CN113604480A

CN113604480A - 一种玉米转录因子ZmHsf28及应用

Info

Publication number: CN113604480A
Application number: CN202111094095.4A
Authority: CN
Inventors: 王强; 刘丽君; 谌琴琴; 傅竞也
Original assignee: Sichuan Agricultural University
Current assignee: Sichuan Agricultural University
Priority date: 2021-09-17
Filing date: 2021-09-17
Publication date: 2021-11-05
Anticipated expiration: 2041-09-17
Also published as: CN113604480B

Abstract

本发明公开了一种玉米转录因子ZmHsf28及应用，包括a）或b）任一所述的核苷酸序列：a)SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；b)SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列经替换，缺失或添加碱基形成的具有同等功能的核苷酸序列。该基因编码的蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；该基因对改良、增强植物的抗逆性、加速抗逆分子育种进程具有十分重要的意义。

Description

一种玉米转录因子ZmHsf28及应用

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体地说，涉及一种玉米转录因子Zm Hsf28及应用。

背景技术

玉米作为世界上主要的粮食、饲料和工业级能源作物,需求量日益增加，我国玉米大量依赖进口，提升玉米自主生产关系粮食安全。我国人均耕地面积和水资源有限，培育高产、优质、多抗、广适的玉米新品种是提升我国玉米生产自给率的现实需求。干旱、盐害等非生物胁迫严重影响农业生产，随着全球气候变化、人口増长、可利用淡水量降低、农业用水增加,进一步加剧了对农业生产的影响(Gupta A,Rico-Medina A,

-Delgado A.Thephysiology of plant responses to drought.Science,2020,368(6488):266-269.)。鉴定玉米抗旱、耐盐基因，解析抗旱、抗盐分子机制，挖掘可利用基因资源，是培育抗逆新品种的必须课题，具有重要理论意义和实际应用价值。

转录调控是植物逆境应答中的重要分子机制。转录因子作为植物转录调控中重要的调节因子，它们可以同时激活或者抑制多个下游基因的表达，从而调控植物的生长发育以及逆境胁迫的耐受性(Lehti-Shiu M.D.,Panchy N.,Wang P.,et al.Diversity,expansion,and evolutionary novelty of plant DNA-binding transcription factorfamilies.Biochim Biophys Acta Gene Regul Mech,2017,1860(1):3-20.)。热激因子(Heatsh ockfactor，Hsf)家族在真核生物中广泛存在，植物中的Hsf除了在高温胁迫应答以及耐热性形成过程中具有重要作用外，也参与调控植物生长发育以及其他逆境响应(Scharf KD,Berberich T,Ebersberger I,Nover L.2012.The plant heat stresstranscription factor(Hsf)family:structure,function and evolution.BiochimBiophys Acta 1819(2):104-119.)。Hsf主要作为转录因子发挥作用，根据其结构域差异将其分为A、B和C三个亚家族(Guo M,Liu JH,Ma X,Luo DX,Gong ZH,Lu MH.2016.The PlantHeat Stress Transcription Factors(HSFs):Structure,Regulation,and Function inResponse to Abiotic Stresses.Front Plant Sci 7:114)。目前报道过功能的HSF转录因子较少，拟南芥中报道了AtHsfA2可以参与到干旱、高盐等胁迫；番茄中的StHsfA1a和鹰嘴豆中的CarHs fB2在拟南芥中过表达后可以显著增加拟南芥对干旱的抗性(Nishizawa-Yokoi A,Nosaka R,Hayashi H,et al.HsfA1d and HsfA1e involved in thetranscriptional regulation of HsfA2 function as key regulators for the Hsfsignaling network in response to environmental stress.Plant and cellphysiology.2011,52(5):933-45；Giorno F,Wolters-Arts M,Grillo S,etal.Developmental and heat stress-regulated expression of Hsf A2 and smallheat shock proteins in tomato anthers.Journal of experi mental botany.2010,61(2):453-62；Ma H,Wang C,Yang B,et al.Car HSFB2,a Class B Heat ShockTranscription Factor,Is Involved in Different Developmental Processes andVarious Stress Responses in Chickpea(Cicer Arietinum L.).Plant MolecularBiology Reporter.2015,34(1):1-14.)

