CN113507929A

CN113507929A - Dna聚合酶iiic抑制剂及其用途

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Publication number: CN113507929A
Application number: CN201980084447.2A
Authority: CN
Inventors: 喻向阳; 邢莉; 王明华; 凯西·马科马斯; 迈克尔·西尔弗曼; 理查德·索尔
Original assignee: Arcolis Pharmaceutical Co ltd
Current assignee: Arcolis Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2018-12-21
Filing date: 2019-12-19
Publication date: 2021-10-15
Also published as: IL283684A; US10723741B1; MX2021007219A; IL283684B2; AU2019404179A1; WO2020132174A1; US20230250102A1; US20200308180A1; US11001592B2; EP3897645A4; SG11202106061VA; EP3897645A1; JP2022515775A; CA3123843A1; US20220112195A1; IL283684B; US20200308179A1; US10836772B2; KR20210106508A

Abstract

本发明涉及用于抑制DNA聚合酶IIIC酶的化合物和方法。本发明还提供包括本发明化合物的药学上可接受的组合物和使用所述组合物治疗革兰氏阳性细菌感染的方法。

Description

DNA聚合酶IIIC抑制剂及其用途

相关申请的交叉引用

本申请要求于2018年12月21日提交的美国临时申请第62/783,754号的优先权和权益，其内容通过引用并入本文。

技术领域

本发明涉及用于抑制DNA聚合酶IIIC(pol IIIC)酶的化合物和方法。本发明还提供包括本发明化合物的药学上可接受的组合物和使用所述组合物治疗革兰氏阳性细菌感染的方法。

背景技术

细菌病原体对公众健康构成严重威胁。对多种抗生素具有多药耐药性的需氧和厌氧革兰氏阳性细菌已经成为主要的治疗挑战。

两种革兰氏阳性病原体，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和粪肠球菌(Enterococcus faecalis)/屎肠球菌(faecium)，占医院内疾病的大部分(Muto等人)。第三种生物体，肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)，通常是社区获得性病原体。这些生物体是需氧细菌，即在含氧大气中生长的细菌。

金黄色葡萄球菌是医院内菌血症和皮肤/伤口感染的最常见原因，也是医院内下呼吸道感染的第二常见原因。社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的出现已成为严重的公共卫生问题。随着时间的推移，MRSA菌株越来越具有多重耐药性。在世界许多地区，MRSA感染代表了大多数具有社区发病的散发性葡萄球菌感染。这些菌株还与大量局部(皮肤和皮肤结构)和侵入性(菌血症)感染的爆发有关。

粪肠球菌和屎肠球菌引起医院内败血症、心内膜炎和伤口和尿道感染。耐万古霉素的表型于1987年首次在肠球菌(耐万古霉素肠球菌，或VRE)中报道，这是在该药物被广泛应用于临床多年之后。如今，超过30％的ICU粪肠球菌感染是VRE。对于由VRE引起的某些疾病，包含血流感染、手术部位和尿路感染，几乎没有或根本没有治疗选择。仅在美国，每年VRE的发病率约为20,000例。

肺炎链球菌是引起脑膜炎、社区获得性肺炎、急性中耳炎和鼻窦炎的最常见细菌。在美国，据估计肺炎链球菌每年造成3000-6000例肺炎球菌性脑膜炎、50万例肺炎、12000多例菌血症和600万例中耳炎。据估计，每年由肺炎链球菌引起的疾病的死亡率在美国为40000人，全球为300-500万人。耐青霉素肺炎链球菌(PRSP)的鉴定已有所增加。肺炎球菌耐药菌株的出现和传播使这些常见感染的治疗变得复杂。

厌氧细菌，即在贫氧大气中生长的那些，也是公共卫生问题。艰难梭菌(Clostridium difficile)已经越来越多地与人类患者的疾病有关，通常是由于用某些抗生素药物治疗的结果。最常见的疾病被称为艰难梭菌相关性腹泻(CDAD)。

解决具有多药耐药性细菌问题的一种方法涉及开发能够选择性攻击新细菌靶标的有效抗菌剂。已经表明DNA pol IIIC酶在革兰氏阳性细菌的复制性DNA合成中是至关重要的(科恩伯格(Kornberg)等人)。由于DNA pol IIIC酶显示与哺乳动物或革兰氏阴性细菌DNA聚合酶几乎没有同源性，因此在发现新的革兰氏阳性选择性抗菌剂中，它是抑制作用的有吸引力的靶标。

低G:C革兰氏阳性生物体(需氧菌和厌氧菌)特别需要DNApol IIIC酶进行染色体复制。由结构基因polC编码的DNA pol IIIC酶是革兰氏阳性细菌中两种必需的复制特异性DNA聚合酶之一。polC不存在于具有高G:C含量的真细菌和革兰氏阴性真细菌以及真核细胞中，但在广泛的革兰氏阳性病原体中具有很强的保守性。

因此，DNA pol III对于低G:C含量革兰氏阳性细菌的宿主染色体的复制是必需的。当其作用被阻断时，染色体DNA无法复制并且细菌宿主死亡。该pol IIIC的基本结构在一大组低G:C含量的革兰氏阳性病原体中高度保守，包含葡萄球菌(Staphylococcus)、链球菌(Streptococcus)、肠球菌(Enterococcus)和支原菌(Mycoplasma)(塔兰蒂诺(Tarantino)等人《抗微生物剂和化疗(Antimicrobial Agents and Chemotherapy)》，1999年8月，1982-87)。

尽管DNA pol IIIC抑制剂已经表明革兰氏阳性抗菌活性和体内保护活性，但是缺乏化合物的“可成药”特征(例如肠胃外制剂的适用性或有利的药代动力学)已经阻碍了它们的发展。因此，仍然需要鉴定可有效用于抑制DNApol III C，从而治疗和抑制细菌感染的化合物。

发明内容

本发明涉及DNA pol IIIC抑制剂，其可用于对抗革兰氏阳性微生物，包含诸如耐万古霉素肠球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐青霉素肺炎链球菌和革兰氏阳性厌氧菌艰难梭菌等耐抗生素菌株。

一方面，本发明的特征在于具有下式所示的化合物：

或其药学上可接受的盐，

其中A和B独立地为N、CH或R₁；

其中n为0-3；

其中R₁是(CH₂)m-{(V)_o-(CH2)_p}_q—W；

其中V为CH₂、CH═CH、C≡C、CO、O、S、SO、SO₂、NR₄、CHR₅、OC(O)、(O)CO、CONR₆、NR₇CO、SO₂NH、NHSO₂；C_3-8环烷基，

其中R₄、R₆和R₇各自独立地为H或C_1-6烷基；

其中R₅是OH或C_1-6烷基、CH(R₈R₉)，以及

其中R₈和R₉各自独立地为H、卤素或C1-6烷基；

其中W是H、卤素、取代或未取代的C_1-6烷基、取代或未取代的C_3-8环烷基、取代或未取代的C_2-8杂环基、取代或未取代的C_6-14芳基、取代或未取代的C_1-10杂芳基、NH₂、CN、OR₁₀、SR₁₁、COR₁₂、OCOR₁₃、NR14COR₁₅、NR16R₁₇、NR₁₈(CO)NHR₁₉、CH(CO₂R₂₀)₂、CO₂R₂₁、NHSO₂R₂₂、CONR₂₃R₂₄、CH₂CO₂R₂₅、S(O)R₂₆或S(O₂)R₂₇

其中R₁₀–R₂₇各自独立地为H、取代或未取代的C_1-6烷基、取代或未取代的C_3-8环烷基、取代或未取代的C_2-8杂环基、取代或未取代的C_6-14芳基、取代或未取代的C_1-10杂芳基，

其中m为1至5，o为0至4，p为0至4，且q为0至4；

其中R₂是H、卤素、CN、取代或未取代的C_1-6烷基、CO₂R₂₁、CONR₂₃R₂₄、取代或未取代的C_2-8杂环基或取代或未取代的C_1-10杂芳基，

其中R₃是被一或多个选自以下组成的组的取代基取代的C_6-14芳基或C_1-10杂芳基：F、Cl、Br、I、C_1-6烷基、OH、CN、C_1-6-烷基、CF₃，CHF₂、CF₃CH₂、OCH₃和OCF₃，

其中R₀是H、CH₂OPO(OH)₂、CH₂OCONHCH₂(CH₂)tOPO(OH)₂、

CH₂OCOCH₂(CH₂)tOPO(OH)₂、COO(CH₂)tOPO(OH)₂、CH₂OPO(OH)OPO(OH)₂，或(CR₃₀R₃₁O)_s-X-Y-(CR₃₀R₃₁)_t-OPO(OR₂₈)(OR₂₉)；

其中X是直接键或(C＝O)，Y是直接键或氧

s为0或1

t为1、2或3

R₂₈和R₂₉各自独立地为氢或可水解的酯基，其中当R₂₈为氢时，R₂₉可为-P(O)OR₃₂OR₃₃；

R₃₀和R₃₁各自独立地为氢或C_1-4烷基；

以及

R₃₂和R₃₃各自独立地为氢或可水解的酯基

或其光学异构体、其同位素异构体、其前药或其药学上可接受的盐。

本文描述了上式的具体化合物。本发明涵盖本文所述化合物的所有对映体、外消旋体、互变异构体和非对映体形式及其混合物。

本发明的特征还在于包含式I的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。

另一方面，本发明的特征在于式I化合物的制剂，其适于涂布例如本文所述的医疗装置的表面。在此制剂中，本发明的化合物可以与合适的生物相容性涂布剂混合，或者可以共价地或以其它方式结合(例如，静电地或作为配体)至涂布剂。

另一方面，本发明的特征在于用于抑制细菌生长的方法，其包含使易于细菌生长的区域(例如，介质或表面，诸如医疗装置的介质或表面)与式I的化合物接触的步骤。

本发明的特征还在于用于治疗动物革兰氏阳性细菌感染的方法，其包含使用治疗有效量的式I化合物对动物给药的步骤。

在本发明的各种实施例中，本发明的化合物可用于治疗或预防革兰氏阳性细菌的感染或抑制或预防其生长，革兰氏阳性细菌包含但不限于金黄色葡萄球菌；耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；粪肠球菌；屎肠球菌；耐万古霉素肠球菌；肺炎链球菌；芽孢杆菌属、葡萄球菌属、链球菌属和肠球菌属中的其它微生物；以及产生DNA pol IIIC酶的任何其它革兰氏阳性微生物。

具体实施方式

现在将更具体地描述本发明的特征和其它细节。应当理解，本文描述的特定实施例是以说明的方式示出的，而不是对本发明的限制。在不脱离本发明的范围的情况下，可以在各种实施例中采用本发明的原理特征。

定义

术语“烷基”定义为支链或非支链的饱和无环烃基，优选地具有1至6个碳原子。实例包含甲基；乙基；正丙基；异丙基；正丁基；异丁基；仲丁基；叔丁基；戊烷基；1-甲基丁基；2-甲基丁基；3-甲基丁基；2,2-二甲基丙基；1-乙基丙基；1,1-二甲基丙基；1,2-二甲基丙基；1-甲基戊基；2-甲基戊基；3-甲基戊基；4-甲基-戊基；1,1-二甲基丁基；1,2-二甲基丁基；1,3-二甲基-丁基；2,2-二甲基丁基；2,3-二甲基丁基；3,3-二甲基-丁基；1-乙基丁基；2-乙基丁基；1,1,2-三甲基丙基；1,2,2-三甲基丙基；l-乙基-1-甲基丙基；l-乙基-2-甲基丙基；和己基。如本文所述，烷基可以是未取代的或取代的。

术语“环烷基”定义为在环中仅具有碳原子的单环或双环结构，其中每个环理想地具有三至八个成员。示范性环烷基包含环丙基；环丁基；环戊基；和环己基。如本文所述，环烷基可以是未取代的或取代的。

术语“杂环基”定义为不包含芳环的单环、双环或多环杂环系统。每个环优选地包含2至8个碳原子和1至4个氧、氮和/或硫原子。实例包含吖丙啶基、氮杂环丁烷基、吗啉基、噁唑烷基、噁唑啉基、氧杂环癸基、氧杂环庚基、氧杂环丙基、哌嗪基、哌啶基、吡喃基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢噻吩基和四氢噻喃基。如本文所述，杂环基可以是未取代的或取代的。

术语“芳基”定义为具有一或多个芳环的单环、双环或多环碳环系统。每个环优选地包含6至14个碳原子。实例包含苯基、萘基、1,2-二氢萘基、1,2,3,4-四氢萘基、芴基、茚满基和茚基。如本文所述，芳基可以是未取代的或取代的。

术语“杂芳基”定义为具有一或多个芳环的单环、双环或多环杂环系统。每个环优选地包含1至10个碳原子和1至4个氧、氮和/或硫原子。实例包含苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并三唑基、呋喃基、咪唑基、吲哚基、异苯并呋喃基、异喹啉基、异噁唑基、噁唑基、嘌呤基、吡嗪基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹啉基、四唑基、噻吩基、三嗪基和三唑基。如本文所述，杂芳基可以是未取代的或取代的。

术语“卤素”定义为氟、溴、氯或碘。

术语“烷氧基”定义为-OR，其中R是烷基。

术语“芳氧基”定义为-OR，其中R是芳基。

术语“烷基氨基”定义为-NHR，其中R是烷基。

术语“芳基氨基”定义为-NHR，其中R是芳基。

术语“烷基磺酰基”定义为-SOR₂，其中R是烷基。

术语“芳基磺酰基”定义为-SOR₂，其中R为芳基。

术语“烷硫基”定义为-SR，其中R是烷基。

术语“芳基氨基”定义为-NHR，其中R是芳基。

术语“烷硫基”定义为-SR，其中R是烷基。

术语“芳硫基”定义为-SR，其中R是芳基。

术语“季氨基”定义为-NRR'R"⁺，其中R、R'和R"独立地为烷基、芳基、杂芳基和杂环基。

术语“取代的”定义为基团或基团部分的一或多个氢原子被取代基取代，取代基包含但不限于C_1-6烷氧基、C_6-14芳氧基、巯基(-SH)、C_1-6烷硫基、C_6-14芳硫基、氨基(-NH₂)、C_1-6烷基氨基、C_6-14芳基氨基、二取代的氨基、季氨基、羟基(-OH)、羧基(-COOR)、卤素、氰基(-CN)、叠氮基(-N₃)、氧代、-C(O)-C_1-6烷基、-C(O)-C_3-8环烷基、-C(O)-C_6-14芳基、-C(O)-C_1-10杂芳基、C(O)-C_2-8杂环基、C_1-6烷基磺酰基、(SO₂)O-C_1-6烷基、-(SO₂)O-C_3-8环烷基、-(SO₂)O-C_3-8环烷基、-(SO₂)-C_6-14芳基、-(SO₂)O-C_6-14芳基、-(SO₂)-C_1-10杂芳基、-(SO₂)O-C_1-10杂芳基、-(SO₂)-C_2-8杂环基和-(SO₂)O-C_2-8杂环基。

另外，烷基、芳基、环烷基、杂芳基和杂环基可被C_6-14芳基、C_3-8环烷基、C_1-10杂芳基或C_2-8杂环基取代。环烷基、杂芳基和杂环基也可以被烷基取代。取代基可以如对母体基团所述被例如卤素、三氟甲基、羟基或羧基取代。

本文所用的术语“给药”或“施用”是指给予动物一或多个单位剂量的抗微生物药物组合物的方法(例如局部、口服、静脉内、腹膜内或肌内给药)。给药方法可根据各种因素而变化，例如药物组合物的组分、潜在或实际感染的部位、涉及的微生物和实际微生物感染的严重程度。

“动物”是指易受革兰氏阳性细菌感染的任何动物。这样的动物可包含人、狗、猫、猪、牛、马、山羊、鸡、火鸡、绵羊、大鼠、小鼠和兔，以及为商业目的或作为宠物饲养的其它动物。术语“易受微生物感染的动物”定义为相对于普通人群，感染微生物感染的风险增加的动物。此类动物的实例包括最近接受过外科手术的动物，或免疫受损的人，例如患有AIDS(获得性免疫缺陷综合征)的动物或需要接受免疫抑制药物移植的人。可以使用本领域普通技术人员已知的方法鉴定此类动物。

术语“涂层剂”定义为适于涂覆表面的生物相容性化合物或化合物的混合物。合适的涂层剂是本领域已知的。示范性涂层剂包含但不限于聚合物，例如聚乙二醇、羟丙甲纤维素、羟丙基纤维素、聚四氟乙烯、甲基纤维素、聚乙烯醇或其它生物相容性聚合物。

术语化合物的“有效量”定义为当施用于感染部位或潜在感染部位(例如培养基，如真核细胞培养物或患者)时，将分别实现特定水平的微生物抑制或预防微生物感染形成的量。

术语“抑制”定义为使微生物的细胞生长速率降低至少80％。在某些实施例中，生长可被抑制90％、95％或甚至99％或更多。抑制程度可以例如通过体外生长测定，例如通过标准液体培养技术来确定。在<100μg/ml，更优选地<10μg/ml的最小抑制浓度(MIC)下显示抑制菌落形成的化合物是特别有用的。

术语“培养基”定义为任何物质，液体或固体，其上或其中可能存在微生物或其中需要防止微生物的存在。示范性培养基包含培养基(例如，琼脂或肉汤)、食品、医疗用品(例如，无菌流体)、医疗装置(例如，导管)、工作台面和其它表面。

术语“微生物感染”定义为病原微生物侵入宿主动物。例如，感染可包含通常存在于动物体内或体表的微生物的过度生长或通常不存在于动物体内或体表的微生物的生长。更一般地，微生物感染可以是其中微生物群体的存在损害宿主动物的任何情况。因此，当动物体内或体表存在过量的微生物群体时，或当微生物群体的存在损害动物的细胞或其它组织时，动物“遭受”微生物感染。在一个实施例中，微生物的特定属或种的数量至少是动物中通常发现的数量的2、4、6或8倍。微生物的实例包含但不限于革兰氏阳性细菌或任何其它种类的细菌。

“药学上可接受的盐”是指衍生自药学上可接受的无机和有机酸和碱的盐。合适的酸的实例包含盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、富马酸、马来酸、磷酸、乙醇酸、乳酸、水杨酸、琥珀酸、对甲苯磺酸、酒石酸、乙酸、柠檬酸、甲磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、萘-2-磺酸和苯磺酸。其它酸(如草酸)虽然本身不是药学上可接受的，但可用作获得本发明化合物及其药学上可接受的酸加成盐的中间体。衍生自适当碱的盐包括碱金属(例如，钠或钾)、碱土金属(例如，镁)、铵和NR₄ ⁺(其中R为C_1-4烷基)盐。优选的盐包含盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、甲磺酸盐、马来酸盐、酒石酸盐和富马酸盐。下文提及的本发明化合物包含所示通式的化合物及其药学上可接受的盐。

“预防”微生物生长或感染定义为应用本发明化合物使得不发生微生物生长或感染。预防微生物生长所需的本发明化合物的量可例如通过体外生长测定，例如通过标准液体培养技术来确定。预防微生物感染所需的本发明化合物的量可例如通过体内测定来确定，例如通过测定在用微生物接种后为了预防研究动物(例如豚鼠)中的感染而必须施用的化合物的量来确定。一般而言，在合适浓度(例如<100μg/ml，更优选地<10μg/ml)下显示出预防作用的化合物可用作治疗剂用于进一步检查。

术语“治疗”被定义为以治愈、改善或预防疾病、病理状况或病症为目的而对患者进行的医学管理。该术语包含积极治疗，即特别针对改善疾病、病理状况或病症的治疗，并且还包含病因治疗，即针对消除疾病、病理状况或病症的病因的治疗。另外，该术语包含姑息治疗，即旨在缓解症状而不是治愈疾病、病理状况或病症的治疗；预防性治疗，即旨在预防疾病、病理状况或病症的治疗；和支持性治疗，即用于补充针对改善疾病、病理状况或病症的另一种特定疗法的治疗。术语“治疗”还包括对症治疗，即针对疾病、病理状况或病症的全身症状的治疗。

术语“治疗有效量”定义为当施用于有需要的动物时将减轻细菌感染的至少一些症状的量。

在预防的上下文中，“治疗有效量”是当施用于易受细菌感染的动物时将帮助抑制或以其它方式降低此类感染的可能性的量。

本发明的一或多个实施例的细节在以下所附描述中阐述。本发明的其它特征、目的和优点将从说明书和权利要求书中显而易见。

在一个实施例中，本发明涉及根据式I的化合物。

在一些实施例中，R₁可以是如下所示的H、甲基、其它取代或未取代的烷基、环状和杂环基。

在一些实施例中，R₁还可以是如下所示的取代或未取代的芳基和杂芳基。

在一些实施例中，R₂是H、卤素、CN、取代或未取代的C_1-6烷基、CO₂R₂₁、CONR₂₃R₂₄、取代或未取代的C_2-8杂环基或取代或未取代的C_1-10杂芳基。

在一些实施例中，R₃可以是如下所示的取代或未取代的芳基和杂芳基。

抗菌化合物

优选的化合物包含：

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-3-氟-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

1-烯丙基-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

4-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙酸丁酯、

1-(环丁基甲基)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-苯基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮、

1-环丙基-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

环戊基-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

5-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)戊酸Cethyl酯、

5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(4-吡啶基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮、

3-氯-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-甲氧乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-3-氟-1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

3-氯-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(噁唑-4-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

1-(2-(4-乙酰基哌嗪-1-基)乙基)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-甲氧乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((4-甲基吗啉-2-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(3-甲基吡啶甲酰基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐、

5-((3,4-二氟苄基)氨基)-3-氟-1-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

5-((4-氯-3-甲基苄基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1,3-二甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(4-羟基丁基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮)、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(噻唑-2-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(氧杂环丁烷-3-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((四氢呋喃-3-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(3-羟基丙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(吡嗪-2-基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-异丙基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(5-甲氧基戊基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(吡啶-3-基磺酰基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐、

(E)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(4-甲氧基丁-2-烯-1-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

5-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)戊酸乙酯、

5-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)戊酸异丙酯、

4-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丁酸乙酯、

3-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸甲酯、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(吡啶-2-基甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮二盐酸盐、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(吡啶-3-基甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮二盐酸盐、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(吡啶-4-基甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮二盐酸盐、

5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[1-(噁唑-4-羰基)-4-哌啶基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮、

5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[1-(噻唑-2-羰基)-4-哌啶基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(4-甲氧基吡啶甲酰基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(4-甲基吡啶甲酰基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐、

5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-3-氟-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮、

3-氯-5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮、

5-((3,4-二氟苄基)氨基)-3-氟-1-(噁唑-4-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

3-氯-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-烟酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐、

磷酸(2-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基)乙氧基)甲酯铵盐、

(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-7-氧代-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-6(7H)-基)甲基磷酸二氢酯、

合成方法

给出以下实例是为了说明本发明，而不是为了限制本发明的范围或精神。

本发明的化合物(包含上文和下文具体公开的那些)可如以下方案中所述制备。例如，式I的化合物可如以下方案所述制备，其对于制备其片段和组合是本领域技术人员已知的。

在本文提供的一些方案中，化合物可在括号中示出。相关领域技术人员将认识到，括号中所示的化合物指示在反应中使用或产生的异构体的混合物。

合成方法

方案A

方案A中用于制备化合物的一般程序

1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-羧酸的制备(方案A中的步骤1)

在20℃～25℃下向发烟HNO₃(24.73g，392.50mmol，16.38mL，1.5eq)在H₂SO₄(119.84g，1.22mol，65.13mL，4.67eq)中的溶液中分批添加2-甲基吡唑-3-羧酸(33g，261.67mmol，1eq)。将混合物在30℃～40℃下搅拌1小时，然后在75℃～80℃下搅拌5小时。TLC指示原料被消耗，检测到一个具有较大极性的主要新斑点。将反应混合物缓慢倒入冰水(150mL)中。有一些固体沉淀。过滤后收集固体，用水(50mL)和石油醚(50mL)洗涤固体。减压浓缩固体，然后无需进一步纯化即用于下一步骤。获得呈白色固体状的2-甲基-4-硝基-吡唑-3-羧酸(37g，216.23mmol，产率82.64％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.30(s,1H),3.96(s,3H)。

1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-碳酰氯的制备(方案A中的步骤2)

将2-甲基-4-硝基-吡唑-3-羧酸(35g，204.55mmol，1eq)和DMF(149.51mg，2.05mmol，157.38μL，0.01eq)在SOCl₂(150mL)中的溶液在85℃下搅拌1小时。TLC显示反应完成。冷却反应混合物，减压除去溶剂。粗产物无需进一步纯化即用于下一步骤。获得呈无色油状的2-甲基-4-硝基-吡唑-3-碳酰氯(38g，200.47mmol，产率98.01％)。

1-甲基-4-硝基-1H-吡唑-5-甲酰胺的制备(方案A中的步骤3)

在0℃下向NH₃·H₂O(150mL)中滴加2-甲基-4-硝基-吡唑-3-碳酰氯(38g，200.47mmol，1eq)。将混合物在25℃下搅拌1小时。TLC和LC-MS显示反应完成。形成一些固体。过滤后，收集固体。水溶液用EtOAc(80μΛ x 5)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL x1)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。合并的粗产物无需进一步纯化即用于下一步骤。获得呈浅黄色固体状的2-甲基-4-硝基-吡唑-3-甲酰胺(32g，188.10mmol，产率93.83％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.48(s,1H),8.32(s,1H),8.27(s,1H),3.86(s,3H)。

4-氨基-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺的制备(方案A中的步骤4)

将2-甲基-4-硝基-吡唑-3-甲酰胺(32g，188.10mmol，1eq)和10％Pd/C(3g)在EtOH(600mL)中的混合物在25℃下在H₂(45psi.)下搅拌5小时。TLC指示没有原料残留，检测到一个具有较大极性的主要新斑点。过滤后，减压浓缩滤液。粗产物无需进一步纯化即用于下一步骤。获得呈紫色固体状的4-氨基-2-甲基-吡唑-3-甲酰胺(23g，164.12mmol，产率87.25％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.37(s,2H),7.01(s,1H),4.39(s,2H),3.89(s,3H)。

1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5,7(4H,6H)-二酮的制备(方案A中的步骤5)

在100℃下在1小时内向4-氨基-2-甲基-吡唑-3-甲酰胺(23g，164.12mmol，1eq)在CH₃CN(500mL)中的混合物中分批添加CDI(34.60g，213.35mmol，1.3eq)。然后将混合物在100℃下在N₂下加热12小时。形成灰色固体。LC-MS显示没有原料残留。在LC-MS上显示几个新峰，检测到约80％的所需化合物。在90℃下过滤后，收集固体。粗产物无需进一步纯化即用于下一步骤。获得呈灰色固体状的1-甲基-4H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5,7-二酮(25g，150.48mmol，产率91.69％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.10(s,1H),10.95(s,1H),7.35(s,1H),4.05(s,3H)。

5,7-二氯-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶的制备(方案A中的步骤6)

在50℃下在N₂下向1-甲基-4H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5,7-二酮(26g，156.50mmol，1eq)在POCl₃(239.96g，1.56mol，145.43mL，10eq)中的溶液中滴加DBU(142.95g，938.98mmol，141.53mL，6eq)。将混合物在85℃下搅拌12小时。LC-MS显示没有原料残留。将混合物倒入冰水(1L)中，然后用EtOAc(200mL x 6)萃取。将合并的有机层用饱和NaHCO₃洗涤至pH＝7和盐水(100mL x 1)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶色谱(

80g

硅胶快速柱，洗脱液为150mL/min的0～20％乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化残余物。减压除去洗脱液，得到呈浅黄色油状的5,7-二氯-1-甲基-吡唑并[4,3-d]嘧啶(14g，68.96mmol，产率44.06％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ8.17(s,1H),4.40(s,3H)。

5-氯-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案A中的步骤7)

在0℃下向5,7-二氯-1-甲基-吡唑并[4,3-d]嘧啶(14g，68.96mmol，1eq)在二噁烷(140mL)和H₂O(100mL)中的溶液中滴加NaOH(2.76g，68.96mmol，1eq)在H₂O(20mL)中的溶液。然后将混合物在100℃下搅拌6小时。TLC和LC-MS显示约10％的5,7-二氯-1-甲基-吡唑并[4,3-d]嘧啶残留。减压除去有机溶剂。用MTBE(120mL x 2)萃取水相以回收原料。然后用2NHCl使水溶液pH＝5。形成白色固体。过滤后收集固体并减压浓缩。残余物无需进一步纯化即用于下一步骤。获得呈白色固体状的5-氯-1-甲基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(12.7g，68.80mmol，产率99.78％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ7.85(s,1H),4.30(s,3H)。

方案A中化合物的制备(方案A中的步骤8)

将5-氯-1-甲基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(541.76μmol，1eq)、R₃(CH₂)_nNH₂(1.63mmol，3eq)和碱(无碱或TEA或DIEA)或TFA在溶剂(t-BuOH或i-PrOH或NMP)(6mL/mmol)中的溶液在(100℃～160℃)下加热一段时间(4小时～20小时)。LC-MS和HPLC显示反应完成。将反应混合物用H₂O淬灭并用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物。柱：a)Luna C18 100mm x 30mm 5μm；b)Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；c)Waters Xbridge 150mm x 25mm 5μm；d)纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 5μm；e)Boston Prime C18 150mm x 30mm 5μm；f)Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；g)Waters Xbridge 150mm x 25mm5μm；h)Xtimate C18 150mm x 25mm 5μm；i)Xbridge 150mm x 30mm 10μm。流动相：a)[水(0.1％TFA)-MeCN]，B％：1％-55％，10分钟；b)[水(0.05％HCl)-MeCN]，B％：5％-35％，8分钟c)[水(10mM NH₄HCO₃)-MeCN]，B％：5％-50％，20分钟)；d)[水(0.04％NH₃.H₂O+10mM NH₄HCO₃)-MeCN]，B％：15％-60％，10.5分钟；e)[水(10mM NH₄HCO₃)-MeCN]；B％：1％-25％，10分钟。将水溶液冻干，得到所需产物。

化合物1

5-((4-氯-3-氟苄基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案A中的步骤8)

将5-氯-1-甲基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.1g，541.76μmol，1eq)和(4-氯-3-氟-苯基)甲胺(259.38mg，1.63mmol，198.39μL，3eq)在t-BuOH(3mL)中的溶液在100℃下加热16小时。LC-MS和HPLC显示5-氯-1-甲基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮被完全消耗，检测到一个具有所需质量的主峰。将反应混合物在25℃下用H₂O(5mL)淬灭，然后用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150mm x 25mm 5μm；流动相：[水(10mM NH₄HCO₃)-MeCN]；B％：25％-45％，20分钟)纯化残余物。将水溶液冻干，得到呈浅黄色固体状的5-[(4-氯-3-氟-苯基)甲基氨基]-1-甲基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(71.8mg，233.34μmol，产率43.07％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.60～7.50(m,2H),7.38(d,J＝10.4Hz,1H),7.21(d,J＝8.0Hz,1H),4.53(d,J＝4.4Hz,2H),4.07(s,3H)。HPLC：99.03％(220nm)，99.12％(215nm)，96.82％(254nm)。MS(ESI)：C₁₃H₁₁ClFN₅O质量计算值为307.06m/z，实测值为308.0[M+H]⁺。

化合物2

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈灰白色固体状的所需化合物(0.8g，2.45mmol，产率64.54％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.09(s,1H),7.57～7.55(m,2H),7.50(s,1H),7.31(t,J＝2.0Hz,1H),6.67(s,1H),4.44(d,J＝6.0Hz,2H),4.04(s,3H)。HPLC：99.17％(220nm)，98.91％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₃H₁₁C_l2N₅O质量计算值为323.03m/z，实测值为324.0[M+H]⁺。

化合物3

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-(苄基氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮)。

该程序产生呈灰白色固体状的所需化合物(70.8mg，271.41μmol，产率41.75％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.57(s,1H),7.35～7.25(m,5H),6.93(s,1H),4.50(d,J＝5.2Hz,2H),4.07(s,3H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₃H₁₃N₅O质量计算值为255.11m/z，实测值为256.1[M+H]⁺。

化合物4

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备1-甲基-5-((吡啶-2-基甲基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮)。

该程序产生呈黄色固体状的所需化合物(90.4mg，352.76μmol，54.26％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.67(d,J＝5.2Hz,1H),8.12(t,J＝7.6Hz,1H),7.66(d,J＝8.0Hz,1H),7.58(t,J＝6.4Hz,1H),7.52(s,1H),7.07(s,1H),4.71(d,J＝3.6Hz,2H),4.07(s,3H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₂H₁₂N₆O质量计算值为256.11m/z，实测值为257.2[M+H]⁺。

化合物5

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备1-甲基-5-(3-吡啶基甲基氨基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮)。

该程序产生呈黄色固体状的所需化合物(149.1mg，581.82μmol，产率89.50％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.81(s,1H),8.72(d,J＝4.4Hz,1H),8.34(d,J＝8.0Hz,1H),7.87(dd,J＝7.6Hz,5.2Hz,1H),7.52(s,1H),6.98～6.97(m,1H),4.63(d,J＝5.6Hz,2H),4.06(s,3H)。HPLC：97.28％(220nm)，96.72％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₂H₁₂N₆O质量计算值为256.11m/z，实测值为257.1[M+H]⁺。

化合物6

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备1-甲基-5-((吡啶-4-基甲基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮)。

该程序产生呈黄色固体状的所需化合物(89.9mg，350.81μmol，53.96％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.80(d,J＝4.8Hz,2H),7.91(d,J＝5.6Hz,2H),7.46(s,1H),7.11(s,1H),4.75(d,J＝3.6Hz,2H),4.06(s,3H)。HPLC：96.79％(220nm)，96.31％(215nm)，98.37％(254nm)。MS(ESI)：C₁₂H₁₂N₆O质量计算值为256.11m/z，实测值为257.1[M+H]⁺。

化合物7

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-((3,4-二氟苄基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮)。

该程序产生呈浅黄色固体状的所需化合物(0.1288g，442.22μmol，81.63％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.54(s,1H),7.42～7.35(m,2H),7.18(d,J＝3.6Hz,1H),6.67(s,1H),4.60(d,J＝5.6Hz,2H),4.06(s,3H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₃H₁₁F₂N₅O质量计算值为291.09m/z，实测值为292.1[M+H]⁺。

化合物8

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-((3,4-二氯苯乙基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮)。

该程序产生呈黄色固体状的所需化合物(0.119g，351.87μmol，98.20％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.58～7.53(m,3H),7.26(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),6.40(s,1H),4.06(s,3H),3.50(s,2H),2.85(t,J＝6.8Hz,2H)。HPLC：98.20％(220nm)，97.79％(215nm)，98.10％(254nm)。MS(ESI)：C₁₄H₁₃Cl₂N₅O质量计算值337.05m/z，实测值为338.1[M+H]⁺。

化合物9

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-((3,4-二氯苯基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮)。

该程序产生呈浅黄色固体状的所需化合物(46.3mg，149.29μmol，产率27.56％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.06(s,1H),8.86(s,1H),8.10(d,J＝2.4Hz,1H),7.76(s,1H),7.58～7.53(m,1H),7.51～7.47(m,1H),4.12(s,3H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₂H₉Cl₂N₅O质量计算值为309.02m/z，实测值为310.0[M+H]⁺。

化合物10

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备1-甲基-5-(苯基氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈浅黄色固体状的所需化合物(100mg，391.73μmol，产率60.26％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.52(s,1H),7.70(s,1H),7.62(d,J＝7.6Hz,2H),7.33(t,J＝8.0Hz,2H),7.01(t,J＝7.6Hz,1H),4.11(s,3H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，99.20％(254nm)。MS(ESI)：C₁₂H₁₁N₅O质量计算值为241.10m/z，实测值为242.1[M+H]⁺。

化合物11

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备1-甲基-5-((嘧啶-2-基甲基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈浅棕色固体状的所需化合物(31mg，120.50μmol，产率22.24％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.81(d,J＝4.8Hz,2H),7.55(s,1H),7.43(t,J＝4.8Hz,1H),6.88(s,1H),4.69(d,J＝4.4Hz,2H),4.07(s,3H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₁H₁₁N₇O质量计算值为257.10m/z，实测值为258.1[M+H]⁺。

化合物12

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备1-甲基-5-((吡嗪-2-基甲基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(30.6mg，118.95μmol，产率21.96％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.66(s,1H),8.60～8.59(m,1H),8.53(s,1H),7.52(d,J＝1.2Hz,1H),6.81(t,J＝5.2Hz,1H),4.64(d,J＝5.2Hz,1H),4.06(s,3H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₁H₁₁N₇O质量计算值为257.10m/z，实测值为258.1[M+H]⁺。

化合物13

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-(((1H-吲唑-5-基)甲基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(56.6mg，191.13μmol，产率35.28％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ13.01(s,1H),10.78(s,1H),8.03(s,1H),7.69(s,1H),7.55(s,1H),7.50(d,J＝8.4Hz,1H),7.35(dd,J＝1.2Hz,8.4Hz,1H),6.42(s,1H),4.55(d,J＝5.2Hz,2H),4.07(s,3H)。HPLC：99.72％(220nm)，99.71％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₄H₁₃N₇O质量计算值为295.12m/z，实测值为296.1[M+H]⁺。

化合物14

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-(((1H-吲哚-5-基)甲基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈橙色固体状的所需化合物(38.4mg，130.47μmol，产率24.08％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.08(s,1H)7.61(s,1H),7.52(s,1H),7.37(d,J＝8.4Hz,1H),7.33(t,J＝2.8Hz,1H),7.09(dd,J＝1.6Hz,8.4Hz,1H),7.04～6.81(m,1H),6.40(d,J＝2.0Hz,1H),4.54(d,J＝4.8Hz,2H),4.08(s,3H)。HPLC：96.92％(220nm)，96.82％(215nm)，99.08％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₄N₆O质量计算值为294.12m/z，实测值为295.1[M+H]⁺。

化合物15

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备1-甲基-5-((噻唑-4-基甲基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(66.9mg，255.06μmol，产率58.85％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ9.09(d,J＝2.0Hz,1H),7.55(s,1H),7.51(d,J＝0.8Hz,1H),6.49(s,1H),4.59(d,J＝5.2Hz,1H),4.06(s,3H)。.HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₀H₁₀N₆OS质量计算值为262.06m/z，实测值为263.0[M+H]⁺。

化合物16

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-(((1H-吡唑-3-基)甲基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(118.8mg，484.42μmol，产率89.42％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.67(d,J＝1.6Hz,1H),7.62(s,1H),7.13(s,1H),6.24(d,J＝1.6Hz,1H),4.49(s,2H),4.08(s,3H)。HPLC：98.38％(220nm)，97.78％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₄H₁₈N₁₀O质量计算值为245.10m/z，实测值为246.1[M+H]⁺。

化合物17

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-(((2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(55.9mg，227.03μmol，产率41.91％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.78(s,1H),7.60(s,1H),6.75(s,1H),4.55(d,J＝4.4Hz,2H),4.07(s,3H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₉H₁₀N₈O质量计算值为246.10m/z，实测值为247.1[M+H]⁺。

化合物18

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-((苯并[d]噻唑-2-基甲基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(73.3mg，234.67μmol，产率43.32％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.02(d,J＝7.6Hz,1H),7.94(d,J＝8.0Hz,1H),7.55(s,1H),7.49(t,J＝8.4Hz,1H),7.40(t,J＝8.0Hz,1H),7.03(s,1H),4.90(d,J＝5.6Hz,2H),4.08(s,3H)。HPLC：96.43％(220nm)，96.13％(215nm)，97.34％(254nm)。MS(ESI)：C₁₄H₁₂N₆OS质量计算值为312.08m/z，实测值为313.1[M+H]⁺。

化合物19

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-(((1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(44.5mg，149.58μmol，产率22.01％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ9.41(s,1H),7.80(d,J＝8.8Hz,1H),7.75(s,1H),7.55(d,J＝8.4Hz,1H),7.52(d,J＝3.2Hz,1H),6.70(m,1H),4.65(t,J＝6.0Hz,2H),4.06(s,3H)。HPLC：99.26％(220nm)，98.34％(215nm)，98.34％(254nm)。MS(ESI)：C₁₄H₁₃N₇O质量计算值为295.12m/z，实测值为296.2[M+H]⁺。

化合物20

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备1-甲基-5-((噻唑-5-基甲基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈浅黄色固体状的所需化合物(19.7mg，75.11μmol，产率13.86％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.17(s,1H),8.93(s,1H),7.82(s,1H),7.59(s,1H),6.65(t,J＝4.8Hz,1H),4.67(d,J＝5.6Hz,2H),4.07(s,3H)。HPLC：96.83％(220nm)，96.38％(215nm)，96.83％(254nm)。MS(ESI)：C₁₀H₁₀N₆OS质量计算值为262.06m/z，实测值为263.0[M+H]⁺。

化合物21

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备1-甲基-5-((噁唑-5-基甲基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(39.5mg，160.42μmol，产率29.61％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.30(s,1H),7.59(s,1H),7.06(s,1H),6.70(s,1H),4.55(d,J＝5.2Hz,2H),4.07(s,3H)。HPLC：96.01％(220nm)，95.85％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₀H₁₀N₆O₂质量计算值为246.09m/z，实测值为247.1[M+H]⁺。

化合物22

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-(((1H-咪唑-2-基)甲基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(26.4mg，107.27μmol，产率19.80％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.57(s,1H),6.94(s,2H),6.51(s,1H),4.44(d,J＝5.2Hz,2H),4.06(s,3H)。HPLC：99.65％(220nm)，98.40％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₀H₁₁N₇O质量计算值为245.10m/z，实测值为246.1[M+H]⁺。

化合物23

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备1-甲基-5-((哒嗪-3-基甲基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈浅棕色固体状的所需化合物(4.9mg，19.05μmol，产率3.52％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ9.15(dd,J＝2.8Hz,4.0Hz,1H),7.69～7.64(m,2H),7.54(s,1H),7.05～6.96(m,1H),4.78(d,J＝5.2Hz,2H),4.07(s,3H)。HPLC：99.18％(220nm)，98.00％(215nm)，98.57％(254nm)。MS(ESI)：C₁₁H₁₁N₇O质量计算值为257.10m/z，实测值为258.1[M+H]⁺。

化合物24

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-((3-氯-4-氟苄基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(139mg，451.72μmol，产率83.38％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.55～7.54(m,2H),7.37～7.35(m,2H),6.87(s,1H),4.47(d,J＝5.2Hz,2H),4.07(s,3H)。HPLC：98.59％(220nm)，97.69％(215nm)，99.20％(254nm)。MS(ESI)：C₁₃H₁₁ClFN₅O质量计算值为307.06m/z，实测值为308.0[M+H]⁺。

化合物25

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-((4-氯苄基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈灰白色固体状的所需化合物(23.1mg，79.73μmol，产率14.72％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.84(s,1H),7.62(s,1H),7.46～7.35(m,4H),4.57(d,J＝3.6Hz,2H),4.09(s,3H)。HPLC：99.48％(220nm)，99.72％(215nm)，98.92％(254nm)。MS(ESI)：C₁₃H₁₂ClN₅O质量计算值为289.07m/z，实测值为290.1[M+H]⁺。

化合物26

根据本文对于方案A中的步骤8所述的程序制备5-((3-氯苄基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(157.9mg，391.09μmol，产率72.19％，TFA)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.57(s,1H),7.40(s,1H),7.36(d,J＝7.5Hz,1H),7.33～7.28(m,2H),7.04(s,1H),4.51(d,J＝5.4Hz,2H),4.07(s,3H)。HPLC：97.49％(220nm)，97.20％(215nm)，98.84％(254nm)。MS(ESI)：C₁₃H₁₂ClN₅O质量计算值为289.07m/z，实测值为290.1[M+H]⁺。

化合物27

根据本文对于方案A中的步骤8所述的程序制备5-((2-氯苄基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(93.2mg，313.84μmol，产率57.93％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.55(s,1H),7.47～7.45(m,1H),7.41～7.38(m,1H),7.34～7.29(m,2H),6.68～6.67(m,1H),5.55(d,J＝5.6Hz,2H),4.07(s,3H)。HPLC：97.56％(220nm)，97.45％(215nm)，98.61％(254nm)。MS(ESI)：C₁₃H₁₂ClN₅O质量计算值为289.07m/z，实测值为290.1[M+H]⁺。

化合物28

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-((2,4-二氯苄基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈灰白色固体状的所需化合物(92.6mg，276.14μmol，产率50.97％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.62(d,J＝1.8Hz,1H),7.53(s,1H),7.42～7.35(m,2H),6.63(s,1H),4.51(d,J＝6.0Hz,2H),4.06(s,3H)。HPLC：96.67％(220nm)，96.29％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₃H₁₁Cl₂N₅O质量计算值为323.03m/z，实测值为324.0[M+H]⁺。

化合物29

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-((2,3-二氯苄基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(55mg，169.67μmol，产率31.32％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.14(s,1H),7.56～7.53(m,2H),7.33(d,J＝5.2Hz,2H),6.64(s,1H),5.56(d,J＝6.0Hz,2H),4.06(s,3H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₃H₁₁Cl₂N₅O质量计算值为323.03m/z，实测值为324.0[M+H]⁺。

化合物30

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-((2,6-二氯苄基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(26.5mg，81.75μmol，产率15.09％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.55(s,1H),7.61(s,1H),7.54～7.52(m,2H),7.40～7.38(m,1H),6.24(s,1H),4.68(d,J＝4.0Hz,2H),4.06(s,3H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₃H₁₁Cl₂N₅O质量计算值为323.03m/z，实测值为324.0[M+H]⁺。

化合物31

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-((3-氯-4-甲基苄基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(106.2mg，349.63μmol，产率64.54％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.56(s,1H),7.38(s,1H),7.31(d,J＝7.6Hz,1H),7.20(d,J＝8.0Hz,1H),6.82(s,1H),4.46(d,J＝5.2Hz,2H),4.08(s,3H),2.30(s,3H)。HPLC：97.09％(220nm)，96.49％(215nm)，98.94％(254nm)。MS(ESI)：C₁₄H₁₄ClN₅O质量计算值为303.09m/z，实测值为304.0[M+H]⁺。

化合物32

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-((3,4-二甲氧基苄基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(91.3mg，289.54μmol，产率59.38％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.57(s,1H),6.98(s,1H),6.93～6.83(m,2H),6.74(s,1H),4.39(d,J＝5.2Hz,2H),4.07(s,3H),3.73(d,J＝5.2Hz,6H)。HPLC：99.37％(220nm)，99.36％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₇N₅O₃质量计算值为315.13m/z，实测值为316.1[M+H]⁺。

化合物33

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-((3,4-二甲基苄基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(117mg，412.95μmol，产率84.69％。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.56(s,1H),7.09(d,J＝5.6Hz,2H),7.05(d,J＝5.6Hz,1H),6.59(s,1H),4.39(d,J＝4.8Hz,2H),4.07(s,3H),2.19(d,J＝4.8Hz,6H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₇N₅O质量计算值为283.14m/z，实测值为284.1[M+H]⁺。

化合物34

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-((4-氯-3-甲氧基苄基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(92.1mg，288.04μmol，产率59.08％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.55(s,1H),7.36(d,J＝8.0Hz,1H),7.15(d,J＝1.6Hz,1H),6.91(dd,J＝8.0Hz,J＝1.6Hz,1H),6.56(s,1H),4.46(d,J＝8.0Hz,2H),4.07(s,3H),3.83(s,3H)。HPLC：100.00％(220nm)，98.52％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₄H₁₄ClN₅O₂质量计算值为319.08m/z，实测值为320.1[M+H]⁺。

化合物35

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-((4-氯-3-甲基苄基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈浅白色固体状的所需化合物(102.3mg，336.79μmol，产率69.07％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.56(s,1H),7.37(d,J＝8.0Hz,1H),7.31(s,1H),7.18(d,J＝8.0Hz,1H),6.97(s,1H),4.46(d,J＝4.0Hz,2H),4.07(s,3H),2.31(s,3H)。HPLC：99.90％(220nm)，99.86％(215nm)，98.42％(254nm)。MS(ESI)：C₁₄H₁₄ClN₅O质量计算值为303.09m/z，实测值为304.1[M+H]⁺。

化合物36

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-(((4,5-二氯吡啶-2-基)甲基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮-2,2,2-三氟乙酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(35.8mg，110.10μmol，产率33.87％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.20(s,1H),8.73(s,1H),7.69(s,1H),7.53(s,1H),6.73(s,1H),4.58(d,J＝5.6Hz,2H),4.07(s,3H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，96.16％(254nm)。MS(ESI)：C₁₂H₁₀Cl₂N₆O质量计算值为324.03m/z，实测值为325.0[M+H]⁺。

化合物37

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-(((4,5-二氯-1H-咪唑-2-基)甲基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(23.2mg，73.85μmol，产率16.41％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.57(s,1H),6.55(s,1H),4.42(d,J＝5.6Hz,2H),4.07(s,3H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₀H₉Cl₂N₇O质量计算值为313.02m/z，实测值为314.0[M+H]⁺。

化合物38

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-(((4-氯-5-乙基-1H-咪唑-2-基)甲基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(8.4mg，27.01μmol，产率9.97％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.59(s,1H),7.19(s,1H),4.61(d,J＝2.4Hz,2H),4.09(s,3H),2.56(q,J＝7.6Hz,2H),1.15(t,J＝7.6Hz,3H)。HPLC:98.96％(220nm)，98.49％(215nm)，99.11％(254nm)。MS(ESI)：C₁₂H₁₅Cl₂N₇O质量计算值为307.09m/z，实测值为308.1[M+H]⁺。

化合物39

根据本文针对方案A中的步骤8所述的程序制备5-((1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈黄色固体状的所需化合物(26.8mg，92.37μmol，产率42.63％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.54(s,1H),7.70(s,1H),7.68(s,1H),7.43(d,J＝8.0Hz,1H),7.24(d,J＝8.4Hz,1H),5.00(s,2H),4.96(s,2H),4.11(s,3H)。HPLC：97.64％(220nm)，96.24％(215nm)，98.52％(254nm)。MS(ESI)：C₁₄H₁₃N₅O₂质量计算值为283.11m/z，实测值为284.1[M+H]⁺。

方案B-1

化合物40

根据本文针对方案B-1中的步骤1-2所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-羧酸甲酯。

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-3-碘代-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案B-1中的步骤1)

将HBF₄(677.22mg，7.71mmol，480.30μL，2.5eq)添加到5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-甲基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(1g，3.08mmol，1eq)和NIS(694.03mg，3.08mmol，1eq)在MeCN(8mL)中的混合物中。将混合物在100℃下搅拌4小时。LC-MS显示反应完成。形成一些黄色固体。过滤后，用H₂O(8mL)和EtOAc(8mL)洗涤后收集固体。获得呈黄色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-3-碘代-1-甲基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(730mg，1.62mmol，产率52.58％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.21(s,1H),7.70(d,J＝1.6Hz,1H),7.58(d,J＝8.0Hz,1H),7.39(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),6.70(t,J＝6.0Hz,1H),4.46(d,J＝9.6Hz,2H),4.07(s,3H)。

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-羧酸甲酯的制备(方案B-1中的步骤2)

在N₂气氛下，向5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-3-碘代-1-甲基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(300mg，666.58mol，1eq)和TEA(269.80mg，2.67mmol，371.12μL，4eq)在MeOH(10mL)和DMF(3mL)中的溶液中添加Pd(dppf)Cl₂(97.55mg，133.32μmol，0.2eq)。将悬浮液脱气并用CO吹扫3次。将混合物在80℃下在CO(50psi.)下搅拌5小时。LC-MS显示反应完成。过滤后，减压浓缩滤液。通过快速硅胶色谱(

4g

二氧化硅快速柱，洗脱液为65mL/min的0～100％乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化残余物。减压除去洗脱液。50mg所获得的粗产物通过制备型HPLC(柱：纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 8μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：45％-70％，10分钟)进一步纯化。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-甲基-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-羧酸甲酯(9.8mg，25.54μmol，产率3.83％，纯度99.62％)以用于递送。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.32(s,1H),7.72(s,1H),7.58(d,J＝8.4Hz,1H),7.42(d,J＝8.4Hz,1H),6.88(s,1H),4.47(d,J＝5.6Hz,2H),4.13(s,3H),3.83(s,3H)。HPLC：99.62％(220nm)，99.52％(215nm)，99.35％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₃C_l2N₅O₃质量计算值为381.04m/z，实测值为382.1[M+H]⁺。

方案B-1中化合物的制备(方案B-1中的步骤3)

将5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-甲基-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-羧酸甲酯(784.93μmol，1eq)、LiOH.H₂O(2.35mmol，3eq)在MeOH(2mL)和H₂O(2mL)(或在MeNH₂(2M在EtOH中，15.7mmol，7.85mL，20eq))中的混合物在25℃下搅拌一段时间(1小时-12小时)。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC纯化残余物。柱：纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 8μm。流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：35％-65％，10分钟)。在冷冻干燥下除去溶剂，得到所需产物。

化合物41

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-羧酸的制备(方案B-1中的步骤3)

该程序产生呈浅棕色固体状的所需化合物(14.1mg，37.32μmol，产率4.75％，纯度97.44％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.25(s,1H),10.64(s,1H),7.73(s,1H),7.59～7.55(m,1H),7.47～7.32(m,1H),6.77(s,1H),4.55～4.47(m,2H),4.12(s,3H)。HPLC：97.44％(220nm)，97.47％(215nm)，98.21％(254nm)。MS(ESI)：C₁₄H₁₁Cl₂N₅O₃质量计算值为367.02m/z，实测值为368.0[M+H]⁺。

化合物42

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-N,1-二甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-甲酰胺的制备(方案B-1中的步骤3)

将5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-甲基-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-羧酸甲酯(50mg，130.82μmol，1eq)在MeNH₂(2M在EtOH中，1.31mL，20eq)中的混合物在25℃下搅拌12小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 8μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：35％-55％，10分钟)纯化残余物。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈棕色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-N,1-二甲基-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-甲酰胺(5.8mg，15.02μmol，产率11.48％，纯度98.71％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.42(s,1H),7.94(d,J＝4.8Hz,1H),7.66(s,1H),7.60(d,J＝8.4Hz,1H),7.37(d,J＝7.2Hz,1H),7.03(t,J＝5.6Hz,1H),4.50(d,J＝5.6Hz,2H),4.09(s,3H),2.82(d,J＝4.8Hz,3H)。HPLC：98.71％(220nm)，98.32％(215nm)，96.98％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₄Cl₂N₆O₂质量计算值为380.06m/z，实测值为381.1[M+H]⁺。

化合物43

根据本文针对方案B-1中的步骤3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-N,N,1-三甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-甲酰胺。

该程序产生呈棕色固体状的所需化合物(3.3mg，7.80μmol，产率5.96％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.24(s,1H),7.59～7.57(m,2H),7.33(d,J＝8.0Hz,1H),6.73(s,1H),4.44～4.45(m,2H),4.09(s,3H),2.96(s,3H),2.82(s,3H)。HPLC：93.37％(220nm)，90.08％(215nm)，92.84％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₆Cl₂N₆O₂质量计算值为394.07m/z，实测值为395.1[M+H]⁺。

方案B-2

化合物44

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1,3-二甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案B-2中的步骤1)

将5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-3-碘代-1-甲基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.2g，444.38μmol，1eq)、2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三硼烷(334.71mg，1.33mmol，372.73μL，50％在THF中，3eq)、Pd(dppf)Cl₂(48.77mg，66.66μmol，0.15eq)和K₂CO₃(184.26mg，1.33mmol，3eq)在二噁烷(10mL)中的混合物在120℃下在N₂下搅拌10小时。LC-MS显示反应完成。过滤后，减压浓缩滤液。通过制备型HPLC(柱：Luna C18 100mm x30mm5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：35％-50％，10分钟)纯化残余物，得到呈灰白色固体状的5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1,3-二甲基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(22.4mg，66.23μmol，产率14.90％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.98(s,1H),7.64(s,1H),7.58(d,J＝8.4Hz,1H),7.36(d,J＝7.6Hz,1H),6.56(s,1H),4.46(d,J＝4.8Hz,2H),3.98(s,3H),2.20(s,3H)。HPLC：97.11％(220nm)，95.73％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₄H₁₃Cl₂N₅O质量计算值为337.05m/z，实测值为338.2[M+H]⁺。

方案B-3

化合物45

5-((3,4二氯苄基)氨基)-1-甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-甲腈的制备(方案B-3中的步骤1)

将3-溴-5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-甲基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(50mg，124.05μmol，1eq)和CuCN(12.22mg，136.46μmol，29.81μL，1.1eq)在DMSO(1mL)中的混合物在160℃下搅拌4小时。LC-MS显示反应完成。过滤反应混合物以除去不溶物。首先通过制备型HPLC(柱：Welch Xtimate C18 100mm x 25mm 3μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：30％-60％，12分钟)纯化滤液，然后通过制备型HPLC(柱：Welch Xtimate C18150mm x 25mm 5μm；流动相：[水(10mM NH₄HCO₃)-MeCN]；B％：40％-65％，10.5分钟)进行第二次纯化。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-甲基-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-甲腈(5.3mg，14.75μmol，产率11.89％，纯度97.20％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.63～7.59(m,2H),7.35(d,J＝8.0Hz,1H),7.00(s,1H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),4.14(s,3H)。HPLC：97.20％(220nm)，96.95％(215nm)，95.24％(254nm)。MS(ESI)：C₁₄H₁₀Cl₂N₆O质量计算值为348.03m/z，实测值为349.0[M+H]⁺。

方案B-4

化合物46

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-3-(2,5-二氢呋喃-2-基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案B-4中的步骤1)

