CN113521047A - 丁酸盐在制备慢性阻塞性肺疾病药物中的应用 - Google Patents

丁酸盐在制备慢性阻塞性肺疾病药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于医药技术领域，具体公开了一种丁酸盐在制备慢性阻塞性肺疾病药物中的应用。本发明在探讨慢阻肺不同阶段肠道iILC2变化及其与肺部炎症反应关系的过程中发现，丁酸盐能够通过抑制肠道iILC2减轻慢阻肺肺部炎症反应，从而为慢阻肺的诊断治疗提供了新思路。

Description

丁酸盐在制备慢性阻塞性肺疾病药物中的应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，尤其涉及一种丁酸盐在制备慢性阻塞性肺疾病药物中的应用。
背景技术
慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一种具有气流受阻特征的疾病，临床表现为持续进行性的肺部炎症反应、肺气肿和肺功能下降。COPD急性加重期的主要病变特征是COPD患者气道和全身性高炎症反应，是导致COPD患者死亡和生活质量下降的主要阶段。
COPD炎症反应主要涉及巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞、自然杀伤细胞和先天性淋巴样细胞(ILCs)，ILCs包括ILC1、ILC2、ILC3、NK和LTi。ILC2细胞可分为截然不同的两种类型，分别是炎症性ILC2细胞(inflammatoryILC2s,iILC2)和天然ILC2细胞(naturalILC2s,nILC2s)。病理条件下，iILC2可通过“肠-肺募集轴”从肠道远端转移至肺部，单独或补充肺部nILC2细胞参与炎症信号的响应。
发明人在前期研究发现，ILC2参与慢阻肺Th1/Th2免疫紊乱导致的慢性炎症反应，ILC2细胞通过高表达MHCII调控Th2型免疫反应，或经notch-GATA3途径高表达细胞因子IL-13、IL-4，为Th2 细胞提供分化微环境促进Th2型免疫反应，进而影响慢阻肺急性加重炎症反应，但是由于ILC2细胞可分为截然不同的两种类型(iILC2和nILC2s)，而iILC2是否参与慢阻肺的发展仍不清楚，寻找 COPD进展过程中调控肺部iILC2细胞的原因具有临床指导意义。
基于以上背景，本发明展开体内和体外细胞培养实验探讨慢阻肺不同阶段肠道iILC2变化及其与肺部炎症反应的关系，希望为慢阻肺ILC2炎症调节作用提供新思路。
发明内容
本发明的目的在于提供一种丁酸盐在制备慢性阻塞性肺疾病药物中的应用，至少解决上述技术问题之一。
为了达到上述目的，本发明的一个技术方案如下：丁酸盐在制备慢性阻塞性肺疾病药物中的应用。
本发明提供的另一个技术方案如下：丁酸盐与药学上可接受的任何载体和/或稀释剂制成各种制剂在制备慢性阻塞性肺疾病药物中的应用。
优选地，制剂包括吸入气雾剂、吸入粉雾剂、吸入雾化液、片剂、丸剂、胶囊剂、滴丸、控释剂、微囊剂、脂质体、混悬剂、乳剂、注射液或冻干制剂。
优选地，载体包括乳糖、微晶纤维素、硬脂酸镁中的一种或两种以上。
优选地，稀释剂包括乳糖、蔗糖、磷酸氢二钙、玉米淀粉中的一种或两种以上。
本技术方案的原理和有益效果在于：本发明在探讨慢阻肺不同阶段肠道iILC2变化及其与肺部炎症反应关系的过程中发现，丁酸盐能够通过抑制肠道iILC2减轻慢阻肺肺部炎症反应，从而为慢阻肺的诊断治疗提供了新思路。
附图说明
图1为CTL组、CS组和CS+LPS组小鼠的肺功能；
图2为HE染色结果；
图3为病理评分；
图4为小鼠肺泡灌洗液中总细胞数、中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞数；
