坐标为荧光强度,横坐标为循环数,ROX为阴性参照。
对比图3和图4可见,从扩增效果看,硅油对磁珠-核酸复合物的洗涤效果优于常规洗涤液。
实施例五:硅油洗涤液的粘度对扩增效果的对比实验
裂解液采用全式金EC601通用型试剂盒,扩增液采用菲鹏公司的MD027扩增液,洗涤液分别采用粘度为55000cs的硅油、粘度为15000cs的硅油、粘度为800cs的硅油,使用布氏杆菌为比较样本,扩增曲线对应如图5、图6、图7所示,其中,纵坐标为荧光强度,横坐标为循环数,ROX为阴性参照。
由图5、图6、图7可见,采用高粘度硅油作为洗涤液,扩增效果差结果不稳定,其原因可能在于高粘度硅油影响磁珠的运动速度,使磁珠在硅油层中滞留无法把核酸模板带到扩增液中。采用低粘度硅油作为洗涤液,无法扩增,其原因可能在于低粘度的硅油无法在反应管中长时间停留会,硅油上移,裂解液下渗混到扩增液中导致扩增酶变性失活。而合适粘度的硅油作为洗涤液,具有良好的扩增效果。
上述通过具体实施例对本发明进行了详细的说明,这些详细的说明仅仅限于帮助本领域技术人员理解本发明的内容,并不能理解为对本发明保护范围的限制。本领域技术人员在本发明构思下对上述方案进行的各种润饰、等效变换等均应包含在本发明的保护范围内。
Claims (6)
1.一种磁珠-核酸复合体洗涤液,其特征在于,所述磁珠-核酸复合体洗涤液由粘度介于1000~50000cs之间的硅油构成。
2.根据权利要求1所述的磁珠-核酸复合体洗涤液,其特征在于,硅油粘度介于3000~30000cs之间。
3.根据权利要求1所述的磁珠-核酸复合体洗涤液,其特征在于,硅油粘度介于5000~20000cs之间。
4.将粘度介于1000~50000cs之间的硅油作为磁珠法全自动提取核酸模板的洗涤液的应用。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述硅油被填装于试管内的裂解液和扩增液之间。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述硅油的深度介于30~60mm之间。
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