将5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-3-碘代-1-甲基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.3g，666.58μmol，1eq)、2,3-二氢呋喃(233.60mg，3.33mmol，252.00μL，5eq)、AcOK(163.54mg，1.67mmol，2.5eq)、Pd(OAc)₂(29.93mg，133.32μmol，0.2eq)和PPh₃(17.48mg，66.66μmol，0.1eq)在DMF(1mL)中的混合物脱气并用N₂吹扫3次，然后将混合物在N₂气氛下在100℃下搅拌12小时。LCMS和HPLC显示反应完成。将反应混合物冷却至室温并在0℃下用H₂O(5mL)淬灭。用EtOAc(8mL x 3)萃取混合物。将合并的有机层用盐水(5mL x 1)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得0.45g(粗产物)浅黄色固体状的5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-3-(2,5-二氢呋喃-2-基)-1-甲基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.6g，粗产物)。0.15g的粗产物通过制备型HPLC(柱：Xtimate C18 100mm x 30mm 3μm；流动相：[水(0.04％HCl)-MeCN]；B％：40％-55％，10分钟)纯化。在30℃下减压除去MeCN。将水相经冻干干燥以得到呈浅黄色固体状的5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-3-(2,5-二氢呋喃-2-基)-1-甲基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(24.9mg，62.01μmol，产率9.30％，纯度97.685％)以用于递送。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.63～7.58(m,2H),7.35(d,J＝7.6Hz,1H),6.97(s,1H),6.08(d,J＝4.4Hz,1H),5.88(dd,J＝18.0Hz,2.0Hz,2H),4.70～4.67(m,1H),4.57(s,1H),4.46(s,2H),4.02(s,3H)。HPLC：97.69％(220nm)，97.64％(215nm)，98.97％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₅Cl₂N₅O₂质量计算值为391.06m/z，实测值为392.1[M+H]⁺。

化合物47

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-甲基-3-(四氢呋喃-2-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案B-4中的步骤2)

向5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-3-(2,5-二氢呋喃-2-基)-1-甲基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.3g，229.45μmol，1eq)在EtOH(50mL)和THF(50mL)中的溶液中添加Rh(PPh₃)₃Cl(21.23mg，22.95μmol，0.1eq)。将悬浮液脱气并用H₂吹扫3次。将混合物在30℃下在H₂(20psi.)下搅拌16小时。LCMS和HPLC显示反应完成。过滤后，减压浓缩滤液。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 100mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：35％-55％，12分钟)纯化残余物。在30℃下减压除去MeCN。将残余物经冻干干燥。获得呈黄色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-甲基-3-四氢呋喃-2-基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(20.7mg，49.82μmol，产率21.71％，纯度94.90％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.61～7.57(m,2H),7.33(d,J＝8.0Hz,1H),6.92～6.81(m,1H),4.93(t,J＝6.8Hz,1H),4.46(s,2H),4.01(s,3H),3.82～3.79(m,1H),3.72～3.69(m,1H),2.23～2.20(m,1H),2.07～2.05(m,2H),2.03～1.87(m,1H)。HPLC：94.90％(220nm)，94.45％(215nm)，98.07％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₇Cl₂N₅O₂质量计算值为393.08m/z，实测值为394.0[M+H]⁺。

方案B-5

化合物48

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-3-(2-羟基乙基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

(E)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-3-(2-乙氧基乙烯基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案B-5中的步骤1)

将5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-3-碘代-1-甲基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.5g，1.11mmol，1eq)、2-[(E)-2-乙氧基乙烯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(880.18mg，4.44mmol，4eq)、K₂CO₃(460.62mg，3.33mmol，3eq)和Pd(dppf)Cl₂(121.94mg，166.64μmol，0.15eq)在二噁烷(12mL)和H₂O(3mL)中的混合物在100℃下在N₂下搅拌10小时。LCMS和HPLC显示反应完成。减压除去溶剂。通过快速硅胶色谱(

12g

二氧化硅快速柱，洗脱液为50mL/min的0～100％乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化残余物。减压除去洗脱液。获得呈灰白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-3-[(E)-2-乙氧基乙烯基]-1-甲基-6H-吡唑并-[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.34g，862.39μmol，产率77.63％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.09(s,1H),7.62～7.56(m,3H),7.34(dd,J＝2.0Hz,5.2Hz,1H),6.62(t,J＝5.6Hz,1H),5.77(d,J＝12.8Hz,1H),5.25(d,J＝11.2Hz,1H),4.46(d,J＝5.6Hz,2H),3.91(s,3H),3.82(t,J＝6.8Hz,2H),1.21(t,J＝6.8Hz,3H)。

化合物49

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-3-(2-乙氧基乙基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案B-5中的步骤2)

将5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-3-[(E)-2-乙氧基乙烯基]-1-甲基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.15g，380.46μmol，1eq)和Rh(PPh₃)₃Cl(35.20mg，38.05μmol，0.1eq)在EtOH(50mL)和THF(20mL)中的混合物在30℃下在H₂(20psi.)下搅拌5小时。HPLC和LCMS指示反应完成。过滤后，减压浓缩滤液。通过制备型HPLC(柱：纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：35％-55％，10分钟)纯化残余物。冻干除去洗脱液。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-3-(2-乙氧基乙基)-1-甲基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(71.7mg，180.94μmol，产率47.56％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.08(s,1H),7.62(d,J＝2.4Hz,1H),7.57(d,J＝8.0Hz,1H),7.34(dd,J＝2.0Hz,8.0Hz,1H),6.62(s,1H),4.44(d,J＝5.2Hz,2H),3.99(s,3H),3.82(t,J＝2.8Hz,2H),3.35(q,J＝6.8Hz,2H),2.84(t,J＝7.6Hz,2H),1.03(t,J＝6.8Hz,3H)。HPLC：99.64％(220nm)，99.62％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₉Cl₂N₅O₂质量计算值为395.09m/z，实测值为396.1[M+H]⁺。

2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-甲基-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)乙醛的制备(方案B-5中的步骤3)

在0℃下向5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-3-[(E)-2-乙氧基乙烯基]-1-甲基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.15g，380.46μmol，1eq)在DCM(10mL)中的混合物中滴加TFA(1mL)。然后将混合物在20℃下搅拌5小时。LCMS显示反应完成。将混合物倒入水(10mL)中并分离有机层。水相用DCM(20mL x 5)萃取。将合并的有机层用饱和NaHCO₃洗涤至pH＝7，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。残余物无需进一步纯化即用于下一步骤获得呈黄色固体状的化合物2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-甲基-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基]乙醛(0.1g，273.07μmol，产率71.77％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.08(s,1H),9.67(s,1H),7.62～7.55(m,2H),7.34(dd,J＝2.0Hz,8.0Hz,1H),6.59(s,1H),4.42(d,J＝5.6Hz,2H),4.05(s,3H),3.75(d,J＝2.0Hz,2H)。

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-3-(2-羟基乙基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案B-5中的步骤4)

在0℃下向2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-甲基-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基]乙醛(0.1g，273.07μmol，1eq)在MeOH(5mL)中的溶液中分批添加NaBH₄(30.99mg，819.22μmol，3eq)。然后将混合物在20℃下搅拌1小时。LCMS显示反应完成。将混合物用冰水(5mL)缓慢淬灭并用EtOAc(10mL x 4)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL x 2)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：纳-微Kromasil C18 100mm x30mm 5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：20％-40％，10分钟)纯化残余物。冻干除去洗脱液。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-3-(2-羟基乙基)-1-甲基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(83.8mg，227.58μmol，产率83.34％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.64(d,J＝2.0Hz,1H),7.59(d,J＝8.4Hz,1H),7.37(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),6.63(s,1H),4.46(d,J＝5.6Hz,2H),4.00(s,3H),3.67(t,J＝7.2Hz,2H),2.80(t,J＝7.2Hz,2H)。.HPLC：100.00％(220nm)，99.85％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₅Cl₂N₅O₂质量计算值为367.06m/z，实测值为368.1[M+H]⁺。

方案B-6

化合物50

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-3-(噁唑-2-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-3-碘代-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案B-6中的步骤1)

向5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.1g，251.10μmol，1eq)和NIS(73.44mg，326.43μmol，1.3eq)在MeCN(2mL)中的溶液中滴加HBF₄(55.12mg，627.76μmol，39.10μL，2.5eq)。将混合物在100℃下搅拌10小时。TLC显示反应完成。向反应混合物中添加H₂O(5mL)。用EtOAc(10mL x 3)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水(5mL x 2)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈棕色固体状的化合物5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-3-碘代-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(0.12g，228.95μmol，产率91.18％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.70(s,1H),7.60～7.57(m,2H),7.40(dd,J＝8.0Hz,J＝2.0Hz,1H),6.72(t,J＝5.6Hz,1H),4.56(d,J＝5.2Hz,2H),4.46(d,J＝5.2Hz,2H),3.78(t,J＝6.0Hz,2H),3.40～3.38(m,4H)。

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-3-(噁唑-2-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案B-6中的步骤2)

将5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-3-碘代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(55mg，104.93μmol，1eq)、三丁基(噁唑-2-基)锡烷(375.77mg，1.05mmol，10eq)和Pd(dppf)Cl₂(15.36mg，20.99μmol，0.2eq)在二噁烷(2mL)中的混合物脱气并用N₂吹扫3次，然后将混合物在N₂气氛下在100℃下搅拌12小时。LCMS和HPLC显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 100mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.04％HCl)-MeCN]；B％：20％-50％，10分钟)纯化残余物。在30℃下减压除去MeCN。将残余物经冻干干燥。获得呈浅黄色固体状的化合物5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-3-(噁唑-2-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(14.0mg，28.83μmol，产率27.48％，纯度95.832％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.22(s,1H),7.81(s,1H),7.58～7.57(m,1H),7.47～7.41(m,2H),7.07(s,1H),4.66(s,2H),4.50(s,2H),3.85(s,2H),3.59(s,2H),3.45(s,2H)。HPLC：95.83％(220nm)，95.77％(215nm)，98.53％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₁₈Cl₂N₆O₄质量计算值为464.08m/z，实测值为465.0[M+H]⁺。

方案B-7

化合物51

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-甲腈的制备

化合物52

3-溴-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案B-7中的步骤1)

向5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(230mg，577.54μmol，1eq)和NBS(113.07mg，635.29μmol，1.1eq)在MeCN(3mL)中的混合物中添加HBF4(126.79mg，1.44mmol，89.92μL，2.5eq)。将混合物在100℃下搅拌半小时。TLC显示反应完成。将反应混合物用H₂O(5mL)淬灭并用EtOAc(8mL x 3)萃取。将合并的有机层用饱和NaHCO₃(10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶色谱(

4g

二氧化硅快速柱，洗脱液为30mL/min的0～100％乙酸乙酯/甲醇)纯化残余物。减压除去洗脱液。获得呈白色固体状的化合物3-溴-5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(190mg，粗产物)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.27(s,1H),7.66(d,J＝1.6Hz,1H),7.59(d,J＝8.4Hz,1H),7.37(dd,J＝8.4Hz,1.6Hz,1H),6.76(t,J＝5.6Hz,1H),4.57～4.52(m,3H),4.47(d,J＝5.6Hz,2H),3.78(t,J＝5.6Hz,2H),3.41～3.37(m,4H)。HPLC：99.39％(220nm)，99.22％(215nm)，99.59％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₆BrCl₂N₅O₃质量计算值为474.98m/z，实测值为476.0[M+H]⁺。

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-甲腈的制备(方案B-7中的步骤2)

将3-溴-5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(40mg，83.83μmol，1eq)、Zn(CN)₂(29.53mg，251.50μmol，3eq)、dppf(7.44mg，13.41μmol，0.16eq)和Pd₂(dba)₃(6.14mg，6.71μmol，0.08eq)在DMA(0.5mL)中的混合物脱气并用N₂吹扫3次，然后将混合物在N₂气氛下在170℃下搅拌40分钟。LC-MS显示反应完成。过滤后，通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Gemini-NX 150 30mm x 5μm；流动相：[水(10mM NH₄HCO₃)-MeCN]；B％：20％-50％，8分钟)纯化滤液。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-甲腈(27.7mg，64.67μmol，产率19.28％，纯度98.81％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.63(d,J＝1.6Hz,1H),7.59(d,J＝8.4Hz,1H),7.35(dd,J＝8.4Hz,1.6Hz,1H),7.05(t,J＝5.6Hz,1H),4.66(t,J＝5.2Hz,2H),4.51(d,J＝6.0Hz,3H),3.84(t,J＝5.2Hz,2H),3.39(s,4H)。HPLC：98.81％(220nm)，98.60％(215nm)，98.43％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₆Cl₂N₆O₃质量计算值为422.07m/z，实测值为423.0[M+H]⁺。

方案B-8

化合物53

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-3-氟-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

5-氯-3-氟-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案B-8中的步骤1)

将5-氯-1-甲基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.5g，2.71mmol，1eq)和Select F(2.88g，8.13mmol，3eq)在MeCN(15mL)中的混合物在100℃下搅拌40小时。LCMS和HPLC显示约20％的5-氯-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮残留和约40％的所需峰。减压除去溶剂。将残余物溶解于水(20mL)中并在20℃下搅拌15分钟。过滤后，收集固体。残余物无需进一步纯化即用于下一步骤。获得呈黄色固体状的化合物5-氯-3-氟-1-甲基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.4g，1.97mmol，产率72.90％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ4.13(s,3H)。

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-3-氟-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案B-8中的步骤2)

将5-氯-3-氟-1-甲基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.1g，493.65μmol，1eq)和(3,4-二氯苯基)甲胺(173.81mg，987.30μmol，131.67μL，2eq)在t-BuOH(3mL)中的混合物在N₂下在100℃下搅拌10小时。LCMS和HPLC显示反应完成。减压除去溶剂。通过制备型HPLC(柱：Luna C8 100mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：35％-60％，10分钟)纯化残余物。冻干除去洗脱液。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-3-氟-1-甲基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(15.6mg，45.59μmol，产率9.24％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.28(s,1H),7.60～7.58(m,2H),7.32(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),6.68(t,J＝5.6Hz,1H),4.46(d,J＝5.6Hz,2H),3.95(s,3H)。HPLC：95.42％(220nm)，94.90％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₃H₁₀Cl₂FN₅O质量计算值为341.02m/z，实测值为342.0[M+H]⁺。

方案B-9

化合物54和化合物55

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-3-氟-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮和3-氯-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

5-氯-3-氟-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮和3,5-二氯-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案B-9中的步骤1)

在0℃下向5-氯-3-氟-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(100mg，493.65μmol，1eq)和3,5-二氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(493.65μmol，1eq)在MeCN(1mL)中的混合物中添加NaI(295.97mg，1.97mmol，4eq)和TMSCl(214.52mg，1.97mmol，250.61μL，4eq)。然后将混合物在25℃下搅拌5小时。TLC指示反应完成。将反应混合物用H₂O(1mL)淬灭并减压浓缩。水相用EtOAc(1mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(1mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈棕色固体状的化合物5-氯-3-氟-1,6-二氢吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(100mg，粗产物)和3,5-二氯-1,6-二氢吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的混合物。MS(ESI)：C₅H₂ClFN₄O质量计算值为187.99m/z，实测值为189.0[M+H]+；C₅H₂Cl₂N₄O质量计算值为203.96m/z，实测值为205.0[M+H]⁺。

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-3-氟-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮和3-氯-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案B-9中的步骤2)

向5-氯-3-氟-1,3a,6,7a-四氢吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(130mg，682.19μmol，1eq)和3,5-二氯-1,3a,6,7a-四氢吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(682.19μmol，1eq)在t-BuOH(4mL)中的混合物中添加(3,4-二氯苯基)甲胺(240.19mg，1.36mmol，181.96μL，2eq)。将混合物在100℃下搅拌12小时。HPLC显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：Welch Xtimate C18 100mm x 25mm 3μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：30％-50％，12分钟)纯化残余物。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-3-氟-1,6-二氢吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(化合物54)(6.6mg，18.94μmol，产率2.78％，纯度94.16％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ13.19(s,1H),11.19(s,1H),7.60～7.58(m,2H),7.34(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),6.68(t,J＝5.6Hz,1H),4.47(d,J＝6.0Hz,2H)。HPLC：94.16％(220nm)，90.65％(215nm)，90.27％(254nm)。MS(ESI)：C₁₂H₈Cl₂FN₅O质量计算值为327.01m/z，实测值为328.0[M+H]⁺。获得呈灰白色固体状的3-氯-5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1,6-二氢吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(化合物55)(8.2mg，23.34μmol，产率4.45％，纯度98.1％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ13.85(s,1H),11.17(s,1H),7.64(d,J＝1.6Hz,1H),7.60(d,J＝8.0Hz,1H),7.36(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),6.73(t,J＝5.6Hz,1H),4.49(d,J＝6.4Hz,2H)。HPLC：98.10％(220nm)，98.04％(215nm)，99.41％(254nm)。MS(ESI)：C₁₂H₈Cl₃N₅O质量计算值为342.98m/z，实测值为344.0[M+H]⁺。

方案C-1

方案C-1中用于制备化合物的一般程序

1-烯丙基-4-硝基-吡唑的制备(方案C-1中的步骤1)

在25℃下在N₂下向4-硝基-1H-吡唑(200g，1.77mol，1eq)在DMF(1L)中的溶液中添加3-溴丙-1-烯(235.29g，1.94mol，1.1eq)和K₂CO₃(488.74g，3.54mol，2eq)。然后将混合物在80℃下搅拌1小时。TLC显示反应完成。将反应混合物在0℃下用冰水(500mL)淬灭，然后用MTBE(500mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(300mL x 6)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈棕色油状的1-烯丙基-4-硝基-吡唑(270g，1.76mol，产率99.71％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ8.16(s,1H),8.09(s,1H),6.07～6.00(m,1H),5.44～5.34(m,2H),4.78(d,J＝6.0Hz,2H)。

2-烯丙基-4-硝基-吡唑-3-羧酸的制备(方案C-1中的步骤2)

在-78℃下在N₂下向1-烯丙基-4-硝基-吡唑(50g，326.50mmol，1eq)在THF(500mL)中的溶液中滴加LiHMDS(1M，489.75mL，1.5eq)。之后，将混合物在-78℃下搅拌1小时。然后向上述混合物中通入干燥CO₂半小时。TLC显示约30％的起始材料残留并且形成具有较大极性的新斑点。将反应混合物(5批)在0℃下用水(2.5L)淬灭，然后用饱和Na₂CO₃调节至pH＝8～9。用MTBE(1L x 3)萃取混合物以回收1-烯丙基-4-硝基-吡唑。然后用2N HCl将水层调节至pH＝1，然后用EtOAc(2L x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(1L)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈棕色油状的2-烯丙基-4-硝基-吡唑-3-羧酸(200g，1.01mol，产率62.14％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.34(s,1H),6.02～5.94(m,1H),5.25(dd,J＝10.4Hz,1.2Hz,1H),5.10(dd,J＝17.2Hz,1.2Hz,1H),4.90(d,J＝5.6Hz,2H)。

2-烯丙基-4-硝基-吡唑-3-甲酰胺的制备(方案C-1中的步骤3)

将2-烯丙基-4-硝基-吡唑-3-甲酸(65g，329.70mmol，1eq)在SOCl₂(200mL)和DMF(5mL)中的溶液在80℃下搅拌2小时。TLC显示反应完成。将反应混合物减压浓缩，得到呈棕色油状的1-烯丙基-5-(氯代甲基)-4-硝基-吡唑(80g，粗产物)。在0℃下将2-烯丙基-4-硝基-吡唑-3-碳酰氯(80g，371.07mmol，1eq)在DCM(50mL)中的溶液滴加到NH₃.H₂O(200mL)中，然后将混合物在25℃下搅拌1小时。TLC显示反应完成。形成一些固体。过滤后，收集固体，用EtOAc(200mL x 3)萃取滤液。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶色谱(

330g

硅胶快速柱，洗脱液为200mL/min的0～50％乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化合并的残余物，得到呈浅黄色固体状的2-烯丙基-4-硝基-吡唑-3-甲酰胺(22g，112.15mmol，产率30.22％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.48(s,1H),8.31(s,1H),8.29(s,1H),6.0～5.92(m,1H),5.24(dd,J＝10.4Hz,0.8Hz,1H),5.13(dd,J＝17.2Hz,1.0Hz,1H),4.81(br d,J＝5.6Hz,2H)。

2-烯丙基-4-氨基-吡唑-3-甲酰胺的制备(方案C-1中的步骤4)

在25℃下向2-烯丙基-4-硝基-吡唑-3-甲酰胺(22g，112.15mmol，1eq)在MeOH(150mL)和H₂O(50mL)中的溶液中添加NH4Cl(12.00g，224.30mmol，2eq)和Fe(18.79g，336.45mmol，3eq)。将混合物在85℃下搅拌2小时。TLC显示2-烯丙基-4-硝基-吡唑-3-甲酰胺被完全消耗，检测到一个具有较大极性的主要新斑点。过滤反应混合物并用MeOH(100mL)洗涤滤饼。将合并的滤液减压浓缩。将残留物用水(50mL)稀释并用DCM和i-PrOH(v:v＝3:1，100mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈棕色油状的2-烯丙基-4-氨基-吡唑-3-甲酰胺(17.5g，105.31mmol，产率93.90％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.37(s,2H),7.08(s,1H),5.93～5.84(m,1H),5.04(dd,J＝10.4Hz,1.6Hz,1H),4.96(d,J＝5.2Hz,2H),4.88(dd,J＝17.2,1.6Hz,1H),4.35(s,2H)。

1-烯丙基-4H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5,7-二酮的制备(方案C-1中的步骤5)

在N₂下在100℃下经1小时向2-烯丙基-4-氨基-吡唑-3-甲酰胺(17.5g，105.31mmol，1eq)于MeCN(250mL)中的溶液中分批添加CDI(22.20g，136.90mmol，1.3eq)。然后将混合物在100℃下加热12小时。LC-MS显示反应完成。在100℃下过滤反应混合物并用MeCN(100mL x 3)洗涤滤饼，得到呈灰白色固体状的1-烯丙基-4H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5,7-二酮(15.2g，79.09mmol，产率75.11％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.14(s,1H),11.00(s,1H),7.40(s,1H),6.03～5.94(m,1H),5.14(d,J＝7.2Hz,1H),5.03～4.97(m,3H)。

1-烯丙基-5,7-二氯-吡唑并[4,3-d]嘧啶的制备(方案C-1中的步骤6)

在50℃下在N₂下向1-烯丙基-4H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5,7-二酮(15g，78.05mmol，1eq)在POCl₃(119.68g，780.54mmol，72.53mL，10eq)中的溶液中逐滴添加DBU(71.30g，468.32mmol，70.59mL，6eq)。然后将混合物在85℃下搅拌12小时。TLC显示1-烯丙基-4H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5,7-二酮被完全消耗，检测到一个具有较低极性的新斑点。将反应混合物冷却至室温并在0℃下缓慢倒入冰水(200mL)中，然后用EtOAc(200mL x3)萃取。将合并的有机层用饱和Na₂CO₃洗涤至pH＝7～8，然后用盐水(100mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈棕色油状的1-烯丙基-5,7-二氯-吡唑并[4,3-d]嘧啶(17g，74.21mmol，产率95.08％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.56(s,1H),6.12～6.05(m,1H),5.35-5.30(dd,J＝4.8,1.6Hz,2H),5.21(dd,J＝10.8Hz,0.8Hz,1H),4.94(dd,J＝17.2Hz,1.2Hz,1H)。

1-烯丙基-5-氯-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案C-1中的步骤7)

在25℃下向1-烯丙基-5,7-二氯-吡唑并[4,3-d]嘧啶(6.8g，29.69mmol，1eq)在二噁烷(60mL)中的溶液中添加NaOH(1M，29.69mL，1eq)。将混合物在100℃下搅拌10小时。TLC和LC-MS显示反应完成。减压除去有机溶剂。用2N HCl使水溶液pH＝5。形成一些固体。过滤后收集固体，然后减压浓缩。残余物无需进一步纯化即用于下一步骤。获得呈浅黄色固体状的化合物1-烯丙基-5-氯-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(5.5g，26.11mmol，产率87.97％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ13.32(s,1H),8.00(s,1H),6.07～5.99(m,1H),5.18～5.13(m,3H),4.99(d,J＝17.2Hz,1H)。

化合物56

1-烯丙基-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案C-1中的步骤8)

将1-烯丙基-5-氯-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(4g，18.99mmol，1eq)和(3,4-二氯苯基)甲胺(10.03g，56.97mmol，7.60mL，3eq)在t-BuOH(60mL)中的溶液在100℃下加热10小时。LC-MS显示反应完成。减压除去溶剂。将残余物溶解于EtOAc(200mL)中并用0.005NHCl(50mL x 10)洗涤。有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。用EtOAc(30mL)对残余物进行研磨。过滤后，收集固体。获得呈白色固体状的化合物1-烯丙基-5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(3g，8.49mmol，产率44.70％，纯度99.09％)，并递送59.6mg。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.08(s,1H),9.58～7.56(m,3H),7.31(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),6.56(t,J＝5.6Hz,1H),6.01～5.97(m,1H),5.11(d,J＝10.4Hz,1H),5.03(d,J＝5.6Hz,2H),4.96(d,J＝15.6Hz,1H),4.46(d,J＝6.0Hz,2H)。HPLC：99.08％(220nm)，99.08％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₃Cl₂N₅O质量计算值为349.05m/z，实测值为350.0[M+H]⁺。

2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙醛的制备(方案C-1中的步骤9)

将1-烯丙基-5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(1g，2.86mmol，1eq)和K₂OsO₄.2H₂O(105.21mg，285.55μmol，0.1eq)在THF(20mL)和H₂O(20mL)中的混合物在25℃下搅拌半小时。然后添加NaIO₄(1.83g，8.57mmol，3eq)并将混合物在25℃下搅拌1.5小时。TLC显示反应完成。过滤后，用EtOAc(30mL x 3)萃取滤液。将合并的有机层用饱和Na₂SO₃(10mL)、盐水(10mL x 1)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。残余物无需进一步纯化即用于下一步骤。获得呈灰白色固体状的化合物2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙醛(0.8g，2.27mmol，产率79.55％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.15(s,1H),9.65(s,1H),7.65(s,1H),7.59～7.57(m,2H),7.32(d,J＝8.0Hz,1H),6.60(t,J＝6.0Hz,1H),5.36(s,2H),4.48(d,J＝6.0Hz,2H)。

方案C-1中化合物的制备(方案C-1中的步骤10)

在0℃下向2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙醛(4.26mmol，1eq)和R'NHR"(5.11～85.2mmol，1.2～20eq)在MeOH或DCM(4mL/mmol)中的溶液中分批添加NaBH₃CN(5.11～12.78mmol，1.2～3eq)。然后将混合物在0℃～80℃下搅拌一段时间(2小时～10小时)。LCMS和HPLC显示反应完成。将反应混合物在0℃用H₂O淬灭，然后用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物。柱：a)Luna C18 100mm x 30mm 5μm；b)Phenomenex Luna C18 150mmx 30mm 5μm；c)纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 5μm；d)Boston Prime C18 150mm x30mm 5μm；e)Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm5μm；f)Xbridge 150mm x 30mm 10μm。流动相：a)[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：15％-55％，10分钟；b)[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：1％-55％，8分钟或10分钟或12分钟；c)[水(0.04％NH₃.H₂O+10mM NH₄HCO₃)-MeCN]；B％：40％-60％，10.5分钟。减压除去MeCN。经冻干干燥水相。

化合物57

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备(方案C-1中的步骤10)

在0℃下向2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙醛(1.5g，4.26mmol，1eq)和吗啉(1.11g，12.78mmol，1.12mL，3eq)在MeOH(15mL)中的混合物中分批添加NaBH₃CN(401.49mg，6.39mmol，1.5eq)，然后将混合物在25℃下搅拌2小时。LC-MS显示反应完成。将混合物在0℃用冰水(10mL)淬灭并减压除去有机溶剂。水相用EtOAc(20mL x 5)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(HCl条件柱：Phenomenex luna C18 250mm x 50mm 10μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：5％-35％，20分钟)纯化滤液。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(2-吗啉代乙基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(460mg，1.08mmol，产率25.36％，纯度99.38％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.75(s,1H),7.70(s,1H),7.62～7.59(m,2H),7.52(s,1H),7.35(dd,J＝8.0Hz,1.6Hz,1H),4.86(t,J＝6.0Hz,2H),4.54(d,J＝5.2Hz,2H),3.97～3.93(m,2H),3.74～3.68(m,2H),3.65～3.60(m,2H),3.48～3.45(m,2H),3.13～3.10(m,2H)。HPLC：99.38％(220nm)，99.42％(215nm)，98.29％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₂₁Cl₃N₆O₂质量计算值为422.10m/z，实测值为423.1[M+H]⁺。

化合物58

根据本文针对方案C-1中的步骤10所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈灰白色固体状的所需化合物(58.7mg，134.53μmol，产率31.59％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.36～10.84(m,1H),9.38～9.32(m,1H),7.60～7.58(m,3H),7.3(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),6.71～6.68(m,1H),4.56(t,J＝6.0Hz,2H),4.47(d,J＝5.6Hz,2H),3.36～3.30(m,2H),3.07～3.04(m,2H),2.95～2.84(m,4H),2.74(s,3H),2.38～2.27(m,2H)。HPLC：99.58％(220nm)，99.44％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₂₃Cl₂N₇O质量计算值为435.13m/z，实测值为436.2[M+H]⁺。

化合物59

根据本文针对方案C-1中的步骤10所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(1,1-二氧代硫代吗啉代)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(22.3mg，47.31μmol，产率11.11％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.62(s,1H),7.5～7.54(m,2H),7.31(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),4.64(t,J＝6.0Hz,2H),4.46(s,2H),3.29～3.27(m,6H),3.21～3.18(m,4H)。HPLC：99.85％(220nm)，94.04％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₂₀Cl₂N₆O₃S质量计算值为470.07m/z，实测值为471.1[M+H]⁺。

化合物60

根据本文针对方案C-1中的步骤10所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(4-甲基-3-氧代哌嗪-1-基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈灰白色固体状的所需化合物(69.1mg，153.45μmol，产率36.03％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.25(s,1H),7.65(s,1H),7.61～7.55(m,2H),7.33(dd,J＝8.4Hz,1.6Hz,1H),6.81(s,1H),4.72(s,2H),4.48(d,J＝6.0Hz,2H),3.58(s,2H),3.37(s,4H),3.25(s,2H),2.82(s,3H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₂₁Cl₂N₇O₂质量计算值为449.11m/z，实测值为450.2[M+H]⁺。

化合物61

根据本文针对方案C-1中的步骤10所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(甲基氨基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈灰白色固体状的所需化合物(30.5mg，83.05μmol，产率19.50％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.25(s,1H),8.45(s,2H),7.64(s,1H),7.57～7.54(m,2H),7.28(dd,J＝6.0Hz,2.0Hz,1H),6.79～6.76(m,1H),4.68(t,J＝5.6Hz,2H),4.45(d,J＝6.0Hz,2H),3.39～3.36(m,2H),2.56(s,3H)。HPLC：98.94％(220nm)，98.62％(215nm)，97.58％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₆Cl₂N₆O质量计算值为366.08m/z，实测值为367.1[M+H]⁺。

化合物62

根据本文针对方案C-1中的步骤10所述的程序制备1-[2-(叔丁基氨基)乙基]-5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(20.3mg，48.83μmol，产率24.46％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.59～7.57(m,2H),7.54(s,1H),7.32(dd,J＝1.2Hz,8.4Hz,1H),6.58(s,1H),4.47(d,J＝6.0Hz,2H),4.42(t,J＝6.8Hz,2H),2.86(t,J＝6.8Hz,2H),0.96(s,9H)。HPLC：98.11％(220nm)，98.18％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₂₂Cl₂N₆O质量计算值为408.12m/z，实测值为409.1[M+H]⁺。

化合物63

根据本文针对方案C-1中的步骤10所述的程序制备1-(2-氨基乙基)-5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(34.9mg，98.81μmol，产率34.80％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.30(s,1H),7.89(s,3H),7.66(s,1H),7.58(m,2H),7.32(q,J＝2.0Hz,1H),6.84(t,J＝5.2Hz,1H),4.65(t,J＝6.0Hz,2H),4.46(s,2H),3.27(t,J＝6.0Hz,2H)。HPLC：99.19％(220nm)，98.71％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₄H₁₄Cl₂N₆O质量计算值为352.06m/z，实测值为353.1[M+H]⁺。

化合物64

根据本文针对方案C-1中的步骤10所述的程序制备1-(2-(4-乙酰基哌嗪-1-基)乙基)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(0.293g，585.05μmol，产率20.60％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.01(s,1H),7.87(s,1H),7.73(s,1H),7.64～7.61(m,2H),7.37(m,1H),4.90～4.87(m,2H),4.59(d,J＝4.4Hz,2H),4.40～4.37(m,1H),4.01～3.98(m,1H),3.62(s,2H),3.50～3.43(m,3H),3.07～2.98(m,3H),2.02(s,3H)。HPLC：99.87％(220nm)，99.77％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₀H₂₄Cl₃N₇O₂质量计算值为463.13m/z，实测值为464.1[M+H]⁺。

化合物65

根据本文针对方案C-1中的步骤10所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(4-羟基哌啶-1-基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(25.4mg，51.62μmol，产率18.18％，HCl)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.03(s,1H),7.68～7.60(m,3H),7.34～7.33(m,2H),4.84(s,2H),4.50(d,J＝10.4Hz,2H),4.01(s,1H),3.94～3.90(m,1H),3.33(s,1H),3.17(s,1H),2.98(s,1H),1.98～1.87(m,3H),1.73～1.60(m,2H),1.17(s,1H)。HPLC：95.87％(220nm)，95.31％(215nm)，99.13％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₂₃Cl₃N₆O₂质量计算值为436.12m/z，实测值为437.1[M+H]⁺。

化合物66

根据本文针对方案C-1中的步骤10所述的程序制备1-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙基)哌啶-4-甲酰胺盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(24.9mg，51.41μmol，产率18.10％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ9.48(s,1H),7.71～7.67(m,1H),7.63～7.57(m,2H),7.41(s,1H),7.34(d,J＝8.4Hz,1H),7.01(s,1H),6.93(s,1H),4.84(t,J＝6.0Hz,2H),4.50(d,J＝5.6Hz,2H),3.58(s,4H),3.03～2.88(m,2H),2.39(s,1H),1.92(d,J＝13.4Hz,2H),1.82～1.66(m,2H)。HPLC：95.87％(220nm)，95.70％(215nm)，94.38％(254nm)。MS(ESI)：C₂₀H₂₄Cl₃N₇O₂质量计算值为463.13m/z，实测值为464.2[M+H]⁺。

化合物67

根据本文针对方案C-1中的步骤10所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮二盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(42.0mg，76.61μmol，产率26.98％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.05(s,1H),10.42～10.30(m,1H),7.69(s,1H),7.63～7.50(m,2H),7.34(d,J＝8.0Hz,1H),4.90～4.82(m,2H),4.51(d,J＝5.2Hz,2H),3.80～3.70(m,4H),3.32(s,1H),2.99(s,2H),2.71(d,J＝4.8Hz,6H),2.27(d,J＝14.0Hz,2H),1.99(d,J＝12.4Hz,2H)。HPLC：98.01％(220nm)，97.80％(215nm)，97.50％(254nm)。MS(ESI)：C₂₁H₂₉Cl₄N₇O质量计算值为463.17m/z，实测值为464.2[M+H]⁺。

化合物68

根据本文针对方案C-1中的步骤10所述的程序制备1-(2-((1S,4S)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基)乙基)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(26.3mg，55.26μmol，产率19.46％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.21～10.52(m,1H),7.70(s,1H),7.61(d,J＝8.4Hz,2H),7.36(d,J＝8.4Hz,1H),4.86～4.74(m,2H),4.66～4.52(m,4H),4.13(d,J＝10.4Hz,1H),3.78～3.66(m,2H),3.54～3.47(m,2H),3.13～2.96(m,1H),2.28～1.95(m,2H)。HPLC：99.12％(220nm)，98.61％(215nm)，99.33％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₂₁Cl₃N₆O₂质量计算值为434.10m/z，实测值为435.0[M+H]⁺。

化合物69

根据本文针对方案C-1中的步骤10所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(5-甲基-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮二盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(26.9mg，57.25μmol，产率28.80％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.66(s,1H),7.58(s,2H),7.32(d,J＝8.4Hz,1H),6.99(s,1H),4.77(s,2H),4.49(d,J＝5.6Hz,2H),4.33(s,1H),3.93(s,2H),3.34～3.32(m,4H),3.17(s,1H),2.82(s,3H),2.46(s,2H)。HPLC：95.42％(220nm)，94.46％(215nm)，93.04％(254nm)。MS(ESI)：C₂₀H₂₅Cl₄N₇O质量计算值为447.13m/z，实测值为448.1[M+H]⁺。

化合物70

根据本文针对方案C-1中的步骤10所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(33.8mg，71.91μmol，产率25.32％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.33～10.04(m,1H),7.70(d,J＝2.8Hz,1H),7.61(d,J＝8.4Hz,2H),7.36(dd,J＝8.4Hz,1.6Hz,1H),4.68～4.65(m,2H),4.56～4.50(m,2H),4.41～4.34(m,1H),4.26～4.22(m,1H),4.13～4.07(m,1H),3.78～3.76(m,2H),3.68～3.64(m,2H)。HPLC：94.83％(220nm)，94.29％(215nm)，95.83％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₉Cl₃N₆O₄质量计算值为408.09m/z，实测值为409.1[M+H]⁺。

化合物71

根据本文针对方案C-1中的步骤10所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮二盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(28.3mg，52.38μmol，产率18.45％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.67(s,1H),7.61(d,J＝2.4Hz,1H),7.59(d,J＝8.4Hz,1H),7.34(dd,J＝2.4Hz,8.6Hz,1H),4.79(t,J＝6.0Hz,2H),4.54(d,J＝5.2Hz,2H),3.75～3.73(m,10H),3.21(s,2H),2.50(d,J＝1.6Hz,2H)。HPLC：99.82％(220nm)，99.75％(215nm)，99.72％(254nm)。MS(ESI)：C₂₀H₂₇Cl₄N₇O₂质量计算值为465.14m/z，实测值为466.1[M+H]⁺。

化合物72

根据本文针对方案C-1中的步骤10所述的程序制备4-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙基)-N,N-二甲基吗啉-2-甲酰胺盐酸盐。

该程序产生呈浅黄色固体状的所需化合物(26mg，48.14μmol，产率16.95％，纯度98.662％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.03(s,1H),7.68(s,1H),7.59(s,2H),7.33(d,J＝8.0Hz,1H),7.24(s,1H),4.88(s,2H),4.69～4.56(m,1H),4.51(s,2H),4.13～4.02(m,1H),3.96～3.85(m,1H),3.68(s,4H),3.23～3.09(m,2H),3.00(s,3H),2.90～2.82(m,3H)。HPLC：98.66％(220nm)，98.61％(215nm)，99.05％(254nm)。MS(ESI)：C₂₁H₂₆Cl₃N₇O₃质量计算值为493.14m/z，实测值为494.1[M+H]⁺。

化合物73

根据本文针对方案C-1中的步骤10所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-((二甲基氨基)甲基)吗啉代)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮二盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(33.7mg，66.33μmol，产率23.36％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.37(s,2H),7.68(s,1H),7.60(s,2H),7.34(d,J＝8.8Hz,2H),4.87(s,2H),4.52(s,2H),4.30(s,2H),4.07～4.05(m,2H),3.90～3.88(m,1H),3.40～3.24(m,2H),3.20～3.16(m,4H),3.79(s,6H)。HPLC：94.95％(220nm)，93.86％(215nm)，99.71％(254nm)。MS(ESI)：C₂₁H₂₉Cl₄N₇O₂质量计算值为479.16m/z，实测值为480.2[M+H]⁺。

化合物74

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(哌嗪-1-基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

4-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的制备(方案C-1中的步骤10)

将2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙醛(0.18g，511.11μmol，1eq)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(114.23mg，613.33μmol，1.2eq)和AcOH(3.07mg，51.11μmol，2.92μL，0.1eq)在MeOH(4mL)中的混合物在25℃下搅拌2小时。然后在0℃下分批添加NaBH₃CN(38.54mg，613.33μmol，1.2eq)并将混合物在25℃下搅拌2小时。LC-MS显示反应完成。将混合物用冰水(5mL)淬灭并减压除去有机溶剂。水相用EtOAc(10mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL x 1)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。残余物无需进一步纯化即用于下一步骤。获得呈浅棕色固体状的化合物4-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.2g，382.83μmol，产率74.90％)。MS(ESI)：C₂₃H₂₉Cl₂N₇O₃质量计算值为521.17m/z，实测值为522.2[M+H]⁺。

向4-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.2g，382.83μmol，1eq)在EtOAc(5mL)中的混合物中添加HCl/EtOAc(4M，2.87mL，30eq)并将混合物在25℃下搅拌2小时。LC-MS和HPLC显示反应完成形成一些固体。过滤后，收集固体。通过制备型HPLC(柱：Luna C18 100mm x 30mm5u；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：20％-35％，10分钟)纯化固体。获得呈灰白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(2-哌嗪-1-基乙基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(60.2mg，142.55μmol，产率37.24％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.22～11.05(m,1H),8.57～8.54(m,2H),7.60～7.58(m,3H),7.32(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),6.72(t,J＝6.0Hz,1H),4.56(t,J＝6.0Hz,2H),4.47(d,J＝6.0Hz,2H),3.08～3.02(m,4H),2.71～2.69(m,2H),2.68～2.63(m,4H)。HPLC：100.00％(220nm)，99.04％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₂₁Cl₂N₇O质量计算值为421.12m/z，实测值为422.1[M+H]⁺。

化合物75

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2,3-二羟基丙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

向1-烯丙基-5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.1g，285.55μmol，1eq,)(方案C-1中的步骤8)在THF(0.5mL)和H₂O(0.5mL)中的溶液中添加K₂OsO_4.2H₂O(10.52mg，28.55μmol，0.1eq)。半小时后，添加NMO(100.35mg，856.65μmol，90.41μL，3eq)。将混合物在25℃下搅拌3小时。LC-MS和HPLC显示反应完成。减压除去有机溶剂。水相用EtOAc(8mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL x 2)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：Luna C18 100mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：25％-40％，10分钟)纯化残余物，得到呈黄色固体状的5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2,3-二羟基丙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(48.5mg，126.23μmol，产率44.21％，纯度100％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.05～11.03(m,1H),7.62～7.54(m,3H),7.32(dd,J＝1.6Hz,8.0Hz,1H),6.67～6.62(m,1H),4.48(d,J＝5.6Hz,2H),4.42(t,J＝6.0Hz,2H),3.93～3.90(m,1H),3.34～3.31(m,2H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，96.43％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₅Cl₂N₅O₃质量计算值为383.06m/z，实测值为384.1[M+H]⁺。

化合物76

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-羟乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

在0℃下向2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙醛(0.15g，425.92μmol，1eq)(方案C-1中的步骤9)在MeOH(3mL)中的混合物中分批添加NaBH₄(24.17mg，638.89μmol，1.5eq)。然后将混合物在25℃下搅拌1小时。LC-MS显示反应完成。混合物用饱和NH₄Cl(1mL)在0℃下淬火，然后在减压下除去有机溶剂。将残余物溶解于EtOAc(30mL)中并用盐水(5mL x 1)洗涤。有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：Luna C18 100mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：25％-40％，10分钟)纯化残余物。通过冷冻干燥除去洗脱液。获得呈白色固体状的化合物5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(54.4mg，152.85μmol，产率35.89％，纯度99.52％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.60～7.57(m,3H),7.33(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),6.83(s,1H),4.50～4.45(m,4H),3.74(t,J＝6.0Hz,2H)。HPLC：99.52％(220nm)，98.91％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₄H₁₃Cl₂N₅O₂质量计算值为353.04m/z，实测值为354.1[M+H]⁺。

化合物77

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案C-1中的步骤10)

将2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙醛(0.15g，425.92μmol，1eq)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(95.19mg，511.11μmol，1.2eq)和AcOH(2.56mg，42.59μmol，2.44μL，0.1eq)在DCM(5mL)中的混合物在25℃下搅拌1小时。然后添加NaBH(OAc)₃(108.32mg，511.11μmol，1.2eq)并将混合物在25℃下搅拌3小时。LC-MS和HPLC显示没有残留2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙醛。LC-MS上主要显示一个新峰，其为5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。将混合物用冰水(5mL)淬灭，然后用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL x 1)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：Luna C18 100mmx 30mm 5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：20％-45％，10分钟纯化残余物。冷冻干燥后，所得产物用MeOH(2mL)和EtOAc(1mL)洗涤。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1,6-二氢吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(24.3mg，78.35μmol，产率18.40％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.04～10.88(m,1H),7.69(s,1H),7.60～7.58(m,2H),7.34(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),6.78～6.71(m,1H),4.49(d,J＝6.0Hz,2H)。HPLC：98.28％(220nm)，97.37％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₂H₉Cl₂N₅O质量计算值为309.02m/z，实测值为310.0[M+H]⁺。

化合物78

1,1'-(氮烷二基双(乙烷-2,1-二基))双(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案C-1中的步骤10)

将2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙醛(0.1g，283.95μmol，1eq)和AcONH₄(218.73mg，2.84mmol，10eq)在MeOH(3mL)中的混合物在25℃下搅拌2小时。然后在0℃下分批添加NaBH₃CN(26.77mg，425.92μmol，1.5eq)并将混合物在25℃下搅拌10小时。LC-MS和HPLC显示反应完成。主要形成5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙基氨基]乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮。将混合物用冰水(5mL)淬灭并减压除去有机溶剂。水相用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL x 1)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：Luna C18 100mm x 30mm5u；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：30％-55％，10分钟)纯化。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)-甲基氨基]-1-[2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙基氨基]乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(38.1mg，55.27μmol，产率19.46％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.31(s,2H),8.74(s,2H),7.64(s,2H),7.60～7.57(m,4H),7.31(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,2H),6.80～6.78(m,2H),4.70(t,J＝6.0Hz,4H),4.48(d,J＝6.0Hz,4H),3.47(t,J＝5.6Hz,4H)。HPLC：100.00％(220nm)，99.46％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₈H₂₅Cl₄N₁₁O₂质量计算值为687.09m/z，实测值为688.2[M+H]⁺。

方案C-2

方案C-2中用于制备化合物的一般程序

化合物的制备(方案C-2中的步骤1)

将1-(R'-氨基乙基)-5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(283.12μmol，1eq)、R"COOH(283.12μmol～368.06μmol，1eq～1.3eq)、EDCI(339.74μmol，1.2eq)，HOBt(56.62μmol，0.2eq)和DIEA(849.36μmol，147.94μL，3eq)在DMF(3mL/mmol)中的混合物在20℃～25℃下搅拌10小时～12小时。将反应混合物在0℃～25℃下搅拌一段时间(1小时～3小时)。LC-MS显示反应完成。将反应混合物用H₂O淬灭，然后用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物。柱：Luna C18 100mm x 30mm 5μm或纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：20％-45％，10分钟或20分钟)。将水溶液冻干，得到所需化合物。

化合物79

N-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙基)-3,5-二甲基异噁唑-4-甲酰胺的制备(方案C-2中的步骤1)

将1-(2-氨基乙基)-5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.1g，283.12μmol，1eq)、3,5-二甲基异噁唑-4-羧酸(39.96mg，283.12μmol，48.14μL，1eq)、EDCI(65.13mg，339.74μmol，1.2eq)、HOBt(7.65mg，56.62μmol，0.2eq)和DIEA(109.77mg，849.36μmol，147.94μL，3eq)在DMF(1mL)中的混合物在25℃下搅拌12小时。LC-MS显示反应完成。过滤后，通过制备型HPLC(柱：Luna C18 100mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：30％-45％，10分钟)纯化滤液。获得呈白色固体状的化合物N-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)-甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙基]-3,5-二甲基-异噁唑-4-甲酰胺(29.2mg，58.90μmol，产率20.80％，纯度96.077％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.96(t,J＝5.2Hz,1H),7.60(s,1H),7.57(d,J＝6.0Hz,2H),7.32(d,J＝8.4Hz,1H),6.73-6.72(m,1H),4.55(t,J＝5.2Hz,2H),4.47(d,J＝5.6Hz,2H),3.62(t,J＝4.8Hz,2H),2.41(s,3H),2.18(s,3H)。HPLC：96.08％(220nm)，96.58％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₀H₁₉Cl₂N₇O₃质量计算值为475.09m/z，实测值为476.1[M+H]⁺。

化合物80

根据本文针对方案C-2中的步骤1所述的程序制备N-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙基)-N,3,5-三甲基异噁唑-4-甲酰胺。

该程序产生呈灰白色固体状的所需化合物(29.5mg，60.16μmol，产率44.19％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.86～10.33(m,1H),7.63～7.49(m,3H),7.34(d,J＝7.6Hz,1H),6.56～6.39(m,1H),4.61(s,2H),4.50(d,J＝5.6Hz,2H),3.87(t,J＝5.2Hz,2H),2.85(s,3H),2.23(s,3H),1.98(s,3H)。HPLC：98.05％(220nm)，88.25％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₁H₂₁Cl₂N₇O₃质量计算值为489.11m/z，实测值为490.2[M+H]⁺。

化合物81

根据本文针对方案C-2中的步骤1所述的程序制备6-氯-N-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-羟基-N-甲基哒嗪-4-甲酰胺。

该程序产生呈浅黄色固体状的所需化合物(34.2mg，65.30μmol，产率23.98％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ13.40(s,1H),7.61～7.51(m,3H),7.35(d,J＝8.0Hz,1H),7.25(s,0.5H),6.67(s,0.5H),6.57～6.42(m,1H),4.73～4.60(m,1H),4.58～4.52(m,1H),4.51(d,J＝4.0Hz,2H),3.88～3.78(m,1H),3.69～3.60(m,2H),2.95(s,2H),2.74(s,1H)。HPLC：97.50％(220nm)，96.618％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₀H₁₇Cl₃N₈O₃S质量计算值为522.05m/z，实测值为523.1[M+H]⁺。

化合物82

根据本文针对方案C-2中的步骤1所述的程序制备N-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙基)-N-甲基异噁唑-4-甲酰胺的制备

该程序产生呈灰白色固体状的所需化合物(25.1mg，54.30μmol，产率24.92％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ9.10(s,1H),8.56(s,1H),7.58(d,J＝7.2Hz,1H),7.57～7.51(m,2H),7.37～7.31(m,1H),6.57～6.47(m,1H),4.62(t,J＝5.6Hz,2H),4.50(d,J＝5.2Hz,2H),3.86(t,J＝5.6Hz,2H),2.94(s,3H)。HPLC：99.73％(220nm)，99.65％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₁₇Cl₂N₇O₃质量计算值为461.08m/z，实测值为462.1[M+H]⁺。

化合物83

根据本文针对方案C-2中的步骤1所述的程序制备6-氯-N-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-羟基哒嗪-4-甲酰胺的制备。

该程序产生呈浅黄色固体状的所需化合物(19mg，37.27μmol，产率18.81％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ13.92(s,1H),11.10(s,1H),9.38(t,J＝6.4Hz,1H),7.93(s,1H),7.60～7.56(m,3H),7.33～7.30(m,1H),6.55(s,1H),4.58(t,J＝5.6Hz,2H),4.46(d,J＝5.6Hz,2H),3.76(t,J＝5.6Hz,2H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，96.43％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₁₅Cl₃N₈O₃质量计算值为508.03m/z，实测值为509.1[M+H]⁺。

化合物84

根据本文针对方案C-2中的步骤1所述的程序制备3-氯-N-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-羟基哒嗪-4-甲酰胺的制备。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(3.7mg，6.08μmol，产率2.15％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ13.36(s,1H),8.83(s,1H),7.60～7.57(m,3H),7.32(d,J＝8.4Hz,1H),6.64(s,1H),6.83～6.62(m,1H),4.55(t,J＝5.6Hz,2H),4.47(t,J＝5.6Hz,2H),3.62(s,2H)。HPLC：97.29％(220nm)，97.48％(215nm)，98.52％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₁₅Cl₃N₈O₃质量计算值为508.03m/z，实测值为509.1[M+H]⁺。

化合物85

根据本文针对方案C-2中的步骤1所述的程序制备3,6-二氯-N-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙基)-N-甲基哒嗪-4-甲酰胺的制备。

该程序产生呈浅黄色固体状的所需化合物(35mg，64.55μmol，产率11.85％)。1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.92及7.43(s,1H),7.67～7.55(m,3H),7.38～7.30(m,1H),6.83～6.59(m,1H),4.73～4.66(m,1H),4.51～4.47(m,3H),3.97～3.88(m,1H),3.77～3.66(m,1H),3.65～3.52(m,1H),3.01及2.71(s,3H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₀H₁₆Cl₄N₈O₂质量计算值为540.02m/z，实测值为541.1[M+H]⁺。

化合物86

根据本文针对方案C-2中的步骤1所述的程序制备N-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙基)异噁唑-4-甲酰胺的制备。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(20.4mg，45.24μmol，产率10.65％)。1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.26(s,1H),8.09(s,1H),7.79(t,J＝5.6Hz,1H),7.60～7.54(m,3H),7.33(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),6.65(s,1H),4.48(d,J＝3.6Hz,4H),3.51(d,J＝5.6Hz,2H)。HPLC：99.41％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₁₅Cl₂N₇O₃质量计算值为447.06m/z，实测值为448.1[M+H]⁺。

化合物87

根据本文针对方案C-2中的步骤1所述的程序制备3-氯-N-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-羟基-N-甲基哒嗪-4-甲酰胺的制备。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(21.4mg，40.86mol，产率17.04％)。1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ13.14(s,1H),7.60～7.54(m,2H),7.35(t,J＝6.4Hz,1H),6.76and6.44(s,1H),6.52(s,1H),4.68(t,J＝5.6Hz,1H),4.59(t,J＝6.0Hz,1H),4.50(s,2H),3.89(d,J＝4.0Hz,1H),3.71(t,J＝5.6Hz,1H),2.92(s,1H),2.76(s,2H)。HPLC：99.82％(220nm)，99.84％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₀H₁₇Cl₃N₈O₃质量计算值为522.05m/z，实测值为523.1[M+H]⁺。

方案C-3

方案C-3中用于制备化合物的一般程序

化合物的制备(方案C-3中的步骤1)

在0℃下向5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(5.42mmol，1eq)、R₁OH(5.42mmol～16.26mmol，1eq～3eq)和PPh₃(5.96mmol～10.84mmol，1.1eq～2eq)在THF(3mL/mmol～10mL/mmol)中的溶液中逐滴添加DIAD(5.96mmol～10.84mmol，1.1eq～2eq)。然后将混合物在0℃～25℃下搅拌2小时～16小时。TLC显示反应完成。将混合物用冰水淬灭并分离有机层。水相用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶色谱(

20g或40g

二氧化硅快速柱，洗脱液为35mL/min或80mL/min的0～100％乙酸乙酯/石油或0～20％MeOH/乙酸乙酯醚梯度)纯化残余物。减压除去洗脱液，得到所需产物。

化合物的制备(方案C-3中的步骤2)

向5-氯-7-甲氧基-1-R₁-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(4.36mmol，1eq)在MeOH(3mL/mmol～5mL/mmol)或THF(3mL/mmol～5mL/mmol)和H₂O(3mL/mmol～5mL/mmol)中的溶液中添加LiOH.H₂O(13.08mmol～21.80mmol，3eq～5eq)。将混合物在20℃～25℃下搅拌2小时～16小时。TLC显示反应完成。减压浓缩反应混合物。用3N HCl使水溶液pH＝6，然后用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到所需产物。

化合物的制备(方案C-3中的步骤3)

将5-氯-1-R₁-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(3.87mmol，1eq)、R₃NH₂(162.66mmol～216.88mmol，1.5eq～2eq)和DIEA(11.61mmol，3eq，仅在R₃NH₂为HCl盐时添加DIEA)在t-BuOH或t-AmOH或NMP(3mL/mmol～10mL/mmol)中的混合物在100℃～160℃下搅拌3小时～40小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC纯化残余物。柱：a)Phenomenex Luna C18 250mm x 50mm 10μm；b)Phenomenex Luna C18 100mm x 30mm5μm；c)Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；d)Luna C18 100mm x 30mm 5μm；e)Boston Prime C18 150mm x 30mm 5μm；f)纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 5μm；g)Welch Xtimate C18 100mm x 25mm3μm；h)Xtimate C18 100mm x 30mm 3μm；i)KromasilC18(250 50mm 10μm)；j)Phenomenex Gemini-NX 150 30mm x 5μm；k)Welch Xtimate C18150mm x 25mm 5μm；l)Xtimate C18 150mm x 25mm 5μm；m)Xtimate C18 100mm x 30mm 3μm。流动相：a)[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：10％-70％，10分钟或20分钟；b)[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：10％-70％，10分钟或20分钟；c)[水(10mM NH₄HCO₃)-MeCN]；B％：10％-85％，8分钟或20分钟。在冷冻干燥下除去溶剂，得到所需产物。

化合物88

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

2-(2-(5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基)乙醇的制备(方案C-3中的步骤1)

在0℃下向5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(1g，5.42mmol，1eq)、2-(2-羟基乙氧基)乙醇(1.15g，10.84mmol，1.03mL，2eq)和PPh₃(2.13g，8.13mmol，1.5eq)在THF(10mL)中的溶液中滴加DIAD(1.64g，8.13mmol，1.58mL，1.5eq)。将混合物在25℃下搅拌2小时。TLC指示反应完成。将反应混合物用H₂O(15mL)淬灭，然后减压浓缩以除去有机溶剂。水相用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶色谱(

