CN113507933A - 诱导胱天蛋白酶活性 - Google Patents
诱导胱天蛋白酶活性 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113507933A CN113507933A CN202080016977.6A CN202080016977A CN113507933A CN 113507933 A CN113507933 A CN 113507933A CN 202080016977 A CN202080016977 A CN 202080016977A CN 113507933 A CN113507933 A CN 113507933A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- caspase
- therapeutic compound
- cells
- caspase activity
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000011727 Caspases Human genes 0.000 title claims abstract description 41
- 108010076667 Caspases Proteins 0.000 title claims abstract description 41
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 34
- 230000006698 induction Effects 0.000 title description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims abstract description 42
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 40
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 29
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 239000003999 initiator Substances 0.000 claims abstract description 10
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerol group Chemical group OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 claims description 13
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 11
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 6
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- PTJWCLYPVFJWMP-UHFFFAOYSA-N 2-[[3-hydroxy-2-[[3-hydroxy-2,2-bis(hydroxymethyl)propoxy]methyl]-2-(hydroxymethyl)propoxy]methyl]-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound OCC(CO)(CO)COCC(CO)(CO)COCC(CO)(CO)CO PTJWCLYPVFJWMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- AGNTUZCMJBTHOG-UHFFFAOYSA-N 3-[3-(2,3-dihydroxypropoxy)-2-hydroxypropoxy]propane-1,2-diol Chemical compound OCC(O)COCC(O)COCC(O)CO AGNTUZCMJBTHOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108090000397 Caspase 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004018 Caspase 6 Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000425 Caspase 6 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004041 Caspase 7 Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000567 Caspase 7 Proteins 0.000 claims description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 2
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N Propylene oxide Chemical compound CC1CO1 GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ZJCCRDAZUWHFQH-UHFFFAOYSA-N Trimethylolpropane Chemical compound CCC(CO)(CO)CO ZJCCRDAZUWHFQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 2
