JP2022515775A - Ｄｎａポリメラーゼｉｉｉｃ阻害剤及びその使用 - Google Patents

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Abstract

本発明は、ＤＮＡポリメラーゼＩＩＩＣ酵素を阻害するのに有用な化合物及び方法に関する。本発明は、本発明の化合物を含む薬学的に許容される組成物、及び前記組成物をグラム陽性菌感染症の処置に使用する方法も提供する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１２月２１日に出願された米国仮出願第６２／７８３，７５４号に対する優先権及び利益を主張し、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は、ＤＮＡポリメラーゼＩＩＩＣ（ｐｏｌ ＩＩＩＣ）酵素を阻害するのに有用な化合物及び方法に関する。本発明は、本発明の化合物を含む薬学的に許容される組成物、及び前記組成物をグラム陽性菌感染症の処置に使用する方法も提供する。
発明の背景
細菌性病原体は、公衆衛生に深刻な脅威となる。多様な抗生物質に対する多剤耐性を有する好気性及び嫌気性グラム陽性菌は、処置の大きな課題として浮上している。
２種のグラム陽性病原体、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）及びエンテロコッカス・ファエカリス／ファエシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ／ ｆａｅｃｉｕｍ）は、院内疾患の大多数を占める（Ｍｕｔｏ，ｅｔ ａｌ．）。第３の生物である肺炎レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）は、一般的に市中感染性病原体である。これらの生物は好気性細菌であり、すなわち酸素含有雰囲気において成長する生物である。
黄色ブドウ球菌は、院内菌血症及び皮膚／創傷感染症の最も多い原因であり、院内下気道感染症の２番目に最も多い原因である。市中感染性メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）の出現は、公衆衛生の深刻な懸案事項となっている。ＭＲＳＡ株は、時が経つにつれ、ますます多剤耐性になってきている。世界の多くの地域において、ＭＲＳＡ感染症は、市中で発生する散発性ブドウ球菌感染症の大多数に相当する。これらの株は、限局的（皮膚及び皮膚構造）で侵襲的な（菌血症）感染症の多数の発生にも関連している。
エンテロコッカス・ファエカリス及びエンテロコッカス・ファエシウムは、院内敗血症、心内膜炎、並びに創傷及び尿路の感染症を引き起こす。バンコマイシン耐性表現型は、薬物を広範な臨床的使用に導入して何年も経ってから、１９８７年に初めてエンテロコッカス（ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ）（バンコマイシン耐性腸球菌又はＶＲＥ）で報告された。今日、ＩＣＵにおけるエンテロコッカス・ファエカリス感染症の＞３０％はＶＲＥである。血流感染症、手術部位及び尿路感染症を包含するＶＲＥによって引き起こされるある特定の病気の処置選択肢はほとんどない、又はない。ＶＲＥの発生率は、米国のみで１年に患者およそ２０，０００人である。
肺炎レンサ球菌は、髄膜炎、市中感染性肺炎、急性中耳炎及び副鼻腔炎の最も普通の細菌性の原因である。米国では、肺炎レンサ球菌は毎年、肺炎球菌髄膜炎のうち３０００～６０００例、肺炎のうち５０万例、菌血症のうち１２，０００例超及び中耳炎のうち６００万例を占めると見積もられている。肺炎レンサ球菌誘発性疾患による年間死亡率は、米国で４０，０００人、全世界で３～５００万人と見積もられている。ペニシリン耐性肺炎レンサ球菌（ＰＲＳＰ）の同定が増加している。肺炎球菌の薬物耐性株の出現及び拡大は、これらの普通の感染症の処置を複雑にしている。
嫌気性細菌、すなわち酸素欠乏雰囲気で成長する細菌も、公衆衛生の問題である。クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）は、多くはある特定の抗生物質薬を用いた処置の結果として、ヒト患者における疾患にますます関連してきている。最も普通の疾患は、クロストリジウム・ディフィシル関連下痢症（ＣＤＡＤ）と呼ばれる。
多剤耐性を有する細菌の問題を解決するためのアプローチの１つには、新たな細菌の標的を選択的に攻撃することが可能である有効な抗菌剤の開発が関与する。ＤＮＡ ｐｏｌ ＩＩＩＣ酵素は、グラム陽性菌の複製的なＤＮＡ合成にきわめて重大であることが示されている（Ｋｏｒｎｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．）。ＤＮＡ ｐｏｌ ＩＩＩＣ酵素は、哺乳類又はグラム陰性菌のＤＮＡポリメラーゼに相同性をほとんど示さないため、新たなグラム陽性選択的抗菌剤を発見する際に阻害するのに魅力的な標的である。
ＤＮＡ ｐｏｌ ＩＩＩＣ酵素は、具体的には、低Ｇ：Ｃグラム陽性生物（好気性菌及び嫌気性菌の両方）が染色体を複製するために必要とされる。構造遺伝子ｐｏｌＣによりコードされるＤＮＡ ｐｏｌ ＩＩＩＣ酵素は、グラム陽性菌に必須の複製に特化したＤＮＡポリメラーゼ２種のうちの１つである。ｐｏｌＣは、Ｇ：Ｃ含有量が多い真正細菌、グラム陰性真正細菌並びに真核細胞にはないが、広範な群のグラム陽性病原体では強固に保存されている。
したがって、ＤＮＡ ｐｏｌ ＩＩＩは、Ｇ：Ｃ含有量が少ないグラム陽性菌の宿主染色体の複製に必須である。その作用がブロックされる場合、染色体ＤＮＡは複製に失敗し、細菌宿主は死滅する。このｐｏｌ ＩＩＩＣの必須の構造は、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、エンテロコッカス及びマイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）を包含する広い群のＧ：Ｃ含有量が少ないグラム陽性病原体に強固に保存されている（Ｔａｒａｎｔｉｎｏ，ｅｔ ａｌ．抗微生物剤及び化学療法（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ）、１９９９年８月、１９８２～８７頁）。
ＤＮＡ ｐｏｌ ＩＩＩＣ阻害剤は、グラム陽性抗菌活性及びｉｎ ｖｉｖｏ保護活性を示しているが、化合物の「ドラッガブル」な特徴、例えば非経口製剤の適合性又は好都合な薬物動態を欠いていることが、その開発を妨げていた。したがって、効率的に使用して、ＤＮＡ ｐｏｌ ＩＩＩ Ｃを阻害し、ひいては細菌性感染症を処置及び阻害できる化合物を特定する必要性は依然としてある。
発明の概要
本発明は、抗生物質耐性株、例えばバンコマイシン耐性腸球菌、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌、ペニシリン耐性肺炎レンサ球菌及びグラム陽性嫌気性菌クロストリジウム・ディフィシルを包含するグラム陽性微生物に対して有用なＤＮＡ ｐｏｌ ＩＩＩＣ阻害剤に関する。
一側面では、本発明は、下に示されている式：
Figure 2022515775000001
（式中、Ａ及びＢは、独立して、Ｎ、ＣＨ又はＲ１であり、
ｎは０～３であり、
Ｒ１は、（ＣＨ２）ｍ－｛（Ｖ）ｏ－（ＣＨ２）ｐ｝ｑ－Ｗであり、
Ｖは、ＣＨ２、ＣＨ＝ＣＨ、Ｃ≡Ｃ、ＣＯ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、ＮＲ４、ＣＨＲ５、ＯＣ（Ｏ）、（Ｏ）ＣＯ、ＣＯＮＲ６、ＮＲ７ＣＯ、ＳＯ２ＮＨ、ＮＨＳＯ２；Ｃ３～８シクロアルキルであり、
Ｒ４、Ｒ６及びＲ７のそれぞれは、独立して、Ｈ又はＣ１～６アルキルであり、
Ｒ５は、ＯＨ又はＣ１～６アルキル、ＣＨ（Ｒ８Ｒ９）であり、
Ｒ８及びＲ９のそれぞれは、独立して、Ｈ、ハロ又はＣ１～６アルキルであり、
Ｗは、Ｈ、ハロ、置換若しくは非置換Ｃ１～６アルキル、置換若しくは非置換Ｃ３～８シクロアルキル、置換若しくは非置換Ｃ２～８ヘテロシクリル、置換若しくは非置換Ｃ６～１４アリール、置換若しくは非置換Ｃ１～１０ヘテロアリール、ＮＨ２、ＣＮ、ＯＲ１０、ＳＲ１１、ＣＯＲ１２、ＯＣＯＲ１３、ＮＲ１４ＣＯＲ１５、ＮＲ１６Ｒ１７、ＮＲ１８（ＣＯ）ＮＨＲ１９、ＣＨ（ＣＯ２Ｒ２０）２、ＣＯ２Ｒ２１、ＮＨＳＯ２Ｒ２２、ＣＯＮＲ２３Ｒ２４、ＣＨ２ＣＯ２Ｒ２５、Ｓ（Ｏ）Ｒ２６又はＳ（Ｏ２）Ｒ２７であり、
Ｒ１０～Ｒ２７のそれぞれは、独立して、Ｈ、置換若しくは非置換Ｃ１～６アルキル、置換若しくは非置換Ｃ３～８シクロアルキル、置換若しくは非置換Ｃ２～８ヘテロシクリル、置換若しくは非置換Ｃ６～１４アリール、置換若しくは非置換Ｃ１～１０ヘテロアリールであり、
ｍは１～５であり、ｏは０～４であり、ｐは０～４であり、ｑは０～４であり、
Ｒ２は、Ｈ、ハロ、ＣＮ、置換若しくは非置換Ｃ１～６アルキル、ＣＯ２Ｒ２１、ＣＯＮＲ２３Ｒ２４、置換若しくは非置換Ｃ２～８ヘテロシクリル又は置換若しくは非置換Ｃ１～１０ヘテロアリールであり、
Ｒ３は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ１～６アルキル、ＯＨ、ＣＮ、Ｃ１～６－アルキル、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＦ３ＣＨ２、ＯＣＨ３及びＯＣＦ３からなる群から選択される１個又は２個以上の置換基により置換されているＣ６～１４アリール又はＣ１～１０ヘテロアリールであり、
Ｒ０は、Ｈ、ＣＨ２ＯＰＯ（ＯＨ）２、ＣＨ２ＯＣＯＮＨＣＨ２（ＣＨ２）ｔＯＰＯ（ＯＨ）２、ＣＨ２ＯＣＯＣＨ２（ＣＨ２）ｔＯＰＯ（ＯＨ）２、ＣＯＯ（ＣＨ２）ｔＯＰＯ（ＯＨ）２、ＣＨ２ＯＰＯ（ＯＨ）ＯＰＯ（ＯＨ）２又は（ＣＲ３０Ｒ３１Ｏ）ｓ－Ｘ－Ｙ－（ＣＲ３０Ｒ３１）ｔ－ＯＰＯ（ＯＲ２８）（ＯＲ２９）であり、
Ｘは、直接結合又は（Ｃ＝Ｏ）であり、Ｙは、直接結合又は酸素であり、
ｓは、０又は１であり、
ｔは、１、２又は３であり、
Ｒ２８及びＲ２９は、それぞれ独立して、水素又は加水分解性エステル基であり、Ｒ２８が水素である場合、Ｒ２９は－Ｐ（Ｏ）ＯＲ３２ＯＲ３３であり得、
Ｒ３０及びＲ３１は、それぞれ独立して、水素又はＣ１～４アルキルであり、
Ｒ３２及びＲ３３は、それぞれ独立して、水素又は加水分解性エステル基である）を有する化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又はその光学異性体、その同位体異性体、プロドラッグ若しくはその薬学的に許容される塩を特徴とする。
上の式の具体的な化合物は、本明細書で記載されている。本発明は、本明細書に記載されている化合物の鏡像異性体、ラセミ、互変異性体及びジアステレオ異性体形態及びそれらの混合物すべてを網羅する。
本発明は、式Ｉの化合物、及び薬学的に許容される担体を包含する薬学的組成物を更に特徴とする。
別の側面では、本発明は、例えば、本明細書に記載されている医療デバイスの表面のコーティングに好適な式Ｉの化合物の製剤を特徴とする。そのような製剤では、本発明の化合物は、好適な生体適合性があるコーティング剤と混合され得る、又はコーティング剤に共有結合で若しくは別の方法（例えば、静電的に又はリガンドとして）で結合し得る。
別の側面では、本発明は、細菌が成長する傾向がある領域（例えば、生息環境又は表面、例として医療デバイスのもの）を、式Ｉの化合物と接触させるステップを包含する、細菌の成長を阻害するための方法を特徴とする。
本発明は、治療有効量の式Ｉの化合物を使用して動物に投与するステップを包含する、グラム陽性細菌感染症に関して動物を処置するための方法も特徴とする。
本発明の様々な態様では、本発明の化合物は、感染症の処置若しくは防止、又は、黄色ブドウ球菌；メチシリン耐性黄色ブドウ球菌；エンテロコッカス・ファエカリス；エンテロコッカス・ファエシウム；バンコマイシン耐性腸球菌；肺炎レンサ球菌；桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、スタフィロコッカス、ストレプトコッカス及びエンテロコッカス属における他の微生物；並びにＤＮＡ ｐｏｌ ＩＩＩＣ酵素を生成するあらゆる他のグラム陽性微生物を包含するが、それらに限定されないグラム陽性菌の成長の阻害若しくは防止に有用である。
発明の詳細な説明
本発明の特徴及び他の詳細は、以下により詳細に記載されている。本明細書に記載されている詳細な態様は、例証の目的で示されており、本発明の限定としては示されないことが理解される。本発明の原則的特徴は、本発明の範囲から逸脱することなく、様々な態様で用いられ得る。
定義
「アルキル」の語は、好ましくは１から６個の炭素原子を有する分岐又は非分岐飽和非環式炭化水素基と定義される。例は、メチル；エチル；ｎ－プロピル；イソプロピル；ｎ－ブチル；イソブチル；ｓｅｃ－ブチル；ｔｅｒｔ－ブチル；ペンチル；１－メチルブチル；２－メチルブチル；３－メチルブチル；２，２－ジメチルプロピル；１－エチルプロピル；１，１－ジメチルプロピル；１，２－ジメチルプロピル；１－メチルペンチル；２－メチルペンチル；３－メチルペンチル；４－メチル－ペンチル；１，１－ジメチルブチル；１，２－ジメチルブチル；１，３－ジメチル－ブチル；２，２－ジメチルブチル；２，３－ジメチルブチル；３，３－ジメチル－ブチル；１－エチルブチル；２－エチルブチル；１，１，２－トリメチルプロピル；１，２、２－トリメチルプロピル；ｌ－エチル－１－メチルプロピル；ｌ－エチル－２－メチルプロピル；及びヘキシルを包含する。アルキル基は、本明細書に記載されているように非置換であってよく、又は置換されていてよい。
「シクロアルキル」の語は、環（単数又は複数）に炭素原子のみを有し、各環は、望ましくは３から８員を有する単環式又は二環式構造と定義される。例示的なシクロアルキル基は、シクロプロピル；シクロブチル；シクロペンチル；及びシクロヘキシルを包含する。シクロアルキル基は、本明細書に記載されているように非置換であってよく、又は置換されていてよい。
「ヘテロシクリル」の語は、芳香族環を包含しない単環式、二環式又は多環式ヘテロ環式環系と定義される。各環は、好ましくは、２から８個の炭素原子、並びに１から４個の酸素、窒素及び／又は硫黄原子を包含する。例は、アジリジニル、アゼチジニル、モルホリニル、オキサゾリジニル、オキサゾリニル、オキセカニル（ｏｘｅｃａｎｙｌ）、オキセパニル（ｏｘｅｐａｎｙｌ）、オキシラニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラニル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチエニル及びテトラヒドロチオピラニルを包含する。ヘテロシクリル基は、本明細書に記載されているように非置換であってよく、又は置換されていてよい。
「アリール」の語は、１個又は２個以上の芳香族環を有する単環式、二環式又は多環式炭素環式環系と定義される。各環は、好ましくは６～１４個の炭素原子を包含する。例は、フェニル、ナフチル、１，２－ジヒドロナフチル、１，２，３，４－テトラヒドロナフチル、フルオレニル、インダニル及びインデニルを包含する。アリール基は、本明細書に記載されているように非置換であってよく、又は置換されていてよい。
「ヘテロアリール」の語は、１個又は２個以上の芳香族環を有する単環式、二環式又は多環式ヘテロ環式環系と定義される。各環は、好ましくは、１から１０個の炭素原子、並びに１から４個の酸素、窒素、及び／又は硫黄原子を包含する。例は、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾトリアゾリル、フリル、イミダゾリル、インドリル、イソベゾフラニル（ｉｓｏｂｅｚｏｆｕｒａｎｙｌ）、イソキノリニル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、プリニル、ピラジニル、ピリダジニル、ピリジニル、ピリミジニル、ピロリル、キノリニル、テトラゾリル、チエニル、トリアジニル及びトリアゾリルを包含する。ヘテロアリール基は、本明細書に記載されているように非置換であってよく、又は置換されていてよい。
「ハロ」の語は、フルオロ、ブロモ、クロロ又はヨードと定義される。
「アルコキシ」の語は、Ｒがアルキル基である－ＯＲと定義される。
「アリールオキシ」の語は、Ｒがアリール基である－ＯＲと定義される。
「アルキルアミノ」の語は、Ｒがアルキル基である－ＮＨＲと定義される。
「アリールアミノ」の語は、Ｒがアリール基である－ＮＨＲと定義される。
「アルキルスルホニル」の語は、Ｒがアルキル基である－ＳＯＲ２と定義される。
「アリールスルホニル」の語は、Ｒがアリール基である－ＳＯＲ２と定義される。
「アルキルチオ」の語は、Ｒがアルキル基である－ＳＲと定義される。
「アリールアミノ」の語は、Ｒがアリール基である－ＮＨＲと定義される。
「アルキルチオ」の語は、Ｒがアルキル基である－ＳＲと定義される。
「アリールチオ」の語は、Ｒがアリール基である－ＳＲと定義される。
「第四級アミノ」の語は、Ｒ、Ｒ’及びＲ’’が、独立して、アルキル、アリール、ヘテロアリール及びヘテロシクリルである－ＮＲＲ’Ｒ’’＋と定義される。
「置換されている」の語は、基又は基の一部の１個又は２個以上の水素原子が、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ６～１４アリールオキシ、スルフヒドリル（－ＳＨ）、Ｃ１～６アルキルチオ、Ｃ６～１４アリールチオ、アミノ（－ＮＨ２）、Ｃ１～６アルキルアミノ、Ｃ６～１４アリールアミノ、二置換アミノ、第四級アミノ、ヒドロキシル（－ＯＨ）、カルボキシル（－ＣＯＯＲ）、ハロ、シアノ（－ＣＮ）、アジド（－Ｎ３）、オキソ、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ１～６アルキル、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ３～８シクロアルキル、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ６～１４アリール、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ１～１０ヘテロアリール、Ｃ（Ｏ）－Ｃ２～８ヘテロシクリル、Ｃ１～６アルキルスルホニル、（ＳＯ２）Ｏ－Ｃ１～６アルキル、－（ＳＯ２）Ｏ－Ｃ３～８シクロアルキル、－（ＳＯ２）Ｏ－Ｃ３～８シクロアルキル、－（ＳＯ２）－Ｃ６～１４アリール、－（ＳＯ２）Ｏ－Ｃ６～１４アリール、－（ＳＯ２）－Ｃ１～１０ヘテロアリール、－（ＳＯ２）Ｏ－Ｃ１～１０ヘテロアリール、－（ＳＯ２）－Ｃ２～８ヘテロシクリル及び－（ＳＯ２）Ｏ－Ｃ２～８ヘテロシクリルを包含するが、それらに限定されない置換基により置き換えられていることと定義される。
更に、アルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール及びヘテロシクリル基は、Ｃ６～１４アリール、Ｃ３～８シクロアルキル、Ｃ１～１０ヘテロアリール又はＣ２～８ヘテロシクリル基で置換されていてよい。シクロアルキル、ヘテロアリール及びヘテロシクリル基も、アルキル基で置換されていてよい。置換基は、親基について記載されているように、例えば、ハロゲン、トリフルオロメチル、ヒドロキシル又はカルボキシルで置換され得る。
本明細書で使用されている「投与」又は「投与すること」の語は、１種又は２種以上の単位用量の抗微生物薬学的組成物を、動物に与える方法（例えば、局所、経口、静脈内、腹腔内又は筋肉内投与）を意味する。投与方法は、様々な要因、例えば、薬学的組成物の成分、潜在的な又は実際の感染部位、関与している微生物及び実際の微生物感染症の重症度に応じて変動させてよい。
「動物」は、グラム陽性菌感染症の影響を受けやすいあらゆる動物を意味する。例えば動物は、ヒト、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ウマ、ヤギ、ニワトリ、シチメンチョウ、ヒツジ、ラット、マウス及びウサギ、並びに商用目的で、又はペットとして飼育されている他の動物を包含してよい。「微生物感染症の影響を受けやすい動物」の語は、一般的な集団と比較して微生物感染症に罹る危険性が増大した動物と定義される。そのような動物の例は、最近手術手技を施されたもの、又は免疫障害を持つヒト、例えばＡＩＤＳ（後天性免疫不全症候群）が認められる者、又は免疫抑制薬が必要とされる移植片を有する者を包含する。そのような動物は、当業者に公知の方法を使用して同定され得る。
「コーティング剤」の語は、生体適合性がある化合物又は表面をコーティングするのに好適な化合物の混合物と定義される。好適なコーティング剤は、当技術分野で公知である。例示的なコーティング剤は、ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール、ヒプロメロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリテトラフルオロエチレン、メチルセルロース、ポリビニルアルコール又は生体適合性がある他のポリマーを包含するが、それらに限定されない。
化合物の「有効量」の語は、感染又は潜在的感染部位、例えば生息環境、例として真核細胞の培養物又は患者に投与された場合、微生物を阻害又は微生物感染の確立を防止する特定のレベルをそれぞれ達成する量と定義される。
「阻害すること」の語は、微生物の細胞成長速度を少なくとも８０％まで低下させることと定義される。ある特定の態様では、成長は、９０％まで、９５％又は９９％以上までさえ阻害できる。阻害の程度は、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏ成長アッセイにより、例として標準的な液体培養技術により確かめることができる。＜１００μｇ／ｍｌ、より好ましくは＜１０μｇ／ｍｌの最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）で、コロニー形成の阻害を示す化合物は特に有用である。
「生息環境」の語は、微生物が上に、若しくは中に存在し得る、或いは微生物の存在を防止することが所望されるあらゆる物質、液体又は固体と定義される。例示的な生息環境は、培養培地（例えば、寒天又はブロス）、食品、医療用品（例えば、無菌流体）、医療デバイス（例えば、カテーテル）、調理台及び他の表面を包含する。
「微生物感染症」の語は、病原性微生物による宿主動物の侵襲と定義される。例えば、感染症は、動物の体内若しくはその上に通常存在する微生物の過剰成長、又は動物内に若しくはその上に通常存在しない微生物の成長を包含し得る。より一般的には、微生物感染症は、微生物の集団（単数又は複数）の存在が、宿主動物にダメージを与えるあらゆる状況であり得る。したがって、過剰量の微生物の集団が、動物の体内若しくはその上に存在する場合、又は、微生物の集団（単数又は複数）の存在により、動物の細胞若しくは他の組織がダメージを受ける場合、動物は微生物感染症に「罹患している」。一態様では、特定の属又は種の微生物の数は、動物に通常見出される数の少なくとも２、４、６又は８倍である。微生物の例は、グラム陽性又は他のあらゆる分類の細菌を包含するが、それらに限定されない。