20g

二氧化硅快速柱，洗脱液为60mL/min的0～60％乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化残余物。减压除去洗脱液。获得呈黄色油状的化合物2-[2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基]乙醇(1.19g，4.36mmol，产率80.55％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.26(s,1H),4.66(t,J＝5.6Hz,2H),4.52～4.45(m,1H),4.16(s,3H),3.84(t,J＝5.6Hz,2H),3.37～3.35(m,4H)。获得呈黄色固体状的化合物2-[2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)乙氧基]乙醇(440mg，1.61mmol，产率29.78％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.64(s,1H),4.64～4.61(m,2H),4.12(s,3H),3.91(t,J＝5.2Hz,2H),3.44～3.41(m,4H)。

5-氯-1-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案C-3中的步骤2)

将2-[2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基]乙醇(1.19g，4.36mmol，1eq)和LiOH.H₂O(732.45mg，17.46mmol，4eq)在THF(10mL)和H₂O(10mL)中的混合物在20℃下搅拌5小时。TLC指示反应完成。减压浓缩反应混合物以除去THF，然后用3N HCl将水溶液调节至pH＝4。水相用EtOAc(25mL x 4)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色油状的5-氯-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(1.3g，粗产物)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.06(s,1H),7.78(s,1H),4.62(t,J＝5.2Hz,2H),4.38(t,J＝4.8Hz,2H),3.83～3.75(m,5H)。

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案C-3中的步骤3)

将(3,4-二氯苯基)甲胺(1.36g，7.73mmol，1.03mL，2eq)和5-氯-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(1g，3.87mmol，1eq)在t-BuOH(6mL)中的混合物在100℃下搅拌16小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 250mm x 50mm 10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：10％-40％，20分钟)纯化残余物。将水溶液冻干，得到呈白色固体状的5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.99g，2.45mmol，产率63.34％，纯度98.50％)。已递送30.1mg。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.61～7.57(m,3H),7.33(dd,J＝2.0,8.4Hz,1H),6.82(s,1H),4.57(t,J＝5.6Hz,2H),4.49(d,J＝5.2Hz,2H),3.79(t,J＝5.6Hz,2H),3.42～3.37(m,4H)。HPLC：97.84％(220nm)，98.14％(215nm)，98.77％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₇Cl₂N₅O₃质量计算值为397.07m/z，实测值为398.0[M+H]⁺。

化合物89

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(4-羟基丁基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(378.3mg，986.58μmol，产率46.04％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.07(s,1H),7.62～7.58(m,2H),7.56(s,1H),7.34(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),6.62(s,1H),4.48(d,J＝5.6Hz,2H),4.43(t,J＝6.8Hz,2H),3.37(t,J＝6.8Hz,2H),1.82～1.75(m,2H),1.38～1.26(m,2H)。HPLC：99.69％(220nm)，99.76％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₇Cl₂N₅O₂质量计算值为381.08m/z，实测值为382.2[M+H]⁺。

化合物90

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备4-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙酸丁酯。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(0.03g，70.71μmol，产率77.48％)。¹HNMR(CDCl₃,400MHz)δ11.28(s,1H),7.57(s,1H),7.43(d,J＝1.6Hz,1H),7.34(d,J＝8.0Hz,1H),7.16(d,J＝1.6Hz,1H),5.45(s,1H),4.54(d,J＝5.2Hz,2H),4.46(t,J＝6.8Hz,2H),4.02(t,J＝6.4Hz,2H),1.94(s,3H),1.83～1.91(m,2H),1.49～1.53(m,2H)。HPLC：98.46％(220nm)，98.15％(215nm)，98.76％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₁₉Cl₂N₅O₃质量计算值为423.1m/z，实测值为424.0[M+H]⁺。

化合物91

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(噻唑-2-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈浅黄色固体状的所需化合物(71.4mg，175.31μmol，产率42.66％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.75(d,J＝3.2Hz,1H),7.70(s,1H),7.68(d,J＝3.2Hz,1H),7.62～7.57(m,2H),7.34(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),6.85(d,J＝2.0Hz,1H),5.96(s,2H),4.50(d,J＝5.6Hz,2H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₂Cl₂N₆OS质量计算值为406.02m/z，实测值为406.9[M+H]⁺。

化合物92

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(噁唑-4-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮)。

该程序产生呈灰白色固体状的所需化合物(290.5mg，741.49μmol，产率15.42％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.13(s,1H),8.29(s,1H),7.96(s,1H),7.63～7.54(m,3H),7.32(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),6.59(s,1H),5.55(s,2H),4.47(d,J＝5.6Hz,2H)。HPLC：99.86％(220nm)，99.88％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₂Cl₂N₆O₂质量计算值为390.04m/z，实测值为391.0[M+H]⁺。

化合物93

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((5-氧代吡咯烷-2-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(63.7mg，156.41μmol，产率46.52％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.64(s,1H),7.61～7.58(m,3H),7.33(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),6.68(s,1H),4.50～4.46(m,3H),4.42～4.36(m,1H),3.95(d,J＝5.6Hz,1H),2.01(t,J＝5.6Hz,3H),1.80～1.77(m,1H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₆Cl₂N₆O₂质量计算值为406.07m/z，实测值为407.1[M+H]⁺。

化合物94

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮)。

该程序产生呈灰白色固体状的所需化合物(90.4mg，210.81μmol，产率59.38％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.59～7.57(m,2H),7.54(s,1H),7.33(dd,J＝1.6Hz,8.4Hz,1H),6.78(m,1H),4.51(t,J＝5.2Hz,2H),4.47(d,J＝5.6Hz,2H),3.56(t,J＝5.6Hz,2H),3.17(t,J＝6.8Hz,2H),2.05(t,J＝8.4Hz,2H),1.79～1.77(m,2H)。HPLC：98.24％(220nm)，98.21％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₁₈Cl₂N₆O₂质量计算值为420.09m/z，实测值为421.1[M+H]⁺。

化合物95

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备1-(2-(2-(2-丁氧基乙氧基)乙氧基)乙基)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮)。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(77.5mg，155.50μmol，产率29.37％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.61～7.57(m,3H),7.33(dd,J＝1.6Hz,2.0Hz,1H),6.72(s,1H),4.56(t,J＝5.6Hz,2H),4.48(d,J＝5.6Hz,2H),3.79(t,J＝5.6Hz,2H),3.48～3.44(m,2H),3.43～3.37(m,6H),3.32(t,J＝6.8Hz,2H),1.47～1.38(m,2H),1.31～1.22(m,2H),0.85(t,J＝7.2Hz,3H)。HPLC：99.05％(220nm)，97.64％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₂H₂₉Cl₂N₅O₄质量计算值为497.16m/z，实测值为498.2[M+H]⁺。

化合物96

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(((2R,3R,4R,5S)-3,4,5-三羟基哌啶-2-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮)。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(20mg，41.73μmol，产率6.69％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.97～8.95(m,1H),8.67(br s,1H),7.70(s,1H),7.60～7.58(m,2H),7.32(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),6.88(br s,1H),4.93(br d,J＝13.2Hz,1H),4.67～4.61(m,1H),4.49(d,J＝6.0Hz,2H),3.55～3.43(m,2H),3.30～3.21(m,2H),3.12(d,J＝8.0Hz,1H),2.70～2.64(m,1H)。HPLC：94.99％(220nm)，94.77％(215nm)，98.18％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₂₀Cl₂N₆O质量计算值为454.09m/z，实测值为455.09[M+H]⁺。

化合物97

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((1-甲基-1H-咪唑-2-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(21mg，51.95μmol，产率13.04％)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.80(s,1H),7.59～7.53(m,3H),7.34～7.32(m,1H),7.07(s,1H),7.03(s,1H),6.75(s,1H),5.71(s,2H),4.47(d,J＝4.4Hz,2H),3.64(s,3H)。HPLC:95.33％(220nm),94.77％(215nm),93.17％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₅Cl₂N₇O质量计算值为403.07m/z，实测值为404.1[M+H]⁺。

化合物98

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备3-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(26.4mg，54.15μmol，产率36.80％)。¹HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.67(s,1H),7.64(s,1H),7.61(d,J＝8.0Hz,1H),7.36(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),5.57(s,1H),4.57(d,J＝4.4Hz,2H),3.71～3.68(m,1H),3.57～3.53(m,1H),3.46～3.41(m,2H),2.33～2.30(m,2H),1.39(d,J＝8.0Hz,9H)。HPLC：98.32％(220nm)，98.63％(215nm)，96.81％(254nm)。MS(ESI)：C₂₁H₂₄Cl₂N₆O₃质量计算值为478.13m/z，实测值为479.2[M+H]⁺。

化合物99

1-(2-(2-氨基乙氧基)乙基)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备

化合物100

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备(2-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(350mg，697.88μmol，产率62.42％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.09(s,1H),7.62～7.52(m,3H),7.33(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),6.65(s,1H),4.55(t,J＝5.2Hz,2H),4.47(d,J＝6.0Hz,2H),3.77(t,J＝5.6Hz,2H),3.33(t,J＝6.4Hz,2H),2.98(q,J＝6.0Hz,2H),1.35(s,9H)。HPLC：99.17％(220nm)，99.07％(215nm)，99.62％(254nm)。MS(ESI)：C₂₁H₂₆Cl₂N₆O₄质量计算值为496.14m/z，实测值为497.2[M+H]⁺。

将N-[2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物100)(0.1g，201.06μmol，1eq)在HCl/EtOAc(20mL)和EtOAc(5mL)中的混合物在20℃下搅拌5小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。获得呈白色固体状的化合物1-[2-(2-氨基乙氧基)乙基]-5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(70mg，159.76μmol，产率79.46％，纯度98.989％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.83(s,3H),7.65～7.57(m,3H),7.35(d,J＝8.4Hz,1H),4.62(t,J＝5.6Hz,2H),4.53(s,2H),3.85(t,J＝5.6Hz,2H),3.57(t,J＝5.2Hz,2H),2.90(d,J＝5.2Hz,2H)。HPLC：98.99％(220nm)，98.52％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₉Cl₃N₆O₂质量计算值为396.09m/z，实测值为397.1[M+H]⁺。

化合物101

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备1-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(34.7mg，77.16μmol，产率21.34％，HCl)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.75(s,1H),7.99(s,1H),7.74(s,1H),7.61～7.57(m,2H),7.35～7.32(m,2H),6.74(s,2H),4.52(d,J＝4.8Hz,2H)。HPLC：95.10％(220nm)，94.99％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₃Cl₃N₈O质量计算值为390.05m/z，实测值为391.0[M+H]⁺。

化合物102

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((四氢呋喃-2-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(48.8mg，123.40μmol，产率52.38％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.87～7.53(m,4H),7.37(dd,J＝1.6Hz,8.4Hz,1H),4.57(d,J＝4.8Hz,2H),4.55～4.50(m,1H),4.36(dd,J＝5.2Hz,13.6Hz,1H),4.24～4.18(m,1H),3.73～3.71(m,1H),3.62～3.57(m,1H),1.93～1.72(m,3H),1.69～1.57(m,1H)。HPLC：99.70％(220nm)，99.50％(215nm)，99.40％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₇Cl₂N₅O₂质量计算值为393.08m/z，实测值为394.1[M+H]⁺。

化合物103

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(21.1mg，45.65μmol，产率12.62％，HCl)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.93～8.87(m,2H),8.35(s,1H),8.07(s,1H),7.73～7.62(m,2H),7.42(t,J＝5.6Hz,1H),6.75(s,2H),4.74(s,2H)。HPLC：92.54％(220nm)，91.99％(215nm)，93.12％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₃Cl₃N₈O质量计算值为390.05m/z，实测值为391.0[M+H]⁺。

化合物104

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-((2-羟基乙基)硫基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(184.5mg，436.26μmol，产率52.11％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.47(s,1H),7.68～7.47(m,3H),7.33(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),6.64(s,1H),4.77(s,1H),4.58(t,J＝6.8Hz,2H),4.47(d,J＝6.0Hz,2H),3.52(q,J＝6.0Hz,2H),2.93(t,J＝7.2Hz,2H),2.56(t,J＝6.8Hz,2H)。HPLC：97.97％(220nm)，97.21％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₇Cl₂N₅O₂S质量计算值为413.05m/z，实测值为414.0[M+H]⁺。

化合物105

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备1-((1,4-二噁烷-2-基)甲基)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(89.6mg，210.89μmol，产率57.08％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.63(s,3H),7.33(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),6.77(s,1H),4.57(dd,J＝7.2Hz,13.6Hz,1H),4.48(d,J＝5.6Hz,2H),4.37(dd,J＝5.2Hz,14.0Hz,1H),3.95～3.90(m,1H),3.71(s,2H),3.60(s,1H),3.48～3.44(m,2H),3.32(dd,J＝9.6Hz,11.6Hz,1H)。HPLC：96.56％(220nm)，95.74％(215nm)，98.80％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₇Cl₂N₅O₃质量计算值为409.07m/z，实测值为410.0[M+H]⁺。

化合物106

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(68.5mg，158.02μmol，产率62.01％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.65～7.54(m,3H),7.33(d,J＝7.6Hz,1H),6.91(s,1H),5.44(s,1H),4.49(d,J＝3.6Hz,2H),3.75(t,J＝9.6Hz,2H),3.63(dd,J＝4.8Hz,10.0Hz,2H),3.17(s,6H)。HPLC：95.10％(220nm)，94.43％(215nm)，97.70％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₉Cl₂N₅O₃质量计算值为411.09m/z，实测值412.1[M+H]⁺。

化合物107

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1,3-二羟基丙-2-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(17.5mg，43.55μmol，产率10.65％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.59(d,J＝4.4Hz,3H),7.33(d,J＝6.8Hz,1H),6.81(s,1H),5.14～5.00(m,1H),4.49(d,J＝3.6Hz,2H),3.74(d,J＝5.6Hz,4H)。HPLC：95.62％(220nm)，95.60％(215nm)，95.24％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₅Cl₂N₅O₃质量计算值为383.06m/z，实测值为384.1[M+H]⁺。

化合物108

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮)。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(71.1mg，161.56μmol，产率32.17％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.99(s,1H),7.69～7.64(m,2H),7.62(d,J＝7.6Hz,1H),7.38(d,J＝8.4Hz,1H),4.62～4.56(m,4H),3.81(t,J＝5.2Hz,2H),3.68(s,2H),3.45～3.43(m,1H),3.29～3.22(m,2H),1.75～1.68(m,2H),1.30～1.21(m,2H)。HPLC：99.60％(220nm)，99.70％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₂₁Cl₂N₅O₃质量计算值为437.10m/z，实测值为438.1[M+H]⁺。

化合物109

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(吡啶-2-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(55.4mg，117.21μmol，产率29.49％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.58(d,J＝4.8Hz,1H),7.94～7.92(m,1H),7.71(s,1H),7.63～7.60(m,2H),7.45～7.43(m,1H),7.37～7.35(m,2H),7.12(d,J＝8.0Hz,1H),5.82(s,2H),4.54(d,J＝5.2Hz,2H)。HPLC：92.60％(220nm)，90.01％(215nm)，95.32％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₁₅Cl₃N₆O质量计算值为400.06m/z，实测值为401.0[M+H]⁺。

化合物110

根据本文对于方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(吡啶-2-基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(131.7mg，287.85μmol，产率34.50％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.77(d,J＝5.2Hz,1H),8.72(s,1H),8.28(d,J＝8.4Hz,1H),8.05～7.89(m,2H),7.67～7.56(m,3H),7.37(d,J＝8.4Hz,1H),4.79(t,J＝6.4Hz,2H),4.58(d,J＝3.6Hz,2H),3.36(t,J＝6.4Hz,2H)。HPLC：98.74％(220nm)，98.50％(215nm)，99.11％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₁₇Cl₃N₆O质量计算值为414.08m/z，实测值为415.0[M+H]⁺。

化合物111

根据本文对于方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(吡啶-3-基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(66.3mg，157.39μmol，产率45.68％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.76(d,J＝5.2Hz,1H),8.43～8.36(m,1H),7.87(d,J＝6.4Hz,1H),7.76(d,J＝8.0Hz,1H),7.64～7.56(m,2H),7.52(s,1H),7.37～7.34(m,1H),4.90(t,J＝6.4Hz,2H),4.57(d,J＝5.2Hz,2H),3.57(s,2H)。HPLC：98.58％(220nm)，98.30％(215nm)，98.93％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₁₇Cl₃N₆O质量计算值为414.08m/z，实测值为415.1[M+H]⁺。

化合物112

根据本文对于方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(吡嗪-2-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(43.3mg，92.57μmol，产率34.74％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.56(s,2H),8.49(s,1H),7.68(s,1H),7.65～7.58(m,2H),7.46～7.30(m,2H),5.83(s,2H),4.54(d,J＝4.8Hz,2H)。HPLC：93.80％(220nm)，92.74％(215nm)，99.63％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₄Cl₃N₇O质量计算值为401.06m/z，实测值为402.0[M+H]⁺。

化合物113

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(3-吡啶基甲基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(87.3mg，196.51μmol，产率57.13％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.80～8.75(m,2H),8.19(d,J＝8.4Hz,1H),7.88(dd,J＝5.6Hz,8.0Hz,1H),7.71(s,1H),7.63～7.56(m,2H),7.46～7.27(m,2H),5.83(s,2H),4.53(d,J＝5.2Hz,2H)。HPLC：98.52％(220nm)，91.50％(215nm)，99.46％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₁₅Cl₃N₆O质量计算值为400.06m/z，实测值为401.0[M+H]⁺。

化合物114

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(嘧啶-2-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈浅黄色固体状的所需化合物(54.7mg，128.84μmol，产率41.78％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.73(d,J＝4.8Hz,2H),7.67(d,J＝10.0Hz,2H),7.62(d,J＝8.4Hz,1H),7.45～7.35(m,2H),5.85(s,2H),4.57(d,J＝4.0Hz,2H)。HPLC：94.74％(220nm)，93.84％(215nm)，98.88％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₃Cl₂N₇O质量计算值为401.06m/z，实测值为402.0[M+H]⁺。

化合物115

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(420mg，947.33μmol，产率68.28％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.61～7.52(m,3H),7.31(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),6.79(t,J＝4.4Hz,1H),4.55(t,J＝5.6Hz,2H),4.46(d,J＝5.6Hz,2H),3.77(s,2H),3.47～3.43(m,4H),3.41(d,J＝4.4Hz,2H),3.34～3.30(m,2H)。HPLC：99.76％(220nm)，99.59％(215nm)，99.72％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₂₁Cl₂N₅O₄质量计算值为441.10m/z，实测值为442.1[M+H]⁺。

化合物116

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(106.3mg，214.99μmol，产率53.25％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.63～7.55(m,3H),7.33(dd,J＝1.6Hz,8.4Hz,1H),6.75(s,1H),4.57(t,J＝5.6Hz,2H),4.48(d,J＝5.6Hz,2H),3.79(t,J＝6.0Hz,2H),3.48～3.45(m,4H),3.43(s,6H),3.39～3.36(m,2H)。HPLC：98.36％(220nm)，97.32％(215nm)，98.29％(254nm)。MS(ESI)：C₂₀H₂₅Cl₂N₅O₅质量计算值为485.12m/z，实测值为486.1[M+H]⁺。

化合物117

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(嘧啶-2-基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(9.8mg，21.84μmol，产率20.14％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.70(d,J＝4.8Hz,2H),7.60～7.56(m,2H),7.52～7.48(m,1H),7.37～7.31(m,2H),6.83(s,1H),4.88(t,J＝7.2Hz,2H),4.48(d,J＝5.6Hz,2H),3.43～3.41(m,2H)。HPLC：92.75％(220nm)，91.04％(215nm)，98.20％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₁₅Cl₂N₇O质量计算值为415.07m/z，实测值为416.0[M+H]⁺。

化合物118

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(氧杂环丁烷-3-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(84.1mg，207.55μmol，产率24.97％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.75(s,1H),7.66～7.53(m,3H),7.32(dd,J＝1.6Hz,8.0Hz,1H),6.59(s,1H),4.72(d,J＝7.6Hz,2H),4.60(dd,J＝6.0Hz,7.6Hz,2H),4.47(d,J＝6.0Hz,2H),4.40(t,J＝6.4Hz,2H),3.45～3.37(m,1H)。HPLC：93.84％(220nm)，88.55％(215nm)，98.29％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₅Cl₂N₅O₂质量计算值为379.06m/z，实测值为380.0[M+H]⁺。

化合物119

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(70.4mg，174.59μmol，产率20.01％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.60～7.57(m,3H),7.32(d,J＝8.0Hz,1H),6.85(s,1H),5.65(t,J＝4.4Hz,1H),4.48(d,J＝5.6Hz,2H),4.03～3.96(m,2H),3.85～3.81(m,2H),2.37～2.31(m,2H)。HPLC：94.30％(220nm)，91.72％(215nm)，90.52％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₅Cl₂N₅O₂质量计算值为379.06m/z，实测值为380.1[M+H]⁺。

化合物120

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((四氢呋喃-3-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(72.6mg，181.68μmol，产率21.03％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.65～7.60(m,4H),7.37(d,J＝8.0Hz,1H),4.57(s,2H),4.46～4.40(m,2H),3.74～3.71(m,4H),2.75～2.72(m,1H),1.88～1.84(m,1H),1.67～1.57(m,1H)。HPLC：98.66％(220nm)，98.29％(215nm)，98.84％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₇Cl₂N₅O₂质量计算值为393.08m/z，实测值为394.0[M+H]⁺。

化合物121

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(102.6mg，257.22μmol，产率36.39％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.60～7.56(m,3H),7.32(dd,J＝1.6Hz,8.4Hz,1H),6.65(s,1H),5.13～4.96(m,1H),4.47(d,J＝5.6Hz,2H),3.97(dd,J＝3.2Hz,11.2Hz,2H),3.47～3.44(m,2H),2.10～2.00(m,2H),1.89～1.84(m,2H)。HPLC：98.84％(220nm)，98.20％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₇Cl₂N₅O₂质量计算值为393.08m/z，实测值为394.0[M+H]⁺。

化合物122

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(8.0mg，19.89μmol，产率11.97％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.65～7.53(m,3H),7.32(d,J＝7.6Hz,1H),6.60(s,1H),5.02～4.95(m,1H),4.76～4.69(m,1H),4.65～4.56(m,1H),4.51～4.41(m,3H),4.36～4.29(m,1H),2.65～2.57(m,2H)。HPLC：94.54％(220nm)，93.72％(215nm)，98.31％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₅Cl₂N₅O₂质量计算值为379.06m/z，实测值为380.0[M+H]⁺。

化合物123

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(3-羟基丙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈灰白色固体状的所需化合物(27.8mg，75.50μmol，产率19.18％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.07(s,1H),7.59～7.57(m,2H),7.53(s,1H),7.32(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),6.59～6.50(m,1H),4.54～4.44(m,4H),3.38(t,J＝6.0Hz,2H),1.94～1.87(m,2H)。HPLC：100.00％(220nm)，83.10％(215nm)，98.33％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₅Cl₂N₅O₂质量计算值为367.06m/z，实测值为368.0[M+H]⁺。

化合物124

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(吡嗪-2-基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(24.1mg，49.93μmol，产率19.19％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.51(d,J＝2.8Hz,1H),8.45(d,J＝2.0Hz,1H),8.40(s,1H),7.60～7.58(m,2H),7.52(s,1H),7.33(dd,J＝8.4Hz,J＝2.0Hz,1H),7.01(s,1H),4.81(t,J＝6.8Hz,2H),4.49(d,J＝5.6Hz,2H),3.31(t,J＝7.2Hz,2H)。HPLC：93.79％(220nm)，91.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₁₆Cl₃N₇O质量计算值为415.07m/z，实测值为416.0[M+H]⁺。

化合物125

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氟苄基)氨基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(18.3mg，52.58μmol，产率50.62％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.00(s,1H),7.59(s,1H),7.42～7.33(m,2H),7.18(s,1H),6.53(s,1H),5.03～4.93(m,1H),4.79～4.69(m,1H),4.66～4.57(m,1H),4.48～4.42(m,3H),4.36～4.30(m,1H),2.63～2.58(m,1H),2.42～2.37(m,1H)。HPLC：99.80％(220nm)，99.76％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₅F₂N₅O₂质量计算值为347.12m/z，实测值为348.2[M+H]⁺。

化合物126

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

5-氯-7-甲氧基-1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶的制备(方案C-3中的步骤1)

在20℃下向5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(1g，5.42mmol，1eq)和1-溴-2-甲氧基-乙烷(978.90mg，7.04mmol，661.42μL，1.3eq)在DMF(10mL)中的混合物中添加Cs₂CO₃(3.53g，10.84mmol，2eq)。然后将混合物在20℃下搅拌3小时。TLC显示反应完成。将混合物缓慢倒入冰水(20mL)中，然后用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mLx 4)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶色谱(

12g

硅胶快速柱，洗脱液为40mL/min的0～35％乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化残余物。减压除去洗脱液。获得呈白色固体状的化合物5-氯-7-甲氧基-2-(2-甲氧基乙基)吡唑并[4,3-d]嘧啶(0.6g，2.47mmol，产率45.64％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ8.05(s,1H),4.71(t,J＝5.6Hz,2H),4.23(s,3H),3.82(t,J＝5.6Hz,2H),3.29(s,3H)。获得呈白色固体状的化合物5-氯-7-甲氧基-1-(2-甲氧基乙基)吡唑并[4,3-d]嘧啶(0.5g，2.06mmol，产率38.033％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ8.09(s,1H),4.58(t,J＝5.2Hz,2H),4.23(s,3H),3.85(t,J＝5.6Hz,2H),3.32(s,3H)。

5-氯-1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(反应图C-3中的步骤2)

将5-氯-7-甲氧基-1-(2-甲氧基乙基)吡唑并[4,3-d]嘧啶(0.6g，2.47mmol，1eq)和LiOH.H₂O(311.25mg，7.42mmol，3eq)在MeOH(5mL)和H₂O(5mL)中的溶液在20℃下搅拌3小时。TLC显示反应完成。在减压下除去有机溶剂。用2N HCl缓慢地使水溶液pH＝6～7并形成一些固体。过滤后收集固体。然后用EtOAc(20mL×2)萃取水相。将合并的有机层用盐水(5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈白色固体状的化合物5-氯-1-(2-甲氧基乙基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.5g，2.19mmol，产率88.45％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ13.30(s,1H),7.98(s,1H),4.68(t,J＝5.2Hz,2H),3.75(t,J＝5.6Hz,2H),3.19(s,3H)。

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(反应图C-3中的步骤3)

将5-氯-1-(2-甲氧基乙基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(500.00mg，2.19mmol，1eq)和(3,4-二氯苯基)甲胺(769.97mg，4.37mmol，583.31μL，2eq)在t-BuOH(5mL)中的溶液在100℃下加热30小时。TLC显示反应完成。在减压下除去溶剂。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 250mm×50mm 10μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：25％-55％，10分钟)纯化。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(2-甲氧基乙基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(510.7mg，1.38mmol，产率63.00％，纯度99.34％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.63～7.59(m,3H),7.35(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),4.59(t,J＝5.6Hz,2H),4.54(d,J＝8.8Hz,2H),3.72(t,J＝5.2Hz,2H),3.19(s,3H。HPLC：99.34％(220nm)，99.77％(215nm)，97.94％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₅Cl₂N₅O₂质量计算值为367.06m/z，实测值为368.0[M+H]⁺。

化合物127

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备1-苄基-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈浅白色固体状的所需化合物(119.5mg，294.94μmol，产率38.44％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.62(s,1H),7.60～7.57(m,2H),7.34～7.24(m,4H),7.21(d,J＝6.8Hz,2H),6.90(s,1H),5.62(s,2H),4.49(d,J＝5.6Hz,2H)。HPLC：98.79％(220nm)，98.73％(215nm)，99.28％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₁₅Cl₂N₅O质量计算值为399.07m/z，实测值为400.0[M+H]⁺。

化合物128

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-2-(2-甲氧基乙基)-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(161.8mg，439.41μmol，产率66.98％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.85(s,1H),7.61～7.59(m,2H),7.33(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),7.10(s,1H),4.49(t,J＝5.6Hz,2H),4.38(t,J＝5.2Hz,2H),3.80(t,J＝6.8Hz,2H),3.22(s,3H)。HPLC：98.12％(220nm)，98.18％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₅Cl₂N₅O₂质量计算值为367.06m/z，实测值为368.1[M+H]⁺。

化合物129

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备2-苄基-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(49.5mg，123.67μmol，产率21.49％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.99(s,1H),7.98(s,1H),7.60～7.58(m,2H),7.36～7.33(m,2H),7.32～7.28(m,4H),6.91(s,1H),5.43(s,2H),4.48(d,J＝5.6Hz,2H)。HPLC：98.07％(220nm)，97.98％(215nm)，99.17％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₁₅Cl₂N₅O质量计算值为399.07m/z，实测值为400.1[M+H]⁺。

化合物130

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-异丙基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(77.2mg，219.18μmol，产率51.27％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.60～7.57(m,3H),7.33(dd,J＝1.2Hz,8.4Hz,1H),6.96(s,1H),5.22～5.19(m,1H),4.49(d,J＝5.2Hz,2H),1.41(s,6H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₅Cl₂N₅O质量计算值为351.07m/z，实测值为352.1[M+H]⁺。

化合物131

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(5-甲氧基戊基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(73.6mg，175.20μmol，产率18.97％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.60～7.56(m,2H),7.55(s,1H),7.33(dd,J＝2.0Hz,8.0Hz,1H),6.71(s,1H),4.48(d,J＝6.0Hz,2H),4.41(t,J＝6.8Hz,2H),3.25(t,J＝6.4Hz,2H),3.17(s,3H),1.79～1.75(m,2H),1.50～1.44(m,2H),1.24～1.18(m,2H)。HPLC：97.67％(220nm)，97.65％(215nm)，98.85％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₂₁Cl₂N₅O₂质量计算值为409.11m/z，实测值为410.0[M+H]⁺。

化合物132

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-2-异丙基-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(48.0mg，136.28μmol，产率31.88％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.86(s,1H),7.59～7.57(m,2H),7.31(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),6.56～6.48(m,1H),4.59～4.55(m,1H),4.44(d,J＝6.0Hz,2H),1.43(d,J＝6.8Hz,6H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₅Cl₂N₅O质量计算值为351.07m/z，实测值为352.1[M+H]⁺。

化合物133

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-2-(5-甲氧基戊基)-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(68.3mg，166.46μmol，产率18.03％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.75(s,1H),7.83(s,1H),7.62～7.55(m,2H),7.32(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),6.62(s,1H),4.46(d,J＝6.0Hz,2H),4.19(t,J＝7.2Hz,2H),3.27(t,J＝6.4Hz,2H),3.18(s,3H),1.85～1.79(m,2H),1.51～1.46(m,2H),1.26～1.20(m,2H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₂₁Cl₂N₅O₂质量计算值为409.11m/z，实测值为410.0[M+H]⁺。

化合物134

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备1-(环丁基甲基)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(150mg，396.56μmol，产率52.58％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.63～7.59(m,3H),7.35(dd,J＝2.0Hz,8.0Hz,1H),4.54(d,J＝4.8Hz,2H),4.46(d,J＝7.6Hz,2H),2.75(td,J＝7.6Hz,15.2Hz,1H),1.96～1.87(m,2H),1.85～1.72(m,4H)。HPLC：96.51％(220nm)，96.27％(215nm)，93.88％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₇Cl₂N₅O质量计算值为377.08m/z，实测值为378.1[M+H]⁺。

化合物135

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备2-(环丁基甲基)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(141.9mg，375.14μmol，产率59.69％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.12～10.37(m,1H),7.83(s,1H),7.60～7.58(m,2H),7.33(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),6.86(s,1H),4.48(d,J＝5.6Hz,2H),4.23(d,J＝7.2Hz,2H),2.82～78(m,1H),2.00～1.93(m,2H),1.86～1.73(m,4H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₇Cl₂N₅O质量计算值为377.08m/z，实测值为378.1[M+H]⁺。

化合物136

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(61.5mg，149.17μmol，产率30.36％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ9.48(s,1H),7.60～7.54(m,3H),7.32(dd,J＝2.0,8.2Hz,1H),6.76～6.59(m,1H),4.56(t,J＝5.8Hz,2H),4.47(d,J＝6.0Hz,2H),3.78(t,J＝5.8Hz,2H),3.46(dd,J＝3.2Hz,4.4Hz,2H),3.34(dd,J＝3.8Hz,5.8Hz,2H),3.16(s,3H)。HPLC:98.08％(220nm)，97.73％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₉Cl₂N₅O₃质量计算值为411.09m/z，实测值412.1[M+H]⁺。

化合物137

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(117.3mg，284.52μmol，产率54.26％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.84(s,1H),7.62～7.58(m,2H),7.34(dd,J＝2.0Hz,6.4Hz,1H),4.49(d,J＝5.2Hz,2H),4.37(t,J＝5.2Hz,2H),3.81(t,J＝5.2Hz,2H),3.52～3.48(m,2H),3.38(dd,J＝3.8,5.8Hz,2H),3.19(s,3H)。HPLC：99.87％(220nm)，99.84％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₉Cl₂N₅O₃质量计算值为411.09m/z，实测值412.1[M+H]⁺。

化合物138

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(83.7mg，209.23μmol，产率41.63％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.70(s,1H),7.60～7.57(m,2H),7.34～7.32(m,1H),6.73(s,1H),5.70(s,2H),4.49(d,J＝5.6Hz,2H),3.58(t,J＝4.4Hz,2H),3.36(t,J＝5.2Hz,2H),3.18(s,3H)。HPLC：99.55％(220nm)，99.51％(215nm)，100％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₇Cl₂N₅O₃质量计算值为397.07m/z，实测值为398.1[M+H]⁺。

化合物139

根据本文针对方案C-3中的步骤1-3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(嘧啶-2-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(10.9mg，28.08μmol，产率3.88％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.99(s,1H),8.94(d,J＝4.8Hz,2H),8.59(s,1H),7.63～7.56(m,3H),7.36(dd,J＝2.0Hz,8.0Hz,1H),6.74(s,1H),4.52(d,J＝5.6Hz,2H)。HPLC：96.85％(220nm)，96.29％(215nm)，99.83％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₁Cl₂N₇O质量计算值为387.04m/z，实测值为388.1[M+H]⁺。

化合物140

根据本文针对方案C-3中的步骤1-3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-2-(嘧啶-2-基)-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈浅黄色固体状的所需化合物(8mg，19.56μmol，产率12.16％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.21(s,1H),8.93(d,J＝4.8Hz,2H),7.98(s,1H),7.62～7.57(m,3H),7.35(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),6.82～6.72(m,1H),4.53(d,J＝6.0Hz,2H)。HPLC：94.91％(220nm)，94.48％(215nm)，99.09％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₁Cl₂N₇O质量计算值为387.04m/z，实测值为388.0[M+H]⁺。

化合物141

根据本文针对方案C-3中的步骤1-3所述的程序制备2-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)乙氧基)乙酸。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(6.1mg，14.08μmol，产率5.48％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.14(s,1H),10.99(s,1H),8.24(t,J＝6.0Hz,1H),7.55(d,J＝8.6Hz,1H),7.45(d,J＝1.6Hz,1H),7.37(s,1H),7.24～7.14(m,1H),4.61(t,J＝5.6Hz,2H),4.25(d,J＝6.0Hz,2H),3.89(s,2H),3.85(t,J＝5.6Hz,2H)。HPLC：95.12％(220nm)，94.13％(215nm)，87.14％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₅Cl₂N₅O₄质量计算值为411.05m/z，实测值为412.0[M+H]⁺。

化合物142

根据本文针对方案C-3中的步骤1-3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(19.6mg，50.10μmol，产率45.42％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.73(s,1H),7.59～7.57(m,2H),7.32(dd,J＝8.0Hz,2.0Hz,1H),6.64(s,1H),6.11～6.04(m,1H),4.95～4.89(m,4H),4.47(d,J＝6.0Hz,2H)。HPLC：93.61％(220nm)，91.82％(215nm)，97.14％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₃Cl₂N₅O₂质量计算值为365.04m/z，实测值为366.0[M+H]⁺。

化合物143

根据本文针对方案C-3中的步骤1-3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-基)-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(16mg，41.96μmol，产率36.57％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.00(s,1H),7.60～7.58(m,2H),7.33(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),6.88(s,1H),5.70～5.63(m,1H),4.97～4.93(m,2H),4.91～4.88(m,2H),4.48(d,J＝5.6Hz,2H)。HPLC：96.04％(220nm)，94.85％(215nm)，95.47％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₃Cl₂N₅O₂质量计算值为365.04m/z，实测值为366.0[M+H]⁺。

化合物144

根据本文针对方案C-3中的步骤1-3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(噁唑-2-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(34.8mg，88.81μmol，产率37.24％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.06(s,1H),7.65(s,1H),7.63～7.56(m,2H),7.33(d,J＝8.0Hz,1H),7.16(s,1H),6.83(s,1H),5.79(s,2H),4.49(d,J＝4.6Hz,2H)。HPLC：99.83％(220nm)，99.77％(215nm)，99.88％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₂Cl₂N₆O₂质量计算值为390.04m/z，实测值为391.0[M+H]⁺。

化合物145

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备4-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丁酸。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(97.9mg，223.38μmol，产率38.22％，纯度90.407％)。7.9mg的产物用于递送。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.10(s,1H),7.62～7.51(m,3H),7.33(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),6.62(s,1H),4.52～4.39(m,4H),2.15(t,J＝7.2Hz,2H),2.02～1.95(m,2H)。HPLC：90.41％(220nm)，89.23％(215nm)，96.19％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₅Cl₂N₅O₃质量计算值为396.06m/z，实测值为396.2[M+H]⁺。

化合物146

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(4-(二甲基磷酰基)丁基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物((4.4mg，9.55μmol，产率9.64％，纯度96.037％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.66～7.49(m,3H),7.33(dd,J＝1.6Hz,8.4Hz,1H),6.68(s,1H),4.50～4.38(m,4H),1.89～1.82(m,2H),1.71～1.59(m,2H),1.44～1.34(m,2H),1.30(d,J＝12.8Hz,6H)。

化合物147

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((4-甲基吗啉-2-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备

化合物148

2-((5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯的制备(方案C-3中的步骤1至3)

将2-[(5-氯-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基]吗啉-4-甲酸叔丁酯(1g，1.08mmol，1eq)和(3,4-二氯苯基)甲胺(380.84mg，2.16mmol，288.51μL，2eq)在t-BuOH(10mL)中的混合物在100℃下搅拌12小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物以除去t-BuOH。用EtOAc(10mL)稀释并用HCl水溶液(2N，10mL x 6)洗涤残余物。合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈白色固体状的化合物2-[[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]甲基]吗啉-4-甲酸叔丁酯(1g，粗产物)。残余物(200mg)通过制备型HPLC(中性条件柱：Welch Xtimate C18 150mm x 25mm5μm；流动相：[水(10mM NH₄HCO₃)-MeCN]；B％：50％-70％，10.5分钟)纯化。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物2-[[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]甲基]吗啉-4-甲酸叔丁酯(23.4mg，45.88μmol，产率4.24％，纯度99.87％)以用于递送。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.03(s,1H),7.60～7.57(m,3H),7.33(d,J＝8.0Hz,1H),6.60(s,1H),4.58～4.55(m,1H),4.48～4.41(m,3H),3.78～3.75(m,2H),3.67～3.62(m,2H),3.31～3.28(m,1H),2.88(s,1H),2.67(s,1H),1.36(s,9H)。HPLC：99.87％(220nm)，99.88％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₂H₂₆Cl₂N₆O₄质量计算值为508.14m/z，实测值为509.2[M+H]⁺。

化合物149

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(吗啉-2-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备

将2-[[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]甲基]吗啉-4-甲酸叔丁酯(200mg，392.63μmol，1eq)在HCl/EtOAc(2mL)和EtOAc(1mL)中的溶液在25℃下搅拌2小时。LC-MS显示反应完成。将反应混合物在减压下浓缩以除去EtOAc。通过制备型HPLC(HCl条件柱：Phenomenex Luna C18 100mm×30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：15％-50％，8分钟)纯化残余物。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(吗啉-2-基甲基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(35.4mg，79.42μmol，产率20.23％，纯度100％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ9.33(s,2H),7.67(s,1H),7.63～7.59(m,2H),7.36(d,J＝8.0Hz,1H),4.67～4.62(m,1H),4.55～4.48(m,3H),4.18～4.17(m,1H),3.92～3.89(m,1H),3.65(t,J＝12.0Hz,1H),3.21～3.12(m,2H),2.90～2.87(m,2H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₉Cl₃N₆O₂质量计算值为408.09m/z，实测值为409.1[M+H]⁺。

在0℃下向5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(吗啉-2-基甲基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(400mg，897.40μmol，1eq，HCl)在MeOH(5mL)中的溶液中添加HCHO(218.48mg，2.69mmol，200.44μL，纯度37％，3eq)。将混合物在0℃下搅拌10分钟。然后在0℃下添加AcOH(5.39mg，89.74μmol，5.13L，0.1eq)和NaBH₃CN(451.16mg，7.18mmol，8eq)。将混合物在25℃下搅拌12小时。LC-MS显示反应完成。在减压下浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(HCl条件柱：Phenomenex Luna C18 150mm×30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：15％-45％，10分钟)纯化残余物。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[(4-甲基吗啉-2-基)甲基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(49.1mg，106.69μmol，产率11.89％，纯度99.9％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.33(s,1H),8.37(s,1H),7.74(s,1H),7.68(d,J＝1.2Hz,1H),7.62(d,J＝8.4Hz,1H),7.40(dd,J＝8.4Hz,1.2Hz,1H),4.67～4.62(m,3H),4.57～4.53(m,1H),4.27～4.26(m,1H),3.98～3.94(m,1H),3.74(t,J＝12.0Hz,1H),3.39(d,J＝12.0Hz,1H),3.30(d,J＝12.0Hz,1H),2.98～2.90(m,2H),2.74(m,3H)。HPLC：99.90％(220nm)，99.85％(215nm)，99.57％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₂₁Cl₃N₆O₂质量计算值为422.10m/z，实测值为423.0[M+H]⁺。

化合物150

4-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-1-异烟酰基吡咯烷-2-羧酸盐酸盐的制备

1-(叔丁氧基羰基)-4-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-2-羧酸的制备(方案C-3中的步骤1至3)

将1-叔丁氧基羰基-4-(5-氯-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-2-羧酸(520mg，1.35mmol，1eq)和(3,4-二氯苯基)甲胺(477.05mg，2.71mmol，361.40μL，2eq)在2-甲基丁-2-醇(3mL)中的溶液在130℃下搅拌10小时。LCMS和HPLC显示反应完成。在减压下浓缩混合物。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：30％-50％，12分钟)纯化残余物。将混合物在冷冻干燥下干燥，得到呈白色固体状的1-(叔丁氧基羰基)-4-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-2-羧酸(140mg，267.50μmol，产率19.74％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.62(s,1H),7.59～7.53(m,2H),7.30(d,J＝8.8Hz,1H),5.67～5.52(m,1H),4.48(d,J＝5.6Hz,2H),4.37～4.30(m,1H),3.78～3.74(m,1H),3.63～3.55(m,1H),2.82～2.69(m,1H),2.38～2.31(m,1H),1.39～1.25(m,9H)。

化合物151

4-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-2-羧酸盐酸盐的制备(方案C-3中的步骤1)

在0℃下向1-叔丁氧基羰基-4-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]吡咯烷-2-羧酸(140mg，267.50μmol，1eq)在EtOAc(3mL)中的溶液中添加HCl/EtOAc(4M，3mL)。将混合物在25℃下搅拌4小时。LCMS和HPLC显示反应完成。在减压下浓缩混合物。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：15％-50％，12分钟)纯化残余物。将混合物在冷冻干燥下干燥，得到呈白色固体状的4-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-2-羧酸盐酸盐(120mg，249.49μmol，产率93.27％，纯度95.577％,HCl)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.02(s,1H),9.13(s,1H),7.72(s,1H),7.64～7.53(m,2H),7.33(dd,J＝2.0Hz,J＝8.0Hz,1H),6.95(s,1H),5.79(s,1H),4.60(s,1H),4.50(d,J＝5.6Hz,2H),3.83(s,1H),3.63(d,J＝11.6Hz,1H),2.65～2.63(m,1H),2.62～2.58(m,1H)。HPLC：95.58％(220nm)，94.08％(215nm)，94.72％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₇Cl₃N₆O₃质量计算值为422.07m/z，实测值为423.1[M+H]⁺。

4-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-1-异烟酰基吡咯烷-2-羧酸盐酸盐的制备(方案C-3中的步骤2)

向4-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]吡咯烷-2-羧酸(70mg，152.27μmol，1eq，HCl)在DCM(3mL)中的溶液中添加TEA(61.63mg，609.07μmol，84.78μL，4eq)。然后将吡啶-4-碳酰氯(70.48mg，395.90μmol，2.6eq，HCl)在0℃下分批添加到混合物中。将混合物在25℃下搅拌3小时。LCMS显示反应完成。在减压下浓缩混合物。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：15％-40％，12分钟)纯化残余物。将混合物在冷冻干燥下干燥，得到呈白色固体状的4-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-1-异烟酰基吡咯烷-2-羧酸盐酸盐(25.0mg，43.68μmol，产率28.69％，纯度98.683％,HCl)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.89(d,J＝6.4Hz,2H),7.92(s,1H),7.88～7.73(m,2H),7.72～7.66(m,1H),7.65～7.59(m,2H),7.42～7.33(m,1H),5.75～5.64(m,1H),4.72(t,J＝8.0Hz,1H),4.64～4.57(m,2H),4.08(s,1H),3.79～3.78(m,1H),2.86～2.80(m,1H),2.60(d,J＝6.4Hz,1H)。HPLC：98.68％(220nm)，98.30％(215nm)，99.34％(254nm)。MS(ESI)：C₂₃H₂₀Cl₃N₇O₄质量计算值为527.09m/z，实测值为528.1[M+H]⁺。

化合物152

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

化合物153

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备4-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯

该程序产生呈白色固体状的所需化合物4-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(33.7mg，65.68μmol，产率46.48％，纯度96.163％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.59～7.57(m,3H),7.32(dd,J＝2.0Hz,8.0Hz,1H),6.76(s,1H),5.02～4.98(m,1H),4.48(d,J＝5.6Hz,2H),4.05(br d,J＝13.2Hz,2H),2.92～2.89(m,2H),1.92～1.85(m,4H),1.42(s,9H)。HPLC：96.16％(220nm)，96.40％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₂H₂₆Cl₂N₆O₃质量计算值为492.14m/z，实测值为493.2[M+H]⁺。

获得呈白色固体状的化合物5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(1g，2.33mmol，产率39.64％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.96(s,1H),8.74(s,1H),7.65(s,1H),7.59(d,J＝8.4Hz,2H),7.34(d,J＝8.8Hz,1H),7.33～7.29(m,1H),5.14(s,1H),4.52(d,J＝5.2Hz,2H),3.41-3.37(m,2H),3.14～3.10(m,2H),2.24～2.10(m,4H)。.HPLC：96.39％(220nm)，96.35％(215nm)，96.48％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₈Cl₂N₆O质量计算值为392.09m/z，实测值为393.1[M+H]⁺。

化合物154

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(哌啶-3-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备3-((5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物3-((5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(430mg，粗产物)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.60(d,J＝2.4Hz,2H),7.58(s,1H),7.34(d,J＝8.4Hz,1H),4.50(d,J＝5.2Hz,2H),4.32(d,J＝7.2Hz,2H),3.69(s,2H),2.89～2.68(m,1H),2.60～2.53(m,1H),1.98(s,2H),1.60(d,J＝10.0Hz,3H),1.30(br s,9H)。根据本文针对方案C-3中的步骤1所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(哌啶-3-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(哌啶-3-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(500mg，粗产物)。80mg(粗产物)通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 100mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：15％-45％，10分钟)纯化，得到20.9mg的纯产物用于递送。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.86(d,J＝6.8Hz,1H),8.55(br s,1H),7.62(t,J＝13.2Hz,3H),7.37(d,J＝8.4Hz,1H),4.54(d,J＝5.2Hz,2H),4.43～4.39(m,2H),3.19～3.02(m,2H),2.81～2.67(m,2H),2.31～2.26(m,1H),1.77(d,J＝12.8Hz,1H),1.66～1.58(m,2H),1.27～1.18(m,1H)。HPLC：99.10％(220nm)，98.78％(215nm)，98.43％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₂₁Cl₃N₆O质量计算值为406.11m/z，实测值为407.11[M+H]⁺。

化合物155

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(吡咯烷-3-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备3-((5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物3-[[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(220mg，445.90μmol，产率43.82％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.10(s,1H),7.63～7.50(m,3H),7.33(d,J＝8.4Hz,1H),6.56(t,J＝6.0Hz,1H),4.51～4.38(m,4H),3.31～3.28(m,2H),3.28～3.23(m,1H),3.19(s,1H),3.04(br s,1H),1.80(br s,1H),1.58(d,J＝4.0Hz,1H),1.37(s,9H)。

在0℃下向3-[[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(化合物165)(220mg，445.90μmol，1eq)在EtOAc(2mL)中的溶液中添加HCl/EtOAc(4M，2mL，17.94eq)。将混合物在25℃下搅拌4小时。LCMS显示反应完成。在减压下浓缩混合物。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 100mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：15％-35％，12分钟)纯化固体。将混合物冷冻干燥，得到呈白色固体状的5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(吡咯烷-3-基甲基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(180mg，418.87μmol，产率93.94％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ9.06(brs,2H),7.67～7.57(m,3H),7.34(dd,J＝2.4Hz,8.8Hz,1H),4.60～4.41(m,4H),3.18(br s,2H),3.09～3.07(m,1H),2.95～2.90(m,1H),2.79～2.71(m,1H),1.94～1.88(m,1H),1.65～1.57(m,1H)。HPLC：99.50％(220nm)，99.24％(215nm)，99.65％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₉Cl₃N₆O质量计算值为392.09m/z，实测值为393.1[M+H]⁺。

化合物156

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(吡啶-3-基磺酰基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备

在0℃下向5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(4-哌啶基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(80mg，186.16μmolmol，1eq，HCl)和TEA(75.35mg，744.65μmol，103.65L，4eq)在DCM(3mL)中的混合物中逐滴添加吡啶-3-磺酰氯(33.06mg，186.16μmol，8.53L，1eq)。然后将混合物在20℃下搅拌1小时。LC-MS显示反应完成。将混合物用冰水(5mL)淬灭并分离有机层。水相用DCM(5mL x 4)萃取。将合并的有机层用盐水(2mL x 1)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 100mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：45％-70％，10分钟)纯化残余物。在冷冻干燥下除去洗脱液。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[1-(3-吡啶基磺酰基)-4-哌啶基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(26.7mg，46.07μmol，产率24.75％，纯度98.51％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.96(s,1H),8.92(d,J＝4.0Hz,1H),8.23～8.20(m,1H),7.74～7.71(m,1H),7.61～7.58(m,3H),7.33(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),4.90～4.82(m,1H),4.52(d,J＝5.2Hz,2H),3.81～3.78(m,2H),2.67～2.64(m,2H),2.03～2.01(m,4H)。HPLC：98.51％(220nm)，98.36％(215nm)，95.74％(254nm)MS(ESI)：C₂₂H₂₂Cl₃N₇O₃S质量计算值为533.08m/z，实测值为354.2[M+H]⁺。

化合物157

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备

向5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(4-哌啶基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮盐酸盐(60mg，139.62μmol，1eq，HCl)和1-溴-2-甲氧基-乙烷(58.22mg，418.87μmol，39.34μL，3eq)在CH3CN(1mL)中的溶液中添加K₂CO₃(57.89mg，418.87μmol，3eq)。将混合物在80℃下搅拌16小时。LCMS和HPLC显示反应完成。过滤混合物。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex LunaC18 100mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：20％-40％，10分钟)纯化滤液。将混合物冻干，得到呈白色固体状的5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[1-(2-甲氧基乙基)-4-哌啶基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(18.6mg，40.51μmol，产率29.01％，纯度98.295％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.19(s,1H),7.65(s,1H),7.61～7.56(m,2H),7.48(s,1H),7.33(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),5.13～5.06(m,1H),4.53(d,J＝5.2Hz,2H),3.73～3.67(m,2H),3.59(d,J＝12.0Hz,2H),3.40(s,1H),3.30(s,3H),3.28(d,J＝5.6Hz,2H),3.20(s,1H),2.41～2.31(m,2H),2.16～2.13(m,2H)。HPLC：98.30％(220nm)，98.30％(215nm)，98.14％(254nm)。MS(ESI)：C₂₀H₂₅Cl₃N₆O₂质量计算值为486.11m/z，实测值为451.2[M+H]⁺。

化合物158

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-吗啉代-2-氧代乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-吗啉代-2-氧代乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(16.8mg，37.65μmol，产率17.24％，纯度98.005％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.64～7.59(m,4H),7.36(d,J＝6.8,1H),5.38(s,2H),5.57(s,2H),3.65～3.56(m,4H),3.42(s,4H)。HPLC：98.01％(220nm)，97.95％(215nm)，98.09％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₁₈Cl₂N₆O₃质量计算值为436.08m/z，实测值为437.1[M+H]⁺。

化合物159

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(56.2mg，132.45μmol，产率30.33％，纯度99.285％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.13(s,1H),7.72～7.66(m,2H),7.63(d,J＝8.4Hz,1H),7.40(dd,J＝1.6Hz,8.0Hz,1H),4.64(d,J＝3.6Hz,2H),4.50(d,J＝7.2Hz,2H),3.37～3.33(m,1H),3.18～3.14(m,1H),2.92～2.80(m,1H),2.67(s,3H),2.35～2.29(m,1H),2.12～2.09(m,1H)。HPLC：99.29％(220nm)，99.21％(215nm)，98.28％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₁₈Cl₂N₆O₂质量计算值为420.09m/z，实测值为421.1[M+H]⁺。

化合物160

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-吗啉代乙氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(2-吗啉代乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(54.9mg，105.69μmol，产率17.32％，纯度96.991％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.50(s,1H),7.65～7.58(m,3H),7.36(dd,J＝1.6Hz,8.0Hz,1H),4.63(t,J＝5.2Hz,2H),4.56(d,J＝4.8Hz,2H),3.87～3.81(m,4H),3.75(t,J＝4.4Hz,2H),3.66(t,J＝12.0Hz,2H),3.27～3.20(m,4H),3.01～2.92(m,2H)。HPLC：96.99％(220nm)，94.02％(215nm)，99.79％(254nm)。MS(ESI)：C₂₀H₂₅Cl₃N₆O₃质量计算值为466.13m/z，实测值为467.1[M+H]⁺。

化合物161

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(吡啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮二盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(吡啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮二盐酸盐(40.9mg，85.66μmol，产率14.17％，纯度98.510％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.02(s,1H),8.00～7.97(m,1H),7.61(s,1H),7.60(d,J＝2.4Hz,1H),7.58(d,J＝8.0Hz,1H),7.45(d,J＝8.8Hz,1H),7.34(dd,J＝1.6Hz,8.0Hz,1H),6.94(t,J＝6.8Hz,1H),5.28～5.16(m,1H),4.53(d,J＝5.2Hz,2H),4.38(d,J＝13.6Hz,2H),3.50～3.37(m,2H),2.15～2.04(m,4H)。HPLC：98.51％(220nm)，98.10％(215nm)，99.43％(254nm)。MS(ESI)：C₂₂H₂₃Cl₄N₇O质量计算值为469.12m/z，实测值为470.1[M+H]⁺。

化合物162

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(吡啶-4-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮二盐酸盐。

该程序产生呈浅黄色固体状的所需化合物化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[1-(4-吡啶基)-4-哌啶基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(17.6mg，37.42μmol，产率10.31％，纯度95.01％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ13.55(s 1H),8.26～8.25(m,2H),7.63～7.59(m,3H),7.50(s 1H),7.35(d,J＝6.8Hz,1H),7.27(d,J＝7.2Hz,2H),5.29～5.23(m,1H),4.55(d,J＝5.2Hz,2H),4.35(d,J＝14.0Hz,2H),3.48～3.39(m,2H),2.14～2.02(m,4H)。HPLC：95.01％(220nm)，90.40％(215nm)，92.03％(254nm)。MS(ESI)：C₂₂H₂₃Cl₄N₇O质量计算值为469.12m/z，实测值为470.1[M+H]⁺。

化合物163

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(吡啶-3-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮二盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(吡啶-3-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮二盐酸盐(70.0mg，144.42μmol，产率25.01％，纯度97.038％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.53(d,J＝2.8Hz,1H),8.20～8.13(m,2H),8.11～7.88(m,1H),7.87～7.83(m,1H),7.67(s,2H),7.62(d,J＝8.4Hz,1H),7.39(dd,J＝1.8Hz,8.4Hz,1H),5.20～5.12(m,1H),4.62(d,J＝4.4Hz,2H),4.14(d,J＝12.8Hz,2H),3.26～3.16(m,2H),2.13～2.01(m,4H)。HPLC：97.04％(220nm)，96.74％(215nm)，98.80％(254nm)。MS(ESI)：C₂₂H₂₃Cl₄N₇O质量计算值为469.12m/z，实测值为470.1[M+H]⁺。

化合物164

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-((2-羟基乙基)磺酰基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