- GPLRAVKSCUXZTP-UHFFFAOYSA-N diglycerol Chemical compound OCC(O)COCC(O)CO GPLRAVKSCUXZTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 2
- VIJMMQUAJQEELS-UHFFFAOYSA-N n,n-bis(ethenyl)ethenamine Chemical compound C=CN(C=C)C=C VIJMMQUAJQEELS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- WXZMFSXDPGVJKK-UHFFFAOYSA-N pentaerythritol Chemical compound OCC(CO)(CO)CO WXZMFSXDPGVJKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 2
- 102100029855 Caspase-3 Human genes 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 66
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 13
- HNRMPXKDFBEGFZ-UHFFFAOYSA-N ethyl trimethyl methane Natural products CCC(C)(C)C HNRMPXKDFBEGFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 11
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 238000003705 background correction Methods 0.000 description 7
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 108060000903 Beta-catenin Proteins 0.000 description 4
- 102000015735 Beta-catenin Human genes 0.000 description 4
- 238000003731 Caspase Glo 3/7 Assay Methods 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 4
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 4
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 3
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 3
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 3
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 3
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 230000002475 laxative effect Effects 0.000 description 3
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 3
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 229920000223 polyglycerol Polymers 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 206010052360 Colorectal adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 2
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 2
- 102000052575 Proto-Oncogene Human genes 0.000 description 2
- 108700020978 Proto-Oncogene Proteins 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 201000002313 intestinal cancer Diseases 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- RSROEZYGRKHVMN-UHFFFAOYSA-N 2-ethyl-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;oxirane Chemical compound C1CO1.CCC(CO)(CO)CO RSROEZYGRKHVMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000003952 Caspase 3 Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005927 Cysteine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010005843 Cysteine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000007989 Effector Caspases Human genes 0.000 description 1
