CN113509416A - 一种具有增强过氧化氢酶活力的组合物及其在化妆品中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种具有增强过氧化氢酶活力的组合物及其在化妆品中的应用。所述具有增强过氧化氢酶活力的组合物，按重量份数计，由以下组份组成：五味子油0.1～10份，金银花提取物20～100份。基于该组合物增强过氧化氢酶活力的功效，进一步将其应用于化妆品领域，制备成爽肤水、乳液、膏霜、冻干粉等剂型。本发明通过对五味子油和金银花提取物的合理复配，原料配伍精当，能够最大限度发挥协同抗氧化作用，可以明显提高人永生化表皮细胞细胞的存活率和过氧化氢酶活力，具有预防及修复皮肤细胞氧化损伤、延缓皮肤氧化衰老的功效，弥补了单一的抗氧化组分或其他简单混合的抗氧化组合的不足，具有良好的应用前景。

Description

一种具有增强过氧化氢酶活力的组合物及其在化妆品中的 应用
技术领域
本发明属于天然产物应用及化妆品技术领域，具体地，涉及一种具有增强过氧化氢酶活力的组合物及其在化妆品中的应用。
技术背景
皮肤受到PM2.5暴露、紫外线照射等有害刺激时，皮肤组织的活性氧、活性氮自由基产生过多，从而加快皮肤老化。活性氧自由基(ROS)由于多种因素(酒精、烟草等内源因素和污染、紫外辐射等外界环境因素)而不断积累。可以说，皮肤老化是自由基损伤的综合结果。虽然人体有自身抵御自由基的保护系统：内生的抗氧化剂(具有酶活性或者无酶活性)，但是在老化过程中，这些系统的保护作用不是很有效，氧化程度超出氧化物的清除能力，氧化系统与抗氧化系统失衡，从而导致皮肤组织损伤，引起皮肤炎症免疫反应甚至病变。
过氧化氢酶(CataLase，CAT)能够将对机体有害的过氧化氢催化分解成对人体无毒害作用的氧与水，是一种存在于细胞的过氧化物体内的酶。过氧化氢酶是过氧化物酶体的标志酶，约占过氧化物酶体酶总量的40％。当皮肤受到有害刺激时，皮肤细胞中的过氧化氢酶活力下降，对氧自由基的清除力降低。一旦皮肤组织氧化系统与抗氧化系统失衡，为了能够抑制皮肤提前老化，就需要使用外源性抗氧化功效物质(如抗氧化功能性护肤品)来减轻外来刺激对皮肤的损伤，利用外源性抗氧化功效产品来辅助对组织内自由基进行清除是十分必要的。传统的抗氧化成分如维生素及其衍生物，有很好的清除自由基的功效，但是由于其本身稳定性较差，在实际应用中容易变色和失活，难以满足持续的抗氧化需求。此外，单一的抗氧化成分往往在实际应用中发挥出来的功效也有限，为了保证药效通常建议用量较大，成本较高，很难惠及大众，因此研究开发具有协同增效的抗氧化组合物十分有必要。
目前，诸多的研究主要还是侧重于单一的抗氧化组分或对多种抗氧化组分的的组合，仅仅是简单综合了各抗氧化成分的功效，对单一抗氧化成分的抗氧化功效低的问题并没有得到很好的解决。本申请人前期专利201711455506.1提供了一种五味子和大豆进行复配的抗氧化组合物，两者联用产生了明显的协同增效的抗氧化功效。因此，寻求多种组分的复配使用以降低成本、提升抗氧化效果是目前的研究热点。
发明内容
本发明针对目前抗氧化、抗衰老物质单独使用的作用有限，活性成分的抗氧化功效无法提升，且复配增效的抗氧化组合物种类有限的问题，旨在提供一种具有增强过氧化氢酶活力的组合物及其在化妆品中的应用，五味子油通过复配金银花提取物，得到的组合物在抗氧化、抗衰老方面的活性得到显著的增强，弥补了单一的抗氧化组分或其他简单混合的抗氧化组合功效的不足，各组分协同增效，相互促进，达到很好的增强过氧化氢酶活力的功效，可有效提高对各抗氧化活性组分的利用率，且本发明的组合物活性不受剂型的限制，更容易应用到化妆品中。
本发明的首要目的是提供一种具有增强过氧化氢酶活力的组合物及制备方法。