将5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(2-羟基乙基硫烷基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.1g，241.37μmol，1eq)(方案C-3中的步骤1至3)、高碘酸钠(206.50mg，965.46μmol，53.50μL，4eq)和三氯钌(5.01mg，24.14μmol，1.61μL，0.1eq)在THF(2.5mL)和H₂O(2.5mL)中的混合物在50℃下搅拌3小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。水相用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：Welch Xtimate C18 100mm x 25mm 3μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：20％-55％，12分钟)纯化。将水溶液冻干，得到呈白色固体状的5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(2-羟基乙基磺酰基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(41mg，91.03μmol，产率37.72％，纯度99.093％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.62(s,1H),7.59～7.58(m,2H),7.32(dd,J＝1.6Hz,6.8Hz,1H),6.75(s,1H),4.86(t,J＝6.8Hz,2H),4.48(d,J＝5.6Hz,2H),3.76(t,J＝5.2Hz,2H),3.69(t,J＝7.2Hz,2H),3.24(t,J＝5.6Hz,2H)。HPLC：99.09％(220nm)，98.89％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₇Cl₂N₅O₄S质量计算值为445.04m/z，实测值为446.0[M+H]⁺。

化合物165

2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-N-(甲基磺酰基)乙酰胺的制备

2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙酸的制备

向2-(5-氯-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙酸(0.32g，1.40mmol，1eq)在t-BuOH(3mL)中的溶液中添加(3,4-二氯苯基)甲胺(369.66mg，2.10mmol，280.04μL，1.5eq)。将混合物在100℃下搅拌24小时。LCMS显示反应完成。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：20％-45％，12分钟)纯化残余物。在30℃下减压除去MeCN。将残余物经冻干干燥。获得呈白色固体状的化合物2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙酸(50mg，135.81μmol，产率9.70％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.62～7.58(m,3H),7.35～7.33(m,1H),6.94(s,1H),5.16(s,2H),4.51(d,J＝5.2Hz,2H)。

向2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙酸(40mg，108.64μmol，1eq)(方案C-3中的步骤1至3)在DCM(1mL)中的溶液中添加甲磺酰胺(20.67mg，217.29μmol，2eq)、DMAP(6.64mg，54.32μmol，0.5eq)和DCC(22.42mg，108.64μmol，21.98μL，1eq)。将混合物在40℃下在N₂下搅拌10小时。LCMS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：20％-45％，12分钟)纯化残余物。在30℃下减压除去MeCN。将残余物经冻干干燥。获得呈白色固体状的化合物2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-N-(甲基磺酰基)乙酰胺(21.1mg，46.89μmol，产率43.16％，纯度98.960％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ12.25(s,1H),7.66～7.58(m,3H),7.35(d,J＝8.0Hz,1H),7.21(s,1H),5.24(s,2H),4.53(s,2H),3.24(s,3H)。HPLC：98.96％(220nm)，98.99％(215nm)，98.78％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₄Cl₂N₆O₄S质量计算值为444.02m/z，实测值为445.0[M+H]⁺。

化合物166

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备4-[2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物4-[2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(20mg，34.80μmol，产率9.29％，纯度98.58％)以用于递送。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.00(s,1H),7.58～7.56(m,3H),7.33～7.31(m,1H),6.56(s,1H),4.56(t,J＝5.2Hz,2H),4.47(d,J＝6.0Hz,2H),3.75(t,J＝5.2Hz,2H),3.44(t,J＝5.2Hz,2H),3.20(s,4H),2.35(t,J＝5.2Hz,2H),2.22(t,J＝4.8Hz,4H),1.38(s,9H)。HPLC：98.58％(220nm)，98.17％(215nm)，98.39％(254nm)。MS(ESI)：C₂₅H₃₃Cl₂N₇O₄质量计算值为565.20m/z，实测值为566.2[M+H]⁺。

化合物167

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-(哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮二盐酸盐的制备

该程序产生呈白色固体状的所需化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(2-哌嗪-1-基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(43.3mg，86.11μmol，产率24.39％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ9.52(s,1H),7.62～7.59(m,3H),7.36～7.34(m,1H),7.20(s,1H),4.63(t,J＝5.2Hz,2H),4.47(d,J＝5.2Hz,2H),3.86(t,J＝5.2Hz,2H),3.78(t,J＝3.2Hz,2H),3.64～3.53(m,8H),3.24～3.17(m,2H)。HPLC：99.61％(220nm)，99.52％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₀H₂₇Cl₄N₇O₂质量计算值为465.14m/z，实测值为466.1[M+H]⁺。

化合物168

5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(3-羟基丙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制备

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(3-四氢吡喃-2-基氧基丙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(3-四氢吡喃-2-基氧基丙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(180mg，粗产物)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.02(s,1H),7.59～7.56(m,3H),7.32(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),6.74(s,1H),4.55(t,J＝5.6Hz,2H),4.47(d,J＝6.0Hz,2H),4.41～4.40(m,1H),3.75(t,J＝5.6Hz,2H),3.66～3.60(m,2H),3.54～3.49(m,2H),3.24～3.18(m,2H),1.65～1.60(m,2H),1.59～1.50(m,2H),1.45～1.34(m,4H)。

将5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(3-四氢吡喃-2-基氧基丙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(180mg，362.62μmol，1eq)在MeOH(1mL)和HCl/MeOH(5mL，4M)中的混合物在25℃下搅拌1小时。HPLC显示反应完成。减压浓缩反应混合物以除去溶剂。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Gemini-NX C18 75mm x 30mm 3μm；流动相：[水(10mMNH₄HCO₃)-ACN]；B％：20％-50％，10.5分钟)纯化残余物。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(3-羟基丙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(48.5mg，116.16μmol，产率32.03％，纯度98.74％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.02(s,1H),7.59～7.56(m,3H),7.32(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),6.58(s,1H),4.55(t,J＝5.6Hz,2H),4.47(d,J＝5.6Hz,2H),4.31(t,J＝5.2Hz,1H),3.73(t,J＝5.6Hz,2H),3.39(t,J＝6.4Hz,2H),3.36～3.34(m,2H),1.57～1.51(m,2H)。HPLC：98.74％(220nm)，98.25％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₉Cl₂N₅O₃质量计算值为411.09m/z，实测值412.0[M+H]⁺。

化合物169

5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[3-(2-羟基乙氧基)丙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制备

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备1-[3-(2-苄氧基乙氧基)丙基]-5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物1-[3-(2-苄氧基乙氧基)丙基]-5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(180mg，358.29μmol，产率44.82％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.62～7.54(m,4H),7.33～7.29(m,5H),6.63(s,1H),4.49～4.46(m,4H),3.53～3.49(m,2H),3.39～3.36(m,6H),2.01～1.98(m,2H)。

在N₂气氛下，向1-[3-(2-苄氧基乙氧基)丙基]-5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(150mg，298.57μmol，1eq)在EtOAc(10mL)中的溶液中添加Pd/C(10％，5mg)。将悬浮液脱气并用H₂吹扫3次。将混合物在H₂(15Psi.)下在25℃下搅拌12小时。LC-MS显示反应完成。过滤反应混合物以除去不溶物并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Gemini-NX C18 75mm x 30mm 3μm；流动相：[水(10mM NH₄HCO₃)-ACN]；B％：20％-50％，10.5分钟)纯化残余物。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[3-(2-羟基乙氧基)丙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(6.5mg，15.46μmol，产率5.18％，纯度98.03％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.06(s,1H),7.59～7.55(m,3H),7.32(dd,J＝8.4Hz,1.6Hz,1H),6.56(s,1H),4.54(t,J＝5.6Hz,1H),4.49～4.45(m,4H),3.48～3.44(m,2H),3.34～3.30(m,4H),2.01～1.97(m,2H)。HPLC：98.03％(220nm)，97.71％(215nm)，96.81％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₉Cl₂N₅O₃质量计算值为411.09m/z，实测值为412.2[M+H]⁺。

化合物170

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(吡啶-3-基氧)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(3-吡啶氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(202mg，431.32μmol，产率69.90％，纯度99.873％，HCl)。递送了59.0mg。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.65(d,J＝2.4Hz,1H),8.49(d,J＝5.4Hz,1H),8.12(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),7.92(dd,J＝5.6Hz,8.8Hz,1H),7.72(s,1H),7.68(d,J＝1.6Hz,1H),7.62(d,J＝8.4Hz,1H),7.40(dd,J＝1.6Hz,8.4Hz,1H),4.88(t,J＝4.8Hz,2H),4.74～4.58(m,4H)。HPLC：99.87％(220nm)，99.85％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₁₇Cl₃N₆O₂质量计算值为430.07m/z，实测值为431.1[M+H]⁺。

化合物171

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((2-(羟基甲基)噁唑-4-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

4-((5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基)噁唑-2-羧酸甲酯和4-((5-氯-7-甲氧基-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)甲基)噁唑-2-羧酸甲酯的制备(方案C-3中的步骤1)

向5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(0.4g，2.17mmol，1eq)在THF(5mL)中的溶液中添加PPh₃(852.59mg，3.25mmol，1.5eq)和4-(羟基甲基)噁唑-2-羧酸甲酯(408.59mg，2.60mmol，1.2eq)。然后在0℃下滴加DIAD(657.30mg，3.25mmol，632.02μL，1.5eq)。将混合物在25℃下搅拌12小时。TLC(PE:EtOAc＝1:1)指示反应完成。将反应混合物用H₂O(5mL)淬灭并形成一些白色固体。过滤后收集固体。将固体用EtOAc(2mL)洗涤并减压浓缩。获得呈白色固体状的化合物4-((5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基)噁唑-2-羧酸甲酯(0.45g，1.39mmol，产率64.15％)和4-((5-氯-7-甲氧基-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)甲基)噁唑-2-羧酸甲酯的混合物。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.40(s,1H),8.29(s,1H),5.71(s,2H),4.16(s,3H),3.84(s,3H)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.73(s,1H),8.50(s,1H),5.72(s,2H),4.11(s,3H),3.86(s,3H)。

4-((5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基)噁唑-2-基)甲醇和(4-((5-氯-7-甲氧基-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)甲基)噁唑-2-基)甲醇的制备

在0℃下向4-[(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基]噁唑-2-羧酸甲酯(0.36g，1.11mmol，1eq)和4-[(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)甲基]噁唑-2-羧酸甲酯(1.11mmol，1eq)在MeOH(2mL)中的混合物中分批添加NaBH₄(167.97mg，4.44mmol，4eq)。将混合物在25℃下搅拌13小时。然后在0℃下再次分批添加NaBH₄(167.97mg，4.44mmol，4eq)。将混合物在25℃下搅拌12小时。TLC显示反应完成。将反应混合物用H₂O(10mL)淬灭，然后用EtOAc(15mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL x 1)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得浅黄色油状的化合物(4-((5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基)噁唑-2-基)甲醇(0.27g,913.15μmol，产率82.27％)和(4-((5-氯-7-甲氧基-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)甲基)噁唑-2-基)甲醇的混合物。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.26(s,1H),8.06(s,1H),5.60(s,2H),5.40(d,J＝6.0Hz,2H),4.17(s,3H)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.18(s,1H),8.01(s,1H),5.64(s,2H),5.44(d,J＝6.4Hz,2H),4.11(s,3H)。

5-氯-1-((2-(羟基甲基)噁唑-4-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮和5-氯-2-((2-(羟基甲基)噁唑-4-基)甲基)-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案C-3中的步骤2)

向[4-[(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基]噁唑-2-基]甲醇(0.27g，913.15μmol，1eq)和[4-[(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)甲基]噁唑-2-基]甲醇(913.15μmol，1eq)在H₂O(2mL)和MeOH(4mL)中的混合物中添加LiOH.H₂O(114.95mg，2.74mmol，3eq)。将混合物在25℃下搅拌10小时。TLC显示反应完成。减压浓缩反应混合物。用HCl(3N)将水溶液调节至pH＝6。然后将混合物用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(6mL x 1)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈浅黄色油状的化合物5-氯-1-((2-(羟基甲基)噁唑-4-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(0.25g，粗产物)和5-氯-2-((2-(羟基甲基)噁唑-4-基)甲基)-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的混合物。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.96(s,1H),7.95(s,1H),5.62(s,2H),4.41(d,J＝6.4Hz,2H)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.38(s,1H),8.15(s,1H),5.45(s,2H),4.44(d,J＝6.4Hz,2H)。

(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((2-(羟基甲基)噁唑-4-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮)的制备(方案C-3中的步骤3)

向5-氯-2-[[2-(羟基甲基)噁唑-4-基]甲基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(781.10μmol，1eq)和5-氯-1-[[2-(羟基甲基)噁唑-4-基]甲基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.22g，781.10μmol，1eq)在2-甲基丁-2-醇(5mL)中的混合物中添加(3,4-二氯苯基)甲胺(275.01mg，1.56mmol，208.34L，2eq)。将混合物在130℃下搅拌10小时。LCMS和HPLC显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(TFA条件柱：Phenomenex Luna C18150x30mm 5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：20％-35％，12分钟)纯化残余物。在30℃下减压除去MeCN。将残余物经冻干干燥。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-2-[[2-(羟基甲基)噁唑-4-基]甲基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(33.1mg，78.58μmol，产率10.06％)。获得呈浅黄色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[[2-(羟基甲基)噁唑-4-基]甲基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(30.5mg，68.96μmol，产率8.83％，纯度95.236％)并递送20.1mg。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.90(s,1H),7.59～7.57(m,3H),7.32(d,J＝6.4Hz,1H),6.70(s,2H),5.51(s,2H),4.47(d,J＝6.0Hz,2H),4.41(s,2H)。HPLC：95.24％(220nm)，94.04％(215nm)，97.02％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₄Cl₂N₆O₃质量计算值为420.05m/z，实测值为421.0[M+H]⁺。

化合物172

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((2-(1-甲基哌啶-3-基)噁唑-4-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备3-[4-[[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]甲基]噁唑-2-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物3-[4-[[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]甲基]噁唑-2-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(220mg，382.97μmol，产率97.97％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.82(s,1H),7.61～7.54(m,4H),7.34～7.30(m,1H),6.66(s,1H),5.50(s,2H),4.47(d,J＝6.0Hz,2H),3.90～3.72(m,2H),2.91～2.85(m,3H),2.03～1.99(m,1H),1.70～1.66(m,2H),1.46～1.40(m,1H),1.35(s,9H)。

化合物173

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((2-(哌啶-3-基)噁唑-4-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备

将3-[4-[[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]甲基]噁唑-2-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(40mg，69.63μmol，1eq)在EtOAc(1mL)和HCl/EtOAc(4M，3mL)中的混合物在25℃下搅拌2小时。HPLC显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(HCl条件柱：Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：10％-40％，12分钟)纯化滤液。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[[2-(3-哌啶基)噁唑-4-基]甲基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(17mg，30.86μmol，产率44.33％，纯度92.74％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.93(s,2H),7.92(s,1H),7.62～7.59(m,3H),7.35(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),5.52(s,2H),4.53(d,J＝5.2Hz,2H),3.37～3.20(m,3H),3.09～3.00(m,1H),2.91～2.83(m,1H),2.09～2.05(m,1H),1.83～1.62(m,3H)。HPLC：92.74％(220nm)，88.05％(215nm)，90.43％(254nm)。MS(ESI)：C₂₁H₂₂Cl₃N₇O₂质量计算值为473.11m/z，实测值为474.1[M+H]⁺。

在0℃下向5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[[2-(3-哌啶基)噁唑-4-基]甲基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(130mg，254.50μmol，1eq，HCl)在MeOH(2mL)中的溶液中添加甲醛(61.97mg，763.50μmol，56.85L，纯度37％，3eq)。将混合物在0℃下搅拌10分钟。然后在0℃下添加AcOH(1.53mg，25.45μmol，1.46L，0.1eq)和NaBH₃CN(79.96mg，1.27mmol，5eq)。将混合物在25℃下搅拌10小时。LC-MS显示反应完成。将反应混合物在0℃下用H₂O(2mL)淬灭，然后在减压下浓缩。水相用EtOAc(2mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(2mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(HCl条件柱：Phenomenex Luna C18 150mm x30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：10％-40％，12分钟)纯化残余物。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[[2-(1-甲基-3-哌啶基)噁唑-4-基]甲基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(50.6mg，93.65μmol，产率36.80％，纯度97.14％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.54(s,1H),7.97(s,1H),7.71(s,1H),7.66～7.64(m,2H),7.63(d,J＝8.0Hz,1H),7.36(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),5.53(s,2H),4.57(d,J＝5.2Hz,2H),3.40～3.33(m,3H),3.13～3.04(m,1H),2.91～2.87(m,1H),2.75(d,J＝4.8Hz,3H),2.11～2.08(m,1H),1.89～1.83(m,2H),1.54～1.49(m,1H)。HPLC：97.14％(220nm)，95.64％(215nm)，96.18％(254nm)。MS(ESI)：C₂₂H₂₄Cl₃N₇O₂质量计算值为487.13m/z，实测值为488.1[M+H]⁺。

化合物174

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-((6-(羟基甲基)吡啶-3-基)氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备

5-[2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基]吡啶-2-羧酸甲酯的制备(方案C-3中的步骤1)

在0℃下向5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(400mg，2.17mmol，1eq)、5-(2-羟基乙氧基)吡啶-2-羧酸甲酯(555.51mg，2.82mmol，1.3eq)和PPh₃(852.59mg，3.25mmol，1.5eq)在THF(5mL)中的溶液中滴加DIAD(657.30mg，3.25mmol，632.02μL，1.5eq)。将混合物在25℃下搅拌5小时。TLC显示反应完成。将反应混合物用H₂O(2mL)淬灭并用EtOAc(2mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水(2mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶色谱(

12g

二氧化硅快速柱，洗脱液为45mL/min的0～100％乙酸乙酯/甲醇)纯化残余物。减压除去洗脱液。获得呈白色固体状的化合物5-[2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基]吡啶-2-羧酸甲酯(580mg，1.59mmol，产率73.58％)。获得呈白色固体状的化合物5-[2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)乙氧基]吡啶-2-羧酸甲酯(280mg，769.75μmol，产率35.52％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.30(s,1H),8.25(d,J＝2.8Hz,1H),7.98(d,J＝8.8Hz,1H),7.46(dd,J＝8.8Hz,2.8Hz,1H),4.93(t,J＝5.2Hz,2H),4.63(t,J＝5.2Hz,2H),4.07(s,3H),3.83(s,3H)。

5-[2-(5-氯-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基]吡啶-2-羧酸的制备(方案C-3中的步骤2)

向5-[2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基]吡啶-2-羧酸甲酯(100mg，274.91μmol，1eq)在MeOH(1mL)和H₂O(2mL)中的溶液中添加LiOH.H₂O(34.61mg，824.73μmol，3eq)。将混合物在25℃下搅拌2小时。TLC显示反应完成。减压浓缩反应混合物。用3N HCl使水溶液pH＝6，形成一些白色固体。过滤后收集固体并减压浓缩。获得呈白色固体状的化合物5-[2-(5-氯-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基]吡啶-2-羧酸(95mg，粗产物)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.25(d,J＝2.8Hz,1H),8.00～7.96(m,2H),7.47(dd,J＝8.8Hz,2.8Hz,1H),4.94(t,J＝5.2Hz,2H),4.61(t,J＝5.2Hz,2H)。

化合物175

5-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基)吡啶甲酸盐酸盐的制备(方案C-3中的步骤3)

将5-[2-(5-氯-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基]吡啶-2-羧酸(90mg，268.09μmol，1eq)和(3,4-二氯苯基)甲胺(94.39mg，536.19μmol，71.51L，2eq)在2-甲基-2-丁醇(2mL)中的混合物在140℃下搅拌4小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：15％-45％，12分钟)纯化残余物。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物5-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]吡啶-2-羧酸(45.1mg，86.74μmol，产率32.35％，纯度98.42％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.26(d,J＝2.4Hz,1H),7.98(d,J＝8.8Hz,1H),7.65(s,1H),7.62～7.59(m,2H),7.48(dd,J＝8.4Hz,2.8Hz,1H),7.36(s,1H),7.35(d,J＝8.0Hz,1H),4.85(t,J＝5.2Hz,2H),4.58(t,J＝5.2Hz,2H),4.54(d,J＝4.4Hz,2H)。HPLC：98.42％(220nm)，97.74％(215nm)，99.67％(254nm)。MS(ESI)：C₂₀H₁₇Cl₃N₆O₄质量计算值为474.06m/z，实测值为475.0[M+H]⁺。

[5-[2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基]-2-吡啶基]甲醇的制备

在0℃下向5-[2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基]吡啶-2-羧酸甲酯(150mg，412.37μmol，1eq)在THF(1mL)中的溶液中逐滴添加DIBAL-H(1M，2.06mL，5eq)。然后将混合物在25℃下搅拌6小时。TLC显示反应完成。将反应混合物用H₂O(2mL)淬灭并用EtOAc(2mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(2mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈白色固体状的化合物[5-[2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基]-2-吡啶基]甲醇(130mg，387.20μmol，产率93.90％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.30(s,1H),8.05～8.04(m,1H),7.32～7.31(m,2H),5.27(t,J＝5.6Hz,1H),4.89(t,J＝5.2Hz,2H),4.51(t,J＝5.2Hz,2H),4.45(d,J＝6.0Hz,2H),4.07(s,3H)。

5-氯-1-[2-[[6-(羟基甲基)-3-吡啶基]氧基]乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制备(方案C-3中的步骤2)

向[5-[2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基]-2-吡啶基]甲醇(130mg，387.20μmol，1eq)在MeOH(1mL)和H₂O(1mL)中的溶液中添加LiOH.H₂O(48.74mg，1.16mmol，3eq)。将混合物在25℃下搅拌2小时LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。用3N HCl使水溶液pH＝6并用EtOAc(3mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(3mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈白色固体状的化合物5-氯-1-[2-[[6-(羟基甲基)-3-吡啶基]氧基]乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(100mg，310.83μmol，产率80.28％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.08～8.07(m,1H),8.00(s,1H),7.32(d,J＝2.0Hz,2H),5.27(s,1H),4.90(t,J＝5.2Hz,2H),4.49(t,J＝5.2Hz,2H),4.46(d,J＝4.0Hz,2H)。

根据本文针对方案C-3中的步骤3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-((6-(羟基甲基)吡啶-3-基)氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-[[6-(羟基甲基)-3-吡啶基]氧基]乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(82.6mg，162.01μmol，产率52.12％，纯度97.63％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.40(d,J＝2.8Hz,1H),8.02(dd,J＝8.0Hz,4.0Hz,1H),7.80(d,J＝8.0Hz,1H),7.66～7.59(m,4H),7.35(dd,J＝8.0Hz,4.0Hz,1H),4.86(t,J＝4.8Hz,2H),4.73(s,2H),4.63(t,J＝4.8Hz,2H),4.55(d,J＝5.2Hz,2H)。HPLC：97.63％(220nm)，96.85％(215nm)，97.96％(254nm)。MS(ESI)：C₂₀H₁₉Cl₃N₆O₃质量计算值为460.08m/z，实测值为461.1[M+H]⁺。

化合物176

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((1-(2-甲氧基乙基)-5-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((1-(2-甲氧基乙基)-5-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(306mg，642.75μmol，产率52.34％，纯度97.743％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.62～7.59(m,3H),7.34(d,J＝8.4Hz,1H),6.70(s,1H),4.50～4.46(m,4H),3.39～3.36(m,3H),3.30～3.29(m,2H),3.28～3.19(m,4H),2.75(s,1H),2.34(t,J＝7.6Hz,1H),2.11(dd,J＝6.0Hz,16.8Hz,1H)。HPLC：97.74％(220nm)，97.24％(215nm)，99.81％(254nm)。MS(ESI)：C₂₀H₂₂Cl₂N₆O₃质量计算值为464.11m/z，实测值为465.1[M+H]⁺。

化合物177

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((1-(2-羟基乙基)-5-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

在0℃下向5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[[1-(2-甲氧基乙基)-5-氧代-吡咯烷-3-基]甲基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(50mg，107.45μmol，1eq)在DCM(2mL)中的溶液中逐滴添加BBr₃(80.76mg，322.35μmol，31.06L，3eq)。将混合物在0℃下搅拌1小时。LCMS和HPLC显示反应完成。向混合物中添加冰水(2mL)。用EtOAc(5mL x 3)萃取混合物。合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150mmx 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：20％-50％，12分钟)纯化残余物。将混合物在冷冻干燥下干燥，得到呈白色固体状的5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((1-(2-羟基乙基)-5-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(13.2mg，29.25μmol，产率27.22％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.63～7.53(m,3H),7.32(d,J＝10.0Hz,1H),7.07～6.90(m,1H),4.52～4.40(m,4H),3.23～3.21(m,1H),3.21～3.17(m,2H),3.17～3.07(m,2H),3.03～2.90(m,1H),2.82(d,J＝6.4Hz,1H),2.30～2.24(m,1H),2.08(dd,J＝6.0Hz,16.8Hz,1H)。HPLC:97.85％(220nm)，97.63％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₂₀Cl₂N₆O₃质量计算值为450.10m/z，实测值为451.1[M+H]⁺。

化合物178

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(83.6mg，192.47μmol，产率52.10％，纯度94.451％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.67～7.60(m,3H),7.37(dd,J＝2.0Hz,J＝8.4Hz,1H),4.60～4.54(m,6H),4.54～4.49(m,1H),4.28～4.25(m,2H),3.76(t,J＝5.6Hz,2H)。HPLC：94.45％(220nm)，94.06％(215nm)，95.57％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₇Cl₂N₅O₃质量计算值为409.07m/z，实测值为410.0[M+H]⁺。

化合物179

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(3-(3-羟基环丁氧基)丙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[3-(3-羟基环丁氧基)丙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(88.5mg，200.74μmol，产率37.48％，纯度99.42％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.05(s,1H),7.59～7.57(m,2H),7.54(s,1H),7.32(dd,J＝8.0Hz,2.0Hz,1H),6.61(s,1H),4.97(d,J＝6.8Hz,1H),4.48～4.43(m,4H),3.69～3.60(m,1H),3.42～3.37(m,1H),3.21(t,J＝6.0Hz,2H),2.48～2.43(m,2H),1.99～1.93(m,2H),1.70～1.62(m,2H)。HPLC：99.42％(220nm)，99.21％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₂₁Cl₂N₅O₃质量计算值为437.10m/z，实测值为438.1[M+H]⁺。

化合物180

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(吡啶-4-基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮二盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(吡啶-4-基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮二盐酸盐(12.5mg,27.30μmol，产率18.91％，纯度99.647％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.30～8.19(m,2H),7.68～7.55(m,3H),7.33(d,J＝8.4Hz,1H),7.20(s,1H),6.90(dd,J＝6.4Hz,J＝14.8Hz,2H),5.85(s,1H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),4.07～3.97(m,1H),3.96～3.89(m,1H),3.72(d,J＝6.8Hz,2H),2.62～2.55(m,2H)。HPLC:99.65％(220nm)，99.59％(215nm)，99.68％(254nm)。MS(ESI)：C₂₁H₂₁Cl₄N₇O质量计算值为455.10m/z，实测值为456.1[M+H]⁺。

化合物181

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(吡啶-3-基甲氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(3-吡啶基甲氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(183.7mg,378.49μmol，产率55.10％，纯度99.26％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.83(d,J＝5.6Hz,1H),8.73(s,1H),8.37(d,J＝8.0Hz,1H),8.31(s,1H),8.01～7.98(m,1H),7.69(s,1H),7.68(d,J＝1.6Hz,1H),7.62(d,J＝8.0Hz,1H),7.39(dd,J＝8.0Hz,2.0Hz,1H),4.70～4.64(m,6H),3.94(t,J＝5.2Hz,2H)。HPLC：99.26％(220nm)，99.19％(215nm)，99.61％(254nm)。MS(ESI)：C₂₀H₁₉Cl₃N₆O₂质量计算值为444.09m/z，实测值为445.1[M+H]⁺。

化合物182

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((1-(吡啶-2-基)吡咯烷-2-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮二盐酸盐的制备

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备2-((5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物2-[[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.13g，263.49μmol，产率23.31％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.66～7.61(m,3H),7.37(s,1H),4.58(s,2H),4.45～4.43(m,2H),4.17～4.15(m,1H),3.35～3.20(m,2H),1.76～1.73(m,4H),1.23(m,9H)。

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(吡咯烷-2-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备

向2-[[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.13g，263.49μmol，1eq)在EtOAc(1mL)中的溶液中添加HCl/EtOAc(2mL，4N)将混合物在25℃下搅拌12小时。LCMS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(吡咯烷-2-基甲基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.1g，粗产物)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ9.35(s,1H),8.89(s,1H),7.72(s,1H),7.62～7.60(m,3H),7.37～7.34(m,1H),4.83～4.78(m,1H),4.73～4.59(m,1H),4.55(s,2H),3.94～3.90(m,1H),3.31～3.14(m,2H),1.99～1.86(m,4H)。

向5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(吡咯烷-2-基甲基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.1g，232.70μmol，1eq，HCl)在DMF(1mL)中的溶液中添加2-氟吡啶(45.19mg，465.41μmol，39.99μL，2eq)和K₂CO₃(96.49mg，698.11μmol，3eq)。将混合物在100℃下搅拌12小时。LCMS和HPLC显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(HCl条件柱：Phenomenex Luna C18 150x30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-ACN]；B％：15％-40％，12分钟)纯化残余物。在30℃下减压除去MeCN。将残余物经冻干干燥。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[[1-(2-吡啶基)吡咯烷-2-基]甲基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(37.0mg，72.55μmol，产率31.18％，纯度99.374％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.07(s,3H),7.69～7.63(m,3H),7.37(s,1H),7.23(s,1H),6.93(s,1H),4.59(s,5H),3.64(s,1H),3.43(s,1H),1.97(s,3H),1.76(s,1H)。HPLC：99.37％(220nm)，99.41％(215nm)，99.66％(254nm)。MS(ESI)：C₂₂H₂₃Cl₄N₇O质量计算值为469.12m/z，实测值为470.1[M+H]⁺。

化合物183

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-((1-(二甲基氨基)-3-甲氧基丙-2-基)氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备(2-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基)-3-甲氧基丙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(2-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基)-3-甲氧基丙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.13g，234.04μmol，产率54.07％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.60～7.58(m,3H),7.34(d,J＝8.0Hz,1H),4.55～4.52(m,4H),3.90～3.77(m,1H),3.56～3.51(m,1H),3.25～3.22(m,3H),3.21(s,3H),3.18～3.00(m,2H),2.64(s,3H),1.34(s,9H)。

化合物184

将N-[2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]-3-甲氧基-丙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(0.13g，234.04μmol，1eq)在HCl/EtOAc(2mL)中的溶液在25℃下搅拌10小时。LCMS显示反应完成。减压过滤反应混合物。形成一些浅黄色固体。过滤后收集固体。获得呈浅黄色固体状的化合物5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-((1-甲氧基-3-(甲基氨基)丙烷-2-基)氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(28.5mg，55.75μmol，产率23.82％，纯度96.203％，HCl)以用于递送。获得呈浅黄色固体状的化合物5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-((1-甲氧基-3-(甲基氨基)丙-2-基)氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(80mg，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.68(s,1H),8.45(s,1H),7.63～7.59(m,3H),7.40(s,1H),7.34(d,J＝8.0Hz,1H),4.67～4.59(m,2H),4.53(d,J＝5.6Hz,2H),3.96～3.92(m,2H),3.80(s,1H),3.32(d,J＝4.4Hz,2H),3.19(s,3H),3.04～3.02(m,1H),3.93～3.90(m,1H),2.55(s,3H)。HPLC：96.20％(220nm)，96.13％(215nm)，95.56％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₂₅Cl₃N₆O₃质量计算值为454.13m/z，实测值为455.1[M+H]⁺。

在0℃下向5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-[1-(甲氧基甲基)-2-(甲基氨基)乙氧基]乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(80mg，175.69μmol，1eq)在MeOH(1mL)中的溶液中添加甲醛(42.77mg，527.08mol，39.24L，3eq)和AcOH(1.06mg，17.57μmol，1.00μL，0.1eq)。然后在0℃分批添加NaBH₃CN(33.12mg，527.08μmol，3eq)。将混合物在25℃下搅拌3小时。LCMS和HPLC显示反应完成。向反应混合物中添加H₂O(1mL)。减压过滤混合物。通过制备型HPLC(HCl条件柱：Phenomene x Luna C18 150x30mmx 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-ACN]；B％：15％-45％，12分钟)纯化滤液。在30℃下减压除去MeCN。将残余物经冻干干燥。获得呈白色固体状的化合物5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-((1-(二甲基氨基)-3-甲氧基丙-2-基)氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(40.1mg，79.28μmol，产率45.12％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ9.54(s,1H),7.61～7.59(m,3H),7.33(d,J＝7.6Hz,1H),7.18(s,1H),4.62～4.60(m,2H),4.50(d,J＝4.8Hz,2H),4.00～3.93(m,1H),3.92(s,2H),3.34～3.29(m,2H),3.20(s,3H),3.14～3.13(m,2H),3.71(s,6H)。HPLC：99.40％(220nm)，99.24％(215nm)，99.04％(254nm)。MS(ESI)：C₂₀H₂₇Cl₃N₆O₃质量计算值为468.14m/z，实测值为469.1[M+H]⁺。

化合物185

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-甲氧基-1-(吡啶-3-基)乙氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-甲氧基-1-(吡啶-3-基)乙氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(98.1mg，185.02μmol，产率38.07％，纯度99.172％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.80(d,J＝5.2Hz,1H),8.69(s,1H),8.29(d,J＝8.0Hz,1H),7.96～7.94(m,1H),7.78(s,1H),7.65～7.63(m,3H),7.39～7.37(m,1H),4.78(t,J＝4.0Hz,1H),4.68～4.63(m,1H),4.59～4.58(m,2H),4.56～4.54(m,1H),3.94～3.93(m,1H),3.84～3.82(m,1H),4.54～4.44(m,2H),3.17(s,3H)。HPLC：99.17％(220nm)，99.03％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₂H₂₃Cl₃N₆O₃质量计算值为488.11m/z，实测值为489.1[M+H]⁺。

化合物186

2-(2-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙酸甲酯的制备

2-(2-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙醛的制备

在0℃下向5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.6g，1.36mmol，1eq)(方案C-3中的步骤1至3)在DCM(30mL)中的溶液中分批添加DMP(2.30g，5.43mmol，1.68mL，4eq)。将混合物在25℃下搅拌32小时。TLC(乙酸乙酯：甲醇＝10:1，Rf＝0.58)显示反应完成。将反应混合物在0℃下用H₂O(10mL)淬灭。分离有机层，然后用DCM(10mL x 3)萃取水溶液。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈黄色油状的化合物2-[2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙氧基]乙醛(230mg，粗产物)。

化合物187

2-(2-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙酸)的制备

在0℃下向2-[2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙氧基]乙醛(230mg，522.40μmol，1eq)和2-甲基丁-2-烯(732.74mg，10.45mmol，1.11mL，20eq)在H₂O(1mL)、THF(1mL)和t-BuOH(1mL)中的溶液中分批添加亚氯酸钠(51.97mg，574.63μmol，1.1eq)。将混合物在20℃下搅拌3小时。LC-MS显示反应几乎完成。将反应混合物在20℃下用H₂O(5mL)淬灭，然后用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：纳-微KromasilC18 100mm x 30mm 8μm；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：25％-40％，10分钟)纯化残余物。将水溶液冻干。获得呈棕色固体状的化合物2-[2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙氧基]乙酸(31mg，65.58μmol，产率12.55％，纯度96.527％)。递送了10.8mg。获得呈白色固体状的所需化合物(31mg，65.58μmol，产率12.55％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.66～7.61(m,3H),7.46(s,1H),7.37(dd,J＝1.6Hz,8.4Hz,1H),6.75(s,1H),5.55(s,1H),4.86(s,1H),4.73(d,J＝16.4Hz,1H),4.62(t,J＝5.6Hz,2H),4.45(d,J＝16.4Hz,1H),3.83(t,J＝5.6Hz,2H),3.40(t,J＝4.4Hz,4H)。HPLC：96.53％(220nm)，95.61％(215nm)，94.88％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₁₉Cl₂N₅O₅质量计算值为455.08m/z，实测值为456.1[M+H]⁺。

在0℃下向2-[2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙氧基]乙酸(20mg，43.83μmol，1eq)在MeOH(10mL)中的溶液中滴加SOCl₂(26.07mg，219.16μmol，15.90L，5eq)。将混合物在25℃下搅拌5小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：Xtimate C18 100mm x 30mm 3μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：25％-50％，10分钟)纯化残余物。将水溶液冻干，得到呈白色固体状的2-[2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙氧基]乙酸甲酯(3.6mg，7.37mol，产率16.81％，纯度96.244％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.61～7.56(m,3H),7.33(dd,J＝1.6Hz,8.4Hz,1H),6.70(s,1H),4.62～4.53(m,2H),4.48(d,J＝5.6Hz,2H),4.07(s,1H),4.04(s,1H),3.86(t,J＝5.6Hz,1H),3.79(t,J＝5.6Hz,1H),3.62(s,2H),3.60(s,2H),3.50(s,3H)。HPLC：96.24％(220nm)，96.15％(215nm)，96.33％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₂₁Cl₂N₅O₅质量计算值为469.09m/z，实测值为470.1[M+H]⁺。

化合物188

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-((1,1-二氧四氢-2H-噻喃-4-基)氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

根据本文针对方法C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-((四氢-2H-噻喃-4-基)氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体的所需化合物5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-((四氢-2H-噻喃-4-基)氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(72mg，156.23μmol，产率27.32％，纯度98.591％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.60～7.56(m,3H),7.33(d,J＝8.4Hz,1H),6.68(s,1H),4.55(t,J＝5.6Hz,2H),4.48(d,J＝5.6Hz,2H),3.78(t,J＝5.6Hz,2H),3.27(t,J＝8.0Hz,1H),2.61～2.55(m,2H),2.40～2.37(m,2H),1.93～1.86(m,2H),1.54～1.46(m,2H)。HPLC：98.59％(220nm)，98.28％(215nm)，94.36％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₂₁Cl₂N₅O₂S质量计算值为453.08m/z，实测值为454.1[M+H]⁺。

向5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(2-四氢噻喃-4-基氧基乙基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(30mg，66.03μmol，1eq)在THF(3mL)和H₂O(3mL)中的混合物中添加RuCl₃(1.37mg，6.60μmol，0.44L，0.1eq)，然后在0℃下向混合物中添加NaIO₄(56.49mg，264.10μmol，14.63μL，4eq)。将混合物在50℃下搅拌16小时。LC-MS和HPLC显示反应完成。将混合物倒入H₂O(5mL)中，然后用EtOAc(5mL x 3)萃取。合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：纳-微Kromasil C18 100x30mm 8μm；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：20％-50％，10分钟)纯化残余物。在减压下浓缩混合物，得到呈白色固体状的5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-((1,1-二氧桥四氢-2H-噻喃-4-基)氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(8.6mg,16.87μmol，产率25.55％，纯度95.423％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.61～7.56(m,3H),7.33(d,J＝8.4Hz,1H),6.73(s,1H),4.59(t,J＝5.2Hz,2H),4.48(d,J＝5.6Hz,2H),3.79(t,J＝5.2Hz,2H),3.61～3.60(m,1H),2.94～2.84(m,4H),1.95(d,J＝4.4Hz,4H)。HPLC：95.42％(220nm)，93.82％(215nm)，94.82％(254nm)。MS(ESI)：C1₉H₂₁Cl₂N₅O₄S质量计算值为485.07m/z，实测值为486.0[M+H]⁺。

化合物189

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(3,4-二羟基苄基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

化合物190

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(3,4-二甲氧基苄基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(40mg，86.90μmol，产率36.44％，纯度100.00％)。递送了5.8mg。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.60～7.54(m,3H),7.32(dd,J＝2.0,8.4Hz,1H),6.95(d,J＝1.6Hz,1H),6.86(d,J＝8.4Hz,1H),6.74(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,2H),5.52(s,2H),4.47(d,J＝5.6Hz,2H),3.69(d,J＝1.2Hz,6H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₁H₁₉Cl₂N₅O₃质量计算值为459.09m/z，实测值为460.0[M+H]⁺。

在0℃下向5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(30mg，65.17μmol，1eq)在DCM(1mL)中的溶液中滴加BBr₃(65.31mg，260.69μmol，25.12L，4eq)。将混合物在25℃下搅拌1小时。LC-MS显示反应完成。将反应混合物在0℃下用H₂O(0.1mL)淬灭，然后在减压下浓缩。通过制备型HPLC(柱：纳-微KromasilC18 100mm x 30mm 8μm；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：20％-45％，10分钟)纯化残余物。将溶液冻干，得到呈灰色固体状的5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[(3,4-二羟基苯基)甲基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(7.2mg，15.48μmol，产率23.75％，纯度92.908％)。获得呈灰色固体状的所需化合物(7.2mg，15.48μmol，产率23.75％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.88(s,1H),7.58(d,J＝7.6Hz,3H),7.58(d,J＝7.2Hz,1H),6.72～6.60(m,3H),6.58～6.52(m,1H),5.41(s,2H),4.47(d,J＝6.0Hz,2H)。HPLC：92.91％(220nm)，91.72％(215nm)，91.74％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₁₅Cl₂N₅O₃质量计算值为431.06m/z，实测值为432.0[M+H]⁺。

化合物191

(E)-2-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基)乙醛肟的制备

2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙醛的制备

在0℃下向5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(70mg，175.77μmol，1eq)在DCM(10mL)中的溶液中分批添加DMP(134.19mg，316.39μmol，97.95μL，1.8eq)。将混合物在25℃下搅拌15小时。LCMS显示反应完成。将混合物用H₂O(5mL)淬灭并减压除去有机溶剂。水相用EtOAc(5mL x 5)萃取。将合并的有机层用饱和NaHCO₃(4mL x 1)和盐水(4mL x 1)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈白色固体状的化合物2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙醛(60mg，151.43μmol，产率86.15％)。

在0℃下向2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙醛(50mg，126.19μmol，1eq)在EtOH(2mL)中的溶液中添加NH₂OH.HCl(17.54mg，252.38μmol，2eq)和TEA(31.92mg，315.48μmol，43.91μL，2.5eq)。将混合物在25℃下搅拌10小时。LCMS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(中性条件柱：Phenomenex Gemini-NX C18 75mm x 30mm 3μm；流动相：[水(10mM NH₄HCO₃)-ACN]；B％：25％-50％，10.5分钟)纯化残余物。在30℃下减压除去MeCN。将残余物经冻干干燥。获得呈白色固体状的化合物(1E)-2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙醛肟(15.0mg，35.10μmol，产率27.81％，纯度96.223％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.09(s,0.5H),11.01(s,1H),10.91(s,0.5H),7.59～7.57(m,3H),7.32(dd,J＝8.8Hz,J＝2.4Hz,1H),7.25(t,J＝8.0Hz,1H),6.65(t,J＝8.0Hz,1H),6.58(s,1H),4.58(t,J＝6.4Hz,2H),4.47(d,J＝6.0Hz,2H),4.18(d,J＝4.0Hz,1H),3.94(d,J＝6.4Hz,1H),3.83～3.77(m,1H),3.34(s,1H)。HPLC：96.22％(220nm)，94.69％(215nm)，93.56％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₆Cl₂N₆O₃质量计算值为410.07m/z，实测值为411.0[M+H]⁺。

化合物192

(E)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(4-甲氧基丁-2-烯-1-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

(E)-1-(4-溴丁-2-烯-1-基)-5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶的制备(方案C-3中的步骤1)

向(E)-1,4-二溴丁-2-烯(2.90g，13.54mmol，5eq)在DMF(5mL)中的溶液中添加Cs₂CO₃(1.77g，5.42mmol，2eq)。然后在0℃滴加在DMF的5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(0.5g，2.71mmol，1eq)。将混合物在25℃下搅拌1小时。LCMS显示反应完成。添加H₂O(10mL)。用EtOAc(15mL x 3)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水(10mL x 2)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶色谱(

12g

硅胶快速柱，洗脱液为50mL/min的0～50％乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化残余物。获得呈浅黄色固体状的化合物(E)-1-(4-溴丁-2-烯-1-基)-5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(0.4g，1.26mmol，产率46.50％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.27(s,1H),6.09-6.01(m,1H),5.82-5.73(m,1H),5.16(d,J＝5.6Hz,2H),4.16(s,3H),4.11(d,J＝7.6Hz,2H)。获得呈白色固体状的化合物2-[(E)-4-溴丁-2-烯基]-5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶(0.28g，881.70μmol，产率32.55％)。

(E)-5-氯-7-甲氧基-1-(4-甲氧基丁-2-烯-1-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶的制备

向1-[(E)-4-溴丁-2-烯基]-5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶(0.12g，377.87μmol，1eq)在MeOH(1.5mL)中的溶液中添加NaOMe(30.62mg，566.81μmol，1.5eq)。将混合物在25℃下搅拌12小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。获得呈白色固体状的化合物(E)-5-氯-7-甲氧基-1-(4-甲氧基丁-2-烯-1-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(0.12g，粗产物)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.26(s,1H),5.90～5.84(m,1H),5.63～5.56(m,1H),5.14(d,J＝5.6Hz,2H),4.15(s,3H),3.83(d,J＝4.0Hz,2H),3.17(s,3H)。

(E)-5-氯-1-(4-甲氧基丁-2-烯-1-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案C-3中的步骤2)

向5-氯-7-甲氧基-1-[(E)-4-甲氧基丁-2-烯基]吡唑并[4,3-d]嘧啶(0.12g，446.60μmol，1eq)在H2O(1mL)和THF(1mL)中的溶液中添加LiOH.H₂O(56.22mg，1.34mmol，3eq)。将混合物在25℃下搅拌10小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物以除去THF。然后将混合物用HCl(2N)调节pH＝5，并用EtOAc(10mL x 5)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL x 1)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈白色固体状的化合物(E)-5-氯-1-(4-甲氧基丁-2-烯-1-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(70mg，粗产物)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ13.30(s,1H),7.98(s,1H),5.88-5.82(m,1H),5.61-5.55(m,1H),5.13(d,J＝4.8Hz,2H),3.82(d,J＝4.4Hz,2H),3.18(s,3H)。

(E)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(4-甲氧基丁-2-烯-1-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案C-3中的步骤3)

向5-氯-1-[(E)-4-甲氧基丁-2-烯基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(70mg，274.86mol，1eq)在t-BuOH(2mL)的溶液中添加(3,4-二氯苯基)甲胺(96.78mg，549.73μmol，73.31μL，2eq)。将混合物在100℃下搅拌12小时。LC-MS和HPLC显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(TFA条件柱：纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：30％-45％，10分钟)纯化残余物。获得呈白色固体状的化合物(E)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(4-甲氧基丁-2-烯-1-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(54.8mg，133.12μmol，产率48.43％，纯度95.77％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.07(s,1H),7.59～7.57(m,3H),7.32(d,J＝10.0Hz,1H),6.60(s,1H),5.85～5.80(m,1H),5.55～5.51(m,1H),5.03(d,J＝5.2Hz,2H),4.47(d,J＝5.6Hz,2H),3.81(d,J＝5.6Hz,2H),3.17(s,3H)。HPLC：95.77％(220nm)，95.00％(215nm)，96.86％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₇Cl₂N₅O₂质量计算值为393.08m/z，实测值为394.1[M+H]⁺。

化合物193

(E)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(4-(2-甲氧基乙氧基)丁-2-烯-1-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

2-甲氧基乙醇钠的制备

在0℃下向NaH(683.36mg，17.08mmol，2.05μL，纯度60％，1.3eq)在CH₃-THF(10mL)中的溶液中滴加2-甲氧基乙醇(1g，13.14mmol，1.04mL，1eq)。将混合物在0℃下搅拌2小时。TLC显示反应完成。减压浓缩反应混合物。获得呈白色固体状的化合物2-甲氧基乙醇钠(0.4g，4.08mmol，产率31.03％)。

(E)-5-氯-7-(2-甲氧基乙氧基)-1-(4-(2-甲氧基乙氧基)丁-2-烯-1-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶的制备

向2-甲氧基乙氧基钠(74.12mg，755.74μmol，1.5eq)在2-甲氧基乙醇(2mL)中的溶液中添加1-[(E)-4-溴丁-2-烯基]-5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶(0.16g，503.83μmol，1eq)。将混合物在25℃下搅拌1小时。LC-MS显示反应完成。添加H₂O(5mL)。用EtOAc(10mL x 3)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水(5mL x 2)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶色谱(

4g

硅胶快速柱，洗脱液为36mL/min的0～60％乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化残余物。然后在减压下浓缩洗脱液。获得呈黄色油状的化合物(E)-5-氯-7-(2-甲氧基乙氧基)-1-(4-(2-甲氧基乙氧基)丁-2-烯-1-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(70mg，196.19μmol，产率38.94％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.26(s,1H),5.90～5.85(m,1H),5.72～5.67(m,1H),5.13(d,J＝5.6Hz,2H),4.68(dd,J＝6.4Hz,4.4Hz,2H),3.91(d,J＝4.8Hz,2H),3.78(d,J＝2.0Hz,2H),3.44～3.40(m,4H),3.39(s,3H),3.20(s,3H)。

(E)-5-氯-1-(4-(2-甲氧基乙氧基)丁-2-烯-1-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案C-3中的步骤2)

向5-氯-7-(2-甲氧基乙氧基)-1-[(E)-4-(2-甲氧基乙氧基)丁-2-烯基]吡唑并[4,3-d]嘧啶(70mg，196.19μmol，1eq)在H2O(1mL)和TH F(1mL)中的溶液中添加LiOH.H₂O(24.70mg，588.56μmol，3eq)。将混合物在25℃下搅拌10小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物以除去THF。将混合物用HCl(2N)调节pH＝5，然后用EtOAc(10mL x 5)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL x 1)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈浅黄色油状的化合物(E)-5-氯-1-(4-(2-甲氧基乙氧基)丁-2-烯-1-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(60mg，粗产物)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ13.30(s,1H),7.98(s,1H),5.89～5.83(m,1H),5.61～5.54(m,1H),4.13(d,J＝5.6Hz,2H),3.90(d,J＝5.2Hz,2H),3.46～3.41(m,4H),3.21(s,3H)。

(E)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(4-(2-甲氧基乙氧基)丁-2-烯-1-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案C-3中的步骤3)

向5-氯-1-[(E)-4-(2-甲氧基乙氧基)丁-2-烯基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(60mg，200.85μmol，1eq)在t-BuOH(2mL)中的溶液中添加(3,4-二氯苯基)甲胺(70.72mg，401.71μmol，53.57L，2eq)。将混合物在100℃下搅拌12小时。LC-MS和HPLC显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(TFA条件柱：Boston Prime C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：30％-55％，10分钟)纯化。在30℃下减压除去MeCN。将残余物经冻干干燥。获得呈白色固体状的化合物(E)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(4-(2-甲氧基乙氧基)丁-2-烯-1-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(59.8mg，136.43μmol，产率67.93％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.60～7.57(m,3H),7.33(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),6.74(s,1H),5.87～5.79(m,1H),5.56～5.50(m,1H),4.03(d,J＝5.2Hz,2H),4.48(d,J＝5.6Hz,2H),3.88(t,J＝4.0Hz,2H),3.45～3.39(m,4H),3.21(s,3H)。HPLC：99.52％(220nm)，99.29％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₂₁Cl₂N₅O₃质量计算值为437.10m/z，实测值为438.1[M+H]⁺。

化合物194

4-((5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基)哌啶-4-甲酸乙酯盐酸盐的制备

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备4-((5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基)哌啶-1,4-二羧酸1-叔丁酯4-乙酯。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物4-[[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]甲基]哌啶-1,4-二羧酸1-叔丁酯4-乙酯(0.22g，379.65μmol，产率66.80％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.59～7.57(m,3H),7.32(d,J＝8.4Hz,1H),8.82(s,1H),4.61(s,2H),4.46(d,J＝6.0Hz,2H),4.04(q,J＝6.8Hz,2H),3.76～3.73(m,2H),2.78～2.74(m,2H)。1.85～1.81(m,2H),1.45～1.37(m,11H),1.12(t,J＝6.8Hz,3H)。

4-((5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基)-4-(羟基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

在0℃下向4-[[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]甲基]哌啶-1,4-二羧酸O1-叔丁酯O4-乙酯(0.1g，172.57μmol，1eq)在THF(3mL)中的溶液中添加LiBH₄(15.04mg，690.28μmol，4eq)。然后将混合物在55℃下搅拌6小时。LCMS和TLC显示反应完成。将混合物用冰水(2mL)淬灭并减压除去有机溶剂。水相用EtOAc(5mL x4)萃取。将合并的有机层用盐水(2mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈白色固体状的4-[[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]甲基]-4-(羟基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(90mg，167.46μmol，产率97.04％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.61～7.30(m,3H),7.30(dd,J＝8.0Hz,2.0Hz,1H),4.57(d,J＝5.6Hz,2H),4.47(s,2H),3.40～3.30(m,4H)。3.09(s,2H),1.88～1.94(m,2H),1.38～1.26(m,11H)。

化合物195

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((4-(羟基甲基)哌啶-4-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备

向4-[[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]甲基]-4-(羟基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.13g，241.89μmol，1eq)在EtOAc(4mL)中的混合物中添加HCl/EtOAc(4M，6.05mL，100eq)并将混合物在20℃下搅拌2小时。LCMS显示反应完成。形成一些白色固体。过滤后，收集固体。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 100mmx 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：10％-35％，12分钟)纯化固体。减压除去洗脱液。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[[4-(羟基甲基)-4-哌啶基]甲基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(102mg，210.83μmol，产率87.16％，纯度97.93％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.70(s,1H),8.51(s,1H),7.95(s,1H),7.71(s,1H),7.66～7.61(m,2H),7.38(dd,J＝8.0Hz,2.0Hz,1H),4.59(d,J＝4.4Hz,2H),4.50(s,2H),3.37(s,2H)。3.08～3.03(m,4H),1.68～1.64(m,2H),1.51～1.45(m,2H)。HPLC：97.93％(220nm)，97.47％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₂₃Cl₃N₆ O₂质量计算值为436.12m/z，实测值437.1[M+H]⁺。

1-(叔丁氧基羰基)-4-((5-氯-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基)哌啶-4-羧酸的制备(方案C-3中的步骤2)

将4-[(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基]哌啶-1,4-二羧酸O1-叔丁酯O4-乙酯(0.1g，220.30umol，1eq)和LiOH.H₂O(46.22mg，1.10mmol，5eq)在MeOH(1mL)、THF(1mL)和H₂O(1mL)中的溶液在20℃下搅拌3小时。然后添加NaOH(17.62mg，440.61μmol，2eq)并将混合物在70℃下搅拌5小时。TLC显示反应完成。减压除去有机溶剂。用2N HCl缓慢地使水溶液pH＝6～7并形成一些固体。过滤后收集固体。然后用EtOAc(10mL x 3)萃取水相。将合并的有机层用盐水(5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈白色固体状的1-叔丁氧基羰基-4-[(5-氯-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基]哌啶-4-羧酸(80mg，194.25μmol，产率88.17％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.94(s,1H),4.71(s,2H),3.76～3.72(m,2H),2.80～2.79(m,2H),1.91～1.84(m,2H),1.40～1.35(m,11H)。

1-(叔丁氧基羰基)-4-((5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基)哌啶-4-羧酸的制备(方案C-3中的步骤3)

将(3,4-二氯苯基)甲胺(68.39mg，388.50μmol，51.81μL，2eq)和1-叔丁氧基羰基-4-[(5-氯-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基]哌啶-4-羧酸(80mg，194.25μmol，1eq)在t-BuOH(2mL)中的溶液在100℃下加热30小时。LCMS显示反应几乎完成。减压除去溶剂。获得呈灰白色固体状的化合物1-叔丁氧基羰基-4-[[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]甲基]哌啶-4-羧酸(0.13g，粗产物)。MS(ESI)：C₂₄H₂₈Cl₂N₆O₅质量计算值为550.15m/z，实测值为495.0[M+H-Boc]⁺。

化合物196

4-((5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基)哌啶-4-羧酸盐酸盐的制备

向1-叔丁氧基羰基-4-[[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]甲基]哌啶-4-羧酸(0.11g，199.48μmol，1eq)在EtOAc(5mL)中的混合物中添加HCl/EtOAc(4M，4.99mL，100eq)并将混合物在20℃下搅拌2小时。LCMS显示反应完成。形成一些固体。过滤后，收集固体。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：10％-40％，12分钟)纯化固体。在冷冻干燥下干燥洗脱液。获得呈白色固体状的化合物4-[[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]甲基]哌啶-4-羧酸(40.2mg，81.00μmol，产率40.60％，纯度98.28％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.77～8.75(m,1H),8.44～8.42(m,1H),7.65(s,1H),7.61～7.59(m,2H),7.25(dd,J＝8.0Hz,2.0Hz,1H),7.33～7.32(m,1H),4.65(s,2H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),3.24～3.21(m,2H),2.77～2.66(m,2H),2.00～1.97(m,2H),1.73～1.67(m,2H)。HPLC：98.28％(220nm)，98.41％(215nm)，95.91％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₂₁Cl₃N₆O₃质量计算值为450.10m/z，实测值为451.0[M+H]⁺。