- 108010089510 Effector Caspases Proteins 0.000 description 1
- 201000003741 Gastrointestinal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000005016 Intestinal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N Thiazole Chemical compound C1=CSC=N1 FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 208000029664 classic familial adenomatous polyposis Diseases 0.000 description 1
- 201000010897 colon adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 208000035474 group of disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- -1 hexaglycerol Chemical compound 0.000 description 1
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007422 luminescence assay Methods 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 238000012794 pre-harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- MUUHXGOJWVMBDY-UHFFFAOYSA-L tetrazolium blue Chemical compound [Cl-].[Cl-].COC1=CC(C=2C=C(OC)C(=CC=2)[N+]=2N(N=C(N=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 MUUHXGOJWVMBDY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/74—Synthetic polymeric materials
- A61K31/765—Polymers containing oxygen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/74—Synthetic polymeric materials
- A61K31/765—Polymers containing oxygen
- A61K31/77—Polymers containing oxygen of oxiranes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Abstract
实施方案涉及诱导胱天蛋白酶活性的方法。该方法包括使细胞与通过使用氧化物将引发剂烷氧基化形成的治疗化合物接触。
Description
技术领域
本公开的实施方案涉及诱导胱天蛋白酶活性的方法。
背景技术
癌症是一组涉及异常细胞生长的疾病。结直肠癌,也称为结肠癌或肠癌,是一种由结肠或直肠中不受控制的细胞生长引起的癌症。
结直肠癌是一种常诊断的恶性肿瘤。结直肠癌的治疗可包括手术、放射疗法和/或化学疗法。然而,仍然需要可用于治疗的新方法和/或新组合物。
发明内容
本公开提供了诱导胱天蛋白酶活性的方法,该方法包括使细胞与通过使用氧化物将引发剂烷氧基化形成的治疗化合物接触。
本公开的以上发明内容并非旨在描述本公开的每个所公开的实施方案或每个实施方案。以下描述更具体地示范说明性实施方案。在本申请整篇的若干处,通过实例列表提供指导,所述实例可以各种组合形式使用。在每种情况下,所列举的列表仅充当代表性群组并且不应解释为排它性列表。
具体实施方式
虽然不希望受制于理论,但涉及结直肠癌发展的一种机制是产生APC蛋白的APC(腺瘤性结肠息肉)基因的突变。APC蛋白是基于蛋白质的破坏复合物的一部分,其有助于防止β-联蛋白在细胞中积累。APC蛋白和β-联蛋白是WNT(Wingless/Integrated)信号转导通路之一的一部分,该通路通过细胞表面受体将信号传递到细胞中。一般来说,当细胞受到WNT刺激时,破坏复合物失活,β-联蛋白会进入细胞核并与控制遗传信息转录的转录因子(TCF)结合。参与正常细胞进程的基因将被激活,并且这是一个受调控的过程。如果没有APC蛋白,β-联蛋白会不断积累到高水平并转移到细胞核中,与TCF结合,TCF再与DNA结合,并且激活原癌基因的转录。当原癌基因被不恰当地高水平表达时,它们就变成癌基因。激活的癌基因会导致指定要凋亡的细胞存活并增殖,这可能导致个体患上结直肠癌。
本文公开了诱导胱天蛋白酶活性的方法。有利地,诱导胱天蛋白酶活性可以诱导细胞凋亡,即诱导细胞死亡。对于许多应用,与坏死相比,细胞凋亡是期望的。诱导胱天蛋白酶活性可以提供大量细胞内蛋白质的降解以导致细胞死亡。例如,细胞凋亡导致的细胞死亡可能是对结直肠癌细胞的理想效果。
如本文所用,除非另有说明,否则“一个”、“一种”、“该/所述”、“至少一个”、“许多”和“一个或多个”可以互换使用。术语“和/或”意指所列项目中的一个、一或多个或所有。通过端点对数值范围的叙述包括所述范围中所包含的所有数字(例如1至5包括1、1.5、2、2.75、3、3.80、4、5等)。
如本文所公开的,诱导胱天蛋白酶活性的方法包括使细胞与治疗化合物接触。如本文所用,“治疗化合物”是指可通过使用氧化物将引发剂烷氧基化形成的化合物。
本公开的实施方案规定,引发剂包括含有三个或更多个反应性可用羟基、胺基或其组合的化合物。一个或多个实施方案规定,引发剂可选自甘油、双甘油、三甘油、六甘油、三季戊四醇、三羟甲基丙烷、山梨糖醇、乙二胺、三亚乙基胺、2,2双(羟甲基)-1,3-丙二醇、乙醇胺及其组合。