玉米中含有30个Hsf转录因子，目前仅有ZmHsfA4、ZmHsf05被报道参与玉米抗旱或抗盐调控(Jiang Y,Zheng Q,Chen L,et al.overex pression of maize heat shocktranscription factor gene ZmHsf04 confers increased thermo and salt-stresstolerance in transgenic Arabidopsis.Acta Physiologiae Plantarum.2017,40(1)；LiGL,Zhang HN,Shao H,et al.ZmHsf05,a new heat shock transcription factor fromZea mays L.improves thermotolerance in Arabidopsis thaliana and rescuesthermotolerance defects of the athsfa2 mutant.Plant science:an internationaljournal of experimental plant biology.2019,283:375-84.)。植物在逆境中为了存活往往会牺牲生长来适应环境，最终导致减产。目前还未见报道有Hsf转录因子既平衡生长发育又响应逆境应答。因此，有必要挖掘一种新的参与生长发育以及逆境响应的玉米Hsf家族转录因子。

发明内容

有鉴于此，本发明针对基于干旱、盐害等非生物胁迫严重影响玉米产量的现状，挖掘既能响应逆境应答又能平衡生长的转录因子，为作物的遗传改良育种提供了一种玉米转录因子ZmHsf28及应用。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种玉米转录因子ZmHsf28，包括a)或b)任一所述的核苷酸序列：

a)SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；

b)SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列经替换，缺失或添加碱基形成的具有同等功能的核苷酸序列。

本发明还公开了一种上述的玉米转录因子ZmHsf28基因编码的蛋白。

可选地，其氨基酸如SEQ ID NO.2所示。

本发明还公开了一种上述的核苷酸序列的玉米转录因子ZmHsf28基因的克隆载体pMD19-ZmHsf28、重组表达载体pCAMBIA3301-p35S::ZmHsf28以及相应的大肠杆菌重组菌株、GV3101农杆菌重组菌

本发明还公开了一种含有上述的重组表达载体pCAMBIA3301-p35S::ZmHsf28的宿主细胞。

本发明还公开了一种玉米转录因子ZmHsf28基因的制备方法，该方法中用到的扩增引物序列包括F：5’-GACAAGGCAAGGCAACTGATG-3’，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，以及R：5’-CGCCTGCTCGTCATTCAGTAC-3’，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

本发明还公开了一种上述的重组表达载体pCAMBIA3301-p35S::ZmHsf 28的构建方法，该方法中用到的亚克隆引物，亚克隆引物包括F:5’-ACGGGGGACTCTTGACCATGGATGGCGGCGGGCGGCGGAG-3’，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，以及R:5’-TAGAAATTTACCCTCAGATCTTCAGTACCCCGCGTCCACG-3’，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

本发明还公开了一种上述的玉米转录因子ZmHsf28基因在参与植物生长、抗旱及耐盐调控中的应用。

可选地，所述植物为玉米、拟南芥或者水稻。

与现有技术相比，本发明可以获得包括以下技术效果：

本发明的ZmHsf28蛋白及其编码的基因对改良、增强植物的抗逆性、加速抗逆分子育种进程具有十分重要的意义。

当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。

附图说明

此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本发明的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：

图1是本发明pMD19-ZmHsf28的载体图谱；

图2是本发明pCAMBIA3301-35s::ZmHsf28的载体图谱；

图3是本发明pBGV002-35s::ZmHsf28的载体图谱；

图4是本发明玉米转录因子ZmHsf28调控植物的生长示意图，图中WT：野生型；OE1-3：ZmHsf28过表达后的三个株系；其中，A，B：代表野生型拟南芥和过表达株系正常生长下，叶片的表型及叶片宽度的测量；C，D：代表野生型拟南芥和过表达株系正常生长下，株高的表型及株高的测量；E，F：代表野生型水稻和过表达株系正常生长下，根的表型及根长的测量；

图5是本发明玉米转录因子ZmHsf28提高植物的抗旱能力；图中WT：野生型；OE1-3：ZmHsf28过表达后的三个株系；其中，A，B：代表300mM Mannitol处理下，野生型拟南芥及过表达株系根的生长表型及根长的测量；C，D:代表自然干旱下，野生型拟南芥及过表达株系的生长及植株失水率的测量；E，F:代表自然干旱处理下，野生型水稻及过表达株系的生长表型及存活率的测量；

