CN113603779A

CN113603779A - 一种结合人淋巴细胞活化基因3(lag-3)的抗体及其用途

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Publication number: CN113603779A
Application number: CN202110947010.6A
Authority: CN
Inventors: 彭洁
Original assignee: Shenzhen Yuangu Biotechnology Co ltd
Current assignee: Shenzhen Yuangu Biotechnology Co ltd
Priority date: 2021-08-18
Filing date: 2021-08-18
Publication date: 2021-11-05
Anticipated expiration: 2041-08-18
Also published as: CN113603779B; WO2023019945A1

Abstract

本发明涉及一种结合人淋巴细胞活化基因3(LAG‑3)的抗体及其用途。具体而言，所述抗体或其抗原结合片段包括：(a)包含SEQ ID NO:5的重链CDR1、包含SEQ ID NO:6的重链CDR2和包含SEQ ID NO:7的重链CDR3；以及(b)包含SEQ ID NO:8的轻链CDR1、包含SEQ ID NO:9的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:10的轻链CDR3。本发明的抗体特异性识别LAG‑3蛋白的同时能够有效阻断MHCII或FGL1与LAG‑3分子的结合，具有潜在的抑瘤活性。

Description

一种结合人淋巴细胞活化基因3(LAG-3)的抗体及其用途

技术领域

本发明属于肿瘤免疫治疗领域，涉及一种高亲和力靶向人淋巴细胞活化基因3(LAG-3)的抗体药物及其药物组合相关的用途。具体而言，本发明大体上涉及一种结合LAG-3的抗体及其用途。本发明大体上还涉及编码所述抗体的核酸分子，生产所述抗体的细胞，以及使用所述抗体治疗如癌症等疾病的方法。

背景技术

为了防止人体由于过度的免疫反应而破坏组织，免疫系统具有多种负反馈调节机制来平衡机体免疫应答的水平和强度。同样，肿瘤也可以利用负调节机制逃逸免疫系统的监视。其中，包括程序性细胞死亡1(PD-1)和细胞毒性T细胞抗原4(CTLA-4)，在限制自身组织和肿瘤细胞的免疫反应中起着关键检查点的作用。阻断PD-1和CTLA-4通路的免疫检查点抑制剂显著改善了不同癌症类型患者的预后，并彻底改变了癌症治疗的策略。然而，部分患者对这类疗法的反应率有限，而且在大量患者中也观察到与免疫有关的不良事件，因此迫切需要具有更高疗效和更低毒性的新治疗技术。除了PD-1和CTLA-4，多种共刺激和共抑制受体协同参与调节T细胞的活化。这些辅助受体是潜在的药物靶点，开发针对这些辅助受体的新型免疫疗法的竞争非常激烈。在众多分子中，淋巴细胞活化基因3(LAG-3)有望成为仅次于PD-1的肿瘤治疗的首要靶点，目前多项靶向LAG-3疗法正在进行多项临床试验。

文献报道，LAG-3分子同时存在四个配体分子，包括主要组织相容性复合体II(MHCII)、C型凝集素受体LSEtin、半乳糖凝集素-3(galectin-3)以及纤维蛋白样蛋白1(FGL1)。其中，MHCII和FGL1被证实是LAG-3分子产生免疫抑制，发挥免疫逃逸的关键配体分子。因此，通过抗体阻断LAG-3与MHCII以及FGL1的作用可以有效地解除肿瘤微环境中的免疫抑制状态，恢复免疫系统杀伤肿瘤的能力。LAG-3与MHCII分子的结合位置位于LAG-3的第一个结构域富含脯氨酸的环状结构中。FGL1是最新发现的一个与LAG-3免疫抑制功能密切相关的配体分子，其与LAG-3分子识别的区域与MHCII分子识别的区域空间上靠近但并不重叠，而且两个配体分子独立发挥免疫抑制功能。因此设计靶向LAG-3分子的抗体如果能够同时阻断MHCII、FGL1与LAG-3分子的相互作用，理论上可以更有效地解除LAG-3介导的免疫抑制，增强免疫系统抗肿瘤效应。

杂交瘤技术是目前获得治疗性抗体的主流技术之一，但是通过杂交瘤技术获得的鼠源抗体在人体内具有较强的免疫原性，半衰期短，需要经过人源化改造才能进一步应用。因此，获得免疫原性低的人源抗体成为抗体药物研发的热门领域。获取人源抗体的主要手段包括：噬菌体人源抗体库、转基因小鼠以及单个B细胞技术。其中，转基因小鼠技术具有较高的技术和专利壁垒，不能广泛普及。单个B细胞技术需要从感染或者接种疫苗的人群的外周血获取抗体，具有一定的供者和伦理限制。而基于噬菌体人源抗体库获取人源抗体具有筛选周期短、人源程度高等优势，减少了后续抗体工程化改造的流程。

FGL1是最新(2019年)发现的LAG-3配体分子，因此很多处于临床前研究的LAG-3抗体没有考虑其是否阻断LAG-3与FGL1的结合作用。

专利文献CN110678484A提供一种抗PD-L1/抗LAG3双特异性抗体，其能够结合MHCII类分子和/或FGL1，从而阻断LAG-3与它们的结合。其用杂交瘤技术产生抗人LAG-3小鼠单克隆抗体，然后人源化产生人源化抗体。