本公开的实施方案规定,所述氧化物可以选自环氧乙烷、环氧丙烷、环氧丁烷及其组合。
本公开的一个或多个实施方案规定,通过使用氧化物将引发剂烷氧基化形成的治疗化合物可以由下式I表示:
其中每个n独立地从1到303。
由式I表示的治疗化合物的实例是三羟甲基丙烷乙氧基化物。
本公开的一个或多个实施方案提供了治疗化合物可由下式II表示:
其中每个n独立地从1到227。
由式II表示的治疗化合物的实例是4臂聚(乙二醇)。
本公开的一个或多个实施方案提供了治疗化合物可由下式III表示:
其中每个n独立地从1到303。
由式III表示的治疗化合物的实例是甘油乙氧基化物。
本公开的实施方案规定,治疗化合物具有400至40,000g/mol的数均分子量(Mn)。包括从400到40,000g/mol的所有单个值和子范围;例如,治疗化合物可以具有从400、450、500、600、700、800、900或1000g/mol的下限到40,000、30,000、20,000、15,000或10,000g/mol的上限的Mn。
可以使用已知的方法、设备和/或条件来制备治疗化合物,例如使用氧化物将引发剂烷氧基化,这些方法、设备和/或条件可以针对不同的应用而变化。治疗化合物可商购获得。
如提及的,如本文所公开的,诱导胱天蛋白酶活性的方法包括使细胞与治疗化合物接触。本公开的一个或多个实施方案提供在体内发生细胞与治疗化合物的接触。本公开的一个或多个实施方案提供在体外发生细胞与治疗化合物的接触。可以通过使用多种不同的已知方法、设备和/或条件使细胞与治疗化合物接触。各种方法、设备和/或条件可用于不同的应用。
治疗化合物可以与已知的治疗培养基一起使用。例如,治疗化合物可以在接触细胞之前溶解在已知的治疗培养基中以提供有效量。一个或多个实施方案规定,治疗化合物和治疗培养基可以组合以形成溶液。该溶液可以是均匀溶液。治疗培养基的实例包括但不限于DMEM(Dulbecco's Modified Eagle培养基)、RPMI 1640和McCoy's 5A,以及它们的组合等。许多治疗培养基是可商购的。
治疗化合物在治疗培养基中可以具有0.001毫摩尔(mM)至75mM的浓度。包括从0.001到75mM的所有单个值和子范围;例如,有效浓度可以是在治疗培养基中0.001、0.005、0.01、0.1或1.0mM的下限至75、72、70、68或65mM的上限的治疗化合物。
细胞可以与有效量的治疗化合物接触。如本文所用,术语“有效量”可与“治疗有效量”和/或“治疗量”互换使用,是指足以提供预期应用例如诱导胱天蛋白酶活性的治疗化合物的量。使细胞与有效量的治疗化合物接触可以期望地提供疾病治疗,例如结直肠癌治疗,其中不期望的细胞因诱导胱天蛋白酶活性而导致的细胞凋亡而死亡。有效量可取决于具体应用(例如体外或体内)、所治疗的受试者(例如受试者的体重和年龄)、疾病状况的严重程度和/或施用方式等考虑因素而变化,本领域普通技术人员可以容易地确定。如本文所用,被治疗的“受试者”是指动物界的任何成员,例如哺乳动物,包括人。
本公开的实施方案规定,具体剂量可以根据所使用的具体治疗化合物、要遵循的给药方案、施用时间和/或携带治疗化合物的物理递送系统而变化。例如,有效量的治疗化合物可以通过单次给药或多次给药与细胞接触。
本公开的实施方案规定,与治疗化合物接触的细胞是癌细胞。例如,细胞可以是结直肠癌细胞。结直肠癌细胞也可称为结肠癌细胞、肠癌细胞和/或结直肠腺癌细胞。本公开的一个或多个实施方案规定,额外的细胞,即非癌细胞,可以与治疗化合物接触。
尽管不打算受理论的束缚,胱天蛋白酶(可以称为半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶)是参与细胞凋亡的半胱氨酸蛋白酶家族。有两种类型的胱天蛋白酶:起始物胱天蛋白酶,包括胱天蛋白酶2、8、9、10、11、12,和效应物胱天蛋白酶,包括胱天蛋白酶3、6、7。本公开的一个或多个实施方案提供了使细胞与治疗化合物接触诱导效应物胱天蛋白酶活性。本公开的一个或多个实施方案提供了胱天蛋白酶选自胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶6、胱天蛋白酶7或其组合。
如上所述,诱导胱天蛋白酶活性可以有利地诱导细胞凋亡。诱导的胱天蛋白酶活性可以通过多种不同的已知方法、设备和/或条件来确定。例如,诱导的胱天蛋白酶活性可由大于一(>1)的平均相对胱天蛋白酶活性证明,例如,对于多次实验运行,如通过胱天蛋白酶-Glo 3/7测定4.B确定的。96孔板中细胞的标准方案可从Promega获得。如本文所用,“相对胱天蛋白酶活性”可与相对细胞凋亡互换使用。
与用于癌症治疗的一些其他聚合化合物相比,如本文所讨论的,使用治疗化合物可以有利地提供改进的即降低的通便作用。与相对较大的通便作用相关的一些其他聚合化合物相比,这种降低的通便作用可有助于提供患者顺应性的期望增加。
本公开的一个或多个实施方案提供了一种治疗结直肠癌的方法。该方法可以包括使结直肠癌细胞与治疗化合物接触。
本公开的一个或多个实施方案提供了一种治疗癌症的方法。该方法可以包括向哺乳动物施用治疗化合物。
实施例
在实施例中,使用材料的各种术语和名称,所述术语和名称包括例如以下:
三甲基丙烷乙氧基化物(Mn为1014g/mol;从Sigma-Aldrich获得);
4臂聚(乙二醇)(Mn为10,000g/mol;从Sigma-Aldrich获得);
甘油乙氧基化物(Mn为1000g/mol;从Sigma-Aldrich获得);
McCoy's 5A(生长培养基;从ThermoFisher Scientific获得);
胎牛血清(从ATCC获得);
Dulbecco磷酸盐缓冲盐水(GIBCO 14190-144;从ThermoFisher Scientific获得);
胰蛋白酶-EDTA(GIBCO胰蛋白酶-EDTA(0.25%);目录号25200056;从ThermoFisher Scientific获得);