4-((5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基)哌啶-4-羧酸乙酯盐酸盐的制备

向4-[[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]甲基]哌啶-1,4-二羧酸O1-叔丁酯O4-乙酯(30mg，51.77μmol，1eq)在EtOAc(1mL)中的混合物中添加HCl/EtOAc(4M，1.29mL，100eq)并将混合物在20℃下搅拌2小时。TLC显示反应完成。形成一些白色固体。过滤后，收集固体。将固体减压浓缩，得到呈白色固体状的4-[[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]甲基]哌啶-4-羧酸乙酯(15.6mg，29.46μmol，产率56.90％，纯度97.41％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.77～8.74(m,1H),8.52～8.48(m,1H),7.63(s,1H),7.60～7.58(m,2H),7.33(dd,J＝8.4Hz,1.6Hz,1H),7.09～7.07(m,1H),4.65(s,2H),4.49(d,J＝5.6Hz,2H),4.07(q,J＝7.2Hz,2H),3.27～3.23(m,2H),2.77～2.67(m,2H),2.02～1.99(m,2H),1.79～1.76(m,2H),1.15(t,J＝7.2Hz,3H)。HPLC：97.41％(220nm)，96.42％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₁H₂₅Cl₃N₆O₃质量计算值为478.13m/z，实测值为479.1[M+H]⁺。

化合物197

2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-N-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)乙酰胺的制备

2-(5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙酰胺的制备(方案C-3中的步骤1)

向5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(700mg，3.79mmol，1eq)和2-氯乙酰胺(709.26mg，7.58mmol，2eq)在DMF(5mL)中的溶液中添加K₂CO₃(1.05g，7.58mmol，2eq)。将混合物在70℃下搅拌10小时。TLC显示反应完成。将混合物倒入H₂O(7mL)中并用HCl(2M)将混合物调节至pH＝7。用DCM和i-PrOH(3:1,10mL x 3)萃取混合物。将合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈白色固体状的2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙酰胺(900mg，3.72mmol，产率98.21％)和2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)乙酰胺的混合物。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.26(s,1H),5.12(s,2H),4.11(s,3H)。

2-(5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-N-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)乙酰胺的制备

在0℃下向2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙酰胺(392mg，1.62mmol，1eq)和2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)乙酰胺(1.00eq)在DMF(5mL)中的混合物中滴加DIEA(1.05g，8.11mmol，1.41mL，5eq)和SEM-Cl(1.03g，6.16mmol，1.09mL，3.8eq)。然后将混合物在40℃下搅拌10小时。TLC显示反应完成。将混合物倒入H₂O(5mL)中并在0℃下用HCl(3M)调节至pH＝7。用EtOAc(8mL x 3)萃取混合物。合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶色谱(

4g

硅胶快速柱，洗脱液为40mL/min的0～55％乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化残余物。将洗脱液减压浓缩，得到呈白色固体状的2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-N-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)乙酰胺(30mg，80.67μmol，产率4.97％)和2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)-N-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)乙酰胺(60mg，161.34μmol，产率9.94％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.29(s,1H),5.21(s,2H),4.53(d,J＝6.8Hz,2H),4.11(s,3H),3.44(t,J＝8.4Hz,2H),1.24(s,2H),-0.02(s,9H)。

2-(5-氯-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-N-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)乙酰胺的制备(方案C-3中的步骤2)

向2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-N-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)乙酰胺(75mg，201.67μmol，1eq)在MeOH(1mL)和H₂O(1mL)中的溶液中添加LiOH.H₂O(25.39mg，605.01μmol，3eq)。将混合物在25℃下搅拌10小时。LCMS显示反应完成。减压浓缩混合物，然后用HCl(2M)将水溶液调节至pH＝7。水相用EtOAc(3mL x 3)萃取。将合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈白色固体状的2-(5-氯-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-N-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)乙酰胺(72mg，201.19μmol，产率99.76％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.99(s,1H),5.19(s,2H),4.52(d,J＝6.4Hz,2H),3.49～3.41(m,2H),0.84～0.82(m,2H),-0.02(s,9H)。

2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-N-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)乙酰胺的制备(方案C-3中的步骤3)

将2-(5-氯-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-N-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)乙酰胺(50mg，139.72μmol，1eq)和(3,4-二氯苯基)甲胺(49.19mg，279.43μmol，37.27μL，2eq)在t-BuOH(2mL)中的溶液在110℃下搅拌10小时。LCMS显示反应完成。在减压下浓缩混合物。通过制备型HPLC(柱：Welch Xtimate C18 100mm x 25mm 3μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：40％-60％，12分钟)纯化残余物。将混合物在冷冻干燥下干燥。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：45％-65％，12分钟)对残留物进行第二次纯化。将混合物在冷冻干燥下干燥，得到呈白色固体状的2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]-N-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)乙酰胺(5.4mg，10.20μmol，产率7.30％，纯度94.00％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.08(s,1H),8.71(t,J＝6.0Hz,1H),7.58～7.55(m,3H),7.31(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),6.64(s,1H),5.06(s,2H),4.47(t,J＝6.4Hz,4H),3.40(s,2H),0.82～0.77(m,2H),-0.04(s,9H)。HPLC：94.00％(220nm)，92.65％(215nm)，76.77％(254nm)。MS(ESI)：C₂₀H₂₆Cl₂N₆O₃Si质量计算值为496.12m/z，实测值为497.1[M+H]⁺。

化合物198

5-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-N,2,2-三甲基戊酰胺的制备

化合物199

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-2,2-二甲基戊酸。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物5-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]-2,2-二甲基-戊酸(93.4mg，212.99μmol，产率42.42％，纯度99.953％)。递送了26.3mg。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.65～7.51(m,3H),7.33(d,J＝8.0Hz,1H),6.80(s,1H),4.48(d,J＝4.4Hz,2H),4.39(s,2H),1.72(s,2H),1.44～1.33(m,2H),1.03(s,6H)。HPLC：99.95％(220nm)，99.94％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₂₁Cl₂N₅O₃质量计算值为437.10m/z，实测值为438.1[M+H]⁺。

将5-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]-2,2-二甲基-戊酸(30mg，68.45μmol，1eq)、甲胺盐酸盐(9.24mg，136.89μmol，2eq)、EDCI(15.75mg，82.13μmol，1.2eq)、HOBt(1.85mg，13.69μmol，0.2eq)和DIEA(26.54mg，205.34μmol，35.77μL，3eq)在DMF(1mL)中的混合物在20℃下搅拌16小时。LC-MS显示反应完成。过滤后，通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：15％-35％，12分钟)纯化滤液。将水溶液冻干，得到呈灰白色固体状的化合物5-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]-N,2,2-三甲基-戊酰胺(12.7mg，27.80μmol，产率40.62％，纯度98.800％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.64(d,J＝1.2Hz,1H),7.61(t,J＝3.6Hz,2H),7.36(d,J＝6.8Hz,2H),4.56(d,J＝4.4Hz,2H),4.37(t,J＝6.8Hz,2H),2.52(s,3H),1.72～1.55(m,2H),1.42～1.29(m,2H),1.00(s,6H)。HPLC：98.80％(220nm)，98.35％(215nm)，98.34％(254nm)。MS(ESI)：C₂₀H₂₄Cl₂N₆O₂质量计算值为450.13m/z，实测值为451.1[M+H]⁺。

化合物200

5-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-N-甲基-2-苯基戊酰胺的制备

2-(3-(5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙基)-2-苯基丙二酸二乙酯的制备(方案C-3中的步骤1)

将5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(300mg，1.63mmol，1eq)、2-(3-溴丙基)-2-苯基-丙二酸二乙酯(870.92mg，2.44mmol，470.47μL，1.5eq)和Cs₂CO₃(1.06g，3.25mmol，2eq)在DMF(3mL)中的混合物在25℃下搅拌5小时。TLC显示反应完成。将反应混合物用H₂O(5mL)淬灭，并用EtOAc(5mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL x 3)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶色谱(

4g

硅胶快速柱，洗脱液为65mL/min的0～40％乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化残余物。减压除去洗脱液。获得呈无色油状的化合物2-[3-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙基]-2-苯基-丙二酸二乙酯(450mg，976.33μmol，产率60.07％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ7.99(s,1H),7.27(s,5H),4.51(t,J＝6.8Hz,2H),4.22～4.16(m,7H),2.29～2.25(m,2H),1.88～1.84(m,2H),1.25～1.18(m,6H)。获得呈无色油状的化合物2-[3-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)丙基]-2-苯基-丙二酸二乙酯(270mg，585.80μmol，产率36.04％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ7.94(s,1H),7.32～7.27(m,5H),4.40(t,J＝7.2Hz,2H),4.24～4.20(m,7H),2.29～2.24(m,2H),2.00～1.96(m,2H),1.23～1.20(m,6H)。

5-(5-氯-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-2-苯基戊酸的制备

将2-[3-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙基]-2-苯基-丙二酸二乙酯(200mg，433.92μmol，1eq)和NaOH(104.13mg，2.60mmol，6eq)在MeOH(1mL)和H₂O(1mL)中的混合物在80℃下搅拌3小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。用3N HCl使水溶液pH＝6并用EtOAc(6mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(6mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈白色固体状的化合物5-(5-氯-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-2-苯基-戊酸(175mg，粗产物)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ13.27(s,1H),12.25(s,1H),7.94(s,1H),7.29～7.20(m,5H),4.51(t,J＝6.4Hz,2H),3.49(t,J＝7.6Hz,1H),1.90～1.58(m,4H)。

化合物201

5-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-2-苯基戊酸的制备(方案C-3中的步骤3)

将5-(5-氯-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-2-苯基-戊酸(175mg，504.66μmol，1eq)和(3,4-二氯苯基)甲胺(177.68mg，1.01mmol，134.61μL，2eq)在2-甲基-2-丁醇(3mL)中的混合物在140℃下搅拌4小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 8μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：45％-60％，10分钟)纯化残余物。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物5-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]-2-苯基-戊酸(131.2mg，264.99μmol，产率52.51％，纯度98.23％)。递送了31.2mg。.¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.60～7.56(m,3H),7.34～7.20(m,6H),6.82(s,1H),4.48(d,J＝5.2Hz,2H),4.42(t,J＝6.0Hz,2H),3.49(t,J＝8.0Hz,1H),1.87～1.82(m,1H),1.76～1.70(m,1H),1.68～1.62(m,1H),1.60～1.51(m,1H)。HPLC：98.23％(220nm)，97.82％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₃H₂₁Cl₂N₅O₃质量计算值为485.10m/z，实测值为486.1[M+H]⁺。

将5-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]-2-苯基-戊酸(30mg，61.68μmol，1eq)、甲胺盐酸盐(8.33mg，123.37μmol，2eq)、DIEA(23.92mg，185.05μmol，32.23μL，3eq)、HOBt(1.67mg，12.34μmol，0.2eq)和EDCI(14.19mg，74.02μmol，1.2eq)在DMF(0.5mL)中的混合物在25℃下搅拌12小时。LC-MS显示反应完成。过滤反应混合物以除去不溶物。通过制备型HPLC(HCl条件柱：Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.04％HCl)-MeCN]；B％：25％-50％，12分钟)纯化滤液。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物5-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]-N-甲基-2-苯基-戊酰胺(13.8mg，27.59μmol，产率44.73％，纯度99.85％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.94(s,1H),7.78(s,1H),7.65～7.60(m,3H),7.37(d,J＝7.2Hz,1H),7.24～7.19(m,5H),4.57(s,2H),4.42(s,2H),3.38(s,1H),2.50(s,3H),1.85～1.84(m,1H),1.71～1.57(m,2H),1.53～1.51(m,1H)。HPLC：99.85％(220nm)，99.93％(215nm)，99.21％(254nm)。MS(ESI)：C₂₄H₂₄Cl₂N₆O₂质量计算值为498.13m/z，实测值为499.1[M+H]⁺。

化合物202

5-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-2-甲基戊酸的制备

根据本文针对方案C-3中的步骤1所述的程序制备2-(3-(5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙基)-2-甲基丙二酸二乙酯。

将5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(0.3g，1.63mmol，1eq)、2-(3-溴丙基)-2-甲基-丙二酸二乙酯(623.65mg，2.11mmol，201.22μL，1.3eq)和Cs₂CO₃(1.06g，3.25mmol，2eq)在DMF(2mL)中的混合物在25℃下搅拌4小时。TLC指示反应完成。将反应混合物在20℃下用H₂O(15mL)淬灭，然后用EtOAc(15mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶色谱(

12g

硅胶快速柱，洗脱剂为35mL/min的0～30％乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化残余物。减压除去洗脱液。获得呈白色固体状的化合物2-[3-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙基]-2-甲基-丙二酸二乙酯(440mg，1.10mmol，产率67.88％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.25(s,1H),4.51(t,J＝5.6Hz,2H),4.16(s,3H),4.05(q,J＝7.2Hz,4H),1.73(s,4H),1.27(s,3H),1.09(t,J＝6.8Hz,6H)。

5-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-2-甲基戊酸的制备(方案C-3中的步骤2)

将2-[3-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙基]-2-甲基-丙二酸二乙酯(380mg，952.76μmol，1eq)和NaOH(266.77mg，6.67mmol，7eq)在H₂O(2mL)和MeOH(2mL)中的混合物在100℃下搅拌3小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。用HCl(3M)将水溶液调节至pH＝5，并用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈白色固体状的化合物2-[3-(5-氯-7-羟基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)丙基]-2-甲基-丙二酸(230mg，699.71μmol，产率73.44％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ13.27(s,1H),12.66(s,1H),7.96(s,1H),4.50(t,J＝6.4Hz,2H),1.80～1.69(m,2H),1.68～1.60(m,2H),1.20(s,3H)。

将2-[3-(5-氯-7-羟基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)丙基]-2-甲基-丙二酸(170mg，517.18μmol，1eq)和(3,4-二氯苯基)甲胺(182.09mg，1.03mmol，137.95μL，2eq)在2-甲基丁-2-醇(3mL)中的混合物在140℃下搅拌16小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 8μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：30％-50％，10分钟)纯化残余物。冻干除去水溶液，得到呈白色固体状的化合物5-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]-2-甲基-戊酸(80mg，187.63μmol，产率36.28％，纯度99.510％)。递送了30.0mg。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.65～7.55(m,3H),7.33(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),6.84(s,1H),4.49(d,J＝5.6Hz,2H),4.41(t,J＝7.2Hz,2H),2.35～2.26(m,1H),1.76(m,2H),1.53～1.41(m,1H),1.31～1.19(m,1H),1.00(d,J＝6.8Hz,3H)。HPLC：99.51％(220nm)，99.27％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₁₉Cl₂N₅O₃质量计算值为423.09m/z，实测值为424.1[M+H]⁺。

化合物203

5-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)戊酸乙酯的制备

在0℃下向5-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]戊酸(60mg，146.25μmol，1eq)(方案C-3中的步骤1至3)在EtOH(2mL)中的溶液中滴加SOCl₂(87.00mg，731.25μmol，53.05μL，5eq)。然后将混合物在80℃下搅拌10小时。LCMS显示反应完成。形成一些白色固体。过滤后收集固体，然后减压浓缩。获得呈白色固体状的化合物5-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]戊酸乙酯(57.1mg，127.37μmol，产率87.09％，纯度97.77％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.62～7.59(m,3H),7.35(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),7.26(s,1H),4.52(d,J＝5.2Hz,2H),4.43(t,J＝6.8Hz,2H),4.02(t,J＝7.2Hz,2H),2.28(t,J＝7.2Hz,2H),1.80～1.76(m,2H),1.44～1.41(m,2H),1.14(t,J＝7.2Hz,3H)。HPLC：97.77％(220nm)，97.72％(215nm)，98.01％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₂₁Cl₂N₅O₃质量计算值为437.10m/z，实测值为438.0[M+H]⁺。

化合物204

5-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)戊酸异丙酯的制备

在0℃下向5-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]戊酸(40mg，97.50μmol，1eq)(方案C-3中的步骤1至3)在i-PrOH(1mL)中的溶液中滴加SOCl₂(58.00mg，487.50μmol，35.36μL，5eq)。然后将混合物在80℃下搅拌20小时。LCMS显示反应完成。形成一些白色固体。过滤后收集固体，然后减压浓缩。获得呈白色固体状的化合物5-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]戊酸异丙酯(23.9mg，51.15μmol，产率52.46％，纯度96.81％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.61～7.59(m,3H),7.33(d,J＝2.0Hz,8.0Hz,1H),4.85～4.82(m,1H),4.51(d,J＝5.6Hz,2H),4.42(t,J＝6.4Hz,2H),2.24(t,J＝7.6Hz,2H),1.79～1.75(m,2H),1.43～1.40(m,2H),1.13(d,J＝6.0Hz,6H)。HPLC：96.81％(220nm)，96.76％(215nm)，94.56％(254nm)。MS(ESI)：C₂₀H₂₃Cl₂N₅O₃质量计算值为451.12m/z，实测值为452.1[M+H]⁺。

化合物205

4-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丁酸乙酯的制备

在0℃下向4-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]丁酸(45mg，113.57μmol，1eq)(方案C-3中的步骤1至3)在EtOH(5mL)中的溶液中添加SOCl₂(67.56mg，567.86μmol，41.19μL，5eq)。将混合物在80℃下搅拌16小时。LC-MS显示反应完成。过滤反应混合物以除去不溶物并减压浓缩以除去溶剂。通过制备型HPLC(柱：纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 8μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：30％-60％，10分钟)纯化残余物。将水溶液冻干，得到化合物。获得呈浅黄色固体状的化合物4-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]丁酸乙酯(15.6mg，36.65μmol，产率32.27％，纯度99.67％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.66～7.59(m,3H),7.37(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),4.57(d,J＝4.8Hz,2H),4.46(t,J＝6.8Hz,2H),3.99(d,J＝7.2Hz,2H),2.25(t,J＝7.2Hz,2H),2.07～2.00(m,2H),1.14(t,J＝6.8Hz,3H)。HPLC：99.67％(220nm)，99.65％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₁₉Cl₂N₅O₃质量计算值为423.09m/z，实测值为424.1[M+H]⁺。

化合物206

4-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丁酸异丙酯的制备

在0℃下向4-[5-[(3,4--二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]丁酸(方案C-3中的步骤1-3)(45mg，113.57μmol，1eq)在i-PrOH(5mL)中的溶液中添加SOCl₂(67.56mg，567.86μmol，41.19μL，5eq)。将混合物在80℃下搅拌16小时。LC-MS显示反应完成。过滤反应混合物以除去不溶物并减压浓缩以除去溶剂。通过制备型HPLC(柱：纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 8μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：35％-55％，10分钟)纯化残余物。将水溶液冻干，得到化合物。获得呈白色固体状的化合物4-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]丁酸异丙酯(17.0mg，38.79μmol，产率34.15％，纯度100.00％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.67～7.58(m,3H),7.36(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),4.86～4.80(m,1H),4.55(d,J＝5.6Hz,2H),4.46(t,J＝6.4Hz,2H),2.20(t,J＝7.6Hz,2H),2.05～1.98(m,2H),1.14(d,J＝6.4Hz,6H)。HPLC:100.00％(220nm),100.00％(215nm),100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₂₁Cl₂N₅O₃质量计算值为437.10m/z，实测值为438.1[M+H]⁺。

化合物207

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(((2R,5R)-5-(羟基甲基)-1,4-二噁烷-2-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

((2R,5R)-5-((5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基)-1,4-二噁烷-2-基)甲醇和((2S,5R)-5-((5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基)-1,4-二噁烷-2-基)甲醇的制备(方案C-3中的步骤1)

向((2S,5R)-5-(碘甲基)-1,4-二噁烷-2-基)甲醇(838.82mg，3.25mmol，2eq)和((2R,5R)-5-(碘甲基)-1,4-二噁烷-2-基)甲醇和5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(0.3g，1.63mmol，1eq)在丙酮(1mL)中的溶液中添加Cs₂CO₃(1.59g，4.88mmol，3eq)。将混合物在70℃下搅拌16小时。LCMS显示反应完成。过滤反应混合物以除去不溶物，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 8μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：10％-30％，10分钟)纯化残余物。将水溶液冻干，得到呈灰白色固体状的化合物[(2S,5R)-5-[(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基]-1,4-二噁烷-2-基]甲醇(40mg，127.10μmol，7.82％产率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ8.08(s,1H),5.05(dd,J＝8.4Hz,14.0Hz,1H),4.62(dd,J＝5.6Hz,14.4Hz,1H),4.26～4.24(m,3H),4.21～4.10(m,1H),3.97～3.56(m,8H)。获得呈灰白色固体状的化合物[(2R,5R)-5-[(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基]-1,4-二噁烷-2-基]甲醇(40mg，127.10μmol，产率7.82％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ8.03～8.01(m,1H),4.60～4.55(m,1H),4.49～4.44(m,1H),4.23～4.18(m,3H),3.95～3.93(m,1H),3.81～3.72(m,2H),3.56～3.35(m,6H)。

5-氯-1-(((2R,5R)-5-(羟基甲基)-1,4-二噁烷-2-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案C-3中的步骤2)

向[(2R,5R)-5-[(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基]-1,4-二噁烷-2-基]甲醇(40mg，127.10μmol，1eq)在MeOH(2mL)和H₂O(2mL)中的溶液中添加LiOH·H₂O(16.00mg，381.29μmol，3eq)。将混合物在25℃下搅拌3小时。TLC显示反应完成。将反应混合物减压浓缩以除去MeOH。然后在0℃下用HCl(3M)将混合物调节至pH＝4，并用EtOAc(10mL x4)萃取。合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈白色固体状的化合物5-氯-1-(((2R,5R)-5-(羟基甲基)-1,4-二噁烷-2-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(50mg，粗产物)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.99(s,1H),4.81～4.64(m,1H),4.64～4.54(m,1H),4.52～4.44(m,1H),4.09～3.98(m,1H),3.96～3.85(m,2H),3.79～3.72(m,2H),3.29～3.25(m,3H),3.24～3.17(m,1H)。

化合物208

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(((2R,5R)-5-(羟基甲基)-1,4-二噁烷-2-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案C-3中的步骤3)

将5-氯-1-[[(2R,5R)-5-(羟基甲基)-1,4-二噁烷-2-基]甲基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(50mg，166.28μmol，1eq)和(3,4-二氯苯基)甲胺(58.54mg，332.56μmol，44.35μL，2eq)在t-BuOH(1mL)和2-甲基丁-2-醇(1mL)中的混合物在105℃下搅拌32小时。LCMS显示反应完成。减压浓缩反应混合物以除去溶剂。通过制备型HPLC(柱：纳-微Kromasil C18100mm x 30mm 8μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：20％-40％，10分钟)纯化残余物。冻干水溶液，得到呈白色固体状的化合物5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(((2R,5R)-5-(羟基甲基)-1,4-二噁烷-2-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(16.9mg，37.60μmol，产率22.61％，纯度97.965％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.66～7.55(m,3H),7.33(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),6.76(s,1H),4.55～4.45(m,3H),4.37(dd,J＝14.0Hz,5.2Hz,1H),3.89～3.83(m,1H),3.76～3.69(m,2H),3.36(dd,J＝11.2Hz,3.6Hz,2H),3.32～3.24(m,2H),3.24～3.18(m,1H)。HPLC：97.97％(220nm)，97.83％(215nm)，98.59％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₁₉Cl₂N₅O₄质量计算值为439.08m/z，实测值为440.1[M+H]⁺。

5-氯-1-(((2R,5S)-5-(羟基甲基)-1,4-二噁烷-2-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案C-3中的步骤2)

向[(2S,5R)-5-[(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基]-1,4-二噁烷-2-基]甲醇(40mg，127.10μmol，1eq)在MeOH(2mL)和H₂O(2mL)中的溶液中添加LiOH·H₂O(16.00mg，381.29μmol，3eq)。将混合物在25℃下搅拌4小时。TLC显示反应完成。减压浓缩反应混合物以除去THF。然后在0℃下通过HCl(3M)将混合物调节至pH＝3，并用EtOAc(5mL x5)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩。获得呈灰白色油状的化合物5-氯-1-(((2R,5S)-5-(羟基甲基)-1,4-二噁烷-2-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(30mg，99.77μmol，产率78.50％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ13.31(s,1H),8.00(s,1H),5.08(dd,J＝14.0Hz,9.2Hz,1H),4.51(dd,J＝14.0Hz,4.4Hz,1H),4.07～4.02(m,2H),3.77～3.63(m,4H),3.48(s,1H),3.46(d,J＝4.8Hz,1H)。

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(((2R,5S)-5-(羟基甲基)-1,4-二噁烷-2-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案C-3中的步骤3)

将5-氯-1-[[(2R,5S)-5-(羟基甲基)-1,4-二噁烷-2-基]甲基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(30.00mg，99.77μmol，1eq)和(3,4-二氯苯基)甲胺(35.13mg，199.54μmol，26.61μL，2eq)在2-甲基丁-2-醇(1mL)和t-BuOH(1mL)中的混合物在105℃下搅拌32小时。LCMS显示反应完成。减压浓缩反应混合物以除去溶剂。通过制备型HPLC(柱：纳-微KromasilC18 100mm x 30mm 8μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：20％-40％，10分钟)纯化残余物。冻干水溶液，得到呈白色固体状的化合物5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(((2R,5S)-5-(羟基甲基)-1,4-二噁烷-2-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(21.0mg,47.06μmol，产率47.17％，纯度98.675％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.60～.57(m,3H),7.33(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),6.72(s,1H),4.98(dd,J＝13.6Hz,8.8Hz,1H),4.48(d,J＝6.0Hz,2H),4.41(dd,J＝14.0Hz,4.8Hz,1H),4.05～3.98(m,1H),3.80～3.67(m,3H),3.67～3.57(m,4H)。HPLC：98.68％(220nm)，98.32％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₁₉Cl₂N₅O₄质量计算值为439.08m/z，实测值为440.0[M+H]⁺。

化合物209

5-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-3-氟-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)戊酸的制备

5-(5-氯-3-氟-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)戊酸乙酯的制备(方案C-3中的步骤1)

向5-溴戊酸乙酯(536.71mg，2.57mmol，409.70μL，1.3eq)、5-氯-3-氟-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(0.4g，1.97mmol，1eq)和3,5-二氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(1.97mmol，1eq)在DMF(3mL)中的溶液中添加Cs₂CO₃(1.29g，3.95mmol，2eq)。将混合物在25℃下搅拌3小时。LCMS和HPLC显示反应完成。过滤后，通过制备型HPLC(柱：PhenomenexLuna C18 100mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：35％-65％，10分钟)纯化滤液。用饱和NaHCO₃将水溶液调节至pH＝8，并用EtOAc(15mL x 3)萃取。合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈灰白色固体状的化合物5-(5-氯-3-氟-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)戊酸乙酯(130mg，393.06μmol，产率19.91％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ4.42(t,J＝6.8Hz,2H),4.24(s,3H),4.12(q,J＝7.2Hz,2H),2.34(t,J＝7.2Hz,2H),1.97～1.87(m,2H),1.65～1.59(m,2H),1.25(t,J＝7.2Hz,3H)。

5-(5-氯-3-氟-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)戊酸的制备(方案C-3中的步骤2)

向5-(5-氯-3-氟-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)戊酸乙酯(130mg，393.06μmol，1eq)在MeOH(1mL)和H₂O(1mL)中的溶液中添加LiOH·H₂O(49.48mg，1.18mmol，3eq)。将混合物在25℃下搅拌2小时。TLC指示反应完成。减压浓缩反应混合物。用3N HCl使水溶液pH＝6并用EtOAc(3mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(3mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈白色固体状的化合物5-(5-氯-3-氟-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)戊酸(114mg，粗产物)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ13.49(s,1H),12.02(s,1H),4.41(t,J＝6.8Hz,2H),2.22(t,J＝7.2Hz,2H),1.82～1.75(m,2H),1.46～1.40(m,2H)。

5-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-3-氟-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)戊酸的制备(方案C-3中的步骤2)

将5-(5-氯-3-氟-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)戊酸(20mg，69.29μmol，1eq)和(3,4-二氯苯基)甲胺(24.39mg，138.57μmol，2eq)在t-BuOH(2mL)中的溶液在100℃下搅拌20小时。TLC显示反应几乎完成。减压除去有机溶剂。通过制备型HPLC(柱：纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 8μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：30％-60％，10分钟)纯化残余物。减压除去洗脱液。获得呈白色固体状的化合物5-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-3-氟-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]戊酸(13.5mg，31.42μmol，产率45.35％，纯度99.67％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.29(s,1H),7.60～7.58(m,2H),7.34(dd,J＝2.0Hz,8.0Hz,1H),6.69(t,J＝5.6Hz,1H),4.46(d,J＝5.6Hz,2H),4.31(t,J＝6.8Hz,2H),2.21(t,J＝7.2Hz,2H),1.75～1.72(m,2H),1.41～1.38(m,2H)。HPLC：99.67％(220nm)，99.67％(215nm)，99.02％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₆Cl₂FN₅O₃质量计算值为427.06m/z，实测值为428.0[M+H]⁺。

化合物210

根据本文针对方案C-3中的步骤1至3所述的程序制备5-(5-((3,4-二氟苄基)氨基)-3-氟-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)戊酸。

该程序产生呈灰白色固体状的所需化合物(13.3mg，33.52μmol，产率48.37％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.23(s,1H),7.45～7.33(m,2H),7.20～7.19(m,1H),6.65(t,J＝5.6Hz,1H),4.45(d,J＝5.6Hz,2H),4.31(t,J＝6.4Hz,2H),2.21(t,J＝7.2Hz,2H),1.77～1.70(m,2H),1.43～1.36(m,2H)。HPLC：99.62％(220nm)，99.31％(215nm)，99.65％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₆F₃N₅O₃质量计算值为395.12m/z，实测值为396.0[M+H]⁺。

化合物211

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-(二甲基氨基)乙氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备

向1-[2-(2-氨基乙氧基)乙基]-5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.1g，251.73μmol，1eq，HCl)(方案C-3中的步骤1至3)在MeOH(3mL)中的溶液中添加甲醛(163.42mg，2.01mmol，149.93μL，37％purity，8eq)和AcOH(1.51mg，25.17μmol，1.44μL，0.1eq)。将混合物在20℃下搅拌10分钟。然后在0℃下分批添加NaBH₃CN(126.55mg，2.01mmol，8eq)。将所得混合物在20℃下搅拌16小时。LC-MS和HPLC显示反应完成。将反应混合物用H₂O(5mL)淬灭，然后减压浓缩。水相用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：15％-45％，10分钟)纯化残余物。将水溶液冻干，得到呈白色固体状的5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-[2-(二甲基氨基)乙氧基]乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮盐酸盐(29.3mg，68.89μmol，产率27.37％，纯度100.00％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ9.99(s,1H),7.95(s,1H),7.78～7.50(m,3H),7.38(s,1H),4.62(d,J＝11.6Hz,4H),3.86(s,2H),3.71(s,2H),3.21(s,2H),2.67(s,6H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₂₃Cl₃N₆O₂质量计算值为424.12m/z，实测值为425.1[M+H]⁺。

方案C-4

方案C-4中用于制备化合物的一般程序

方案C-4中化合物的制备(方案C-4中的步骤1)

将5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(3.79mmol，1.0eq)、R'(Ar)CHB(OH)₂(4.55mmol，1.2eq)、吡啶(7.58mmol，2.0eq)和Cu(OAc)₂(7.58mmol，2.0eq)在甲苯(2.5mL/mmol)中的混合物脱气并用O₂吹扫3次，然后将混合物在O₂气氛下在110℃下搅拌12小时。LCMS和TLC指示反应完成。过滤后，减压浓缩滤液。通过柱色谱(SiO₂，石油醚：乙酸乙酯＝15:1至1:1)纯化残余物，得到所需产物。

方案C-4中化合物的制备(方案C-4中的步骤2)

将1-(R'(Ar)甲基)-5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(806μmol，1.0eq)、(3,4-二氯苯基)甲胺(1.21mmol，1.5eq)、BINAP(75.2mg，121μmol，0.15eq)、Pd₂(dba)₃(40.3μmol，0.05eq)和t-BuONa(1.61mmol，2.0eq)在甲苯(4mL/mmol～6mL/mmol)中的混合物脱气并用N₂吹扫3次，然后将混合物在N₂气氛下在90℃下搅拌12小时。LCMS和TLC显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过柱色谱(SiO₂，石油醚：乙酸乙酯＝15:1至1:1)纯化残余物，得到所需产物。

方案C-4中化合物的制备(方案C-4中的步骤3)

将1-(R'(Ar)甲基)-N-(3,4-二氯苄基)-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-胺(450μmol，1.0eq)、TMSCl(899μmol，2.0eq)和NaI(899μmol，2.0eq)在MeCN(3mL/mmol～7mL/mmol)中的混合物脱气并用N₂吹扫3次，然后将混合物在N₂气氛下在70℃下搅拌12小时。TLC显示反应完成。将反应混合物用水淬灭，然后用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱(SiO₂，石油醚：乙酸乙酯＝4:1至1:1)纯化残余物，得到所需产物。

化合物212

5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-苯基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制备

5-氯-7-甲氧基-1-苯基-吡唑并[4,3-d]嘧啶的制备(方案C-4中的步骤1)

将5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(700mg，3.79mmol，1.0eq)、苯基硼酸(555mg，4.55mmol，1.2eq)、吡啶(600mg，7.58mmol，612μL，2.0eq)和Cu(OAc)₂(1.38g，7.58mmol，2.0eq)在甲苯(1.0mL)中的混合物脱气并用O₂吹扫3次，然后将混合物在O₂气氛下在110℃下搅拌12小时。LCMS和TLC指示反应完成。过滤后，减压浓缩滤液。将残余物通过柱色谱法(SiO₂，石油醚：乙酸乙酯＝15：1至1：1)纯化。获得呈白色固体化合物5-氯-7-甲氧基-1-苯基-吡唑并[4,3-d]嘧啶(210mg，806μmol，产率21.2％)。

N-[(3,4-二氯苯基)甲基]-7-甲氧基-1-苯基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-胺的制备(方案C-4中的步骤2)

将5-氯-7-甲氧基-1-苯基-吡唑并[4,3-d]嘧啶(210mg，806μmol，1.0eq)、(3,4-二氯苯基)甲胺(213mg，1.21mmol，161μL，1.5eq)、[1-(2-二苯基膦基-1-萘基)-2-萘基]-二苯基-膦(75.2mg，121μmol，0.15eq)、(1E,4E)-1,5-二苯基戊-1,4-二烯-3-酮钯(36.9mg，40.3μmol，0.05eq)和2-甲基丙-2-醇钠(155mg，1.61mmol，2.0eq)在甲苯(5.0mL)中的混合物脱气并用N₂吹扫3次，然后将混合物在N₂气氛下在90℃下搅拌12小时。LCMS和TLC显示反应完成。减压浓缩反应混合物。将残余物通过柱色谱法(SiO₂，石油醚：乙酸乙酯＝15：1至1：1)纯化，得到呈白色固体状的化合物N-[(3,4-二氯苯基)甲基]-7-甲氧基-1-苯基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-胺(180mg，粗产物)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ7.90(s,1H),7.50(d,J＝8.0Hz,2H),7.40～7.42(m,3H),7.30～7.38(m,2H),7.16(s,1H),5.24(s,1H),4.59(d,J＝8Hz,2H),3.89(s,3H)。

5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-苯基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制备(方案C-4中的步骤3)

将N-[(3,4-二氯苯基)甲基]-7-甲氧基-1-苯基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-胺(180mg，450μmol，1.0eq)、TMSCl(97.7mg，899μmol，114μL，2.0eq)和NaI(135mg，899μmol，2.0eq)在MeCN(1.0mL)中的混合物脱气并用N₂吹扫3次，然后将混合物在N₂气氛下在70℃下搅拌12小时。TLC显示反应完成。将反应混合物用水(2.0mL)淬灭，然后用EtOAc(5.0mL，3.0)萃取。将合并的有机层用盐水(3.0mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO₂，石油醚：乙酸乙酯＝6:1至1:1)纯化。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-苯基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(50.0mg，129μmol，产率28.8％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.22(s,1H),7.86(s,1H),7.67(d,J＝7.8Hz,2H),7.55～7.62(m,2H),7.47(t,J＝7.8Hz,2H),7.30～7.40(m,2H),6.67(s,1H),4.51(d,J＝6.0Hz,2H)。HPLC：97.5％(220nm)，97.3％(215nm)，97.1％(254nm)。LCMS：C₁₈H₁₃Cl₂N₅O质量计算值为385.05m/z，实测值为386.0[M+H]⁺。

化合物213

根据本文针对方案C-4中的步骤1至3所述的程序制备1-环丙基-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(80.0mg，228μmol，产率48.9％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.0(s,1H),7.56(d,J＝8.0Hz 2H),7.47(s,1H),7.31(d,J＝8.4Hz,1H),6.54(s,1H),4.45(d,J＝4.0Hz,2H),4.19(br s,1H),1.08～1.13(m,2H),0.96～0.99(m,2H)。HPLC：95.4％(220nm)，92.0％(215nm)，93.7％(254nm)。LCMS：C₁₅H₁₃Cl₂N₅O质量计算值为349.05m/z，实测值为350.0[M+H]⁺。

化合物214

1-环戊基-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

5-氯-1-环戊基-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶的制备(方案C-4中的步骤1)

将化合物5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(1g，5.42mmol，1eq)、溴环戊烷(968.86mg，6.50mmol，697.02μL，1.2eq)，Cs₂CO₃(3.53g，10.84mmol，2eq)在DMF(10mL)中的混合物脱气并用N₂吹扫3次，然后将混合物在N₂气氛下在50℃下搅拌12小时。TLC指示反应完成。将混合物用H₂O(10mL)稀释并用EtOAc(10mL)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL x 3)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱(柱高：250mm，直径：100mm，100-200目硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化残余物，得到呈白色固体状的化合物5-氯-1-环戊基-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(500mg，1.98mmol，产率36.55％)。获得呈白色固体状的化合物5-氯-2-环戊基-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶(500mg，1.98mmol，产率36.52％)。¹HNMR(CDCl₃,400MHz)δ7.94(s,1H),5.23～5.30(m,1H),4.15(s,3H),2.04～2.09(m,4H),1.88～1.89(m,2H),1.65～1.68(m,2H)。

1-环戊基-N-(3,4-二氯苄基)-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-胺的制备(方案C-4中的步骤2)

将化合物5-氯-1-环戊基-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(0.5g，1.98mmol，1eq)、(3,4-二氯苯基)甲胺(452.82mg，2.57mmol，343.05μL，1.3eq)、t-BuONa(285.23mg，2.97mmol，1.5eq)、BINAP(123.20mg，197.8μμmol，0.1eq)和Pd₂(dba)₃(113.77mg，197.86μmol，0.1eq)在甲苯(5mL)中的混合物脱气并用N₂吹扫3次，然后将混合物在N₂气氛下在80℃下搅拌15小时。TLC指示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过硅胶色谱(柱高：250mm，直径：100mm，300-400目硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝30/1，15/1)纯化残余物，得到呈黄色固体状的化合物1-环戊基-N-(3,4-二氯苄基)-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-胺(300mg，764.76μmol，产率38.65％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ7.66(s,1H),7.30(d,J＝5.6Hz,1H),7.28～7.30(m,1H),7.12～7.14(m,1H),5.23～5.28(m,1H),5.15～5.18(t,J＝5.6Hz,1H),4.52～4.54(d,J＝6.0Hz,3H),1.99～2.04(m,4H),1.84～1.85(m,2H),1.60～1.62(m,2H)。

1-环戊基-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案C-4中的步骤3)

向1-环戊基-N-(3,4-二氯苄基)-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-胺(200mg，509.84μmol，1.00eq)在MeCN(2mL)中的溶液中添加TMSCl(110.78mg，1.02mmol，129.42μL，2.00eq)和NaI(152.84mg，1.02mmol，2.00eq)。将混合物在70℃下搅拌15小时。TLC指示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 200mm x 40mm 10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：40％-60％，10分钟)进一步纯化混合物，得到呈白色固体状的化合物1-环戊基-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(24mg，63.45μmol，产率12.44％)。¹H NMR(MeOD,400MHz)δ7.52～7.56(m,2H),7.50～7.52(m,1H),7.30～7.32(m,1H),5.47～5.55(m,1H),4.56～4.57(d,J＝6.8Hz,2H),2.07～2.12(m,4H),2.03～2.07(m,2H),1.65～1.92(m,2H)。HPLC：98.7％(215nm)，98.8％(220nm)，98.5％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₇Cl₂N₅O质量计算值为377.10m/z，实测值为378.1[M+H]⁺。

化合物215

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮TFA盐的制备

3-(5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯和3-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备(方案C-4中的步骤1)

向5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(2.00g，10.8mmol，1eq)在DMF(20.0mL)中的溶液中添加K₂CO₃(3.00g，21.7mmol，2.00eq)和3-溴吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(3.52g，14.0mmol，1.30eq)。将混合物在50℃下搅拌12小时。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝1:1，R_f1＝0.65，R_f2＝0.47)显示化合物Int-B被完全消耗并且形成许多新的斑点。将反应混合物通过在25℃下添加H₂O(100mL)淬灭，然后用EtOAc(50.0mL，30.0mL，20.0mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到残留物。通过硅胶柱色谱(石油醚：乙酸乙酯＝10：1至1：1)纯化残余物。获得呈白色固体状的化合物3-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1.20g，3.39mmol，产率31.3％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ8.03(d,J＝16.40,1H),5.51～5.54(m,1H),4.24(br s,3H),3.68～3.91(m,3H),3.55～3.57(m,1H),2.34～2.63(m,2H),1.48(s,9H)。获得呈白色固体状的化合物3-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(500mg，1.41mmol，产率13.0％)。¹HNMR(CDCl₃,400MHz)δ8.04(s,1H),5.18～5.21(m,1H),4.25(s,3H),3.97～4.02(m,2H),3.59～3.61(m,2H),2.52～2.59(m,2H),1.49(s,9H)。

3-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备(方案C-4中的步骤2)

将3-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(400mg，1.13mmol，1.00eq)、(3,4-二氯苯基)甲胺(239mg，1.36mmol，180μL，1.20eq)、t-BuONa(162mg，1.70mmol，1.50eq)、BINAP(70.4mg，113μmol，0.10eq)和Pd₂(dba)₃(103mg，113μmol，0.10eq)置于微波管中的1,4-二噁烷(8.00mL)中。将密封管在微波下在120℃下加热20分钟。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝1:2，R_f＝＝0.54)显示3-(5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯被完全消耗，形成许多新的斑点。将2个反应合并用于后处理。将笔记本页面ET23828-10上的粗产物(100mg)与ET23828-11合并用于进一步后处理。将合并的反应混合物减压浓缩以除去溶剂。通过硅胶柱色谱(石油醚：乙酸乙酯＝10：1至1：1)纯化残余物。获得呈黄色固体状的化合物3-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(450mg，912μmol，产率35.9)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ7.77(d,J＝5.60Hz,1H),7.49(d,J＝1.60Hz,1H),7.39(d,J＝8.40Hz,1H),7.23(dd,J＝8.40,2.00Hz,1H),5.38～5.45(m,1H),4.63(d,J＝6.40Hz,2H),4.07(d,J＝4.80Hz,3H),3.68～3.83(m,3H),3.51～3.54(m,1H),2.49～2.62(m,1H),2.30～2.37(m,1H),1.47(s,9H)。

化合物216

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮TFA盐的制备(方案C-4中的步骤3)

向3-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(260mg，527μmol，1.00eq)在MeCN(2.00mL)中的溶液中添加TMSCl(171mg，1.58mmol，200μL，3.00eq)和NaI(237mg，1.58mmol，3.00eq)。将混合物在70℃下搅拌12小时。LCMS显示3-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯被完全消耗，检测到具有所需质量的一个主峰。在25℃下通过添加H₂O(20.0mL)淬灭反应混合物且用EtOAc(10.0mL x 3)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到残留物。将笔记本页面ET23828-13上的粗产物(100mg)与ET23828-14合并用于进一步纯化。通过制备型HPLC(TFA条件:柱：Phenomenex Luna C18200mm x 40mm 10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：20％-40％，10分钟)纯化合并的粗产物，得到所需化合物。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-吡咯烷-3-基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(80mg,160.56μmol，产率22.0％，纯度99％，TFA)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.30(s,1H),8.99～9.03(m,2H),7.69(s,1H),7.57～7.59(m,2H),7.30～7.32(m,1H),6.75～6.79(m,1H),5.75～5.78(m,1H),4.48(d,J＝5.60Hz,2H),3.60～3.65(m,2H),3.35～3.38(m,2H),2.37～2.42(m,1H),2.32～2.33(m,1H)。HPLC：99.05％(220nm)，98.82％(215nm)，98.60％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₆Cl₂N₆O质量计算值为378m/z，实测值为379.0[M+H]⁺。

根据本文针对方案C-4中的步骤2至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-2-(吡咯烷-3-基)-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮TFA盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(25.4mg，67.0μmol，产率22.0％，TFA)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.78～10.80(m,1H),8.92～9.05(m,2H),7.98(s,1H),7.54～7.59(m,2H),7.32(dd,J＝8.40Hz,2.00Hz,1H),6.59～6.61(m,1H),5.25(m,1H),4.45(d,J＝6.00Hz,2H),3.37～3.42(m,4H),2.31～2.32(m,2H)。HPLC：97.01％(220nm)，97.25％(215nm)，95.78％(254nm)。LCMS：C₁₆H₁₆Cl₂N₆O质量计算值为378.03m/z，实测值为379.0[M+H]⁺。

化合物217

5-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]戊烷异羟肟酸的制备

化合物218

根据本文针对方案C-4中的步骤1至3所述的程序制备5-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)戊酸甲酯。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物5-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]戊酸甲酯(110mg，259.26μmol，产率45.45％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ11.30(d,J＝1.2Hz 1H),7.57(s,1H),7.39(m,1H),7.34(m,1H),7.17(m,1H),5.38(s,1H),4.54(d,J＝5.6Hz,2H),4.43(t,J＝7.2Hz,2H),3.55(s,3H),2.26(m,2H),1.85(m,2H),1.53(m,2H)。MS(ESI)：C₁₈H₁₉Cl₂N₅O₃质量计算值为423.1m/z，实测值为424.1[M+H]⁺。HPLC：94.32％(220nm)，92.49％(215nm)，93.91％(254nm)。

化合物219

5-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]戊酸的制备

向5-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并4,3-d]嘧啶-1-基]戊酸乙酯(100mg，235.69μmol，1eq)在MeOH(1mL)、THF(1mL)和H₂O(1mL)中的溶液中添加LiOH·H₂O(9.89mg，235.69μmol，1eq)。将混合物在25℃下搅拌12小时。TLC指示反应完成。将反应混合物用水(5mL)稀释并用2N HCl调节pH＝2。用EtOAc(10mL x 2)萃取混合物。过滤后，将滤液浓缩，得到呈白色固体状的5-[5-[(3,4二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]戊酸(65mg，158.44μmol，产率67.22％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.97(s,1H),11.04(s,1H),7.56(m,3H),7.30(m,1H),6.53(s,1H),4.44(m,2H),4.40(m,2H),2.17(m,2H),1.73(m,2H),1.37(m,2H)。MS(ESI)：C₁₇H₁₇Cl₂N₅O₃质量计算值为409.1m/z，实测值为410.1[M+H]⁺。HPLC：97.79％(220nm)，99.35％(215nm)，98.41％(254nm)。

在25℃下向5-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]戊酸(40mg，97.50μmol，1eq)在DMF(0.4mL)中的溶液中添加DIPEA(50.41mg，390.00μmol，67.93μL，4eq)和HATU(40.78mg，107.25μmol，1.1eq)。添加后，将混合物在该温度搅拌10分钟，然后在25℃下添加NH₂OH·HCl(13.55mg,195.00μmol,2eq)。将所得混合物在25℃下搅拌12小时。LC-MS显示20％的5-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]戊酸残留。在LC-MS上显示几个新峰，检测到约70％的所需化合物。将混合物通过制备型HPLC(柱：纳-微Kromasil C18 100mm x 40mm 10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：20％-50％，10分钟)纯化混合物。获得呈黄色固体状的化合物5-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]戊烷异羟肟酸(27mg，63.49μmol，产率65.12％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.31(d,J＝5.6Hz 1H),7.57(m,2H),7.32(m,1H),6.63(m,1H),4.45(m,2H),4.38(m,2H),1.91(m,2H),1.74(m,2H),1.35(m,2H)。MS(ESI)：C₁₇H₁₈Cl₂N₆O₃质量计算值为424.1m/z，实测值为425.1[M+H]⁺。HPLC：99.36％(220nm)，98.61％(215nm)，99.45％(254nm)。

化合物220

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-(甲基磺酰基)乙氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

根据本文针对方案C-4中的步骤1所述的程序制备1-(2-(2-溴乙氧基)乙基)-5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物1-[2-(2-溴乙氧基)乙基]-5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶(370mg，1.10mmol，产率40.70％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ8.06(s,1H),4.75(t,J＝5.6Hz,2H),4.24(s,3H),3.95(t,J＝6.0Hz,2H),3.68(t,J＝6.0Hz,2H),3.31(t,J＝6.0Hz,2H)。获得呈白色固体状的化合物2-[2-(2-溴乙氧基)乙基]-5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶(400mg，1.19mmol，产率44.00％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ8.17(s,1H),4.63(t,J＝4.8Hz,2H),4.25(s,3H),3.95(t,J＝5.2Hz,2H),3.74(t,J＝5.6Hz,2H),3.39(t,J＝6.4Hz,2H)。

5-氯-7-甲氧基-1-(2-(2-(甲基磺酰基)乙氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶的制备

将1-[2-(2-溴乙氧基)乙基]-5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶(370mg，1.10mmol，1eq)和甲烷亚磺酸钠(225.12mg，2.21mmol，2eq)在DMSO(4mL)中的混合物在25℃下搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将残留物用H₂O(4mL)稀释并用EtOAc(4mL x 2)萃取。将合并的有机层用盐水(2mL x 2)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈白色固体状的化合物5-氯-7-甲氧基-1-[2-(2-甲基磺酰基乙氧基)乙基]吡唑并[4,3-d]嘧啶(280mg，836.37μmol，产率75.86％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ8.04(s,1H),4.75(t,J＝5.6Hz,2H),4.24(s,3H),3.97(t,J＝5.6Hz,2H),3.86(t,J＝5.2Hz,2H),3.12(t,J＝5.2Hz,2H),2.75(s,3H)。

5-氯-1-(2-(2-(甲基磺酰基)乙氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

在0℃下向5-氯-7-甲氧基-1-[2-(2-甲基磺酰基乙氧基)乙基]吡唑并[4,3-d]嘧啶(130mg，388.32μmol，1eq)和NaI(174.61mg，1.16mmol，3eq)在MeCN(3mL)中的混合物中滴加TMSCl(126.56mg，1.16mmol，147.85μL，3eq)。然后将混合物在25℃下搅拌12小时。TLC指示反应完成。将反应混合物用H₂O(3mL)淬灭并用EtOAc(3mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(3mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈棕色固体状的化合物5-碘-1-[2-(2-甲基磺酰基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(220mg，粗品)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.02(s,1H),4.73～4.68(m,2H),3.88～3.84(m,2H),3.77～3.68(m,2H),3.27～3.24(m,2H),2.78～2.77(m,3H)。

将5-碘-1-[2-(2-甲基磺酰基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(160mg，388.16μmol，1eq)和(3,4-二氯苯基)甲胺(136.66mg，776.32μmol，103.53μL，2eq)在NMP(2mL)中的混合物在160℃下搅拌2小时。LC-MS显示反应完成。过滤后，通过制备型HPLC(柱：纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：30％-50％，10分钟)纯化滤液。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(2-甲基磺酰基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(39.5mg，85.46μmol，产率22.02％，纯度99.6％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.07(s,1H),7.59～7.57(m,3H),7.33～7.31(m,1H),6.56(t,J＝5.6Hz,1H),4.60(t,J＝5.2Hz,2H),4.47(d,J＝6.0Hz,2H),3.83(t,J＝5.6Hz,2H),3.71(t,J＝5.6Hz,2H),3.27(t,J＝5.6Hz,2H),2.80(s,3H)。HPLC：99.57％(220nm)，99.37％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₉Cl₂N₅O₄S质量计算值为459.05m/z，实测值为460.1[M+H]⁺。

化合物221

(1-(3-(1H-四唑-5-基)丙基)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮)的制备

1-(3-(1H-四唑-5-基)丙基)-N-(3,4-二氯苄基)-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-胺的制备

向4-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]丁腈(0.600g，1.53mmol，1.00eq)在甲苯(10.0mL)中的溶液中添加TMSN₃(1.10g，9.51mmol，1.25mL，6.20eq)和二丁基(氧代)锡(458mg，1.84mmol，1.20eq)。将混合物在110℃下搅拌15小时。LC-MS显示反应完成。将反应混合物用水(10.0mL)稀释并用EtOAc(5.00mL x 2)萃取。将合并的有机层用盐水(10.0mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。粗产物无需进一步纯化即用于下一步骤。获得呈黄色固体状的化合物N-[(3,4-二氯苯基)甲基]-7-甲氧基-1-[3-(1H-四唑-5-基)丙基]吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-胺(0.300g，691μmol，产率45.1％)。¹HNMR(CDCl3,400MHz)δ7.67(s,1H),7.40(s,1H),7.31(d,J＝8.0Hz,1H),7.13(d,J＝8.0Hz,1H),4.55～4.17(m,4H),4.00(s,3H),2.79～2.76(m,2H),2.25(s,2H)。

(1-(3-(1H-四唑-5-基)丙基)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮)的制备(方案C-4中的步骤3)

向N-[(3,4-二氯苯基)甲基]-7-甲氧基-1-[3-(1H-四唑-5-基)丙基]吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-胺(0.300g，691μmol，1.00eq)在MeCN(10.0mL)中的溶液中添加TMSCl(150mg，1.38mmol，175μL，2.00eq)和NaI(207mg，1.38mmol，2.00eq)。将混合物在70℃下搅拌12小时。LC-MS显示反应完成。将反应混合物用水(10.0mL)稀释并用EtOAc(10.0mL x2)萃取。将合并的有机层用盐水(5.00mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：纳-微Kromasil C18 100mm x 40mm 10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：33％-53％，10分钟)。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[3-(1H-四唑-5-基)丙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.100g，238μmol，产率34.5％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.25(s,1H),7.58(d,J＝5.2Hz,3H),7.31(d,J＝8.4Hz,1H),6.79(s,1H),4.52～4.46(m,4H),2.82～2.78(m,2H),2.25～2.18(m,2H)。HPLC：98.61％(220nm)，98.07％(254nm)，98.98％(215nm)。LCMS(ESI)：C₁₈H₁₅Cl₂N₉O质量计算值为419.08m/z，实测值420.0[M+H]⁺。

化合物222

5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(4-吡啶基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制备

N-[(3,4-二氯苯基)甲基]-7-甲氧基-1-(4-吡啶基)吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-胺的制备(方案C-4中的步骤2)

将N-[(3,4-二氯苯基)甲基]-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-胺(210mg，444μmol，1.00eq)、4-吡啶基硼酸(65.5mg，533μmol，1.20eq)、Cu(OAc)₂(161mg，888μmol，2.00eq)和吡啶(70.2mg，888μmol，71.6μL，2.00eq)在甲苯(10.0mL)中的混合物脱气并用O₂吹扫3次，然后将混合物在O₂气氛下在110℃下搅拌12小时。LC-MS显示反应完成。过滤反应混合物，减压浓缩滤液。通过制备型TLC(SiO₂，DCM：MeOH＝20：1，R_f＝0.55)纯化残余物。获得呈黄色固体状的化合物N-[(3,4-二氯苯基)甲基]-7-甲氧基-1-(4-吡啶基)吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-胺(40.0mg，99.7μmol，产率22.5％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.66(d,J＝6.00Hz,2H),8.20(s,1H),7.71～7.78(m,3H),7.56～.60(m,2H),7.34～7.36(m,1H),4.53(d,J＝6.00Hz,2H),4.00～4.03(m,3H)。

5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(4-吡啶基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制备(方案C-4中的步骤3)

向N-[(3,4-二氯苯基)甲基]-7-甲氧基-1-(4-吡啶基)吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-胺(40.0mg，99.7μmol，1.00eq)在MeCN(2.00mL)中的溶液中添加TMSCl(32.5mg，299μmol，38.0μL，3.00eq)和NaI(44.8mg，299μmol，3.00eq)。将混合物在70℃下搅拌3小时。LC-MS显示反应完成。将反应混合物在25℃下用H₂O(20.0mL)淬灭并用EtOAc(10.0mL x 3)萃取。合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(TFA条件：柱：Welch UltimateAQ-C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：25％-55％，12分钟)纯化。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(4-吡啶基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(10.0mg，20.0μmol，产率20.0％，TFA)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.60～11.63(m,1H),8.77(d,J＝4.80Hz,2H),8.27～8.32(m,2H),8.21(s,1H),7.60～7.61(m,2H),7.36(dd,J＝8.40Hz,2.00Hz,1H),6.94～6.95(m,1H),4.53～4.54(d,J＝6.00Hz,2H)。LCMS：C₁₇H₁₂Cl₂N₆O质量计算值为386m/z，实测值为387.0[M+H]⁺。HPLC：99.18％(220nm)，99.13％(215nm)，98.62％(254nm)。

化合物223

2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)丙酸的制备

化合物224

根据本文针对方案C-4中的步骤1至3所述的程序制备2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)丙酸甲酯。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)丙酸甲酯(20.0mg，50.22μmol，产率19.42％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.98(s,1H),7.61～7.59(m,2H),7.35～7.33(m,1H),7.14(s,1H),5.45(q,J＝7.2Hz,1H),4.50(d,J＝5.2Hz,2H),3.66(s,3H),1.70(d,J＝7.2Hz,3H)。HPLC：96.94％(220nm)，96.74％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₅Cl₂N₅O₃质量计算值为395.06m/z，实测值为396.1[M+H]⁺。

化合物225

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-2-(1-羟基丙-2-基)-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