WO2019141092公开了一种抗LAG-3抗体，其能够阻断LAG-3结合MHC II和/或FGL1。其也是首先开发鼠源抗体，然后进行改造，开发该鼠源抗体的人源化抗体。

然而，这些技术都要进行杂交瘤人源化改造过程，因此人们期望开发具有更低的免疫原性的抗LAG3抗体。

发明内容

本发明基于上面的研究背景，通过天然全人源噬菌体抗体库筛选高亲和力新型抗LAG-3人源抗体，并通过实验证明抗体特异性识别LAG-3蛋白的同时能够有效阻断MHCII或FGL1与LAG-3分子的结合，具有潜在的抑瘤活性。

本次公开的专利专门验证了所筛选获得的高亲和力新型抗LAG-3人源抗体，具有同时阻断LAG-3与MHCII和/或FGL1作用的能力，认为其具有更全面的药理学特性。

在一个方面，本发明提供一种结合人淋巴细胞活化基因3(LAG-3)的抗体，或其抗原结合片段，其包括：(a)包含SEQ ID NO:5的重链CDR1、包含SEQ ID NO:6的重链CDR2和包含SEQ ID NO:7的重链CDR3；以及(b)包含SEQ ID NO:8的轻链CDR1、包含SEQ ID NO:9的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:10的轻链CDR3。

在一个实施方式中，抗体包括：与氨基酸序列SEQ ID NO:1具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的重链可变区；和与氨基酸序列SEQ ID NO:2具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的轻链可变区。

在一个实施方式中，抗体包括：与氨基酸序列SEQ ID NO:11具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的重链；和与氨基酸序列SEQ IDNO:12具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的轻链。

在一个实施方式中，所述抗体是全人源抗体。

在一个实施方式中，所述抗体结合人LAG-3和/或猴LAG-3。

在一个实施方式中，所述抗体抑制LAG-3与主要组织相容性复合体II(MHCII)结合，和/或抑制LAG-3与纤维蛋白样蛋白1(FGL1)结合。

在另一方面，本发明提供一种分离的核酸分子，其编码上文所述的抗体。

在一个实施方式中，分离的核酸分子包含：编码所述抗LAG-3抗体的重链可变区的核酸序列SEQ ID NO:3；和编码所述抗LAG-3抗体的轻链可变区的核酸序列SEQ ID NO:4，或者包含：编码所述抗LAG-3抗体的重链的核酸序列SEQ ID NO:13；和编码所述抗LAG-3抗体的轻链的核酸序列SEQ ID NO:14。

在又一方面，本发明提供一种细胞，其产生上文所述的抗体，或者包含上文所述的核酸分子。

在又一方面，本发明提供上文所述的抗体、或者上文所述的核酸分子、或者上文所述的细胞在制备用于治疗、预防和/或诊断癌症或感染性疾病的药物中的用途，优选的是，所述癌症选自黑色素瘤、非小细胞性肺癌、结肠直肠癌、前列腺癌、乳腺癌、头颈癌、结直肠癌、胰腺癌、血液学癌、非霍奇金淋巴瘤或白血病或癌症的转移性病灶。

本发明的有益效果

相对于现有技术，本发明主要具有以下有益效果。

1.本发明的LAG-3抗体是从全人源抗体库里面筛选获得的，是全人源的，不需要经过杂交瘤人源化改造过程，因此具有更低的免疫原性。因此，本发明的全人源抗体可较安全地施用给人受试者，最大程度避免引发免疫原性反应，具有重大的临床价值。

2.本发明的LAG-3抗体亲和力比CN110678484A、WO2019141092等文献中的要高，能更好的靶向LAG-3和/或FGL1产生阻断效应。

3.本发明验证了本发明的靶向LAG3的抗体与PD-1抗体具有联用的效果，与现有技术的单独PD-1抗体或LAG3抗体相比，具有更明确的抑瘤效果。

附图说明

图1显示噬菌体筛选投入/产出比。

图2显示ELISA法测定噬菌体上清结合活性。

图3显示还原SDS-PAGE检测抗体完整性。

图4显示SEC检测抗体完整性。

图5显示克隆号C8结合/解离拟合曲线图。

图6显示抗体与人LAG-3抗原结合活性。

图7显示抗体与人LAG-3D1-2抗原结合活性。

图8显示抗体阻断LAG-3与MHCII结合活性。

图9显示抗体阻断LAG-3与FGL1结合活性。

图10显示抗体联合治疗抑瘤活性。其中，A小鼠肿瘤增殖曲线B小鼠体重增长曲线。

具体实施方式

现参照下列意在举例说明本发明(而非限定本发明)的实施例来描述本发明。

1.抗体

在一个实施方式中，所述抗体包括：与氨基酸序列SEQ ID NO:1具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的重链可变区；和与氨基酸序列SEQ ID NO:2具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的轻链可变区。

在一个实施方式中，所述抗体包括：与氨基酸序列SEQ ID NO:11具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的重链；和与氨基酸序列SEQ IDNO:12具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的轻链。

