CN113527333B - 具有生物活性的度鲁特韦衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及药物化学合成技术领域，具体涉及一种具有生物活性的度鲁特韦衍生物及其制备方法，该衍生物结构式如下：
其中：R1为甲基或氢；R2为甲基、异丙基、苯基、苄基、含氮杂环、含硫杂环或含氧杂环；R3为氢、甲基、乙基、苯基、苄基、含氮杂环、含硫杂环或含氧杂环。其制备方法是1‑(2,2‑二甲氧基乙基)‑1,4‑二氢‑3‑甲氧基‑4‑氧代‑2,5‑吡啶二甲酸‑2‑甲酯脱保护成醛，先与氨基丁醇环合后，再与氨基化合物发生酰化反应，最后与叠氮经click反应，得到目标化合物。本发明的衍生物对人体肿瘤细胞具有增殖抑制活性。
Description
技术领域
本发明涉及药物化学合成技术领域，具体涉及一种具有生物活性的度鲁特韦衍生物及其制备方法和应用。
背景技术
人类免疫缺陷病(human immunodeficiency virus,HIV)于1981年在美国首次发现，是一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒(lentivirus)，属逆转录病毒的一类。该病毒破坏人体的免疫能力，导致免疫系统失去抵抗力，从而导致各种疾病及癌症得以在人体内生存，最终导致艾滋病，即获得性免疫缺陷综合征，至今无有效的根治疗法。高效抗逆转录病毒疗法(Highly Active Antiretroviral Therapy,HAART)是艾滋病的常规治疗方法，该方法采用一个基础药物与两个核苷类逆转录酶抑制剂联合应用。整合酶抑制剂通过抑制HIV逆转录生成的双链DNA整合至宿主染色体发挥抗HIV活性，可作为基础药物使用。
度鲁特韦(Dolutegraver,DTG)是一种安全高效且具有较高基因屏障和良好药代特性的整合酶抑制剂，是由美国葛兰素史克旗下公司所研发，于2013年由FDA批准上市。度鲁特韦通过与整合酶活性部位结合来阻断逆转录病毒脱氧核糖核酸(DNA)整合的链转移步骤。该药物每日仅服用一次，对于治疗首次感染HIV-1患者，疗效与每日服用两次的雷特格韦的作用相当，并且安全性高，具有强效的抗耐药属性，度鲁特韦作为FDA优先审评药物，预计2020年销售额将达26亿美元。临床前研究结果显示其毒性小，没有基因毒性和致癌毒性，在大于临床剂量27倍时没有出现明显的生育毒性和致畸毒性。临床研究显示度鲁特韦对初次治疗的HIV感染者、当前疗法治疗失败但未使用整合酶抑制药治疗的患者的治疗效果均优于对照药；对抗病毒治疗失败、且对雷特格韦和/或埃替格韦耐药的成人患者也显示出良好的疗效。
肿瘤是当今世界危及人类生命的一种常见的严重疾病，已成为导致人类死亡的第二大杀手。据统计，2035年全球癌症死亡人数将增加到1315万人，但是目前上市的绝大多数化疗药物不良反应较多，很多患者不能耐受以致死亡。因此，抗肿瘤药物的研究开发在当今生命科学领域中极富挑战性而且意义重大。因为HIV会降低人体免疫力，进而会导致病人容易患各种肿瘤，而且目前关于度鲁特韦的研究主要在抗HIV方面，还没有发现其能够应用到治疗别的疾病。本发明对度鲁特韦进行结构改造，以度鲁特韦为母核，根据生物活性亚结构拼接原理，通过click反应设计合成了一系列衍生物，并且我们利用CCK-8法评价了目标化合物对十多种人肿瘤细胞增殖抑制活性。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有生物活性的度鲁特韦衍生物，对人体肿瘤细胞具有抑制活性；本发明的同时提供其制备方法和应用。
本发明所述的具有生物活性的度鲁特韦衍生物，其结构式如下：
其中：
R1为甲基或氢；
R2为亚甲基、异丙基、苯基、苄基、含氮杂环、含硫杂环或含氧杂环；
R3为氢、甲基、乙基、苯基、苄基、含氮杂环、含硫杂环或含氧杂环。
所述的具有生物活性的度鲁特韦衍生物的制备方法，包括以下步骤：
(1)1-(2,2-二甲氧基乙基)-1,4-二氢-3-甲氧基-4-氧代-2,5-吡啶二甲酸-2-甲酯脱保护成醛后，与氨基丁醇环合得到3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-羧酸；
(2)3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-羧酸与氨基化合物经酰化反应得到酰化产物；
(3)酰化产物与叠氮经click反应，得到目标化合物。
其中：
一、步骤(1)如下：将1-(2,2-二甲氧基乙基)-1,4-二氢-3-甲氧基-4-氧代-2,5-吡啶二甲酸-2-甲酯加入溶剂中，在氩气保护下加热至60-70℃，反应2-6h；反应完全，再加入氨基丁醇，升温至70-85℃，反应2-8h；浓缩后加入二氯甲烷和水，分出下层有机相，浓缩得到3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-羧酸；
所述的1-(2,2-二甲氧基乙基)-1,4-二氢-3-甲氧基-4-氧代-2,5-吡啶二甲酸-2-甲酯、氨基丁醇的摩尔比为1:1-3；所述的氨基丁醇为R-3-氨基丁醇、S-3-氨基丁醇或消旋的3-氨基丁醇；所述的溶剂为苯磺酸和乙腈的混合液、甲酸和乙酸、甲酸或乙酸。
二、步骤(2)有两种方法：
方法一、3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-羧酸与氨基苯乙炔酰化，得到3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-(X-炔基苯氨基)甲酰胺；
其中，X为2、3或4；所述的氨基苯乙炔为2-氨基苯乙炔、3-氨基苯乙炔或4-氨基苯乙炔。
进一步优选的方法一如下：
室温下将3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-羧酸，HATU，DIPEA，氨基苯乙炔，N,N-二甲基甲酰胺混合反应11-13h，加水打浆，抽滤，干燥得到3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-(X-炔基苯氨基)甲酰胺；
其中，X为2、3或4；所述的3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-羧酸，HATU，DIPEA，氨基苯乙炔的摩尔比为1:1:2:1-2；所述的氨基苯乙炔为2-氨基苯乙炔、3-氨基苯乙炔或4-氨基苯乙炔。
方法二、3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-羧酸、N,N-羰基二咪唑与3-氨基-3-甲基-1-丁炔或胺基丙炔反应，得到3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-(1,1-二甲基丙炔基)甲酰胺或3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-(丙炔基)甲酰胺；
所述的3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-羧酸、CDI、氨基丙炔或3-氨基-3-甲基-1-丁炔的摩尔比为1:1-2:2-3。
进一步优选的方法二如下：
室温下，将3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-羧酸加入乙二醇二甲醚中，加入N,N-羰基二咪唑，升温至60-80℃反应，冷却，滴加溶有3-氨基-3-甲基-1-丁炔的乙二醇二甲醚溶液或氨基丙炔的乙二醇二甲醚溶液，在25-30℃条件下反应至TLC检测无原料，加水，减压蒸去乙二醇二甲醚，加入二氯甲烷萃取，分出有机相，水相萃取，合并有机相，浓缩后得到3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-(1,1-二甲基丙炔基)甲酰胺或3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-(丙炔基)甲酰胺。
三、步骤(3)有两种方法：
方法一、酰化产物与叠氮直接经click反应，得到目标化合物A；目标化合物A脱甲基，得到目标化合物B；
方法二、酰化产物脱甲基后再与叠氮发生click反应，得到目标化合物B。
方法一、
步骤(3)中，制得目标化合物A的步骤按照如下之一进行；
①将叠氮、酰化产物、叔丁醇、水、四氢呋喃、五水硫酸铜和抗坏血酸钠混合，在10-80℃下反应，TLC监控原料反应完全，得到黄色液体，加入二氯甲烷，过滤，萃取，干燥，蒸除溶剂得到目标化合物A；
所述的叠氮为苄基叠氮、2-溴苄基叠氮、2-乙基苯基叠氮、2-甲基-3-硝基苯基叠氮、2-氟苯基叠氮、4-三氟甲基苯基叠氮、2-甲基-3-硝基苯基叠氮、4-氟苯基叠氮、4-乙基苯基叠氮、3-三氟甲基苯基叠氮或2-三氟甲基苯基叠氮；
或者
②将TMS-叠氮、酰化产物、叔丁醇、水、四氢呋喃、五水硫酸铜和抗坏血酸钠混合，在10-80℃下反应，TLC监控原料反应完全，加入硅藻土，真空浓缩，层析，冲洗，然后将冲出的有机相，浓缩；
步骤(3)中，目标化合物A脱甲基的步骤如下：目标化合物A和无水溴化锂反应得到目标化合物B。
方法二、
步骤(3)中，酰化产物和无水溴化锂反应得到脱甲基的酰化产物，再与叠氮发生click反应，得到目标化合物B，按照如下之一进行：
①酰化产物和无水溴化锂反应得到脱甲基的酰化产物后，再将TMS-叠氮、脱甲基的酰化产物、叔丁醇、水、四氢呋喃、五水硫酸铜和抗坏血酸钠混合，在10-80℃下反应，TLC监控原料反应完全，浓缩反应液，然后加入二甲基亚砜，通过制备硅胶板进行分离，用纯甲醇进行展开，将基线周围未爬上去的硅胶刮出，通过甲醇和二氯甲烷的混合溶液冲洗后，浓缩，得到目标化合物B；
或者
②酰化产物和无水溴化锂反应得到脱甲基的酰化产物后，再将叠氮、脱甲基的酰化产物、叔丁醇、水、四氢呋喃、五水硫酸铜和抗坏血酸钠混合，在10-80℃下反应，TLC监控原料反应完全，加入二氯甲烷，过滤，萃取，干燥，蒸除溶剂得到目标化合物B；
所述的叠氮为苄基叠氮、2-溴苄基叠氮、2-乙基苯基叠氮、2-甲基-3-硝基苯基叠氮、2-氟苯基叠氮、4-三氟甲基苯基叠氮、2-甲基-3-硝基苯基叠氮、4-氟苯基叠氮、4-乙基苯基叠氮、3-三氟甲基苯基叠氮或2-三氟甲基苯基叠氮。
本发明中所述的目标化合物A、目标化合物B均为本发明的目标化合物。
所述的具有生物活性的度鲁特韦衍生物的应用，是将度鲁特韦衍生物制备抗癌药物。
本发明的有益效果如下：
1、本发明以度鲁特韦为先导化合物，利用药物拼接原理，通过click反应，将度鲁特韦结构中的苄基变为1,2,3-三氮唑结构，得到一系列结构新颖的化合物，能够通过影响肿瘤细胞中的钙离子通道来抑制肿瘤细胞的生长，具有显著的应用价值。
2、本发明同时发现度鲁特韦其他几个手性化合物也同时具有抗肿瘤活性，扩大了应用范围。
3、本发明对制备度鲁特韦关键中间体3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-羧酸的方法进行了优化，提高了其收率。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步描述。
实施例中化合物的命名如下：
化合物1：1-(2,2-二甲氧基乙基)-1,4-二氢-3-甲氧基-4-氧代-2,5-吡啶二甲酸-2-甲酯；
化合物2：(4R,12AS)-3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-羧酸；
化合物2–a：(4S,12AS)-3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-羧酸；
化合物2–b：3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-羧酸；
化合物3：(4R,12AS)-3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-(3-炔基苯氨基)甲酰胺；
化合物3-b：(4R,12AS)-3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-(2-炔基苯氨基)甲酰胺；
化合物3-c：(4R,12AS)-3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-(4-炔基苯氨基)甲酰胺；
化合物3-d：(4R,12AS)-3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-(1,1-二甲基丙炔基)甲酰胺；
化合物3-e：(4R,12AS)-3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-(丙炔基)甲酰胺；
化合物4：(4R,12AS)-3,4,6,8,12,12A-六氢-7-羟基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-(3-炔基苯氨基)甲酰胺；
化合物4-a：(4R,12AS)-3,4,6,8,12,12A-六氢-7-羟基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-(3-丙炔基)甲酰胺；
化合物5-e：(4R,12AS)-3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-(3-(1,2,3-三氮唑)苯氨基)甲酰胺；
