CN113521156A - 一种抗hpv感染的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种抗HPV感染的中药组合物及其制备方法。本发明的中药组合物，由以下原料药制备得到：龙葵、苦参、穿心莲、大黄和青黛。本发明的中药组合物中的有效成分利用高渗透性充分接触阴道与宫颈黏膜，直达基底层细胞，能够更彻底、更深层的杀灭病毒，对HPV感染疗效显著，转阴率达到88％以上，有效抑制宫颈癌前病变，使CINⅡ级以下病变转归。并且治疗宫颈糜烂、阴道炎等慢性炎症有效率达到98％以上。

Description

一种抗HPV感染的中药组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种抗HPV感染的中药组合物及其制备方法，属于中药技术领域。

背景技术

宫颈癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，为全球女性第四大高发病率和高致死率肿瘤，中国新增病例数13万/年。宫颈癌的发病与高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)持续性感染密切相关，所有的侵袭性宫颈癌及95％的宫颈上皮内瘤变、原位癌病理组织中均可检测出HPV。高危型HPV主要为HPV16及HPV18，HPV表达的主要致瘤蛋白E6、E7在由HPV感染发展为宫颈癌的过程中发挥关键作用。70～80％的女性一生都感染过HPV，其中10％的女性面临持续性HPV感染的危险状态。注射疫苗是一种预防宫颈癌的有效途径，但是目前HPV疫苗适用人群窄、抗HPV型别有限，并且价格昂贵，产量小，使得疫苗推广受到阻碍；目前市场上没有抗HPV的特效药，只能靠自身的免疫力清除，然而现代人们生活压力大，饮食不均衡，长期熬夜，导致现代人包括年轻人的免疫力均降低，所以很多人会发展成HPV病毒持续感染，进而进展为宫颈癌前病变或宫颈癌，目前临床多采用手术的方法进行治疗。手术对于年轻人，将直接影响日后的生育；另外，手术只是切除病变的地方，但切不掉病毒，所以手术残端如果还有病毒，日后还存在病变的风险。患者一旦持续感染HPV，将承担巨大的心理压力和经济压力，给生活带来巨大困扰。因此，临床迫切需要一款抗HPV的相关产品，为广大女性解除病痛。

现有抗HPV产品种类主要包括：α-干扰素免疫调节型，不直接对病毒起作用，提升免疫应答，疗效不理想，复发率高；腐蚀型化学外用药，低效易复发，对高危HPV病毒无效；生物蛋白敷料型，生物蛋白电荷非特异结合，主要起物理隔绝作用，对病毒直接作用有限，疗效个体差异太大，难以评估；还有多数产品对持续感染无效，多数无临床症状的HPV感染是一过性的，感染者不用产品也会自愈，因此导致现有多数产品疗效浑水摸鱼，对持续感染无效。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种抗HPV感染的中药组合物及其制备方法。

本发明的第一个目的是提供一种抗HPV感染的中药组合物，由以下原料药制备得到：龙葵、苦参、穿心莲、大黄和青黛。

进一步地，所述中药组合物由以下重量份的原料药制备得到：龙葵4～6份、苦参10～14份、穿心莲8～9份、大黄1～3份和青黛8～9份。

进一步地，所述中药组合物由以下重量份的原料药制备得到：龙葵5份、苦参12份、穿心莲8.5份、大黄2份和青黛8.5份。

本发明的第二个目的是提供所述的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：

S1、取龙葵、苦参、穿心莲、大黄和青黛，洗净后进行干燥，粉碎，得到粗粉；

S2、将S1步骤得到的粗粉采用破壁超微粉碎技术粉碎至粒径在25微米以下，得到超微破壁粉；

S3、向S2步骤的超微破壁粉中加入辅料，制备成成品制剂。

在本发明中，采用破壁超微粉碎技术，保留了处方中药成分“天然复合化学库”的完整性，提高了药物成分渗透性和生物利用度，由于HPV病毒感染发生在上皮基底层细胞，本发明的中药组合物中的有效成分利用高渗透性充分接触阴道与宫颈黏膜，直达基底层细胞，实现更彻底、更深层的杀灭病毒。