噻唑蓝四唑溴化物(得自ThermoFisher Scientific);
含钙和镁的Dulbecco磷酸盐缓冲盐水(GIBCO 14040-133;从ThermoFisherScientific获得);
Caspase-Glo 3/7 Assay(发光测定;目录号G8093;从Promega获得);
二甲基亚砜(目录号276855;从Sigma-Aldrich获得)。
培养启动和维持
启动HT-29(HTB-38TM)细胞(每mL含有约1x106个细胞)并接种到含有McCoy's 5A和胎牛血清(10%(v/v))的T-25烧瓶中。然后,使用30-2007(在37℃水浴中温热至少15分钟)扩增HT-29细胞。细胞在保持在37℃和5%CO2的加湿培养箱(SANYOINCT-16-CMT;MCO-19AIC(UV))中生长。然后,将细胞用1X Dulbecco磷酸盐缓冲盐水冲洗并在T-75烧瓶中使用1X胰蛋白酶-EDTA每周传代培养1至3次,应用<5分钟;通过向分离的细胞中加入完全生长培养基来终止胰蛋白酶-EDTA的酶促作用。然后,在达到80%到90%汇合时,将细胞分成以下分流比范围:1:5到1:16。记录传代培养和生长扩增活动,例如传代数、%汇合、%存活率(仅在实验设置日)和所有阶段的细胞形态。细胞保持对数期生长。
细胞培养铺板(第0天)
细胞培养铺板如下进行。用胰蛋白酶-EDTA和完全生长培养基从单个80%到90%汇合的T-75烧瓶中收集细胞悬浮液。为了获得细胞浓度和存活率,使用COUNTESS自动细胞计数器(INVITROGEN C10227;CNTR-7-CMT)获得细胞计数,其中每个载玻片的2个小室都提供10μL的1:1、0.4%台盼蓝染料(INVITROGEN T10282)和细胞悬液的每一种。对单个载玻片的两个室的细胞计数和存活率百分比进行平均。然后,使用多通道移液器将含有完全生长培养基的活细胞(定义为存活率≥90%)铺板到无菌96孔板上。每个细胞密度,每孔5000到6000个细胞(每毫升40,000到48,000个细胞)被添加到每个孔中,除了用作‘仅盐水’无细胞对照孔的孔;从板上A开始到H行,每孔加入等体积的125μL细胞悬液。用于2个终点(细胞凋亡和细胞毒性)中的每一个的板分别是实心白色板和透明板。将细胞温育24±2小时以允许附着。
三甲基丙烷乙氧基化物/4臂聚(乙二醇)/甘油乙氧基化物原料制备
在无菌盐水中以三甲基丙烷乙氧基化物、4臂聚(乙二醇)和甘油乙氧基化物的各自目标浓度制备储备溶液。对于测定,根据高分子量导致的溶解度限制,如有必要,调整至较低储备浓度制剂(w/v)以生成溶液或可移液悬浮液,或者在用于测定之前通过添加少量盐水、连续混合、涡旋、超声处理或搅拌实现增溶。如果溶解需要,在与三甲基丙烷乙氧基化物、4臂聚(乙二醇)和/或甘油乙氧基化物混合之前将盐水预热至37℃。在细胞悬浮铺板当天(第0天),每种测试物质制备的总体积为10mL。
细胞毒性试剂制备
在含钙和镁的Dulbecco磷酸盐缓冲盐水中,以5mg/mL制备溴化噻唑蓝四唑鎓。每个设置日(第0天)准备30mL的总体积(w/v)并储存在4℃下直至使用。
给药溶液制备(第0天)
在McCoy's 5A和1%胎牛血清每一种的总15mL中制备每种测试物质原液的给药溶液/悬浮液。使用不同量的给药原液以获得从0.0015到60mM的给药溶液/悬浮液。在无菌贮器中制备给药溶液/悬浮液并用移液管反复混合直至达到可见的均匀性。使用容量为2mL的无菌96深孔块,对于治疗组,将2mL给药溶液/悬浮液添加到6个重复孔中的每一个,对于仅盐水细胞对照和仅盐水‘无细胞’背景校正对照,添加到12个孔中的每一个。按照半随机统计设计建立所述板。每种测试物质都通过数字和颜色代码进行识别,用于识别待处理的孔。用密封胶带、板盖覆盖块,并放入4℃实验室冰箱(Fischer Scientific,135B1;RFR-22-CMT)中过夜。
处理(第1天)
从冰箱中取出所有含有给药溶液/悬浮液的96深孔块,并将其置于37℃珠浴中至少30分钟。在铺板后大约24小时,从培养箱中取出孔板并一次处理一个。使用从A行开始到H行的6孔抽吸装置抽吸细胞板中的所有孔。使用多通道移液器,将100μL的给药溶液/悬浮液(来自块)添加到96孔细胞处理板;从A行开始到H行(相同顺序)。所有孔一次抽吸和处理2行,以防止孔干燥并保持细胞附着和活力;每行都更换了移液器吸头。将所有板置于培养箱中,并在收获前处理24±2或48±2小时。
收获(第2天和第3天)
细胞凋亡
如下进行细胞凋亡的评估。根据96孔板中细胞的“Caspase-Glo 3/7Assay”4.B.标准方案(Promega)进行细胞凋亡。将Caspase-Glo 3/7 Assay组件预热至室温约60分钟。从培养箱中取出(一次一个)白板并吸出处理培养基。使用多通道移液器,将100μL的1XDulbecco磷酸盐缓冲盐水加入96孔板的每个孔中。将测定试剂(缓冲液和底物)手动混合并添加到试剂贮器中;使用多通道移液器,将100μL测定试剂混合物添加到96孔板的每个孔中。将板(用箔保护避光)置于板振荡器上并允许在室温下以约800rpm旋转5分钟。然后在分析前将板在室温下再温育25分钟。在FLUOstar Omega Plate Reader上对每个板以相对光单位(RLU)为单位记录发光。
细胞毒性
如下进行细胞毒性的评估。将如前所述的细胞毒性试剂(5mg/mL)预热至室温,约30分钟,然后稀释到含钙和镁的1X Dulbecco磷酸盐缓冲盐水中,以提供0.675mg/mL的浓度(最终)。从培养箱中取出透明板(一次一个)并吸出处理培养基。使用多通道移液器,将200μL细胞毒性试剂(最终)加入96孔板的每个孔中;然后将板用密封胶带覆盖并在加湿的37℃培养箱中温育4小时。温育后,吸出上清液,将二甲基亚砜(200μL)添加到每个孔中。通过重复移液彻底混合后,将细胞裂解物转移到新的透明96孔板中,并在FLUOstar Omega读板机上对600和630nm处的吸光度进行定量。