在0℃下向2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基]丙酸甲酯(100mg，252.38μmol，1eq)在THF(2mL)中的溶液中添加DIBAL-H(1M,1.26mL,5eq)。然后将混合物在25℃下搅拌6小时。LCMS显示反应完成。将反应混合物在0℃下用H₂O(2mL)淬灭，并用EtOAc(2mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(2mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(TFA条件柱：纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：20％-35％，10分钟)纯化残余物，得到呈白色固体状的5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-2-(2-羟基-1-甲基-乙基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(29.5mg，79.80μmol，产率31.62％，纯度99.6％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.87(s,1H),7.61～7.59(m,2H),7.35～7.33(m,1H),7.21(s,1H),4.51～4.45(m,3H),3.69～3.65(m,2H),1.39(d,J＝6.8Hz,3H)。HPLC：99.60％(220nm)，99.44％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₅Cl₂N₅O₂质量计算值为367.06m/z，实测值为368.1[M+H]⁺。

向2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基]丙酸甲酯(100mg，252.38μmol，1eq)在MeOH(1mL)和H₂O(1mL)中的溶液中添加LiOH·H₂O(31.77mg，757.14μmol，3eq)。将混合物在25℃下搅拌3小时。LC-MS显示反应完成。将反应混合物减压浓缩以除去MeOH。用2N HCl使水溶液pH＝4。形成固体，通过过滤收集。通过制备型HPLC(TFA条件柱：Luna C18 100mm x 30mm5 u；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：20％-50％，10分钟)纯化残余物。获得呈白色固体状的化合物2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基]丙酸(19.1mg，49.97μmol，产率19.80％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.04(s,1H),7.95(s,1H),7.61～7.59(m,2H),7.35～7.33(m,1H),7.03(s,1H),5.29(d,J＝6.8Hz,1H),4.50(d,J＝3.6Hz,2H),1.69(d,J＝6.8Hz,3H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₃Cl₂N₅O₃质量计算值为381.04m/z，实测值为382.0[M+H]⁺。

化合物226

2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸的制备

化合物227

根据本文针对方案C-4中的步骤1至3所述的程序制备2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸甲酯。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸甲酯(22.1mg，55.78μmol，产率19.42％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.63(s,1H),7.60～7.58(m,2H),7.34～7.32(m,1H),6.73(s,1H),5.73(q,J＝7.2Hz,1H),4.49(d,J＝5.6Hz,2H),3.62(s,3H),1.69(d,J＝7.6Hz,3H)。HPLC：99.27％(220nm)，99.09％(215nm)，99.58％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₅Cl₂N₅O₃质量计算值为395.06m/z，实测值为396.1[M+H]⁺。

化合物228

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-羟基丙-2-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

在0℃下向2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]丙酸甲酯(90mg，227.14μmol，1eq)在THF(1mL)中的溶液中添加DIBAL-H(1M，1.36mL，6eq)。然后将混合物在25℃下搅拌6小时。LC-MS显示反应完成。将反应混合物在0℃下用H₂O(2mL)淬灭，并用EtOAc(2mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(2mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(TFA条件柱：纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：25％-45％，10分钟)纯化残余物。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(2-羟基-1-甲基-乙基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(14.3mg，38.84μmol，产率17.10％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.60～7.58(m,3H),7.34～7.32(m,1H),6.85(s,1H),5.10(q,J＝6.8Hz,1H),4.49(d,J＝5.6Hz,2H),3.62～3.58(m,2H),1.36(d,J＝6.8Hz,3H)。HPLC：99.23％(220nm)，98.64％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₅Cl₂N₅O₂质量计算值为367.06m/z，实测值为368.1[M+H]⁺。

2-(5-氯-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸的制备

向2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸甲酯(160mg，591.12μmol，1eq)在MeOH(1mL)和H₂O(1mL)中的溶液中添加LiOH·H₂O(74.42mg，1.77mmol，3eq)。将混合物在25℃下搅拌2小时。LC-MS显示反应完成。将反应混合物减压浓缩以除去MeOH。用3N HCl使水溶液pH＝4，并用EtOAc(2mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(2mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈白色固体状的化合物2-(5-氯-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸(200mg，粗品)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ7.62～7.61(m,1H),5.67～5.65(m,1H),1.03～1.04(m,3H)。

将2-(5-氯-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸(100mg，412.17μmol，1eq)和(3,4-二氯苯基)甲胺(145.12mg，824.34μmol，109.94μL，2eq)在t-BuOH(3mL)中的混合物在100℃下搅拌12小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物以除去t-BuOH。通过制备型HPLC(TFA条件柱：Waters Xbridge 150mm x 25mm5u；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：20％-40％，20分钟)纯化残余物。获得呈白色固体状的化合物2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]丙酸(26mg，68.03μmol，产率16.50％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.60～7.57(m,3H),7.34～7.32(m,1H),6.67(s,1H),5.62(q,J＝7.6Hz,1H),4.48(d,J＝5.6Hz,2H),1.69(d,J＝7.6Hz,3H)。HPLC：99.16％(220nm)，99.07％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₃Cl₂N₅O₃质量计算值为381.04m/z，实测值为382.0[M+H]⁺。

方案C-5

方案C-5中用于制备化合物的一般程序

方案C-5中化合物的制备(方案C-5中的步骤1)

在25℃下向5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(3.79mmol，1eq)和烯烃(4.93mmol，1.3eq)在二噁烷(4mL/mmol)中的混合物中添加Cs₂CO₃(189.62μmol，0.05eq)。然后将混合物在100℃下搅拌10小时。TLC和LCMS显示反应完成。减压除去溶剂。将残余物溶解于EtOAc中并用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩。通过快速硅胶色谱(

12g

二氧化硅快速柱，洗脱液为30mL/min的0～25％乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化残余物。减压除去洗脱液，得到所需化合物。

方案C-5中化合物的制备(方案C-5中的步骤2)

将3-(5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酰基-R'(X)(554.18μmol，1eq)和LiOH·H₂O(1.66mmol，3eq)在MeOH(3mL/mmol～5mL/mmol)或THF(3mL/mmol～5mL/mmol)和H₂O(3mL/mmol～5mL/mmol)中的溶液在25℃下搅拌3小时。LCMS显示反应完成。减压除去有机溶剂。用2N HCl缓慢地使水溶液pH＝5，形成一些固体。过滤后，收集固体并减压浓缩。

方案C-5中化合物的制备(方案C-5中的步骤3)

将3-(5-氯-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酰基-R'(X)(412.17μmol，1eq)和(3,4-二氯苯基)甲胺(618.26μmol～1.24mmol，1.5eq～3eq)在t-BuOH(3mL/mmol～10mL/mmol)中的混合物在100℃～140℃搅拌10小时～20小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC纯化残余物。柱：a)Luna C18 100mm x 30mm5μm；b)纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 5μm；c)Xtimate C18 150mm x 25mm 5μm。流动相：a)[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：20％-50％，10分钟；b)[水(10mM NH₄HCO₃)-ACN]；B％：32％-52％，10.5分钟。在冷冻干燥下除去溶剂，得到所需产物。

化合物229

3-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸的制备

3-(5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸甲酯的制备(方案C-5中的步骤1)

在25℃下向5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(0.7g,3.79mmol,1eq)和丙-2-烯酸甲酯(424.42mg，4.93mmol，443.96μL，1.3eq)在二噁烷(15mL)中的混合物中添加Cs₂CO₃(61.78mg，189.62μmol，0.05eq)。然后将混合物在100℃下搅拌10小时。TLC和LCMS显示反应完成。减压除去溶剂。将残留物溶解于EtOAc(50mL)中并用盐水(10mL x 2)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩。通过快速硅胶色谱(

12g

二氧化硅快速柱，洗脱液为30mL/min的0～25％乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化残余物。减压除去洗脱液。获得呈白色固体状的化合物3-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)丙酸甲酯(0.4g，1.48mmol，产率38.97％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ8.02(s,1H),4.84(t,J＝6.8Hz,2H),4.24(s,3H),3.67(s,3H),2.98(t,J＝6.8Hz,2H)。获得呈白色固体状的化合物3-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸甲酯(0.3g，1.11mmol，产率29.23％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ8.09(s,1H),4.72(t,J＝6.0Hz,2H),4.23(s,3H),3.68(s,3H),3.07(t,J＝6.8Hz,2H)。

3-(5-氯-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸的制备(方案C-5中的步骤2)

将3-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸甲酯(0.15g，554.18μmol，1eq)和LiOH·H₂O(69.76mg，1.66mmol，3eq)在MeOH(1mL)、H₂O(1mL)和THF(1mL)中的溶液在25℃下搅拌3小时。LCMS显示反应完成。减压除去有机溶剂。用2N HCl缓慢地使水溶液pH＝5，形成一些固体。过滤后，收集固体并减压浓缩。残余物无需进一步纯化即用于下一步骤。获得呈白色固体状的化合物3-(5-氯-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸(0.11g，453.39μmol，产率81.81％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ13.28(s,1H),12.37(s,1H),7.95(s,1H),4.72(t,J＝6.8Hz,2H),2.85(t,J＝6.8Hz,2H)。

3-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸的制备(方案C-5中的步骤3)

将(3,4-二氯苯基)甲胺(217.68mg，1.24mmol，164.91μL，3eq)和3-(5-氯-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸(0.1g，412.17μmol，1eq)在t-BuOH(3mL)中的溶液在100℃下加热10小时。LC-MS和HPLC显示反应完成。减压除去溶剂。通过制备型HPLC(柱：LunaC18 100mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：25％-50％，10分钟)纯化残余物。获得呈白色固体状的化合物3-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]丙酸(88.8mg，232.34μmol，产率56.37％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ12.34(s,1H),11.11(s,1H),7.59～7.57(m,2H),7.55(s,1H),7.33(dd,J＝2.8Hz,8.0Hz,1H),6.59(s,1H),4.62(t,J＝6.8Hz,2H),4.47(d,J＝6.0Hz,2H),2.79(t,J＝6.8Hz,2H)。HPLC：98.91％(220nm)，98.72％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₃Cl₂N₅O₃质量计算值为381.04m/z，实测值为382.0[M+H]⁺。

化合物230

根据本文针对方案C-5中的步骤2至3所述的程序制备3-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)丙酸。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(22.4mg，58.61μmol，产率20.31％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ12.47(s,1H),10.80(s,1H),7.82(s,1H),7.60～7.58(m,2H),7.32(dd,J＝2.0Hz,8.0Hz,1H),6.67～6.63(m,1H),4.45(d,J＝6.0Hz,2H),4.40(t,J＝6.8Hz,2H),2.86(t,J＝6.8Hz,2H)。HPLC：99.06％(220nm)，98.84％(215nm)，95.66％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₃Cl₂N₅O₃质量计算值为381.04m/z，实测值为382.0[M+H]⁺。

化合物231

根据本文针对方案C-5中的步骤1至3所述的程序制备3-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸甲酯。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(53.3mg，134.52μmol，产率28.77％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.59～7.57(m,2H),7.56(s,1H),7.32(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),6.72(s,1H),4.65(t,J＝7.2Hz,2H),4.47(d,J＝6.0Hz,2H),3.56(s,3H),2.88(t,J＝6.8Hz,2H)。HPLC：97.26％(220nm)，97.07％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₅Cl₂N₅O₃质量计算值为395.06m/z，实测值为396.1[M+H]⁺。

化合物232

根据本文针对方案C-5中的步骤1至3所述的程序制备3-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)丙酸甲酯。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(114.1mg，287.97μmol，产率49.27％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.88(s,1H),7.61～7.59(m,2H),7..33(dd,J＝2.0Hz,8.0Hz,1H),7.15(s,1H),4.50～4.45(m,4H),3.59(s,3H),2.97(t,J＝6.8Hz,2H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₅Cl₂N₅O₃质量计算值为395.06m/z，实测值为396.1[M+H]⁺。

化合物233

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

3-(5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸叔丁酯的制备(方案C-5中的步骤1)

在25℃下向5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(0.5g，2.71mmol，1eq)和丙-2-烯酸叔丁酯(451.34mg，3.52mmol，511.14μL，1.3eq)在二噁烷(10mL)中的混合物中添加Cs₂CO₃(44.13mg，135.44μmol，0.05eq)。然后将混合物在100℃下搅拌10小时。TLC和LCMS显示反应完成。减压除去溶剂。将残留物溶解于EtOAc(50mL)中并用盐水(10mL x 2)洗涤。合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶色谱(

12g

二氧化硅快速柱，洗脱液为30mL/min的0～25％乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化残余物。减压除去洗脱液。获得呈白色固体状的化合物3-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸叔丁酯(0.14g，447.64μmol，产率16.53％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ8.01(s,1H),4.79(t,J＝6.8Hz,2H),4.23(s,3H),2.88(t,J＝6.8Hz,2H),1.38(s,9H)。

3-(5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸的制备(方案C-5中的步骤2)

在25℃下向3-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸叔丁酯(0.2g，639.49μmol，1eq)在EtOAc(5mL)中的溶液中添加HCl/EtOAc(4M，4.00mL，25eq)。然后将混合物在25℃下搅拌10小时。TLC和LCMS显示反应几乎完成。减压除去溶剂。残余物无需进一步纯化即用于下一步骤。获得呈白色固体状的化合物3-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸(0.16g，623.43μmol，产率97.49％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.24(s,1H),4.72(t,J＝6.8Hz,2H),4.16(s,3H),2.88(t,J＝6.8Hz,2H)。

N'-乙酰基-3-(5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙烷酰肼的制备

向乙酰肼(86.60mg，1.17mmol，1eq)、3-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸(0.3g，1.17mmol，1eq)和DIEA(453.22mg，3.51mmol，610.80μL，3eq)在CH₃CN(5mL)中的混合物中添加HATU(488.91mg，1.29mmol，1.1eq)。然后将混合物在20℃下搅拌3小时。TLC和LCMS显示反应完成。将混合物用冰水(4mL)缓慢淬灭并形成一些固体。过滤后收集固体。残余物无需进一步纯化即用于下一步骤。获得呈灰白色固体状的化合物N'-乙酰基-3-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙烷酰肼(0.17g，543.63μmol，产率46.51％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ9.82(s,1H),9.72(s,1H),8.23(s,1H),4.74(t,J＝6.8Hz,2H),4.17(s,3H),2.80(t,J＝6.8Hz,2H),1.81(s,3H)。

2-(2-(5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑的制备

将N'-乙酰基-3-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙烷酰肼(0.17g，543.63μmol，1eq)在POCl₃(4.17g，27.18mmol，2.53mL，50eq)中的溶液在100℃下在N₂下搅拌半小时。TLC和LCMS显示反应完成。减压除去溶剂。将残余物溶解于DCM(30mL)中并用盐水(5mL x 6)洗涤。将有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色油状的2-[2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-甲基-1,3,4-噁二唑(0.15g，509.00μmol，产率93.63％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ8.05(s,1H),4.99(t,J＝6.8Hz,2H),4.22(s,3H),3.46(t,J＝6.8Hz,2H),2.47(s,3H)。

5-氯-1-(2-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案C-5中的步骤2)

将2-[2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-甲基-1,3,4-噁二唑(0.15g，509.00μmol，1eq)和LiOH·H₂O(64.07mg，1.53mmol，3eq)在THF(2mL)和H₂O(2mL)中的溶液在25℃下搅拌3小时。LCMS显示反应完成。减压除去有机溶剂。用2N HCl缓慢地使水溶液pH＝5，然后用EtOAc(10mL x 5)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。残余物无需进一步纯化即用于下一步骤。获得呈白色固体状的化合物5-氯-1-[2-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.13g，463.18μmol，产率91.00％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ13.36(s,1H),7.97(s,1H),4.88(t,J＝6.4Hz,2H),3.42(t,J＝6.8Hz,2H),2.37(s,3H)。

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案C-5中的步骤3)

将(3,4-二氯苯基)甲胺(163.08mg，926.35μmol，123.54μL，2eq)和5-氯-1-[2-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.13g，463.18μmol，1eq)在t-BuOH(3mL)中的溶液在100℃下加热10小时。LC-MS和HPLC显示反应完成。减压除去溶剂。通过制备型HPLC(柱：Luna C18 100mm x 30mm5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：25％-40％，10分钟)纯化残余物，然后通过制备型HPLC(柱：柱：Xtimate C18 150mm x25mm 5μm；流动相：[水(10mM NH₄HCO₃)-MeCN]；B％：32％-52％，10.5分钟)纯化。在冷冻干燥下除去洗脱液。在冷冻干燥下除去洗脱液。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(28.6mg，68.05μmol，产率14.69％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.59～7.57(m,2H),7.53(s,1H),7.32(dd,J＝2.0Hz,8.8Hz,1H),6.74(s,1H),4.77(t,J＝6.8Hz,2H),4.46(d,J＝5.6Hz,2H),3.35(t,J＝6.8Hz,2H),2.50(s,3H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₅Cl₂N₇O₂质量计算值为419.07m/z，实测值为420.1[M+H]⁺。

化合物234

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(5-(羟基甲基)-1,3,4-噁二唑-2-基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备

向5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(2g，10.84mmol，1eq)在二噁烷(20mL)中的溶液中添加丙-2-烯酸叔丁酯(1.81g，14.09mmol，2.04mL，1.3eq)和Cs₂CO₃(282.43mg，866.82μmol，0.08eq)。将混合物在100℃下搅拌12小时。TLC显示5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶被完全消耗，形成新的斑点。向反应混合物中添加H₂O(15mL)。然后将混合物用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL x 1)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶色谱(

40g

硅胶快速柱，洗脱液为45mL/min的0～25％乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化残余物。然后在减压下浓缩洗脱液。获得呈浅黄色固体状的化合物3-(5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸叔丁酯(0.59g，1.89mmol，产率17.41％)且获得呈白色固体状的化合物3-(5-氯-7-甲氧基-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)丙酸叔丁酯(2g，6.39mmol，产率59.02％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ8.03(s,1H),4.81(t,J＝6.8Hz,2H),4.24(s,3H),2.89(t,J＝7.2Hz,2H),1.39(s,9H)。

3-(5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸的制备

向3-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸叔丁酯(0.59g，1.89mmol，1eq)在EtOAc(2mL)中的溶液中添加HCl/EtOAc(5mL，4N)。将混合物在25℃下搅拌12小时。LCMS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。获得呈白色固体状的化合物3-(5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸(0.45g，粗品)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.24(s,1H),4.72(t,J＝6.8Hz,2H),4.16(s,3H),2.88(t,J＝7.2Hz,2H)。

3-(5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-N'-(2-甲氧基乙酰基)丙酰肼的制备

向3-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙酸(0.3g，1.17mmol，1eq)、2-甲氧基乙酸肼(121.69mg，1.17mmol，1eq)、DIEA(453.23mg，3.51mmol，610.82μL，3eq)在MeCN(4mL)中的溶液添加HATU(488.91mg，1.29mmol，1.1eq)，在25℃下搅拌12小时。LC-MS和TLC显示反应完成。向反应混合物中添加H₂O(7mL)。将反应混合物减压浓缩以除去MeCN。然后将混合物用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(6mL x 1)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到残留物。通过快速硅胶色谱(

12g

二氧化硅快速柱，洗脱液为40mL/min的0～8％EtOAc/MeOH梯度)纯化残余物。然后在减压下浓缩洗脱液。获得呈浅黄色固体状的化合物3-(5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-N'-(2-甲氧基乙酰基)丙酰肼(0.39g，1.14mmol，产率97.35％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ9.88(s,1H),9.72(s,1H),8.24(s,1H),4.74(t,J＝6.8Hz,2H),4.16(s,3H),3.86(s,2H),3.32(s,3H),2.82(d,J＝7.2Hz,2H)。

2-(2-(5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-(甲氧基甲基)-1,3,4-噁二唑的制备

将3-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-N'-(2-甲氧基乙酰基)丙酰肼(0.38g，1.11mmol，1eq)在POCl₃(4mL)中的溶液在100℃下搅拌0.5小时。TLC显示反应完成。将反应混合物减压浓缩，得到呈棕色油状的2-(2-(5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-(甲氧基甲基)-1,3,4-噁二唑(0.37g，粗品)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ7.79(s,1H),4.79(t,J＝6.8Hz,2H),4.34(s,2H),3.98(s,3H),3.24(t,J＝8.8Hz,2H),3.21(s,3H)。

5-氯-1-(2-(5-(甲氧基甲基)-1,3,4-噁二唑-2-基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案C-5中的步骤2)

向2-[2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-(甲氧基甲基)-1,3,4-噁二唑(0.1g，307.96μmol，1eq)在H₂O(2mL)和MeOH(2mL)中的溶液中添加LiOH·H₂O(38.77mg，923.87μmol，3eq)。将混合物在25℃下搅拌2小时。TLC显示反应完成。向反应混合物中添加H₂O(4mL)。将反应混合物减压浓缩以除去MeOH。用HCl(3N)将水溶液调节至pH＝6。然后将混合物用EtOAc(7mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(6mL x 1)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶色谱(

12g

二氧化硅快速柱，洗脱液为40mL/min的0～9％MeOH/乙酸乙酯梯度)纯化残余物。然后在减压下浓缩洗脱液。获得呈浅黄色固体状的化合物5-氯-1-(2-(5-甲氧基甲基)1,3,4-噁二唑-2-基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(30mg，96.56μmol，产率31.35％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.97(s,1H),4.91(t,J＝6.4Hz,2H),4.56(s,2H),3.47(d,J＝6.4Hz,2H),3.28(s,3H)。

化合物235

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(5-(甲氧基甲基)-1,3,4-噁二唑-2-基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备(方案C-5中的步骤3)

向5-氯-1-[2-[5-(甲氧基甲基)-1,3,4-噁二唑-2-基]乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(25mg，80.46μmol，1eq)在t-BuOH(1mL)中的溶液中添加(3,4-二氯苯基)甲胺(21.25mg，120.70μmol，16.10μL，1.5eq)。将混合物在100℃下搅拌10小时。HPLC显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 100mm x 30mm5μm；流动相：[水(0.04％HCl)-ACN]；B％：25％-45％，10分钟)纯化残余物。在30℃下减压除去MeCN。将残余物经冻干干燥。获得呈白色固体状的化合物5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((2-(5-(甲氧基甲基)-1,3,4-噁二唑-2-基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐(3.6mg，7.56μmol，产率9.39％，纯度94.542％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.61～7.58(m,4H),7.33(dd,J＝8.8Hz,1.2Hz,1H),7.18(s,1H),4.81(t,J＝6.4Hz,2H),4.56(s,2H),4.51(d,J＝5.2Hz,2H),3.42(t,J＝6.8Hz,2H),3.27(s,3H)。HPLC：94.54％(220nm)，93.28％(215nm)，94.36％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₁₈Cl₃N₇O₃质量计算值为449.08m/z，实测值为450.0[M+H]⁺。

在-78℃下向5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-[5-(甲氧基甲基)-1,3,4-噁二唑-2-基]乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(20mg，44.42μmol，1eq)在DCM(0.5mL)中的溶液中添加BBr₃(55.64mg，222.09μmol，21.40μL，5eq)在DCM(0.2mL)中的溶液。然后将混合物温热至25℃。将混合物在25℃下搅拌3小时。LCMS显示反应完成。将反应混合物在0℃下滴加到饱和NaHCO₃(2mL)中。将混合物用饱和Na₂CO₃调节至pH＝7。然后将混合物用DCM和i-PrOH(v:v＝3:1,5mL x 6)萃取。合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(HCl条件柱：Phenomenex Luna C18 100mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.04％HCl)-MeCN]；B％：15％-45％，10分钟)纯化残余物。在30℃下减压除去MeCN。将残余物经冻干干燥。获得呈浅黄色固体状的化合物5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(5-(羟基甲基)-1,3,4-噁二唑-2-基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐(2.9mg，5.27μmol，产率11.86％，纯度85.862％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.60～7.58(m,3H),7.33(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),6.99(s,1H),4.81(t,J＝6.4Hz,2H),4.56(s,2H),4.50(d,J＝5.2Hz,2H),3.41～3.36(m,2H)。HPLC：85.86％(220nm)，84.13％(215nm)，85.12％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₆Cl₃N₇O₃质量计算值为435.06m/z，实测值为436.0[M+H]⁺。

化合物236

根据本文针对方案C-5中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((3-羟基奎宁环-2-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

2-[(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基]奎宁环-3-酮的制备(方案C-5中的步骤1)

将5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(0.42g，2.28mmol，1eq)、2-亚甲基奎宁环-3-酮(405.78mg，2.96mmol，1.3eq)和Cs₂CO₃(370.68mg，1.14mmol，0.5eq)在MeCN(5mL)中的混合物在20℃下搅拌24小时。TLC指示反应完成。将反应混合物用H₂O(5mL)淬灭，然后减压浓缩。水溶液用DCM和i-PrOH(3:1,12mL x 5)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL x 2)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈浅黄色固体状的2-[(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基]奎宁环-3-酮(0.7g，粗品)和2-[(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)甲基]奎宁环-3-酮(粗品)的混合物。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.74～8.12(m,1H),4.81～4.72(m,2H),4.18～4.10(m,3H),3.92～3.70(m,1H),3.25～3.14(m,1H),2.91～2.63(m,3H),2.39～2.30(m,1H),2.04～1.87(m,4H)。

2-[(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基]奎宁环-3-醇的制备

在0℃下向2-[(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基]奎宁环-3-酮(0.7g，2.18mmol，1eq)和2-[(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)甲基]奎宁环-3-酮在MeOH(10mL)中的混合物中添加NaBH₄(164.94mg，4.36mmol，2eq)。将混合物在20℃下搅拌1小时。TLC指示反应完成。将反应混合物在20℃下用H₂O(10mL)淬灭，然后用DCM和i-PrOH(3:1,24mL x 4)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色固体状的2-[(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基]奎宁环-3-醇(0.7g，粗品)和2-[(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)甲基]奎宁环-3-醇(粗品)的混合物。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.63～8.13(m,1H),5.02～4.88(m,1H),4.72～4.42(m,2H),4.17～4.08(m,3H),3.95～3.81(m,1H),3.18～3.04(m,1H),3.01～2.53(m,4H),1.89～1.63(m,4H)。

5-氯-2-[(3-羟基奎宁环-2-基)甲基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制备(方案C-5中的步骤2)

将2-[(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)甲基]奎宁环-3-醇和2-[(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)甲基]奎宁环-3-醇(0.7g，2.16mmol，1eq)和LiOH·H₂O(272.15mg，6.48mmol，3eq)在H₂O(5mL)和THF(5mL)中的混合物在20℃下搅拌3小时。TLC指示反应完成。减压浓缩反应混合物。用3N HCl将水溶液调节至pH＝5。通过制备型HPLC(柱：Xtimate C18 100mm x 30mm 3μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：1％-20％，10分钟)纯化水溶液。将洗脱液冻干，得到呈白色固体状的5-氯-2-[(3-羟基奎宁环-2-基)甲基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(170mg，548.83μmol，产率25.41％)和5-氯-1-[(3-羟基奎宁环-2-基)甲基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的混合物。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.41(s,2H),8.06(s,1H),5.98～5.67(m,2H),5.07～5.01(m,1H),4.88～4.71(m,4H),4.37～4.23(m,2H),4.16(s,2H),3.80(s,1H),3.65～3.58(m,2H),3.26～3.10(m,9H),2.12～2.02(m,4H),1.85(s,4H),1.66(d,J＝6.8Hz,3H)。

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((3-羟基奎宁环-2-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案C-5中的步骤3)

该程序产生呈浅黄色固体状的所需化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[(3-羟基奎宁环-2-基)甲基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(50mg，102.92μmol，产率25.66％，纯度100％，HCl)和呈白色固体状的5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-2-[(3-羟基奎宁环-2-基)甲基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(70.3mg，144.71μmol，产36.07％率，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ9.39(s,1H),7.73(s,1H),7.63～7.58(m,2H),7.36(dd,J＝1.6,8.0Hz,1H),4.97～4.91(m,1H),4.71(dd,J＝5.6Hz,15.2Hz,1H),4.56(d,J＝5.2Hz,2H),3.78(s,1H),3.61～3.57(m,1H),3.50～3.43(m,1H),3.20～3.07(m,3H),2.10～2.00(m,2H),1.85(d,J＝1.2Hz,2H),1.66(d,J＝4.8Hz,1H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₀H₂₃Cl₃N₆O₂质量计算值为448.12m/z，实测值为449.1[M+H]⁺。

方案C-6

化合物237

2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙磺酰胺的制备

N-(叔丁基)-2-(5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙磺酰胺的制备(方案C-6中的步骤1)

将5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(500mg，2.71mmol，1eq)、N-叔丁基乙烯磺酰胺(517.35mg，3.17mmol，1.17eq)和Cs₂CO₃(441.29mg，1.35mmol，0.5eq)在MeCN(10mL)中的混合物在25℃下搅拌12小时。TLC指示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过快速硅胶色谱(

10g

硅胶快速柱，洗脱液为60mL/min的0～50％乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化残余物。在压力下除去洗脱液。获得呈白色固体状的化合物N-叔丁基-2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙烷磺酰胺(70mg，201.25μmol，产率7.43％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.30(s,1H),7.03(s,1H),4.88(t,J＝7.2Hz,2H),4.16(s,3H),3.58(t,J＝7.2Hz,2H),1.22(s,9H)。获得呈白色固体状的化合物N-叔丁基-2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)乙磺酰胺(380mg，1.09mmol，产率40.33％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.73(s,1H),7.10(s,1H),4.83(t,J＝6.8Hz,2H),4.13(s,3H),3.70(t,J＝6.8Hz,2H),1.212(s,9H)。

N-(叔丁基)-2-(5-氯-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙磺酰胺的制备(方案C-6中的步骤2)

向N-叔丁基-2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙磺酰胺(70mg，201.25μmol，1eq)在MeOH(0.5mL)和H₂O(0.5mL)中的溶液中添加LiOH·H₂O(50.67mg，1.21mmol，6eq)。将混合物在25℃下搅拌10小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。用3N HCl使水溶液pH＝6并用EtOAc(2mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(2mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈白色固体状的N-叔丁基-2-(5-氯-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙磺酰胺(50mg，149.79μmol，产率74.43％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.01(s,1H),7.02(s,1H),4.88(t,J＝7.2Hz,2H),3.56(t,J＝7.2Hz,2H),1.25(s,9H)。

化合物238

N-(叔丁基)-2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙磺酰胺的制备(方案C-6中的步骤3)

将N-叔丁基-2-(5-氯-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙烷磺酰胺(50mg，149.79μmol，1eq)和(3,4-二氯苯基)甲胺(52.74mg，299.59μmol，39.95μL，2eq)在t-BuOH(1mL)中的混合物在100℃下搅拌12小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：Boston Prime C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：35％-65％，10分钟)纯化残余物。获得呈白色固体状的化合物N-叔丁基-2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙烷磺酰胺(25.7mg，54.29μmol，产率36.24％，纯度98.63％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.61～7.58(m,3H),7.33～7.31(m,1H),7.01(s,1H),6.73(s,1H),4.77(t,J＝7.2Hz,2H),4.47(d,J＝5.2Hz,2H),3.50(t,J＝7.2Hz,2H),1.24(s,9H)。HPLC：98.63％(220nm)，98.11％(215nm)，99.23％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₂₂Cl₂N₆O₃S质量计算值为472.09m/z，实测值为473.1[M+H]⁺。

2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙磺酰胺的制备(方案C-6中的步骤4)

将N-叔丁基-2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙磺酰胺(150mg,316.87μmol,1eq)在TFA(2mL)中的混合物在25℃下搅拌8小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：Boston Prime C18 150mm x30mm 5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：30％-45％，10分钟)纯化残余物。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙磺酰胺(40.2mg，96.34μmol，产率30.40％，纯度96.77％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.25(s,1H),7.61～7.58(m,3H),7.33～7.31(m,1H),7.04(s,2H),6.70(s,1H),4.79(t,J＝7.2Hz,2H),4.47(d,J＝5.6Hz,2H),3.51(t,J＝7.2Hz,2H)。HPLC：96.77％(220nm)，95.58％(215nm)，94.88％(254nm)。MS(ESI)：C₁₄H₁₄Cl₂N₆O₃S质量计算值为416.02m/z，实测值为417.0[M+H]⁺。

方案C-7

方案C-7中用于制备化合物的一般程序

化合物的制备(方案C-7中的步骤1)

向5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(921.00μmol，1eq)在DMF(2mL/mmol～3mL/mmol)中的溶液中添加不同的环氧乙烷R'R"COCH₂(1.84mmol～3.68mmol，2eq～4eq)和Na₂CO₃(2.76mmol，3eq)。将混合物在45℃下搅拌12小时。TLC显示反应完成。向反应混合物中添加H₂O。将反应混合物用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶色谱(

4g

硅胶快速柱，洗脱液为50mL/min的0～100％乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化残余物。然后将洗脱液减压浓缩，得到所需化合物。

化合物的制备(方案C-7中的步骤2)

向2-(5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-1-R',1'-R"-乙醇(4.36mmol，1eq)在MeOH(3mL/mmol～5mL/mmol)或THF(3mL/mmol～5mL/mmol)和H₂O(3mL/mmol～5mL/mmol)中的溶液中添加LiOH·H₂O(13.08mmol～21.80mmol，3eq～5eq)。将混合物在20℃～25℃下搅拌2小时～16小时。TLC显示反应完成。减压浓缩反应混合物。用3N HCl使水溶液pH＝6，然后用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到所需产物。

化合物的制备(方案C-7中的步骤3)

将1-(2-R'-2R"-R-2-羟基乙基)-5-氯-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(393.64μmol，1eq)、(3,4-二氯苯基)甲胺(590.46mmol～787.28mmol，1.5eq～2eq)在t-BuOH(6mL/mmol～8mL/mmol)中的溶液在100℃～110℃下搅拌10小时～30小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC纯化残余物。柱：a)Phenomenex Luna C18 150mm x30mm 5μm；b)Welch Xtimate C18 150mm x 25mm 5μm。流动相：a)[水(0.1％TFA)-MeCN]，B％：30％-50％，12分钟；b)[水(0.05％HCl)-MeCN]，B％：15％-45％，12分钟)。在冷冻干燥下除去溶剂，得到所需产物。

化合物239

(R)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-羟基丙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

(R)-1-(5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙-2-醇的制备(方案C-7中的步骤1)

向5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(0.17g，921.00μmol，1eq)在DMF(2mL)中的溶液中添加(2R)-2-甲基环氧乙烷(213.96mg，3.68mmol，258.10μL，4eq)和Na₂CO₃(292.85mg，2.76mmol，3eq)。将混合物在45℃下搅拌12小时。TLC显示反应完成。向反应混合物中添加H₂O(6mL)。用EtOAc(8mL x 3)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水(5mL x 5)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶色谱(

4g

硅胶快速柱，洗脱液为50mL/min的0～100％乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化残余物。然后在减压下浓缩洗脱液。获得呈白色固体状的化合物(R)-1-(5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙-2-醇(90mg，370.89μmol，产率40.27％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.25(s,1H),4.87(d,J＝5.2Hz,1H),4.46～4.38(m,2H),4.20(s,3H),4.15～4.03(m,1H),1.05(d,J＝6.0Hz,3H)。获得呈浅黄色固体状的化合物(R)-1-(5-氯-7-甲氧基-2H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)丙-2-醇(40mg，164.84μmol，产率17.90％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.56(s,1H),5.03(d,J＝4.8Hz,1H),4.43～4.39(m,1H),4.34～4.28(m,1H),4.12(s,3H),4.32～4.30(m,1H),1.09(d,J＝6.0Hz,3H)。

(R)-5-氯-1-(2-羟基丙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案C-7中的步骤2)

向(2R)-1-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丙-2-醇(90mg，370.89μmol，1eq)在MeOH(1mL)和H₂O(1mL)中的溶液中添加LiOH·H₂O(46.69mg，1.11mmol，3eq)。将混合物在25℃下搅拌4小时。TLC显示反应完成。将反应混合物减压浓缩以除去MeOH。向反应混合物中添加H₂O(3mL)。然后将水溶液用HCl(2N)调节pH＝5并用EtOAc(10mL x 5)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL x 1)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈浅黄色固体状的化合物(R)-5-氯-1-(2-羟基丙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(90mg，粗品)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.95(s,1H),4.46～4.44(m,1H),4.38～4.36(m,1H),4.06～4.04(m,1H),1.01(d,J＝6.4Hz,3H)。

(R)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-羟基丙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案C-7中的步骤3)

向5-氯-1-[(2R)-2-羟基丙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.09g，393.64μmol，1eq)在t-BuOH(6mL)中的溶液中添加(3,4-二氯苯基)甲胺(138.60mg，787.28μmol，105.00μL，2eq)。将混合物在105℃下搅拌12小时。LCMS和HPLC显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：15％-45％，12分钟)纯化残余物。在30℃下减压除去MeCN。将残余物经冻干干燥。获得呈白色固体状的化合物(R)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-羟基丙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(22.8mg，61.66μmol，产率15.66％，纯度99.586％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.64～7.60(m,3H),7.37(s,1H),7.37～7.35(m,1H),4.55(d,J＝5.2Hz,2H),4.40～4.37(m,1H),4.31～4.26(m,1H),4.04～4.02(m,1H),1.00(d,J＝6.0Hz,3H)。HPLC：99.59％(220nm)，99.50％(215nm)，99.90％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₅Cl₂N₅O₂质量计算值为367.06m/z，实测值为368.0[M+H]⁺。

化合物240

根据本文针对方案C-7中的步骤1至3所述的程序制备(S)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-羟基丙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(69.5mg，186.03μmol，产率38.67％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.63～7.54(m,3H),7.34(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),6.77(s,1H),4.49(d,J＝5.6Hz,2H),4.42～4.35(m,1H),4.32～4.24(m,1H),4.06～4.00(m,1H),0.99(d,J＝6.0Hz,3H)。HPLC：98.56％(220nm)，98.50％(215nm)，97.26％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₅Cl₂N₅O₂质量计算值为367.06m/z，实测值为368.0[M+H]⁺。

化合物241

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((4-羟基-1-甲基哌啶-4-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备

根据本文针对方案C-7中的步骤1至3所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((4-羟基哌啶-4-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[(4-羟基-4-哌啶基)甲基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮以用于递送。剩余的固体(0.15g)无需进一步纯化即用于下一步骤。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.74(s,1H),8.23(s,1H),7.68(s,1H),7.63～7.50(m,3H),7.35(d,J＝8.4Hz,1H),4.54(d,J＝4.4Hz,2H),4.47(s,2H),3.09～3.07(m,2H),3.01～2.95(m,2H),1.70～1.57(m,4H)。HPLC：99.31％(220nm)，98.62％(215nm)，98.46％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₂₁Cl₃N₆O₂质量计算值为422.12m/z，实测值为423.1[M+H]⁺。

在0℃下向4-[[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]甲基]哌啶-4-醇(0.15g，316.60μmol，1eq，HCl)和HCHO(128.48mg，1.58mmol，117.87μL，纯度37％，5eq)在MeOH(1mL)中的溶液中分批添加NaBH₃CN(59.69mg，949.80μmol，3eq)。然后将混合物在25℃下搅拌2小时。LCMS显示反应完成。将混合物用冰水(1mL)淬灭并用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：10％-30％，12分钟)纯化残余物。减压除去洗脱液。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[(4-羟基-1-甲基-4-哌啶基)甲基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(55.9mg，117.44μmol，产率37.10％，纯度99.54％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ9.98(s,1H),8.21(s,1H),7.73(s,1H),7.67(s,1H),7.62(d,J＝8.4Hz,1H),7.39(d,J＝8.0Hz,1H),4.63(d,J＝4.4Hz,2H),4.47(s,2H),3.21～3.19(m,2H),3.06～3.03(m,2H),2.67(d,J＝4.8Hz,3H),1.86～1.80(m,2H),1.64～1.61(m,2H)。HPLC：99.54％(220nm)，99.50％(215nm)，98.86％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₂₃Cl₃N₆O₂质量计算值为436.12m/z，实测值为437.1[M+H]⁺。

方案C-8

方案C-8中用于制备化合物的一般程序

方案C-8中化合物的制备(方案C-8中的步骤1)

在0℃下向胺(101.71μmol，1eq)和R'COR"(122.05～915.39μmol，1.2～9eq)在MeOH(10mL/mmol)中的溶液中分批添加NaBH₃CN(152.56～813.68μmol，3～8eq)。将混合物在0～25℃下搅拌一段时间(2～16小时)。LCMS和HPLC显示反应完成。过滤后，通过制备型HPLC纯化滤液。柱：a)纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 5μm；b)Boston Prime C18150x30mm 5μm；c)Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；d)Xbridge 150mm x 30mm 10μm。流动相：a)[水(0.1％TFA)-MeCN]，B％：25％-55％，10分钟；b)[水(0.05％HCl)-MeCN]，B％：5％-55％，8分钟或10分钟或12分钟。在30℃减压除去乙腈。将水溶液经冻干干燥，得到所需产物。

化合物242

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(四氢-2H-吡喃-4-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶7(6H)-酮盐酸盐的制备(方案C-8中的步骤1)

向5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(4-哌啶基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(40mg，101.71μmol，1eq)在MeOH(1mL)中的溶液中添加四氢吡喃-4-酮(91.65mg，915.40μmol，84.08μL，9eq)。将混合物在25℃下搅拌2小时。然后在0℃分批添加NaBH₃CN(19.18mg，305.13μmol，3eq)。将混合物在0℃下搅拌1小时。LCMS和HPLC显示反应完成。减压过滤反应混合物。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150x30mm x 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：20％-35％，10分钟)纯化滤液。在30℃下减压除去MeCN。将水溶液经冻干干燥以得到呈浅黄色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(1-四氢吡喃-4-基-4-哌啶基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(20.4mg，38.76μmol，产率38.10％，纯度97.620％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.29(s,1H),7.67(s,1H),7.61～7.59(m,2H),7.34(dd,J＝8.4Hz,1.2Hz,1H),5.20～5.13(m,1H),4.53(d,J＝4.8Hz,2H),3.99～3.96(m,2H),3.63～3.60(m,2H),3.41(s,1H),3.40～3.34(m,2H),3.32～3.29(m,2H),2.33～2.27(m,2H),2.24～2.21(m,2H),2.20～2.04(m,2H),2.01～1.75(m,2H)。HPLC：97.62％(220nm)，97.65％(215nm)，98.71％(254nm)。MS(ESI)：C₂₂H₂₇Cl₃N₆O₂质量计算值为476.15m/z实测值为477.1[M+H]⁺。

化合物243

根据本文针对方案C-8中的步骤1所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮TFA盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(12.5mg，24.6μmol，产率30.4％，TFA)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.42～11.45(m,1H),10.04～10.61(m,1H),7.68～7.71(m,1H),7.57～7.59(m,2H),7.31(dd,J＝8.00Hz,1.60Hz,1H),6.94～7.08(m,1H),5.82(s,1H),4.48(d,J＝5.60Hz,2H),4.08(s,1H),3.74(s,3H),3.27～3.31(m,1H),2.91(s,3H)。HPLC：98.84％(220nm)，98.98％(215nm)，99.33％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₈Cl₂N₆O质量计算值为392.0m/z，实测值为393.1[M+H]⁺。

化合物244

根据本文针对方案C-8中的步骤1所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(吡啶-2-基甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮二盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(11.8mg，20.90μmol，产率29.93％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.51(s,1H),8.70(d,J＝4.8Hz,1H),7.95(t,J＝7.6Hz,1H),7.67～7.59(m,4H),7.52～7.49(m,1H),7.35～7.34(m,1H),5.17～5.13(m,1H),4.62～4.52(m,4H),3.56～3.53(m,2H),3.37～3.33(m,2H),2.42～2.39(m,2H),2.20～2.17(m,2H)。HPLC：98.69％(220nm)，98.74％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₃H₂₅Cl₄N₇O₁质量计算值为483.13m/z，实测值为484.2[M+H]⁺。

化合物245

根据本文针对方案C-8中的步骤1所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(吡啶-3-基甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮二盐酸盐。

该程序产生呈浅黄色固体状的所需化合物(22.3mg，39.76μmol，产率56.96％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.25(s,1H),9.00(s,1H),8.86(d,J＝4.8Hz,1H),8.47(d,J＝8.4Hz,1H),7.86(t,J＝5.6Hz,1H),7.66(s,1H),7.62～7.59(m,2H),7.53(s,1H),7.34(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),5.16～5.10(m,1H),4.55～4.48(m,4H),3.54～3.51(m,2H),3.26～3.24(m,2H),2.43～2.40(m,2H),2.33～2.18(m,2H)。HPLC：99.37％(220nm)，99.47％(215nm)，97.96％(254nm)。MS(ESI)：C₂₃H₂₅Cl₄N₇O₁质量计算值为483.13m/z，实测值为484.2[M+H]⁺。

化合物246

根据本文针对方案C-8中的步骤1所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(吡啶-4-基甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮二盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(20mg，35.79μmol，产率51.27％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.56(s,1H),8.91(d,J＝5.6Hz,2H),8.12～8.08(m,2H),7.67(s,1H),7.61～7.59(m,2H),7.34(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),5.16～5.12(m,1H),4.55～4.53(m,4H),3.52～3.49(m,2H),3.26～3.22(m,2H),2.43～2.40(m,2H),2.17～2.14(m,2H)。HPLC：99.73％(220nm)，99.73％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₃H₂₅Cl₄N₇O₁质量计算值为483.13m/z，实测值为484.2[M+H]⁺。

化合物247

(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮二盐酸盐)的制备(方案C-8中的步骤1)

化合物248

根据本文针对方案C-8中的步骤1所述的程序制备4-((4-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯2,2,2-三氟乙酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(17.1mg，22.70μmol，产率24.39％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.17～9.92(m,1H),7.66(s,1H),7.60(d,J＝8.0Hz,2H),7.42(s,1H),7.34(d,J＝8.0Hz,1H),5.16～5.11(m,1H),4.53(d,J＝4.4Hz,2H),3.94～3.91(m,2H),3.64～3.61(m,1H),3.19～3.12(m,2H),2.98(s,2H),2.73(s,2H),2.39～2.33(m,3H),2.16～2.13(m,2H),2.01(s,1H),1.80～1.77(m,2H),1.39(s,9H),1.13～1.03(m,2H)。HPLC：93.54％(220nm)，93.45％(215nm)，96.13％(254nm)。MS(ESI)：C₃₀H₃₈Cl₂F₃N₇O₅质量计算值为589.23m/z，实测值为590.3[M+H]⁺。

将4-[[4-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(150mg，254.00μmol，1eq)在HCl/EtOAc(3mL)和EtOAc(1mL)中的溶液在25℃下搅拌2小时。LC-MS显示4-[[4-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯被完全消耗，检测到具有所需质量的一个主峰。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(HCl条件柱：Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：15％-45％，10分钟)纯化残余物。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[1-(4-哌啶基甲基)-4-哌啶基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(23.3mg，44.09μmol，产率17.36％，纯度99.7％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.74～10.60(m,1H),9.08(s,1H),8.95～8.93(m,1H),8.23(s,1H),7.71(s,1H),7.66(s,1H),7.61(d,J＝8.0Hz,1H),7.38(d,J＝8.0Hz,1H),5.16～5.10(m,1H),4.62(s 2H),3.64(d,J＝11.2Hz,2H),3.27～3.24(m,2H),3.18～3.13(m,2H),3.01(s,2H),2.88～2.80(m,2H),2.67～2.57(m,1H),2.36～2.33(m,1H),2.16～2.13(m,3H),2.03～1.99(m,2H),1.50～1.41(m,2H)。HPLC：99.70％(220nm)，99.62％(215nm)，99.81％(254nm)。MS(ESI)：C₂₃H₃₁Cl₄N₇O质量计算值为489.18m/z，实测值为490.2[M+H]⁺。

化合物249

(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(哌啶-2-基甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮二盐酸盐)的制备(方案C-8中的步骤1)

化合物250

根据方案C-8中的步骤1所述的程序制备3-((4-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯盐酸盐)。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(22.2mg，33.60μmol，产率13.21％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.11～9.86(m,1H),7.67(d,J＝5.2Hz,1H),7.62～7.59(m,2H),7.52～7.48(m,1H),7.35(d,J＝8.0Hz,1H),5.14(s,1H),4.55(d,J＝4.4Hz,2H),4.00～3.86(m,2H),3.74～3.71(m,2H),3.62～3.59(m,1H),3.22～3.19(m,2H),3.98～3.97(m,2H),2.70(s,1H),2.43～2.33(m,2H),2.30～2.25(m,2H),2.18～1.94(m,2H),1.60～1.55(m,1H),1.40(s,9H),1.35(s,1H),1.24(m,1H)。HPLC：94.89％(220nm)，95.03％(215nm)，94.11％(254nm)。MS(ESI)：C₂₈H₃₈Cl₃N₇O₃质量计算值为589.23m/z，实测值为590.3[M+H]⁺。

化合物251

(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(哌啶-3-基甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮二盐酸盐)的制备(方案C-8中的步骤1)

向3-[[4-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.1g，169.34μmol，1eq)在EtOAc(1mL)中的溶液中添加HCl/EtOAc(8mL，4N)。将混合物在25℃下搅拌12小时。LC-MS和HPLC显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：10％-50％，8分钟)纯化残余物。在30℃下减压除去MeCN。将残余物经冻干干燥。获得呈浅黄色固体状的化合物5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(哌啶-3-基甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(41.1mg，71.96μmol，产率42.50％，纯度98.635％，2HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.78～10.63(m,1H),9.28～9.25(m,1H),8.84～8.82(m,1H),7.78(s,1H),7.69～7.60(m,3H),7.36(d,J＝8.4Hz,1H),5.12～5.15(m,1H),4.57(s,2H),3.61～3.57(m,2H),3.53(s,1H),3.18～3.12(m,4H),3.00～2.97(m,1H),2.76～2.67(m,2H),2.36(d,J＝2.8Hz,2H),2.33～2.17(m,2H),2.14～1.70(m,4H),1.30～1.27(m,1H)。HPLC：98.64％(220nm)，98.39％(215nm)，98.48％(254nm)。MS(ESI)：C₂₃H₃₁Cl₄N₇O质量计算值为489.18m/z，实测值为490.2[M+H]⁺。

将2-[[4-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(150mg，254.00μmol，1eq)(方案C-8中的步骤1)在EtOAc(1mL)和HCl/EtOAc(4M，3mL)中的混合物在25℃下搅拌2小时。HPLC显示反应完成。过滤反应混合物以除去不溶物。将滤液浓缩并通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：5％-50％，12分钟)纯化。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[1-(2-哌啶基甲基)-4-哌啶基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(33.5mg，65.88μmol，产率25.94％，纯度96.45％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.77(s,1H),9.53～9.46(m,2H),7.84(s,1H),7.69(s,1H),7.64～7.60(m,2H),7.37(d,J＝7.6Hz,1H),5.20～5.14(m,1H),4.58(d,J＝4.4Hz,2H),3.91(d,J＝10.8Hz,1H),3.81～3.79(m,1H),3.65(d,J＝10.8Hz,1H),3.49～3.45(m,1H),3.34～3.29(m,4H),2.93～2.91(m,1H),2.43～2.38(m,2H),2.21(d,J＝12.8Hz,2H),1.92(d,J＝12.0Hz,1H),1.77～1.48(m,5H)。HPLC：96.45％(220nm)，95.99％(215nm)，99.39％(254nm)。MS(ESI)：C₂₃H₃₁Cl₄N₇O质量计算值为489.18m/z，实测值为490.2[M+H]⁺。

方案C-9

方案C-9中用于制备化合物的一般程序

化合物的制备(方案C-9中的步骤1)

将5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮或5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(283.12μmol，1eq)、R'COOH(283.12μmol～368.06μmol，1eq～1.3eq)、EDCI(339.74μmol，1.2eq)、HOBt(56.62μmol，0.2eq)和DIEA(849.36μmol，147.94μL，3eq)在DMF(3mL/mmol)中的混合物在20℃～25℃搅拌一段时间(10小时～32小时)。将反应混合物在0℃～25℃下搅拌一段时间(1小时～3小时)。LC-MS显示反应完成。将反应混合物用H₂O淬灭，然后用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物。柱：a)Phenomenex luna C18 250mm x 50mm 10μm；b)Phenomenex Luna C18 100mm x 30mm 5μm；c)Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm5μm；d)Luna C18 100mm x 30mm 5μm；e)BostonPrime C18 150mm x 30mm 5μm；f)纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 5μm；g)WelchXtimate C18 100mm x 25mm 3μm。流动相：a)[水(0.1％TFA)-MeCN]，B％：30％-65％，10分钟或20分钟；b)[水(0.05％HCl)-MeCN]，B％：10％-55％，10分钟或9分钟；c)[水(10mMNH₄HCO₃)-MeCN]，B％：20％-50％，20分钟。将水溶液冻干，得到所需化合物。

化合物252

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-异烟酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备(方案C-9中的步骤1)

将5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(4-哌啶基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.7g，1.63mmol，1eq，HCl)、异烟酸(200.54mg，1.63mmol，1eq)、HOBt(44.02mg，325.79μmol，0.2eq)、EDCI(374.72mg，1.95mmol，1.2eq)和DIEA (631.57mg，4.89mmol，851.17μL，3eq)在DMF(5mL)中的混合物在25℃下搅拌12小时。LCMS和HPLC显示反应完成。减压过滤反应混合物。将滤液通过制备型HPLC(HCl条件柱：Phenomenexluna C18 250mm x 50mm 10μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：20％-50％，10分钟)纯化残余物。在30℃下减压除去MeCN。将残余物经冻干干燥。获得呈浅黄色固体状的化合物5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-异烟酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(456.1mg，903.34μmol，产率55.46％，纯度98.705％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.92(d,J＝6.0Hz,2H),7.93(d,J＝6.0Hz,2H),7.85(s,1H),7.68(s,1H),7.65～7.60(m,2H),7.38(d,J＝2.0Hz,1H),5.17～5.12(m,1H),4.59(d,J＝4.8Hz,2H),4.54(s,1H),3.55～3.51(m,1H),3.33～3.27(m,1H),3.12～3.05(m,1H),2.09～1.90(m,4H)。HPLC：98.71％(220nm)，98.68％(215nm)，98.91％(254nm)。MS(ESI)：C₂₃H₂₂Cl₃N₇O₂质量计算值为497.11m/z，实测值为498.1[M+H]⁺。

化合物253

根据本文针对方案C-9中的步骤1所述的程序制备5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[1-(噁唑-4-羰基)-4-哌啶基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(52.6mg，107.71μmol，产率60.52％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.60(s,1H),8.51(s,1H),7.60～7.58(m,3H),7.34～7.32(m,1H),6.82(s,1H),5.20～5.13(m,1H),4.65～4.55(m,2H),4.50～4.48(m,2H),3.33～3.32(m,1H),2.97～2.96(m,1H),2.02～2.01(m,4H)。HPLC：99.67％(220nm)，99.67％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₁H₁₉Cl₂N₇O₃质量计算值为487.09m/z，实测值为488.1[M+H]⁺。

化合物254

根据本文针对方案C-9中的步骤1所述的程序制备5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[1-(噻唑-2-羰基)-4-哌啶基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮。

该程序产生呈灰白色固体状的所需化合物(33.1mg，65.62μmol，产率36.87％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.05～8.02(m,2H),7.60～7.58(m,3H),7.34～7.32(m,1H),6.75(s,1H),5.39～5.36(m,1H),5.21～5.19(m,1H),4.58～4.55(m,1H),4.49(d,J＝5.6Hz,2H),3.46～3.44(m,1H),3.12～3.06(m,1H),2.07～2.06(m,4H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₁H₁₉Cl₂N₇O₂S质量计算值为503.07m/z，实测值为504.1[M+H]⁺。

化合物255

根据本文针对方案C-9中的步骤1所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-吡啶甲酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(41.5mg，77.60μmol，产率41.68％，HCl)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.61(d,J＝4.4Hz,1H),7.97(t,J＝8.0Hz,1H),7.70(s,1H),7.66～7.60(m,3H),7.53～7.49(m,1H),7.38(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),5.17～5.15(m,1H),4.62(s,2H),4.61(s,1H),3.82～3.78(m,1H),3.30～3.23(m,1H),3.07～3.01(m,1H),2.07～1.91(m,4H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，95.43％(254nm)。MS(ESI)：C₂₃H₂₂Cl₃N₇O₂质量计算值为497.11m/z，实测值为498.2[M+H]⁺。

化合物256

根据本文针对方案C-9中的步骤1所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-烟酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(54.4mg，101.22μmol，产率54.37％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.85(s,1H),8.81～8.80(m,1H),8.21(d,J＝6.8Hz,1H),7.79～7.75(m,1H),7.66(s,1H),7.64～7.59(m,2H),7.36(dd,J＝7.6Hz,2.0Hz,1H),5.14(s,1H),4.57～4.56(m,3H),3.95(s,1H),3.07～3.05(m,2H),2.05～1.94(m,4H)。HPLC：99.51％(220nm)，99.24％(215nm)，99.54％(254nm)。MS(ESI)：C₂₃H₂₂Cl₃N₇O₂质量计算值为497.11m/z，实测值为498.1[M+H]⁺。

化合物257

根据本文针对方案C-9中的步骤1所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-吡啶甲酰基吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈浅黄色固体状的所需化合物(28.2mg，54.15μmol，产率25.67％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.60(dd,J＝8.4Hz,2.4Hz,1H),7.95(q,J＝7.6Hz,1H),7.80～7.76(m,1H),7.71～7.59(m,3H),7.55～7.49(m,1H),7.39～7.34(m,1H),5.68～5.63(m,1H),4.58(d,J＝4.4Hz,2H),4.19～4.04(m,1H),4.03～4.00(m,1H),3.96～3.89(m,1H),3.76～3.73(m,1H),2.40～2.32(m,2H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₂H₂₀Cl₃N₇O₂质量计算值为483.10m/z，实测值为484.2[M+H]⁺。