进一步地，S1步骤中，干燥是在30～45℃干燥10～20h。

进一步地，S1步骤中，在8000～12000r/min条件下粉碎50～100s，得到粗粉。

进一步地，S2步骤中，粉碎是采用振动研磨式超微粉碎机，在900～1000r/min条件下粉碎30～50min，温度-20～10℃。

进一步地，所述的制剂为膏剂。

进一步地，制剂为膏剂时，所述辅料包括卡波姆、水和小分子透明质酸钠。

本发明中，小分子透明质酸为本领域通用的小分子透明质酸，通过商业购买得到。

进一步地，所述的辅料还包括尼泊金乙酯钠。

本发明的有益效果是：

本发明的中药组合物中的有效成分利用高渗透性充分接触阴道与宫颈黏膜，直达基底层细胞，能够更彻底、更深层的杀灭病毒，对HPV感染疗效显著，转阴率达到88％以上，有效抑制宫颈癌前病变，使CINⅡ级以下病变转归，免除手术之苦，也可以保证年青患者的生育功能，避免宫颈锥切造成的流产。具有重要的社会意义。并且治疗宫颈糜烂、阴道炎等慢性炎症有效率达到98％以上。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。

HPV持续感染致宫颈癌机理：宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一。流行病学资料结合实验室证据均强有力地支持人乳头瘤病毒(human pap-illomavirus，HPV)，尤其是高危型HPV感染是宫颈癌发生的必要条件。随着细胞遗传学和分子生物学的进展，人们逐渐发现高危型HPV感染者并非都发生了宫颈癌，HPV与宿主染色体的整合才是宫颈细胞永生化过程中的重要步骤，这成为近年研究的热点。该过程包括HPV识别、黏附宫颈上皮细胞、穿膜入胞及与宿主细胞染色体发生整合等关键步。HPV对宿主的损害是以感染宫颈鳞状上皮基底层开始的，如感染的是表层上皮细胞，将会随着其成熟老化而脱落清除，造成短暂感染；而只有感染基底细胞才有可能形成持续感染。

HPV穿膜入胞后早期常以游离状态存在于宿主细胞内，HPV-DNA以独立的外源性染色体状态游离于被感染的细胞核内。在细胞蛋白和病毒自身蛋白的帮助下，HPV脱壳后，整合酶将HPV基因组整合至宿主细胞基因组内，并释放子代病毒，导致HPV持续感染，使表达病毒癌基因以及宿主细胞相关基因的表达也发生变化，从而导致宿主染色体的数量或结构异常，最终发展为宫颈癌。因此，复制、装配和释放子代病毒就构成了HPV与宿主染色体整合的整个过程。从HPV致病机理可以明确：阻断HPV感染，预防宫颈上皮细胞病变，需要从三方面干预：1、直接杀灭病毒2、清除已经整合HPV基因组的宿主细胞3、通过调节自身免疫功能，及时清除突变的细胞及病毒。只有如此，才能达到彻底清除病毒，防止癌变的目的。

苦参具有消炎解毒、杀虫燥湿、止带止痒之功，现代药物研究证明苦参碱有抗炎、抗菌、抗肿瘤、抗病原微生物之功效；穿心莲具有清热解毒、抗炎消肿、止痛燥湿、止痒止血的作用，现代药学研究穿心莲内酯具有抗细菌和抗病毒作用，也具有抗肿瘤作用，穿心莲可以调节机体的免疫功能，调节细胞免疫功能，提高人体巨噬细胞和中性粒细胞的吞噬能力，通过宫颈局部给药，将提高宫颈局部巨噬细胞和中性粒细胞的吞噬病毒能力，加入此药，既可以有杀灭病毒的能力，同时可以调节机体的局部免疫功能，达到清除HPV病毒的目的。苦参与穿心莲同用能够倍增杀病毒杀菌抗肿瘤的功能。青黛具有清热解毒之功效，现代药理学研究显示，青黛具有抗肿瘤、抗病毒、抗菌消炎、免疫调节作用。青黛与穿心莲、苦参同用，具有强有力地增强杀病毒，抗肿瘤，调节免疫力、杀菌消炎的功效。大黄具有清热利湿，抗病毒、抗菌抗炎、抗真菌、抗寄生虫作用，并有局部止血作用。龙葵具有清热解毒、消肿止痛功效，现代药理学研究显示，龙葵碱具有明显的抗肿瘤作用，抑制肿瘤细胞再生，能减少病毒对人体细胞的伤害，同时抗菌消炎。