图6是本发明玉米转录因子ZmHsf28提高植物的耐盐性；图中WT：野生型；OE1-3：ZmHsf28过表达后的三个株系；其中，A，B：代表100mMNaCl处理下，平板上生长的野生型拟南芥和过表达株系根的生长表型及根长的测量；C：代表250mM NaCl处理下，野生型拟南芥和过表达株系的生长表型；D：代表野生型水稻和过表达株系在正常条件和150mM NaCl处理下植株的生长表型。

具体实施方式

以下将配合实施例来详细说明本发明的实施方式，藉此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。

以下实施例中未做具体说明的分子生物学实验方法，均参照《分子克隆实验指南》(第三版)J.萨姆布鲁克一书中所列的具体方法进行，或按试剂盒和产品说明书进行。

实施例1ZmHsf28基因的克隆

通过maizeGDB(https://www.maizegdb.org/)以及plantTFDB(http://planttfdb.cbi.pkμ.edμ.cn/)数据库查询玉米中Hsf家族基因，利用CLC Sequence viewer对这些基因进行同源比对并利用iTOL(http://planttfdb.cbi.pkμ.edμ.cn/)构建系统进化树分析Hsf转录因子间的进化关系并进行分类后，查找到ZmHsf28完整开放阅读框设计特异引物(F：5’-GACAA GGCAA GGCAA CTGAT G-3’，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，以及R：5’-CGCCTGCTCGTCATTCAGTAC-3’，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示)进行克隆。

基因克隆选用玉米自交系Mo17(市售)两周大小植株，用水培和土培两种方式培养。水培采用40％霍格兰溶液培养，每间隔一天更换一次营养液，土培则种植于营养土中，所用玉米种子均用3％的过氧化氢溶液消毒、无菌水浸泡4h后种植。培养温度均为28℃，16h光照，8h黑暗交替培养。培养至第二叶完全展开后，用20％PEG6000处理玉米24小时，利用Trizol法提取RNA，并反转录为cDNA，通过特异引物(核苷酸序列如SEQ ID NO.3和4所示)进行扩增，获得ZmHsf28基因片段大小为804bp，其cDNA序列如SEQ ID NO.1所示，该转录因子源于玉米Mo17，其氨基酸序列SEQ ID NO.2所示，由268个氨基酸(*代表终止密码子)残基组成，是HsfC类转录因子。DNA结合结构域位于氨基酸N端1至102位区域内，寡聚化结构域位于氨基酸103至200位区域内，核定位信号位于201至267位区域内，并将ZmHsf28基因片段重组到载体pMD19上，通过蓝白斑筛选、阳性克隆酶切和测序分析，得到重组质粒pMD19-ZmHsf28，其载体图谱如图1所示。

实施例2：重组表达载体的构建

以pMD19-ZmHsf28为模板，利用包含载体同源臂以及酶切位点(下划线：Nco I和Bgl II)的亚克隆引物：F:5’-ACGGGGGACTCTTGACCATGGATGGCGGCGGGCGGCGGAG-3’(其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示)，R:5’-TAGAAATTTACCCTCAGATCTTCAGTACCCCGCGTCCACG-3’(其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示)进行扩增，将扩增片段进行胶回收后，正向插入载体pCAMBIA3301，得到重组载体pCAMBIA3301-35s::Zm Hsf28，其载体图谱如图2所示。

以pMD19-ZmHsf28为模板，设计亚克隆引物F：5’-CAGTGGTCTCACTCTATGGCGGCGGGCGGCGGAG-3’(其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示)，R：5’-CAGTGGTCTCACTGCTCAGTACCCCGCGTCCACG-3’(其核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示)在基因序列两端加BsaI酶切位点(下划线为酶切位点及保护碱基)；所用载体与扩增的基因序列，用BsaI酶切后T4连接酶连接构建过表达载体pBGV002-35s::ZmHsf28，其载体图谱如图3所示。