化合物6：(4R,12AS)-3,4,6,8,12,12A-六氢-7-羟基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-(3-(1,2,3-三氮唑)苯氨基)甲酰胺。
实施例1
把化合物1(30g)加入到无水甲酸100mL中，在氩气保护下加热至65℃；反应约3h后，浓缩后加入乙腈150mL，搅拌使溶解，加入R-3-氨基丁醇12.5g，搅拌10min；升温至回流搅拌反应2h；真空浓缩蒸后加入二氯甲烷200mL，搅拌下加入水100mL，再加入2N盐酸调节反应液pH为1～2，搅拌10min后分出下层有机相，上层水相用二氯甲烷50mL萃取三次，合并有机相，浓缩得到化合物2(25.5g)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.43(s,1H),5.30(t,J1＝4.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),5.02(t,J1＝4.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),4.41(dd,J1＝4.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.27(dd,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.08(s,3H),4.03-3.99(m,2H),2.25-2.16(m,1H),1.56(d,J＝12.0Hz,1H),1.39(d,J＝8.0Hz,3H).
实施例2
把化合物1(30g)加入到无水甲酸70mL和无水乙酸40mL的混合液中，在氩气保护下加热至65℃；反应约3h后，真空浓缩除去甲酸和部分乙酸，加入乙腈100mL和R-3-氨基丁醇12.5g，搅拌10min；升温至80℃搅拌反应8h；真空浓缩蒸后加入二氯甲烷200mL，搅拌下加入水100mL，搅拌10min后分出下层有机相，上层水相用二氯甲烷50mL萃取三次，合并有机相，浓缩得到纯品化合物2(23.1g)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.43(s,1H),5.30(t,J1＝4.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),5.02(t,J1＝4.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),4.41(dd,J1＝4.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.27(dd,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.08(s,3H),4.03-3.99(m,2H),2.25-2.16(m,1H),1.56(d,J＝12.0Hz,1H),1.39(d,J＝8.0Hz,3H).
实施例3
把化合物1(30g)和苯磺酸24g加入到乙腈300mL中，氩气保护下加热至70℃；反应约5h后，加入R-3-氨基丁醇18g，搅拌10min；升温至80℃搅拌反应3.5h；真空浓缩蒸后加入二氯甲烷200mL，搅拌下加入水150mL，搅拌10min后分出下层有机相，上层水相用二氯甲烷50mL萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水40mL洗涤3次；然后浓缩得到粗品，最后在甲醇中重结晶纯化得到纯品化合物2(19.1g)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.43(s,1H),5.30(t,J1＝4.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),5.02(t,J1＝4.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),4.41(dd,J1＝4.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.27(dd,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.08(s,3H),4.03-3.99(m,2H),2.25-2.16(m,1H),1.56(d,J＝12.0Hz,1H),1.39(d,J＝8.0Hz,3H).
实施例4
把化合物1(30g)和苯磺酸24g加入到乙腈300mL中，在氩气保护下加热至70℃；反应约5h后，加入S-3-氨基丁醇18g，搅拌10min；升温至80℃搅拌反应4h；真空浓缩蒸后加入二氯甲烷200mL，搅拌下加入水150mL，搅拌10min后分出下层有机相，上层水相用二氯甲烷50mL萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水50mL洗涤3次；然后浓缩得到粗品，最后在甲醇中重结晶纯化得到纯品化合物2–a(24.2g)。
实施例5
把化合物1(30g)和苯磺酸24g加入到乙腈300mL中，在氩气保护下加热至70℃；反应约5h后，加入3-氨基丁醇25g，搅拌10min；升温至80℃搅拌反应6h；真空浓缩蒸后加入二氯甲烷200mL，搅拌下加入水150mL，搅拌10min后分出下层有机相，上层水相用二氯甲烷50mL萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水50mL洗涤3次；然后浓缩得到粗品，最后在甲醇中重结晶纯化得到纯品化合物2–b(15.7g)。
实施例6
在室温条件下，在反应瓶中加入化合物2(30g)，HATU38g，DIPEA25g，间氨基苯乙炔23g和N,N-二甲基甲酰胺1500mL，搅拌反应12h，室温下加水500mL，室温下，充分的打浆后，抽滤，滤饼置于鼓风烘箱干燥过夜，得到化合物3(34g)。
实施例7
在室温条件下，在反应瓶中加入化合物2(30g)，HATU38g，DIPEA25g，2-氨基苯乙炔23g和N,N-二甲基甲酰胺1500mL，搅拌反应12h，室温下加水500mL，室温下充分的打浆后抽滤得到化合物3-b(31.4g)。
实施例8
在室温条件下，在反应瓶中加入化合物2(30g)，HATU38g，DIPEA25g，4-氨基苯乙炔14g和N,N-二甲基甲酰胺1500mL，搅拌反应12h，室温下加水500mL，室温下，充分的打浆后，抽滤得到化合物3-c(27.6g)。
实施例9
氮气保护下，把化合物2(10g)加入乙二醇二甲醚150mL，室温搅拌20min后加入N,N-羰基二咪唑7.3g，体系开始加热，升温至70℃，搅拌反应1.5h，然后冷却到室温15～25℃，滴加溶有3-氨基-3-甲基-1-丁炔9g的乙二醇二甲醚20mL的溶液，保持内温在25-30℃反应至TLC检测无原料；室温下加水100mL，减压蒸去乙二醇二甲醚，加入二氯甲烷100mL萃取，分层，水层再用二氯甲烷萃取多次，合并有机相，分出有机相；浓缩后得到化合物3-d(9.5g)。
实施例10
氮气保护下，把化合物2(10.0g)加入乙二醇二甲醚150.0mL，室温搅拌；加入N,N-羰基二咪唑7.3g，升温至70℃，保持该温度继续搅拌1.5h，体系冷却到室温，滴加溶有氨基丙炔5.3g的乙二醇二甲醚20mL的溶液，可见内温缓慢升高；在室温条件下反应至TLC检测无原料，室温下加水100mL，减压蒸去乙二醇二甲醚，加入二氯甲烷100mL萃取，分层，水层再用二氯甲烷150mL萃取2次，合并有机相，分出有机相；浓缩后得到类白色固体化合物3-e(8.2g)，1H NMR(400MHz,DMSO-d6):10.21(t,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),8.56(s,1H),5.35(dd,J1＝4.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.77(t,J1＝4.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),4.58-4.53(m,1H),4.37-4.32(m,1H),4.12(dd,J1＝4.0Hz,J2＝4.0Hz,2H),3.96(t,J1＝4.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),3.87(dd,J1＝4.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),3.79(s,3H),3.17(d,J＝4.0Hz,1H),2.09(s,1H),1.28(d,J＝4.0Hz,3H)。
实施例11
在反应瓶中，把化合物3(40g)加入到四氢呋喃300mL中，在氮气保护下，室温搅拌均匀；然后加入无水溴化锂(26g)，缓慢升温至回流，保持该温度搅拌8h，停止加热，冷却至25～30℃，加入水200mL，搅拌20min；40℃下减压蒸除大部分四氢呋喃，加入二氯甲烷400mL，室温搅拌下加入2N盐酸溶液调节反应液pH为2～4，萃取，分层，水相用二氯甲烷300mL萃取三次，合并有机相，浓缩后得到固体化合物4(32g)；LC-MS(ESI)：394[M+H]+。
实施例12
在反应瓶中，把化合物3-e(35g)加入到四氢呋喃300mL中，在氮气保护下，室温搅拌均匀；然后加入无水溴化锂(26g)，缓慢升温至回流，保持该温度搅拌8h，停止加热，冷却至25～30℃，加入水200mL，搅拌20min；40℃下减压蒸除大部分四氢呋喃，加入二氯甲烷400mL，室温搅拌下加入2N盐酸溶液调节反应液pH为2～4，萃取，分层，水相用二氯甲烷300mL萃取三次，合并有机相，浓缩后得到固体化合物4-a(24g)；LC-MS(ESI)：332[M+H]+。
实施例13
在500mL反应瓶中，依次加入苄基叠氮0.4g、化合物3(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL，四氢呋喃10mL，五水硫酸铜0.2g和抗坏血酸钠0.4g，在20℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，得到黄色液体，加入二氯甲烷20mL，过滤反应液，水相用二氯甲烷萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用乙醇重结晶得到白色产品，目标化合物5(0.39g)；LC-MS(ESI)：541[M+H]+。
实施例14
在500mL反应瓶中，依次加入2-溴苄基叠氮0.4g、化合物3(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL，四氢呋喃10mL，五水硫酸铜0.2g和抗坏血酸钠0.4g，在20℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，得到黄色液体，加入二氯甲烷20mL，过滤反应液，水相用二氯甲烷萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用乙醇重结晶得到白色的产品，目标化合物5-a(0.35g)；LC-MS(ESI)：619[M+H]+。
实施例15
在反应瓶中，依次加入2-乙基苯基叠氮0.5g、化合物3(0.5g)，叔丁醇10mL，水10mL，四氢呋喃10mL，五水硫酸铜0.25g，抗坏血酸钠0.5g，在70℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，加入二氯甲烷20mL，过滤反应液，水相用二氯甲烷萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到白色的产品，目标化合物5-b(0.55g)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):10.46(t,J1＝4.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),8.59(s,1H),8.33(s,1H),7.55-7.49(m,2H),7.43-7.38(m,2H),5.35(t,J1＝4.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.77(t,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.68(d,J＝4.0Hz,2H),4.57(dd,J1＝4.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.36(dd,J1＝4.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),3.96(t,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),3.85(dd,J1＝4.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),3.78(s,3H),2.42(dd,J1＝8.0Hz,J2＝8.0Hz,2H),2.00-1.91(m,1H),1.52(d,J＝16.0Hz,1H),1.28(d,J＝8.0Hz,3H),1.02(t,J1＝8.0Hz,J2＝8.0Hz,3H).
实施例16
在反应瓶中，依次加入2-甲基-3-硝基苯基叠氮0.5g、化合物3(0.5g)，叔丁醇10mL，水10mL，四氢呋喃10mL，五水硫酸铜0.25g，抗坏血酸钠0.5g，在70℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，加入二氯甲烷20mL，过滤反应液，水相用二氯甲烷萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到白色的产品，目标化合物5-c(0.52g)，1HNMR(400MHz,DMSO-d6):12.63(s,1H),9.12(s,1H),,8.71(s,1H),8.20(t,J1＝8.0Hz,J2＝8.0Hz,2H),7.95(d,J＝8.0Hz,1H),7.84(d,J＝8.0Hz,1H),7.73(dd,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,2H),7.50(t,J1＝8.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),5.39(s,1H),4.79(s,1H),4.62(d,J＝12.0Hz,1H),4.41(d,J＝8.0Hz,1H),3.98(t,J1＝12.0Hz,J2＝12.0Hz,1H),3.89(s,1H),3.85(s,3H),2.26(s,3H),1.97(s,1H),1.53(d,J＝12.0Hz,1H),1.29(d,J＝8.0Hz,3H).
实施例17
在反应瓶中，依次加入2-氟苯基叠氮0.5g、化合物3(0.5g)，叔丁醇10mL，水10mL，四氢呋喃10mL，五水硫酸铜0.25g，抗坏血酸钠0.5g，在70℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，加入二氯甲烷20mL，过滤反应液，水相用二氯甲烷萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到白色的产品，目标化合物5-d(0.47g)，1H NMR(400MHz,DMSO-d6):12.62(s,1H),9.17(s,1H),8.73(s,1H),8.24(s,1H),7.90(d,J＝24.0Hz,2H),7.68(d,J＝16.0Hz,3H),7.50(s,2H),5.40(s,1H),4.80(s,1H),4.65(s,1H),,4.43(s,1H),3.98(s,1H),3.89-3.86(m,4H),1.98(s,1H),1.54(s,1H),1.30(d,J＝8.0Hz,3H).
实施例18
在反应瓶中，依次加入TMS-叠氮0.4g、化合物3(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL，四氢呋喃10mL，五水硫酸铜0.2g，抗坏血酸钠0.4g，在70℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，然后向反应体系中加入硅藻土20g，真空浓缩后，把浓缩物干燥后放入层析柱里面，通过甲醇和二氯甲烷的混合溶液(V甲醇：V二氯甲烷1:8)冲洗浓缩物，然后把冲出来的有机相在高真空条件下浓缩得到目标化合物5-e(0.36g)，LC-MS(ESI)：451[M+H]+。
实施例19
在反应瓶中，把化合物5-e(0.45g)和无水溴化锂0.26g加入到无水甲醇30mL中，在氮气保护下，升温至回流，保持该温度搅拌3.5h，向反应液中加入饱和的氢氧化钠溶液5mL，再加入水20mL，真空浓缩加入二氯甲烷20mL，分出水相，向水相中室温搅拌下加入2N盐酸溶液调节反应液pH为2～4，有大量固体析出，抽滤后烘干得到目标化合物6(0.27g)，LC-MS(ESI)：437[M+H]+。
实施例20
在500mL反应瓶中，依次加入TMS-叠氮0.5g、化合物4(0.5g)，叔丁醇10mL，水10mL，四氢呋喃10mL，五水硫酸铜0.25g和抗坏血酸钠0.5g，在70℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，浓缩反应液，然后加入二甲基亚砜10mL，通过制备硅胶板进行分离，用纯甲醇进行展开，把基线周围未爬上去的硅胶刮出，通过甲醇和二氯甲烷的混合溶液(V甲醇：V二氯甲烷1:8)冲洗后浓缩得到目标化合物6(0.41g)，LC-MS(ESI)：437[M+H]+。
实施例21
在500mL反应瓶中，依次加入4-三氟甲基苯基叠氮0.4g、化合物4(0.5g)，叔丁醇10mL，水10mL和四氢呋喃10mL，五水硫酸铜0.2g和抗坏血酸钠0.4g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，得到黄色液体，用二氯甲烷萃取两次，有机相经无水硫酸镁干燥后，蒸除溶剂后用乙醇重结晶得到产品，目标化合物6-a(0.44g)，LC-MS(ESI)：581[M+H]+。
实施例22
在500mL反应瓶中，依次加入2-甲基-3-硝基苯基叠氮0.5g、化合物4(0.5g)，叔丁醇10mL，水10mL，四氢呋喃10mL，五水硫酸铜0.25g和抗坏血酸钠0.5g，在70℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，用二氯甲烷萃取两次，有机相经无水硫酸镁干燥后，蒸除溶剂后用乙醇重结晶得到产品，目标化合物6-b(0.34g)，LC-MS(ESI)：572[M+H]+。
实施例23
在500mL反应瓶中，依次加入3-三氟甲基苯基叠氮0.5g、化合物4(0.5g)，叔丁醇10mL，水10mL，四氢呋喃10mL，五水硫酸铜0.25g和抗坏血酸钠0.5g，在70℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，用二氯甲烷萃取两次，有机相经无水硫酸镁干燥后，蒸除溶剂后用乙醇洗涤得到产品，目标化合物6-c(0.283g)，LC-MS(ESI)：581[M+H]+。
实施例24
在500mL反应瓶中，依次加入2-三氟甲基苯基叠氮0.5g、化合物4(0.5g)，叔丁醇10mL，水10mL，四氢呋喃10mL，五水硫酸铜0.25g和抗坏血酸钠0.5g，在70℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，用二氯甲烷30mL萃取两次，有机相经无水硫酸镁干燥后，蒸除溶剂后用乙醇洗涤得到产品，目标化合物6-d(0.309g)。
实施例25
在反应瓶中，依次加入4-乙基苯基叠氮0.5g、化合物3-d(0.5g)，叔丁醇10mL，水10mL，四氢呋喃10mL，五水硫酸铜0.25g和抗坏血酸钠0.5g，在70℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，得到黄色液体，用二氯甲烷萃取两次，有机相经无水硫酸镁干燥后，蒸除溶剂后用乙醇重结晶得到产品，目标化合物7(0.52g)；LC-MS(ESI):549[M+H]+。
实施例26
在反应瓶中，依次加入2-三氟甲基苯基叠氮0.5g、化合物3-b(0.5g)，叔丁醇10mL，水10mL，四氢呋喃10mL，五水硫酸铜0.25g和抗坏血酸钠0.5g，在70℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，得到黄色液体，用二氯甲烷萃取两次，有机相经无水硫酸镁干燥后，蒸除溶剂后用甲醇重结晶得到产品，目标化合物8(0.52g)；LC-MS(ESI):595[M+H]+。
实施例27
在反应瓶中，依次加入2-甲基苯基叠氮0.5g、化合物3-c(0.5g)，叔丁醇10mL，水10mL，四氢呋喃10mL，五水硫酸铜0.25g和抗坏血酸钠0.5g，在70℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，得到黄色液体，用二氯甲烷萃取两次，有机相经无水硫酸镁干燥后，蒸除溶剂后用甲醇重结晶得到产品，目标化合物8-a(0.19g)；LC-MS(ESI):541[M+H]+。
实施例28
在反应瓶中，依次加入2-氟苯基叠氮0.5g、化合物3-c(0.5g)，叔丁醇10mL，水10mL，四氢呋喃10mL，五水硫酸铜0.25g和抗坏血酸钠0.5g，在70℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，得到黄色液体，用二氯甲烷萃取两次，有机相经无水硫酸镁干燥后，蒸除溶剂后用甲醇重结晶得到产品，目标化合物9(0.24g)；LC-MS(ESI):545[M+H]+。
实施例29
在反应瓶中，依次加入4-氟苯基叠氮0.4g、化合物4-a(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL，四氢呋喃10mL，五水硫酸铜0.2g和抗坏血酸钠0.4g，在70℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，得到黄色液体，用二氯甲烷萃取两次，有机相经无水硫酸镁干燥后，蒸除溶剂得到黄色固体，用乙醇重结晶得到产品，目标化合物10(0.41g)；1H NMR(400HMz,DMSO-d6):12.51(s,1H),11.94(s,2H),10.41(t,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),8.69(s,1H),8.51(s,1H),7.95(dd,J1＝4.0Hz,J2＝4.0Hz,2H),7.44(t,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,2H),5.48(s,1H),4.80(t,J1＝8.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),4.67(d,J＝8.0Hz,2H),4.59(d,J＝12.0Hz,1H),4.39(dd,J1＝8.0Hz,J2＝4.0Hz,1H),4.05(t,J1＝12.0Hz,J2＝12.0Hz,1H),3.90(d,J＝16.0Hz,1H),1.34(d,J＝8.0Hz,3H).
实施例30
从CO2培养箱中取出肿瘤细胞SW480，肺癌细胞H1975细胞和肺纤维细胞CCD19培养皿，分别进行如下操作：在酒精灯旁进行无菌操作，打开皿盖，吸出培养液于废液缸中，用2mL的PBS洗培养瓶中的培养液两次，用0.25％的胰蛋白酶进行消化，待观察发现出现细胞间隙增大、细胞变成小圆圈形状时终止消化，使用移液枪吹打培养瓶底部使细胞脱落。将所得的细胞悬浮液转移至无菌离心管中，设置离心机为800r/min，3min，进行离心，然后缓慢倾倒离心管中的上清液，加入2～5mL的培养液，于倒置显微镜下进行细胞计数。根据计数结果，将细胞接种于96孔板中，每孔细胞数目为3000个。将96孔板放入37℃，5％CO2培养箱中培养24h。
将所得到的药物分子配制至所需浓度：40μmol/L，20μmol/L，10μmol/L，5μmol/L，2.5μmol/L。从CO2培养箱中取出96孔板，除去上清液，每孔加入100μL的含药培养基，每种浓度的药物同时设3个复孔。作为空白实验的孔，加入等体积的相应培养液。将其置于37℃、5％CO2培养箱中培养72h。每一种药物都用同一批次不同代数的细胞进行三次实验。72小时后，在避光条件下，每孔加入5mg/mL的MTT溶液10μL，继续放入CO2培养箱中培养4h，用移液枪吸取上清液，每孔加入100μL DMSO，放置摇床10min使其混合均匀，用酶标仪在490nm波长处测定其吸光度OD值，其细胞增殖抑制率计算方法如下：细胞增殖抑制率＝[OD对照-OD实验]/OD对照×100％；通过测试实施例6，实施例7和实施例8这三个化合物，我们发现对这H1975和CCD19两种细胞的抑制活性分别为(66.9μmol/L，146.3μmol/L)，(86.2μmol/L，216.7μmol/L)和(83.9μmol/L，172.1μmol/L)，由此我们可以大概判断炔基在间位活性要优于邻位和对位；通过测试实施例16和实施例22这两个化合物，我们发现对这H1975和CCD19两种细胞的抑制活性分别为(4.1μmol/L，27.1μmol/L)和(34.0μmol/L，63.3μmol/L)；通过实施例15，实施例18和实施例14这三个化合物，我们发现对这H1975和CCD19两种细胞的抑制活性分别为(3.3μmol/L，12.1μmol/L)，(95.1μmol/L，116.4μmol/L)和(22.4μmol/L，315.0μmol/L)。实施例25得到的目标化合物对肿瘤细胞SW480，在浓度为320μmol/L的条件下达到了87％。
实施例31
细胞内钙离子检测
从CO2培养箱中取出肺癌细胞H1975细胞培养皿，分别进行如下操作：在酒精灯旁进行无菌操作，打开皿盖，吸出培养液于废液缸中，用2mL的PBS洗培养瓶中的培养液两次，用0.25％的胰蛋白酶进行消化，待观察发现出现细胞间隙增大、细胞变成小圆圈形状时终止消化，使用移液枪吹打培养瓶底部使细胞脱落，将所得的细胞悬浮液转移至无菌离心管中，设置离心机为800r/min，3min，进行离心，然后缓慢倾倒离心管中的上清液，加入2～5mL的培养液，于倒置显微镜下进行细胞计数。根据计数结果，用相应的培养液将其配制成1×105cells/mL的单细胞悬液，然后接种于6孔板中，且每孔2mL，放入37℃，5％CO2培养箱中培养24h，第二天加入10mmol/L的药物分子，同时设置3个孔，作为空白实验的孔，加入等体积的相应培养液，继续培养24小时，每一种药物都用同一批次不同代数的细胞进行三次实验。24小时后，同细胞凋亡处理方法一致，制造成细胞沉淀于无菌离心管。向离心管中加入浓度为5μM的钙离子荧光探针Fluo-3 100μL，轻轻摇匀，于37℃，5％CO2培养箱中孵育30分钟，染色后，用PBS清洗两次，后使用流式细胞仪进行分析。经过测试计算实施例16所得到的化合物和实施例15所得到的化合物浓度在10mmol/L时均不同程度上影响钙离子分泌水平，会增加钙离子的分泌，其增加的百分比分别为50.8％，47.2％。
实施例32
从CO2培养箱中取出肿瘤细胞PC9，H460，Huh7，hepG2等，分别进行如下操作：在酒精灯旁进行无菌操作，打开皿盖，吸出培养液于废液缸中，用2mL的PBS洗培养皿中的细胞1次，然后用0.25％的胰酶消化，待观察到细胞间隙增大、细胞变成小圆圈形状时终止消化，使用移液枪吹打培养皿底部使细胞脱落。将所得的细胞悬浮液转移至无菌15ml离心管中，800r/min，2min，进行离心，然后缓慢倾倒离心管，除去上清液，留底部细胞，加入3mL的培养液，于倒置显微镜下进行细胞计数。根据计数结果，用相应的培养液将其配制成1×104cells/mL的单细胞悬液，然后接种于96孔板中，每孔100μL。将96孔板放入37℃，5％CO2培养箱中培养24h。
将所得到的药物分子配制至所需浓度：0.5，2.0，8.0，16.0，32.0μmol/L。从CO2培养箱中取出96孔板，除去上清液，每孔加入100μL的含药培养基，同时设5个复孔。作为空白实验的孔，加入等体积的相应培养液。然后将加了药物的96孔板置于37℃、5％CO2培养箱中分别培养48h。每一种药物都用同一批次不同代数的细胞进行三次实验。48小时后，在避光条件下，去除上清液，按照每100uL培养液加10uL的CCK8检测液配置混合液，向96孔板细胞中每孔加100ul混合液，包括空白对照孔。继续放入CO2培养箱中培养1h，用酶标仪在450nm波长处测定其吸光度OD值，样品OD值减去空白OD值，计算比较细胞活性。
实施例16所得化合物对这4种肿瘤细胞的抑制活性分别为8.5，3.2，14.4，2.1，6.7μmol/L；实施例15所得化合物对这4种肿瘤细胞的抑制活性分别为9.7，12.2，16.3，14.7μmol/L；实施例14所得化合物对这4种肿瘤细胞的抑制活性分别为12.1，16.3，14.5，27.7μmol/L。
实施例33
对C8166细胞的毒性实验：4×105/mL C8166细胞悬液100μL与不同的待测药物溶液混合，设3个重复孔。同时设置不含药物的对照孔，37℃,5％CO2培养3天，采用MTT比色法检测细胞毒性。ELx800酶标仪测定OD值，测定波长为595nm，参考波长为630nm。计算得到CC50值(50％Cytotoxic Concentration)，即对50％的正常T淋巴细胞系C8166产生毒性时的药物浓度。
对HIV-1IIIB致细胞病变(CPE)的抑制实验：将8×105/mL C8166细胞50μL/孔接种到含有100μL/孔梯度倍比稀释药物的96孔细胞培养板上，然后加入50μL的HIV-1IIIB稀释上清，1300TCID50/孔。设3个重复孔。同时设置不含药物的正常细胞对照孔。3TC为阳性药物对照。37℃,5％CO2培养3天，倒置显微镜下(100×)计数合胞体的形成。EC50(50％EffectiveConcentration)为抑制合胞体形成50％时的药物浓度。
计算公式：根据实验结果，采用Origin7.5绘制折线图，按Reed&Muench法计算出样品抑制病毒的50％有效浓度(EC50)，50％抑制细胞生长浓度(CC50)及抗HIV-1活性的治疗指数TI值(Therapeutic index)为：TI＝CC50/EC50。1、细胞生长存活率(％)＝实验孔OD值/对照孔OD值×100；2、HIV-1致细胞病变的抑制率(％)＝(1-实验孔合胞体数/对照孔合胞体数)×100。
化合物6-b、6-c和6-d的CC50分别为12.38μmol/L、“>200μmol/L”和“>200μmol/L”；EC50分别为0.67μmol/L、2.79μmol/L和3.03μmol/L；TI分别为18.38、“>71.77”和“>65.95”。
以上实施例描述了本发明的基本原理、主要特征及优点，本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明原理的范围下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进均落入本发明保护的范围内。
Claims (7)
1.一种具有生物活性的度鲁特韦衍生物，其特征在于，其结构式如下：
其中：
R1为甲基或氢；
R2为亚苯基；
R3为氢、甲基、乙基、苯基或苄基。
2.一种权利要求1所述的具有生物活性的度鲁特韦衍生物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）1-(2,2-二甲氧基乙基)-1,4-二氢-3-甲氧基-4-氧代-2,5-吡啶二甲酸-2-甲酯脱保护成醛后，与氨基丁醇环合得到3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-羧酸；
（2）3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-羧酸与氨基苯乙炔酰化，得到3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-(X-炔基苯氨基)甲酰胺；
其中，X为2、3或4；所述的氨基苯乙炔为2-氨基苯乙炔、3-氨基苯乙炔或4-氨基苯乙炔；
（3）酰化产物与叠氮直接经click反应，得到目标化合物A；目标化合物A脱甲基，得到目标化合物B；
或者酰化产物脱甲基后再与叠氮发生click反应，得到目标化合物B。
3.一种权利要求1所述的具有生物活性的度鲁特韦衍生物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）1-(2,2-二甲氧基乙基)-1,4-二氢-3-甲氧基-4-氧代-2,5-吡啶二甲酸-2-甲酯脱保护成醛后，与氨基丁醇环合得到3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-羧酸；
（2）室温下将3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-羧酸，HATU，DIPEA，氨基苯乙炔，N,N-二甲基甲酰胺混合反应11-13h，加水打浆，抽滤，干燥得到3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-(X-炔基苯氨基)甲酰胺；
其中，X为2、3或4；所述的3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-羧酸，HATU，DIPEA，氨基苯乙炔的摩尔比为1:1:2:1-2；所述的氨基苯乙炔为2-氨基苯乙炔、3-氨基苯乙炔或4-氨基苯乙炔；
（3）酰化产物与叠氮直接经click反应，得到目标化合物A；目标化合物A脱甲基，得到目标化合物B；
或者酰化产物脱甲基后再与叠氮发生click反应，得到目标化合物B。
4.根据权利要求2或3所述的具有生物活性的度鲁特韦衍生物的制备方法，其特征在于，
步骤（1）如下：将1-(2,2-二甲氧基乙基)-1,4-二氢-3-甲氧基-4-氧代-2,5-吡啶二甲酸-2-甲酯加入溶剂中，在氩气保护下加热至60-70℃，反应2-6h；反应完全，再加入氨基丁醇，升温至70-85℃，反应2-8h；浓缩后加入二氯甲烷和水，分出下层有机相，浓缩得到3,4,6,8,12,12A-六氢-7-甲氧基-4-甲基-6,8-二氧代-2H-吡啶并[1',2':4,5]吡嗪并[2,1-B][1,3]恶嗪-9-羧酸；
所述的1-(2,2-二甲氧基乙基)-1,4-二氢-3-甲氧基-4-氧代-2,5-吡啶二甲酸-2-甲酯、氨基丁醇的摩尔比为1:1-3；所述的溶剂为苯磺酸和乙腈的混合液、甲酸和乙酸、甲酸或乙酸。
5.根据权利要求2或3所述的具有生物活性的度鲁特韦衍生物的制备方法，其特征在于，
步骤（3）中，制得目标化合物A的步骤按照如下之一进行；
①当R3为苄基时，将叠氮、酰化产物、叔丁醇、水、四氢呋喃、五水硫酸铜和抗坏血酸钠混合，在10-80℃下反应，TLC监控原料反应完全，得到黄色液体，加入二氯甲烷，过滤，萃取，干燥，蒸除溶剂得到目标化合物A；
所述的叠氮为苄基叠氮；
或者
②当R3为氢时，将TMS-叠氮、酰化产物、叔丁醇、水、四氢呋喃、五水硫酸铜和抗坏血酸钠混合，在10-80℃下反应，TLC监控原料反应完全，加入硅藻土，真空浓缩，层析，冲洗，然后将冲出的有机相，浓缩得到目标化合物A；
步骤（3）中，目标化合物A脱甲基的步骤如下：目标化合物A和无水溴化锂反应得到目标化合物B。
6.根据权利要求2或3所述的具有生物活性的度鲁特韦衍生物的制备方法，其特征在于，
步骤（3）中，酰化产物和无水溴化锂反应得到脱甲基的酰化产物，再与叠氮发生click反应，得到目标化合物B，按照如下之一进行：
①当R3为氢时，酰化产物和无水溴化锂反应得到脱甲基的酰化产物后，再将TMS-叠氮、脱甲基的酰化产物、叔丁醇、水、四氢呋喃、五水硫酸铜和抗坏血酸钠混合，在10-80℃下反应，TLC监控原料反应完全，浓缩反应液，然后加入二甲基亚砜，通过制备硅胶板进行分离，用纯甲醇进行展开，将基线周围未爬上去的硅胶刮出，通过甲醇和二氯甲烷的混合溶液冲洗后，浓缩，得到目标化合物B；
或者
②当R3为苄基时，酰化产物和无水溴化锂反应得到脱甲基的酰化产物后，再将叠氮、脱甲基的酰化产物、叔丁醇、水、四氢呋喃、五水硫酸铜和抗坏血酸钠混合，在10-80℃下反应，TLC监控原料反应完全，加入二氯甲烷，过滤，萃取，干燥，蒸除溶剂得到目标化合物B；
所述的叠氮为苄基叠氮。
7.一种权利要求1所述的具有生物活性的度鲁特韦衍生物的应用，其特征在于，将度鲁特韦衍生物制备抗肺癌、抗结肠癌或抗肝癌的药物。
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