「薬学的に許容される塩」は、薬学的に許容される無機及び有機の酸及び塩基に由来するものを意味する。好適な酸の例は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン－ｐ－スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン－２－スルホン酸及びベンゼンスルホン酸を包含する。他の酸、例えばシュウ酸は、それ自体薬学的に許容されないが、本発明の化合物及びその薬学的に許容される酸付加塩を得る際に中間体として有用になり得る。適切な塩基に由来する塩は、アルカリ金属（例えば、ナトリウム又はカリウム）、アルカリ土類金属（例えばマグネシウム）、アンモニウム及びＮＲ４ ＋（式中Ｒは、Ｃ１～４アルキルである）塩を包含する。好ましい塩は、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、メシル酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩及びフマル酸塩を包含する。本発明による化合物への以下の言及は、示されている一般式の化合物、並びにその薬学的に許容される塩を包含する。
微生物の成長又は感染症の「防止」は、微生物の成長又は感染症が発生しないようにする本発明の化合物の適用と定義される。微生物の成長の防止に必要である本発明の化合物の量は、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏ成長アッセイにより、例として、標準的な液体培養技術により確かめことができる。微生物感染症の防止に必要である本発明の化合物の量は、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏアッセイにより、例として、研究動物、例として、微生物を播種した後のモルモットにおいて、感染症を防止するために投与されなければならない化合物の量を判定することにより確かめることができる。一般に、好適な濃度、例えば＜１００μｇ／ｍｌ、より好ましくは＜１０μｇ／ｍｌで防止を示す化合物は、治療剤としてさらなる検査に有用である。
「処置すること」の語は、疾患、病態又は障害が治癒、寛解又は防止される結果になることを意図した患者の医療管理と定義される。この用語は、積極的処置、すなわち具体的には疾患、病態又は障害の改善を対象とした処置を包含し、原因処置、すなわち疾患、病態又は障害の原因の除去を対象とした処置も包含する。更に、この用語は、緩和的処置、すなわち、疾患、病態又は障害の治癒ではなく症状を軽減するために設計された処置；防止的処置、すなわち疾患、病態又は障害の防止を対象とする処置；並びに支持処置、すなわち、疾患、病態又は障害の改善を対象とした別の特定の治療を補うために用いられる処置を包含する。「処置すること」の語は、対症処置、すなわち疾患、病態又は障害の全身症状を対象とする処置も包含する。
「治療有効量」の語は、それを必要とする動物に投与される場合、細菌性感染症の症状の少なくとも一部を緩和する量と定義される。
予防に関して、「治療有効量」は、細菌性感染症に影響を受けやすい動物に投与される場合、そのような感染症を阻害する、又はそうでなければその可能性を低下させることを助ける量である。
本発明の１つ又は２つ以上の態様の詳細は、下に付随する説明で記載されている。本発明の他の特徴、目的及び利点は、説明及び特許請求の範囲から明らかになる。
本発明は、一態様では、式Ｉ
Figure 2022515775000002
による化合物に関する。
いくつかの態様では、Ｒ１は、下に例証されているように、Ｈ、メチル、他の置換若しくは非置換アルキル、環状及びヘテロシクリル基であり得る。
Figure 2022515775000003
いくつかの態様では、Ｒ１は、下に例証されているように、置換若しくは非置換アリール及びヘテロアリール基でもあり得る。
Figure 2022515775000004
いくつかの態様では、Ｒ２は、Ｈ、ハロ、ＣＮ、置換若しくは非置換Ｃ１～６アルキル、ＣＯ２Ｒ２１、ＣＯＮＲ２３Ｒ２４、置換若しくは非置換Ｃ２～８ヘテロシクリル又は置換若しくは非置換Ｃ１～１０ヘテロアリールである。
いくつかの態様では、Ｒ３は、下に例証されているように、置換若しくは非置換アリール及びヘテロアリール基であり得る。
Figure 2022515775000005
抗菌性化合物
好ましい化合物は：
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
１－アリル－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
４－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ブチルアセタート、
１－（シクロブチルメチル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
５－［（３，４－シクロロフェニル）メチルアミノ］－１－フェニル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン、
１－シクロプロピル－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
シクロペンチル－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
セチル５－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ペンタノアート、
５－［（３，４－シクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（４－ピリジル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン、
３－クロロ－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－メトキシエチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
５－（（３，４－シクロロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－１－（２－メトキシエチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
３－クロロ－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（オキサゾール－４－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
１－（２－（４－アセチルピペラジン－１－イル）エチル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩、
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－メトキシエチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（４－メチルモルホリン－２－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩、
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（３－メチルピコリノイル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩、
５－（（３，４－ジフルオロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－１－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
５－（（４－クロロ－３－メチルベンジル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、

５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１，３－ジメチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－モルホリノエチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩、
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（４－ヒドロキシブチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン）、
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（チアゾール－２－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（オキセタン－３－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（テトラヒドロフラン－３－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（オキセタン－２－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（３－ヒドロキシプロピル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（ピラジン－２－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩、
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－イソプロピル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（５－メトキシペンチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（２－メトキシエトキシ）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（ピリジン－３－イルスルホニル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩、
（Ｅ）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（４－メトキシブタ－２－エン－１－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
エチル５－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ペンタノアート、
イソプロピル５－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ペンタノアート、
エチル４－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ブタノアート、
メチル３－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパノアート、
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（ピリジン－２－イルメチル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩、
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（ピリジン－３－イルメチル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩、
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（ピリジン－４－イルメチル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩、
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［１－（オキサゾール－４－カルボニル）－４－ピペリジル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン、
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［１－（チアゾール－２－カルボニル）－４－ピペリジル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン、
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（４－メトキシピコリノイル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩、
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（４－メチルピコリノイル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩、
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－３－フルオロ－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン、
３－クロロ－５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン、
５－（（３，４－ジフルオロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－１－（オキサゾール－４－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
３－クロロ－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－ニコチノイルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩、
アンモニウム（２－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）エトキシ）メチルホスファート
（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）－７－オキソ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－６（７Ｈ）－イル）リン酸二水素メチル、
又はその光学異性体、その同位体異性体、プロドラッグ若しくはその薬学的に許容される塩を包含する。
合成方法
以下の例は本発明を説明する目的のために与えられるが、本発明の範囲又は精神を限定するものではない。
本発明の化合物は、上記本明細書及び下記本明細書に具体的に開示した化合物を含み、以下のスキームに記載した通りに調製できる。例えば、式Ｉの化合物は下記スキームに記載した通りに調製でき、これらの断片及び組合せを作ることが当業者に公知である。
本明細書に提供された一部のスキームにおいて、化合物は括弧で示され得る。括弧で示された化合物は、反応において使用され又は生成される異性体の混合物を示すことを、当業者は認識するであろう。
合成方法
スキームＡ
Figure 2022515775000006
スキームＡ中の化合物を調製するための一般的手順
１－メチル－４－ニトロ－１Ｈ－ピラゾール－５－カルボン酸の調製（スキームＡ中のステップ１）
Figure 2022515775000007
発煙ＨＮＯ３（２４．７３ｇ、３９２．５０ｍｍｏｌ、１６．３８ｍＬ、１．５当量）のＨ２ＳＯ４（１１９．８４ｇ、１．２２ｍｏｌ、６５．１３ｍＬ、４．６７当量）中溶液に、２０℃～２５℃で２－メチルピラゾール－３－カルボン酸（３３ｇ、２６１．６７ｍｍｏｌ、１当量）を少しずつ加えた。混合物を３０℃～４０℃で１時間、次いで７５℃～８０℃で５時間撹拌した。ＴＬＣは、出発物質が消費され、より大きな極性を有する１つの主要な新規スポットが検出されていることを示した。反応混合物を氷水（１５０ｍＬ）中にゆっくり注ぎ入れた。多少の固体が沈殿していた。濾過した後に固体を集め、固体を水（５０ｍＬ）及び石油エーテル（５０ｍＬ）で洗浄した。固体を減圧下で濃縮し、次いで更には精製せずに次のステップに使用した。２－メチル－４－ニトロ－ピラゾール－３－カルボン酸（３７ｇ、２１６．２３ｍｍｏｌ、収率８２．６４％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.30 (s, 1H), 3.96 (s, 3H).
１－メチル－４－ニトロ－１Ｈ－ピラゾール－５－カルボニルクロリドの調製（スキームＡ中のステップ２）
Figure 2022515775000008
２－メチル－４－ニトロ－ピラゾール－３－カルボン酸（３５ｇ、２０４．５５ｍｍｏｌ、１当量）及びＤＭＦ（１４９．５１ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ、１５７．３８μＬ、０．０１当量）のＳＯＣｌ２（１５０ｍＬ）中溶液を、８５℃で１時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を冷却し、溶媒を減圧下で除去した。粗製物を更には精製せずに次のステップに使用した。２－メチル－４－ニトロ－ピラゾール－３－カルボニルクロリド（３８ｇ、２００．４７ｍｍｏｌ、収率９８．０１％）を無色油状物として得た。
１－メチル－４－ニトロ－１Ｈ－ピラゾール－５－カルボキサミドの調製（スキームＡ中のステップ３）
Figure 2022515775000009
ＮＨ３・Ｈ２Ｏ（１５０ｍＬ）に、０℃で２－メチル－４－ニトロ－ピラゾール－３－カルボニルクロリド（３８ｇ、２００．４７ｍｍｏｌ、１当量）を滴下添加した。混合物を２５℃で１時間撹拌した。ＴＬＣ及びＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。多少の固体が生成された。濾過した後、固体を集めた。水溶液をＥｔＯＡｃ（８０μＬ×５）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。合わせた粗製物を更には精製せずに次のステップに使用した。２－メチル－４－ニトロ－ピラゾール－３－カルボキサミド（３２ｇ、１８８．１０ｍｍｏｌ、収率９３．８３％）を淡黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.48 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 3.86 (s, 3H).
４－アミノ－１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－カルボキサミドの調製（スキームＡ中のステップ４）
Figure 2022515775000010
２－メチル－４－ニトロ－ピラゾール－３－カルボキサミド（３２ｇ、１８８．１０ｍｍｏｌ、１当量）及び１０％ Ｐｄ／Ｃ（３ｇ）のＥｔＯＨ（６００ｍＬ）中混合物を、Ｈ２（４５ｐｓｉ）下２５℃で５時間撹拌した。ＴＬＣは、出発物質が残っておらず、より大きな極性を有する１つの主要な新規スポットが検出されていることを示した。濾過した後、濾液を減圧下で濃縮した。粗製物を更には精製せずに次のステップに使用した。４－アミノ－２－メチル－ピラゾール－３－カルボキサミド（２３ｇ、１６４．１２ｍｍｏｌ、収率８７．２５％）を紫色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.37 (s, 2H), 7.01 (s, 1H), 4.39 (s, 2H), 3.89 (s, 3H).
１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－５，７（４Ｈ，６Ｈ）－ジオンの調製（スキームＡ中のステップ５）
Figure 2022515775000011
４－アミノ－２－メチル－ピラゾール－３－カルボキサミド（２３ｇ、１６４．１２ｍｍｏｌ、１当量）のＣＨ３ＣＮ（５００ｍＬ）中混合物に、１００℃で１時間かけてＣＤＩ（３４．６０ｇ、２１３．３５ｍｍｏｌ、１．３当量）を少しずつ加えた。次いで混合物をＮ２下１００℃で１２時間加熱した。灰色固体が生成された。ＬＣ－ＭＳは、出発物質が残っていないことを示した。数種の新規ピークがＬＣ－ＭＳ上で示され、所望の化合物約８０％が検出された。９０℃で濾過した後、固体を集めた。粗製物を更には精製せずに次のステップに使用した。１－メチル－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－５，７－ジオン（２５ｇ、１５０．４８ｍｍｏｌ、収率９１．６９％）を灰色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.10 (s, 1H), 10.95 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 4.05 (s, 3H).
５，７－ジクロロ－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジンの調製（スキームＡ中のステップ６）
Figure 2022515775000012
１－メチル－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－５，７－ジオン（２６ｇ、１５６．５０ｍｍｏｌ、１当量）のＰＯＣｌ３（２３９．９６ｇ、１．５６ｍｏｌ、１４５．４３ｍＬ、１０当量）中溶液に、Ｎ２下５０℃でＤＢＵ（１４２．９５ｇ、９３８．９８ｍｍｏｌ、１４１．５３ｍＬ、６当量）を滴下添加した。混合物を８５℃で１２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、出発物質が残っていないことを示した。混合物を氷水（１Ｌ）中に注ぎ入れ、次いでＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ×６）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３でｐＨ＝７に及びブライン（１００ｍＬ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム８０ｇ、１５０ｍＬ／分で０～２０％酢酸エチル／石油エーテル濃度勾配の溶出液）により精製した。溶出液を減圧下で除去して、５，７－ジクロロ－１－メチル－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（１４ｇ、６８．９６ｍｍｏｌ、収率４４．０６％）を淡黄色油状物として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.17 (s, 1H), 4.40 (s, 3H).