与指定多肽的氨基酸序列具有一定同一性的序列可以称为该多肽的变体。多肽的变体可以通过在多肽序列内进行氨基酸添加或插入、缺失、置换等来产生。在优选实施方式中，这些添加或插入、缺失、置换是保守性修饰，特别优选保守性置换。保守性修饰可产生的肽具有与原始肽相似的功能、物理和化学特性以及生理活性。

保守性置换意指不会不利地影响或改变包含氨基酸序列的蛋白/多肽的预期性质的氨基酸置换。例如，可通过本领域内已知的标准技术例如定点诱变和PCR介导的诱变引入保守置换。保守氨基酸置换包括用具有相似侧链的氨基酸残基替代氨基酸残基的置换，例如用在物理学上或功能上与相应的氨基酸残基相似(例如具有相似大小、形状、电荷、化学性质，包括形成共价键或氢键的能力等)的残基进行的置换。已在本领域内定义了具有相似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括具有碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸和组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β分支侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。因此，优选用来自相同侧链家族的另一个氨基酸残基替代相应的氨基酸残基。

在一个优选实施方式中，本发明抗体的重链、重链可变区、轻链和轻链可变区的氨基酸修饰是发生在除重链CDR1-CDR3和轻链CDR1-CDR3之外的保守性置换。

在一个实施方式中，所述抗体是全人源抗体。

本发明的全人源抗体可较安全地施用给人受试者，最大程度避免引发免疫原性反应。本发明的抗体具有重大的临床价值。

在一个实施方式中，所述抗体结合人LAG-3和/或猴LAG-3。

本发明的全人源LAG-3抗体的筛选及制备方法，具体实施过程如下：

1)天然噬菌体抗体库筛选抗LAG-3抗体；

2)抗体理化性质分析；

3)ELISA测定抗体与人LAG-3结合活性；

4)ELISA测定抗体与人LAG-3D1-2结合活性；

5)抗体阻断Raji(MHCII)/LAG-3结合活性；

6)抗体阻断FGL1/LAG-3结合活性；

7)抗体体内抑瘤活性。

以下参照实施例的步骤详细描述抗LAG-3人源抗体的筛选及制备过程。筛选及制备本发明抗体的方法仅仅是说明相关方法，并非是限制性的；也可以采用其他已知的方法，或者采用修改的方法。

2.核酸分子

具体而言，该分离的核酸分子包含编码本发明的抗体或其抗原结合片段，或其重链可变区和/或轻链可变区的核苷酸序列。在某些优选的实施方案中，所述分离的核酸分子编码本发明的抗体或其抗原结合片段，或其重链可变区和/或轻链可变区。

在某些优选的实施方案中，所述分离的核酸分子包含分别编码本发明的抗体或其抗原结合片段的重链可变区和轻链可变区的第一核酸和第二核酸，或分别编码本发明的抗体或其抗原结合片段的重链可变区和重链恒定区的第一核酸和编码其轻链可变区和轻链恒定区的第二核酸，或分别编码本发明的抗体或其抗原结合片段的重链和轻链的第一核酸和第二核酸，或与所述第一核酸和第二核酸基本上相同的序列。

在某些优选的实施方案中，本发明提供了一种分离的核酸分子，其包含编码抗体重链可变区的核酸分子，和/或编码抗体轻链可变区的核酸分子，其中，所述编码抗体重链可变区的核酸分子具有选自下列的序列：(a)如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列，或(b)与(a)所述的核苷酸序列基本上相同的序列(例如，与(a)所述的核苷酸序列相比，具有至少大约85％、90％、95％、99％或更高序列同一性的序列，或具有一个或更多个核苷酸取代的序列)，或(c)与(a)所述的核苷酸序列相差不超过3、6、15、30或45个核苷酸的序列；所述编码抗体轻链可变区的核酸分子具有选自下列的序列：(d)如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列，或(e)与(d)所述的核苷酸序列基本上相同的序列(例如，与d)所述的核苷酸序列相比，具有至少大约85％、90％、95％、99％或更高序列同一性的序列，或具有一个或更多个核苷酸取代的序列)，或(f)与(d)所述的核苷酸序列相差不超过3、6、15、30或45个核苷酸的序列。

在某些优选的实施方式中，所述编码抗体重链可变区的核酸分子具有如SEQ IDNO:3所示的核苷酸序列，以及所述编码抗体轻链可变区的核酸分子具有如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列。

例如，在一个实施方式中，分离的核酸分子包含：编码所述抗LAG-3抗体的重链可变区的核酸序列SEQ ID NO:3；和编码所述抗LAG-3抗体的轻链可变区的核酸序列SEQ IDNO:4；或者包含：编码所述抗LAG-3抗体的重链的核酸序列SEQ ID NO:13；和编码所述抗LAG-3抗体的轻链的核酸序列SEQ ID NO:14。

3.表达载体

本发明的抗体可以本领域已知的各种方法来制备，例如通过基因工程重组技术来获得。例如，通过化学合成或PCR扩增获得编码本发明抗体的重链和轻链基因的DNA分子。将所得DNA分子插入表达载体内，然后转染宿主细胞。然后，在特定条件下培养转染后的宿主细胞，并表达本发明的抗体。