本发明的另一目的是提供上述组合物在制备抗氧化、抗衰老的日化品中的应用。
本发明的另一目的是提供一种包含上述组合物的抗氧化、抗衰老的化妆品。
本发明的目的通过以下技术方案予以实现：
本发明首先提供了一种具有增强过氧化氢酶活力的组合物，所述组合物由五味子油和金银花提取物组成。
五味子，为木兰科植物五味子(Schisandra chinensis(Turcz.)BaiLL.)或华中五味子(Schisandra sphenanthera Rehd.et WiLs.)的干燥成熟果实，含有五味子素及维生素C、树脂、鞣质及少量糖类，具有敛肺止咳、滋补涩精、止泻止汗之效。金银花(Lonicerajaponica Thunb.)，为忍冬科忍冬属植物忍冬及同属植物干燥花蕾或带初开的花，含有绿原酸、异绿原酸、白果醇等成分，具有抗菌、消炎抗氧化等功效。
发明人创造性地研究发现，通过对五味子油复配金银花提取物，五味子油、金银花提取物之间相互促进，可以明显提高人永生化表皮细胞细胞(hacat ceLL)的存活率和过氧化氢酶活力，最大限度的发挥抗氧化功效，具有预防及修复皮肤细胞氧化损伤、延缓皮肤氧化衰老的功效，弥补了单一的抗氧化组分或其他简单混合的抗氧化组合的不足。
优选地，所述组合物按重量份数计，由以下组份组成：五味子油0.1～10份，金银花提取物20～100份，见实施例1～5。
本发明的组合方案作为一个整体，相互配合使用，通过优化组分含量，使得最终的配方达到高效提高过氧化氢酶活力、抗氧化的护肤功效。
更优选地，所述组合物按重量份数计，由以下组份组成：五味子油0.5～5份，金银花提取物35～60份，见实施例2～4。
最优选地，所述组合物按重量份数计，由以下组份组成：五味子油1份，金银花提取物40份，见实施例3。
优选地，所述五味子油的提取步骤如下：将14～60目的五味子粉末，按料液比5～10倍加入蒸馏水，采用水蒸气蒸馏法于90～100℃加热提取3～8h，分离五味子粗油，加入2～10倍乙酸乙酯萃取2～5次，即得。在该条件下进行五味子油的提取，设备易得、工艺简便。
更优选地，所述五味子油的提取步骤如下：将40目的五味子粉末，按料液比8倍加入蒸馏水，采用水蒸气蒸馏法于100℃加热提取6h，分离五味子粗油，加入8倍乙酸乙酯萃取4次，即得五味子油，见实施例1～5。
优选地，所述金银花提取物的提取步骤如下：向金银花按料液比8～12倍加入浓度为60％～80％的乙醇水溶液，80～100℃加热回流提取2～3次，每次回流1～3h，合并提取液，于50～65℃减压浓缩至金银花提取物浸膏后，置50～65℃干燥至水分含量小于8％。在该条件下进行金银花提取物的提取，设备易得，工艺简便。
更优选地，所述金银花提取物的提取步骤如下：取金银花，按照料液比10倍加入浓度为70％的乙醇水溶液，90℃加热回流提取2次，每次回流2h，过滤，合并滤液，置于60℃减压浓缩至金银花提取物浸膏，置60℃干燥至水分含量小于8％即得所述金银花提取物，见实施例1～5。
优选地，上述具有增强过氧化氢酶活力的组合物，由以下步骤制备得到：按照配方量称取五味子油、金银花提取物，将五味子油与上述金银花提取物混合搅拌均匀，即得。
将本发明上述具有增强过氧化氢酶活力的组合物添加于爽肤水、乳液、精华、膏霜、冻干粉、面膜、喷雾等各种剂型的化妆品中，得到的产品均可显著提高过氧化氢酶活力和抗氧化作用，具有预防及修复皮肤细胞氧化损伤、延缓皮肤氧化衰老的功效。
因此，本发明还请求保护上述组合物在制备抗氧化、抗衰老的日化品中的应用。
本发明还请求保护一种抗氧化、抗衰老的化妆品，所述化妆品为在上述组合物中加入化妆品中可接受的基质制成。如可以根据需要适当地配合通常在化妆品中使用的成分，例如，保湿剂、表面活性剂、润肤剂、水等基质成分等。