本发明综合阻断HPV感染、预防宫颈上皮细胞病变的三方面干预因素，且根据中草药的性、味、功效一一分析，经过反复改进处方和反复临床验证，不断完善，确定了本发明的中药组合物，并制备出抗HPV和治疗宫颈2级以下癌前病变、并且无毒副作用的理想中药复方制剂。

本发明的中药复方制剂，发挥了中药复方协同效应的独有优势，穿心莲、青黛、大黄、龙葵具有抗病毒功效，可以杀灭病毒；而穿心莲、青黛、苦参、龙葵均具有很强的抗肿瘤作用，可以及时抑制肿瘤的再生；穿心莲与青黛均具有调节免疫力的功能，促进机体通过免疫系统及时清除病毒和突变的细胞。本发明从致病机理入手，五种药物组合，相互协同，达到高治愈率，为患者解除病痛。

实施例1：本发明中药组合物的制备

S1、取5份龙葵、12份苦参、8.5份穿心莲、2份大黄和8.5份青黛，洗净后在40℃干燥15h，然后在10000r/min条件下粉碎60s，得到粗粉。

S2、将S1步骤得到的粗粉采用振动研磨式破壁超微粉碎机，在960r/min条件下粉碎40min，温度为-15℃，粉碎至粒径在25微米以下，得到超微破壁粉；超微破壁粉采用钴60射线灭菌。

S3、先把卡波姆1份，小分子量透明质酸钠1份-2份，尼泊金乙酯钠0.1份，加蒸馏水至85份，充分溶胀，制得凝胶基质。向S2步骤的超微破壁粉15份中加入凝胶基质，充分混匀，制备成凝胶膏体。

本发明为了使药物成分直达基底层细胞，细胞更好吸收药物有效成分，本发明首先将中药进行超微破壁粉碎，增强药物的渗透性和生物利用度；另外在辅料中加入小分子透明质酸钠，通过小分子透明质酸钠高渗透作用促进药物的吸收利用度，且与传统药物促透剂相比，无任何毒副作用。

实施例2：药理药效实验

对实施例1制备的凝胶膏体进行抗病毒活性检测，主要检测了抗人乳头瘤病毒HPV16的活性。检测依据为《消毒技术规范》(2002年版)，以Vero-E6细胞为靶细胞，采用实施例1制备的凝胶膏体为试验组，采用实施例1中S3步骤，不添加15份超微破壁粉制备的凝胶基质作为对照组，实验组和对照组分别设置三组平行实验，在靶细胞Vero-E6细胞正常生长的培养基中加入人乳头瘤病毒HPV16进行共孵育，然后加入凝胶膏体或凝胶基质，观察凝胶膏体或凝胶基质对人乳头瘤病毒HPV16的抑制作用，检测结果如下表所示。结果显示本发明制备的凝胶膏体对人乳头瘤病毒HPV16具有很强的抑制作用，抗病毒活性率能够达到99.99％以上。

表1

实施例3：毒理学实验

本实施例基于体外细胞毒性对凝胶膏体的安全性进行说明：

本实施例采用Vero-E6细胞作为靶细胞，与含有不同浓度的凝胶膏体的培养基共孵育，结果显示不同药量对Vero-E6细胞毒性不同，细胞存活率与凝胶膏体浓度成反比，结果如下表所示：

表2

实施例4：临床试验

使用方法：患者每晚睡前使用。每日1支(3.0克/支)。把臀部垫高，将容器前段的前盖取下，插入容器后端作为推杆；将容器缓慢插入阴道深处，用食指推动助推杆将凝胶膏体推入阴道深处。用药后臀部垫高平躺1小时。睡前少喝水，夜间尽量减少上厕所的次数。

下面结合病例对本发明作进一步说明：

病例1：吴女士，45岁，宫颈活检标本：6点，12点方向CINⅢ，累及腺体，锥切后3个月复查，HPV31依然呈阳性；连续使用本发明的中药组合物2个月，无上皮内病变，HPV31呈阴性。

病例2：张女士，44岁，临床诊断：HPV16/18阳性，用干扰素治疗6个月，复查依然呈阳性，两年后检查高级别上皮内病变，锥切后，复查，HPV16/18依然阳性；连续使用本发明的中药组合物2个月，HPV16/18呈阴性，一年后复查为阴性。