因此，在另一个方面，本发明提供了一种载体(例如克隆载体或表达载体或表达构建体)，其包含本发明的分离的核酸分子。在某些优选的实施方案中，所述载体能够在受试者(例如哺乳动物，例如人)体内表达本发明的抗体或其抗原结合片段。

表达载体是本领域技术人员公知的，包括但不限于：质粒；粘粒；噬菌粒；柯斯质粒；人工染色体，例如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1来源的人工染色体(PAC)；噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体及动物病毒等。可用作载体的动物病毒包括但不限于，逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如SV40)。某些优选的实施方案中，本发明的表达载体是例如质粒，粘粒，噬菌体等。

4.细胞

在又一方面，本发明提供一种宿主细胞，其产生上文所述的抗体，或者包含上文所述的核酸分子。

作为制备该细胞的方法，可以举出将编码所述抗体的核酸分子引入合适的表达载体，然后转染宿主细胞的方法。

可用于导入表达载体的细胞包括但不限于，如大肠杆菌或枯草菌等的原核细胞，如酵母细胞或曲霉菌等的真菌细胞，如S2果蝇细胞或Sf9等的昆虫细胞，或者如纤维原细胞，CHO细胞，COS细胞，NS0细胞，HeLa细胞，BHK细胞，HEK 293细胞或人细胞等的动物细胞。

5.制药用途

在又一方面，本发明提供上文所述的抗体、或者上文所述的核酸分子、或者上文所述的细胞在制备用于治疗、预防和/或诊断癌症或感染性疾病的药物中的用途。

在一个实施方式中，癌症选自黑色素瘤、非小细胞性肺癌、结肠直肠癌、前列腺癌、乳腺癌、头颈癌、结直肠癌、胰腺癌、血液学癌、非霍奇金淋巴瘤或白血病或癌症的转移性病灶。

在一个实施方式中，癌症选自黑色素瘤、非小细胞性肺瘤、结肠直肠瘤、前列腺瘤、乳腺瘤、头颈瘤、结直肠瘤、胰腺瘤、血液学瘤、非霍奇金淋巴瘤或白血病或癌症的转移性病灶。

6.药物组合物、治疗方法和施用

在又一方面，本发明提供一种药物组合物，其包含治疗有效量的上文所述的抗体、或者上文所述的核酸分子、或者上文所述的细胞，以及一种或多种药学上可接受的载体。

在某些优选的实施方式中，所述药物组合物还可以包含另外的药学活性剂。在某些优选的实施方式中，所述另外的药学活性剂是具有抗肿瘤活性的药物。在某些优选的实施方案中，所述另外的药学活性剂是用于治疗感染的药物。在某些优选的实施方案中，所述另外的药学活性剂是用于治疗自身免疫性疾病的药物。

某些优选的实施方式中，在所述药物组合物中，本发明的抗体或其抗原结合片段与所述另外的药学活性剂作为分离的组分或作为同一组合物的组分提供。因此，本发明的抗体或其抗原结合片段与所述另外的药学活性剂可以同时、分开或相继施用。

在又一方面，本发明提供一种治疗癌症的方法，其包括向受试对象施用治疗有效量的上文所述的抗体、或者上文所述的核酸分子、或者上文所述的细胞。所述癌症如上文所述。

上述抗体、核酸分子、细胞或组合物可以使用常规的递送方式施用，包括但不限于静脉内施用、腹膜内施用、经口施用、淋巴管内施用、皮下施用、动脉内施用、肌内施用、胸膜内施用、鞘内施用、通过局部导管灌注、瘤内施用。当通过注射施用组合物时，可以通过连续输注或通过单次或多次剂量施用。对于肠胃外施用，其可以以无热原的肠胃外可接受的水溶液形式施用，所述水溶液包含所需的在药学上可接受的载体中的抗体、核酸分子或细胞。用于肠胃外注射的特别合适的载体是无菌蒸馏水，在无菌蒸馏水中将一种或多种抗体、核酸分子或细胞配制为无菌等渗溶液，适当防腐。

一旦配制了药物组合物，就可以将其以溶液、混悬剂、凝胶、乳剂、固体或脱水或冻干粉的形式储存在无菌小瓶中。这样的制剂可以以即用形式或在施用前重构的(例如冻干)形式存储。

“治疗有效量”是指能够引起一种或多种以下作用的量：(1)在一定程度上抑制癌症或肿瘤生长，包括减缓生长或完全生长停滞；(2)癌细胞或肿瘤细胞数量减少；(3)肿瘤体积缩小；(4)抑制(即减少、减缓或完全停止)癌细胞或肿瘤细胞向周围器官的浸润；(5)抑制(即减少、减缓或完全停止)转移；(6)增强抗肿瘤免疫应答，其可能但不是必须导致肿瘤消退或排斥，或(7)在一定程度上缓解与癌症或肿瘤相关的一种或多于一种症状。治疗有效量可根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重以及一种或多于一种抗癌剂在个体中引发所需应答的能力等因素而变化。