优选地，所述组合物按重量百分比为0.5％～3％的比例添加在所述化妆品中。更优选地，所述组合物按重量百分比为2％添加在化妆品中，如应用例所示的化妆水。
优选地，所述化妆品包括但不限于爽肤水、乳液、精华、膏霜、冻干粉、面膜、喷雾。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明通过五味子油复配金银花提取物，得到的组合物在抗氧化、抗衰老方面的活性得到显著的增强，弥补了单一的抗氧化组分或其他简单混合的抗氧化组合功效的不足，五味子油和金银花提取物协同增效，相互促进，最大限度发挥各组分的抗氧化功效以提高活性利用率，达到很好的增强过氧化氢酶活力的功效，可以明显提高人永生化表皮细胞细胞(hacat ceLL)的存活率，实现预防及修复皮肤细胞氧化损伤、延缓皮肤氧化衰老的作用，且本发明的组合物活性不受剂型的限制，更容易应用到化妆品中。
附图说明
图1为不同处理组人永生化表皮细胞(hacat cell)存活率；
图2为不同处理组人永生化表皮细胞细胞的氧化氢酶(CAT)的相对酶活力；
图3为不同处理组对DPPH自由基清除率；
其中：C表示空白组、M表示模型组、S1表示实施例1组合物给药组、S2表示实施例2组合物给药组、S3表示实施例3组合物给药组、S4表示实施例4组合物给药组、S5表示实施例5组合物给药组、D1表示对比例1组合物给药组、D2表示对比例2组合物给药组、D3表示对比例3组合物给药组、D4表示对比例4组合物给药组、D5表示对比例5组合物给药组。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
实施例1～5
1、实施例1～5提供了一系列具有增强过氧化氢酶活力的组合物，由如表1所示重量份的各组分制备而成。
表1实施例1-5各组合物的重量份配比
五味子油(重量份) 金银花提取物(重量份)
实施例1 0.1 100
实施例2 0.5 60
实施例3 1 40
实施例4 5 35
实施例5 10 20
其中，五味子油的提取工艺：取五味子干果粉碎，过40目药典筛；然后按料液比8倍加入蒸馏水，采用水蒸气蒸馏法100℃加热提取6h，分离五味子粗油，加入8倍乙酸乙酯萃取4次，得到五味子油。
金银花提取物的提取工艺：取金银花，按照料液比10倍加入浓度为70％的乙醇水溶液；90℃加热回流提取2次，每次回流2h，过滤，合并滤液，置于60℃减压浓缩至金银花提取物浸膏，置60℃干燥至水分小于8％。
2、上述实施例1-5的组合物制备方法具体步骤为：
按照配方量称取五味子油、金银花提取物，将五味子油与上述金银花提取物混合搅拌均匀，即得。
对比例1-5
对比例1为五味子油，不加金银花提取物；
对比例2为金银花提取物，不加五味子油。
对比例3-5提供了三种由五味子油和金银花提取物组成的组合物，由如表2所示重量份的各组分制备而成。
表2对比例组合物的组分
Figure BDA0003160963190000051
Figure BDA0003160963190000061
其中，五味子油和金银花提取物的提取工艺同实施例1-5；对比例3-5的组合物制备方法同实施例1-5。
实施例6实施例1～5与对比例1～5组合物对人永生化表皮细胞存活率影响的测试
1、实验方法
为了确认上述实施例1～5与对比例1～5的抗氧化功效，利用人永生化表皮细胞进行测定。
实验组处理：将源自人永生化表皮细胞(hacat cell)接入含有10％胎牛血淸、1％双抗的DMEM培养基中，在37℃、5％CO2的条件下进行培养。将培养的hacat细胞用0.25％胰蛋白酶-EDTA消化分离，在96孔板以5×103细胞/孔(cells/well)的浓度培养细胞。培养24h后，加入100μL的600μmoL/mL的H2O2溶液。2h后，分别加入含实施例1～5与对比例1～5组合物的完全培养基，其中，组合物按照上述实施例1～5与对比例1～5的方案进行配比，然后加入完全培养基中，使得培养基中的组合物终浓度分别为50μg/mL。48h后，加入MTT溶液(0.5mg/mL)作用4h。4h后，加入DMSO溶液，15min孵化，使用酶标仪，震荡20s，570nm波长下测量吸光度。对实验所得数据进行显著性分析。平行试验三次。
空白组加不含H2O2的基础培养基2h后，再加100μL完全培养基培养48h；
模型组加含H2O2的基础培养基损伤后，再加100μL完全培养基培养48h；
实施例1组加含H2O2的基础培养基损伤后，再加入100μL含实施例1组合物的完全培养基培养48h；
实施例2组加含H2O2的基础培养基损伤后，再加入100μL含实施例2组合物的完全培养基培养48h；
实施例3组加含H2O2的基础培养基损伤后，再加入100μL含实施例3组合物的完全培养基培养48h；
实施例4组加含H2O2的基础培养基损伤后，再加入100μL含实施例4组合物的完全培养基培养48h；
实施例5组加含H2O2的基础培养基损伤后，再加入100μL含实施例5组合物的完全培养基培养48h；
对比例1组加含H2O2的基础培养基损伤后，再加入100μL含对比例1组合物的完全培养基培养48h；
对比例2组加含H2O2的基础培养基损伤后，再加入100μL含对比例2组合物的完全培养基培养48h；
对比例3组加含H2O2的基础培养基损伤后，再加入100μL含对比例3组合物的完全培养基培养48h；
对比例4组加含H2O2的基础培养基损伤后，再加入100μL含对比例4组合物的完全培养基培养48h；
对比例5组加含H2O2的基础培养基损伤后，再加入100μL含对比例5组合物的完全培养基培养48h。
调零组不接种细胞，其余操作同空白组。
细胞存活率＝(药物组OD值-调零组OD值)/(空白组OD值-调零组OD值)
2.、实验结果
检测结果见下表3和图1所示。
表3不同组别hacat细胞存活率
Figure BDA0003160963190000071
Figure BDA0003160963190000081
备注：“*”表示与模型对照组有显著性差异(P<0.05)。
从图1和表3的结果可以看出：实施例1～5的组合物给药后，hacat细胞存活率均显著高于对比例1～2，表明本发明将五味子油与金银花提取物复配使用，相比单独的五味子油或金银花提取物作用时抗氧化效果显著提升；实施例3的hacat细胞存活率高于实施例1、2、4、5，说明实施例中实施例3的配方下，对于细胞的抗氧化功效最佳，此外，实施例1～5的hacat细胞存活率均显著高于对比例3～5组合物的给药组，表明本发明是通过将五味子油与金银花提取物在特定的配比下组合使用，才能发挥更佳的抗氧化效果。
实施例7实施例1～5与对比例1～5组合物对过氧化氢酶活力的影响
1、实验方法
首先，将源自人永生化表皮细胞细胞(hacat cell)接入含有10％胎牛血淸、1％双抗的DMEM培养基中，在37℃、5％CO2的条件下进行培养。将培养的hacat细胞用0.25％胰蛋白酶-EDTA分离，在6孔板以2×105细胞/孔(cells/well)的浓度培养细胞。培养24h后，加入100uL的600umoL/mL的H2O2溶液。2h后，分别加入含实施例1～5与对比例1～5的完全培养基，其中含组合物的完全培养基中组合物浓度为50μg/mL。48h后，加入0.5％曲拉通溶液，低温高速离心10min，收集上清液，使用CAT试剂盒检测CAT酶活力。以空白组的CAT酶活力为100％。
其中：空白组加不含H2O2的基础培养基2h后，再加2mL完全培养基培养48h；
模型组加含H2O2的基础培养基损伤后，再加2mL完全培养基培养48h；
实施例1组加含H2O2的基础培养基损伤后，再加入2mL含实施例1组合物的完全培养基培养48h；