图5为采用流式细胞仪检测CS组和CS+LPS组小鼠肺组织中nILC2s和iILC2s细胞；
图6为CS+LPS组小鼠肺泡灌洗液中高表达的IL-13，IL-4；
图7为CTL组、CS组和CS+LPS组小鼠结肠组织中nILC2s和iILC2s细胞；
图8为小鼠肠道微生物；
图9为小鼠粪便中SCFA含量；
图10为在200μM SCFA处理后通过ELISA测量ILC2在上清液中的IL-13和IL-4分泌；
图11为通过RT-PCR检测IL-13和IL-4的mRNA水平；
图12为butyrate体外处理的ILC2细胞Arg1，KLRGI，IL-17RB的表达变化；
图13为butyrate处理后的小鼠肠道和肺中iILC2s和nILC2s的变化；
图14为butyrate处理后的小鼠肠道和肺中iILC2s和nILC2s的变化。
具体实施方式
下面通过具体实施方式进一步详细说明：
以下实施例进行的实验由新疆医科大学动物保护福利委员会批准执行。
一、构建慢阻肺小鼠模型
①实验操作
选取6周龄SPF级雄性C57BL/6J小鼠45只，体重范围在20±2g，购自新疆医科大学实验动物中心。屏障实验室饲养条件为22～25℃，相对湿度为45～65％，明暗周期12h/12h，自由饮水。适应性喂养1周后，随机分为CTL组、CS组和CS+LPS组，每组小鼠的数量均为15只。
CTL组为对照组，图1为构建慢阻肺小鼠模型的流程图。如图1所示，将CS组和CS+LPS组放入玻璃熏箱(60×40×30cm3)中香烟暴露105天，CS组和CS+LPS组的区别在于：CS+LPS组需在第 91天和第105天，称取LPS 7.5μg于50μl生理盐水中，并鼻内吸入至小鼠。
LPS为脂多糖，可以采用美国Sigma-Aldrich生产的货号为L5293的脂多糖。
造模期间每天观察小鼠的毛色及行为变化。
小鼠模型建立中使用的香烟燃烧的频率为：每小时9支香烟，每次2小时，每天2次，每周6 天。香烟为新疆卷烟厂出品的雪莲牌，焦油量12mg，烟气烟碱量1.0mg，烟气CO量1mg。
②实验结果
本实验使用CS+LPS组模拟细菌刺激诱导LPS触发的加重模型。整个实验过程中，CTL组小鼠无死亡，毛发光泽，呼吸均匀，活动正常。CS组小鼠和CS+LPS组小鼠毛发无光泽，部分有脱毛现象，躁动，熏烟时喜扎堆，倦怠卷缩，呼吸急促，出现点头运动。
二、验证实验
(1)检测小鼠肺功能
①实验操作
熏烟造模结束后，使用美国Buxco公司生产的型号为Fine Point的无创肺功能仪进行检测：在小鼠清醒、无约束的状态下测定小鼠的增强呼气间歇，然后依次滴加不同浓度的乙酰胆碱(购买自 Sigma-Aldrich)，乙酰胆碱的浓度分别为0.00、3.125、6.25、12.50、25.00和50.00mg/mL，观察激发后的变化，记录并比较各组小鼠气道反应性的改变。
②实验结果：
本实验在小鼠清醒、安静、无刺激、无约束的状态下测定肺功能，以增强的呼吸间隙(Penh)作为气道缩窄的指数来反映气道高反应的程度。
图1为CTL组、CS组和CS+LPS组小鼠的肺功能，如图1所示，在增加乙酰胆碱攻击后，CTL 组小鼠表现出更高的动态顺应性，而CS+LPS组小鼠表现出更低抵抗力，表明CS组小鼠肺功能降低， CS+LPS组小鼠肺功能降低显著。
(2)HE染色
①实验操作：
处死小鼠并摘取左侧肺组织，置于4％中性甲醛中进行固定，常规脱水处理，石蜡包埋后进行 HE染色。蜡块处理成5μm厚的连续切片，放在60℃烤箱中烤片2h以防止脱片。
HE染色步骤：将切片依次用二甲苯脱蜡、梯度乙醇水化；取苏木精染色5-10s，取出漂洗，用1％盐酸乙醇分化5-10s，漂洗，进行伊红染色1-2min；继续进行梯度乙醇脱水、二甲苯透明处理；用中性树脂进行封片。