分析
相对胱天蛋白酶活性计算如下:(RLU前景)-(RLU仅盐水‘无细胞’对照)=(RLU背景校正);
(每个含有测试物质的孔的(RLU背景校正))/(12个仅盐水对照孔的平均值(RLU前景))=相对胱天蛋白酶活性;其中RLU=相对光单位。
每个含有测试物质的孔的相对胱天蛋白酶活性/6次重复=平均相对胱天蛋白酶活性。表1、3和5中报告了各种使用浓度的结果。
细胞存活率计算如下:
(Abs 600前景)–(Abs 600仅盐水‘无细胞’对照)=(Abs 600背景校正)
(Abs 630前景)–(Abs 630仅盐水‘无细胞’对照)=(Abs 630背景校正)
(Abs 600背景校正)–(Abs 630背景校正)=(Abs 600-630)
(每个含有测试物质的孔的(Abs 600-630))/(12个仅盐水对照孔的平均(Abs600-630))=%细胞存活率
每个含有测试物质的孔的%细胞存活率/6次重复=平均%细胞存活率。表2、4和6中报告了各种使用浓度的结果。
表1
表1的数据说明,当细胞暴露于15、30和60mM浓度的三甲基丙烷乙氧基化物时提供有利的相对胱天蛋白酶活性,即平均相对胱天蛋白酶活性>1,如各自平均相对胱天蛋白酶活性(运行1、2、3、4)值所示。
表2
表2的数据说明,当细胞暴露于15、30和60mM浓度的三甲基丙烷乙氧基化物时在24小时后提供足够的存活率,即对于(运行1、2、3、4),平均存活率%为50%或更大。
表3
表3的数据说明,当细胞暴露于1.5、3和6mM浓度的4臂聚(乙二醇)时提供有利的相对胱天蛋白酶活性,即平均相对胱天蛋白酶活性>1,如各自平均相对胱天蛋白酶活性(运行1、2)值所示。
表4
表4的数据说明,当细胞暴露于1.5、3和6mM浓度的4臂聚(乙二醇)时在24小时后提供足够的存活率,即对于平均存活率%(运行1、2),平均存活率%为50%或更大。
表5
表5的数据说明,当细胞暴露于15和30mM浓度的甘油乙氧基化物时提供有利的相对胱天蛋白酶活性,即平均相对胱天蛋白酶活性>1,如各自平均相对胱天蛋白酶活性(运行1、2、3、4)值所示。
表6
表6的数据说明,当细胞暴露于15和30mM浓度的甘油乙氧基化物时在24小时后提供足够的存活率,即对于平均存活率%(运行1、2、3、4),平均存活率%为50%或更大。
Claims (10)
1.一种诱导胱天蛋白酶活性的方法,所述方法包括使细胞与通过使用氧化物将引发剂烷氧基化形成的治疗化合物接触。
2.根据权利要求1所述的方法,其中所述引发剂包括含有三个或更多个反应性可用羟基、胺基或其组合的化合物。
3.根据权利要求1所述的方法,其中所述引发剂选自甘油、双甘油、三甘油、六甘油、三季戊四醇、三羟甲基丙烷、山梨糖醇、乙二胺、三亚乙基胺、2,2双(羟甲基)-1,3-丙二醇、乙醇胺及其组合。
4.根据权利要求1所述的方法,其中所述氧化物选自环氧乙烷、环氧丙烷、环氧丁烷及其组合
5.根据权利要求1所述的方法,其中所述治疗化合物具有400至40,000g/mol的数均分子量。
6.根据权利要求1所述的方法,其中所述治疗化合物在治疗培养基中的浓度为0.001毫摩尔至75毫摩尔。
7.根据权利要求1所述的方法,其中所述细胞是癌细胞。
8.根据权利要求1所述的方法,其中所述胱天蛋白酶是效应物胱天蛋白酶。
9.根据权利要求1所述的方法,其中所述胱天蛋白酶选自胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶6、胱天蛋白酶7或其组合。
10.根据权利要求1所述的方法,其进一步诱导细胞凋亡。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201962813819P | 2019-03-05 | 2019-03-05 | |
US62/813819 | 2019-03-05 | ||
PCT/US2020/019804 WO2020180549A1 (en) | 2019-03-05 | 2020-02-26 | Inducing caspase activity |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN113507933A true CN113507933A (zh) | 2021-10-15 |
CN113507933B CN113507933B (zh) | 2024-05-10 |
Family
ID=
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2000071564A2 (en) * | 1999-04-29 | 2000-11-30 | The University Of Tennessee Research Corporation | Isolated nucleic acids of the p-hyde family, p-hyde proteins, and methods of inducing susceptibility to induction of cell death in cancer |
US20040028804A1 (en) * | 2002-08-07 | 2004-02-12 | Anderson Daniel G. | Production of polymeric microarrays |
US20090252702A1 (en) * | 2006-04-24 | 2009-10-08 | Bruce Medical Ab | Polymer-based anti-cancer agents |
US20100303878A1 (en) * | 2009-06-02 | 2010-12-02 | Joram Slager | Biodegradable bioactive agent releasing matrices with particulates |