实施例2组加含H2O2的基础培养基损伤后，再加入2mL含实施例2组合物的完全培养基培养48h；
实施例3组加含H2O2的基础培养基损伤后，再加入2mL含实施例3组合物的完全培养基培养48h；
实施例4组加含H2O2的基础培养基损伤后，再加入2mL含实施例4组合物的完全培养基培养48h；
实施例5组加含H2O2的基础培养基损伤后，再加入2mL含实施例5组合物的完全培养基培养48h；
对比例1组加含H2O2的基础培养基损伤后，再加入2mL含对比例1组合物的完全培养基培养48h；
对比例2组加含H2O2的基础培养基损伤后，再加入2mL含对比例2组合物的完全培养基培养48h；
对比例3组加含H2O2的基础培养基损伤后，再加入2mL含对比例3组合物的完全培养基培养48h；
对比例4组加含H2O2的基础培养基损伤后，再加入2mL含对比例4组合物的完全培养基培养48h；
对比例5组加含H2O2的基础培养基损伤后，再加入2mL含对比例5组合物的完全培养基培养48h。
2、实验结果
检测结果见下表4和图2所示。
表4不同组别CAT酶活力
Figure BDA0003160963190000091
Figure BDA0003160963190000101
备注：“*”表示与模型对照组有显著性差异(P<0.05)。
表4和图2为不同组别CAT酶活力的结果，从中可以看出：所有实施例的CAT酶活力均高于对比例，说明实施例1～5的组合物对hacat细胞的CAT酶活力增强效果比对比例1～5更佳。其中，实施例3的hacat细胞CAT酶活力大于实施例1、2、4、5，说明按照实施例3的五味子油、金银花提取物组合配比，对于CAT酶活力的增强作用最佳；实施例3的CAT酶活力大于对比例1～2，表明本发明五味子油与金银花提取物的组合对CAT酶活力的正向调节作用比五味子油、金银花提取物单独作用效果更佳。此外，实施例1～5组合物的CAT酶活力均显著高于对比例3～5组合物的给药组，表明本发明是通过将五味子油与金银花提取物在特定的配比下组合使用，才能发挥更佳的抗氧化效果。
实施例8实施例1～5与对比例1～5组合物对DPPH自由基清除实验
1、实验方法
精密称取DPPH 3.94mg，用无水乙醇溶解并定容至100mL棕色容量瓶中，得0.1mmol/L DPPH溶液，避光保存，备用。分别加入0.1mL的实施例1～5和对比例1～5组合物，浓度为50μg/mL，其中阳性对照组加50μg/mL浓度的VC溶液，置96孔板中，每孔再加入0.1mL的DPPH溶液，室温避光反应30min，同时以无水乙醇为空白，于517nm波长处测定吸光值。选取50μg/mL浓度的VC溶液作阳性对照。将实验重复三次。按下列公式计算DPPH自由基清除率，并进行显著性分析。
DPPH自由基清除率(％)＝A0-(As-Ac)/A0×100％
公式中，A0—0.1mL蒸馏水+0.1mL DPPH；
溶液的吸光度值As—0.1mL样品溶液+0.1mL DPPH；
溶液的吸光度值Ac—0.1mL样品溶液+0.1mL无水乙醇的吸光度值。
2、实验结果
实验结果见表5和图3。
表5不同组别DPPH自由基清除率
DPPH自由基清除率(％)
空白组 0±0.00
实施例1 70.16±2.54****
实施例2 80.83±1.60****
实施例3 91.61±1.81****
实施例4 77.21±4.45****
实施例5 73.44±2.18****
对比例1 57.22±2.42****
对比例2 59.91±1.30****
对比例3 64.12±0.86****
对比例4 68.00±1.62****
对比例5 68.75±1.03****
备注：“*”表示与空白组有显著性差异(P<0.05)。
从表5和图3的结果可以看出：所有实施例组合物对自由基清除率均高于70％，对比例的自由基清除率为55％～70％，表明本发明通过将五味子油与金银花提取物进行特定的配伍，可显著增强其自由基清除率，比五味子油、金银花提取物单独作用效果更佳。此外，实施例3的自由基清除率大于实施例1、2、4、5，说明按照实施例3的五味子油、金银花提取物组合配比，自由基清除率的增强作用最佳。实施例1～5组合物对自由基清除率高于对比例3～5，表明需要将五味子油与金银花提取物在特定的配比下组合使用，才可发挥更佳的清除自由基的效果。
应用例一种具有增强过氧化氢酶活力的化妆水
1、化妆水的配方如表6所示：
表6
Figure BDA0003160963190000111
Figure BDA0003160963190000121
2、化妆水的制备方法为：按重量份称取各组分，将植物油脂、保湿剂、实施例3的组合物、以及去离子水，混合搅拌并加热至70℃，搅拌均匀得到料液，然后在3500r/min下匀浆15min，得到含该组合物的化妆水。
3、化妆水抗氧化效果测试
实验方法同实施例6～8，结果证明含有本发明组合物制备得到的化妆水对DPPH自由基的清除率达到71.77％，hacat细胞存活率为65.31％，相对酶活力为86.43％。表明本发明的抗氧化组合物添加于化妆水中，可显著提高产品的过氧化氢酶活力和抗氧化作用，具有预防及修复皮肤细胞氧化损伤、延缓皮肤氧化衰老的功效。
以上所述，仅用以说明本发明的技术方案而非限制，本领域普通技术人员对本发明的技术方案所做的其它修改或者等同替换，只要不脱离本发明技术方案的精神与范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (10)

1.一种具有增强过氧化氢酶活力的组合物，其特征在于，由以下组份组成：五味子油、金银花提取物。
2.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，按重量份数计，由以下组份组成：
五味子油0.1～10份，金银花提取物20～100份。
3.根据权利要求2所述组合物，其特征在于，按重量份数计，由以下组份组成：
五味子油0.5～5份，金银花提取物35～60份。
4.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，所述五味子油的提取步骤如下：将14～60目的五味子粉末，按料液比5～10倍加入水，采用水蒸气蒸馏法于90～100℃加热提取3～8h，分离五味子粗油，加入2～10倍乙酸乙酯萃取2～5次，即得。
5.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，所述金银花提取物的提取步骤如下：将金银花按料液比8～12倍加入浓度为60％～80％的乙醇水溶液，80～100℃加热回流提取2～3次，每次回流1～3h，合并提取液，于50～65℃减压浓缩至金银花提取物浸膏后，置50～65℃干燥至水分含量小于8％，即得。
6.权利要求1～5任一所述组合物的制备方法，其特征在于，由以下步骤制备得到：按照配方量称取五味子油、金银花提取物，将五味子油与金银花提取物混合搅拌均匀，即得。
7.权利要求1～5任一所述组合物在制备抗氧化、抗衰老的日化品中的应用。
8.一种抗氧化、抗衰老的化妆品，其特征在于，所述化妆品为在权利要求1～5任一所述组合物中加入化妆品中可接受的基质制成。
9.根据权利要求8所述化妆品，其特征在于，所述组合物按重量百分比为0.5％～3％的比例添加在所述化妆品中。
10.根据权利要求8所述化妆品，其特征在于，所述化妆品包括爽肤水、乳液、精华、膏霜、冻干粉、面膜、喷雾。
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