二甲苯的厂家为Sigma-Aldrich，CAS为1330-20-7；苏木精和伊红购买自飞净PHYGENE生产的苏木素伊红(HE)染色试剂盒，货号为PH0516。
在光镜下进行组织病理学观察。肺组织学病理评分法：观察以下七项指标。
a：上皮脱落糜烂；b：上皮杯状细胞增生；c：管壁中性粒细胞浸润；d：管壁淋巴细胞浸润，淋巴滤泡形成；e：管壁单核、巨噬细胞浸润；f：管壁嗜酸粒细胞浸润；g：管腔渗出。
按照上七项指标对各组大鼠分别进行评分，评分标准：无病变为0分，轻、中、重度异常分别为l、2、3分，累计各指标得分。将7项指标的病理积分相加，即可得到各标本的病理评分。
②实验结果
图2为HE染色结果，HE染色结果显示，CTL组肺组织结构清晰，支气管粘膜上皮完整，平滑肌层及粘膜下层排列规则；周围肺泡组织结构清晰、完整。CS组部分支气管管壁破坏，部分支气管粘膜纤毛柱状上皮增生，部分萎缩、脱落，平滑肌层及粘膜下层结构稍紊乱，管壁周围较多慢性炎细胞浸润；周围肺组织部分肺泡壁增厚，部分实变，间质较多慢性炎细胞浸润，部分肺泡壁扩张、断裂。
CS+LPS组中，LPS攻击进一步加剧了支气管管壁破坏、粘膜上皮脱落程度及周围慢性炎细胞浸润程度加重，急性炎细胞浸润增多。
图3为病理评分。如图3所示，CS+LPS组的病理评分显著高于CTL组和CS组。
(3)分析肺泡灌洗液(BALF)
①实验操作
用二氧化碳处死BALB/c小鼠并分离气管。用4℃预冷的无菌PBS 0.8mL进行支气管肺泡灌洗，重复灌洗3次，BALF的回收率高达75％。4℃1500rpm离心10min，分别收集上清和沉淀，上清液在-80℃保存备用。BALF中沉淀用100μL无菌PBS重悬，并利用细胞计数板进行细胞总数计数。取细胞沉淀涂片进行瑞氏-吉姆萨染色(购买自南京建成生物工程研究所有限公司)，在光镜下分别行细胞总数、中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞计数。BALF上清液于-80℃保存备用。
②实验结果
图4为小鼠肺泡灌洗液中总细胞数、中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞数，如图4所示，实验结果：受到LPS攻击的CS+LPS组的总细胞数、中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞数显著增加。
该实验结果说明：香烟暴露能促进小鼠肺部炎症反应，而LPS处理促使炎症反应加剧。
(4)采用流式细胞仪检测CS组和CS+LPS组小鼠肺组织和结肠组织中nILC2s和iILC2s细胞
①实验操作
取30mg肺/肠组织，无菌状态下采用眼科剪将肺/肠组织轻柔剪成1-2mm3小块，接着冰浴匀浆 1min。将组织加入预热至37℃的新鲜1mg/mL IV型胶原酶(美国Sigma-Aldrich生产的货号为 Collagenase胶原酶IV Sigma C5138)和40μg/mLDnase I(美国Sigma-Aldrich生产的货号为D21962 的DNase I脱氧核糖核酸5′-寡核苷酸-水解酶)的RPMI-1640培养液中进行消化，置入37℃的水浴箱中，每隔3-5min轻轻振摇1次。60min后可见肺/肠组织几乎全部消化，冰浴终止消化，轻轻吹打分散细胞，收集消化液；200目不锈钢网过滤；1000rpm离心5min。
弃上清，PBS洗涤；加入红细胞裂解液5mL，冰上孵育10min；离心去上清；加入PBS吹打，再离心漂洗1-2次，去上清，加入含1％BSA的4℃PBS 2mL得到小鼠肺、肠单细胞悬液细胞浓度调节至1×106个/mL。