实施例

实施例1.天然噬菌体库筛选抗LAG-3抗体

1.1.噬菌体淘筛

将人LAG-3抗原(购置于北京义翘神州生物技术有限公司，货号：16498-H08H)按照10μg包被于免疫管中，将本公司制备的大容量人源天然库按照每轮投入1×10E11噬菌体，共进行3轮筛选富集，计算每轮筛选后产出。按照每轮噬菌体投入比产出，计算投入/产出比，具体结果如图1所示。结果表明，针对LAG-3抗原特异性的克隆得到了明显的富集。

1.2.噬菌体结合与测序

96孔深孔板中按照1mL/孔加入含有抗性的的2-YT培养基(培养基中含有100μg/mL氨苄抗生素和2％葡萄糖)。从第3轮筛选富集的平板中挑取单克隆菌落至深孔板中。置于37℃摇床中220rpm培养4小时。加入M13KO7辅助噬菌体并置于37℃培养箱静置超染半小时，4000rpm离心15分钟，弃上清并加入含有双抗性的2YT培养基(培养基中含有100μg/mL氨苄抗生素以及80μg/mL卡那抗生素)置于28℃摇床培养16-20小时。6000rpm离心10分钟，获得的上清中含有特异性抗体序列的噬菌体分子。与此同时，提前一天包被1μg/mL的LAG-3抗原于96孔聚丙烯酰胺板中，以上述培养上清作为一抗，Anti-M13 Antibody(HRP)(购置于北京义翘神州生物技术有限公司，货号：11973-MM05T-H)作为显色抗体。结果如图2所示，OD值大于1.5以上的克隆数为39个，将对应孔板中的菌液送测序，最终确定3套完全不一样的抗体序列，即对应的克隆号分别为A2、C8、H11。

实施例2.抗体理化性质分析

2.1.还原SDS-PAGE检测抗体轻、重链完整性

将克隆号A2、C8、H11抗体轻、重链抗体序列构建至全抗真核表达载体，并利用ExpiCHO^TM表达系统试剂盒(购置于Thermo Fisher Scientific公司，货号：A29133)表达制备获得全抗分子。在β-巯基乙醇还原剂存在情况下进行还原SDS-PAGE检测，结果如图3所示，轻、重链间半胱氨酸被还原剂打开，分子量分别为50KDa、25KDa，与理论值相符。

2.2.尺寸排除色谱法(size-exclusion chromatography；SEC)检测抗体完整性

利用SEC法检测抗体的纯度。图4表示C8号克隆的峰图，结果显示，主峰面积大于98％。三个抗体的峰面积，主峰/次峰面积及比例如表1所示。结果表明，三个抗体的纯度均大于95％，符合预期。

表1.SEC检测主峰图表(214nm)

2.3.检测亲和力

使用生物膜层干涉技术测量抗体与LAG-3抗原的亲合力。用Anti-Human IgG FcCapture(AHC)芯片捕获待测抗体，将待测抗体的浓度用运行缓冲液(PBS中含有0.1％吐温20)稀释至20μg/mL，上样时间为90s；分析物LAG-3-HIS同样用运行缓冲液梯度稀释至相应的浓度(250nM、125nM、62.5nM、31.25nM、15.625nM、7.812nM、3.906nM和0nM)，待测抗体与分析物结合时间300s，解离时间600s；芯片用10mM甘氨酸HCl、pH 1.7溶液5秒脉冲重复3次进行再生。测定数据拟合成1:1结合模型，来测定平衡解离常数K_D。为了方便比较，本研究表达制备了百时美施贵宝公司同类型临床在研抗LAG-3抗体药物作为阳性对照药物，具体抗体序列来源参见该公司的专利(专利申请号：CN201380035443.8A)。图5显示克隆号C8结合/解离曲线拟合图，阳性对照药物及其它LAG-3抗体与抗原的平衡解离常数K_D测定结果见表2。其中，C8和H11亲和力较阳性对照药物分别提高了10倍和3倍。

表2.LAG-3亲和力常数测定

实施例3.ELISA测定抗体与人LAG-3结合活性

采用蛋白酶联免疫吸附试验(ELISA)测定抗体与人LAG-3的结合活性。将LAG-3抗原(购置于北京义翘神州生物技术有限公司，货号：16498-H08H)固定在96孔板上，在4℃条件下放置过夜。4％牛奶(PBS缓冲液中配置)作为封闭液在37℃孵育1小时，以封闭非特异性结合位点，用PBST(PBS中含有2％吐温20)清洗酶联板3次。PBS缓冲液配置抗体样品(克隆A2、C8、H11、瑞拉利单抗(Relatlimab))，将抗体统一稀释至10μg/mL，并进行2倍稀释，共获得12个浓度点。将梯度抗体对应加入相应的孔板中，37℃放置1小时，用PBST清洗酶联板3次，按照1:8000稀释并加入羊抗人IgG-HRP(购置于Thermo Fisher Scientific公司，货号:A16104SAMPLE)，室温放置45分钟，用PBST清洗酶联板5次，用TMB(购置于Thermo FisherScientific公司，货号:00-4201-56)显色，用1M H₂SO₄终止反应。计算抗体与人LAG-3相对结合活性EC₅₀。结果如图6所示，C8结合活性要优于阳性对照抗体瑞拉利单抗，其EC₅₀值分别为0.047μg/mL、0.093μg/mL。