５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＡ中のステップ７）
Figure 2022515775000013
５，７－ジクロロ－１－メチル－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（１４ｇ、６８．９６ｍｍｏｌ、１当量）のジオキサン（１４０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１００ｍＬ）中溶液に、０℃でＮａＯＨ（２．７６ｇ、６８．９６ｍｍｏｌ、１当量）のＨ２Ｏ（２０ｍＬ）中溶液を滴下添加した。次いで混合物を１００℃で６時間撹拌した。ＴＬＣ及びＬＣ－ＭＳは、５，７－ジクロロ－１－メチル－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン約１０％が残っていることを示した。有機溶媒を減圧下で除去した。水溶液をＭＴＢＥ（１２０ｍＬ×２）で抽出して、出発物質を回収した。次いで水溶液を２Ｎ ＨＣｌでｐＨ＝５にした。白色固体が生成された。濾過した後に固体を集め、減圧下で濃縮した。残渣を更には精製せずに次のステップに使用した。５－クロロ－１－メチル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１２．７ｇ、６８．８０ｍｍｏｌ、収率９９．７８％）を白色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.85 (s, 1H), 4.30 (s, 3H).
スキームＡ中の化合物の調製（スキームＡ中のステップ８）
Figure 2022515775000014
５－クロロ－１－メチル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（５４１．７６μｍｏｌ、１当量）、Ｒ３（ＣＨ２）ｎＮＨ２（１．６３ｍｍｏｌ、３当量）及び塩基（塩基無し又はＴＥＡ又はＤＩＥＡ）又はＴＦＡの溶媒（ｔ－ＢｕＯＨ又はｉ－ＰｒＯＨ又はＮＭＰ）（６ｍＬ／ｍｍｏｌ）中溶液を、（１００℃～１６０℃）で一定時間（４時間～２０時間）加熱した。ＬＣ－ＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物をＨ２Ｏでクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製した。カラム：ａ）Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｂ）Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｃ）Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０ｍｍ×２５ｍｍ ５μｍ；ｄ）Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｅ）Ｂｏｓｔｏｎ Ｐｒｉｍｅ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｆ）Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｇ）Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０ｍｍ×２５ｍｍ ５μｍ；ｈ）Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １５０ｍｍ×２５ｍｍ ５μｍ；ｉ）Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０ｍｍ×３０ｍｍ １０μｍ。移動相：ａ）［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］、Ｂ％：１％～５５％、１０分；ｂ）［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］、Ｂ％：５％～３５％、８分；ｃ）［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＭｅＣＮ］、Ｂ％：５％～５０％、２０分）；ｄ）［水（０．０４％ ＮＨ３・Ｈ２Ｏ＋１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＭｅＣＮ］、Ｂ％：１５％～６０％、１０．５分；ｅ）［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１％～２５％、１０分。水性溶液を凍結乾燥して、所望の生成物を得た。
化合物１
５－（（４－クロロ－３－フルオロベンジル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＡ中のステップ８）
Figure 2022515775000015
５－クロロ－１－メチル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．１ｇ、５４１．７６μｍｏｌ、１当量）及び（４－クロロ－３－フルオロ－フェニル）メタンアミン（２５９．３８ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ、１９８．３９μＬ、３当量）のｔ－ＢｕＯＨ（３ｍＬ）中溶液を、１００℃で１６時間加熱した。ＬＣ－ＭＳ及びＨＰＬＣは、５－クロロ－１－メチル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンが完全に消費され、所望の質量を有する１つの主要なピークが検出されていることを示した。反応混合物を２５℃でＨ２Ｏ（５ｍＬ）にてクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０ｍｍ×２５ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２５％～４５％、２０分）により精製した。水性溶液を凍結乾燥して、５－［（４－クロロ－３－フルオロ－フェニル）メチルアミノ］－１－メチル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（７１．８ｍｇ、２３３．３４μｍｏｌ、収率４３．０７％）を淡黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.60～7.50 (m, 2H), 7.38 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.53 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 4.07 (s, 3H). HPLC: 99.03% (220 nm), 99.12% (215 nm), 96.82% (254 nm). MS (ESI): C13H11ClFN5Oの質量計算値307.06, m/z 実測値308.0 [M+H]+.
化合物２
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン）を、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000016
手順により、所望の化合物（０．８ｇ、２．４５ｍｍｏｌ、収率６４．５４％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.09 (s, 1H), 7.57～7.55 (m, 2H), 7.50 (s, 1H), 7.31 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 6.67 (s, 1H), 4.44 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.04 (s, 3H). HPLC: 99.17% (220 nm), 98.91% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C13H11Cl2N5Oの質量計算値323.03, m/z 実測値324.0 [M+H]+.
化合物３
５－（ベンジルアミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン）を、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000017
手順により、所望の化合物（７０．８ｍｇ、２７１．４１μｍｏｌ、収率４１．７５％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.57 (s, 1H), 7.35～7.25 (m, 5H), 6.93 (s, 1H), 4.50 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.07 (s, 3H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C13H13N5Oの質量計算値255.11, m/z 実測値256.1 [M+H]+.
化合物４
１－メチル－５－（（ピリジン－２－イルメチル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン）を、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000018
手順により、所望の化合物（９０．４ｍｇ、３５２．７６μｍｏｌ、５４．２６％）を黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.67 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.12 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.58 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 4.71 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 4.07 (s, 3H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C12H12N6Oの質量計算値256.11, m/z 実測値257.2 [M+H]+.
化合物５
１－メチル－５－（３－ピリジルメチルアミノ）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン）を、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000019
手順により、所望の化合物（１４９．１ｍｇ、５８１．８２μｍｏｌ、収率８９．５０％）を黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.81 (s, 1H), 8.72 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.34 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.87 (dd, J = 7.6 Hz, 5.2 Hz, 1H), 7.52 (s, 1 H), 6.98～6.97 (m, 1H), 4.63 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.06 (s, 3H). HPLC: 97.28% (220 nm), 96.72% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS(ESI): C12H12N6Oの質量計算値256.11, m/z 実測値257.1 [M+H]+.
化合物６
１－メチル－５－（（ピリジン－４－イルメチル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン）を、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000020
手順により、所望の化合物（８９．９ｍｇ、３５０．８１μｍｏｌ、５３．９６％）を黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.80 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 7.91 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 7.46 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 4.75 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 4.06 (s, 3H). HPLC: 96.79% (220 nm), 96.31% (215 nm), 98.37% (254 nm). MS (ESI): C12H12N6Oの質量計算値256.11, m/z 実測値257.1 [M+H]+.
化合物７
５－（（３，４－ジフルオロベンジル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン）を、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000021
手順により、所望の化合物（０．１２８８ｇ、４４２．２２μｍｏｌ、８１．６３％）を淡黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.54 (s, 1H), 7.42～7.35 (m, 2H), 7.18 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.67 (s, 1H), 4.60 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.06 (s, 3H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C13H11F2N5Oの質量計算値291.09, m/z 実測値292.1 [M+H]+.
化合物８
５－（（３，４－ジクロロフェネチル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン）を、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000022
手順により、所望の化合物（０．１１９ｇ、３５１．８７μｍｏｌ、９８．２０％）を黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.58～7.53 (m, 3H), 7.26 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.40 (s, 1H), 4.06 (s, 3H), 3.50 (s, 2H), 2.85 (t, J = 6.8 Hz, 2H). HPLC: 98.20% (220 nm), 97.79% (215 nm), 98.10% (254 nm). MS (ESI): C14H13Cl2N5Oの質量計算値337.05, m/z 実測値338.1 [M+H]+.
化合物９
５－（（３，４－ジクロロフェニル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン）を、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000023
手順により、所望の化合物（４６．３ｍｇ、１４９．２９μｍｏｌ、収率２７．５６％）を淡黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.06 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.10 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.58～7.53 (m, 1H), 7.51～7.47 (m, 1H), 4.12 (s, 3H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C12H9Cl2N5Oの質量計算値309.02, m/z 実測値310.0 [M+H]+.
化合物１０
１－メチル－５－（フェニルアミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000024
手順により、所望の化合物（１００ｍｇ、３９１．７３μｍｏｌ、収率６０．２６％）を淡黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.52 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.62 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.33 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.01 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 4.11 (s, 3H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 99.20 % (254 nm). MS (ESI): C12H11N5Oの質量計算値241.10, m/z 実測値242.1 [M+H]+.
化合物１１
１－メチル－５－（（ピリミジン－２－イルメチル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000025
手順により、所望の化合物（３１ｍｇ、１２０．５０μｍｏｌ、収率２２．２４％）を薄茶褐色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.81 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 7.55 (s, 1H), 7.43 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.88 (s, 1H), 4.69 (d, J= 4.4 Hz, 2H), 4.07 (s, 3H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C11H11N7Oの質量計算値257.10, m/z 実測値258.1 [M+H]+.
化合物１２
１－メチル－５－（（ピラジン－２－イルメチル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000026
手順により、所望の化合物（３０．６ｍｇ、１１８．９５μｍｏｌ、収率２１．９６％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.66 (s, 1H), 8.60～8.59 (m, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.52 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 6.81 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 4.64 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.06 (s, 3H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C11H11N7Oの質量計算値257.10, m/z 実測値258.1 [M+H]+.
化合物１３
５－（（（１Ｈ－インダゾール－５－イル）メチル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000027
手順により、所望の化合物（５６．６ｍｇ、１９１．１３μｍｏｌ、収率３５．２８％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 13.01 (s, 1H), 10.78 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.50 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.35 (dd, J = 1.2 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.42 (s, 1H), 4.55 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.07 (s, 3H). HPLC: 99.72% (220 nm), 99.71% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C14H13N7Oの質量計算値295.12, m/z 実測値296.1 [M+H]+.
化合物１４
５－（（（１Ｈ－インドール－５－イル）メチル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000028
手順により、所望の化合物（３８．４ｍｇ、１３０．４７μｍｏｌ、収率２４．０８％）をオレンジ色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.08 (s, 1H) 7.61 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.37 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.33 (t, J = 2.8 Hz, 1H), 7.09 (dd, J = 1.6 Hz,8.4 Hz, 1H), 7.04～6.81 (m, 1H), 6.40 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.54 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 4.08 (s, 3H). HPLC: 96.92% (220 nm), 96.82% (215 nm), 99.08% (254 nm). MS (ESI): C15H14N6Oの質量計算値294.12, m/z 実測値295.1 [M+H]+.
化合物１５
１－メチル－５－（（チアゾール－４－イルメチル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000029
手順により、所望の化合物（６６．９ｍｇ、２５５．０６μｍｏｌ、収率５８．８５％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.09 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.51 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 6.49 (s, 1H), 4.59 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.06 (s, 3H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C10H10N6OSの質量計算値262.06, m/z 実測値263.0 [M+H]+.
化合物１６
５－（（（１Ｈ－ピラゾール－３－イル）メチル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000030
手順により、所望の化合物（１１８．８ｍｇ、４８４．４２μｍｏｌ、収率８９．４２％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.67 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.24 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 4.49 (s, 2H), 4.08 (s, 3H). HPLC: 98.38% (220 nm), 97.78% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C14H18N10Oの質量計算値245.10, m/z 実測値246.1 [M+H]+.
化合物１７
５－（（（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）メチル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000031
手順により、所望の化合物（５５．９ｍｇ、２２７．０３μｍｏｌ、収率４１．９１％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.78 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 6.75 (s, 1H), 4.55 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 4.07 (s, 3H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C9H10N8Oの質量計算値246.10, m/z 実測値247.1 [M+H]+.
化合物１８
５－（（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イルメチル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000032
手順により、所望の化合物（７３．３ｍｇ、２３４．６７μｍｏｌ、収率４３．３２％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.02 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.94 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.49 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.03 (s, 1H), 4.90 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.08 (s, 3H). HPLC: 96.43% (220 nm), 96.13% (215 nm), 97.34 % (254 nm). MS (ESI): C14H12N6OSの質量計算値312.08, m/z 実測値313.1 [M+H]+.
化合物１９
５－（（（１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－５－イル）メチル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000033
手順により、所望の化合物（４４．５ｍｇ、１４９．５８μｍｏｌ、収率２２．０１％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.41 (s, 1H), 7.80 (d, J = 8.8 Hz,1H), 7.75 (s, 1H), 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.70 (m, 1H), 4.65 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.06 (s, 3H). HPLC: 99.26% (220 nm), 98.34% (215 nm), 98.34% (254 nm). MS (ESI): C14H13N7Oの質量計算値295.12, m/z 実測値296.2 [M+H]+.
化合物２０
１－メチル－５－（（チアゾール－５－イルメチル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000034
手順により、所望の化合物（１９．７ｍｇ、７５．１１μｍｏｌ、収率１３．８６％）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.17 (s, 1H), 8.93 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 6.65 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 4.67 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.07 (s, 3H). HPLC: 96.83% (220 nm), 96.38% (215 nm), 96.83% (254 nm). MS (ESI): C10H10N6OSの質量計算値262.06, m/z 実測値263.0 [M+H]+.
化合物２１
１－メチル－５－（（オキサゾール－５－イルメチル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000035
手順により、所望の化合物（３９．５ｍｇ、１６０．４２μｍｏｌ、収率２９．６１％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.30 (s, 1H), 7.59 ( s, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.70 (s, 1H),4.55 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.07 (s, 3H). HPLC: 96.01% (220 nm), 95.85% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C10H10N6O2の質量計算値246.09, m/z 実測値247.1 [M+H]+.
化合物２２
５－（（（１Ｈ－イミダゾール－２－イル）メチル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000036
手順により、所望の化合物（２６．４ｍｇ、１０７．２７μｍｏｌ、収率１９．８０％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.57 (s, 1H), 6.94 ( s, 2H), 6.51 (s, 1H), 4.44 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.06 (s, 3H). HPLC: 99.65% (220 nm), 98.40% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C10H11N7Oの質量計算値245.10, m/z 実測値246.1 [M+H]+.
化合物２３
１－メチル－５－（（ピリダジン－３－イルメチル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000037
手順により、所望の化合物（４．９ｍｇ、１９．０５μｍｏｌ、収率３．５２％）を淡茶褐色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.15 (dd, J = 2.8 Hz, 4.0 Hz, 1H), 7.69～7.64 (m, 2H), 7.54 (s, 1H), 7.05～6.96 (m, 1H), 4.78 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.07 (s, 3H). HPLC: 99.18% (220 nm), 98.00% (215 nm), 98.57% (254 nm). MS (ESI): C11H11N7Oの質量計算値257.10, m/z 実測値258.1 [M+H]+.
化合物２４
５－（（３－クロロ－４－フルオロベンジル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000038
手順により、所望の化合物（１３９ｍｇ、４５１．７２μｍｏｌ、収率８３．３８％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.55～7.54 (m, 2H), 7.37～7.35 (m, 2H), 6.87 (s, 1H), 4.47 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.07 (s, 3H). HPLC: 98.59 % (220 nm), 97.69 % (215 nm), 99.20 % (254 nm). MS (ESI): C13H11ClFN5Oの質量計算値307.06, m/z 実測値308.0 [M+H]+.
化合物２５
５－（（４－クロロベンジル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000039
手順により、所望の化合物（２３．１ｍｇ、７９．７３μｍｏｌ、収率１４．７２％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.84 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.46～7.35 (m, 4H), 4.57 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 4.09 (s, 3H). HPLC: 99.48% (220 nm), 99.72% (215 nm), 98.92% (254 nm). MS (ESI): C13H12ClN5Oの質量計算値289.07, m/z 実測値290.1 [M+H]+.
化合物２６
５－（（３－クロロベンジル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000040
手順により、所望の化合物（１５７．９ｍｇ、３９１．０９μｍｏｌ、収率７２．１９％、ＴＦＡ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.57 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.36 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.33～7.28 (m, 2H), 7.04 (s, 1H), 4.51 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 4.07 (s, 3H). HPLC: 97.49% (220 nm), 97.20% (215 nm), 98.84% (254 nm). MS (ESI): C13H12ClN5Oの質量計算値289.07, m/z 実測値290.1 [M+H]+.
化合物２７
５－（（２－クロロベンジル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000041
手順により、所望の化合物（９３．２ｍｇ、３１３．８４μｍｏｌ、収率５７．９３％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.55 (s, 1H), 7.47～7.45 (m, 1H), 7.41～7.38 (m, 1H), 7.34～7.29 (m, 2H), 6.68～6.67 (m, 1H), 5.55 (d, J = 5.6 Hz,2H), 4.07 (s, 3H). HPLC: 97.56% (220 nm), 97.45% (215 nm), 98.61% (254 nm). MS (ESI): C13H12ClN5Oの質量計算値289.07, m/z 実測値290.1 [M+H]+.
化合物２８
５－（（２，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000042
手順により、所望の化合物（９２．６ｍｇ、２７６．１４μｍｏｌ、収率５０．９７％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.62 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.42～7.35 (m, 2H), 6.63 (s, 1H), 4.51 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.06 (s, 3H). HPLC: 96.67% (220 nm), 96.29% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C13H11Cl2N5Oの質量計算値323.03, m/z 実測値324.0 [M+H]+.
化合物２９
５－（（２，３－ジクロロベンジル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000043
手順により、所望の化合物（５５ｍｇ、１６９．６７μｍｏｌ、収率３１．３２％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.14 (s, 1H), 7.56～7.53 (m, 2H), 7.33 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 6.64 (s, 1H), 5.56 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.06 (s, 3H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C13H11Cl2N5Oの質量計算値323.03, m/z 実測値324.0 [M+H]+.
化合物３０
５－（（２，６－ジクロロベンジル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000044
手順により、所望の化合物（２６．５ｍｇ、８１．７５μｍｏｌ、収率１５．０９％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.55 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.54～7.52 (m, 2H), 7.40～7.38 (m, 1H), 6.24 (s, 1H), 4.68 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 4.06 (s, 3H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00 % (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C13H11Cl2N5Oの質量計算値323.03, m/z 実測値324.0 [M+H]+.
化合物３１
５－（（３－クロロ－４－メチルベンジル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000045
手順により、所望の化合物（１０６．２ｍｇ、３４９．６３μｍｏｌ、収率６４．５４％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.56 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.31 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.82 (s, 1H), 4.46 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.08 (s, 3H), 2.30 (s, 3H). HPLC: 97.09% (220 nm), 96.49% (215 nm), 98.94% (254 nm). MS (ESI): C14H14ClN5Oの質量計算値303.09, m/z 実測値304.0 [M+H]+.