化合物258

根据本文针对方案C-9中的步骤1所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-烟酰基吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈黄色固体状的所需化合物(35.2mg，67.59μmol，产率32.04％，HCl)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.95～8.84(m,2H),8.40～8.34(m,1H),8.21(s,1H),7.86～7.82(m,1H),7.43～7.60(m,3H),7.40～7.35(m,1H),5.73～5.60(m,1H),4.62(d,J＝12.8Hz,2H),4.03～3.99(m,1H),3.92～3.85(m,1H),3.78～3.76(m,1H),3.70～3.67(m,1H),2.32～2.38(m,2H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₂H₂₀Cl₃N₇O₂质量计算值为483.10m/z，实测值为484.2[M+H]⁺。

化合物259

根据本文针对方案C-9中的步骤1所述的程序制备5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[1-(吡啶-4-羰基)吡咯烷-3-基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(34.1mg，65.48μmol，产率31.04％，HCl)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.91～8.88(m,2H),7.88～7.87(m,2H),7.71～7.59(m,4H),7.36～7.35(m,1H),5.73～5.60(m,1H),4.56(dd,J＝13.2Hz,4.8Hz,2H),3.92～3.55(m,4H),2.44～2.38(m,2H)。HPLC：99.11％(220nm)，99.33％(215nm)，98.46％(254nm)。MS(ESI)：C₂₂H₂₀Cl₃N₇O₂质量计算值为483.10m/z，实测值为484.2[M+H]⁺。

化合物260

根据本文针对方案C-9中的步骤1所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(5-甲氧基烟酰基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(23.4mg，41.36μmol，产率25.39％，HCl)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ9.03(s,1H),8.47(s,1H),8.33(s,1H),7.66～7.59(m,4H),7.36(dd,J＝9.6Hz,2.0Hz,1H),5.13(s,1H),4.61(s,1H),4.56(d,J＝4.4Hz,2H),3.90(s,3H),3.67(s,1H),3.72(s,1H),3.05(s,1H),2.08～1.94(m,4H)。HPLC：99.84％(220nm)，99.51％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₄H₂₃Cl₂N₇O₃质量计算值为527.12m/z，实测值为528.2[M+H]⁺。

化合物261

根据本文针对方案C-9中的步骤1所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(5-甲基烟酰基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈黄色固体状的所需化合物(24.2mg，44.09μmol，产率27.07％，HCl)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.75(s,2H),8.22(s,1H),7.76(s,1H),7.67(s,1H),7.64(s,1H),7.61(d,J＝8.4Hz,1H),7.36(d,J＝8.0Hz,1H),5.14(s,1H),4.58(d,J＝4.8Hz,2H),4.54(s,1H),3.67(s,1H),3.33(s,1H),3.12(s,1H),2.33(s,3H),2.08～1.94(m,4H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₄H₂₃Cl₂N₇O₂质量计算值为511.03m/z，实测值为512.2[M+H]⁺。

化合物262

根据本文针对方案C-9中的步骤1所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(3-甲基吡啶甲酰基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(30.8mg，60.11μmol，产率36.90％，HCl)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.45(d,J＝4.0Hz,1H),7.81(d,J＝8.0Hz,1H),7.68(s,1H),7.64(d,J＝1.6Hz,1H),7.61(d,J＝8.0Hz,1H),7.43(q,J＝4.0Hz,1H),7.37(dd,J＝8.0Hz,4.0Hz,1H),5.17～5.12(m,1H),4.63(d,J＝12.0Hz,1H),4.58(d,J＝4.0Hz,2H),3.34～3.31(m,1H),3.25～3.22(m,1H),3.05～3.02(m,1H),2.29(s,3H),2.11～1.89(m,4H)。HPLC：98.99％(220nm)，98.83％(215nm)，99.29％(254nm)。MS(ESI)：C₂₄H₂₄Cl₃N₇O₂质量计算值为511.13m/z，实测值为512.2[M+H]⁺。

化合物263

根据本文针对方案C-9中的步骤1所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(4-甲氧基吡啶甲酰基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(28.4mg，50.28μmol，产率30.87％，HCl)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.57(d,J＝5.6Hz,1H),7.65(s,1H),7.63～7.58(m,2H),7.40(d,J＝2.4Hz,1H),7.35(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),7.27(dd,J＝2.4Hz,8.4Hz,1H),5.16(t,J＝4.4Hz,1H),4.60～4.51(m,3H),3.97(s,3H),3.73(d,J＝12.4Hz,1H),3.28(t,J＝13.2Hz,1H),3.06(t,J＝10.4Hz,1H),2.12～1.99(m,3H),1.95～1.89(m,1H)。HPLC：99.44％(220nm)，99.43％(215nm)，99.31％(254nm)。MS(ESI)：C₂₄H₂₄Cl₃N₇O₃质量计算值为527.12m/z，实测值为528.2[M+H]⁺。

化合物264

根据本文针对方案C-9中的步骤1所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(4-甲基吡啶甲酰基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(22.1mg，40.27μmol，产率24.72％，HCl)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.49(d,J＝5.2Hz,1H),7.65(s,1H),7.64～7.58(m,2H),7.50(s,1H),7.40～7.33(m,2H),5.20～5.12(m,1H),4.60(s,1H),4.55(d,J＝4.8Hz,2H),3.78(d,J＝11.6Hz,1H),3.25(t,J＝12.0Hz,1H),3.02(t,J＝12.0Hz,1H),2.40(s,3H),2.11～1.96(m,3H),1.94～1.88(m,1H)。HPLC：100.00％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₄H₂₄Cl₃N₇O₂质量计算值为511.13m/z，实测值为512.2[M+H]⁺。

化合物265

根据本文针对方案C-9中的步骤1所述的程序制备1-(1-(4H-1,2,4-三唑-3-羰基)哌啶-4-基)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(24.0mg，44.27μmol，产率27.18％，HCl)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.48～8.47(m,1H),7.62～7.58(m,3H),7.33(dd,J＝8.4Hz,2.4Hz,1H),6.84(s,1H),5.21～5.15(m,1H),4.62～4.56(m,1H),4.48(d,J＝3.6Hz,3H),3.30～3.29(m,1H),3.00～2.88(m,1H),2.05～1.97(m,4H)。HPLC：96.80％(220nm)，96.70％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₀H₂₀Cl₃N₉O₂质量计算值为487.10m/z，实测值为488.2[M+H]⁺。

化合物266

根据本文针对方案C-9中的步骤1所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(4-甲氧基烟酰基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈黄色固体状的所需化合物(36.2mg，63.92μmol，产率39.24％，HCl)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.86～8.76(m,2H),7.68(d,J＝6.8Hz,1H),7.62～7.58(m,3H),7.33(dd,J＝9.6Hz,2.0Hz,1H),6.95(m,1H),5.11(s,1H),5.59～5.56(m,1H),4.50(d,J＝5.6Hz,2H),4.11(s,3H),3.51～3.48(m,1H),3.26～3.22(m,1H),3.08～3.04(m,1H),2.07～1.89(m,4H)。HPLC：99.73％(220nm)，99.76％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₄H₂₄Cl₃N₇O₃质量计算值为527.12m/z，实测值为528.2[M+H]⁺。

化合物267

根据本文针对方案C-9中的步骤1所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(4-甲基烟酰基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈浅黄色固体状的所需化合物(38.1mg，69.24μmol，产率42.50％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.77～8.68(m,2H),7.72(d,J＝5.6Hz,1H),7.62～5.58(m,3H),7.33(dd,J＝8.0Hz,2.0Hz,1H),5.15～5.09(m,1H),4.65～5.60(m,1H),4.50(d,J＝5.6Hz,2H),3.43～3.32(m,1H),3.32～3.29(m,1H),3.28～3.07(m,1H),2.49～2.46(m,3H),2.33～1.87(m,4H)。HPLC：99.74％(220nm)，99.43％(215nm)，97.66％(254nm)。MS(ESI)：C₂₄H₂₄Cl₃N₇O₂质量计算值为511.13m/z，实测值为512.2[M+H]⁺。

化合物268

根据本文针对方案C-9中的步骤1所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(3-甲氧基吡啶甲酰基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(29.2mg，55.26μmol，产率29.68％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.34(s,1H),8.18(d,J＝4.4Hz,1H),7.73(s,1H),7.68(s,1H),7.62(d,J＝8.0Hz,2H),7.49～7.46(m,1H),7.39(d,J＝8.0Hz,1H),5.18～5.12(m,1H),4.65(s,2H),4.59(d,J＝12.8Hz,1H),3.85(s,3H),3.31(d,J＝14.0Hz,1H),3.20(t,J＝12.0Hz,1H),3.01(t,J＝12.0Hz,1H),2.06～1.87(m,4H)。HPLC：99.10％(220nm)，99.06％(215nm)，97.83％(254nm)。MS(ESI)：C₂₄H₂₄Cl₃N₇O₃质量计算值为527.12m/z，实测值为528.2[M+H]⁺。

化合物269

根据本文针对方案C-9中的步骤1所述的程序制备1-(1-(1H-咪唑-2-羰基)哌啶-4-基)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(31.9mg，63.81μmol，产率39.18％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.68(s,1H),7.64(d,J＝2.0Hz,1H),7.62(s,1H),7.60(s,1H),7.56(s,2H),5.23～5.18(m,1H),4.60～4.54(m,4H),3.45～3.44(m,1H),3.14～3.11(m,1H),2.09～2.03(m,4H)。HPLC：97.49％(220nm)，95.89％(215nm)，98.22％(254nm)。MS(ESI)：C₂₁H₂₁Cl₃N₈O₂质量计算值为486.11m/z，实测值为487.2[M+H]⁺。

化合物270

根据本文针对方案C-9中的步骤1所述的程序制备1-(1-(1H-咪唑-5-羰基)哌啶-4-基)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(26.9mg，54.80μmol，产率29.44％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ9.22(s,1H),8.19(s,1H),8.12(s,1H),7.69～7.60(m,3H),7.38(d,J＝7.6Hz,1H),5.19(s,1H),4.63(s,2H),4.51(s,1H),4.03(s,1H),3.54(s,1H),3.10(s,1H),2.07(s,4H)。HPLC：99.28％(220nm)，98.88％(215nm)，97.87％(254nm)。MS(ESI)：C₂₁H₂₁Cl₃N₈O₂质量计算值为486.11m/z，实测值为487.2[M+H]⁺。

化合物271

根据本文针对方案C-9中的步骤1所述的程序制备1-(1-(1H-吡唑-3-羰基)哌啶-4-基)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(22.8mg，45.01μmol，产率27.63％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.78(d,J＝2.0Hz,1H),7.67(d,J＝8.0Hz,2H),7.61(d,J＝8.0Hz,1H),7.37(d,J＝8.0Hz,1H),6.58(d,J＝2.0Hz,1H),5.21～5.13(m,1H),4.77～4.73(m,1H),4.59(s,3H),3.31～3.28(m,1H),2.99～2.93(m,1H),2.04～2.00(m,4H)。HPLC：96.19％(220nm)，92.51％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₁H₂₁Cl₃N₈O₂质量计算值为486.11m/z，实测值为487.2[M+H]⁺。

化合物272

根据本文针对方案C-9中的步骤1所述的程序制备1-(1-(2H-1,2,3-三唑-4-羰基)哌啶-4-基)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈浅黄色固体状的所需化合物(26.8mg，50.39μmol，产率27.07％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.32(s,1H),7.64～7.59(m,3H),7.35(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),5.21～5.17(m,1H),4.71～4.65(m,1H),4.61～4.54(m,1H),4.51(d,J＝8.8Hz,2H),3.39～3.35(m,1H),3.03～2.98(m,1H),2.07～1.94(m,4H)。HPLC：98.67％(220nm)，97.49％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₀H₂₀Cl₃N₉O₂质量计算值为487.10m/z，实测值为488.2[M+H]⁺。

化合物273

4-(4-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-4-氧代丁酸的制备

向5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(4-哌啶基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮盐酸盐(80mg，203.42μmol，1eq)和四氢呋喃-2,5-二酮(20.36mg，203.42μmol，1eq)在CH₃CN(3mL)中的溶液中添加TEA(30.88mg，305.13μmol，42.47μL,1.5eq)和DMAP(4.97mg，40.68μmol，0.2eq)。将混合物在25℃下搅拌10小时。LCMS和HPLC显示反应完成。过滤混合物，通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge BEH C18 100mm x 25mm 5μm；流动相：[水(10mMNH₄HCO₃)-MeCN]；B％：20％-50％，20分钟)纯化滤液。将混合物在冷冻干燥下干燥，得到呈白色固体状的4-[4-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-4-氧代-丁酸(24.9mg，50.07μmol，产率24.61％，纯度99.197％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.59～7.56(m,2H),7.55(s,1H),7.32(d,J＝8.4Hz,1H),7.14(s,1H),5.09(s,1H),4.46(d,J＝6.0Hz,2H),4.02(d,J＝13.6Hz,1H),3.26～3.23(m,1H),2.60～2.55(m,2H),2.47～2.43(m,2H),2.42～2.37(m,2H),2.00～1.89(m,3H),1.81(d,J＝12.8Hz,1H)。HPLC：99.20％(220nm)，99.18％(215nm)，98.21％(254nm)。MS(ESI)：C₂₁H₂₂Cl₂N₆O₄质量计算值为492.1m/z，实测值为493.1[M+H]⁺。

化合物274

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-((2S,4R)-4-羟基吡咯烷-2-羰基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备

化合物275

根据本文针对方案C-9中的步骤1所述的程序制备(2S,4R)-2-(4-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(14.0mg，22.14μmol，产率29.02％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.62～7.59(m,3H),7.34(d,J＝8.6Hz,1H),6.94(s,1H),5.10(s,1H),4.72(t,J＝7.6Hz,1H),4.51(d,J＝6.0Hz,2H),4.21(br s,1H),4.04(d,J＝17.6Hz,2H),3.30(s,2H),3.19～3.09(m,1H),2.80～2.71(m,1H),2.14～2.02(m,2H),2.00(br s,2H),1.84(br d,J＝7.8Hz,2H),1.36(t,J＝14.4Hz,9H)。HPLC：95.90％(220nm)，95.94％(215nm)，95.95％(254nm)。MS(ESI)：C₂₇H₃₃Cl₂N₇O₅质量计算值为605.19m/z，实测值为606.2[M+H]⁺。

在0℃下向(2S,4R)-2-[4-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]哌啶-1-羰基]-4-羟基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(120mg，197.86μmol，1eq)(方案C-9中的步骤1)在EtOAc(2mL)中的溶液中添加HCl/EtOAc(4M，2mL)。将混合物在25℃下搅拌10小时。LCMS和HPLC显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：15％-40％，10分钟)纯化残余物。在冷冻干燥下干燥混合物，得到呈白色固体状的5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-((2S,4R)-4-羟基吡咯烷-2-羰基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐(20.6mg，40.13μmol，产率20.28％，纯度98.651％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.64～7.52(m,3H),7.32(d,J＝8.6Hz,1H),6.82(d,J＝6.4Hz,1H),5.47(br s,1H),5.12(s,1H),4.83～4.65(m,1H),4.47(d,J＝5.8Hz,2H),4.45～4.42(m,1H),3.92(d,J＝14.4Hz,1H),3.30～3.24(m,2H),3.06(d,J＝11.6Hz,1H),2.98～2.89(m,1H),2.18～2.02(m,2H),2.00(br s,2H),1.95～1.85(m,2H)。HPLC：98.65％(220nm)，97.98％(215nm)，98.52％(254nm)。MS(ESI)：C₂₂H₂₆Cl₃N₇O₃质量计算值为505.14m/z，实测值为506.1[M+H]⁺。

化合物276

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-((2S,3R)-2,3,4-三羟基丁酰基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

将5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(4-哌啶基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(60mg，139.62μmol，1eq，HCl)、(3R,4R)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-酮(49.46mg，418.87μmol，3eq)和NaOMe(22.63mg，418.87μmol，3eq)在MeOH(2mL)中的混合物在50℃下搅拌16小时。HPLC和LCMS显示反应完成。将反应混合物冷却至室温并用H₂O(5mL)淬灭。用EtOAc(10mL x3)萃取混合物。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：15％-35％，12分钟)纯化残余物。将水溶液冻干，得到呈浅黄色固体状的5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[1-[(2S,3R)-2,3,4-三羟基丁酰基]-4-哌啶基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(25.9mg，50.30μmol，产率36.02％，纯度99.307％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.67～7.58(m,3H),7.36(d,J＝8.4Hz,1H),5.11(s,1H),4.57(d,J＝4.4Hz,2H),4.59(s,1H),4.30(s,1H),4.20(d,J＝14.8Hz,1H),3.61(t,J＝6.4Hz,1H),3.57～3.50(m,1H),3.46～3.42(m,1H),3.30(dd,J＝10.4Hz,5.6Hz,1H),3.18(t,J＝8.8Hz,1H),2.80(t,J＝11.2Hz,1H),2.07～1.74(m,4H)。HPLC：99.31％(220nm)，99.16％(215nm)，98.79％(254nm)。MS(ESI)：C₂₁H₂₄Cl₂N₆O₅质量计算值为510.12m/z，实测值为511.1[M+H]⁺。

化合物277

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(4-(二甲基氨基)-2,3-二羟基丁酰基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备

(E)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案C-9中的步骤1)

将(E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酸盐酸盐(84.79mg，511.95μmol，1.1eq)、5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(4-哌啶基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.2g，465.41μmol，1eq，HCl)、DIEA(180.45mg，1.40mmol，243.19μL，3eq)、HOBt(12.58mg，93.08μmol，0.2eq)和EDCI(107.06mg，558.49μmol，1.2eq)在DMF(2mL)中的混合物在25℃下搅拌6小时。LC-MS和HPLC显示5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐被完全消耗且检测到具有所需质量的一个主峰。将反应混合物在25℃下用H₂O(5mL)淬灭，然后用DCM和i-PrOH(v:v＝3:1,12mL x 6)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黑褐色油状的5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[1-[(E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]-4-哌啶基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.3g，粗品)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.18(s,1H),7.57(t,J＝5.2Hz,3H),7.32(dd,J＝1.6Hz,8.4Hz,1H),6.67～6.56(m,2H),5.16～5.03(m,1H),4.47(d,J＝5.6Hz,2H),4.23～4.10(m,1H),3.42～3.20(m,4H),3.17(d,J＝6.0Hz,2H),2.25(s,6H),2.01～1.82(m,4H)。

向5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[1-[(E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]-4-哌啶基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.3g，594.75μmol，1eq)在THF(2.5mL)和H₂O(2.5mL)中的溶液中添加OsO₄(30.24mg，118.95μmol，0.2eq)。半小时后，添加NMO(209.02mg，1.78mmol，188.31μL，3eq)。将混合物在25℃下搅拌3小时。HPLC显示(E)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮被完全消耗。减压浓缩反应混合物。水相用EtOAc(5mL x 4)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：PhenomenexLuna C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：15％-55％，12分钟)纯化残余物。将水溶液冻干，得到呈灰白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[1-[4-(二甲基氨基)-2,3-二羟基-丁酰基]-4-哌啶基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(10mg，17.09μmol，产率2.87％，纯度98.22％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ9.42(s,1H),7.68～7.57(m,3H),7.44～7.30(m,1H),7.13(s,1H),5.32～5.01(m,1H),4.54～4.42(m,3H),4.31～4.20(m,1H),4.17～3.99(m,2H),3.27～3.20(m,4H),2.86～2.79(m,6H),2.09～1.97(m,4H)。HPLC：98.22％(220nm)，97.59％(215nm)，98.12％(254nm)。MS(ESI)：C₂₃H₃₀Cl₃N₇O₄质量计算值为537.17m/z，实测值为538.2[M+H]⁺。

化合物278

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-((2S,4S)-4-羟基吡咯烷-2-羰基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备

(2S,4S)-2-(4-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备(方案C-9中的步骤1)

在0℃下向5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(4-哌啶基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(60mg，139.62μmol，1eq，HCl)、(2S,4S)-1-叔丁氧基羰基-4-羟基-吡咯烷-2-羧酸(41.97mg，181.51μmol，1.3eq)和DIEA(108.27mg，837.73μmol，145.91μL，6eq)在THF(2mL)中的溶液中滴加T3P(266.55mg，418.87μmol，249.11μL，纯度50％，3eq)。将混合物在25℃下搅拌3小时。LC-MS显示约20％的5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐残留。在LC-MS上显示几个新峰，检测到约70％的所需化合物。将反应混合物在20℃下用H₂O(5mL)淬灭，然后用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈灰白色固体状的(2S,4S)-2-[4-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]哌啶-1-羰基]-4-羟基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(270mg，粗品)。

将(2S,4S)-2-[4-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]哌啶-1-羰基]-4-羟基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(270mg，445.18μmol，1eq)在EtOAc(2mL)和HCl/EtOAc(8mL 4M)中的混合物在20℃下搅拌2小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：10％-25％，12分钟)纯化残余物。将水溶液冻干，得到呈灰白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[1-[(2S,4S)-4-羟基吡咯烷-2-羰基]-4-哌啶基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(17.5mg，31.50μmol，产率7.08％，纯度97.711％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.20～9.79(m,1H),8.57～8.43(m,1H),7.66～7.53(m,3H),7.39～7.18(m,2H),5.19～5.07(m,1H),4.69～4.54(m,1H),4.53～4.37(m,4H),3.96～3.79(m,2H),3.18(s,2H),3.02～2.89(m,1H),2.64～2.57(m,1H),2.05～1.73(m,5H)。HPLC：97.71％(220nm)，95.90％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₂H₂₆Cl₃N₇O₃质量计算值为505.14m/z，实测值为506.1[M+H]⁺。

化合物279

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-(2-(二甲基氨基)-3-羟基丙酰基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备

(1-(4-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-羟基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯的制备(方案C-9中的步骤1)

将5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(4-哌啶基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(300mg，698.11μmol，1eq，HCl)、2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-羟基-丙酸(214.89mg，1.05mmol，1.5eq)、EDCI(160.59mg，837.73μmol，1.2eq)、HOBt(18.87mg，139.62μmol，0.2eq)和DIEA(270.67mg，2.09mmol，364.79μL，3eq)在DMF(3mL)中的混合物在25℃下搅拌12小时。LC-MS显示5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(4-哌啶基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(HCl)被完全消耗且检测到具有所需质量的一个峰。将反应混合物用H₂O(2mL)淬灭。然后将混合物用EtOAc(4mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(4mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈棕色油状的化合物N-[2-[4-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-1-(羟基甲基)-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(800mg，粗品)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.17(s,1H),7.58～7.56(m,2H),7.32(dd,J＝8.4Hz,1.6Hz,1H),7.61～7.59(m,1H),5.10(s,1H),4.47(d,J＝5.6Hz,3H),3.61～3.55(m,1H),3.50～3.42(m,1H),3.32(s,2H),3.25～3.17(m,1H),3.01～2.98(m,1H),2.03～1.95(m,3H),1.87～1.80(m,1H),1.37(s,9H)。

1-(1-(2-氨基-3-羟基丙酰基)哌啶-4-基)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

将N-[2-[4-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-1-(羟基甲基)-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(700mg，1.21mmol，1eq)在EtOAc(3mL)和HCl/EtOAc(4M，7mL)中的混合物在25℃下搅拌1小时。LC-MS显示反应完成。将反应混合物减压浓缩，得到呈白色固体状的1-(1-(2-氨基-3-羟基丙酰基)哌啶-4-基)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(650mg，粗品)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.95(s,1H),8.19(s,2H),7.74(d,J＝14.0Hz,2H),7.64(d,J＝8.4Hz,1H),7.74(d,J＝8.4Hz,1H),5.14～5.10(m,1H),4.75(s,1H),4.48～4.46(m,2H),3.74～3.70(m,1H),3.68～3.58(m,1H),3.09～3.03(m,1H),3.00～2.93(m,1H),2.70～2.67(m,2H),2.06～1.98(m,4H)。

在0℃下向1-[1-(2-氨基-3-羟基-丙酰基)-4-哌啶基]-5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(640mg，1.33mmol，1eq)在MeOH(2mL)中的溶液中添加甲醛(324.41mg，4.00mmol，297.63μL，纯度37％，3eq)。将混合物在0℃下搅拌10分钟。然后在0℃下添加AcOH(8.00mg，133.24μmol，7.62μL，0.1eq)和NaBH₃CN(669.81mg，10.66mmol，8eq)。将混合物在25℃下搅拌2小时。TLC指示反应完成。将反应混合物用H₂O(2mL)淬灭，然后用EtOAc(4mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(4mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(HCl条件柱：Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：20％-30％，12分钟)纯化残余物。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[1-[2-(二甲基氨基)-3-羟基-丙酰基]-4-哌啶基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(90mg，176.02μmol，产率13.21％，纯度99.43％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ9.64(s,1H),7.86(s,1H),7.67(d,J＝3.2Hz,1H),7.65(s,1H),7.61(d,J＝8.4Hz,1H),7.37(d,J＝7.6Hz,1H),5.16～5.11(m,1H),4.71～4.70(m,1H),4.64～4.59(m,2H),4.52～4.45(m,1H),4.04～3.98(m,1H),3.89～3.79(m,2H),3.36～3.30(m,1H),3.00～2.91(m,1H),2.86～2.75(m,6H),2.09～2.03(m,3H),1.96～1.88(m,1H)。HPLC：99.43％(220nm)，99.28％(215nm)，99.19％(254nm)。MS(ESI)：C₂₂H₂₈Cl₃N₇O₃质量计算值为507.16m/z，实测值为508.1[M+H]⁺。

方案C-10

方案C-10中用于制备化合物的一般程序

化合物的制备(方案C-10中的步骤1)

在0℃下向R'COOH(306.90μmol，1eq)在DMF或DCM(10mL/mmol)中的溶液中添加EDCI(613.80μmol，2eq)、HOBt(92.07μmol，0.3eq)和DIEA(920.71μmol，3eq)。半小时后，向混合物中添加5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(吡咯烷-3-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮或5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(哌啶-3-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(306.90μmol，1eq)。将混合物在25℃下搅拌10小时。LC-MS显示反应完成。将反应混合物用H₂O淬灭，然后用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物。柱：a)Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；b)纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 5μm。流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：20％-50％，12分钟或10分钟。将水溶液冻干，得到所需化合物。

化合物280

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((1-烟酰基哌啶-3-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备

(方案C-10中的步骤1)

在0℃下向烟酸(37.78mg，306.90μmol，25.70μL，1eq)在DCM(3mL)中的溶液中添加EDCI(117.67mg，613.80μmol，2eq)、HOBt(12.44mg，92.07μmol，0.3eq)和DIEA(118.99mg，920.71μmol，160.37μL，3eq)。半小时后，向混合物中添加5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(哌啶-3-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(125mg，306.90μmol，1eq)。将混合物在25℃下搅拌10小时。LCMS和HPLC显示反应完成。在减压下浓缩混合物。通过制备型HPLC(柱：纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：20％-50％，10分钟)纯化残余物。将混合物冷冻干燥，得到呈白色固体状的5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-((1-烟酰基哌啶-3-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(42.7mg，74.97μmol，产率24.43％，纯度96.362％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.94～8.79(m,1H),8.75(s,1H),8.24(s,1H),8.13～7.89(m,1H),7.83(s,1H),7.73(s,1H),7.68(s,1H),7.64(d,J＝8.4Hz,1H),7.54(s,1H),7.40(d,J＝8.4Hz,1H),4.63(d,J＝4.8Hz,2H),4.26～4.14(m,3H),3.39(d,J＝11.6Hz,1H),3.27(d,J＝14.0Hz,1H),3.12～3.09(m,0.5H),2.92～2.85(m,1.5H),2.20(br s,1H),1.80～1.58(m,2H),1.45(br s,1H),1.34～1.26(m,1H)。HPLC：96.36％(220nm)，95.85％(215nm)，95.29％(254nm)。MS(ESI)：C₂₄H₂₄Cl₃N₇O₂质量计算值为511.13m/z，实测值为512.1[M+H]⁺。

根据本文针对方案C-10中的步骤1所述的程序制备化合物2811-((1-乙酰基吡咯烷-3-基)甲基)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(37.0mg，84.32μmol，产率41.45％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.73～7.59(m,3H),7.59～7.38(m,1H),7.37(d,J＝6.8Hz,1H),4.56(d,J＝4.8Hz,2H),4.53～4.42(m,2H),3.51～3.22(m,4H),3.08～3.03(m,1H),2.80～2.69(m,1H),1.90(d,J＝6.4Hz,3H),1.89～1.76(m,1H),1.71～1.53(m,1H)。HPLC：99.21％(220nm)，98.93％(215nm)，98.52％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₂₀Cl₂N₆O₂质量计算值为434.10m/z，实测值为435.1[M+H]⁺。

方案C-11

化合物282

1-(2-((2H-四唑-5-基)甲氧基)乙基)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备(方案C-11)

2-[2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙氧基]乙酸叔丁酯的制备(方案C-11中的步骤1)

在0℃下向NaH(7.37g，184.32mmol，纯度60％，1.3eq)在THF(500mL)中的混合物中滴加2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧乙醇(25g，141.78mmol，1eq)。30分钟后，在0℃下滴加2-溴乙酸叔丁酯(35.95g，184.32mmol，27.24mL，1.3eq)。将混合物在25℃下搅拌1小时。TLC指示反应完成。将混合物倒入冰水(500mL)中并减压浓缩以除去THF，然后用EtOAc(500mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水(500mL x 3)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈棕色油状的化合物2-[2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙氧基]乙酸叔丁酯(40g，粗品)。¹HNMR(CDCl₃,400MHz)δ4.04(s,2H),3.81(t,J＝5.2Hz,2H),3.63(t,J＝5.2Hz,2H),1.48(s,9H),0.90(s,9H),0.08(s,6H)。

2-(2-羟基乙氧基)乙酸叔丁酯的制备(方案C-11中的步骤2)

将2-[2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙氧基]乙酸叔丁酯(40g，137.71mmol，1eq)在四丁基氟化铵(1M在THF中，206.56mL，1.5eq)中的混合物在25℃下搅拌4小时。TLC指示反应完成。将反应混合物在0℃下用H₂O(100mL)淬灭，然后用EtOAc(200mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(200mL x 3)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶色谱(

220g

二氧化硅快速柱，洗脱液为100mL/min的0～60％石油醚/乙酸乙酯)纯化残余物。减压除去洗脱液。获得呈棕色油状的化合物2-(2-羟基乙氧基)乙酸叔丁酯(3.1g，17.59mmol，产率12.78％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ4.02(s,2H),3.75～3.73(m,2H),3.68～3.66(m,2H),1.49(s,9H)。

2-[2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基]乙酸叔丁酯的制备(方案C-11中的步骤3)

在0℃下向5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(800mg，4.33mmol，1eq)、2-(2-羟基乙氧基)乙酸叔丁酯(992.82mg，5.63mmol，1.3eq)和PPh₃(1.71g，6.50mmol，1.5eq)在THF(10mL)中的溶液中滴加DIAD(1.31g，6.50mmol，1.26mL，1.5eq)。将混合物在25℃下搅拌5小时。TLC指示反应完成。将反应混合物用H₂O(10mL)淬灭并减压浓缩。然后用EtOAc(10mLx 3)萃取水溶液。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶色谱(

12g

二氧化硅快速柱，洗脱液为60mL/min的0～60％石油醚/乙酸乙酯)纯化残余物。减压除去洗脱液。获得呈白色固体状的化合物2-[2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基]乙酸叔丁酯(1.7g，粗品)。获得呈白色固体状的化合物2-[2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-2-基)乙氧基]乙酸叔丁酯(0.74g，粗品)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ8.05(s,1H),4.76(t,J＝5.6Hz,2H),4.23(s,3H),4.00(t,J＝5.6Hz,2H),3.88(s,2H),1.43(s,9H)。

2-[2-(5-氯-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基]乙酸的制备(方案C-11中的步骤4)

向2-[2-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基]乙酸叔丁酯(1.7g，4.96mmol，1eq)在MeOH(10mL)和H₂O(10mL)中的溶液中添加LiOH·H₂O(624.30mg，14.88mmol，3eq)。将混合物在25℃下搅拌2小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。用3N HCl使水溶液pH＝6，形成一些白色固体。过滤后收集固体，减压浓缩。获得呈白色固体状的化合物2-[2-(5-氯-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基]乙酸(750mg，2.75mmol，产率55.47％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.59(s,1H),4.65(t,J＝5.2Hz,2H),3.73(t,J＝5.2Hz,2H),3.61(s,2H)。

化合物283

2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙酸的制备(方案C-11中的步骤5)

将2-[2-(5-氯-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基]乙酸(50mg，183.39μmol，1eq)和(3,4-二氯苯基)甲胺(64.57mg，366.78μmol，48.92μL，2eq)在2-甲基-2-丁醇(2mL)中的混合物在130℃下搅拌10小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：Welch Xtimate C18 100mm x 25mm 3μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：15％-45％，12分钟)纯化残余物。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙酸(31.8mg，76.83μmol，产率41.89％，纯度99.59％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.60～7.58(m,3H),7.33(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),6.80(s,1H),4.59(t,J＝5.2Hz,2H),4.48(d,J＝5.6Hz,2H),3.96(s,2H),3.86(t,J＝5.2Hz,2H)。HPLC：99.59％(220nm)，99.30％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₅Cl₂N₅O₄质量计算值为411.05m/z，实测值为412.0[M+H]⁺。

化合物284

2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙酰胺的制备(方案C-11中的步骤6)

将2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙酸(50mg，121.29μmol，1eq)、HATU(59.95mg，157.68μmol，1.3eq)、DIEA(47.03mg，363.88μmol，63.38μL，3eq)和NH₄Cl(64.88mg，1.21mmol，10eq)在DMF(1mL)中的混合物在25℃下搅拌4小时。LC-MS显示反应完成。过滤反应混合物以除去不溶物。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：20％-40％，12分钟)纯化残余物。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙酰胺(21.8mg，51.83μmol，产率42.73％，纯度97.77％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.60～7.58(m,3H),7.33(dd,J＝8.4Hz,1.6Hz,1H),7.25(s,1H),7.01(s,1H),6.79(s,1H),4.62(t,J＝5.2Hz,2H),4.48(d,J＝5.6Hz,2H),3.83(t,J＝5.2Hz,2H),3.75(s,2H)。HPLC：97.77％(220nm)，96.38％(215nm)，97.03％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₆Cl₂N₆O₃质量计算值为410.07m/z，实测值为411.0[M+H]⁺。

化合物285

2-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基)乙腈的制备(方案C-11中的步骤7)

在0℃下向2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙酰胺(45mg，109.42μmol，1eq)和TEA(44.29mg，437.70μmol，60.92μL，4eq)在DCM(1mL)中的溶液中添加TFAA(91.93mg，437.70μmol，60.88μL，4eq)在DCM(1mL)中的溶液。将混合物在25℃下搅拌2小时。LC-MS显示反应完成。将反应混合物在0℃下用H₂O(2mL)淬灭，然后用DCM(2mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(2mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(TFA条件柱：纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 8μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：25％-50％，10分钟)纯化残余物。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙腈(10.1mg，25.18μmol，产率23.01％，纯度98.02％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.60～7.58(m,3H),7.33(dd,J＝8.4Hz,1.6Hz,1H),6.75(s,1H),4.63(t,J＝5.2Hz,2H),4.48(d,J＝5.6Hz,2H),4.43(s,2H),3.91(t,J＝5.2Hz,2H)。HPLC：98.02％(220nm)，96.58％(215nm)，97.87％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₄Cl₂N₆O₂质量计算值为392.06m/z，实测值为393.0[M+H]⁺。

1-(2-((2H-四唑-5-基)甲氧基)乙基)-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备(方案C-11中的步骤8)

向2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙腈(30mg，76.29μmol，1eq)在甲苯(1mL)中的溶液中滴加TBAF(1M，91.55μL，1.2eq)和TMSN₃(17.58mg，152.58μmol，20.07μL，2eq)。将混合物在120℃下搅拌12小时。HPLC显示反应完成。将反应混合物用H₂O(1mL)淬灭，然后用EtOAc(1mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(1mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：PhenomenexLuna C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：20％-50％，12分钟)纯化残余物。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(2H-四唑-5-基甲氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(19.1mg，39.36μmol，产率51.59％，纯度97.42％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.62～7.59(m,3H),7.35(dd,J＝8.0Hz,1.6Hz,1H),7.30(s,1H),4.80(s,2H),4.64(t,J＝5.2Hz,2H),4.53(d,J＝5.2Hz,2H),3.92(t,J＝5.2Hz,2H)。HPLC：97.42％(220nm)，95.83％(215nm)，96.97％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₆Cl₃N₉O₂质量计算值为435.07m/z，实测值为436.0[M+H]⁺。

化合物286

5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(2,2-二氘-2-羟基-乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制备(方案C-11)

化合物287

2-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基)乙酸甲酯的制备(方案C-11中的步骤9)

在0℃下向2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙酸(40mg，97.03μmol，1eq)在MeOH(1mL)中的溶液中滴加SOCl₂(57.72mg，485.17μmol，35.20μL，5eq)。将混合物在25℃下搅拌一小时。LC-MS显示反应完成。形成一些固体。过滤后，将固体用MeOH(2mL x 3)洗涤并收集。获得呈白色固体状的化合物2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙酸甲酯(39.5mg，87.66μmol，产率90.34％，纯度94.6％)并递送15.2mg。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.61～7.59(m,3H),7.34(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),4.60(t,J＝5.6Hz,2H),4.50(d,J＝5.6Hz,2H),4.08(s,2H),3.87(t,J＝5.26Hz,2H),3.60(s,3H)。HPLC：94.60％(220nm)，92.18％(215nm)，95.05％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₇Cl₂N₅O₄质量计算值为425.07m/z，实测值为426.1[M+H]⁺。

5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(2,2-二氘-2-羟基-乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制备(方案C-11中的步骤10)

在0℃下向2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙酸甲酯(30mg，70.38μmol，1eq)在THF(1mL)中的溶液中分批添加LiAlD₄(4.12mg，105.57μmol，1.5eq)。将混合物在0℃下搅拌1小时。HPLC显示反应完成。将反应混合物用D₂O(1mL)淬灭，然后用EtOAc(1mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(1mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 8μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：20％-40％，10分钟)纯化残余物。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(2,2-二氘-2-羟基-乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(10.8mg，25.42μmol，产率36.12％，纯度94.22％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.60～7.56(m,3H),7.33(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),6.81(s,1H),4.57(t,J＝5.6Hz,2H),4.48(d,J＝5.6Hz,2H),3.79(t,J＝5.6Hz,2H),3.37(s,2H)。HPLC：94.22％(220nm)，94.05％(215nm)，94.77％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₅D₂Cl₂N₅O₃质量计算值为399.08m/z，实测值为400.2[M+H]⁺。

方案C-12

化合物288和化合物289

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(3-羟基-2-吗啉代丙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐和5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-羟基-3-吗啉代丙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备

化合物290

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(3-羟基-2-氧代丙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案C-12中的步骤1)

在-78℃下将臭氧鼓泡到5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(羟基甲基)烯丙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(80mg，210.40μmol，1eq)在MeOH(5mL)中的溶液中15分钟。在用O₂吹扫过量O₃之后，在20℃下添加Me₂S(26.14mg，420.80μmol，30.90μL，2eq)。将混合物在20℃下搅拌1小时。HPLC显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：20％-40％，12分钟)纯化残余物。将水溶液冻干，得到呈灰白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(3-羟基-2-氧代-丙基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(6.8mg，17.01μmol，产率8.08％，纯度95.598％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.71～7.53(m,3H),7.36(d,J＝7.6Hz,2H),5.43(s,2H),4.54(s,2H),4.21(s,2H)。HPLC：95.60％(220nm)，94.95％(215nm)，97.53％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₃Cl₂N₅O₃质量计算值为381.04m/z，实测值为382.1[M+H]⁺。

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(3-羟基-2-吗啉代丙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐和5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-羟基-3-吗啉代丙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备(方案C-12中的步骤2)

在0℃下向5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(3-羟基-2-氧代-丙基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(50mg，130.82μmol，1eq)在MeOH(20mL)中的溶液中添加吗啉(56.99mg，654.11μmol，57.56μL，5eq)和NaBH₃CN(24.66mg，392.46μmol，3eq)。将混合物在20℃下搅拌16小时。LC-MS显示反应完成。将反应混合物在0℃下用H₂O(5mL)淬灭，然后在减压下浓缩。水相用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：15％-30％，12分钟)纯化残余物。将水溶液冻干，得到呈灰白色固体状的5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(3-羟基-2-吗啉代-丙基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(化合物288)(9.5mg，19.02μmol，产率14.54％，纯度98.060％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.22(s,1H),7.86～7.69(m,1H),7.68～7.59(m,3H),7.36(d,J＝7.2Hz,1H),4.57(d,J＝5.2Hz,2H),4.53～4.45(m,2H),3.90(t,J＝11.6Hz,2H),3.80～3.75(m,2H),3.70(d,J＝12.0Hz,1H),3.36(d,J＝12.0Hz,2H),3.16～3.06(m,4H)。HPLC：98.06％(220nm)，97.40％(215nm)，98.35％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₂₃Cl₃N₆O₃质量计算值为452.11m/z，实测值为453.1[M+H]⁺。

5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-(2-羟基-3-吗啉代-丙基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(化合物289)(13.1mg，25.28μmol，产率19.32％，纯度94.507％，HCl)为红棕色固体。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.77～10.38(m,1H),7.72(s,1H),7.64～7.56(m,3H),7.35(dd,J＝1.6,8.4Hz,1H),4.99(dd,J＝5.2,14.8Hz,1H),4.82(dd,J＝6.8,14.4Hz,1H),4.55(d,J＝5.2Hz,2H),3.95～3.79(m,6H),3.34～3.06(m,5H)。HPLC:94.51％(220nm),93.99％(215nm),94.51％(254nm)。MS(ESI)：C₁₉H₂₃Cl₃N₆O₃质量计算值为452.11m/z，实测值为453.1[M+H]⁺。

方案C-13

化合物291

5-[[二氘-(3,4-二氯苯基)甲基]氨基]-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制备

3,4-二氯苯甲酰胺的制备(方案C-13中的步骤1)

在0℃下向3,4-二氯苯甲酸(2g，10.47mmol，1eq)在草酰氯(6.65g，52.35mmol，4.58mL，5eq)中的溶液中滴加DMF(38.26mg，523.53μmol，40.28μL，0.05eq)。将混合物在25℃下搅拌12小时。减压除去溶剂。将残余物用DCM(2mL)稀释并在0℃下滴加至NH₃·H₂O(7.34g，52.35mmol，8.07mL，纯度25％，5eq)中。然后将混合物在0℃下搅拌1小时。TLC显示反应完成。形成一些白色固体。过滤后，将固体用H₂O(10mL x 3)洗涤并收集。获得呈白色固体状的化合物3,4-二氯苯甲酰胺(1.7g，8.95mmol，产率85.44％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.15(s,1H),8.09(d,J＝2.4Hz,1H),7.84(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),7.74(d,J＝8.4Hz,1H),7.61(s,1H)。

二氘代-(3,4-二氯苯基)甲胺的制备(方案C-13中的步骤2)

在0℃下向LiAlD₄(205.23mg，5.26mmol，2eq)在THF(5mL)中的混合物中分批添加3,4-二氯苯甲酰胺(500mg，2.63mmol，1eq)。将混合物在0℃下搅拌2小时。TLC显示反应完成。将反应混合物在0℃下用D₂O(2mL)淬灭并用H₂O(5mL)稀释。减压除去有机溶剂。水相用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶色谱(

12g

二氧化硅快速柱，洗脱液为60mL/min的0～10％乙酸乙酯/MeOH)纯化残余物。减压除去洗脱液。获得呈黄色油状的化合物二氘-(3,4-二氯苯基)甲胺(280mg，1.57mmol，产率59.77％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ7.44(d,J＝2.0Hz,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,1H),7.16(dd,J＝8.0Hz,2.0Hz,1H)。

5-[[二氘-(3,4-二氯苯基)甲基]氨基]-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制备(方案C-13中的步骤3)

将5-氯-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(80mg，309.28μmol，1eq)和二氘-(3,4-二氯苯基)甲胺(82.60mg，463.93μmol，1.5eq)在2-甲基-2-丁醇(1mL)中的混合物在100℃下搅拌12小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 8μm；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：20％-40％，10分钟)纯化残余物。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物5-[[二氘-(3,4-二氯苯基)甲基]氨基]-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(10.8mg，25.54μmol，产率8.26％，纯度94.67％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.60～7.58(m,3H),7.33(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),6.72(s,1H),4.57(t,J＝5.6Hz,2H),3.79(t,J＝5.6Hz,2H),3.42～3.38(m,4H)。HPLC：94.67％(220nm)，91.25％(215nm)，97.10％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₅D₂Cl₂N₅O₃质量计算值为399.08m/z，实测值为400.1[M+H]⁺。

方案C-14

方案C-14中用于制备化合物的一般程序

化合物的制备(方案C-14中的步骤1)

将1-(2-氨基-A)-5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(169.87μmol，HCl盐，1eq)、吡唑-1-甲脒或(Z)-甲基N-R₁-N'-R₁'硫代甲脒(169.87μmol～339.74μmol，1eq～1.5eq)和DIEA(339.75μmol，2eq)在MeCN(3mL/mmol)和DMF(3mL/mmol)或吡啶(5mL/mmol)中的混合物在20℃～120℃搅拌一段时间(10小时～16小时)。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC纯化残余物。柱：Phenomenex Luna C18150mm x 30mm 5μm。流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：5％-45％，12分钟。将水溶液冻干，得到所需产物。

化合物292

1-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙基)胍盐酸盐的制备(方案C-14中的步骤1)

将1-(2-氨基乙基)-5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(60mg，169.87μmol，HCl盐，1eq)、吡唑-1-甲脒(24.90mg，169.87μmol，1eq，HCl)和DIEA(43.91mg，339.75μmol，59.18μL，2eq)在MeCN(0.5mL)和DMF(0.5mL)中的混合物在20℃下搅拌16小时。LC-MS显示反应完成。将反应混合物减压浓缩以除去MeCN。过滤后，通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：20％-45％，12分钟)纯化滤液。将水溶液冻干，得到呈浅黄色固体状的1-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙基]胍(40.6mg，88.10μmol，产率51.86％，纯度93.679％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.03(d,J＝6.8Hz,1H),7.71～7.60(m,3H),7.46(t,J＝6.0Hz,1H),7.38(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),7.34～6.84(m,2H),4.61(d,J＝4.8Hz,2H),4.54(t,J＝5.2Hz,2H),3.59(q,J＝6.0Hz,2H)。HPLC：93.68％(220nm)，93.40％(215nm)，96.08％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₇Cl₃N₈O质量计算值为394.08m/z，实测值为395.1[M+H]⁺。

化合物293

根据本文针对方案C-14中的步骤1所述的程序制备1-(2-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基)乙基)胍盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(36.2mg，81.96μmol，产率81.40％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.67～7.58(m,3H),7.49(s,1H),7.37(d,J＝8.0Hz,1H),7.11(s,3H),4.67～.51(m,4H),3.83(t,J＝4.8Hz,2H),3.47(t,J＝4.8Hz,2H),3.21(d,J＝4.8Hz,2H)。HPLC：99.46％(220nm)，99.37％(215nm)，99.54％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₂₁Cl₃N₈O₂质量计算值为438.11m/z，实测值为439.1[M+H]⁺。

化合物294

根据本文针对方案C-14中的步骤1所述的程序制备1-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-甲基胍盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(30.2mg，67.75μmol，产率34.19％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.25(s,1H),7.77～7.52(m,4H),7.42(d,J＝12.0Hz,4H),4.68～4.50(m,4H),3.60(s,2H),2.67(s,3H)。HPLC：98.66％(220nm)，98.75％(215nm)，98.55％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₉Cl₃N₈O质量计算值为408.10m/z，实测值为409.1[M+H]⁺。

化合物295

根据本文针对方案C-14中的步骤1所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-((4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(30.2mg，65.65μmol，产率51.16％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.54～8.43(m,1H),8.16(t,J＝6.0Hz,1H),7.89(s,1H),7.67～7.60(m,3H),7.37(d,J＝8.0Hz,1H),4.58～4.56(m,4H),3.85～3.55(m,6H)。HPLC：99.50％(220nm)，99.55％(215nm)，99.61％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₉Cl₃N₈ O质量计算值为420.10m/z，实测值为421.0[M+H]⁺。

方案C-15

化合物296

2-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基)乙基二氢磷酸酯的制备

化合物297和化合物298

2-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基)乙基二甲基磷酸酯和2-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基)乙基甲基磷酸氢酯的制备(方案C-15中的步骤1)

在0℃下向5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.15g，376.65μmol，1eq)和t-BuOK(211.32mg，1.88mmol，5eq)在DCM(5mL)中的混合物中滴加[氯(甲氧基)磷酰基]氧基甲烷(81.64mg，564.98μmol，60.92μL，1.5eq)。将混合物在0℃下搅拌半小时。TLC、LCMS和HPLC显示反应完成。将反应混合物缓慢倒入冰水(10mL)中，减压除去有机层。水相用EtOAc(5mL x 4)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL x 1)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗品2-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基)乙基二甲基磷酸酯。水相主要是2-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基)乙基甲基磷酸氢酯。残余物(40mg)通过制备型HPLC(柱：Welch Xtimate C18 150mmx 25mm 5μm；流动相：[水(10mM NH₄HCO₃)-MeCN]；B％：30％-60％，10.5分钟)纯化，得到呈浅黄色固体状的2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙基二甲基磷酸酯(16.1mg，31.10μmol，产率8.26％，纯度97.80％)。剩余的残余物(0.1g)无需进一步纯化即用于下一步骤。通过制备型HPLC(柱：Welch Xtimate C18100mm x 25mm 3μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：20％-40％，12分钟)纯化水相，得到呈白色固体状的2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙基甲基磷酸氢酯(化合物297)(24.5mg，47.23μmol，产率12.54％，纯度94.89％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.09(s,1H),7.59～7.57(m,3H),7.32(dd,J＝8.0Hz,2.0Hz,1H),6.58(t,J＝5.6Hz,1H),4.57(t,J＝5.6Hz,2H),4.46(d,J＝6.0Hz,2H),3.97(d,J＝2.0Hz,2H),3.83(t,J＝5.6Hz,2H),3.60(s,3H),3.56(s,3H),3.35(t,J＝4.8Hz,2H)。HPLC：97.80％(220nm)，97.61％(215nm)，97.57％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₂₂Cl₂N₅O₆P质量计算值为505.07m/z，实测值为506.0[M+H]⁺。

还分离了2-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基)乙基甲基磷酸氢酯(化合物298)：¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.59～7.57(m,3H),7.32(dd,J＝8.0Hz,2.0Hz,1H),6.66(t,J＝5.6Hz,1H),4.58(t,J＝5.6Hz,2H),4.47(d,J＝6.0Hz,2H),3.87(d,J＝2.0Hz,2H),3.81(t,J＝5.6Hz,2H),3.55～3.47(m,5H)。HPLC：94.86％(220nm)，92.75％(215nm)，96.17％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₂₀Cl₂N₅O₆P质量计算值为491.05m/z，实测值为492.0[M+H]⁺。

2-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基)乙基二氢磷酸酯的制备(方案C-15中的步骤2)

在0℃下向2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙基二甲基磷酸酯(0.1g,197.52μmol，1eq)在DCM(5mL)中的溶液中滴加TMSBr(302.39mg，1.98mmol，256.26μL，10eq)。然后将混合物在25℃下搅拌3小时。LCMS和HPLC显示反应完成。将混合物倒入冰水(5mL)中并分离有机层。用DCM(5mL x 5)萃取水相。将合并的有机层用饱和NaHCO₃洗涤至pH＝7，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：15％-35％，12分钟)纯化残余物。减压除去洗脱液，得到呈白色固体状的2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙基二氢磷酸酯(14.2mg，27.67μmol，产率14.01％，纯度93.17％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.60～7.58(m,3H),7.33(dd,J＝8.0Hz,2.0Hz,1H),4.58(t,J＝5.2Hz,2H),4.50(d,J＝5.6Hz,2H),3.89～3.80(m,4H),3.53(t,J＝4.8Hz,2H)。HPLC：93.17％(220nm)，88.83％(215nm)，87.24％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₈Cl₂N₅O₆P质量计算值为477.04m/z，实测值为478.0[M+H]⁺。

方案C-16

化合物299

磷酸(2-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基)乙氧基)甲酯铵盐的制备

2-[2-(甲基硫烷基甲氧基)乙氧基]乙醇的制备(方案C-16中的步骤1)

在0℃下向2-(2-羟基乙氧基)乙醇(3.30g，31.06mmol，2.94mL，3eq)和DIEA(4.01g，31.06mmol，5.41mL，3eq)在DCM(20mL)中的溶液中滴加氯(甲硫基)甲烷(1g，10.35mmol，869.57μL，1eq)。将混合物在25℃下搅拌4小时。TLC指示反应完成。将反应混合物用H₂O(20mL)淬灭，然后用DCM和i-PrOH(3:1,20mL x 2)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶色谱(

40g

二氧化硅快速柱，洗脱液为100mL/min的0～100％石油醚/乙酸乙酯)纯化残余物。减压除去洗脱液。获得呈无色油状的化合物2-[2-(甲基硫烷基甲氧基)乙氧基]乙醇(1.25g，7.52mmol，产率72.62％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ4.69(s,2H),3.75～3.70(m,6H),3.62～3.60(m,2H),2.15(s,3H)。

5-氯-7-甲氧基-1-[2-[2-(甲基硫烷基甲氧基)乙氧基]乙基]吡唑并[4,3-d]嘧啶的制备(方案C-16中的步骤2)

在0℃下向5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(300mg，1.63mmol，1eq)、2-[2-(甲基硫烷基甲氧基)乙氧基]乙醇(324.22mg，1.95mmol，1.2eq)和PPh₃(639.44mg，2.44mmol，1.5eq)在THF(5mL)中的溶液中滴加DIAD(492.97mg，2.44mmol，474.01μL，1.5eq)。将混合物在25℃下搅拌5小时。TLC指示反应完成。将反应混合物用H₂O(5mL)淬灭并减压浓缩。水相用EtOAc(5mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶色谱(

12g

二氧化硅快速柱，洗脱液为60mL/min的0～100％石油醚/乙酸乙酯)纯化残余物。减压除去洗脱液。获得呈白色固体状的化合物5-氯-7-甲氧基-1-[2-[2-(甲基硫烷基甲氧基)乙氧基]乙基]吡唑并[4,3-d]嘧啶(790mg，粗品)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ8.05(s,1H),4.74(t,J＝5.6Hz,2H),4.57(s,2H),4.23(s,3H),3.93(t,J＝5.6Hz,2H),3.57(s,4H),2.08(s,3H)。

5-氯-1-[2-[2-(甲基硫烷基甲氧基)乙氧基]乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制备(方案C-16中的步骤3)

向5-氯-7-甲氧基-1-[2-[2-(甲基硫烷基甲氧基)乙氧基]乙基]吡唑并[4,3-d]嘧啶(300mg，901.43μmol，1eq)在MeOH(1mL)和H₂O(1mL)中的溶液中添加LiOH·H₂O(113.47mg，2.70mmol，3eq)。将混合物在25℃下搅拌2小时。TLC指示反应完成。减压浓缩反应混合物。用3N HCl使水溶液pH＝6并用EtOAc(3mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(3mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈白色固体状的化合物5-氯-1-[2-[2-(甲基硫烷基甲氧基)乙氧基]乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(215mg，674.45μmol，产率74.82％)。¹HNMR(CDCl₃,400MHz)δ7.88(s,1H),6.44(s,1H),4.81(t,J＝5.6Hz,2H),4.59(s,2H),3.97(t,J＝5.6Hz,2H),3.62(s,4H),2.09(s,3H)。

化合物300

5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-[2-(甲基硫烷基甲氧基)乙氧基]乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制备(方案C-16中的步骤4)

将5-氯-1-[2-[2-(甲基硫烷基甲氧基)乙氧基]乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(30mg，94.11μmol，1eq)和(3,4-二氯苯基)甲胺(33.13mg，188.22μmol，25.10μL，2eq)在t-BuOH(2mL)中的混合物在100℃下搅拌12小时。TLC指示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：Welch Xtimate C18 100mm x 25mm 3μm；流动相：[水(10mM NH₄HCO₃)-MeCN]；B％：35％-65％，10.5分钟)纯化残余物。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-[2-(甲基硫烷基甲氧基)乙氧基]乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(13.8mg，30.11μmol，产率31.99％，纯度100％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.06(s,1H),7.59～7.56(m,3H),7.32(dd,J＝8.4Hz,1.6Hz,1H),6.55(t,J＝6.0Hz,1H),4.58～4.56(m,4H),4.47(d,J＝5.6Hz,2H),3.79(t,J＝5.6Hz,2H),3.49(s,4H),2.00(s,3H)。HPLC：100.00％(220nm)，99.80％(215nm)，99.12％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₂₁Cl₂N₅O₃S质量计算值为457.07m/z，实测值458.0[M+H]⁺。

磷酸(2-(2-(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-7-氧代-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基)乙氧基)甲酯铵盐的制备(方案C-16中的步骤5)