取上述细胞悬液100μL置于流式管中，加入流式抗体(除非提到的流式抗体，否则均来自于BD Bioscience)，具体包括APC-CY7-CD45(2D1)、Lineage-FITC、CD3(UCHT1)、CD19(HIB19)、 CD123(7G3)、CD11b(M1/70)、CD11c(B-ly6)、CD8(RPA-T8)、FceRI(AER-37(CRA-1)、CD14 (M5E2)、CD4(RPA-T4)、CD56(B159)、PerCP-CY5.5-90.2(30-H12,BioLegend,SanDiego,CA,USA)， PE-CY5-KLRG1(2F1)、PE-CD127(SB/199)，于室温避光孵育30min，PBS洗涤两次后重悬，使用流式细胞仪检测Lin-CD45+CD127+CD90.2hiKLRG1lo细胞和Lin-CD45+CD127+CD90.2+KLRG1hi 细胞的比例。
上述制备的标本使用BD flowcytometry流式细胞仪(LSR II,BD,USA)进行检测，检测结果采用 Kaluza software(Beckman Coulter,Inc)软件进行分析。
②实验结果
图5为采用流式细胞仪检测CS组和CS+LPS组小鼠肺组织中nILC2s和iILC2s细胞；图6为在 CS+LPS组小鼠肺泡灌洗液中检测到高表达的IL-13和IL-4；图7为CTL组、CS组和CS+LPS组小鼠结肠组织中nILC2s和iILC2s细胞。
如图5所示：与CTL组相比，CS+LPS组小鼠肺组织中nILC2s细胞显著增加，CS组和CS+LPS 组小鼠肺肠组织中iILC2s细胞显著高于CTL组，尤其是CS+LPS组小鼠肺肠组织中iILC2s细胞显著高于CTL组。
如图6所示：由于iILC2s在体内分泌IL-13和少量IL-4，但nILC2s细胞并不分泌IL-4，在COPD 急性加重的发展过程中，肺部的iILC2显著增加，其相关细胞因子IL-13，IL-4表达显著增加，该结果表明iILC2的积累会导致肺部炎症反应加剧，从而加重慢阻肺造成急性加重。
如图7所示，与对照组相比，CS+LPS组小鼠结肠组织中nILC2s细胞显著增加，CS+LPS组小鼠结肠组织中iILC2s细胞显著高于对照组和CS组。
最新研究表明，nILC2s是肺中的天然静息细胞，不能在器官之间流动，相比于nILC2s细胞，在炎症情况下iILC2s细胞能移动到肺部发挥生物学作用，肠道是肺部iILC2s细胞的主要来源场。图7 的结果表明，肠组织中nILC2s和iILC2s细胞参与慢阻肺的病程，肠组织中nILC2s可能转化为iILC2s，病迁移至远端肺部参与疾病过程。
(5)肠道菌群和SCFAs结果
①实验操作
使用CTAB方法从样品中提取总基因组DNA。采用Illumina高通量测序仪(Illumina-Miseq)分析粪便16SrRNA基因以确定肠道微生物群组成。
采用美国Finnzymes生产的货号为F-416L的SYBR绿色定量PCR试剂盒量化扩增以进行文库标准化。
使用美国Illumina生产的
Figure BDA0003225021930000061
DNA PCR-Free Sample Preparation Kit试剂盒生成测序文库，并添加索引代码。
在美国Thermo Scientific生产的Qubit@2.0荧光计和美国Agilent生产的Agilent 2100Bioanalyzer 生物芯片分析系统上评估文库质量。
最后，将文库在Illumina NovaSeq平台上进行测序，并生成250bp双端读数。对高通量测序的原始下机数据根据序列质量进行初步筛查；通过质量初筛的序列按照引物和Barcode信息，识别分配入对应样本，并去除嵌合体等疑问序列；对获得的序列进行可操作分类单元(operational taxonomic units,OTUs)归并划分。使用Uparse软件(Uparsev7.0.1001，http://drive5.com/uparse/)，对前述获得的序列按97％的序列相似度进行归并和OTUs划分。