化合物３２
５－（（３，４－ジメトキシベンジル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000046
手順により、所望の化合物（９１．３ｍｇ、２８９．５４μｍｏｌ、収率５９．３８％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.57 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.93～6.83 (m, 2H), 6.74 (s, 1H), 4.39 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.07 (s, 3H), 3.73 (d, J = 5.2 Hz, 6H). HPLC: 99.37% (220 nm), 99.36% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C15H17N5O3の質量計算値315.13, m/z 実測値316.1 [M+H]+.
化合物３３
５－（（３，４－ジメチルベンジル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000047
手順により、所望の化合物（１１７ｍｇ、４１２．９５μｍｏｌ、収率８４．６９％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.56 (s, 1H), 7.09 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 7.05 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 6.59 (s, 1H), 4.39 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 4.07 (s, 3H), 2.19 (d, J = 4.8 Hz, 6H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C15H17N5Oの質量計算値283.14, m/z 実測値284.1 [M+H]+.
化合物３４
５－（（４－クロロ－３－メトキシベンジル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000048
手順により、所望の化合物（９２．１ｍｇ、２８８．０４μｍｏｌ、収率５９．０８％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.55 (s, 1H), 7.36 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.91 (dd, J = 8.0 Hz, J = 1.6 Hz, 1H), 6.56 (s, 1H), 4.46 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.07 (s, 3H), 3.83 (s, 3H). HPLC: 100.00% (220 nm), 98.52% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C14H14ClN5O2の質量計算値319.08, m/z 実測値320.1 [M+H]+.
化合物３５
５－（（４－クロロ－３－メチルベンジル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000049
手順により、所望の化合物（１０２．３ｍｇ、３３６．７９μｍｏｌ、収率６９．０７％）を淡白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.56 (s, 1H), 7.37 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.18 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.97 (s, 1H), 4.46 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 4.07 (s, 3H), 2.31 (s, 3H). HPLC: 99.90% (220 nm), 99.86% (215 nm), 98.42% (254 nm). MS (ESI): C14H14ClN5Oの質量計算値303.09, m/z 実測値304.1 [M+H]+.
化合物３６
５－（（（４，５－ジクロロピリジン－２－イル）メチル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン－２，２，２－トリフルオロアセタートを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000050
手順により、所望の化合物（３５．８ｍｇ、１１０．１０μｍｏｌ、収率３３．８７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.20 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 6.73 (s, 1H), 4.58 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.07 (s, 3H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 96.16% (254 nm). MS (ESI): C12H10Cl2N6Oの質量計算値324.03, m/z 実測値325.0 [M+H]+.
化合物３７
５－（（（４，５－ジクロロ－１Ｈ－イミダゾール－２－イル）メチル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000051
手順により、所望の化合物（２３．２ｍｇ、７３．８５μｍｏｌ、収率１６．４１％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.57 (s, 1H), 6.55 (s, 1H), 4.42 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.07 (s, 3H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C10H9Cl2N7Oの質量計算値313.02, m/z 実測値314.0 [M+H]+.
化合物３８
５－（（（４－クロロ－５－エチル－１Ｈ－イミダゾール－２－イル）メチル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000052
手順により、所望の化合物（８．４ｍｇ、２７．０１μｍｏｌ、収率９．９７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.59 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 4.61 (d,J = 2.4 Hz, 2H), 4.09 (s, 3H), 2.56 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.15 (t, J = 7.6 Hz, 3H). HPLC:98.96 % (220 nm), 98.49 % (215 nm), 99.11 % (254 nm). MS (ESI): C12H15Cl2N7Oの質量計算値307.09, m/z 実測値308.1 [M+H]+.
化合物３９
５－（（１，３－ジヒドロイソベンゾフラン－５－イル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＡ中のステップ８として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000053
手順により、所望の化合物（２６．８ｍｇ、９２．３７μｍｏｌ、収率４２．６３％）を黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.54 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.43 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.24 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.00 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.11 (s, 3H). HPLC: 97.64 % (220 nm), 96.24 % (215nm), 98.52% (254 nm). MS (ESI): C14H13N5O2の質量計算値283.11, m/z 実測値284.1 [M+H]+.
スキームＢ－１
Figure 2022515775000054
化合物４０
メチル５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－メチル－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－３－カルボキシラートを、スキームＢ－１中のステップ１～２として本明細書に記載した手順に従って調製した。
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－３－ヨード－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＢ－１中のステップ１）
Figure 2022515775000055
ＨＢＦ４（６７７．２２ｍｇ、７．７１ｍｍｏｌ、４８０．３０μＬ、２．５当量）を、５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－メチル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１ｇ、３．０８ｍｍｏｌ、１当量）及びＮＩＳ（６９４．０３ｍｇ、３．０８ｍｍｏｌ、１当量）のＭｅＣＮ（８ｍＬ）中混合物に加えた。混合物を１００℃で４時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。多少の黄色固体が生成された。濾過した後、Ｈ２Ｏ（８ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（８ｍＬ）で洗浄した後、固体を集めた。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－３－ヨード－１－メチル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（７３０ｍｇ、１．６２ｍｍｏｌ、収率５２．５８％）を黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.21 (s, 1H), 7.70 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.39 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.70 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.46 (d, J = 9.6 Hz, 2H), 4.07 (s, 3H).
メチル５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－メチル－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－３－カルボキシラートの調製（スキームＢ－１中のステップ２）
Figure 2022515775000056
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－３－ヨード－１－メチル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（３００ｍｇ、６６６．５８μｍｏｌ、１当量）及びＴＥＡ（２６９．８０ｍｇ、２．６７ｍｍｏｌ、３７１．１２μＬ、４当量）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）及びＤＭＦ（３ｍＬ）中溶液に、Ｎ２雰囲気下Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（９７．５５ｍｇ、１３３．３２μｍｏｌ、０．２当量）を加えた。懸濁液を脱気してＣＯで３回パージした。混合物をＣＯ（５０ｐｓｉ）下８０℃で５時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。濾過した後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム４ｇ、６５ｍＬ／分で０～１００％酢酸エチル／石油エーテル濃度勾配の溶出液）により精製した。溶出液を減圧下で除去した。得られた粗生成物５０ｍｇを分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ８μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：４５％～７０％、１０分）により更に精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物メチル５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－メチル－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－３－カルボキシラート（９．８ｍｇ、２５．５４μｍｏｌ、収率３．８３％、純度９９．６２％）を白色固体として得、次に使用した。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.32 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.58 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.88 (s, 1H), 4.47 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.13 (s, 3H), 3.83 (s, 3H). HPLC: 99.62% (220 nm), 99.52 % (215 nm), 99.35 % (254 nm). MS (ESI): C15H13Cl2N5O3の質量計算値381.04, m/z 実測値382.1 [M+H]+.
スキームＢ－１中の化合物の調製（スキームＢ－１中のステップ３）
Figure 2022515775000057
メチル５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－メチル－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－３－カルボキシラート（７８４．９３μｍｏｌ、１当量）、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（２．３５ｍｍｏｌ、３当量）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２ｍＬ）（又はＭｅＮＨ２（ＥｔＯＨ中２Ｍ、１５．７ｍｍｏｌ、７．８５ｍＬ、２０当量）中）中混合物を、２５℃で一定時間（１時間～１２時間）撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製した。カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ８μｍ。移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３５％～６５％、１０分）。溶媒を凍結乾燥下で除去して、所望の生成物を得た。
化合物４１
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－メチル－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－３－カルボン酸の調製（スキームＢ－１中のステップ３）
Figure 2022515775000058
手順により、所望の化合物（１４．１ｍｇ、３７．３２μｍｏｌ、収率４．７５％、純度９７．４４％）を薄茶褐色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.25 (s, 1H), 10.64 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.59～7.55 (m, 1H), 7.47～7.32 (m, 1H), 6.77 (s, 1H), 4.55～4.47 (m, 2H), 4.12 (s, 3H). HPLC: 97.44% (220 nm), 97.47 % (215 nm), 98.21 % (254 nm). MS (ESI): C14H11Cl2N5O3の質量計算値367.02, m/z 実測値368.0 [M+H]+.
化合物４２
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－Ｎ，１－ジメチル－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－３－カルボキサミドの調製（スキームＢ－１中のステップ３）
Figure 2022515775000059
メチル５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－メチル－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－３－カルボキシラート（５０ｍｇ、１３０．８２μｍｏｌ、１当量）のＭｅＮＨ２（ＥｔＯＨ中２Ｍ、１．３１ｍＬ、２０当量）中混合物を、２５℃で１２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ８μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３５％～５５％、１０分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－Ｎ，１－ジメチル－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－３－カルボキサミド（５．８ｍｇ、１５．０２μｍｏｌ、収率１１．４８％、純度９８．７１％）を茶褐色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.42 (s, 1H), 7.94 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.60 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.03 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.50 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.09 (s, 3H), 2.82 (d, J = 4.8 Hz, 3H). HPLC: 98.71% (220 nm), 98.32 % (215 nm), 96.98 % (254 nm). MS (ESI): C15H14Cl2N6O2の質量計算値380.06, m/z 実測値381.1 [M+H]+.
化合物４３
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－Ｎ，Ｎ，１－トリメチル－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－３－カルボキサミドを、スキームＢ－１中のステップ３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000060
手順により、所望の化合物（３．３ｍｇ、７．８０μｍｏｌ、収率５．９６％）を茶褐色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.24 (s, 1H), 7.59～7.57 (m, 2H), 7.33 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.73 (s, 1H), 4.44～4.45 (m, 2H), 4.09 (s, 3H), 2.96 (s, 3H), 2.82 (s, 3H). HPLC: 93.37% (220 nm), 90.08 % (215 nm), 92.84 % (254 nm). MS (ESI): C16H16Cl2N6O2の質量計算値394.07, m/z 実測値395.1 [M+H]+.
スキームＢ－２
Figure 2022515775000061
化合物４４
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１，３－ジメチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＢ－２中のステップ１）
Figure 2022515775000062
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－３－ヨード－１－メチル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．２ｇ、４４４．３８μｍｏｌ、１当量）、２，４，６－トリメチル－１，３，５，２，４，６－トリオキサトリボリナン（３３４．７１ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ、３７２．７３μＬ、ＴＨＦ中５０％、３当量）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（４８．７７ｍｇ、６６．６６μｍｏｌ、０．１５当量）及びＫ２ＣＯ３（１８４．２６ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ、３当量）のジオキサン（１０ｍＬ）中混合物を、Ｎ２下１２０℃で１０時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。濾過した後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３５％～５０％、１０分）により精製して、５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１，３－ジメチル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（２２．４ｍｇ、６６．２３μｍｏｌ、収率１４．９０％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.98 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.58 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.56 (s, 1H), 4.46 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 3.98 (s, 3H), 2.20 (s, 3H). HPLC: 97.11% (220 nm), 95.73% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C14H13Cl2N5Oの質量計算値337.05, m/z 実測値338.2 [M+H]+.
スキームＢ－３
Figure 2022515775000063
化合物４５
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－メチル－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－３－カルボニトリルの調製（スキームＢ－３中のステップ１）
Figure 2022515775000064
３－ブロモ－５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－メチル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（５０ｍｇ、１２４．０５μｍｏｌ、１当量）及びＣｕＣＮ（１２．２２ｍｇ、１３６．４６μｍｏｌ、２９．８１μＬ、１．１当量）のＤＭＳＯ（１ｍＬ）中混合物を、１６０℃で４時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を濾過して、不溶物を除去した。濾液を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １００ｍｍ×２５ｍｍ ３μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３０％～６０％、１２分）により最初に精製し、次いで分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １５０ｍｍ×２５ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：４０％～６５％、１０．５分）により２番目に精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－メチル－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－３－カルボニトリル（５．３ｍｇ、１４．７５μｍｏｌ、収率１１．８９％、純度９７．２０％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.63～7.59 (m, 2H), 7.35 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.00 (s, 1H), 4.51 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.14 (s, 3H). HPLC: 97.20% (220 nm), 96.95 % (215 nm), 95.24 % (254 nm). MS (ESI): C14H10Cl2N6Oの質量計算値348.03, m/z 実測値349.0 [M+H]+.
スキームＢ－４
Figure 2022515775000065
化合物４６
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－３－（２，５－ジヒドロフラン－２－イル）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＢ－４中のステップ１）
Figure 2022515775000066
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－３－ヨード－１－メチル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．３ｇ、６６６．５８μｍｏｌ、１当量）、２，３－ジヒドロフラン（２３３．６０ｍｇ、３．３３ｍｍｏｌ、２５２．００μＬ、５当量）、ＡｃＯＫ（１６３．５４ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ、２．５当量）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（２９．９３ｍｇ、１３３．３２μｍｏｌ、０．２当量）及びＰＰｈ３（１７．４８ｍｇ、６６．６６μｍｏｌ、０．１当量）のＤＭＦ（１ｍＬ）中混合物を、脱気してＮ２で３回パージし、次いで混合物をＮ２雰囲気下１００℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を室温に冷却し、０℃でＨ２Ｏ（５ｍＬ）にてクエンチした。混合物をＥｔＯＡｃ（８ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。０．４５ｇ（粗製物）の５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－３－（２，５－ジヒドロフラン－２－イル）－１－メチル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．６ｇ、粗製物）を薄黄色固体として得た。粗製物０．１５ｇを分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ３μｍ；移動相：［水（０．０４％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：４０％～５５％、１０分）により更に精製した。ＭｅＣＮを３０℃で減圧下にて除去した。水溶液を凍結乾燥で脱水して、５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－３－（２，５－ジヒドロフラン－２－イル）－１－メチル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（２４．９ｍｇ、６２．０１μｍｏｌ、収率９．３０％、純度９７．６８５％）を薄黄色固体として得、次に使用した。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.63～7.58 (m, 2H), 7.35 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.08 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 5.88 (dd, J = 18.0 Hz, 2.0 Hz, 2H), 4.70～4.67 (m, 1H), 4.57 (s, 1H), 4.46 (s, 2H), 4.02(s, 3H). HPLC: 97.69% (220 nm), 97.64% (215 nm), 98.97% (254 nm). MS (ESI): C17H15Cl2N5O2の質量計算値391.06, m/z 実測値392.1 [M+H]+.
化合物４７
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－メチル－３－（テトラヒドロフラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＢ－４中のステップ２）
Figure 2022515775000067
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－３－（２，５－ジヒドロフラン－２－イル）－１－メチル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．３ｇ、２２９．４５μｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＨ（５０ｍＬ）及びＴＨＦ（５０ｍＬ）中溶液に、Ｒｈ（ＰＰｈ３）３Ｃｌ（２１．２３ｍｇ、２２．９５μｍｏｌ、０．１当量）を加えた。懸濁液を脱気してＨ２で３回パージした。混合物をＨ２（２０ｐｓｉ）下３０℃で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。濾過した後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３５％～５５％、１２分）により精製した。ＭｅＣＮを３０℃で減圧下にて除去した。残渣を凍結乾燥で脱水した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－メチル－３－テトラヒドロフラン－２－イル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（２０．７ｍｇ、４９．８２μｍｏｌ、収率２１．７１％、純度９４．９０％）を黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.61～7.57 (m, 2H), 7.33 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.92～6.81 (m, 1H), 4.93 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 4.46 (s, 2H), 4.01 (s, 3H), 3.82～3.79 (m, 1H), 3.72～3.69 (m, 1H), 2.23～2.20 (m, 1H), 2.07～2.05 (m, 2H), 2.03～1.87 (m, 1H). HPLC: 94.90% (220 nm), 94.45% (215 nm), 98.07% (254 nm). MS (ESI): C17H17Cl2N5O2の質量計算値393.08, m/z 実測値394.0 [M+H]+.
スキームＢ－５
Figure 2022515775000068
化合物４８
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－３－（２－ヒドロキシエチル）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
（Ｅ）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－３－（２－エトキシビニル）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＢ－５中のステップ１）
Figure 2022515775000069
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－３－ヨード－１－メチル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．５ｇ、１．１１ｍｍｏｌ、１当量）、２－［（Ｅ）－２－エトキシビニル］－４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン（８８０．１８ｍｇ、４．４４ｍｍｏｌ、４当量）、Ｋ２ＣＯ３（４６０．６２ｍｇ、３．３３ｍｍｏｌ、３当量）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１２１．９４ｍｇ、１６６．６４μｍｏｌ、０．１５当量）のジオキサン（１２ｍＬ）及びＨ２Ｏ（３ｍＬ）中混合物を、Ｎ２下１００℃で１０時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。溶媒を減圧下で除去した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム１２ｇ、５０ｍＬ／分で０～１００％酢酸エチル／石油エーテル濃度勾配の溶出液）により精製した。溶出液を減圧下で除去した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－３－［（Ｅ）－２－エトキシビニル］－１－メチル－６Ｈ－ピラゾロ－［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．３４ｇ、８６２．３９μｍｏｌ、収率７７．６３％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.09 (s, 1H), 7.62～7.56 (m, 3H), 7.34 (dd, J = 2.0 Hz, 5.2 Hz, 1H), 6.62 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 5.77 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 5.25 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 4.46 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.82 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.21 (t, J = 6.8 Hz, 3H).
化合物４９
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－３－（２－エトキシエチル）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＢ－５中のステップ２）
Figure 2022515775000070
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－３－［（Ｅ）－２－エトキシビニル］－１－メチル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．１５ｇ、３８０．４６μｍｏｌ、１当量）及びＲｈ（ＰＰｈ３）３Ｃｌ（３５．２０ｍｇ、３８．０５μｍｏｌ、０．１当量）のＥｔＯＨ（５０ｍＬ）及びＴＨＦ（２０ｍＬ）中混合物を、Ｈ２（２０ｐｓｉ）下３０℃で５時間撹拌した。ＨＰＬＣ及びＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。濾過した後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３５％～５５％、１０分）により精製した。溶出液を凍結乾燥下で除去した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－３－（２－エトキシエチル）－１－メチル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（７１．７ｍｇ、１８０．９４μｍｏｌ、収率４７．５６％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.08 (s, 1H), 7.62 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.34 (dd, J = 2.0 Hz, 8.0 Hz, 1H), 6.62 (s, 1H), 4.44 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.99 (s, 3H), 3.82 (t, J = 2.8 Hz, 2H), 3.35 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 2.84 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 1.03 (t, J = 6.8 Hz, 3H). HPLC: 99.64% (220 nm), 99.62% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C17H19Cl2N5O2の質量計算値395.09, m/z 実測値396.1 [M+H]+.