实施例4.ELISA测定抗体与人LAG-3D1-2结合活性

表达制备人LAG-3(RefSeq：NM_002286.5[P18627-1])结构域1-2的截短体，即截取LAG-3全分子第37位甘氨酸至252位丝氨酸与IgG的Fc进行融合表达。ELISA法确定抗体与hLAG-3D1-2结合活性。将重组蛋白hLAG-3D1-2包被在96孔板上，在4℃条件下放置过夜。4％牛奶(PBS缓冲液中配置)作为封闭液在37℃孵育1小时，以封闭非特异性结合位点，用PBST(PBS中含有2％吐温20)清洗酶联板3次。PBS缓冲液配置抗体样品(克隆A2、C8、H11、瑞拉利单抗)，将抗体统一稀释至10μg/mL，并进行2倍稀释，共获得12个浓度点。将梯度抗体对应加入相应的孔板中，37℃放置1小时，用PBST清洗酶联板3次，按照1:4000稀释并加入GoatAnti-Human IgG(Fab')2(HRP)(购置于Abcam公司，货号:ab87422)，室温放置45分钟，用PBST清洗酶联板5次，用TMB(购置于Thermo Fisher Scientific公司，货号:00-4201-56)显色，用1M H₂SO₄终止反应。结果如图7所示，C8、A2以及阳性对照瑞拉利单抗能够特异性识别hLAG-3D1-2，而H11不与hLAG-3D1-2结合，推测其识别区域为LAG-3其它两个近胞结构域。而据文献报道，hLAG-3D1-2是其发挥免疫抑制的关键结构域(LAG-3与MHCII或FGL1结合位点均位于该结构域中)，故剔除H11作为靶向LAG-3的功能性抗体。

实施例5.抗体阻断Raji(MHCII)/LAG-3结合活性

Raji细胞属于B淋巴细胞瘤，其表面表达MHCII分子，是LAG-3分子重要的受体之一。因此本研究采用流式细胞术的方法研究抗体阻断Raji(MHCII)/LAG-3活性。培养Raji细胞至对数生长期，离心计数并按照5×10⁵个/样品进行细胞分装。用FACS洗液(PBS中含有2％胎牛血清)稀释LAG-3-Biotin至5μg/mL，每个样品中加入100μL。同时用FACS洗液将抗体稀释至20μg/mL，并进行4倍稀释，获得4个抗体浓度点，同样每个样品中加入100μL。因此，LAG-3-Biotin至2.5μg/mL，抗体浓度为10μg/mL、2.5μg/mL、0.625μg/mL、0.156μg/mL，同时设置裸细胞和不加抗体的阳性对照。4℃放置30分钟后，FACS洗液洗涤2次，加入APC anti-human IgG Fc Antibody(购置于Biolegend公司，货号：410712)，4℃放置30分钟后，FACS洗液洗涤2次，加入1％多聚甲醛进行固定，利用流式细胞仪进行检测，并用flowjo762软件进行数据分析。结果如图8所示，C8、A2以及阳性对照抗体瑞拉利单抗能够有效地竞争LAG-3与MHCII结合活性，且具有一定的剂量依赖性。其中，C8与瑞拉利单抗在同等浓度下可更有效地阻断LAG-3与MHCII结合活性。表明C8抗体阻断活性优于A2。

实施例6.抗体阻断FGL1/LAG-3结合活性

按照1μg/mL，100μg/孔包被人FGL1蛋白(购置于北京义翘神州生物技术有限公司，货号:13484-H08B)于96孔酶标板中，在4℃条件下放置过夜。4％牛奶(PBS缓冲液中配置)作为封闭液在37℃孵育1小时，以封闭非特异性结合位点，用PBST(PBS中含有2％吐温20)清洗酶联板3次。PBS缓冲液配置0.6μg/mL的LAG-3-Biotin，将此固定浓度的LAG-3-Biotin分别分装到不同编号的EP管中，实验设置6组分别为：C8、A2、瑞拉利单抗、曲妥珠单抗Herceptin无关对照、阳性对照、阴性对照。在不同组别的EP管中等体积加入12μg/mL的抗体样品，其中阳性对照是加等体积的PBS，Herceptin无关对照是加同等浓度的上市抗体Herceptin作为无关抗体对照，阴性对照既不加LAG-3-Biotin抗原也不加抗体，以PBS替代。37℃放置1小时，用PBST清洗酶联板3次，按照1:6000稀释并加入Streptavidin-HRP(购置于ThermoFisher Scientific公司，货号:434323)，室温放置45分钟，用PBST清洗酶联板5次，用TMB(购置于Thermo Fisher Scientific公司，货号:00-4201-56)显色，用1M H₂SO₄终止反应。结果如图9所示，C8、A2以及阳性对照瑞拉利单抗能够特异性阻断LAG-3与FGL1结合，而Herceptin抗体无此功能，表明C8、A2能够有效阻断LAG-3与FGL1结合，从而解除免疫抑制功能。

实施例7.抗体体内抑瘤活性

上海南方模式生物科技股份有限公司购置4-6周龄的LAG-3人源化小鼠，置于SPF级动物房饲养一周。复苏MC38细胞，用DMEM完全培养基(DMEM含有10％FBS)进行传代培养，待细胞处于对数生长期用胰酶消化细胞，用生理盐水洗细胞1次，并将细胞调整至5x10⁶个/mL。100μL接种于小鼠皮下。待肿瘤长至80-120mm³，按照随机数表将小鼠随机分到各个实验组(每组小鼠只数n＝5)，实验组包括：PBS对照组；anti-mPD-1单药治疗组(2mg/kg)；C8抗体联合治疗组(20mg/kg联合2mg/kg anti-mPD-1)；阳性抗体瑞拉利单抗联合治疗组(20mg/kg联合2mg/kg anti-mPD-1)。按照每周给药两次，给药3周(共计6次给药)。给药同时测量肿瘤长径、短径，称量小鼠体重。按照肿瘤计算公式(V＝LW²/2；V代表肿瘤体积、L代表肿瘤长径、W代表肿瘤短径)计算肿瘤大小，并以时间为横坐标，肿瘤大小为纵坐标绘制肿瘤增殖曲线。同时以时间为横坐标，小鼠体重变化为纵坐标绘制小鼠体重增长曲线。结果如图10所示，其中，图10的A表示治疗过程中荷瘤小鼠肿瘤增殖曲线，有结果可知，与PD-1单药治疗组比，联合具有更明确的抑瘤效果。且C8抗体联合治疗组要略优于阳性抗体瑞拉利单抗联合治疗组。图10的B表示治疗过程小鼠体重变化，有结果可知所有组别小鼠体重均有一定的增长，未观察到药物带来的明显体重减轻，表明该剂量下所有组别药物均安全有效。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和修饰，这些改进和修饰也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110> 深圳市元谷生物科技有限公司

<120> 一种结合人淋巴细胞活化基因3(LAG-3)的抗体及其用途

<130> GAI21CN4670

<160> 14

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Thr Tyr Ser Glu Tyr

20 25 30

Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asn His Arg Gly Ser Thr Tyr Ser Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Leu Ser Leu Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Tyr Ser Asp Tyr Ser Tyr Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 2

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asn Ala Ser Asn Arg Ala Asn Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Asn Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 3

<211> 360

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

caggtgcaac tgcagcagtg gggtgctggc ctgctgaaac caagcgagac actgtctctg 60

acctgtgccg tgtacggcgg cacctactct gagtactact ggaattggat caggcagcct 120

cctggcaagg gcctcgagtg gatcggcgag atcaaccacc ggggctccac ctacagtaat 180

cctagcctga agtctagagt gaccctgtcc ctggacacct ccaagaacca gttcagcctg 240

aagctgagat ctgttaccgc cgccgacaca gctgtgtact actgcgccag aggctactcc 300

gactactcct ataactggtt cgatccttgg ggccaaggca ccctggtcac cgtcagctct 360

<210> 4

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

gagattgtgc tgacccagtc tcctgctacc ctgtctctgt cccctggcga aagagccacc 60

ctctcttgcc gggcctctca gtccatctcc tcttatctgg cttggtacca gcagaaacca 120

ggccaggctc ctagactgct gatctacaac gcctccaacc gggccaacgg catccctgcc 180

cggttctccg gctctggcag cggcactgat ttcacactga ccatcagcag cctggaacct 240

gaggactttg ctgtgtacta ctgtcaacag agatccaact accccctgac cttcggccag 300

ggcaccaacc tggaaatcaa g 321

<210> 5

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

Glu Tyr Tyr Trp Asn

1 5

<210> 6

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

Glu Ile Asn His Arg Gly Ser Thr Tyr Ser Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 7

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

Gly Tyr Ser Asp Tyr Ser Tyr Asn Trp Phe Asp Pro

1 5 10

<210> 8

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr

1 5 10

<210> 9

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

Asn Ala Ser Asn Arg Ala Asn

1 5

<210> 10

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

Gln Gln Arg Ser Asn Tyr Pro Leu Thr

1 5

<210> 11

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Thr Tyr Ser Glu Tyr

20 25 30

Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asn His Arg Gly Ser Thr Tyr Ser Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Leu Ser Leu Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Tyr Ser Asp Tyr Ser Tyr Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro

210 215 220

Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly

435 440 445

<210> 12

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asn Ala Ser Asn Arg Ala Asn Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Asn Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 13

<211> 1338

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 13

caggtgcaac tgcagcagtg gggtgctggc ctgctgaaac caagcgagac actgtctctg 60

acctgtgccg tgtacggcgg cacctactct gagtactact ggaattggat caggcagcct 120

cctggcaagg gcctcgagtg gatcggcgag atcaaccacc ggggctccac ctacagtaat 180

cctagcctga agtctagagt gaccctgtcc ctggacacct ccaagaacca gttcagcctg 240

aagctgagat ctgttaccgc cgccgacaca gctgtgtact actgcgccag aggctactcc 300

gactactcct ataactggtt cgatccttgg ggccaaggca ccctggtcac cgtcagctct 360

gctagcacaa agggaccttc cgtgttccca ctggccccat gctccagaag cacatctgag 420

tccaccgccg ctctgggctg tctggtgaag gactacttcc ctgagccagt gaccgtgtcc 480

tggaacagcg gcgccctgac atccggagtg cacacctttc cagctgtgct gcagtccagc 540

ggcctgtaca gcctgtcttc cgtggtgaca gtgcccagct cttccctggg caccaagaca 600

tatacctgca acgtggacca taagcctagc aataccaagg tggataagag ggtggagtct 660

aagtacggac caccttgccc accatgtcca gctcctgagt ttctgggagg accatccgtg 720

ttcctgtttc ctccaaagcc taaggacacc ctgatgatct ctcggacacc tgaggtgacc 780

tgcgtggtgg tggacgtgtc ccaggaggat ccagaggtgc agttcaactg gtacgtggat 840

ggcgtggagg tgcacaatgc taagaccaag ccaagagagg agcagtttaa tagcacatac 900

cgcgtggtgt ctgtgctgac cgtgctgcat caggattggc tgaacggcaa ggagtataag 960

tgcaaggtga gcaataaggg cctgcccagc tctatcgaga agacaatctc taaggctaag 1020

ggacagccta gggagccaca ggtgtacacc ctgccccctt cccaggagga gatgacaaag 1080

aaccaggtga gcctgacctg tctggtgaag ggcttctatc catctgacat cgctgtggag 1140

tgggagtcca atggccagcc cgagaacaat tacaagacca caccacccgt gctggactct 1200

gatggctcct tctttctgta ttccaggctg acagtggata agagccggtg gcaggagggc 1260

aacgtgttta gctgctctgt gatgcacgag gctctgcaca atcattatac ccagaagtcc 1320

ctgagcctgt ctctgggc 1338

<210> 14

<211> 642

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 14

gagattgtgc tgacccagtc tcctgctacc ctgtctctgt cccctggcga aagagccacc 60

ctctcttgcc gggcctctca gtccatctcc tcttatctgg cttggtacca gcagaaacca 120

ggccaggctc ctagactgct gatctacaac gcctccaacc gggccaacgg catccctgcc 180

cggttctccg gctctggcag cggcactgat ttcacactga ccatcagcag cctggaacct 240

gaggactttg ctgtgtacta ctgtcaacag agatccaact accccctgac cttcggccag 300

ggcaccaacc tggaaatcaa gcgtacggtg gctgctccat ctgtcttcat cttcccacca 360

tctgatgagc agctgaagtc tggaactgcc tctgtggtgt gcctgctgaa taacttctat 420

cccagagagg ccaaagtgca gtggaaggtg gataacgccc tgcagtccgg caactcccag 480

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctgagcag caccctgacc 540

ctgagcaaag ccgactacga gaagcacaaa gtctacgcct gcgaggtcac ccatcagggc 600

ctgagcagcc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642

Claims

1.一种结合人淋巴细胞活化基因3(LAG-3)的抗体，或其抗原结合片段，其包括：

(a)包含SEQ ID NO:5的重链CDR1、包含SEQ ID NO:6的重链CDR2和包含SEQ ID NO:7的重链CDR3；以及

(b)包含SEQ ID NO:8的轻链CDR1、包含SEQ ID NO:9的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:10的轻链CDR3。

2.根据权利要求1所述的抗体，其中，所述抗体包括：

与氨基酸序列SEQ ID NO:1具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的重链可变区；和

与氨基酸序列SEQ ID NO:2具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的轻链可变区。

3.根据权利要求1所述的抗体，其中，所述抗体包括：

与氨基酸序列SEQ ID NO:11具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的重链；和

与氨基酸序列SEQ ID NO:12具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的轻链。

4.根据权利要求1至3任一项所述的抗体，其中，所述抗体是全人源抗体。

5.根据权利要求1至4任一项所述的抗体，其中，所述抗体结合人LAG-3和/或猴LAG-3。

6.根据权利要求5所述的抗体，其中，所述抗体抑制LAG-3与主要组织相容性复合体II(MHCII)结合，和/或抑制LAG-3与纤维蛋白样蛋白1(FGL1)结合。

7.一种分离的核酸分子，其编码权利要求1至6中任一项所述的抗体。

8.根据权利要求7所述的核酸分子，其包含：

编码所述抗LAG-3抗体的重链可变区的核酸序列SEQ ID NO:3；和

编码所述抗LAG-3抗体的轻链可变区的核酸序列SEQ ID NO:4；

或者包含：

编码所述抗LAG-3抗体的重链的核酸序列SEQ ID NO:13；和

编码所述抗LAG-3抗体的轻链的核酸序列SEQ ID NO:14。

9.一种细胞，其产生权利要求1至6中任一项所述的抗体，或者包含权利要求7或8所述的核酸分子。

10.权利要求1至6中任一项所述的抗体、或者权利要求7或8所述的核酸分子、或者权利要求9所述的细胞在制备用于治疗、预防和/或诊断癌症或感染性疾病的药物中的用途，优选的是，所述癌症选自黑色素瘤、非小细胞性肺癌、结肠直肠癌、前列腺癌、乳腺癌、头颈癌、结直肠癌、胰腺癌、血液学癌、非霍奇金淋巴瘤或白血病或癌症的转移性病灶，

还优选的是，所述抗体与PD-1抗体联用。