实施例3：ZmHsf28稳定过表达株系的建立：

1)采用融冻法将重组质粒pCAMBIA3301-35s::ZmHsf28转化农杆菌感受态GV3101，取重组质粒1μg加入到200μL感受态细胞中后立即冰浴30min，之后依次进行以下步骤：液氮速冻5min；37℃水浴5min，液氮速冻3-5min；37℃水浴5min，最后冰浴5min，反复冻融后立即加入无菌的800μL YEP液体培养基，置于28℃条件下，200r/min震荡培养3h后，涂布于含有50mg/L Rif、50mg/L Gen、50mg/L Kan的抗生素固体培养基上，置于28℃恒温培养箱培养2d。

2)待单克隆菌落长出后，利用PCR检测是否转化成功，凝胶电泳检测，将转化成功的单克隆菌落转移至含相同抗生素的100mL YEP液体培养基中扩大培养至菌液浓度约为OD＝0.8。

3)取培养好的菌液在5000r/min，5min条件下离心，留沉淀。用含0.05％Silwet L-77的100mL 5％蔗糖溶液重悬，待菌体充分重悬后，便可用作侵染液。

4)取生长状态良好的野生型且处于盛花期的拟南芥，将花序浸没在侵染液中，保持20-30s后立即取出，将植株平放于相对湿度较高的黑暗培养室中暗处理8-12h，然后取出拟南芥，将其置于正常光照和温度的生长室中生培养，此侵染过程均重复三次，每次间隔一周。

5)待侵染的植株成熟结种，收取成熟饱满的果荚，将种子储存于干燥的含变色硅胶的EP管中干燥一周后播种培育成苗，由于pCAMBIA3301-p35S::ZmHsf28具有草铵膦的抗性据此来筛选阳性植株。通过多代筛选，最后筛选得到稳定纯合的过表达拟南芥植株。

6)待拟南芥植株长进入8叶期后，取少量叶片(约0.2g左右)提取植物DNA，利用ZmHsf28表达载体构建的亚克隆引物(F:5’-ACGGGGGACTCTTGACCATGGATGGCGGCGGGCGGCGGAG-3’(其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示)，R:5’-TAGAAATTTACCCTCAGATCTTCAGTACCCCGCGTCCACG-3’(其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示))来检测目的基因是否成功插入拟南芥的基因组中，以哥伦比亚野生型拟南芥为对照。确定ZmHsf28成功插入基因组后，再取适量叶片(0.5g左右)提取植物总RNA，通过反转录成单链cDNA，PCR检测ZmHsf28是否成功表达。

对ZmHsf28能够成功表达的并且能稳定遗传的T3代纯合拟南芥株系编号，收取成熟果夹，干燥保存，用作后续实验。

实施例4：ZmHsf28水稻稳定过表达株系的建立

1)愈伤诱导与继代。挑选当年新收的成熟水稻种子，剥离颖壳，倒入50mL离心管中，先后用75％乙醇消毒1min和30％次氯酸钠消毒20min，消毒后将种子转移到诱导培养基上(诱导培养基：NB培养基4.10g/L，蔗糖30g/L，水解酪蛋白0.25g/L，脯氨酸0.5g/L，谷氨酰胺0.25g/L，2,4-D 2mg/L，琼脂3.5g/L，PH 5.8)，每皿20-25颗种子。愈伤长出后可用原胚直接做转化，也可继代培养后进行转化。

2)农杆菌培养。将含有重组质粒pBGV002-35s::ZmHsf28的农杆菌EHA105在含有相应抗生素的平板上划线，28℃黑暗培养2天至出现单菌落，(具体操作同实施例3)。

3)农杆菌侵染。用AAM侵染液重悬菌体至OD₆₀₀为0.3-0.5，即为共培养转化水稻用的农杆菌悬浮液。挑选长势好的水稻愈伤放入100mL无菌三角瓶中，加入适量农杆菌悬浮液(保证有足够的菌液与材料接触即可)，室温放置侵染20分钟，并不时晃动。倒掉菌液，将愈伤组织放在无菌滤纸上吸去多余菌液，随即转移到固体共培养基上，26℃黑暗培养3天。

4)筛选培养。对共培养3天后的愈伤组织进行用无菌水清洗2遍，第三遍用含有50mg/L羧苄青霉素的无菌水冲洗一遍，将愈伤吹干后转移到筛选培养基上进行筛选培养(筛选培养基是在诱导培养基里加入了50mg/L的潮霉素和50mg/L的羧苄青霉素)，28-30度暗培养一个月。