２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－メチル－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－３－イル）アセトアルデヒドの調製（スキームＢ－５中のステップ３）
Figure 2022515775000071
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－３－［（Ｅ）－２－エトキシビニル］－１－メチル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．１５ｇ、３８０．４６μｍｏｌ、１当量）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中混合物に、０℃でＴＦＡ（１ｍＬ）を滴下添加した。次いで混合物を２０℃で５時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。混合物を水（１０ｍＬ）中に注ぎ入れ、有機層を分離した。水溶液をＤＣＭ（２０ｍＬ×５）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄してｐＨ＝７にし、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を更には精製せずに次のステップに使用した。化合物２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－メチル－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－３－イル］アセトアルデヒド（０．１ｇ、２７３．０７μｍｏｌ、収率７１．７７％）を黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.08 (s, 1H), 9.67 (s, 1H), 7.62～7.55 (m, 2H), 7.34 (dd, J = 2.0 Hz, 8.0 Hz, 1H), 6.59 (s, 1H), 4.42 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.05 (s, 3H), 3.75 (d, J = 2.0 Hz, 2H).
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－３－（２－ヒドロキシエチル）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＢ－５中のステップ４）
Figure 2022515775000072
２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－メチル－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－３－イル］アセトアルデヒド（０．１ｇ、２７３．０７μｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）中溶液に、０℃でＮａＢＨ４（３０．９９ｍｇ、８１９．２２μｍｏｌ、３当量）を少しずつ加えた。次いで混合物を２０℃で１時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。混合物を氷水（５ｍＬ）でゆっくりクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×４）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ×２）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～４０％、１０分）により精製した。溶出液を凍結乾燥下で除去した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－３－（２－ヒドロキシエチル）－１－メチル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（８３．８ｍｇ、２２７．５８μｍｏｌ、収率８３．３４％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.64 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.37 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.63 (s, 1H), 4.46 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.00 (s, 3H), 3.67 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.80 (t, J = 7.2 Hz, 2H). HPLC: 100.00% (220 nm), 99.85% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C15H15Cl2N5O2の質量計算値367.06, m/z 実測値368.1 [M+H]+.
スキームＢ－６
Figure 2022515775000073
化合物５０
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）－３－（オキサゾール－２－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）－３－ヨード－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＢ－６中のステップ１）
Figure 2022515775000074
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．１ｇ、２５１．１０μｍｏｌ、１当量）及びＮＩＳ（７３．４４ｍｇ、３２６．４３μｍｏｌ、１．３当量）のＭｅＣＮ（２ｍＬ）中溶液に、ＨＢＦ４（５５．１２ｍｇ、６２７．７６μｍｏｌ、３９．１０μＬ、２．５当量）を滴下添加した。混合物を１００℃で１０時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）を反応混合物に加えた。反応混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ×２）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）－３－ヨード－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（０．１２ｇ、２２８．９５μｍｏｌ、収率９１．１８％）を茶褐色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.70 (s, 1H), 7.60～7.57 (m, 2H), 7.40 (dd, J = 8.0 Hz, J = 2.0 Hz, 1H), 6.72 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.56 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.46 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.78 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.40～3.38 (m, 4H).
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）－３－（オキサゾール－２－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＢ－６中のステップ２）
Figure 2022515775000075
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－３－ヨード－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（５５ｍｇ、１０４．９３μｍｏｌ、１当量）、トリブチル（オキサゾール－２－イル）スタンナン（３７５．７７ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ、１０当量）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１５．３６ｍｇ、２０．９９μｍｏｌ、０．２当量）のジオキサン（２ｍＬ）中混合物を、脱気してＮ２で３回パージし、次いで混合物をＮ２雰囲気下１００℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０４％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～５０％、１０分）により精製した。ＭｅＣＮを３０℃で減圧下にて除去した。残渣を凍結乾燥で脱水した。化合物５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）－３－（オキサゾール－２－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（１４．０ｍｇ、２８．８３μｍｏｌ、収率２７．４８％、純度９５．８３２％）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.22 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.58～7.57 (m, 1H), 7.47～7.41 (m, 2H), 7.07 (s, 1H), 4.66 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 3.85 (s, 2H), 3.59 (s, 2H), 3.45 (s, 2H). HPLC: 95.83% (220 nm), 95.77% (215 nm), 98.53% (254 nm). MS (ESI): C19H18Cl2N6O4の質量計算値464.08, m/z 実測値465.0 [M+H]+.
スキームＢ－７
Figure 2022515775000076
化合物５１
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－３－カルボニトリルの調製
化合物５２
３－ブロモ－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＢ－７中のステップ１）
Figure 2022515775000077
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（２３０ｍｇ、５７７．５４μｍｏｌ、１当量）及びＮＢＳ（１１３．０７ｍｇ、６３５．２９μｍｏｌ、１．１当量）のＭｅＣＮ（３ｍＬ）中混合物に、ＨＢＦ４（１２６．７９ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ、８９．９２μＬ、２．５当量）を加えた。混合物を１００℃で３０分間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物をＨ２Ｏ（５ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（８ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム４ｇ、３０ｍＬ／分で０～１００％酢酸エチル／メタノールの溶出液）により精製した。溶出液を減圧下で除去した。化合物３－ブロモ－５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１９０ｍｇ、粗製物）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.27 (s, 1H), 7.66 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.37 (dd, J = 8.4 Hz, 1.6 Hz, 1H), 6.76 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.57～4.52 (m, 3H), 4.47 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.78 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.41～3.37 (m, 4H). HPLC: 99.39 % (220 nm), 99.22 % (215 nm), 99.59 % (254 nm). MS (ESI): C16H16BrCl2N5O3の質量計算値474.98, m/z 実測値476.0 [M+H]+.
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－３－カルボニトリルの調製（スキームＢ－７中のステップ２）
Figure 2022515775000078
３－ブロモ－５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（４０ｍｇ、８３．８３μｍｏｌ、１当量）、Ｚｎ（ＣＮ）２（２９．５３ｍｇ、２５１．５０μｍｏｌ、３当量）、ｄｐｐｆ（７．４４ｍｇ、１３．４１μｍｏｌ、０．１６当量）及びＰｄ２（ｄｂａ）３（６．１４ｍｇ、６．７１μｍｏｌ、０．０８当量）のＤＭＡ（０．５ｍＬ）中混合物を、脱気してＮ２で３回パージし、次いで混合物をＮ２雰囲気下１７０℃で４０分間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。濾過した後、濾液を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ １５０ ３０ｍｍ×５μｍ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～５０％、８分）により精製した。溶媒をフリーズドライ下で除去した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－３－カルボニトリル（２７．７ｍｇ、６４．６７μｍｏｌ、収率１９．２８％、純度９８．８１％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.63 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.35 (dd, J = 8.4 Hz, 1.6 Hz, 1H), 7.05 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.66 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.51 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 3.84 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.39 (s, 4H). HPLC: 98.81 % (220 nm), 98.60 % (215 nm), 98.43 % (254 nm). MS (ESI): C17H16Cl2N6O3の質量計算値422.07, m/z 実測値423.0 [M+H]+.
スキームＢ－８
Figure 2022515775000079
化合物５３
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
５－クロロ－３－フルオロ－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＢ－８中のステップ１）
Figure 2022515775000080
５－クロロ－１－メチル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．５ｇ、２．７１ｍｍｏｌ、１当量）及びＳｅｌｅｃｔ Ｆ（２．８８ｇ、８．１３ｍｍｏｌ、３当量）のＭｅＣＮ（１５ｍＬ）中混合物を、１００℃で４０時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン約２０％が残っており、約４０％が所望のピークであることを示した。溶媒を減圧下で除去した。残渣を水（２０ｍＬ）に溶解し、２０℃で１５分間撹拌した。濾過した後、固体を集めた。残渣を更には精製せずに次のステップに使用した。化合物５－クロロ－３－フルオロ－１－メチル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．４ｇ、１．９７ｍｍｏｌ、収率７２．９０％）を黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 4.13 (s, 3H).
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＢ－８中のステップ２）
Figure 2022515775000081
５－クロロ－３－フルオロ－１－メチル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．１ｇ、４９３．６５μｍｏｌ、１当量）及び（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（１７３．８１ｍｇ、９８７．３０μｍｏｌ、１３１．６７μＬ、２当量）のｔ－ＢｕＯＨ（３ｍＬ）中混合物を、Ｎ２下１００℃で１０時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。溶媒を減圧下で除去した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ Ｃ８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３５％～６０％、１０分）により精製した。溶出液を凍結乾燥下で除去した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－３－フルオロ－１－メチル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１５．６ｍｇ、４５．５９μｍｏｌ、収率９．２４％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.28 (s, 1H), 7.60～7.58 (m, 2H), 7.32 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.68 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.46 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H). HPLC: 95.42% (220 nm), 94.90% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C13H10Cl2FN5Oの質量計算値341.02, m/z 実測値342.0 [M+H]+.
スキームＢ－９
Figure 2022515775000082
化合物５４及び化合物５５
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン及び３－クロロ－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
５－クロロ－３－フルオロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン及び３，５－ジクロロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＢ－９中のステップ１）
Figure 2022515775000083
５－クロロ－３－フルオロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（１００ｍｇ、４９３．６５μｍｏｌ、１当量）及び３，５－ジクロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（４９３．６５μｍｏｌ、１当量）のＭｅＣＮ（１ｍＬ）中混合物に、０℃でＮａＩ（２９５．９７ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ、４当量）及びＴＭＳＣｌ（２１４．５２ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ、２５０．６１μＬ、４当量）を加えた。次いで混合物を２５℃で５時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物をＨ２Ｏ（１ｍＬ）でクエンチし、減圧下で濃縮した。水溶液をＥｔＯＡｃ（１ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物５－クロロ－３－フルオロ－１，６－ジヒドロピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１００ｍｇ、粗製物）及び３，５－ジクロロ－１，６－ジヒドロピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンの混合物を茶褐色固体として得た。MS (ESI): C5H2ClFN4Oの質量計算値187.99 m/z 実測値189.0 [M+H]+; C5H2Cl2N4O 203.96 m/z 実測値205.0 [M+H]+.
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン及び３－クロロ－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＢ－９中のステップ２）
Figure 2022515775000084
５－クロロ－３－フルオロ－１，３ａ，６，７ａ－テトラヒドロピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１３０ｍｇ、６８２．１９μｍｏｌ、１当量）及び３，５－ジクロロ－１，３ａ，６，７ａ－テトラヒドロピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（６８２．１９μｍｏｌ、１当量）のｔ－ＢｕＯＨ（４ｍＬ）中混合物に、（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（２４０．１９ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ、１８１．９６μＬ、２当量）を加えた。混合物を１００℃で１２時間撹拌した。ＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １００ｍｍ×２５ｍｍ ３μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３０％～５０％、１２分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－３－フルオロ－１，６－ジヒドロピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（化合物５４）（６．６ｍｇ、１８．９４μｍｏｌ、収率２．７８％、純度９４．１６％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 13.19 (s, 1H), 11.19 (s, 1H), 7.60～7.58 (m, 2H), 7.34 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.68 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.47 (d, J = 6.0 Hz, 2H). HPLC: 94.16 % (220 nm), 90.65 % (215 nm), 90.27 % (254 nm). MS (ESI): C12H8Cl2FN5Oの質量計算値327.01, m/z 実測値328.0 [M+H]+.３－クロロ－５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１，６－ジヒドロピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（化合物５５）（８．２ｍｇ、２３．３４μｍｏｌ、収率４．４５％、純度９８．１％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 13.85 (s, 1H), 11.17 (s, 1H), 7.64 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.36 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.73 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.49 (d, J = 6.4 Hz, 2H). HPLC: 98.10 % (220 nm), 98.04 % (215 nm), 99.41 % (254 nm). MS (ESI): C12H8Cl3N5Oの質量計算値342.98, m/z 実測値344.0 [M+H]+.
スキームＣ－１
Figure 2022515775000085
スキームＣ－１中の化合物を調製するための一般的手順
１－アリル－４－ニトロ－ピラゾールの調製（スキームＣ－１中のステップ１）
Figure 2022515775000086
４－ニトロ－１Ｈ－ピラゾール（２００ｇ、１．７７ｍｏｌ、１当量）のＤＭＦ（１Ｌ）中溶液に、Ｎ２下２５℃で３－ブロモプロパ－１－エン（２３５．２９ｇ、１．９４ｍｏｌ、１．１当量）及びＫ２ＣＯ３（４８８．７４ｇ、３．５４ｍｏｌ、２当量）を加えた。次いで混合物を８０℃で１時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を０℃で氷水（５００ｍＬ）にてクエンチし、次いでＭＴＢＥ（５００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（３００ｍＬ×６）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、１－アリル－４－ニトロ－ピラゾール（２７０ｇ、１．７６ｍｏｌ、収率９９．７１％）を茶褐色油状物として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.16 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 6.07～6.00 (m, 1H), 5.44～5.34 (m, 2H), 4.78 (d, J = 6.0 Hz, 2H).
２－アリル－４－ニトロ－ピラゾール－３－カルボン酸の調製（スキームＣ－１中のステップ２）
Figure 2022515775000087
１－アリル－４－ニトロ－ピラゾール（５０ｇ、３２６．５０ｍｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（５００ｍＬ）中溶液に、Ｎ２下－７８℃でＬｉＨＭＤＳ（１Ｍ、４８９．７５ｍＬ、１．５当量）を滴下添加した。その後、混合物を－７８℃で１時間撹拌した。次いで乾燥ＣＯ２を上記混合物に３０分間吹き込んだ。ＴＬＣは、出発物質約３０％が残っており、大きな極性を有する新規スポットが生成されていることを示した。反応混合物（５バッチ）を０℃で水（２．５Ｌ）にてクエンチし、次いで飽和Ｎａ２ＣＯ３でｐＨ＝８～９に調節した。混合物をＭＴＢＥ（１Ｌ×３）で抽出して、１－アリル－４－ニトロ－ピラゾールを回収した。次いで水性層を２Ｎ ＨＣｌでｐＨ＝１に調節し、次いでＥｔＯＡｃ（２Ｌ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１Ｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、２－アリル－４－ニトロ－ピラゾール－３－カルボン酸（２００ｇ、１．０１ｍｏｌ、収率６２．１４％）を茶褐色油状物として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.34 (s, 1H), 6.02～5.94 (m, 1H), 5.25 (dd, J = 10.4 Hz, 1.2 Hz, 1H), 5.10 (dd, J = 17.2 Hz, 1.2 Hz, 1H), 4.90 (d, J = 5.6 Hz, 2H).
２－アリル－４－ニトロ－ピラゾール－３－カルボキサミドの調製（スキームＣ－１中のステップ３）
Figure 2022515775000088
２－アリル－４－ニトロ－ピラゾール－３－カルボン酸（６５ｇ、３２９．７０ｍｍｏｌ、１当量）のＳＯＣｌ２（２００ｍＬ）及びＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液を、８０℃で２時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮して、１－アリル－５－（クロロシルメチル）－４－ニトロ－ピラゾール（８０ｇ、粗製物）を茶褐色油状物として得た。２－アリル－４－ニトロ－ピラゾール－３－カルボニルクロリド（８０ｇ、３７１．０７ｍｍｏｌ、１当量）のＤＣＭ（５０ｍＬ）中溶液を、０℃でＮＨ３・Ｈ２Ｏ（２００ｍＬ）に滴下添加し、次いで混合物を２５℃で１時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。多少の固体が生成された。濾過した後、固体を集め、濾液をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。合わせた残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム３３０ｇ、２００ｍＬ／分で０～５０％酢酸エチル／石油エーテル濃度勾配の溶出液）により精製して、２－アリル－４－ニトロ－ピラゾール－３－カルボキサミド（２２ｇ、１１２．１５ｍｍｏｌ、収率３０．２２％）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6,400MHz) δ 8.48 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 6.0～5.92 (m, 1H), 5.24 (dd, J = 10.4 Hz, 0.8 Hz, 1H), 5.13 (dd, J = 17.2 Hz, 1.0 Hz, 1H), 4.81 (br d, J = 5.6 Hz, 2H).
２－アリル－４－アミノ－ピラゾール－３－カルボキサミドの調製（スキームＣ－１中のステップ４）
Figure 2022515775000089
２－アリル－４－ニトロ－ピラゾール－３－カルボキサミド（２２ｇ、１１２．１５ｍｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（５０ｍＬ）中溶液に、２５℃でＮＨ４Ｃｌ（１２．００ｇ、２２４．３０ｍｍｏｌ、２当量）及びＦｅ（１８．７９ｇ、３３６．４５ｍｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を８５℃で２時間撹拌した。ＴＬＣは、２－アリル－４－ニトロ－ピラゾール－３－カルボキサミドが完全に消費され、大きな極性を有する１つの主要な新規スポットが検出されることを示した。反応混合物を濾過し、濾過ケーキをＭｅＯＨ（１００ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を減圧下で濃縮した。残渣を水（５０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ及びｉ－ＰｒＯＨ（容量：容量＝３：１、１００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、２－アリル－４－アミノ－ピラゾール－３－カルボキサミド（１７．５ｇ、１０５．３１ｍｍｏｌ、収率９３．９０％）を茶褐色油状物として得た。1H NMR(DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.37 (s, 2H), 7.08 (s, 1H), 5.93～5.84 (m, 1H), 5.04 (dd, J = 10.4 Hz, 1.6 Hz, 1H), 4.96 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.88 (dd, J = 17.2, 1.6 Hz, 1H), 4.35 (s, 2H).
１－アリル－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－５，７－ジオンの調製（スキームＣ－１中のステップ５）
Figure 2022515775000090
２－アリル－４－アミノ－ピラゾール－３－カルボキサミド（１７．５ｇ、１０５．３１ｍｍｏｌ、１当量）のＭｅＣＮ（２５０ｍＬ）中溶液に、Ｎ２下１００℃で１時間かけてＣＤＩ（２２．２０ｇ、１３６．９０ｍｍｏｌ、１．３当量）を少しずつ加えた。次いで混合物を１００℃で１２時間加熱した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を１００℃で濾過し、ケーキをＭｅＣＮ（１００ｍＬ×３）で洗浄して、１－アリル－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－５，７－ジオン（１５．２ｇ、７９．０９ｍｍｏｌ、収率７５．１１％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.14 (s, 1H), 11.00 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 6.03～5.94 (m, 1H), 5.14 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.03～4.97 (m, 3H).