病例3：陈女士，47岁，临床诊断：HPV18阳性，口服中药治疗一年，无效果；连续使用本发明的中药组合物2个月，复查HPV18阴性。

病例4：任女士，46岁，临床诊断：宫颈原位癌，切除后用干扰素治疗3个月，HPV依然高，无效果，HPV16/18及12种高危型均呈阳性；连续使用本发明的中药组合物3个月，复查HPV16/18及12种高危型均呈阴性。

病例5：郑女士，41岁，临床诊断：宫颈原位癌，手术治疗阶段做了三次化疗，持续服用提高免疫力的药物，后用了三个月干扰素，HPV16/18都转阴了，一年后复查时又全部阳性；连续使用本发明的中药组合物2个月，复查没有转阴，继续使用本发明的中药组合物1个月，复查全部转阴。至今复查一直为阴性。

病例6：任女士，51岁，临床诊断：宫颈低级别鳞状上皮内病变，左阴道壁VAIN1级，HPV16/18阳性；连续使用本发明的中药组合物2个月，复查HPV16/18转阴。

病例7：黄女士，47岁，临床诊断：感染高危82，活检低级别癌前病变；连续使用本发明的中药组合物2个月，复查HPV16/18转阴，无病变。

病例8：张女士，40岁，临床诊断：tct是低级别癌前病变，HPV16/68阳性；连续使用本发明的中药组合物2个月，复查全阴、无病变。

病例9：郑女士，47岁，临床诊断：感染HPV高危16；连续使用本发明的中药组合物2个月，复查全阴。

病例10：陈女士，49岁，临床诊断：HPV18型感染，病理显示宫颈低级别病变并累及腺体；连续使用本发明的中药组合物3个月，复查病毒转阴，细胞病变逆转。

病例11：曾女士，38岁，临床诊断：高危型HPV59感染，用干扰素治疗三个月，仍为阳性；连续使用本发明的中药组合物2个月，复查HPV59转阴。

病例12：田女士，38岁，临床诊断：感染低危81，用抗hpv凝胶复查感染高危39；连续使用本发明的中药组合物1个月，复查全阴，无病变。

病例13：王女士，43岁，高危型hpv33和hpv51型感染，宫颈6点方向CIN2-3级并累及腺体，医院建议做手术。患者想保守治疗，连续使用本发明的中药组合物2个月，复查全阴、并且癌前病变消失！

病例14：骆女士，33岁，感染高危hpv16，活检低级别癌前病变，连续使用本发明的中药组合物2个月，复查：全阴、无病变。

病例15：钟女士，57岁，hpv52阳性，活检低级别癌前病变，连续使用本发明的中药组合物2个月，复查：全阴、无病变。

目前本发明的中药组合物制备的凝胶膏体，临床已治愈158例，转阴率达到88％。

以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。

Claims (10)

1.一种抗HPV感染的中药组合物，其特征在于，由以下原料药制备得到：龙葵、苦参、穿心莲、大黄和青黛。

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物由以下重量份的原料药制备得到：龙葵4～6份、苦参10～14份、穿心莲8～9份、大黄1～3份和青黛8～9份。

3.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物由以下重量份的原料药制备得到：龙葵5份、苦参12份、穿心莲8.5份、大黄2份和青黛8.5份。

4.一种权利要求1～3任一项所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、取龙葵、苦参、穿心莲、大黄和青黛，洗净后进行干燥，粉碎，得到粗粉；

S2、将S1步骤得到的粗粉采用破壁超微粉碎技术粉碎至粒径在25微米以下，得到超微破壁粉；

S3、向S2步骤的超微破壁粉中加入辅料，制备成成品制剂。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，S1步骤中，干燥是在30～45℃干燥10～20h。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，S1步骤中，在8000～12000r/min条件下粉碎50～100s，得到粗粉。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，S2步骤中，粉碎是采用振动研磨式超微粉碎机，在900～1000r/min条件下粉碎30～50min，温度-20～10℃。

8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的制剂为膏剂。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，制剂为膏剂时，所述辅料包括卡波姆、水和小分子透明质酸钠。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的辅料还包括尼泊金乙酯钠。