US20130216493A1 (en) * | 2010-11-04 | 2013-08-22 | Norgine Bv | Peg or peg block copolymers for treating colorectal cancer |
CN105592697A (zh) * | 2013-10-03 | 2016-05-18 | 陶氏环球技术有限责任公司 | 包含苯氧乙醇的杀微生物组合物 |
CN109381427A (zh) * | 2017-08-10 | 2019-02-26 | 南京友怡医药科技有限公司 | 一种寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物的注射剂 |
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2000071564A2 (en) * | 1999-04-29 | 2000-11-30 | The University Of Tennessee Research Corporation | Isolated nucleic acids of the p-hyde family, p-hyde proteins, and methods of inducing susceptibility to induction of cell death in cancer |
US20040028804A1 (en) * | 2002-08-07 | 2004-02-12 | Anderson Daniel G. | Production of polymeric microarrays |
US20090252702A1 (en) * | 2006-04-24 | 2009-10-08 | Bruce Medical Ab | Polymer-based anti-cancer agents |
US20100303878A1 (en) * | 2009-06-02 | 2010-12-02 | Joram Slager | Biodegradable bioactive agent releasing matrices with particulates |
US20130216493A1 (en) * | 2010-11-04 | 2013-08-22 | Norgine Bv | Peg or peg block copolymers for treating colorectal cancer |
CN105592697A (zh) * | 2013-10-03 | 2016-05-18 | 陶氏环球技术有限责任公司 | 包含苯氧乙醇的杀微生物组合物 |
CN109381427A (zh) * | 2017-08-10 | 2019-02-26 | 南京友怡医药科技有限公司 | 一种寡聚乙二醇修饰的多西他赛衍生物的注射剂 |
Non-Patent Citations (7)
Title |
---|
B. HOWLEY 等: "Caspases as therapeutic targets", J. CELL. MOL. MED, vol. 12, no. 5, pages 1502 - 1516, XP055496024, DOI: 10.1111/j.1582-4934.2008.00292.x * |
CUI, M 等: "A highly sensitive biosensor for tumor maker alpha fetoprotein based on poly(ethylene glycol) doped conducting polymer PEDOT", BIOSENSORS & BIOELECTRONICS, vol. 79, 15 May 2016 (2016-05-15), pages 736 - 741 * |
DANIELA HUTANU 等: "Recent Applications of Polyethylene Glycols (PEGs) and PEG Derivatives", MODERN CHEMISTRY & APPLICATIONS, vol. 2, no. 2, pages 1000132, XP055346245, DOI: 10.4172/2329-6798.1000132 * |
JANA HERZBERGER 等: "Polymerization of Ethylene Oxide, Propylene Oxide, and Other Alkylene Oxides: Synthesis, Novel Polymer Architectures, and Bioconjugation", CHEMICAL REVIEWS, vol. 116, pages 2170 - 2243, XP055266674, DOI: 10.1021/acs.chemrev.5b00441 * |
MORTEZA ESKANDANI 等: "Cyto/Genotoxicity Study of Polyoxyethylene (20) Sorbitan Monolaurate (Tween 20)", DNA AND CELL BIOLOGY, vol. 32, no. 9, pages 498 - 503, XP055701132, DOI: 10.1089/dna.2013.2059 * |
WENJIN XU 等: "Aptamer-conjugated and doxorubicin-loaded unimolecular micelles for targeted therapy of prostate cancer", BIOMATERIALS, vol. 34, no. 21, pages 5244 - 5253, XP028593817, DOI: 10.1016/j.biomaterials.2013.03.006 * |