１－アリル－５，７－ジクロロ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジンの調製（スキームＣ－１中のステップ６）
Figure 2022515775000091
１－アリル－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－５，７－ジオン（１５ｇ、７８．０５ｍｍｏｌ、１当量）のＰＯＣｌ３（１１９．６８ｇ、７８０．５４ｍｍｏｌ、７２．５３ｍＬ、１０当量）中溶液に、Ｎ２下５０℃でＤＢＵ（７１．３０ｇ、４６８．３２ｍｍｏｌ、７０．５９ｍＬ、６当量）を滴下添加した。次いで混合物を８５℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣは、１－アリル－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－５，７－ジオンが完全に消費され、低い極性を有する１つの新規スポットが検出されていることを示した。反応混合物を室温に冷却し、０℃で氷水（２００ｍＬ）中にゆっくり注ぎ入れ、次いでＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を飽和Ｎａ２ＣＯ３で洗浄してｐＨ＝７～８にし、次いでブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、１－アリル－５，７－ジクロロ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（１７ｇ、７４．２１ｍｍｏｌ、収率９５．０８％）を茶褐色油状物として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.56 (s, 1H), 6.12～6.05 (m, 1H), 5.35-5.30 (dd, J = 4.8, 1.6 Hz, 2H), 5.21 (dd, J = 10.8 Hz, 0.8 Hz, 1H), 4.94 (dd, J = 17.2 Hz, 1.2 Hz, 1H).
１－アリル－５－クロロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－１中のステップ７）
Figure 2022515775000092
１－アリル－５，７－ジクロロ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（６．８ｇ、２９．６９ｍｍｏｌ、１当量）のジオキサン（６０ｍＬ）中溶液に、２５℃でＮａＯＨ（１Ｍ、２９．６９ｍＬ、１当量）を加えた。混合物を１００℃で１０時間撹拌した。ＴＬＣ及びＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。有機溶媒を減圧下で除去した。水溶液を２Ｎ ＨＣｌでｐＨ＝５にした。多少の固体が生成された。濾過した後に固体を集め、次いで減圧下で濃縮した。残渣を更には精製せずに次のステップに使用した。化合物１－アリル－５－クロロ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（５．５ｇ、２６．１１ｍｍｏｌ、収率８７．９７％）を淡黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 13.32 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 6.07～5.99 (m, 1H), 5.18～5.13 (m, 3H), 4.99 (d, J = 17.2 Hz, 1H).
化合物５６
１－アリル－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－１中のステップ８）
Figure 2022515775000093
１－アリル－５－クロロ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（４ｇ、１８．９９ｍｍｏｌ、１当量）及び（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（１０．０３ｇ、５６．９７ｍｍｏｌ、７．６０ｍＬ、３当量）のｔ－ＢｕＯＨ（６０ｍＬ）中溶液を、１００℃で１０時間加熱した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。溶媒を減圧下で除去した。残渣をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）に溶解し、０．００５Ｎ ＨＣｌ（５０ｍＬ×１０）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で摩砕した。濾過した後、固体を集めた。化合物１－アリル－５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（３ｇ、８．４９ｍｍｏｌ、収率４４．７０％、純度９９．０９％）を白色固体として得、５９．６ｍｇを次に使用した。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.08 (s, 1H), 9.58～7.56 (m, 3H), 7.31 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.56 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 6.01～5.97 (m, 1H), 5.11 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.03 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.96 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 4.46 (d, J = 6.0 Hz, 2H). HPLC: 99.08% (220 nm), 99.08% (215 nm), 100.00% (254 nm).MS (ESI): C15H13Cl2N5Oの質量計算値349.05, m/z 実測値350.0 [M+H]+.
２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）アセトアルデヒドの調製（スキームＣ－１中のステップ９）
Figure 2022515775000094
１－アリル－５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１ｇ、２．８６ｍｍｏｌ、１当量）及びＫ２ＯｓＯ４・２Ｈ２Ｏ（１０５．２１ｍｇ、２８５．５５μｍｏｌ、０．１当量）のＴＨＦ（２０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２０ｍＬ）中混合物を、２５℃で３０分間撹拌した。次いでＮａＩＯ４（１．８３ｇ、８．５７ｍｍｏｌ、３当量）を加え、混合物を２５℃で１．５時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。濾過した後、濾液をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を飽和Ｎａ２ＳＯ３（１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を更には精製せずに次のステップに使用した。化合物２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］アセトアルデヒド（０．８ｇ、２．２７ｍｍｏｌ、収率７９．５５％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.15 (s, 1H), 9.65 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.59～7.57 (m, 2H), 7.32 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.60 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 5.36 (s, 2H), 4.48 (d, J = 6.0 Hz, 2H).
スキームＣ－１中の化合物の調製（スキームＣ－１中のステップ１０）
Figure 2022515775000095
２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］アセトアルデヒド（４．２６ｍｍｏｌ、１当量）及びＲ’ＮＨＲ’’（５．１１～８５．２ｍｍｏｌ、１．２～２０当量）のＭｅＯＨ又はＤＣＭ（４ｍＬ／ｍｍｏｌ）中溶液に、０℃でＮａＢＨ３ＣＮ（５．１１～１２．７８ｍｍｏｌ、１．２～３当量）を少しずつ加えた。次いで混合物を０℃～８０℃で一定時間（２時間～１０時間）撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を０℃でＨ２Ｏにてクエンチし、次いでＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製した。カラム：ａ）Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｂ）Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｃ）Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｄ）Ｂｏｓｔｏｎ Ｐｒｉｍｅ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｅ）Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｆ）Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０ｍｍ×３０ｍｍ １０μｍ。移動相：ａ）［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１５％～５５％、１０分；ｂ）［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１％～５５％、８分又は１０分又は１２分；ｃ）［水（０．０４％ ＮＨ３・Ｈ２Ｏ＋１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：４０％～６０％、１０．５分。ＭｅＣＮを減圧下で除去した。水溶液を凍結乾燥で脱水した。
化合物５７
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－モルホリノエチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製（スキームＣ－１中のステップ１０）
Figure 2022515775000096
２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］アセトアルデヒド（１．５ｇ、４．２６ｍｍｏｌ、１当量）及びモルホリン（１．１１ｇ、１２．７８ｍｍｏｌ、１．１２ｍＬ、３当量）のＭｅＯＨ（１５ｍＬ）中混合物に、０℃でＮａＢＨ３ＣＮ（４０１．４９ｍｇ、６．３９ｍｍｏｌ、１．５当量）を少しずつ加え、次いで混合物を２５℃で２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。混合物を０℃で氷水（１０ｍＬ）にてクエンチし、有機溶媒を減圧下で除去した。水溶液をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×５）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。濾液を分取ＨＰＬＣ（ＨＣｌ条件カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ ２５０ｍｍ×５０ｍｍ １０μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：５％～３５％、２０分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（２－モルホリノエチル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（４６０ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ、収率２５．３６％、純度９９．３８％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.75 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.62～7.59 (m, 2H), 7.52 (s, 1H), 7.35 (dd, J = 8.0 Hz, 1.6 Hz, 1H), 4.86 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.54 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.97～3.93 (m, 2H), 3.74～3.68 (m, 2H), 3.65～3.60 (m, 2H), 3.48～3.45 (m, 2H), 3.13～3.10 (m, 2H). HPLC: 99.38% (220 nm), 99.42% (215 nm), 98.29% (254 nm). MS (ESI): C18H21Cl3N6O2の質量計算値422.10, m/z 実測値423.1 [M+H]+.
化合物５８
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－１中のステップ１０として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000097
手順により、所望の化合物（５８．７ｍｇ、１３４．５３μｍｏｌ、収率３１．５９％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.36～10.84 (m, 1H), 9.38～9.32 (m, 1H), 7.60～7.58 (m, 3H), 7.3 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.71～6.68 (m, 1H), 4.56 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.47 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.36～3.30 (m, 2H), 3.07～3.04 (m, 2H), 2.95～2.84 (m, 4H), 2.74 (s, 3H), 2.38～2.27 (m, 2H). HPLC: 99.58% (220 nm), 99.44% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C19H23Cl2N7Oの質量計算値435.13, m/z 実測値436.2 [M+H]+.
化合物５９
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（１，１－ジオキシドチオモルホリノ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－１中のステップ１０として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000098
手順により、所望の化合物（２２．３ｍｇ、４７．３１μｍｏｌ、収率１１．１１％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.62 (s, 1H), 7.5～7.54 (m, 2H), 7.31 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 4.64 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.46 (s, 2H), 3.29～3.27 (m, 6H), 3.21～3.18 (m, 4H). HPLC: 99.85% (220 nm), 94.04% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C18H20Cl2N6O3Sの質量計算値470.07, m/z 実測値471.1 [M+H]+.
化合物６０
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（４－メチル－３－オキソピペラジン－１－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－１中のステップ１０として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000099
手順により、所望の化合物（６９．１ｍｇ、１５３．４５μｍｏｌ、収率３６．０３％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.25 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.61～7.55 (m, 2H), 7.33 (dd, J = 8.4 Hz, 1.6 Hz, 1H), 6.81 (s, 1H), 4.72 (s, 2H), 4.48 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.58 (s, 2H), 3.37 (s, 4H), 3.25 (s, 2H), 2.82 (s, 3H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C19H21Cl2N7O2の質量計算値449.11, m/z 実測値450.2 [M+H]+.
化合物６１
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（メチルアミノ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－１中のステップ１０として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000100
手順により、所望の化合物（３０．５ｍｇ、８３．０５μｍｏｌ、収率１９．５０％）を灰白色固体として得た。1HNMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.25 (s, 1H), 8.45 (s, 2H), 7.64 (s, 1H), 7.57～7.54 (m, 2H), 7.28 (dd, J = 6.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.79～6.76 (m, 1H), 4.68 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.45 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.39～3.36 (m, 2H), 2.56 (s, 3H). HPLC: 98.94% (220 nm), 98.62% (215 nm), 97.58% (254 nm). MS (ESI): C15H16Cl2N6Oの質量計算値366.08, m/z 実測値367.1 [M+H]+.
化合物６２
１－［２－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）エチル］－５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンを、スキームＣ－１中のステップ１０として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000101
手順により、所望の化合物（２０．３ｍｇ、４８．８３μｍｏｌ、収率２４．４６％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.59～7.57 (m, 2H), 7.54 (s, 1H), 7.32 (dd, J = 1.2 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.58 (s, 1H), 4.47 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.42 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.86 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 0.96 (s, 9H). HPLC: 98.11% (220 nm), 98.18% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C18H22Cl2N6Oの質量計算値408.12, m/z 実測値409.1 [M+H]+.
化合物６３
１－（２－アミノエチル）－５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンを、スキームＣ－１中のステップ１０として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000102
手順により、所望の化合物（３４．９ｍｇ、９８．８１μｍｏｌ、収率３４．８０％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.30 (s, 1H), 7.89 (s, 3H), 7.66 (s, 1H), 7.58 (m, 2H), 7.32 (q, J = 2.0 Hz,1H), 6.84 (t, J = 5.2 Hz,1H), 4.65 (t, J = 6.0 Hz,2H), 4.46 (s, 2H), 3.27 (t, J = 6.0 Hz,2H). HPLC: 99.19% (220 nm), 98.71% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C14H14Cl2N6Oの質量計算値352.06, m/z 実測値353.1 [M+H]+.
化合物６４
１－（２－（４－アセチルピペラジン－１－イル）エチル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－１中のステップ１０として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000103
手順により、所望の化合物（０．２９３ｇ、５８５．０５μｍｏｌ、収率２０．６０％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.01 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.64～7.61 (m, 2H), 7.37 (m, 1H), 4.90～4.87 (m, 2H), 4.59 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 4.40～4.37 (m, 1H), 4.01～3.98 (m, 1H), 3.62 (s, 2H), 3.50～3.43 (m, 3H), 3.07～2.98 (m, 3H), 2.02 (s, 3H). HPLC: 99.87% (220 nm), 99.77% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C20H24Cl3N7O2の質量計算値463.13, m/z 実測値464.1 [M+H]+.
化合物６５
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（４－ヒドロキシピペリジン－１－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－１中のステップ１０として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000104
手順により、所望の化合物（２５．４ｍｇ、５１．６２μｍｏｌ、収率１８．１８％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.03 (s, 1H), 7.68～7.60 (m, 3H), 7.34～7.33 (m, 2H), 4.84 (s, 2H), 4.50 (d, J = 10.4 Hz, 2H), 4.01 (s, 1H), 3.94～3.90 (m, 1H), 3.33 (s, 1H), 3.17 (s, 1H), 2.98 (s, 1H), 1.98～1.87 (m, 3H), 1.73～1.60 (m, 2H), 1.17 (s, 1H). HPLC: 95.87% (220 nm), 95.31% (215 nm), 99.13% (254 nm). MS (ESI): C19H23Cl3N6O2の質量計算値436.12, m/z 実測値437.1 [M+H]+.
化合物６６
１－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エチル）ピペリジン－４－カルボキサミド塩酸塩を、スキームＣ－１中のステップ１０として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000105
手順により、所望の化合物（２４．９ｍｇ、５１．４１μｍｏｌ、収率１８．１０％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.48 (s, 1H), 7.71～7.67 (m, 1H), 7.63～7.57 (m, 2H), 7.41 (s, 1H), 7.34 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 4.84 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.50 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.58 (s, 4H), 3.03～2.88 (m, 2H), 2.39 (s, 1H), 1.92 (d, J = 13.4 Hz, 2H), 1.82～1.66 (m, 2H). HPLC: 95.87% (220 nm), 95.70% (215 nm), 94.38% (254 nm). MS (ESI): C20H24Cl3N7O2の質量計算値463.13, m/z 実測値464.2 [M+H]+.
化合物６７
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（４－（ジメチルアミノ）ピペリジン－１－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩を、スキームＣ－１中のステップ１０として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000106
手順により、所望の化合物（４２．０ｍｇ、７６．６１μｍｏｌ、収率２６．９８％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.05 (s, 1H), 10.42～10.30 (m, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.63～7.50 (m, 2H), 7.34 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.90～4.82 (m, 2H), 4.51 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.80～3.70 (m, 4H), 3.32 (s, 1H), 2.99 (s, 2H), 2.71 (d, J = 4.8 Hz, 6H), 2.27 (d, J = 14.0 Hz, 2H), 1.99 (d, J = 12.4 Hz, 2H). HPLC: 98.01% (220 nm), 97.80% (215 nm), 97.50% (254 nm). MS (ESI): C21H29Cl4N7Oの質量計算値463.17, m/z 実測値464.2 [M+H]+.
化合物６８
１－（２－（（１Ｓ，４Ｓ）－２－オキサ－５－アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン－５－イル）エチル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－１中のステップ１０として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000107
手順により、所望の化合物（２６．３ｍｇ、５５．２６μｍｏｌ、収率１９．４６％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.21～10.52 (m, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.61 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.36 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.86～4.74 (m, 2H), 4.66～4.52 (m, 4H), 4.13 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 3.78～3.66 (m, 2H), 3.54～3.47 (m, 2H), 3.13～2.96 (m, 1H), 2.28～1.95 (m, 2H). HPLC: 99.12% (220 nm), 98.61% (215 nm), 99.33% (254 nm). MS (ESI): C19H21Cl3N6O2の質量計算値434.10, m/z 実測値435.0 [M+H]+.
化合物６９
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（５－メチル－２，５－ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン－２－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩を、スキームＣ－１中のステップ１０として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000108
手順により、所望の化合物（２６．９ｍｇ、５７．２５μｍｏｌ、収率２８．８０％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.66 (s, 1H), 7.58 (s, 2H), 7.32 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.99 (s, 1H), 4.77 (s, 2H), 4.49 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.33 (s, 1H), 3.93 (s, 2H), 3.34～3.32 (m, 4H), 3.17 (s, 1H), 2.82 (s, 3H), 2.46 (s, 2H). HPLC: 95.42% (220 nm), 94.46% (215 nm), 93.04% (254 nm). MS (ESI): C20H25Cl4N7Oの質量計算値447.13, m/z 実測値448.1 [M+H]+.
化合物７０
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－１中のステップ１０として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000109
手順により、所望の化合物（３３．８ｍｇ、７１．９１μｍｏｌ、収率２５．３２％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.33～10.04 (m, 1H), 7.70 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.36 (dd, J = 8.4 Hz, 1.6 Hz, 1H), 4.68～4.65 (m, 2H), 4.56～4.50 (m, 2H), 4.41～4.34 (m, 1H), 4.26～4.22 (m, 1H), 4.13～4.07 (m, 1H), 3.78～3.76 (m, 2H), 3.68～3.64 (m, 2H). HPLC: 94.83% (220 nm), 94.29 % (215 nm), 95.83 % (254 nm). MS (ESI): C17H19Cl3N6O4の質量計算値408.09, m/z 実測値409.1 [M+H]+.
化合物７１
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（４－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩を、スキームＣ－１中のステップ１０として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000110
手順により、所望の化合物（２８．３ｍｇ、５２．３８μｍｏｌ、収率１８．４５％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.67 (s, 1H), 7.61 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.34 (dd, J = 2.4 Hz, 8.6 Hz, 1H), 4.79 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.54 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.75～3.73 (m, 10H), 3.21 (s, 2H), 2.50 (d, J = 1.6 Hz, 2H). HPLC: 99.82% (220 nm), 99.75% (215 nm), 99.72% (254 nm). MS (ESI): C20H27Cl4N7O2の質量計算値465.14, m/z 実測値466.1 [M+H]+.
化合物７２
４－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エチル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルモルホリン－２－カルボキサミド塩酸塩を、スキームＣ－１中のステップ１０として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000111
手順により、所望の化合物（２６ｍｇ、４８．１４μｍｏｌ、収率１６．９５％、純度９８．６６２％、ＨＣｌ）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.03 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.59 (s, 2H), 7.33 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.24 (s, 1H), 4.88 (s, 2H), 4.69～4.56 (m, 1H), 4.51 (s, 2H), 4.13～4.02 (m, 1H), 3.96～3.85 (m, 1H), 3.68 (s, 4H), 3.23～3.09 (m, 2H), 3.00 (s, 3H), 2.90～2.82 (m, 3H). HPLC: 98.66% (220 nm), 98.61% (215 nm), 99.05% (254 nm). MS (ESI): C21H26Cl3N7O3の質量計算値493.14, m/z 実測値494.1 [M+H]+.