5)分化再生。筛选一个月后，可见颜色鲜黄，直径1-2mm的阳性愈伤长出，此时可将阳性愈伤挑取到分化培养基上进行分化再生(I L分化培养基含有MS培养基4.4g，蔗糖30g，山梨醇30g，NAA 1mg，KT 2mg，脯氨酸0.5g，水解酪蛋白0.25g，谷氨酰胺0.5g，潮霉素50mg,羧苄青霉素50mg，琼脂3.5g，PH 5.8)，置于28-30度温室中光照培养。10天后愈伤将冒出绿点，再经过10天培养会有幼苗分化出。

6)幼苗生根。待分化出的幼苗长到2-3cm左右，有明显根系的时候就可以将幼苗转移到生根培养基上(MS培养基4.4g，蔗糖30g，潮霉素50mg,羧苄青霉素50mg，琼脂3.5g，PH5.8)，生根培养基倒在15cm的瓶子里，生根培养条件28-30度，无菌光照培养。

7)转化株系的阳性鉴定

待水稻长出根后，将其移栽到花盆中，存活后取少量叶片(约0.2g左右)提取植物DNA，利用亚克隆引物F：5’-CAGTGGTCTCACTCTATGGCGGCGGGCGGCGGAG-3’(其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示)，R：5’-CAGTGGTCTCACTGCTCAGTACCCCGCGTCCACG-3’(其核苷酸序列如SEQID NO.8所示)来检测目的基因是否成功插入水稻的基因组中，以野生型为对照。确定ZmHsf28成功插入基因组后，再取适量叶片(0.5g左右)提取植物总RNA，通过反转录成单链cDNA，PCR检测ZmHsf28是否成功表达。

实施例5 1/2MS组织培养拟南芥

当获得ZmHsf28稳定过表达株系后，将野生型和过表达株系种子干燥一周左右，对种子进行表面消毒，具体步骤如下：

1)消毒准备：无菌水、无菌枪头、75％乙醇、2％的次氯酸钠溶液以及紫外灭菌的移液枪；

2)取适量干净成熟的拟南芥种子在无菌条件下，首先用无菌水清洗种子2-3次，之后加入1mL75％乙醇，表面杀菌消毒种子15-30s；

3)待乙醇清洗完成后，用移液枪去除乙醇后，用无菌水清洗2次；

4)在经无菌水清洗后的种子EP管中加满2％的次氯酸钠溶液，振荡消毒10-15min。

5)用无菌水清洗种子5-7次，洗净次氯酸钠的残留，至此种子消毒工作完成；

经消毒后的种子用无菌封口膜密封，置于4℃培养箱中春化1d，春化后的种子在无菌环境下，点种在1/2MS培养基上生长三天(两叶期)，随后将野生型和ZmHsf28过表达拟南芥苗子移至含有250mM Mannitol、100mM NaCl的1/2MS固体培养基上，待其生长14d左右统计根长。

实施例6：对拟南芥进行胁迫处理

野生型及过表达株系在生长室(温度：22℃；16h光照，8h黑暗)培养4周后，分别进行自然干旱处理、盐胁迫处理。自然干旱处理周期为10天，随后进行复水，3天后观察生长表型，并统计存活率。盐胁迫处理用250mM NaCl浇灌拟南芥，10天后观察表型。

在拟南芥中，当过表达株系生长到第4周时，过表达株系的生长状况优于野生型(图4A)。测定野生型和过表达株系的整株莲座叶，发现叶片的数量没有明显的差异，但过表达株系的叶更宽、更长，选定第6、7叶进行叶片宽度测定，结果表明过表达株系第6、7叶比野生型更宽(图4B)。随后测定生长六周的拟南芥株高，过表达株系的株高显著高于野生型(图4C-D)。这些结果表明，ZmHsf28过表达后促进了拟南芥的生长。

使用250mM甘露醇对幼苗进行渗透胁迫处理，结果发现生长14天的野生型和过表达拟南芥植株的根系生长都受到抑制，但过表达株系根受到的抑制作用低于野生型(图5A-B)。对生长4周的拟南芥进行自然干旱处理，干旱10天后过表达株系和野生型叶片萎焉，生长受到影响，复水3天后，过表达株系恢复生长，其存活率明显高于野生型(图5C)。同时测定野生型与过表达株系的失水率，结果发现过表达株系的失水率低于野生型(图5D)。

用100mM NaCl处理时，生长14天的野生型根受到明显抑制，而OE株系的根更长(图6A-B)，表明ZmHsf28可以调控根的生长去响应盐胁迫。随后用250mM NaCl处理生长4周的拟南芥，处理10天后，过表达株系的存活率高于野生型(图6C)，进一步表明ZmHsf28过表达后会提高拟南芥的抗盐能力。

实施例7：对水稻进行胁迫处理

野生型及过表达水稻在培养箱(温度：28℃；16h光照，8h黑暗)中进行水培培养，生长2周后，进行干旱处理、盐胁迫处理。水培营养液配方：

干旱处理前将水培盒中的营养液增至800mL，干旱过程中不再添加营养液，10天后观察表型。盐胁迫处理时，添加NaCl到水培营养液至终浓度150mM，处理6天后观察表型。

水稻正常生长7天后，发现过表达株系的根比野生型更长，说明ZmHsf28过表达水稻后促进了水稻根的生长(图4E-F)。这些结果表明，ZmHsf28参与生长发育的调控。

对水稻过表达株系及野生型进行干旱处理10天后发现野生型和过表达均有萎焉表型，但复水5天后过表达株系存活率更高(图5E-F)。这些结果表明，ZmHsf28过表达后能增强植物的抗旱能力。

用150mM NaCl处理生长14天的水稻，处理6天后野生型枯萎，而过表达株系表现出更高的耐盐性(图6D)。这些结果表明，ZmHsf28过表达后能增强植物的耐盐性。

这些结果表明ZmHsf28蛋白及其编码的基因对改良、增强植物的抗逆性、加速抗逆分子育种进程具有十分重要的意义。

上述说明示出并描述了发明的若干优选实施例，但如前所述，应当理解发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离发明的精神和范围，则都应在发明所附权利要求的保护范围内。

序列表

<110> 四川农业大学

<120> 一种玉米转录因子ZmHsf28及应用

<130> 2021

<160> 8

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 804

<212> DNA

<213> 玉米(corn)

<400> 1

atggcggcgg gcggcggagg cggctcgccg gcgccgttcg tgtggaagac gtacacgatg 60

gtggaggacc ccgggacggc aggggtgatc ggctggggca gcggcaacaa cagcttcgtc 120

gtcgccgacc ccttcgtctt ctcgcagacg ctgctccccg cgcacttcaa gcacaacaac 180

ttctccagct tcgtccgcca gctcaacacc tatggcttcc gcaaggttga tccggaccgg 240

tgggagttcg cccacgcgtc gttcctgcgc ggccagacgc acctcctgcg caacatcgtc 300

cgccgcggca gcagcgccgc cggtgccgga ggcggaaaga ggaaggacgc cagccccacg 360

gagctggcct ccggggacga catgaccatg gtggccacgg aggtggtgcg cctcaagcaa 420

gagcagcgcg ccatcgacga ccgcgtcgcc tccatgtggc gccgcgtgca ggagacggag 480

cgcaggccca agcagatgct cgcgttcctc ctcaaggtcg tcggcgaccg cgacaggctg 540

caccgcctcg tcggcgacgc ccccgtgcca gataacgggt tcgcctccgg cggtgccgcc 600

gagccgcccg ccgcggaggt cggcgagaag cgggccaggc tgctgctcga cggtgacagc 660

atggtggcgc tcggtcccga ggccgtcgac ttcgccgggt tctacagcgg cggcggtgcg 720

ttcggcgatg ttgccgtgga tgctgccgct gggtcccgcg gaggcgggtt ctcgtttgcg 780

ttcggcgtgg acgcggggta ctga 804

<210> 2

<211> 267

<212> PRT

<213> 玉米(corn)

<400> 2

Met Ala Ala Gly Gly Gly Gly Gly Ser Pro Ala Pro Phe Val Trp Lys

1 5 10 15

Thr Tyr Thr Met Val Glu Asp Pro Gly Thr Ala Gly Val Ile Gly Trp

20 25 30

Gly Ser Gly Asn Asn Ser Phe Val Val Ala Asp Pro Phe Val Phe Ser

35 40 45

Gln Thr Leu Leu Pro Ala His Phe Lys His Asn Asn Phe Ser Ser Phe

50 55 60

Val Arg Gln Leu Asn Thr Tyr Gly Phe Arg Lys Val Asp Pro Asp Arg

65 70 75 80

Trp Glu Phe Ala His Ala Ser Phe Leu Arg Gly Gln Thr His Leu Leu

85 90 95

Arg Asn Ile Val Arg Arg Gly Ser Ser Ala Ala Gly Ala Gly Gly Gly

100 105 110

Lys Arg Lys Asp Ala Ser Pro Thr Glu Leu Ala Ser Gly Asp Asp Met

115 120 125

Thr Met Val Ala Thr Glu Val Val Arg Leu Lys Gln Glu Gln Arg Ala

130 135 140

Ile Asp Asp Arg Val Ala Ser Met Trp Arg Arg Val Gln Glu Thr Glu

145 150 155 160

Arg Arg Pro Lys Gln Met Leu Ala Phe Leu Leu Lys Val Val Gly Asp

165 170 175

Arg Asp Arg Leu His Arg Leu Val Gly Asp Ala Pro Val Pro Asp Asn

180 185 190

Gly Phe Ala Ser Gly Gly Ala Ala Glu Pro Pro Ala Ala Glu Val Gly

195 200 205

Glu Lys Arg Ala Arg Leu Leu Leu Asp Gly Asp Ser Met Val Ala Leu

210 215 220

Gly Pro Glu Ala Val Asp Phe Ala Gly Phe Tyr Ser Gly Gly Gly Ala

225 230 235 240

Phe Gly Asp Val Ala Val Asp Ala Ala Ala Gly Ser Arg Gly Gly Gly

245 250 255

Phe Ser Phe Ala Phe Gly Val Asp Ala Gly Tyr

260 265

<210> 3

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial SEQuence)

<400> 3

gacaaggcaa ggcaactgat g 21

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial SEQuence)

<400> 4

cgcctgctcg tcattcagta c 21

<210> 5

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial SEQuence)

<400> 5

acgggggact cttgaccatg gatggcggcg ggcggcggag 40

<210> 6

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial SEQuence)

<400> 6

tagaaattta ccctcagatc ttcagtaccc cgcgtccacg 40

<210> 7

<211> 34

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial SEQuence)

<400> 7

cagtggtctc actctatggc ggcgggcggc ggag 34

<210> 8

<211> 34

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial SEQuence)

<400> 8

cagtggtctc actgctcagt accccgcgtc cacg 34

Claims

1.一种玉米转录因子ZmHsf28基因，其特征在于，包括a）或b）任一所述的核苷酸序列：

a)SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；

2.一种权利要求1所述的玉米转录因子ZmHsf28基因编码的蛋白。

3.根据权利要求2所述的蛋白，其特征在于，其氨基酸如SEQ ID NO.2所示。

4.一种含有权利要求1所述的核苷酸序列的玉米转录因子ZmHsf28基因的克隆载体pMD19-ZmHsf28、重组表达载体pCAMBIA3301- p35S::ZmHsf28以及相应的大肠杆菌重组菌株、GV3101农杆菌重组菌株。

5.一种含有权利要求4所述的重组表达载体pCAMBIA3301- p35S::ZmHsf28的宿主细胞。

6.一种玉米转录因子ZmHsf28基因的制备方法，其特征在于，该方法中用到的扩增引物序列包括F：5’-GACAAGGCAAGGCAACTGATG-3’，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，以及R：5’-CGCCTGCTCGTCATTCAGTAC -3’，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

7.一种权利要求4所述的重组表达载体pCAMBIA3301- p35S::ZmHsf28的构建方法，其特征在于，该方法中用到的亚克隆引物，亚克隆引物包括F: 5’-ACGGGGGACTCTTGACCATGGATGGCGGCGGGCGGCGGAG -3’，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，以及R: 5’-TAGAAATTTACCCTCAGATCTTCAGTACCCCGCGTCCACG-3’，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

8.权利要求1所述的玉米转录因子ZmHsf28基因在参与植物生长、抗旱及耐盐调控中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述植物为玉米、拟南芥或者水稻。