在0℃下在N₂下向5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-[2-(甲基硫烷基甲氧基)乙氧基]乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.1g，218.17μmol，1eq)、H₃PO₄(213.79mg，2.18mmol，127.26μL 10eq)和4A MS(0.2g，2.18mmol)在THF(2mL)中的混合物中分批添加NIS(73.63mg，327.25μmol，1.5eq)。然后将混合物在25℃下搅拌15分钟。TLC显示反应完成。混合物用饱和NaHCO₃(3mL)淬火并用饱和Na₂CO₃在0℃下缓慢调节至pH＝7。分离水相并通过制备型HPLC(柱：Welch Xtimate C18 100mm x 25mm 3μm；流动相：[水(10mM NH₄HCO₃)-MeCN]；B％：12％-42％，10.5分钟)纯化。在冷冻干燥下除去溶剂。所得产物(80mg)通过制备型HPLC(柱：Welch Xtimate C18 100mm x 25mm3μm；流动相：[水(10mM NH₄HCO₃)-MeCN]；B％：12％-42％，10.5分钟)第二次进一步纯化。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物[偶氮氧基-[2-[2-[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-7-氧代-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基]乙氧基]乙氧基甲氧基]磷酰基]氧铵(30mg，54.54μmol，产率25.00％，纯度98.23％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.58(d,J＝2.4Hz,1H),7.57(d,J＝8.4Hz,1H),7.53(s,1H),7.35(dd,J＝8.0Hz,2.0Hz,2H),4.77(d,J＝8.4Hz,2H),4.57(t,J＝4.8Hz,2H),4.45(d,J＝5.6Hz,2H),3.71(t,J＝5.6Hz,2H),3.52～3.50(m,2H),3.46～3.44(m,2H)。HPLC：98.23％(220nm)，97.71％(215nm)，99.09％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₂₆Cl₂N₇O₇P质量计算值为507.05m/z，实测值为508.1[M+H]⁺。

方案D

方案D中用于制备化合物的一般程序

化合物的制备(方案D中的步骤1)

将5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(2.71mmol，1eq)和Select F(4.06mmol，1.5eq)在MeCN(2.5mL/mmol)中的混合物在80℃下搅拌12小时。TLC显示反应完成。将反应混合物用H₂O淬灭并用EtOAc萃取。合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶色谱(

10g

硅胶快速柱，洗脱液为65mL/min的0～50％乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化残余物，得到5-氯-3-氟-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶和3,5-二氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶的混合物。

化合物的制备(方案D中的步骤2)

在0℃下向5-氯-3-X-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(1.48mmol，1eq)、R₁OH(1.48mmol～4.44mmol，1eq～3eq)和PPh₃(1.63mmol～2.96mmol，1.1eq～2eq)在THF(5mL/mmol)中的混合物中滴加DIAD(1.63mmol～2.96mmol，1.1eq～2eq)。然后将混合物在0℃～25℃下搅拌一段时间(2小时～16小时)。TLC显示反应完成。将混合物用冰水淬灭并分离有机层。水相用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物。柱：a)Phenomenex Luna C18 150mm x 30mm 5μm；b)Phenomenexluna C18 250mm x 50mm 10μm；c)纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 5μm；d)WelchXtimate C18 100mm x 25mm 3μm；e)Xbridge 150mm x 30mm10μm。流动相：a)[水(0.1％TFA)-MeCN]，B％：15％-45％，10分钟或12分钟；b)[水(10mM NH₄HCO₃)-MeCN]；B％：1％-25％，10分钟。洗脱液经冻干干燥，得到所需产物。

化合物的制备(方案D中的步骤3)

向5-氯-3-X-7-甲氧基-1-R₁-H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(137.61μmol，1eq)在MeOH(3mL/mmol～5mL/mmol)或THF(3mL/mmol～5mL/mmol)和H₂O(3mL/mmol～5mL/mmol)中的溶液中添加LiOH·H₂O(412.83μmol～688.05μmol，3eq～5eq)。将混合物在20℃～25℃下搅拌一段时间(2小时～16小时)。TLC显示反应完成。减压浓缩反应混合物。用3N HCl使水溶液pH＝6，然后用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到所需产物。

化合物的制备(方案D中的步骤4)

将5-氯-3-X-1-R₁-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(108.44μmol，1eq)、R₃NH₂(162.66μmol～216.88μmol，1.5eq～2eq)和DIEA(433.76μmol，4eq，DIEA仅在R₃NH₂为HCl盐时添加)在t-BuOH或t-AmOH或NMP(3mL/mmol～10mL/mmol)中的混合物在100℃～160℃搅拌一段时间(2小时～16小时)。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC纯化残余物。柱：a)Xtimate C18 100mm x 30mm 3μm；b)纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 5μm；c)Waters Xbridge BEH C18 100mm x 25mm 5μm；d)Welch Xtimate C18 150mm x 25mm5μm；e)Phenomenex Gemini-NX 150 30mm 5μm；f)Kromasil C18 250mm x 50mm 10μm)。流动相：a)[水(0.1％TFA)-MeCN]，B％：25％-55％，7分钟，10分钟；b)[水(0.05％HCl)-MeCN]，B％：20％-45％，10分钟；c)[水(10mM NH₄HCO₃)-MeCN]，B％：20％-50％，10分钟；d)[水(10mMNH₄HCO₃)-MeCN]，B％：15％-70％，8分钟或10分钟或10.5分钟。在冷冻干燥下除去溶剂，得到所需产物。

化合物301

5-((3,4-二氟苄基)氨基)-3-氟-1-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备

5-氯-3-氟-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶和3,5-二氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶的制备(方案D中的步骤1)

将5-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(3g，16.25mmol，1eq)和Select F(8.64g，24.38mmol，1.5eq)在MeCN(40mL)中的混合物在90℃下搅拌12小时。TLC显示反应完成。将反应混合物用H₂O(20mL)淬灭并减压浓缩。水相用EtOAc(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过快速硅胶色谱(

40g

二氧化硅快速柱，洗脱液为100mL/min的0～50％乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化残余物。减压除去洗脱液。获得呈白色固体状的化合物5-氯-3-氟-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(1.54g，7.60mmol，产率46.77％)和3,5-二氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶的混合物。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ14.62(s,1H),13.99(s,1H),4.16(s,6H)。

2-(2-(5-氯-3-氟-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基)乙醇的制备(方案D中的步骤2)

在0℃下在N₂下向5-氯-3-氟-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(300mg，1.48mmol，1eq)和3,5-二氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(1.48mmol，1eq)、2-(2-羟基乙氧基)乙醇(314.32mg，2.96mmol，280.64μL，2eq)和PPh₃(582.66mg，2.22mmol，1.5eq)在THF(4mL)中的混合物中滴加DIAD(449.19mg，2.22mmol，431.92μL，1.5eq)。将混合物在25℃下搅拌5小时。TLC显示反应完成。将反应混合物用H₂O(3mL)淬灭并用EtOAc(5mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 8μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：25％-40％，10分钟)纯化残余物。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物2-[2-(5-氯-3-氟-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基]乙醇(40mg，137.61μmol，产率9.29％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ4.54(t,J＝5.2Hz,2H),4.17(s,3H),3.79(t,J＝5.2Hz,2H),3.36(s,4H)。获得呈白色固体状的化合物2-[2-(3,5-二氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基]乙醇(70mg，227.91μmol，产率15.39％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ4.63(t,J＝5.6Hz,2H),4.17(s,3H),3.83(t,J＝5.6Hz,2H),3.37(s,4H)。

5-氯-3-氟-1-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案D中的步骤3)

向2-[2-(5-氯-3-氟-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)乙氧基]乙醇(40mg，137.61μmol，1eq)在MeOH(1mL)和H₂O(1mL)中的溶液中添加LiOH·H₂O(17.32mg，412.83μmol，3eq)。将混合物在25℃下搅拌2小时。TLC显示反应完成。减压浓缩反应混合物。用3NHCl使水溶液pH＝6，然后用EtOAc(3mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(3mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈白色固体状的化合物5-氯-3-氟-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(30mg，108.44μmol，产率78.80％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ4.56(t,J＝5.6Hz,2H),3.79(t,J＝5.6Hz,2H),3.38(s,4H)。

5-((3,4-二氟苄基)氨基)-3-氟-1-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案D中的步骤4)

将5-氯-3-氟-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(30mg，108.44μmol，1eq)和(3,4-二氟苯基)甲胺(31.04mg，216.88μmol，25.66μL，2eq)在t-BuOH(2mL)中的混合物在100℃下搅拌12小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge BEH C18 100mm x 25mm 5μm；流动相：[水(10mMNH₄HCO₃)-MeCN]；B％：20％-50％，10分钟)纯化残余物。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物5-[(3,4-二氟苯基)甲基氨基]-3-氟-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(14mg，36.52μmol，产率33.68％，纯度100％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.21(s,1H),7.42～7.35(m,2H),7.19(s,1H),6.66(s,1H),4.53(s,1H),4.46～4.45(m,4H),3.76～3.73(m,2H),3.40～3.37(m,4H)。HPLC：100.00％(220nm)，99.87％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₆F₃N₅O₃质量计算值为383.12m/z，实测值为384.1[M+H]⁺。

化合物302

根据本文根据方案D中的步骤2至4所述的程序制备5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-3-氟-1-[2-(2-羟乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物((262.6mg，612.85μmol，产率60.55％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.29(m,1H),7.60～7.58(m,2H),7.33(dd,J＝8.0Hz,1.6Hz,1H),6.70(t,J＝6.0Hz,1H),4.47～4.44(m,4H),3.75(t,J＝5.6Hz,2H),3.42～3.37(m,4H)。HPLC：98.68％(220nm)，98.69％(215nm)，98.46％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₆Cl₂FN₅O₃质量计算值为415.06m/z，实测值为416.0[M+H]⁺。

化合物303

根据本文针对方案D中的步骤2至4所述的程序制备3-氯-5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮)。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(105.6mg，237.42μmol，产率53.53％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.29(m,1H),7.64(s,1H),7.59(d,J＝8.0Hz,1H),7.35(dd,J＝8.0Hz,1.6Hz,1H),6.76(t,J＝5.6Hz,1H),4.54(t,J＝5.6Hz,2H),4.48(d,J＝6.0Hz,2H),3.78(t,J＝5.6Hz,2H),3.42～3.38(m,4H)。HPLC：97.28％(220nm)，97.27％(215nm)，97.07％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₆Cl₃N₅O₃质量计算值为431.03m/z，实测值为432.0[M+H]⁺。

化合物304

根据本文针对方案D中的步骤2至4所述的程序制备3-氯-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮)。

该程序产生呈灰白色固体状的所需化合物(123.9mg，304.08μmol，产率31.25％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.28(s,1H),δ7.65(s,1H),7.64～7.58(m,1H),7.37～7.35(m,1H),6.76～6.73(m,1H),4.55(t,J＝5.6Hz,2H),4.48(d,J＝5.6Hz,2H),3.70(t,J＝5.6Hz,2H),3.19(s,3H)。HPLC：98.82％(220nm)，99.12％(215nm)，99.50％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₄Cl₃N₅O₂质量计算值为401.02m/z，实测值为402.0[M+H]⁺。

化合物305

根据本文针对方案D中的步骤2至4所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-3-氟-1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(47.9mg，119.51μmol，产率12.28％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.59～7.57(m,2H),7.33(s,1H),7.72(m,2H),4.64(s,4H),3.66(s,2H),3.18(s,3H)。HPLC：96.36％(220nm)，94.86％(215nm)，94.63％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₄Cl₂FN₅O₂质量计算值为385.05m/z，实测值为386.0[M+H]⁺。

化合物306

根据本文针对方案D中的步骤2至4所述的程序制备5-((3,4-二氯苄基)氨基)-3-氟-1-(噁唑-4-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(20.0mg，48.49μmol，产率8.72％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.30(s,1H),8.02(s,1H),7.59(d,J＝8.4Hz,2H),7.33(dd,J＝2.0Hz,8.4Hz,1H),6.75(t,J＝5.6Hz,1H),5.44(s,2H),4.47(d,J＝6.0Hz,2H)。HPLC：99.22％(220nm)，99.28％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₁Cl₂FN₆O₂质量计算值为408.03m/z，实测值为409.1[M+H]⁺。

化合物307

根据本文针对方案D中的步骤2至4所述的程序制备3-氯-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(噁唑-4-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈灰白色固体状的所需化合物(16.8mg，36.19μmol，产率7.96％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.29(s,1H),8.04(s,1H),7.64(s,1H),7.59(d,J＝8.0Hz,1H),7.35(d,J＝8.8Hz,1H),6.79(t,J＝5.2Hz,1H),5.52(s,2H),4.48(d,J＝5.6Hz,2H)。HPLC：91.69％(220nm)，88.44％(215nm)，93.54％(254nm)。S(ESI)：C₁₆H₁₁Cl₃N₆O₂质量计算值为424.00m/z，实测值为425.0[M+H]⁺。

化合物308

根据本文针对方案D中的步骤2至4所述的程序制备5-((3,4-二氟苄基)氨基)-3-氟-1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(28.5mg，80.05μmol，产率39.48％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.26(s,1H),7.39(t,J＝8.0Hz,,2H),7.19(s,1H),6.66(s,1H),4.46(s,4H),3.58(s,2H),3.19(s,3H)。HPLC：99.23％(220nm)，92.78％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₅H₁₄F₃N₅O₂质量计算值为353.11m/z，实测值为354.1[M+H]⁺。

化合物309

根据本文针对方案D中的步骤2至4所述的程序制备3-氯-5-[(3,4-二氟苯基)甲基氨基]-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(48.8mg，121.69μmol，产率54.87％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.21(s,1H),7.45～7.35(m,2H),7.22(s,1H),6.70(s,1H),4.54～4.46(m,5H),3.78(s,2H),3.397(s,4H)。HPLC：99.69％(220nm)，99.72％(215nm)，99.75％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₆ClF₂N₅O₃质量计算值为399.09m/z，实测值为400.0[M+H]⁺。

化合物310

根据本文针对方案D中的步骤2至4所述的程序制备5-[(4-氯-3-甲基-苯基)甲基氨基]-3-氟-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮。

该程序产生呈灰白色固体状的所需化合物(7.2mg，17.67μmol，产率24.44％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.92(s,1H),7.36(d,J＝8.0Hz,1H),7.31(s,1H),7.18(d,J＝8.4Hz,1H),6.64(t,J＝6.0Hz,1H),4.53(s,1H),4.47～4.42(m,4H),3.75(d,J＝5.6Hz,2H),3.39～3.36(m,4H),2.31(m,3H)。HPLC：97.15％(220nm)，96.73％(215nm)，96.78％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₉ClFN₅O₃质量计算值为395.12m/z，实测值为396.1[M+H]⁺。

化合物311

根据本文针对方案D中的步骤2至4所述的程序制备3-氟-5-((4-氟-3-甲基苄基)氨基)-1-(2-(2-羟乙氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(8.5mg，21.82μmol，产率35.51％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.12(s,1H),7.25(d,J＝7.2Hz,1H),7.21～7.15(m,1H),7.14～7.05(m,1H),6.55(t,J＝5.6Hz,1H),4.46(t,J＝5.2Hz,2H),4.40(d,J＝5.6Hz,2H),3.75(t,J＝5.6Hz,2H),3.41～3.37(m,4H),2.21(d,J＝1.2Hz,3H)。HPLC：97.38％(220nm)，97.37％(215nm)，97.86％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₉F₂N₅O₃质量计算值为379.15m/z，实测值为380.1[M+H]⁺。

化合物312

根据本文针对方案D中的步骤2至4所述的程序制备5-[(3-氯-4-甲基-苯基)甲基氨基]-3-氟-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(10.3mg，25.97μmol，产率35.92％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.12(s,1H),7.38(s,1H),7.30(d,J＝8.0Hz,1H),7.20(d,J＝7.6Hz,1H),6.62(t,J＝6.0Hz,1H),4.53(t,J＝5.2Hz,1H),4.47～4.42(m,4H),3.75(t,J＝5.6Hz,2H),3.41～3.37(m,4H),2.29(m,3H)。HPLC：99.78％(220nm)，99.73％(215nm)，99.71％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₉ClFN₅O₃质量计算值为395.12m/z，实测值为396.1[M+H]⁺。

化合物313

根据本文针对方案D中的步骤2至4所述的程序制备3-氟-5-((4-氟-4-甲基苄基)氨基)-1-(2-(2-羟乙氧基)乙基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

该程序产生呈浅黄色固体状的所需化合物(6.1mg，15.08μmol，产率20.86％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.18(s,1H),7.23(t,J＝8.0Hz,1H),7.11～7.06(m,2H),6.61～6.58(m,1H),4.47～4.43(m,4H),3.75(t,J＝5.6Hz,2H),3.29～3.25(m,4H),2.20(s,3H)。HPLC：93.77％(220nm)，93.53％(215nm)，94.33％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₁₉F₂N₅O₃质量计算值为379.15m/z，实测值为380.1[M+H]⁺。

化合物314

根据本文针对方案D中的步骤3至4所述的程序制备5-[(3,4-二氟苯基)甲基氨基]-1-(4-二甲基磷酰基丁基)-3-氟-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮)。

(4-(5-氯-3-氟-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)丁基)二甲基氧化膦的制备

将5-氯-3-氟-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(400mg，1.97mmol，1eq)、1-氯-4-二甲基磷酰基-丁烷(498.22mg，2.96mmol，1.5eq)和Cs₂CO₃(1.28g，3.94mmol，2eq)在丙酮(2mL)中的混合物在60℃下搅拌12小时。LC-MS显示反应完成。减压浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 100mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：15％-45％，10分钟)纯化残余物。在冷冻干燥下除去溶剂。获得呈白色固体状的化合物5-氯-1-(4-二甲基磷酰基丁基)-3-氟-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶(30mg，89.63μmol，产率4.55％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ4.54(t,J＝6.8Hz,2H),4.25(d,J＝3.2Hz,3H),2.06～2.03(m,2H),1.81～1.77(m,2H),1.67～1.63(m,2H),1.52(d,J＝12.4Hz,6H)。

(5-[(3,4-二氟苯基)甲基氨基]-1-(4-二甲基磷酰基丁基)-3-氟-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮)

该程序产生呈灰白色固体状的所需化合物(13mg，29.60μmol，产率63.28％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.42～7.37(m,2H),7.20～7.17(m,1H),6.66(t,J＝5.6Hz,1H),7.20(t,J＝4.4Hz,2H),4.34(t,J＝6.8Hz,2H),1.84～1.81(m,2H),1.68～1.63(m,2H),1.41～1.39(m,2H),1.34(s,3H),1.31(s,3H)。HPLC：97.30％(220nm)，96.48％(215nm)，98.01％(254nm)。MS(ESI)：C₁₈H₂₁F₃N₅O₂P质量计算值为427.14m/z，实测值为428.1[M+H]⁺。

化合物315

根据本文针对方案D中的步骤2至4所述的程序制备5-[(3,4-二氟苯基)甲基氨基]-3-氟-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(12.4mg，33.34μmol，产率28.75％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.24(s,1H),7.42～7.35(m,2H),7.17(dd,J＝10.8Hz,J＝5.6Hz,1H),6.64(t,J＝5.6Hz,1H),4.95～4.92(m,1H),4.66～4.61(m,1H),4.50～4.44(m,4H),4.34～4.31(m,1H),2.63～2.52(m,1H),2.43～2.42(s,1H)。HPLC：98.23％(220nm)，98.16％(215nm)，93.65％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₄F₃N₅O₂质量计算值为365.11m/z，实测值为366.2[M+H]⁺。

化合物316

根据本文针对方案D中的步骤2至4所述的程序制备5-((3,4-二氟苄基)氨基)-3-氟-1-(噁唑-4-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮)。

该程序产生呈白色固体状的所需化合物(9.9mg，26.27μmol，产率11.80％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.23(s,1H),8.29(s,1H),8.02(s,1H),7.43～7.33(m,2H),7.19(s,1H),6.69(t,J＝5.6Hz,1H),5.44(s,2H),4.46(d,J＝6.0Hz,2H)。HPLC：99.84％(220nm)，100.00％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₁₆H₁₁F₃N₆O₂质量计算值为376.09m/z，实测值为377.2[M+H]⁺。

化合物317和化合物318

(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-3-氟-1-(1-烟酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐)和3-氯-5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[1-(吡啶-3-羰基)-4-哌啶基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制备

4-(5-氯-3-氟-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(吡啶-3-基)甲酮和(4-(3,5-二氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(吡啶-3-基)甲酮的制备(方案D中的步骤2)

在0℃下向5-氯-3-氟-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶和5-氯-3-氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(0.4g，1.97mmol，1eq)、(4-羟基-1-哌啶基)-(3-吡啶基)甲酮(366.52mg，1.78mmol，0.9eq)和PPh₃(776.86mg，2.96mmol，1.5eq)在THF(10mL)中的混合物中滴加DIAD(598.92mg，2.96mmol，575.88μL，1.5eq)。然后将混合物在20℃下搅拌3小时。TLC显示反应完成。将混合物用冰水(10mL)淬灭并分离有机层。水相用EtOAc(15mL x 5)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL x 1)洗涤，经Na₂SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(柱：纳-微Kromasil C18 100mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：25％-40％，10分钟)纯化残余物。用饱和NaHCO₃使洗脱液pH＝6，然后用EtOAc(20mL x 4)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL x 1)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈白色固体状的化合物[4-(5-氯-3-氟-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶基]-(3-吡啶基)甲酮(45mg，115.15μmol，产率5.83％)。获得呈白色固体状的化合物[4-(3,5-二氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶基]-(3-吡啶基)甲酮(70mg，171.88μmol，产率8.70％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.76～8.73(m,2H),8.08～8.06(m,1H),7.65～7.62(m,1H),5.01～5.00(m,1H),4.61～4.58(m,1H),4.19(s,3H),3.69～3.66(m,1H),3.35～3.28(m,1H),3.09～3.07(m,1H),2.14～1.95(m,4H)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.73～8.70(m,2H),8.02～8.00(m,1H),7.60～7.57(m,1H),5.10～5.06(m,1H),4.60～4.59(m,1H),4.19(s,3H),3.69～3.67(m,1H),3.35～3.28(m,1H),3.09～3.07(m,1H),2.18～2.00(m,4H)。

5-氯-3-氟-1-(1-烟酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案D中的步骤3)

将[4-(5-氯-3-氟-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶基]-(3-吡啶基)甲酮(45mg，115.15μmol，1eq)和LiOH·H₂O(14.49mg，345.45μmol，3eq)在MeOH(1mL)和H₂O(1mL)中的溶液在25℃下搅拌3小时。LCMS显示反应完成。减压除去有机溶剂。用2N HCl缓慢地使水溶液pH＝6～7，然后用EtOAc(10mL x 5)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。残余物无需进一步纯化即用于下一步骤。获得呈白色固体状的化合物5-氯-3-氟-1-[1-(吡啶-3-羰基)-4-哌啶基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(42mg，111.47μmol，产率96.81％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ9.07(s,1H),8.79～8.78(m,1H),7.89(d,J＝8.0Hz,1H),7.56～7.50(m,1H),5.19～5.16(m,1H),4.58～4.56(m,1H),3.47～3.36(m,1H),3.26～2.93(m,2H),2.32～1.90(m,4H)。

(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-3-氟-1-(1-烟酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐)的制备(方案D中的步骤4)

将5-氯-3-氟-1-[1-(吡啶-3-羰基)-4-哌啶基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(38mg，100.86μmol，1eq)和(3,4-二氯苯基)甲胺(35.51mg，201.71μmol，26.90μL，2eq)在t-BuOH(2mL)中的混合物在N₂下在100℃下搅拌10小时。TLC显示反应完成。减压除去溶剂。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 100mm x 30mm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：30％-45％，10分钟)纯化残余物。冻干除去洗脱液。获得呈浅黄色固体状的5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-3-氟-1-[1-(吡啶-3-羰基)-4-哌啶基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(化合物317)(20.6mg，37.05μmol，产率36.73％，纯度99.42％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.95～8.88(m,2H),8.35(d,J＝8.0Hz,1H),7.90～7.89(m,1H),7.60～7.58(m,2H),7.34～7.32(m,1H),7.12(t,J＝6.8Hz,1H),5.12～5.06(m,1H),4.58～4.54(m,1H),4.47(d,J＝5.2Hz,2H),3.67～3.62(m,1H),3.30～3.27(m,1H),3.02～2.99(m,1H),2.07～1.90(m,4H)。HPLC：99.42％(220nm)，99.53％(215nm)，100.00％(254nm)。MS(ESI)：C₂₃H₂₁Cl₃FN₇O₂质量计算值为515.10m/z，实测值为516.2[M+H]⁺。

3,5-二氯-1-(1-烟酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案D中的步骤2)

将[4-(3,5-二氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶基]-(3-吡啶基)甲酮(60mg，147.33μmol，1eq)和LiOH·H₂O(18.55mg，441.99μmol，3eq)在MeOH(1mL)和H₂O(1mL)中的溶液在20℃下搅拌3小时。LCMS显示反应完成。减压除去有机溶剂。用N HCl缓慢地使水溶液pH＝6～7，然后用EtOAc(10mL x 5)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。残余物无需进一步纯化即用于下一步骤。获得呈白色固体状的化合物3,5-二氯-1-[1-(吡啶-3-羰基)-4-哌啶基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(50mg，127.15μmol，产率86.31％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ9.07(s,1H),8.79(d,J＝4.0Hz,1H),7.90～7.88(m,1H),7.50～7.49(m,1H),5.25～5.23(m,1H),4.61～4.58(m,1H),3.68～3.66(m,1H),3.20～2.94(m,2H),2.33～2.03(m,4H)。

(3-氯-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(1-烟酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐)的制备(方案D中的步骤3)

在100℃下将3,5-二氯-1-[1-(吡啶-3-羰基)-4-哌啶基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(50mg，127.15μmol，1eq)和(3,4-二氯苯基)甲胺(44.77mg，254.31μmol，33.92μL，2eq)在t-BuOH(2mL)中的混合物在N₂下搅拌10小时。LCMS和HPLC显示反应完成。减压除去溶剂。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 100mm 30mmmm 5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-MeCN]；B％：30％-60％，10分钟)纯化残余物。冻干除去洗脱液。获得呈白色固体状的3-氯-5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[1-(吡啶-3-羰基)-4-哌啶基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(化合物318)(7.5mg，12.86μmol，产率10.12％，纯度97.64％，HCl)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.93～8.85(m,2H),8.36～8.35(m,1H),7.89～7.85(m,1H),7.68～7.62(m,2H),7.7.38～7.34(m,1H),7.11(t,J＝6.8Hz,1H),5.15～5.10(m,1H),4.48～4.44(m,1H),4.43(d,J＝5.2Hz,2H),3.67～3.64(m,1H),3.32～3.27(m,1H),3.05～2.99(m,1H),2.07～2.00(m,4H)。HPLC：97.64％(220nm)，97.97％(215nm)，99.39％(254nm)。MS(ESI)：C₂₃H₂₁Cl₄N₇O₂质量计算值为531.07m/z，实测值为532.1[M+H]⁺。

化合物319

(5-((3,4-二氟苄基)氨基)-3-氟-1-(1-异烟酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐的制备

(4-羟基哌啶-1-基)(吡啶-4-基)甲酮的制备(方案D中的步骤1)

(4-(5-氯-3-氟-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(吡啶-4-基)甲酮和(4-(3,5-二氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(吡啶-4-基)甲酮的制备(方案D中的步骤1)

向5-氯-3-氟-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(0.3g，1.48mmol，1eq)和3,5-二氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶(1.48mmol，1eq)在THF(3mL)中的溶液中添加(4-羟基-哌啶-1-基)-(4-吡啶基)甲酮(458.15mg，2.22mmol，1.5eq)，PPh₃(582.66mg，2.22mmol，1.5eq)。然后在0℃下滴加DIAD(449.19mg，2.22mmol，431.92μL，1.5eq)。将混合物在25℃下搅拌10小时。LCMS和HPLC显示反应完成。添加H₂O(6mL)。用EtOAc(8mL x 3)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水(5mL x 1)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过制备型HPLC(TFA条件柱：Phenomenex Luna C18 100x30mm x 5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：25％-40％，10分钟)纯化残余物。在30℃下减压除去MeCN。然后用EtOAc(15mL x 3)萃取水相。将合并的有机层用盐水(15mL x 2)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。获得呈棕色油状的化合物(4-(5-氯-3-氟-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(吡啶-4-基)甲酮(0.19g，218.78μmol，产率14.77％，纯度45％)。获得呈浅黄色固体状的化合物(4-(3,5-二氯-7-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(吡啶-4-基)甲酮(0.35g，300.80μmol，产率20.31％，纯度35％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.69～8.67(m,2H),7.45～7.43(m,2H),5.00(s,1H),4.60～4.56(m,2H),4.18(s,3H),3.59～3.55(m,2H),3.09～3.01(m,2H),1.99～1.97(m,2H)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ8.78～8.77(m,2H),7.41～7.39(m,2H),4.96～4.95(m,1H),4.27(s,3H),3.76～3.78(m,1H),3.25～3.27(m,1H),3.02～3.04(m,1H),2.27～2.24(m,4H),2.05～2.02(m,1H)。

5-氯-3-氟-1-(1-异烟酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮的制备(方案D中的步骤2)

向[4-(5-氯-3-氟-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶基]-(4-吡啶基)甲酮(0.19g，291.71μmol，1eq)在H₂O(2mL)和MeOH(2mL)中的溶液中添加LiOH·H₂O(36.72mg，875.13μmol，3eq)。将混合物在25℃下搅拌10小时。TLC显示反应完成。向反应混合物中添加H₂O(5mL)。将反应混合物减压浓缩以除去MeOH。用HCl(3N)将混合物调节至pH＝6。然后用EtOAc(8mL x 3)萃取混合物。将合并的有机层用盐水(6mL x 1)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。获得呈黄色油状的化合物5-氯-3-氟-1-(1-异烟酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮(0.17g，157.92μmol，产率54.14％，纯度35％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.68(d,J＝6.0Hz,2H),7.44～7.43(m,3H),5.18(m,1H),4.59～4.55(m,2H),4.04～4.02(m,2H),3.02(d,J＝11.6Hz,2H),1.98～1.94(m,2H)。

(5-((3,4-二氟苄基)氨基)-3-氟-1-(1-异烟酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐)的制备(方案D中的步骤3)

向5-氯-3-氟-1-[1-(吡啶-4-羰基)-4-哌啶基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.12g，111.47μmol，1eq)在t-BuOH(2mL)中的溶液中添加(3,4-二氟苯基)甲胺(31.91mg，222.95μmol，26.37μL，2eq)。将混合物在100℃下搅拌12小时。LCMS和HPLC显示反应完成。减压浓缩反应混合物，得到残余物。通过制备型HPLC(HCl条件柱：Phenomenex Luna C18100x30mm x 5μm；流动相：[水(0.04％HCl)-MeCN]；B％：20％-45％，10分钟)纯化残余物。在30℃下减压除去MeCN。将残余物经冻干干燥。获得呈白色固体状的化合物5-((3,4-二氟苄基)氨基)-3-氟-1-(1-异烟酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐(26.7mg，54.15μmol，产率48.58％，纯度98.049％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ8.95～8.93(m,2H),7.99～7.97(m,2H),7.42～7.34(m,2H),7.20～7.10(m,2H),5.10～5.07(m,1H),4.56～4.53(m,1H),4.46(d,J＝4.0Hz,2H),3.54～3.52(m,1H),3.28～3.26(m,1H),3.05～3.03(m,1H),2.06～1.89(m,4H)。HPLC：98.05％(220nm)，97.14％(215nm)，98.68％(254nm)。MS(ESI)：C₂₃H₂₁ClF₃N₇O₂质量计算值为483.16m/z，实测值为484.1[M+H]⁺。

方案E

化合物320

(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-7-氧代-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-6(7H)-基)甲基磷酸二氢酯的制备

((5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-7-氧代-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-6(7H)-基)甲基)磷酸氢酯的制备(方案E中的步骤1)

向5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(500mg，1.26mmol，1eq)和二叔丁基氯甲基磷酸酯(974.32mg，3.77mmol，3eq)在二噁烷(20mL)中的溶液中添加Cs₂CO₃(1.64g，5.02mmol，4.56μL，4eq)和NaI(28.23mg，188.33μmol，1.5eq)。将混合物在100℃下搅拌20小时。LCMS显示5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮几乎耗尽且检测到一个所需峰。过滤后，减压浓缩滤液。获得呈白色固体状的化合物叔丁基[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-7-氧代-吡唑并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲基磷酸氢酯(1.3g，粗产物)。MS(ESI)：C₂₁H₂₈Cl₂N₅O₇P质量计算值为563.11m/z，实测值为564.1[M+H]⁺。

(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-7-氧代-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-6(7H)-基)甲基磷酸二氢酯的制备(方案E中的步骤2)

在0℃下向叔丁基[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-7-氧代-吡唑并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲基磷酸氢酯(1.3g，921.41μmol，1eq)在DCM(10mL)中的溶液中滴加TFA(1mL)。然后将混合物在25℃下搅拌1小时。LCMS显示反应完成。在减压下浓缩混合物。通过制备型HPLC(柱：Welch Xtimate C18 100mm x 25mm 3μm；流动相：[水(0.1％TFA)-MeCN]；B％：20％-50％，10分钟)纯化残余物。减压除去洗脱液。获得黄色固体状化合物[5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-7-氧代-吡唑并[4,3-d]嘧啶-6-基]甲基二氢磷酸酯(97.1mg，187.51μmol，产率20.35％，纯度98.15％)。¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.95(s,1H),7.64(d,J＝6.0Hz,1H),7.61(s,1H),7.55(d,J＝8.4Hz,1H),7.37(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),5.84(d,J＝10.0Hz,2H),4.59(t,J＝6.0Hz,2H),4.53(s,2H),3.80(t,J＝6.0Hz,2H),3.42～3.37(m,4H)。HPLC：98.15％(220nm)，97.83％(215nm)，96.75％(254nm)。MS(ESI)：C₁₇H₂₀Cl₂N₅O₇P质量计算值为507.05m/z，实测值为508.1[M+H]⁺。

化合物功效

化合物抑制DNA pol IIIC酶活性的能力可通过使用DNA聚合酶测定进行测试，例如，如巴尔内斯(Barnes)和布朗(Brown)，核酸研究(Nucl.Acids Res.)第6卷，1203-1219，1979；特兰托洛(Trantolo)等人，医药化学期刊(J.Med.Chem.)第29卷，676-681，1986；米尔斯(Mills)等人，细菌期刊(J.Bacterial.)第132卷，641-649，1977；洛(Low)等人，生物化学期刊(J.Biol.Chem.)第251卷，1311-1325，1976中所描述。这种快速筛选方法可在标准DNA聚合酶活性测定中使用天然或重组DNA pol III酶。通过在与对照并排测定中包含测试化合物，可评估测试化合物对聚合酶活性的作用。优选对天然或重组细菌DNA聚合酶III具有适当抑制水平(Ki<5μM)的化合物。

抗微生物功效可通过在生长培养基中或在补充有适当生长培养基的琼脂平板上进行微生物培养的标准方法来测定。例如，微生物在化合物的连续稀释液的存在下在适当的载体中生长，并且在合适的生长期后，通过视觉或仪器手段测量微生物密度。没有生长的化合物的浓度是化合物的最小抑制浓度(MIC)。优选具有适当生长抑制水平(MIC<4μg/ml)的化合物。

毒性

本发明的化合物对动物显示出低毒性。由于化合物靶向DNA复制中的必需酶，这些酶先前不是任何市售抗生素的靶标，因此耐药性的发展将降至最低。化合物可用于规避致病性革兰氏阳性细菌对常规抗微生物剂的天然和获得性耐药性，而不会对受感染的动物产生有害影响。

化合物对哺乳动物细胞的毒性可根据本领域技术人员已知的标准方法进行评估(参见，例如，古茨(Gootz)，临床微生物研究(Clin.Microbial.Rev.)，第3卷，13-31，1990)。毒性浓度(或“IC₅₀”)可通过使用药理学领域熟知的方案测定。待考虑用于进一步治疗评价的化合物的IC₅₀值的合适范围将大于细菌培养物中的MIC，即治疗指数应大于10。

化合物的治疗性给药

本文所描述的化合物可用于治疗由革兰氏阳性细菌(包含对常见抗生素药物具有耐药性的菌株)引起的人类微生物感染。它们还可用于治疗动物(如猪、牛、马、山羊、鸡、火鸡、绵羊、大鼠、小鼠和兔)中的相关革兰氏阳性细菌感染，以及用于消除或避免真核细胞培养物或其它介质(例如食品、化妆品、医疗装置和医院用品)的细菌或支原体感染。

本发明的化合物可以任选地与可接受的稀释剂、载体或赋形剂一起和/或以单位剂型配制以供药物、兽医和组织培养用途。在使用本发明的化合物时，可以使用常规的药物、兽医或培养实践来提供合适的制剂或组合物，所有这些都涵盖在本发明的药物组合物中。

对于人或动物使用，本发明的制剂可以通过肠胃外给药，例如静脉内、皮下、肌内、眼眶内、眼、心室内、颅内、囊内、脊柱内、脑池内或腹膜内给药，或通过鼻内、气溶胶、划痕、口服、口腔、直肠、阴道或局部给药来给药。本发明的制剂还可以通过使用外科植入物给药，外科植入物以丸剂形式或在预选的时间段内缓慢释放本发明的化合物。

非限制性地，肠胃外制剂可以是例如用于口服给药的液体溶液或悬浮液的形式，制剂可以是例如片剂、胶囊、液体溶液和悬浮液的形式(其中此类溶液和悬浮液特别用于拟用于儿科用途的制剂)；以及对于鼻内给药，制剂可以是例如粉末、滴鼻剂或气雾剂的形式。用于肠胃外、口服或鼻内递送本发明化合物的其它合适制剂是本领域普通技术人员熟知的。用于制备制剂的本领域熟知的方法可以在例如《雷明顿药物科学(Remington'sPharmaceutical Sciences)》中找到。用于肠胃外给药的制剂可以含有作为赋形剂的无菌水或盐水、乙醇、丙二醇、聚亚烷基二醇(如聚乙二醇)、植物来源的油、氢化萘或生物相容的、生物可降解的丙交酯聚合物。聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物可用于控制本发明化合物的释放。用于本发明化合物的其它潜在有用的肠胃外递送系统包含乙烯-乙酸乙烯酯共聚物颗粒、渗透泵、可植入输注系统和脂质体。用于吸入的制剂可以含有乳糖作为赋形剂，或者可以是含有例如聚氧乙烯-9-月桂基醚、甘氨胆酸盐和脱氧胆酸盐的水溶液，或者可以是以滴鼻剂形式给药的油性溶液，或者可以是鼻内施用的凝胶。用于肠胃外给药的制剂还可以包含用于颊给药的甘氨胆酸盐、用于直肠给药的甲氧基水杨酸盐或用于阴道给药的柠檬酸。

本发明的制剂中化合物的浓度将根据许多因素而变化，包括给药剂量和给药途径。通常，本发明化合物可以在含有约0.1至10％w/v化合物的水性生理缓冲溶液中提供，用于肠胃外给药。一般剂量范围为每天约0.01mg/kg至约1g/kg体重，例如每天约0.01mg/kg至100mg/kg体重。待给药剂量取决于待治疗的感染的类型和进展程度、患者的总体健康状况和给药途径。对于局部和口服给药，制剂和剂量可以与其它抗生素药物使用的相似。

在一个实施例中，将本发明的化合物或组合物给药于已诊断患有革兰氏阳性细菌感染的动物(如人类)患者。还可以将化合物给药于动物或人以抑制或降低革兰氏阳性细菌感染的可能性，特别是在易受此类感染的动物或人中(包含但不限于免疫缺陷或免疫受损的人类患者或最近接受过医疗手术的人类患者)。在其它实施例中，用新组合物处理培养的真核细胞，或添加组合物以抑制或降低此类感染的可能性(例如，预防性治疗)。本发明的化合物还可用于防止食品、化妆品和医疗用品中和表面上的细菌生长。

化合物可以预防性给药和在感染发生后给药。预防最适合免疫受损的人类患者和动物以及手术或牙科手术后的患者和动物。用于应用本发明的方法的相关条件的列表不旨在是限制性的，并且可以使用本文所描述的25种方法和/或化合物治疗对化合物有反应的任何合适的感染。

化合物还可用于处理或涂覆介质或表面以防止或降低微生物生长的程度。例如，本发明的化合物可以与真核培养基(例如，固体或液体培养基)混合以防止革兰氏阳性细菌生长。此外，本发明的化合物可用于处理表面的消毒剂制剂中，例如用于清洁和消毒表面的液体制剂，例如厨房、浴室、医院或其它医学治疗或潜在微生物生长区域中的表面。也可用本发明的化合物处理或涂覆医疗装置和其它表面以控制微生物生长。医疗装置包含全部或部分植入动物体内的医疗装置和动物体外的医疗装置。医疗装置的实例包含但不限于导管、透析泵、血液收集设备、支架和药物递送装置。本发明化合物用于表面处理或涂料中的标准制剂是本领域技术人员已知的。

DNA聚合酶IIIC的生产

从基因组DNA扩增DNA聚合酶IIIC编码基因。设计引物使得5'末端和3'末端分别含有BamHI和XhoI切割位点。将片段直接插入表达质粒pET-28a(+)的BamHI和XhoI位点之间。重组蛋白具有原始蛋白的全长和His标签、凝血酶位点和N端的T7标签。使用8个引物覆盖整个编码区，通过Sanger测序证实重组蛋白的编码序列。

将质粒转移到BL21(DE3)感受态大肠杆菌细胞中。将阳性克隆接种到1L LB培养基中并在37℃下以200rpm旋转培养以达到OD600＝0.6。然后添加诱导剂IPTG 1mM以在16℃诱导表达18小时。收集细胞并悬浮于裂解缓冲液(25mM的Tris-HCl pH＝7.5，0.15M的NaCl，20mM的咪唑，2mM的β-巯基乙醇和1×Roche蛋白酶抑制剂混合物)中。通过超声处理裂解细胞，以50000g离心碎片1小时。

首先通过使裂解物通过Ni柱分离蛋白质。用50柱体积(CV)的结合缓冲液(不含蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液)洗涤柱，然后用10CV的洗涤缓冲液(含有共40mM的咪唑的结合缓冲液)洗涤柱。用洗脱缓冲液(含有共300mM的咪唑的结合缓冲液)洗脱蛋白质。

然后使用含有25mM Tris-HCl pH 7.5、0.15M的NaCl、5％甘油和1mM DTT的Superdex 200increase 10/300柱通过尺寸排阻色谱法进一步纯化粗提取物。最终产物作为50-100μL等分试样储存在-80℃下。

DNA聚合酶IIIC的Ki测定

将化合物溶解于DMSO中至1mg/ml(或10mg/ml)作为化合物工作溶液。在测试当天，将180μL的DMSO添加至孔A中，并将100μL的DMSO添加至圆底96孔板(Corning-3788)中的孔B至孔H中。将20μL的化合物工作溶液的等分试样添加至孔A中并通过移液混合。将50μL的溶液从孔A转移至孔B并通过移液混合以进行3倍稀释液。对孔B至孔C重复该程序，以此类推，直到孔G、孔H仅含有DMSO。这生成一系列化合物工作溶液，其在纯DMSO中的浓度为100、33.3、11.1、3.7、1.2、0.4、0.14和0μg/ml。这被视为“母板”。

使用96-头移液管站(CyBio)，将1μL的化合物工作溶液从母板转移到相同的96孔板中。这是“测试板”。将测试板保持在室温下。

从-80℃的冷冻箱中取出酶(DNA聚合酶IIIC)样品。将其解冻并保存在冰上。用稀释缓冲液(25mM Tris-HCl，pH＝7.5，0.15M NaCl，5％甘油，1mM DTT)将酶稀释至0.025至0.06U/μL。一个酶单位被定义为在相同系统中在标准测定(存在所有核苷酸作为底物，与省略dGTP的“截断测定”相反)中在30分钟内掺入250皮摩尔的dTTP的酶量。将稀释的酶到新的96孔板(Corning-3788)中，每孔20μL。将该板置于冰上。这是“酶板”。

为了制备主反应混合物，依次添加以下试剂并在适当的试管中混合(始终将主混合物置于冰上)：

a)500μL/ml的40％甘油

b)30μL/ml的1M Tris-HCl(pH＝7.5)(Aldrich-154563)

c)20μL/ml的0.5M MgAc(惠氏(Hushi)30110518)

d)4μL/ml的1M DTT(阿拉丁(Aladdin)D104859)

e)25μL/ml的1mM dATP(生工生物(Sangon Biotech))

f)25μL/ml的1mM dCTP(生工生物)

g)10μl/ml的1mM dTTP(生工生物)

h)400μl/ml的1mg/ml活化小牛胸腺DNA(西格玛(Sigma)D4522)

将主混合物简单混合并用5μL/ml的2'-dTTP四钠盐[甲基-³H]2.5mCi/ml(珀金埃尔默(PerkinElmer))掺料。这是最终的主混合物。将最终的主混合物倒入储液器中，并将25μL添加至已含有1μL的化合物的测试板的每个孔中。然后将来自酶板的1μL的稀释酶的等分试样添加至测试板的相应孔中。

测试板含有0.025U的酶，每孔一系列浓度的化合物，总体积为27μL。将板立即置于31℃培养箱中并在搅拌下孵育30分钟。

将板从培养箱中取出并立即将100μL的4℃10％TCA(萨恩化学(Sa En Chemical)10000253)添加到每个孔中以终止反应。将板在4℃下孵育30分钟以使大分子沉淀。将Unifilter GF/B滤板(珀金埃尔默)用50μl/孔1M HCl+100mM焦磷酸钠(阿法埃莎(AlfaAesar)A17546)预润湿。使用珀金埃尔默细胞收集器将样品收集到滤板上。在细胞收集器上用～200μL冷的1M HCl+100mM焦磷酸钠洗涤滤板四次，然后用～200μL冷的90％乙醇洗涤两次。将滤板在50℃烘箱中干燥20分钟。

将滤板的底部用相容的粘着剂(珀金埃尔默)密封，将50μL的闪烁混合液(MicroScint-O)添加到各孔中，并将板的顶部用透明膜密封。使用MicroBeta计数器对板进行分析。使用常规的³H方案测量每个孔30秒的闪烁。数据以每分钟计数(CPM)的方式读取。

原始数据在GraphPadPrism中使用内置非线性回归方程式、log(抑制剂)与归一化响应变量斜率进行分析。所用测定直接提供多底物酶的Ki值(给定抑制剂的Ki被定义为对对照活性产生50％抑制作用的浓度)(莱特(Wright)等人；塞尔(Cer)等人；托尔蒂(Torti)等人)

最小抑制浓度的测定

材料和方法

供试品：

左氧氟沙星(Sigma-28266-1G-F)和万古霉素(Sigma-94747-1G)购自西格玛(SIGMA)。

细菌分离株：

测试的细菌是金黄色葡萄球菌NRS384(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，MRSA)、金黄色葡萄球菌ATCC 29213(甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌，MSSA)、肺炎链球菌ATCC 49619、粪肠球菌ATCC 29212、屎肠球菌ATCC 700221(耐万古霉素肠球菌，VRE)、枯草芽孢杆菌ATCC6633和大肠杆菌ATCC 25922。详细信息列于表1中。

金黄色葡萄球菌NRS384获自NARSA(金黄色葡萄球菌抗微生物药物耐药性网络，现在菌株收藏在BEI资源中)。其它细菌分离珠来自ATCC(美国菌种保藏中心)。在接收来自上述机构的细菌样品后，根据供应商提供的手册培养细菌。将细菌储存在-80℃的25％甘油(最终浓度)中。

表1：MIC筛选面板

MHA：米勒-海顿琼脂(Mueller-Hinton IIAgar)(BD-211438)

MHIIB：米勒-海顿II肉汤(BD-212322)

LHB：裂解马血(上海远慕生物科技有限公司(Shanghai YuanMu BiologicalTechnology Co.Ltd.)YM-U161)

EDTA：乙二胺四乙酸(英杰公司(Invitrogen)AM9260G)

基于肉汤微量稀释的最小抑制浓度(MIC)测定

在测试当天，将化合物溶解于纯DMSO(西格玛276855-1L)中至20mg作为原液。在v形底96孔板(Axygen-wipp02280)中，通过手动移液将20μl DMSO添加至孔2至孔12中。向孔1添加12.8μL化合物DMSO原液(20mg/ml)并通过移液与27.2μl DMSO混合。通过将20μl的溶液从孔1转移并混合至孔2，然后从孔2转移并混合至孔3，以此类推，直至孔11来进行两倍连续稀释。向孔12添加20μl不含化合物的DMSO。这是药物“母板”。从孔1到孔12，母板中的药物浓度在DMSO中为6.4、3.2、1.6、0.8、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125和0.00625μg/ml。使用多移液管进行连续稀释。可以根据化合物的效力调节浓度。可以使用

声学液体处理系统代替手动移液操作来制作子板。

在MIC测试前一天，将细菌菌株从-80℃甘油原液划线到MHA板上并在37℃下孵育20小时。将肺炎链球菌在血琼脂上划线并在37℃下在5％CO₂中孵育。使用接种环(Greiner-731175)挑取单个菌落并悬浮于5ml无菌盐水中。将悬浮液的浊度调节至0.10(西门子微扫描(Siemens MicroScan)浊度计)，等于～1.0×10⁸cfu/ml。在相应的测试培养基中将细菌悬浮液稀释200倍(表1)。这用于接种子板。

为了制备U形底96孔‘子板’(Costar 3788)，然后使用多移液管将来自母板的1μl溶液的等分试样复制转移到子板中。

使用多移液管将99μl细菌悬浮液的等分试样接种到子板的每个孔中。每个孔含有～5.0×10⁵cfu/ml细菌、1％DMSO和在100μl相应测试培养基中从孔1至孔12分别以64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625和0μg/ml连续稀释的化合物。

将板在环境大气和37℃培养箱中孵育20小时。

通过目测确定MIC值为完全或显着地抑制测试培养基中细菌生长的最低化合物浓度。测试本发明的化合物对多种细菌生物体的抗菌活性，细菌生物体包含枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、屎肠球菌、肺炎链球菌和大肠杆菌。实例2、44、56、77、126、149、167、211、212、213、214、218、242、273和276中所描述的化合物对金黄色葡萄球菌DNA polIIIC酶的Ki为0.053-1.00μM。实例2、44、53、56、90、134、212、213、214、218、222、304、305和307中所描述的化合物对金黄色葡萄球菌NRS384(MRSA)(μg/ml)和屎肠球菌ATCC 700221(VRE)(μg/ml)的MIC为≤1μg/ml。

化合物对大肠杆菌表现出弱革兰氏阴性活性，其MIC为16->64μg/ml。320种化合物的MIC数据如表2所示。

表2 MIC数据

参考文献

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仅使用常规实验，本领域技术人员将认识到或能够确定本文所述具体程序的许多等同物。这些等同物被认为在本发明的范围内。在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以对本发明进行各种替换、改变和修改。其它方面、优点和修改在本发明的范围内。通过本申请引用的所有参考文献、公布的专利和公布的专利申请的内容通过引用并入本文。可以为本发明及其实施例选择那些专利、申请和其它文献的适当组成部分、工艺和方法。

Claims

1.一种对应于式I的化合物，

其中A和B独立地为N或CH；

其中n为0-3；

其中R₁是(CH2)_m-{(V)_o-(CH₂)_p}_q—W；

其中V是CH₂、CH═CH、C≡C、CO、O、S、SO、SO₂、NR₄、CHR₅、OC(O)、(O)CO、CONR₆、NR₇CO、SO₂NH、NHSO₂；C_3-8环烷基，

其中R₄、R₆和R₇各自独立地为H或C_1-6烷基；

其中R₅是OH或C_1-6烷基、CH(R₈R₉)，

其中R₈和R₉各自独立地为H、卤素或C_1-6烷基；

其中W是H、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C_3-8环烷基、取代或未取代的C_2-8杂环基、取代或未取代的C_6-14芳基、取代或未取代的C_1-10杂芳基、NH₂、CN、OR₁₀、SR₁₁、COR₁₂、OCOR₁₃、NR₁₄COR₁₅、NR₁₆R₁₇、NR₁₈(CO)NHR₁₉、CH(CO₂R₂₀)₂、CO₂R₂₁、NHSO₂R₂₂、CONR₂₃R₂₄、CH₂CO₂R₂₅、S(O)R₂₆或S(O₂)R₂₇其中R₁₀–R₂₇各自独立地为H、取代或未取代的C_1-6烷基、取代或未取代的C_3-8环烷基、取代或未取代的C_2-8杂环基、取代或未取代的C_6-14芳基、取代或未取代的C_1-10杂芳基，

其中m为1至5，o为0至4，p为0至4，且q为0至4；

其中R₃是经一或多个选自由以下组成的群组的取代基取代的C_6-14芳基或C_1-10杂芳基：Cl、F、Br、I、OH、CN、C_1-6烷基、CF₃、CHF₂、CF₃CH₂和OCF₃；

其中R₀是H、CH₂OPO(OH)₂、CH₂OCONHCH₂(CH₂)_tOPO(OH)₂、CH₂OCOCH₂(CH₂)_tOPO(OH)₂、COO(CH₂)_tOPO(OH)₂、CH₂OPO(OH)OPO(OH)₂或(CR₃₀R₃₁O)s-X-Y-(CR₃₀R₃₁)_t-OPO(OR₂₈)(OR₂₉)；

其中X是直接键或(C＝O)，Y是直接键或氧

s为0或1

t为1、2或3

R₃₀和R₃₁各自独立地为氢或C1-4烷基；且

R₃₂和R₃₃各自独立地为氢或可水解的酯基，

2.根据权利要求1所述的化合物，

其中A和B独立地为N或CH；

其中n为0至3；

其中R₁是(CH2)_m-{(V)_o-(CH₂)_p}_q—W；

其中V是CH₂、CO、O、OC(O)或(O)CO，

其中W是H、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、NH₂、CN或OR₁₀，

其中R₁₀是H或取代或未取代的C_1-6烷基，

其中m为1至5，o为0至4，p为0至4，且q为0至4；

其中R₀是H，

3.根据权利要求2所述的化合物，

其中A和B是N；

其中n为0至1；

其中R₁是(CH₂)_m-{(V)_o-(CH₂)_p}_q—W；

其中V是CO、O、OC(O)或(O)CO，

其中W是H、卤素、NH₂、CN或OR₁₀，

其中R₁₀是H或取代或未取代的C_1-6烷基，

其中m为1至5，o为0至1，p为0至4，且q为0至4；

其中R₂是H或卤素或CN，

其中R₃为经一或多个选自由以下组成的群组的取代基取代的C_6-14芳基或C_1-10杂芳基：Cl、F、CF₃、CHF₂、CF₃CH₂和OCF₃；

其中R₀是H，

4.根据权利要求3所述的化合物，

其中A和B是N；

其中n为1；

其中R₁是(CH2)_m-{(V)_o-(CH₂)_p}_q—W；

其中V是CO、O、OC(O)或(O)CO，

其中W是H、卤素、NH₂、CN或OR₁₀，

其中R₁₀是H或取代或未取代的C_1-6烷基，

其中m为1至2，o为1，p为1至2，且q为0至1；

其中R₂是H或卤素或CN，

其中R₀是H，

5.根据权利要求4所述的化合物，

其中A和B是N；

其中n为1；

其中R₁是(CH2)_m-{(V)_o-(CH₂)_p}_q—W；

其中V是O、OC(O)或(O)CO，

其中W是H、卤素、NH₂或OR₁₀，

其中R₁₀是H或取代或未取代的C_1-6烷基，

其中m为1至2，o为1，p为1至2，且q为0至1；

其中R₂是H或卤素或CN，

其中R₀是H，

6.根据权利要求5所述的化合物，

其中A和B是N；

其中n为1；

其中R₁是(CH2)_m-{(V)_o-(CH₂)_p}_q—W；

其中V是O，

其中W是H、卤素、NH₂或OR₁₀，

其中R₁₀是H，

其中m为2，o为1，p为2，且q为1；

其中R₂是H或卤素或CN，

其中R₀是H，

7.一种药物组合物，其包括根据权利要求1所述的化合物和至少一种药学上可接受的载剂。

8.一种抑制革兰氏阳性细菌生长的方法，所述方法包括使培养基与有效量的根据权利要求1所述的化合物接触。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述表面是医疗装置的表面。

10.一种治疗有需要的受试者的革兰氏阳性细菌感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1所述的化合物。

11.一种表面涂层，其包括根据权利要求1所述的化合物和涂层剂，其中所述涂层剂能够将所述化合物粘附到培养基上。

12.一种化合物，其选自由以下组成的群组：

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

1-烯丙基-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-苯基-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮、

1-环丙基-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

环戊基-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

5-(5-氯-7-甲氧基-吡唑并[4,3-d]嘧啶-1-基)戊酸Cethyl酯、

3-氯-5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(恶唑-4-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-异丙基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

5-[(3,4-二氯苯基)甲基氨基]-1-[1-(恶唑-4-羰基)-4-哌啶基]-6H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮、

5-((3,4-二氟苄基)氨基)-3-氟-1-(恶唑-4-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮、

(5-((3,4-二氯苄基)氨基)-1-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-7-氧代-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-6(7H)-基)甲基磷酸二氢酯，

及其药学上可接受的盐。

13.一种药物组合物，其包括根据权利要求12所述的化合物和至少一种药学上可接受的载剂。

14.一种抑制革兰氏阳性细菌生长的方法，所述方法包括使培养基与有效量的根据权利要求12所述的化合物接触。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述表面是医疗装置的表面。

16.一种治疗有需要的受试者的革兰氏阳性细菌感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求12所述的化合物。

17.一种表面涂层，其包括根据权利要求12所述的化合物和涂层剂，其中所述涂层剂能够将所述化合物粘附到培养基上。