每个OTU的代表序列用于分类地位鉴定以及系统发育学分析；根据OTUs在不同样本中的丰度分布，评估每个样本的多样性水平，并通过稀疏曲线反映测序深度是否达标；使用对应于序列最少的样品的序列号标准对OTU的丰度信息进行归一化。随后根据此输出归一化数据对alpha多样性和beta 多样性进行分析。
②实验结果
COPD加重是与炎症加重相关的复杂事件气道反应。肠-肺轴的概念描述了肺和胃肠道的共同粘膜免疫系统，暗示了肠道微生物组在调节包括COPD在内的急性和慢性呼吸道疾病炎症中的作用。肠道菌群代谢产物短链脂肪酸(SCFAs)可作为信号分子影响肠道免疫系统的功能，进而抑制远端肺部炎症反应。
图8为小鼠肠道微生物。如图8所示，与CTL组相比，CS组和CS+LPS组小鼠肠道中梭菌 (Clostridiaceae)比例显著降低。梭菌是产生SCFA的菌种之一，SCFA的变化将导致ILC2细胞功能的改变。
本实验进一步检测了CTL组、CS组和CS+LPS组小鼠粪便中SCFA含量。图9为小鼠粪便中 SCFA含量。如图9所示，CS组和CS+LPS组小鼠粪便中醋酸盐(Acetate)和丁酸盐(Butyrate)浓度降低，尤其是CS+LPS组小鼠粪便中醋酸盐和丁酸盐浓度与CTL组相比差异显著(P＜0.05)，而 CTL组、CS组和CS+LPS组小鼠粪便中其他短链脂肪酸浓度虽然依次降低，但并无统计学差异。
该结果说明，CS组和CS+LPS组小鼠肠道中的梭菌相对丰度降低，将导致丁酸盐浓度降低，尤其是在CS+LPS组。
结合上述结果认为：丁酸盐可以降低ILC2细胞活性进而抑制气道高反应。CS+LPS组小鼠肠道中丁酸盐的降低可能与肠道和肺部增加的iILC2有关。
(6)用SCFAs处理分选的肠道ILC2细胞和RT-PCP
①细胞分选实验操作
制备正常小鼠肠组织PBMC细胞悬液，调整细胞浓度1×108个/mL后，采用加拿大STEMCELL 生产的免疫磁珠试剂盒分选肠ILC2细胞，分选纯度＞95％。调整细胞浓度后将其接种于96孔板(500 个细胞/孔)，用含有10％FBS、双抗、500ng/mL IL-2、500ng/mL IL-25、500ng/mL IL-33和500ng/mL TSLP的IMDM培养基培养5天。
FBS为胎牛血清，可以选用美国Sigma-Aldrich生产的货号为12103C的胎牛血清；双抗可以选用美国gibco生产的货号为15140-122的双抗；IL-2为peprotech公司生产的货号为200-02-100的 200-02-PeproTech细胞因子HumanIL-2；IL-25为R&D生产的货号为8134-IL-025的IL-25；IL-33购买自R&D；TSLP可以选用peprotech公司生产的货号为300-62-10的重组人胸腺基质淋巴生成素细胞因子。
SCFAs作用前，将ILC2洗涤两遍以去除细胞因子对实验的影响。将5×103个ILC2细胞接种于 96孔板中48h，然后将其分为对照组(生理盐水)、乙酸组和丁酸组，乙酸组的浓度分别为2μM、20μM 和200μM，丁酸组的浓度分别为2μM、20μM和200μM，37℃，5％CO2处理6小时。
各组小鼠腹腔注射10％的水合氯醛(0.3mL/100g)麻醉，腹主动脉采血，37℃静置30min，3000rpm 离心10min，收集血清，分装标记，-80℃保存备用。
采用双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法测定各组肺泡灌洗液及细胞培养上清液中IL-13、IL-4 的含量，按试剂盒说明书操作规程进行检测，通过标准品吸光度值(OD值)绘制标准曲线，然后计算各样本的值。