辛向红: "聚乙二醇电解质散剂在结直肠癌术前肠道准备中的效果与安全性", 中国老年学杂志, vol. 33, no. 7, pages 1691 - 1692 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20220125830A1 (en) | 2022-04-28 |
WO2020180549A1 (en) | 2020-09-10 |
JP2022523542A (ja) | 2022-04-25 |
EP3934661A1 (en) | 2022-01-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Gooskens et al. | Clear cell sarcoma of the kidney: a review | |
Chow et al. | Oncogene‐specific formation of chemoresistant murine hepatic cancer stem cells | |
Ashton et al. | Gene sets identified with oncogene cooperativity analysis regulate in vivo growth and survival of leukemia stem cells | |
Dittmar et al. | The dark side of stem cells: triggering cancer progression by cell fusion | |
Wang et al. | Upregulation of miR-98 inhibits apoptosis in cartilage cells in osteoarthritis | |
Siu et al. | Chromosome instability underlies hematopoietic stem cell dysfunction and lymphoid neoplasia associated with impaired Fbw7-mediated cyclin E regulation | |
Yang et al. | Detection and characterization of side population in Ewing’s sarcoma SK-ES-1 cells in vitro | |
Kato et al. | Precision modeling of gall bladder cancer patients in mice based on orthotopic implantation of organoid-derived tumor buds | |
Waldt et al. | Crispr/Cas-based modeling of NF2 loss in meningioma cells | |
US20150203846A1 (en) | Treatment of Myelodysplastic Syndrome by Inhibition of NR2F6 | |
Ting et al. | Withaferin A targeting both cancer stem cells and metastatic cancer stem cells in the UP-LN1 carcinoma cell model | |
CN113507933A (zh) | 诱导胱天蛋白酶活性 | |
CN113507933B (zh) | 诱导胱天蛋白酶活性 | |
WO2021228814A1 (en) | Mdm2 inhibitor response prediction method | |
CN113473996A (zh) | 诱导胱天蛋白酶活性 | |
CN113490501A (zh) | 用于诱导胱天蛋白酶活性的聚乙二醇衍生物 | |
Miyoshi et al. | Properties and identification of cancer stem cells: a changing insight into intractable cancer | |
KR20170103732A (ko) | 암의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물 | |
US20230136088A1 (en) | miRNA-193a for Promoting Immunogenic Cell Death | |
Wei et al. | Characteristics of primary side population cervical cancer cells | |
CN109953989B (zh) | 2-(4-哌啶基苯乙烯)-1,3,3-三甲基-3h-吲哚鎓碘化物的药物应用 | |
Rajaraman | The Origin of Tumor Cell Heterogeneity. | |
Nukaya et al. | CDK7 is a Novel Therapeutic Vulnerability in Fibrolamellar Carcinoma | |
EA007004B1 (ru) | Ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы как антагонисты пролиферации и индукторы дифференцировки клеток | |
Keller | Inhibition of the Hedgehog pathway in combination with cytostatics as potential therapeutic option in Ewing Sarcoma |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant |