CN113575583B - 一种预防或治疗植物炭疽病的产品和应用 - Google Patents

一种预防或治疗植物炭疽病的产品和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及病害防治领域，具体涉及一种预防或治疗炭疽病的产品和应用。为了解决现有技术中治疗植物炭疽病时用药剂量大且会对产生药物残留，对人类健康产生威胁的问题，本发明提供一种预防或治疗植物炭疽病的产品和应用，所述产品包括橙皮苷、对香豆酸、柚皮素、根皮苷、杨梅素、咖啡酸、杨梅苷中的一种或几种。既能减少用药剂量，又能很好的预防或者治疗植物炭疽病。

Description

一种预防或治疗植物炭疽病的产品和应用
技术领域
本发明涉及病害防治领域，具体涉及一种预防或治疗炭疽菌的产品和应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
植物炭疽病的病原菌为一类真菌，是指由黑盘孢目中的炭疽属真菌所引起的病害的统称。感染植物的炭疽菌遍布世界各地，尤其在高温、高湿的热带和亚热带地区，更适合这种病原菌的生长。
炭疽病对植物危害十分严重。炭疽菌的寄主范围非常广泛，可以在多种植物体上繁衍生长。当植物的各部位感染炭疽菌后，可能会出现如下现象：如幼苗受害后引起倒苗而死亡；茎叶受害严重时使全株枯死；受害的果实开始出现小病斑，以后逐渐扩大成褐色凹陷，并在中央产生小黑点。在气温升高的情况下，还会分泌出粉红色的粘状物，最后造成烂果。
胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)是一种重要的植物病原菌，属于炭疽菌属，寄主范围十分广泛，可以侵染诸如核桃、芒果、火龙果、苹果、砀山梨、豇豆等多种重要的果蔬，引发炭疽病，给农林业生产造成严重的经济损失。
目前，主要使用化学药剂对采摘果实进行浸果处理，用于减少炭疽病害的发生，提高其贮藏质量。而近年来，随着人们对食品安全防范意识的不断提高，对食品防腐剂的安全性和减小其用量的呼声也越来越高。
发明内容
为了解决现有技术中的问题，本发明提出一种预防或治疗炭疽病的产品及产品的筛选和应用，对植物炭疽菌的防治具有减量增效的作用，在降低用药成本的同时增大了植物炭疽病防治的用药选择性，若用于食品，还可以保证果蔬的安全性。
具体地，本发明通过以下技术方案实现：
本发明第一方面，提供一种预防或治疗植物炭疽病的产品，所述产品包括橙皮苷、对香豆酸、柚皮素、根皮苷、杨梅素、咖啡酸、杨梅苷中的一种或几种；
优选的，所述产品包括橙皮苷、柚皮素、根皮苷、咖啡酸、对香豆酸中的一种或几种。
本发明第二方面，提供一种筛选抑制胶胞炭疽菌产品的方法，包括测定抑菌剂的菌丝抑制率，通过对菌丝的抑制程度来筛选。
本发明的第三方面，提供一种或多种抑菌剂在抑制炭疽菌属真菌中的应用，所述抑菌剂为橙皮苷、对香豆酸、柚皮素、根皮苷、杨梅素、咖啡酸、杨梅苷。
本发明的第四方面，提供一种或几种抑菌剂在预防或治疗植物炭疽病中的应用，所述抑菌剂为橙皮苷、对香豆酸、柚皮素、根皮苷、杨梅素、咖啡酸、杨梅苷。
本发明一个或多个实施例具有以下有益效果：
1)本发明所述的产品可以在降低使用量的同时达到对植物炭疽病较好的预防或治疗效果。
2)本发明所述的产品对植物炭疽病的预防效果非常好，因炭疽病菌有些潜伏在种子和病株残体中越冬，是次年侵袭的传染源，本发明的产品预防效果好，可以更好的预防植物炭疽病的发生。
3)本发明的产品在用量较小的情况下，可以达到较佳的作用，且橙皮苷、对香豆酸、柚皮素、根皮苷、杨梅素，都可以用于食品行业，比如，橙皮苷是食品行业中一种常用抑菌剂，具有低毒高效、抑菌谱广、无抗药性、价格低廉且原料易得等优点，可以保证用于果蔬的安全性。
4)本发明将来源不同、作用机制相异、抑菌谱互补的橙皮苷与对香豆酸复配后对抑制胶孢炭疽菌的菌丝生长具有增效作用，当二者以各自的MIC浓度并按照2：4或者1:5体积比左右进行复配时，能够完全抑制胶孢炭疽菌的菌丝生长，在减少两种抑菌剂使用量的基础上提高了总体抑菌效果，降低了用药成本，增大了用药选择性，增强了果蔬采后耐贮性与食用安全性。
5)本发明首先通过测定不同抑菌剂的菌丝抑制率来确定各个抑菌剂的最小抑菌浓度(MIC)，然后将抑菌剂以各自的MIC浓度并按照不同体积比进行复配，筛选出了对抑制胶孢炭疽菌的菌丝生长具有增效作用的组合，筛选方法简单、准确。
6)采用本发明的抑菌剂可以对胶孢炭疽菌的菌丝有非常好的抑制效果。
7)采用本发明的复配抑菌剂对果蔬采后炭疽病进行防治，既可以减少抑菌剂的使用量，又可以提高总体抑菌效果，降低了用药成本，增大了用药选择性，增强了果蔬采后耐贮性与食用安全性。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为不同抑菌剂对胶孢炭疽菌菌丝生长的抑制效果(5d)；
图2为不同复配组合对胶孢炭疽菌菌丝生长的抑制效果(5d)；
图3橙皮苷和对香豆酸复配对胶孢炭疽菌菌丝生长的抑制作用(5d)；
图4为橙皮苷和对香豆酸复配对台农芒果发病的预防作用，其中(A)为橙皮苷和对香豆酸复配对台农芒果发病率的预防作用(5d)，(B)为橙皮苷和对香豆酸复配对台农芒果发病指数的预防作用(5d)，(C)为橙皮苷和对香豆酸复配对台农芒果表观的影响(5d)；
图5为橙皮苷和对香豆酸复配对台农芒果发病的治疗作用，其中(A)为橙皮苷和对香豆酸复配对台农芒果发病率的治疗作用(5d)，(B)为橙皮苷和对香豆酸复配对台农芒果发病指数的治疗作用(5d)，(C)为橙皮苷和对香豆酸复配对台农芒果表观的影响(5d)；
图6为橙皮苷和对香豆酸复配对豇豆发病的预防作用，其中(A)为橙皮苷和对香豆酸复配对豇豆发病率的预防作用(5d)，(B)为橙皮苷和对香豆酸复配对豇豆发病指数的预防作用(5d)，(C)为橙皮苷和对香豆酸复配对豇豆表观的影响(5d)；
图7为橙皮苷和对香豆酸复配对豇豆发病的治疗作用，其中(A)为橙皮苷和对香豆酸复配对豇豆发病率的治疗作用(5d)，(B)为橙皮苷和对香豆酸复配对豇豆发病指数的治疗作用(5d)，(C)为橙皮苷和对香豆酸复配对豇豆表观的影响(5d)；
图8为橙皮苷和对香豆酸复配对白心火龙果炭疽病预防的表观影响；(5d)；
图9为橙皮苷和对香豆酸复配对白心火龙果炭疽病治疗的表观影响。(5d)。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
现有技术中，针对植物炭疽病多采用药物防治，但是植物炭疽病也多发于果蔬，现有的很多防治药物都会有药物残留，威胁到人类健康。基于此，急需一种用量低，残留量小，又可以很好的预防或者治疗植物炭疽病的产品。
本发明的第一方面，提供一种预防或治疗植物炭疽病的产品，所述产品包括橙皮苷、对香豆酸、柚皮素、根皮苷、杨梅素、咖啡酸、杨梅苷中的一种或几种。
优选的，所述产品包括橙皮苷、柚皮素、根皮苷、咖啡酸、对香豆酸中的一种或几种。
在一些实施例中，所述植物炭疽病为炭疽菌属真菌导致的；更进一步优选的，所述植物炭疽病为胶胞炭疽菌导致的。
在一些实施例中，所述产品包括橙皮苷与对香豆酸；优选的，所述橙皮苷与对香豆酸以各自的MIC浓度按照1-3：3-5体积比进行复配；
进一步优选的，所述橙皮苷与对香豆酸以各自的MIC浓度按照1.5-2.5：3.5-4.5体积比进行复配；
更进一步优选的，所述橙皮苷与对香豆酸以各自的MIC浓度按照1:5体积比进行复配，或所述橙皮苷与对香豆酸以各自的MIC浓度按照2：4体积比进行复配。本发明可以用于果蔬采后病害防治领域，是一种在降低抑菌剂使用量的同时对胶孢炭疽菌的防治具有增效作用的生物杀菌剂。橙皮苷与对香豆酸单独使用时对胶孢炭疽菌的菌丝生长均有显著抑制作用，二者的最小抑菌浓度(MIC)均为1g/L；橙皮苷与对香豆酸复配后对抑制胶孢炭疽菌的菌丝生长具有增效作用；当橙皮苷与对香豆酸以各自的MIC浓度并按照2：4体积比进行复配时，能够完全抑制胶孢炭疽菌的菌丝生长。本发明中将来源不同、作用机制相异、抑菌谱互补的橙皮苷与对香豆酸复配使用，对抑制胶孢炭疽菌的菌丝生长起到协同增效作用，既可以减少两种抑菌剂的使用量，又可以提高总体抑菌效果，增强了果蔬采后耐贮性与食用安全性。
在一些实施例中，所述产品可以为水剂、水乳剂、油剂、悬浮剂、或固体制剂，更具体的，可以为可湿性粉剂、悬浮剂、水分散颗粒剂、乳剂、油剂、粒剂、粉剂、片剂、胶囊剂和种子用包衣剂。
本发明的第二方面，提供一种筛选抑制胶胞炭疽菌产品的方法，包括通过测定抑菌剂的菌丝抑制率，通过对菌丝的抑制程度来筛选。
在一些实施例中，所述方法包括将胶孢炭疽菌接种到分别含有抑菌剂与不含有抑菌剂的PDA培养基进行培养，培养5-6天后通过比较菌落直径来观察抑菌效果；
优选的，采用十字交叉法测定菌落直径。
筛选过程包括下述的步骤：
S1：培养基的配制：马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基(Potato Dextrose Agar，PDA)：按照蒸馏水：马铃薯：葡萄糖：琼脂＝100:20:2:2的比例配制培养基，根据实验要求适当放大比例。未发芽的马铃薯去皮、清洗、切块(切块要大小均匀，体积约1cm3)后置于蒸馏水中，在电炉上加热并使其保持沸腾状态20-30min，冷却，经6-8层纱布过滤，然后加入一定量去离子水补足至所需量，缓慢倒入锥形瓶中，再加入称取好的葡萄糖、琼脂，摇匀，于灭菌锅中121℃下灭菌20min，待用；
S2：菌种活化：采用划线活化的方法：将接种环在酒精灯上反复灼烧后，于4℃下保藏的培养皿中，挑取胶孢炭疽菌已分化产孢的菌丝，划线至PDA平板上，28℃下恒温培养5d；
S3：孢子悬浮液的制备：取培养6天的胶孢炭疽菌菌落，用打孔器取适量菌饼放入离心管中，加入无菌蒸馏水，涡旋振荡器震荡10s，混匀后用2层无菌纱布过滤。实验中所用到的枪头盒、蒸馏水、离心管、涂布棒、纱布等均需提前高温灭菌(121℃，20min)。最后借助血细胞计数板将孢子悬浮液浓度调整至1×106个/mL，备用；
S4：不同抑菌剂对胶孢炭疽菌的体外抑制效果：采用含药培养基法测定不同抑菌剂对胶孢炭疽菌的最小抑菌浓度(MIC)及体外抑制效果。分别称取12.5、25、50、100mg橙皮苷与25mL PDA混合，摇匀，得到500、1000、2000、4000mg/L的含药培养基，什么都不加的PDA培养基作为对照组，灭菌后，倒平板，待培养基冷凝后，打取直径约为0.7cm的菌饼，将带有菌丝的一面贴于PDA培养基表面的中央，将平板用封口膜封口，每个处理设3个平行，28℃恒温培养48h后观察，无菌生长的最小浓度即为橙皮苷的最小抑菌浓度(MIC)，28℃恒温培养5d后观察橙皮苷对胶孢炭疽菌的菌丝生长抑制情况并拍照记录。
咖啡酸、对香豆酸、根皮苷、绿原酸、没食子酸、杨梅苷、杨梅素、柚皮素、隐绿原酸、原花青素B1、原花青素B2、原花青素B3同上；
S5：二元抑菌剂复配对胶孢炭疽菌的体外抑制效果：将橙皮苷分别与柚皮素、根皮苷、杨梅素、咖啡酸、对香豆酸、杨梅苷复配，找出与橙皮苷复配对胶孢炭疽菌菌丝生长的抑制具有增效作用的组合。假设橙皮苷的MIC为a，其他6种抑菌剂的MIC分别设为b、c、d、e、f、g，利用等效线法中的相加作用，6等分点设置5个复配比。首先分别配制各抑菌剂MIC浓度的溶液，再分别按照5:1，4:2，3:3，2:4，1:5体积比复配后加到PDA培养基中，每个处理3个平行。5d后用十字交叉法测定菌落直径。
本发明的第三方面，提供一种或多种抑菌剂在抑制炭疽菌属真菌中的应用，其特征在于，所述抑菌剂为橙皮苷、对香豆酸、柚皮素、根皮苷、杨梅素、咖啡酸、杨梅苷；
优选的，所述抑菌剂为橙皮苷、柚皮素、根皮苷、咖啡酸、对香豆酸；
优选的，所述炭疽菌属真菌为胶孢炭疽菌；
优选的，所述抑菌剂用于抑制炭疽菌的菌丝生长。
在一些实施例中，在使用时，将橙皮苷与对香豆酸以各自的MIC浓度按照1-3：3-5体积比进行复配；
进一步优选的，所述橙皮苷与对香豆酸以各自的MIC浓度按照1.5-2.5：3.5-4.5体积比进行复配；
更进一步优选的，所述橙皮苷与对香豆酸以各自的MIC浓度按照1:5体积比进行复配，或所述橙皮苷与对香豆酸以各自的MIC浓度按照2：4体积比进行复配。将橙皮苷与对香豆酸复配使用，在降低了抑菌剂使用量的同时对胶孢炭疽菌的防治起到了增效作用。橙皮苷与对香豆酸单独使用时对胶孢炭疽菌的菌丝生长均有显著抑制作用，二者的最小抑菌浓度(MIC)均为1g/L。
本发明的第四方面，提供一种或几种抑菌剂在预防或治疗植物炭疽病中的应用，所述抑菌剂为橙皮苷、对香豆酸、柚皮素、根皮苷、杨梅素、咖啡酸、杨梅苷；
优选的，所述炭疽病为胶胞炭疽病；
优选的，所述抑菌剂包括橙皮苷与对香豆酸，所述橙皮苷与对香豆酸以各自的MIC浓度按照1-3：3-5体积比进行复配；
进一步优选的，所述橙皮苷与对香豆酸以各自的MIC浓度按照1.5-2.5：3.5-4.5体积比进行复配；
更进一步优选的，所述橙皮苷与对香豆酸以各自的MIC浓度按照2：4体积比进行复配。
在一些实施例中，其特征在于，所述植物为木本植物或草本植物；
优选的，所述植物包括柿树、橡胶、梨树、板栗、枇杷、苹果、核桃、蒜薹、番木瓜、草莓、葡萄、麦冬、杏树、桃树、李子树、梅、多肉植物、芒果、火龙果、豇豆；
更进一步优选的，所述植物为台农芒果、豇豆。
将本发明所述抑菌剂用于台农芒果时，抑菌剂的浓度为50-1000mg/L,优选的，抑菌剂的浓度为100-800mg/L，更进一步优选的，所述抑菌剂的浓度为500mg/L。
将本发明所述抑菌剂用于豇豆时，抑菌剂的浓度为300-3000mg/L,优选的，抑菌剂的浓度为500-2000mg/L，更进一步优选的，所述抑菌剂的浓度为2000mg/L。
优选的，所述抑菌剂在果蔬采后使用。
实施例1
1.对抑制胶孢炭疽菌菌丝生长具有增效作用的二元抑菌剂复配组合的筛选
1.1培养基的配制
马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基(Potato Dextrose Agar，PDA)：按照蒸馏水：马铃薯：葡萄糖：琼脂＝100:20:2:2的比例配制培养基，根据实验要求适当放大比例。未发芽的马铃薯去皮、清洗、切块(切块要大小均匀，体积约1cm3)后置于蒸馏水中，在电炉上加热并使其保持沸腾状态20-30min，冷却，经6-8层纱布过滤，然后加入一定量去离子水补足至所需量，缓慢倒入锥形瓶中，再加入称取好的葡萄糖、琼脂，摇匀，于灭菌锅中121℃下灭菌20min，待用。
1.2菌种活化
采用划线活化的方法：将接种环在酒精灯上反复灼烧后，于4℃下保藏的培养皿中，挑取胶孢炭疽菌已分化产孢的菌丝，划线至PDA平板上，28℃下恒温培养5d。
1.3孢子悬浮液的制备
取培养5天的胶孢炭疽菌菌落，用打孔器取适量菌饼放入离心管中，加入无菌蒸馏水，涡旋振荡器震荡10s，混匀后用2层无菌纱布过滤。实验中所用到的枪头盒、蒸馏水、离心管、涂布棒、纱布等均需提前高温灭菌(121℃，20min)。最后借助血细胞计数板将孢子悬浮液浓度调整至1×106个/mL，备用。
1.4不同抑菌剂对胶孢炭疽菌的体外抑制效果
采用含药培养基法测定不同抑菌剂对胶孢炭疽菌的最小抑菌浓度(MIC)及体外抑制效果。
分别称取12.5、25、50、100mg橙皮苷与25mL PDA混合，摇匀，得到500、1000、2000、4000mg/L的含药培养基，什么都不加的PDA培养基作为对照组，灭菌后，倒平板，待培养基冷凝后，打取直径约为0.7cm的菌饼，将带有菌丝的一面贴于PDA培养基表面的中央，将平板用封口膜封口，每个处理设3个平行，28℃恒温培养48h后观察，无菌生长的最小浓度即为橙皮苷的最小抑菌浓度(MIC)，28℃恒温培养5d后观察橙皮苷对胶孢炭疽菌的菌丝生长抑制情况并拍照记录。
咖啡酸、对香豆酸、根皮苷、绿原酸、没食子酸、杨梅苷、杨梅素、柚皮素、隐绿原酸、原花青素B1、原花青素B2、原花青素B3同上。
1.5二元抑菌剂复配对胶孢炭疽菌的体外抑制效果
将橙皮苷分别与柚皮素、根皮苷、杨梅素、咖啡酸、对香豆酸、杨梅苷复配，找出与橙皮苷复配对胶孢炭疽菌菌丝生长的抑制具有增效作用的组合。假设橙皮苷的MIC为a，其他6种抑菌剂的MIC分别设为b、c、d、e、f、g，利用等效线法中的相加作用，6等分点设置5个复配比。首先分别配制各抑菌剂MIC浓度的溶液，再分别按照5:1，4:2，3:3，2:4，1:5体积比复配后加到PDA培养基中，每个处理3个平行。5d后用十字交叉法测定菌落直径。
2.二元抑菌剂复配对果蔬品质的影响
2.1果蔬挑选与清洗
选取大小均匀、成熟度一致、无机械损伤、无病虫害的台农芒果，用0.5％的NaClO溶液浸泡30s后，将台农芒果用清水冲洗干净，自然阴干，备用。
豇豆、白心火龙果同上。
2.2预防与治疗实验
2.2.1台芒
根据1.5中筛选出来的有增效作用的组合配制浓度分别为100、200、500mg/L的混合药水溶液，分装于75mL小喷壶中。在进行预防实验时，首先对台农芒果的一个表面进行喷洒(每按压一次喷壶的喷洒体积为0.1mL，每次喷洒前将装有混合药水的75mL小喷壶置于涡旋振荡器上以使混合药水充分混匀)，表面喷洒相同体积无菌蒸馏水的台农芒果作为对照。等待1h后台农芒果表面的混合药水溶液(对照组为无菌蒸馏水)完全晾干，喷上胶孢炭疽菌的孢子悬浮液(浓度为1×106个/mL)，待菌悬液被吸收后，将台农芒果分别移入塑料筐(长320mm、宽240mm、高100mm)内，每组16个台农芒果，用0.03mm厚的聚乙烯保鲜袋封口，放置在保鲜柜中(温度25℃、湿度90％)，5d后观察并统计台农芒果的的发病率和发病指数。在进行治疗实验时，只需将混合药水溶液和孢子悬浮液的喷洒顺序调换，其余操作步骤同上。
2.2.2豇豆
用于豇豆炭疽病预防和治疗实验的混合药水溶液的浓度分别为500、1000、2000mg/L，每组设置3个平行，每个平行11根豇豆，其余操作步骤同1.2.1。
2.2.3火龙果
用于白心火龙果炭疽病预防和治疗实验的混合药水溶液的浓度分别为500、4000mg/L，每组设置3个平行，每个平行2个火龙果，其余操作步骤同1.2.1。
2.3.发病情况测定
2.3.1发病率计算公式：
发病率＝(发病个数/总个数)×100％
2.3.2发病指数按照以下方法测量：
先根据表面发病面积将果实发病指数划分为4级：0级，无腐烂；1级，轻微发病，发病面积在0-25％之间；2级,发病面积在25％-50％之间；3级，严重发病，发病面积大于50％。
发病指数计算公式如下：
发病指数＝100×[Σ(级别×该级果数)/(总果数×3)]
3.数据处理
采用SPSS 20.0对数据进行分析，邓肯多重比较用来分析数值之间显著性差异(P<0.05)，图表均使用origin2018软件绘制。
4.实验结果
4.1不同抑菌剂的MIC值及体外抑菌效果
通过含药培养基法测定了不同抑菌剂对胶孢炭疽菌的最小抑菌浓度(MIC)，抑菌效果比较显著的几种抑菌剂的最小抑菌浓度(MIC)见表1，不同抑菌剂对胶孢炭疽菌的体外抑制效果(5d)见图1：
从图1可以看出，与对照组相比，橙皮苷、咖啡酸、对香豆酸、根皮苷、柚皮素能够显著抑制胶孢炭疽菌的菌丝生长，杨梅素、杨梅苷、没食子酸、绿原酸的抑菌效果不太明显，而隐绿原酸、原花青素B1、原花青素B2、原花青素B3对胶孢炭疽菌的菌丝生长几乎没有抑制作用。
表1不同抑菌剂的MIC值
Table 1MIC value of different antibacterial agents
Figure BDA0003121440690000101
4.2二元抑菌剂复配对胶孢炭疽菌的体外抑制效果
将对胶孢炭疽菌菌丝生长有显著抑制作用的几种抑菌剂用于复配实验，另外还选取了抑菌效果一般的杨梅素和杨梅苷参与复配实验。
在几种抑菌效果显著的抑菌剂中，橙皮苷有低毒高效、抑菌谱广、无抗药性、价格低廉且原料易得等优点，因此本实验中选取橙皮苷作为复配组合中的主剂，将橙皮苷分别与柚皮素、根皮苷、杨梅素、咖啡酸、对香豆酸、杨梅苷进行复配，各个复配组合对胶孢炭疽菌菌丝生长的抑制效果见图2：
从图2可以看出，与对照组相比，橙皮苷和对香豆酸复配对抑制胶孢炭疽菌的菌丝生长具有明显增效作用。橙皮苷与柚皮素、根皮苷、杨梅素、咖啡酸、杨梅苷复配虽然也有增效作用，但是增效效果远远不如橙皮苷与对香豆酸复配，特别是橙皮苷与杨梅苷复配增效效果并不明显。
从图3可以看出，与对照组相比，橙皮苷和对香豆酸以各自的MIC浓度并按照5:1，4:2，3:3，2:4，1:5体积比复配均可显著抑制胶孢炭疽菌的菌丝生长，且当橙皮苷和对香豆酸以各自的MIC浓度(a＝1g/L，f＝1g/L)并按照2:4，1:5体积比复配后加到PDA培养基中时，能够完全抑制胶孢炭疽菌的菌丝生长。最终选择橙皮苷(a＝1g/L)和对香豆酸(f＝1g/L)按照2:4体积复配比用于后续体内实验。
4.3二元抑菌剂复配对果蔬发病率和发病指数的影响
4.3.1台农芒果
从图4中可以看出，与对照组相比，橙皮苷和对香豆酸复配的三个预防处理浓度均可有效地降低台农芒果的发病率，减小台农芒果的发病指数，且浓度越大，发病率越低，发病指数越小。从图4A中可知，喷洒接菌5d后，对照组台农芒果发病率达到37.50％，而橙皮苷和对香豆酸混合药水溶液浓度为500mg/L时，其发病率降为18.75％；从图4B中可知，喷洒接菌5d后，对照组台农芒果发病指数达到16.67％，而橙皮苷和对香豆酸混合药水溶液浓度为500mg/L时，其发病指数降为6.25％，说明橙皮苷和对香豆酸复配显著抑制了台农芒果发病率和发病指数。
从图5中可以看出，与对照组相比，橙皮苷和对香豆酸复配的三个治疗处理浓度均可有效地降低台农芒果的发病率，减小台农芒果的发病指数，且浓度越大，发病率越低，发病指数越小。从图5A中可知，喷洒接菌5d后，对照组台农芒果发病率达到56.25％，而橙皮苷和对香豆酸混合药水溶液浓度为500mg/L时，其发病率降为18.75％；从图5B中可知，喷洒接菌5d后，对照组台农芒果发病指数达到29.17％，而橙皮苷和对香豆酸混合药水溶液浓度为500mg/L时，其发病指数降为6.25％，说明橙皮苷和对香豆酸复配显著抑制了台农芒果发病率和发病指数。
4.3.2豇豆
从图6中可以看出，与对照组相比，橙皮苷和对香豆酸复配的三个预防处理浓度均可有效地降低豇豆的发病率，减小豇豆的发病指数，且浓度越大，发病率越低，发病指数越小。从图6A中可知，喷洒接菌5d后，对照组豇豆发病率达到72.73％，而橙皮苷和对香豆酸混合药水溶液浓度为2000mg/L时，其发病率降为18.18％；从图6B中可知，喷洒接菌5d后，对照组豇豆发病指数达到33.33％，而橙皮苷和对香豆酸混合药水溶液浓度为2000mg/L时，发病指数降为6.06％，说明橙皮苷和对香豆酸复配显著抑制了豇豆发病率和发病指数。
从图7中可以看出，与对照组相比，橙皮苷和对香豆酸复配的三个治疗处理浓度均可有效地降低豇豆的发病率，减小豇豆的发病指数，且浓度越大，发病率越低，发病指数越小。从图7A中可知，喷洒接菌5d后，对照组豇豆发病率达到100.00％，而橙皮苷和对香豆酸混合药水溶液浓度为2000mg/L时，发病率降为36.36％；从图7B可知，喷洒接菌5d后，对照组豇豆发病指数达到42.42％，而橙皮苷和对香豆酸混合药水溶液浓度为2000mg/L时，发病指数降为12.12％，说明橙皮苷和对香豆酸复配显著抑制豇豆发病率和发病指数。
4.3.3白心火龙果
从图8中可以看出，喷洒接菌5d后，火龙果主要在顶部苞叶和刺座两部分发病，与对照组相比，橙皮苷和对香豆酸复配的两个预防处理浓度均在一定程度上减轻了火龙果炭疽病的发病症状，但是抑制效果不显著。
从图9中可以看出，喷洒接菌5d后，火龙果主要在顶部苞叶和刺座两部分发病，与对照组相比，橙皮苷和对香豆酸复配的两个治疗处理浓度均在一定程度上减轻了火龙果炭疽病的发病症状，但是抑制效果不显著。
本发明首先通过测定不同抑菌剂的菌丝抑制率来确定各个抑菌剂的最小抑菌浓度(MIC)，然后将抑菌剂以各自的MIC浓度并按照五个体积比(5:1，4:2，3:3，2:4，1:5)进行复配，筛选出了对抑制胶孢炭疽菌的菌丝生长具有增效作用的组合：橙皮苷(a＝1g/L)和对香豆酸(f＝1g/L)按照2:4体积复配，将此增效组合用于后续的活体实验。在活体实验中，配制不同浓度的增效组合溶液，通过喷洒接菌的方式在台农芒果、豇豆和白心火龙果上进行炭疽病预防和治疗的效果实验，结果表明实验中所选取的不同浓度的增效组合溶液对台农芒果、豇豆和白心火龙果的炭疽病均有不同程度的抑制作用，其中对台农芒果和豇豆的炭疽病发生具有显著抑制作用，降低了二者的发病率和发病指数，且预防组的整体效果要优于治疗组整体效果。
以上所揭露的仅为本发明的优选实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，因此依本发明申请专利范围所作的等同变化，仍属本发明所涵盖的范围。

Claims (2)

1.一种预防或治疗由胶孢炭疽菌引起的植物炭疽病的方法，其特征在于，所述方法包括向采后的台农芒果或豇豆施用预防或治疗植物炭疽病的产品，所述产品由橙皮苷与对香豆酸各自以1g/L的MIC浓度按照体积比2:4进行复配；其中，施用于台农芒果的产品浓度为500 mg/L，施用于豇豆的产品浓度为2000 mg/L。
2.如权利要求1所述预防或治疗由胶孢炭疽菌引起的植物炭疽病的方法，其特征在于，所述产品为可湿性粉剂、悬浮剂、水分散颗粒剂、乳剂、油剂、粒剂、粉剂、片剂、胶囊剂或种子用包衣剂。
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