ELISA试剂盒购自杭州联科生物科技有限公司，目录号为70-EK204/2-96的MouseIL-4ELISA Kit (小鼠白介素4ELISA试剂盒)，以及目录号为70-EK213/2-96的Mouse IL-13ELISA Kit(小鼠白介素13ELISA试剂盒)。
②RT-PCP实验操作
首先使用Trizol试剂盒提取总RNA，然后，使用Transcriptor第一链cDNA合成试剂盒从分离的总RNA合成cDNA。使用BIO-RAD CFX96检测系统通过RT-PCP检测IL-13和IL-4的mRNA水平。
Transcriptor第一链cDNA合成试剂盒购买自德国ROCHE生产的第一链cDNA合成试剂盒。Trizol Reaget试剂盒为Absin生产的，货号为abs9331的Trizol(总RNA抽提试剂盒)。
RT-PCP过程中所采用的引物序列参见下表1：
表1引物序列
Figure BDA0003225021930000071
PCR程序如下：
5℃5min，然后95℃30s和60℃30s的40个循环。表达水平用2-△△CT方法计算并标准化为β- 肌动蛋白。
③实验结果
图10为在200μM SCFA处理后通过ELISA测量ILC2在上清液中的IL-13和IL-4分泌。图11 为通过RT-PCR检测IL-13和IL-4的mRNA水平。数据显示为平均值±SEM、*P<0.05、**P<0.01和 ***P<0.001(每组n＝5只小鼠)。
如图10所示，本实验用SCFAs处理分选的肠道ILC2，发现丁酸盐显著降低ILC2s上清液中的 IL-13和IL-4水平。
如图11所示，与醋酸盐相比，丁酸盐在抑制细胞因子产生方面的作用最强，由于qPCR分析显示用丁酸盐处理6小时后IL-13和IL-4表达水平显着降低，说明抑制发生在转录水平。
上述结果说明，丁酸盐能抑制体外培养的ILC2s细胞分泌IL-13和IL-4，提示butyrate可抑制 ILC2s细胞的炎症功能。
(7)Western blot
①实验操作
ILC2细胞通过冷RIPA裂解缓冲液进行裂解。RIPA裂解缓冲液购买自百奥莱博生产的货号为 MT0066的RIPA裂解缓冲液。
通过12％SDS-PAGE分离总蛋白裂解物(25μg/泳道)，然后转移到PVDF膜上，随后将PVDF 膜在采用TBST配制的5％脱脂牛奶中封闭室温2h，然后分别与兔抗Arg1(采用TBST:兔抗Arg1＝1:500 进行配制)、兔抗KLRG1(采用TBST:兔抗Arg1＝1:500进行配制)、兔抗IL-17RB(采用TBST:兔抗 Arg1＝1:500进行配制)和小鼠抗β-肌动蛋白抗体孵育过夜。
TBST的配制条件是：20mM Tris-HCl，0.15M NaCl，0.05％Tween-20，pH7.5。
兔抗Arg1由abnova生产的货号为PAB24634的兔抗人ARG1多克隆抗体；兔抗KLRG1为novus 生产的货号为NBP2-33614的兔抗人KLRG1多克隆抗体；兔抗IL-17RB为LSBio生产的货号为 LS-C165179的兔抗人IL17RB/IL-17RB多克隆抗体；小鼠抗β-肌动蛋白抗体为百奥莱博生产的货号为SY0632-QIK的小鼠抗β-肌动蛋白单克隆抗体一抗。
采用TBST洗涤3次后，将PVDF膜与二抗一起孵育，最后使用增强型ECL化学发光检测试剂盒，使用Bio-Rad Quantity One 1-D分析软件包(Bio-Rad，Hercules，CA，USA)定量目标蛋白相对于β-肌动蛋白条带密度的相对条带密度。
二抗为abcam生产。增强型ECL化学发光检测试剂盒为翊圣生物生产，型号为36222ES60。
②实验结果
为了进一步研究butyrate对ILC2s细胞的影响，如图12所示，本实验检测了butyrate体外处理的 ILC2细胞Arg1，KLRGI，IL-17RB的表达变化。结果表明，随着butyrate处理浓度的增加，Arg1和 KLRG1的表达逐渐增加，而IL-17RB的表达逐渐降低。
据此推测，CS+LPS组小鼠肠道中butyrate的降低失去了对ILC2炎症性转化的抑制，导致肠道中iILC2s细胞增加，进一步促进肺部iILC2s细胞的增加。
为了进一步研究butyrate影响急性加重小鼠肺部炎症反应。CS+LPS组小鼠连续饮用pH7.5， 150mM丁酸钠(购买自Sigma-Aldrich，CAS号为156-54-7)两周，生理盐水饮水组作为对照，结束后观察两组小鼠肺、肠道中nILC2s和iILC2s细胞变化情况。
结果表明如图13和图14所示，经butyrate处理后的小鼠肠道中iILC2s细胞明显减少(图13和图14-B)，同时肺部iILC2s细胞和nILC2s细胞数量显著降低(图13和图14-A)。因此，本实验发现 butyrate能抑制肠道ILC2s细胞炎症转化，减少肠道iILC2s细胞储量，最终减少慢阻肺肺部iILC2s 细胞和nILC2s细胞的积累，有助于减轻肺部炎症反应。
以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。
序列表
<110>新疆医科大学第四附属医院
<120>丁酸盐在制备慢性阻塞性肺疾病药物中的应用
<160> 6
<170> Patentln version 3.5
<210> 1
<211> 24
<212> DNA
<213> homo sapins
<400> 1
aatggcagca tggtatggag catc 24
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> homo sapins
<400> 2
gcagaatccg ctcagcatcc tc 22
<210> 3
<211> 24
<212> DNA
<213> homo sapins
<400> 3
gcctacaaag cccagagaga acac 24
<210> 4
<211> 22
<212> DNA
<213> homo sapins
<400> 4
ttgtgcctgt ggaactgctg tg 22
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> homo sapins
<400> 5
catgtacgtt gctatccagc 20
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> homo sapins
<400> 6
catgtacgtt gctatccagc 20

Claims (5)

1.丁酸盐在制备慢性阻塞性肺疾病药物中的应用。
2.丁酸盐与药学上可接受的任何载体和/或稀释剂制成各种制剂在制备慢性阻塞性肺疾病药物中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，制剂包括吸入气雾剂、吸入粉雾剂、吸入雾化液、片剂、丸剂、胶囊剂、滴丸、控释剂、微囊剂、脂质体、混悬剂、乳剂、注射液或冻干制剂。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，载体包括乳糖、微晶纤维素、硬脂酸镁中的一种或两种以上。
5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于，稀释剂包括乳糖、蔗糖、磷酸氢二钙、玉米淀粉中的一种或两种以上。
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