化合物７３
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－（（ジメチルアミノ）メチル）モルホリノ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩を、スキームＣ－１中のステップ１０として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000112
手順により、所望の化合物（３３．７ｍｇ、６６．３３μｍｏｌ、収率２３．３６％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.37 (s, 2H), 7.68 (s, 1H), 7.60 (s, 2H), 7.34 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.87 (s, 2H), 4.52 (s, 2H), 4.30 (s, 2H), 4.07～4.05 (m, 2H), 3.90～3.88 (m, 1H), 3.40～3.24 (m, 2H), 3.20～3.16 (m, 4H), 3.79 (s, 6H). HPLC: 94.95% (220 nm), 93.86% (215 nm), 99.71% (254 nm). MS (ESI): C21H29Cl4N7O2の質量計算値479.16, m/z 実測値480.2 [M+H]+.
化合物７４
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（ピペラジン－１－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
ｔｅｒｔ－ブチル４－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エチル）ピペラジン－１－カルボキシラートの調製（スキームＣ－１中のステップ１０）
Figure 2022515775000113
２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］アセトアルデヒド（０．１８ｇ、５１１．１１μｍｏｌ、１当量）、ｔｅｒｔ－ブチルピペラジン－１－カルボキシラート（１１４．２３ｍｇ、６１３．３３μｍｏｌ、１．２当量）及びＡｃＯＨ（３．０７ｍｇ、５１．１１μｍｏｌ、２．９２μＬ、０．１当量）のＭｅＯＨ（４ｍＬ）中混合物を、２５℃で２時間撹拌した。次いでＮａＢＨ３ＣＮ（３８．５４ｍｇ、６１３．３３μｍｏｌ、１．２当量）を０℃で少しずつ加え、混合物を２５℃で２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。混合物を氷水（５ｍＬ）でクエンチし、有機溶媒を減圧下で除去した。水溶液をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を更には精製せずに次のステップに使用した。化合物ｔｅｒｔ－ブチル４－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エチル］ピペラジン－１－カルボキシラート（０．２ｇ、３８２．８３μｍｏｌ、収率７４．９０％）を淡茶褐色固体として得た。MS (ESI): C23H29Cl2N7O3の質量計算値521.17, m/z 実測値522.2 [M+H]+.
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（ピペラジン－１－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
Figure 2022515775000114
ｔｅｒｔ－ブチル４－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エチル］ピペラジン－１－カルボキシラート（０．２ｇ、３８２．８３μｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）中混合物に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、２．８７ｍＬ、３０当量）を加え、混合物を２５℃で２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。多少の固体が生成された。濾過した後、固体を集めた。固体を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５ｕ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～３５％、１０分）により精製した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（２－ピペラジン－１－イルエチル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（６０．２ｍｇ、１４２．５５μｍｏｌ、収率３７．２４％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.22～11.05 (m, 1H), 8.57～8.54 (m, 2H), 7.60～7.58 (m, 3H), 7.32 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.72 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.56 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.47 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.08～3.02 (m, 4H), 2.71～2.69 (m, 2H), 2.68～2.63 (m, 4H). HPLC: 100.00% (220 nm), 99.04% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C18H21Cl2N7Oの質量計算値421.12, m/z 実測値422.1 [M+H]+.
化合物７５
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２，３－ジヒドロキシプロピル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
Figure 2022515775000115
１－アリル－５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．１ｇ、２８５．５５μｍｏｌ、１当量）（スキームＣ－１中のステップ８）のＴＨＦ（０．５ｍＬ）及びＨ２Ｏ（０．５ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＯｓＯ４・２Ｈ２Ｏ（１０．５２ｍｇ、２８．５５μｍｏｌ、０．１当量）を加えた。３０分後、ＮＭＯ（１００．３５ｍｇ、８５６．６５μｍｏｌ、９０．４１μＬ、３当量）を加えた。混合物を２５℃で３時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。有機溶媒を減圧下で除去した。水溶液をＥｔＯＡｃ（８ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ×２）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２５％～４０％、１０分）により精製して、５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２，３－ジヒドロキシプロピル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（４８．５ｍｇ、１２６．２３μｍｏｌ、収率４４．２１％、純度１００％）を黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.05～11.03 (m, 1H), 7.62～7.54 (m, 3H), 7.32 (dd, J = 1.6 Hz, 8.0 Hz, 1H), 6.67～6.62 (m, 1H), 4.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.42 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.93～3.90 (m, 1H), 3.34～3.31 (m, 2H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 96.43% (254 nm). MS (ESI): C15H15Cl2N5O3の質量計算値383.06, m/z 実測値384.1 [M+H]+.
化合物７６
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－ヒドロキシエチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
Figure 2022515775000116
２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］アセトアルデヒド（０．１５ｇ、４２５．９２μｍｏｌ、１当量）（スキームＣ－１中のステップ９）のＭｅＯＨ（３ｍＬ）中混合物に、０℃でＮａＢＨ４（２４．１７ｍｇ、６３８．８９μｍｏｌ、１．５当量）を少しずつ加えた。次いで混合物を２５℃で１時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。混合物を０℃で飽和ＮＨ４Ｃｌ（１ｍＬ）にてクエンチし、次いで有機溶媒を減圧下で除去した。残渣をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）に溶解し、ブライン（５ｍＬ×１）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２５％～４０％、１０分）により精製した。溶出液を凍結乾燥により除去した。化合物５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－ヒドロキシエチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（５４．４ｍｇ、１５２．８５μｍｏｌ、収率３５．８９％、純度９９．５２％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.60～7.57 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.83 (s, 1H), 4.50～4.45 (m, 4H), 3.74 (t, J = 6.0 Hz, 2H). HPLC: 99.52% (220 nm), 98.91% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C14H13Cl2N5O2の質量計算値353.04, m/z 実測値354.1 [M+H]+.
化合物７７
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－１中のステップ１０）
Figure 2022515775000117
２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］アセトアルデヒド（０．１５ｇ、４２５．９２μｍｏｌ、１当量）、ｔｅｒｔ－ブチルピペラジン－１－カルボキシラート（９５．１９ｍｇ、５１１．１１μｍｏｌ、１．２当量）及びＡｃＯＨ（２．５６ｍｇ、４２．５９μｍｏｌ、２．４４μＬ、０．１当量）のＤＣＭ（５ｍＬ）中混合物を２５℃で１時間撹拌した。次いでＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（１０８．３２ｍｇ、５１１．１１μｍｏｌ、１．２当量）を加え、混合物を２５℃で３時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳ及びＨＰＬＣは、２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］アセトアルデヒドが残っていないことを示した。主に１つの新規ピークがＬＣ－ＭＳ上で示され、これは５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンであった。混合物を氷水（５ｍＬ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～４５％、１０分）により精製した。凍結乾燥した後、得られたものをＭｅＯＨ（２ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（１ｍＬ）で洗浄した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１，６－ジヒドロピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（２４．３ｍｇ、７８．３５μｍｏｌ、収率１８．４０％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.04～10.88 (m, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.60～7.58 (m, 2H), 7.34 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.78～6.71 (m, 1H), 4.49 (d, J = 6.0 Hz, 2H). HPLC: 98.28% (220 nm), 97.37% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C12H9Cl2N5Oの質量計算値309.02, m/z 実測値310.0 [M+H]+.
化合物７８
１，１’－（アザンジイルビス（エタン－２，１－ジイル））ビス（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－１中のステップ１０）
Figure 2022515775000118
２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］アセトアルデヒド（０．１ｇ、２８３．９５μｍｏｌ、１当量）及びＡｃＯＮＨ４（２１８．７３ｍｇ、２．８４ｍｍｏｌ、１０当量）のＭｅＯＨ（３ｍＬ）中混合物を、２５℃で２時間撹拌した。次いでＮａＢＨ３ＣＮ（２６．７７ｍｇ、４２５．９２μｍｏｌ、１．５当量）を０℃で少しずつ加え、混合物を２５℃で１０時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。主に５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エチルアミノ］エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンが生成された。混合物を氷水（５ｍＬ）でクエンチし、有機溶媒を減圧下で除去した。水溶液をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５ｕ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３０％～５５％、１０分）により精製した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）－メチルアミノ］－１－［２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エチルアミノ］エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（３８．１ｍｇ、５５．２７μｍｏｌ、収率１９．４６％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.31 (s, 2H), 8.74 (s, 2H), 7.64 (s, 2H), 7.60～7.57 (m, 4H), 7.31 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 2H), 6.80～6.78 (m, 2H), 4.70 (t, J = 6.0 Hz, 4H), 4.48 (d, J = 6.0 Hz, 4H), 3.47 (t, J = 5.6 Hz, 4H). HPLC: 100.00% (220 nm), 99.46% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C28H25Cl4N11O2の質量計算値687.09, m/z 実測値688.2 [M+H]+.
スキームＣ－２
Figure 2022515775000119
スキームＣ－２中の化合物を調製するための一般的手順
化合物の調製（スキームＣ－２中のステップ１）
Figure 2022515775000120
１－（Ｒ’－アミノエチル）－５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（２８３．１２μｍｏｌ、１当量）、Ｒ’’ＣＯＯＨ（２８３．１２μｍｏｌ～３６８．０６μｍｏｌ、１当量～１．３当量）、ＥＤＣＩ（３３９．７４μｍｏｌ、１．２当量）、ＨＯＢｔ（５６．６２μｍｏｌ、０．２当量）及びＤＩＥＡ（８４９．３６μｍｏｌ、１４７．９４μＬ、３当量）のＤＭＦ（３ｍＬ／ｍｍｏｌ）中混合物を、２０℃～２５℃で１０時間～１２時間撹拌した。反応混合物を０℃～２５℃で一定時間（１時間～３時間）撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物をＨ２Ｏでクエンチし、次いでＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製した。カラム：Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ又はＮａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～４５％、１０分又は２０分）。水性溶液を凍結乾燥して、所望の化合物を得た。
化合物７９
Ｎ－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エチル）－３，５－ジメチルイソオキサゾール－４－カルボキサミドの調製（スキームＣ－２中のステップ１）
Figure 2022515775000121
１－（２－アミノエチル）－５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．１ｇ、２８３．１２μｍｏｌ、１当量）、３，５－ジメチルイソオキサゾール－４－カルボン酸（３９．９６ｍｇ、２８３．１２μｍｏｌ、４８．１４μＬ、１当量）、ＥＤＣＩ（６５．１３ｍｇ、３３９．７４μｍｏｌ、１．２当量）、ＨＯＢｔ（７．６５ｍｇ、５６．６２μｍｏｌ、０．２当量）及びＤＩＥＡ（１０９．７７ｍｇ、８４９．３６μｍｏｌ、１４７．９４μＬ、３当量）のＤＭＦ（１ｍＬ）中混合物を、２５℃で１２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。濾過した後、濾液を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３０％～４５％、１０分）により精製した。化合物Ｎ－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）－メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エチル］－３，５－ジメチル－イソオキサゾール－４－カルボキサミド（２９．２ｍｇ、５８．９０μｍｏｌ、収率２０．８０％、純度９６．０７７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.96 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.57 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 7.32 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.73-6.72 (m, 1H), 4.55 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.47 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.62 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 2.41 (s, 3H), 2.18 (s, 3H). HPLC: 96.08% (220 nm), 96.58% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C20H19Cl2N7O3の質量計算値475.09, m/z 実測値476.1 [M+H]+.
化合物８０
Ｎ－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エチル）－Ｎ，３，５－トリメチルイソオキサゾール－４－カルボキサミドを、スキームＣ－２中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000122
手順により、所望の化合物（２９．５ｍｇ、６０．１６μｍｏｌ、収率４４．１９％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.86～10.33 (m, 1H), 7.63～7.49 (m, 3H), 7.34 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.56～6.39 (m, 1H), 4.61 (s, 2H), 4.50 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.87 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 2.85 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 1.98 (s, 3H). HPLC: 98.05% (220 nm), 88.25% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C21H21Cl2N7O3の質量計算値489.11, m/z 実測値490.2 [M+H]+.
化合物８１
６－クロロ－Ｎ－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エチル）－３－ヒドロキシ－Ｎ－メチルピリダジン－４－カルボキサミドを、スキームＣ－２中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000123
手順により、所望の化合物（３４．２ｍｇ、６５．３０μｍｏｌ、収率２３．９８％）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 13.40 (s, 1H), 7.61～7.51 (m, 3H), 7.35 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.25 (s, 0.5H), 6.67 (s, 0.5H), 6.57～6.42 (m, 1H), 4.73～4.60 (m, 1H), 4.58～4.52 (m, 1H), 4.51 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 3.88～3.78 (m, 1H), 3.69～3.60 (m, 2H), 2.95 (s, 2H), 2.74 (s, 1H). HPLC: 97.50% (220 nm), 96.618% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C20H17Cl3N8O3Sの質量計算値522.05, m/z 実測値523.1 [M+H]+.
化合物８２
Ｎ－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エチル）－Ｎ－メチルイソオキサゾール－４－カルボキサミドの調製を、スキームＣ－２中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000124
手順により、所望の化合物（２５．１ｍｇ、５４．３０μｍｏｌ、収率２４．９２％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.10 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 7.58 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.57～7.51 (m, 2H), 7.37～7.31 (m, 1H), 6.57～6.47 (m, 1H), 4.62 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.50 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.86 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.94 (s, 3H). HPLC: 99.73% (220 nm), 99.65% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C19H17Cl2N7O3の質量計算値461.08, m/z 実測値462.1 [M+H]+.
化合物８３
６－クロロ－Ｎ－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エチル）－３－ヒドロキシピリダジン－４－カルボキサミドの調製を、スキームＣ－２中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000125
手順により、所望の化合物（１９ｍｇ、３７．２７μｍｏｌ、収率１８．８１％）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO- d6, 400 MHz) δ 13.92 (s, 1H), 11.10 (s, 1H), 9.38 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.60～7.56 (m, 3H), 7.33～7.30 (m, 1H), 6.55 (s, 1H), 4.58 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.46 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.76 (t, J = 5.6 Hz, 2H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 96.43% (254 nm). MS (ESI): C19H15Cl3N8O3の質量計算値508.03, m/z 実測値509.1 [M+H]+.
化合物８４
３－クロロ－Ｎ－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エチル）－６－ヒドロキシピリダジン－４－カルボキサミドの調製を、スキームＣ－２中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000126
手順により、所望の化合物（３．７ｍｇ、６．０８μｍｏｌ、収率２．１５％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 13.36 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 7.60～7.57 (m, 3H), 7.32 (d, J =8.4 Hz, 1H), 6.64 (s, 1H), 6.83～6.62 (m, 1H), 4.55 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.47 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.62 (s, 2H). HPLC: 97.29% (220 nm), 97.48% (215 nm), 98.52% (254 nm). MS (ESI): C19H15Cl3N8O3の質量計算値508.03, m/z 実測値509.1 [M+H]+.
化合物８５
３，６－ジクロロ－Ｎ－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エチル）－Ｎ－メチルピリダジン－４－カルボキサミドの調製を、スキームＣ－２中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000127
手順により、所望の化合物（３５ｍｇ、６４．５５μｍｏｌ、収率１１．８５％）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.92及び7.43 (s, 1H), 7.67～7.55 (m, 3H), 7.38～7.30 (m, 1H), 6.83～6.59 (m, 1H), 4.73～4.66 (m, 1H), 4.51～4.47 (m, 3H), 3.97～3.88 (m, 1H), 3.77～3.66 (m, 1H), 3.65～3.52 (m, 1H), 3.0及び2.71 (s, 3H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C20H16Cl4N8O2の質量計算値540.02, m/z 実測値541.1 [M+H]+.
化合物８６
Ｎ－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エチル）イソオキサゾール－４－カルボキサミドの調製を、スキームＣ－２中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000128
手順により、所望の化合物（２０．４ｍｇ、４５．２４μｍｏｌ、収率１０．６５％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.26 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.79 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 7.60～7.54 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.65 (s, 1H), 4.48 (d, J = 3.6 Hz, 4H), 3.51 (d, J = 5.6 Hz, 2H). HPLC: 99.41% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C18H15Cl2N7O3の質量計算値447.06, m/z 実測値448.1 [M+H]+.
化合物８７
３－クロロ－Ｎ－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エチル）－６－ヒドロキシ－Ｎ－メチルピリダジン－４－カルボキサミドの調製を、スキームＣ－２中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000129
手順により、所望の化合物（２１．４ｍｇ、４０．８６μｍｏｌ、収率１７．０４％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 13.14 (s, 1H), 7.60～7.54 (m, 2H), 7.35 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 6.76及び6.44 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 4.68 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.59 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.50 (s, 2H), 3.89 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 3.71 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 2.92 (s, 1H), 2.76 (s, 2H). HPLC: 99.82% (220 nm), 99.84% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C20H17Cl3N8O3の質量計算値522.05, m/z 実測値523.1 [M+H]+.
スキームＣ－３
Figure 2022515775000130
スキームＣ－３中の化合物を調製するための一般的手順
化合物の調製（スキームＣ－３中のステップ１）
Figure 2022515775000131
５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（５．４２ｍｍｏｌ、１当量）、Ｒ１ＯＨ（５．４２ｍｍｏｌ～１６．２６ｍｍｏｌ、１当量～３当量）及びＰＰｈ３（５．９６ｍｍｏｌ～１０．８４ｍｍｏｌ、１．１当量～２当量）のＴＨＦ（３ｍＬ／ｍｍｏｌ～１０ｍＬ／ｍｍｏｌ）中溶液に、０℃でＤＩＡＤ（５．９６ｍｍｏｌ～１０．８４ｍｍｏｌ、１．１当量～２当量）を滴下添加した。次いで混合物を０℃～２５℃で２時間～１６時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。混合物を氷水でクエンチし、有機層を分離した。水溶液をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム２０ｇ又は４０ｇ、３５ｍＬ／分又は８０ｍＬ／分で０～１００％酢酸エチル／石油エーテル又は０～２０％ＭｅＯＨ／酢酸エチルエーテル濃度勾配の溶出液）により精製した。溶出液を減圧下で除去して、所望の生成物を得た。
化合物の調製（スキームＣ－３中のステップ２）
Figure 2022515775000132
５－クロロ－７－メトキシ－１－Ｒ１－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（４．３６ｍｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（３ｍＬ／ｍｍｏｌ～５ｍＬ／ｍｍｏｌ）又はＴＨＦ（３ｍＬ／ｍｍｏｌ～５ｍＬ／ｍｍｏｌ）及びＨ２Ｏ（３ｍＬ／ｍｍｏｌ～５ｍＬ／ｍｍｏｌ）中溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１３．０８ｍｍｏｌ～２１．８０ｍｍｏｌ、３当量～５当量）を加えた。混合物を２０℃～２５℃で２時間～１６時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。水溶液を３Ｎ ＨＣｌでｐＨ＝６にし、次いでＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、所望の生成物を得た。
化合物の調製（スキームＣ－３中のステップ３）
Figure 2022515775000133
５－クロロ－１－Ｒ１－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（３．８７ｍｍｏｌ、１当量）、Ｒ３ＮＨ２（１６２．６６ｍｍｏｌ～２１６．８８ｍｍｏｌ、１．５当量～２当量）及びＤＩＥＡ（１１．６１ｍｍｏｌ、３当量、Ｒ３ＮＨ２がＨＣｌ塩である場合のみＤＩＥＡを加えた）のｔ－ＢｕＯＨ又はｔ－ＡｍＯＨ又はＮＭＰ（３ｍＬ／ｍｍｏｌ～１０ｍＬ／ｍｍｏｌ）中混合物を、１００℃～１６０℃で３時間～４０時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製した。カラム：ａ）Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ ２５０ｍｍ×５０ｍｍ １０μｍ；ｂ）Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｃ）Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｄ）Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｅ）Ｂｏｓｔｏｎ Ｐｒｉｍｅ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｆ）Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｇ）Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １００ｍｍ×２５ｍｍ ３μｍ；ｈ）Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ３μｍ；ｉ）Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８（２５０ ５０ｍｍ １０μｍ）；ｊ）Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ １５０ ３０ｍｍ×５μｍ；ｋ）Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １５０ｍｍ×２５ｍｍ ５μｍ；ｌ）Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １５０ｍｍ×２５ｍｍ ５μｍ；ｍ）Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ３μｍ。移動相：ａ）［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１０％～７０％、１０分又は２０分；ｂ）［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１０％～７０％、１０分又は２０分；ｃ）［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１０％～８５％、８分又は２０分。溶媒を凍結乾燥下で除去して、所望の生成物を得た。
化合物８８
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
２－（２－（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）エタノールの調製（スキームＣ－３中のステップ１）
Figure 2022515775000134
５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（１ｇ、５．４２ｍｍｏｌ、１当量）、２－（２－ヒドロキシエトキシ）エタノール（１．１５ｇ、１０．８４ｍｍｏｌ、１．０３ｍＬ、２当量）及びＰＰｈ３（２．１３ｇ、８．１３ｍｍｏｌ、１．５当量）のＴＨＦ（１０ｍＬ）中溶液に、０℃でＤＩＡＤ（１．６４ｇ、８．１３ｍｍｏｌ、１．５８ｍＬ、１．５当量）を滴下添加した。混合物を２５℃で２時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物をＨ２Ｏ（１５ｍＬ）でクエンチし、次いで減圧下で濃縮して、有機溶媒を除去した。水溶液をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム２０ｇ、６０ｍＬ／分で０～６０％酢酸エチル／石油エーテル濃度勾配の溶出液）により精製した。溶出液を減圧下で除去した。化合物２－［２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ］エタノール（１．１９ｇ、４．３６ｍｍｏｌ、収率８０．５５％）を黄色油状物として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.26 (s, 1H), 4.66 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.52～4.45 (m, 1H), 4.16 (s, 3H), 3.84 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.37～3.35 (m, 4H).化合物２－［２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）エトキシ］エタノール（４４０ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ、収率２９．７８％）を黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.64 (s, 1H), 4.64～4.61 (m, 2H), 4.12 (s, 3H), 3.91 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.44～3.41 (m, 4H).
５－クロロ－１－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－３中のステップ２）
Figure 2022515775000135
２－［２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ］エタノール（１．１９ｇ、４．３６ｍｍｏｌ、１当量）及びＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（７３２．４５ｍｇ、１７．４６ｍｍｏｌ、４当量）のＴＨＦ（１０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１０ｍＬ）中混合物を、２０℃で５時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮してＴＨＦを除去し、次いで水溶液を３Ｎ ＨＣｌでｐＨ＝４に調節した。水溶液をＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ×４）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、５－クロロ－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１．３ｇ、粗製物）を黄色油状物として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.06 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 4.62 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.38 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.83～3.75 (m, 5H).
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－３中のステップ３）
Figure 2022515775000136
（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（１．３６ｇ、７．７３ｍｍｏｌ、１．０３ｍＬ、２当量）及び５－クロロ－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１ｇ、３．８７ｍｍｏｌ、１当量）のｔ－ＢｕＯＨ（６ｍＬ）中混合物を、１００℃で１６時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ ２５０ｍｍ×５０ｍｍ １０μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１０％～４０％、２０分）により精製した。水性溶液を凍結乾燥して、５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．９９ｇ、２．４５ｍｍｏｌ、収率６３．３４％、純度９８．５０％）を白色固体として得た。３０．１ｍｇを次に使用した。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.61～7.57 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 2.0, 8.4 Hz, 1H), 6.82 (s, 1H), 4.57 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.49 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.79 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.42～3.37 (m, 4H). HPLC: 97.84% (220 nm), 98.14% (215 nm), 98.77% (254 nm). MS (ESI): C16H17Cl2N5O3の質量計算値397.07, m/z 実測値398.0 [M+H]+.
化合物８９
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（４－ヒドロキシブチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000137
手順により、所望の化合物（３７８．３ｍｇ、９８６．５８μｍｏｌ、収率４６．０４％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.07 (s, 1H), 7.62～7.58 (m, 2H), 7.56 (s, 1H), 7.34 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.62 (s, 1H), 4.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.43 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.37 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.82～1.75 (m, 2H), 1.38～1.26 (m, 2H). HPLC: 99.69% (220 nm), 99.76% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C16H17Cl2N5O2の質量計算値381.08, m/z 実測値382.2 [M+H]+.
化合物９０
４－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ブチルアセタートを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000138
手順により、所望の化合物（０．０３ｇ、７０．７１μｍｏｌ、収率７７．４８％）を白色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 11.28 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.43 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 5.45 (s, 1H), 4.54 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.46 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.02 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.94 (s, 3H), 1.83～1.91 (m, 2H), 1.49～1.53 (m, 2H). HPLC: 98.46% (220 nm), 98.15% (215 nm), 98.76% (254 nm). MS (ESI): C18H19Cl2N5O3の質量計算値423.1, m/z 実測値424.0 [M+H]+.
化合物９１
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（チアゾール－２－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000139
手順により、所望の化合物（７１．４ｍｇ、１７５．３１μｍｏｌ、収率４２．６６％）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.75 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.68 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.62 ～ 7.57 (m, 2H), 7.34 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.96 (s, 2H), 4.50 (d, J = 5.6 Hz, 2H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C16H12Cl2N6OSの質量計算値406.02, m/z 実測値406.9 [M+H]+.
化合物９２
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（オキサゾール－４－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン）を、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000140
手順により、所望の化合物（２９０．５ｍｇ、７４１．４９μｍｏｌ、収率１５．４２％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO- d6, 400 MHz) δ 11.13 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.63～7.54 (m, 3H), 7.32 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.59 (s, 1H), 5.55 (s, 2H), 4.47 (d, J = 5.6 Hz, 2H). HPLC: 99.86% (220 nm), 99.88% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C16H12Cl2N6O2の質量計算値390.04, m/z 実測値391.0 [M+H]+.
化合物９３
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（５－オキソピロリジン－２－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000141
手順により、所望の化合物（６３．７ｍｇ、１５６．４１μｍｏｌ、収率４６．５２％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.64 (s, 1H), 7.61～7.58 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.68 (s, 1H), 4.50～4.46 (m, 3H), 4.42～4.36 (m, 1H), 3.95 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 2.01 (t, J = 5.6 Hz, 3H), 1.80～1.77 (m, 1H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C17H16Cl2N6O2の質量計算値406.07, m/z 実測値407.1 [M+H]+.
化合物９４
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－オキソピロリジン－１－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン）を、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000142
手順により、所望の化合物（９０．４ｍｇ、２１０．８１μｍｏｌ、収率５９．３８％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.59～7.57 (m, 2H), 7.54 (s, 1H), 7.33 (dd, J = 1.6 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.78 (m, 1H), 4.51 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.47 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.56 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.17 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.05 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 1.79～1.77 (m, 2H). HPLC: 98.24% (220 nm), 98.21% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C18H18Cl2N6O2の質量計算値420.09, m/z 実測値421.1 [M+H]+.
化合物９５
１－（２－（２－（２－ブトキシエトキシ）エトキシ）エチル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン）を、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000143
手順により、所望の化合物（７７．５ｍｇ、１５５．５０μｍｏｌ、収率２９．３７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.61～7.57 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 1.6 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 4.56 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.79 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.48～3.44 (m, 2H), 3.43～3.37 (m, 6H), 3.32 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.47～1.38 (m, 2H), 1.31～1.22 (m, 2H), 0.85 (t, J = 7.2 Hz, 3H). HPLC: 99.05% (220 nm), 97.64% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C22H29Cl2N5O4の質量計算値497.16, m/z 実測値498.2 [M+H]+.
化合物９６
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）－３，４，５－トリヒドロキシピペリジン－２－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン）を、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000144
手順により、所望の化合物（２０ｍｇ、４１．７３μｍｏｌ、収率６．６９％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.97～8.95 (m, 1H), 8.67 (br s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.60～7.58 (m, 2H), 7.32 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.88 (br s, 1H), 4.93 (br d, J = 13.2 Hz, 1H), 4.67～4.61 (m, 1H), 4.49 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.55～3.43 (m, 2H), 3.30～3.21 (m, 2H), 3.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 2.70～2.64 (m, 1H). HPLC: 94.99% (220 nm), 94.77% (215 nm), 98.18% (254 nm). MS (ESI): C18H20Cl2N6O4の質量計算値454.09, m/z 実測値455.09 [M+H]+.
化合物９７
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（１－メチル－１Ｈ－イミダゾール－２－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000145
手順により、所望の化合物（２１ｍｇ、５１．９５μｍｏｌ、収率１３．０４％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.80 (s, 1H), 7.59～7.53 (m, 3H), 7.34～7.32 (m, 1H), 7.07 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 6.75 (s, 1H), 5.71 (s, 2H), 4.47 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 3.64 (s, 3H). HPLC: 95.33% (220 nm), 94.77% (215 nm), 93.17% (254 nm). MS (ESI): C17H15Cl2N7Oの質量計算値403.07, m/z 実測値404.1 [M+H]+.
化合物９８
ｔｅｒｔ－ブチル３－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピロリジン－１－カルボキシラートを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000146
手順により、所望の化合物（２６．４ｍｇ、５４．１５μｍｏｌ、収率３６．８０％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.67 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.36 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 5.57 (s, 1H), 4.57 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 3.71～3.68 (m, 1H), 3.57～3.53 (m, 1H), 3.46～3.41 (m, 2H), 2.33～2.30 (m, 2H), 1.39 (d, J = 8.0 Hz, 9H). HPLC: 98.32% (220 nm), 98.63% (215 nm), 96.81% (254 nm). MS (ESI): C21H24Cl2N6O3の質量計算値478.13, m/z 実測値479.2 [M+H]+.
化合物９９
１－（２－（２－アミノエトキシ）エチル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
化合物１００
ｔｅｒｔ－ブチル（２－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）エチル）カルバマートを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000147
手順により、所望の化合物（３５０ｍｇ、６９７．８８μｍｏｌ、収率６２．４２％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.09 (s, 1H), 7.62～7.52 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.65 (s, 1H), 4.55 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.47 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.77 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.33 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.98 (q, J = 6.0 Hz, 2H), 1.35 (s, 9H). HPLC: 99.17% (220 nm), 99.07% (215 nm), 99.62% (254 nm). MS (ESI): C21H26Cl2N6O4の質量計算値496.14, m/z 実測値497.2 [M+H]+.
１－（２－（２－アミノエトキシ）エチル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
Figure 2022515775000148
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］エチル］カルバマート（化合物１００）（０．１ｇ、２０１．０６μｍｏｌ、１当量）のＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）中混合物を、２０℃で５時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。化合物１－［２－（２－アミノエトキシ）エチル］－５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（７０ｍｇ、１５９．７６μｍｏｌ、収率７９．４６％、純度９８．９８９％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.83 (s, 3H), 7.65～7.57 (m, 3H), 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.62 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.53 (s, 2H), 3.85 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.57 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 2.90 (d, J = 5.2 Hz, 2H). HPLC: 98.99 % (220 nm), 98.52 % (215 nm), 100.00 % (254 nm). MS (ESI): C16H19Cl3N6O2の質量計算値396.09, m/z 実測値397.1 [M+H]+.
化合物１０１
１－（（１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）メチル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000149
手順により、所望の化合物（３４．７ｍｇ、７７．１６μｍｏｌ、収率２１．３４％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.75 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.61～7.57 (m, 2H), 7.35～7.32 (m, 2H), 6.74 (s, 2H), 4.52 (d, J = 4.8 Hz, 2H). HPLC: 95.10% (220 nm), 94.99% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C15H13Cl3N8Oの質量計算値390.05, m/z 実測値391.0 [M+H]+.
化合物１０２
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（テトラヒドロフラン－２－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000150
手順により、所望の化合物（４８．８ｍｇ、１２３．４０μｍｏｌ、収率５２．３８％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.87～7.53 (m, 4H), 7.37 (dd, J = 1.6 Hz, 8.4 Hz, 1H), 4.57 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 4.55～4.50 (m, 1H), 4.36 (dd, J = 5.2 Hz, 13.6 Hz, 1H), 4.24～4.18 (m, 1H), 3.73～3.71 (m, 1H), 3.62～3.57 (m, 1H), 1.93～1.72 (m, 3H), 1.69～1.57 (m, 1H). HPLC: 99.70% (220 nm), 99.50% (215 nm), 99.40% (254 nm). MS (ESI): C17H17Cl2N5O2の質量計算値393.08, m/z 実測値394.1 [M+H]+.
化合物１０３
２－（（１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）メチル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000151
手順により、所望の化合物（２１．１ｍｇ、４５．６５μｍｏｌ、収率１２．６２％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.93～8.87 (m, 2H), 8.35 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.73～7.62 (m, 2H), 7.42 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 6.75 (s, 2H), 4.74(s, 2H). HPLC: 92.54% (220 nm), 91.99% (215 nm), 93.12% (254 nm). MS (ESI): C15H13Cl3N8Oの質量計算値390.05, m/z 実測値391.0 [M+H]+.
化合物１０４
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（（２－ヒドロキシエチル）チオ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000152
手順により、所望の化合物（１８４．５ｍｇ、４３６．２６μｍｏｌ、収率５２．１１％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.47 (s, 1H), 7.68～7.47 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.64 (s, 1H), 4.77 (s, 1H), 4.58 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.47 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.52 (q, J = 6.0 Hz, 2H), 2.93 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.56 (t, J = 6.8 Hz, 2H). HPLC: 97.97% (220 nm), 97.21% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C16H17Cl2N5O2Sの質量計算値413.05, m/z 実測値414.0 [M+H]+.
化合物１０５
１－（（１，４－ジオキサン－２－イル）メチル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000153
手順により、所望の化合物（８９．６ｍｇ、２１０．８９μｍｏｌ、収率５７．０８％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.63 (s, 3H), 7.33 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.77 (s, 1H), 4.57 (dd, J = 7.2 Hz, 13.6 Hz, 1H), 4.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.37 (dd, J = 5.2 Hz, 14.0 Hz, 1H), 3.95～3.90 (m, 1H), 3.71 (s, 2H), 3.60 (s, 1H), 3.48～3.44 (m, 2H), 3.32 (dd, J = 9.6 Hz, 11.6 Hz, 1H). HPLC: 96.56% (220 nm), 95.74% (215 nm), 98.80% (254 nm). MS (ESI): C17H17Cl2N5O3の質量計算値409.07, m/z 実測値410.0 [M+H]+.
化合物１０６
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１，３－ジメトキシプロパン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000154
手順により、所望の化合物（６８．５ｍｇ、１５８．０２μｍｏｌ、収率６２．０１％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.65～7.54 (m, 3H), 7.33 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.91 (s, 1H), 5.44 (s, 1H), 4.49 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 3.75 (t, J = 9.6 Hz, 2H), 3.63 (dd, J = 4.8 Hz, 10.0 Hz, 2H), 3.17 (s, 6H). HPLC: 95.10% (220 nm), 94.43% (215 nm), 97.70% (254 nm). MS (ESI): C17H19Cl2N5O3の質量計算値411.09, m/z 実測値412.1 [M+H]+.
化合物１０７
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１，３－ジヒドロキシプロパン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000155
手順により、所望の化合物（１７．５ｍｇ、４３．５５μｍｏｌ、収率１０．６５％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.59 (d, J = 4.4 Hz, 3H), 7.33 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.81 (s, 1H), 5.14～5.00 (m, 1H), 4.49 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 3.74 (d, J = 5.6 Hz, 4H). HPLC: 95.62 % (220 nm), 95.60 % (215 nm), 95.24 % (254 nm). MS (ESI): C15H15Cl2N5O3の質量計算値383.06, m/z 実測値384.1 [M+H]+.
化合物１０８
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イル）オキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン）を、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000156
手順により、所望の化合物（７１．１ｍｇ、１６１．５６μｍｏｌ、収率３２．１７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.99 (s, 1H), 7.69～7.64 (m, 2H), 7.62 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.62～4.56 (m, 4H), 3.81 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.68 (s, 2H), 3.45～3.43 (m, 1H), 3.29～3.22 (m, 2H), 1.75～1.68 (m, 2H), 1.30～1.21 (m, 2H). HPLC: 99.60% (220 nm), 99.70% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C19H21Cl2N5O3の質量計算値437.10, m/z 実測値438.1 [M+H]+.
化合物１０９
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（ピリジン－２－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000157
手順により、所望の化合物（５５．４ｍｇ、１１７．２１μｍｏｌ、収率２９．４９％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.58 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.94～7.92 (m, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.63～7.60 (m, 2H), 7.45～7.43 (m, 1H), 7.37～7.35 (m, 2H), 7.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.82 (s, 2H), 4.54 (d, J = 5.2 Hz, 2H). HPLC: 92.60% (220 nm), 90.01% (215 nm), 95.32% (254 nm). MS (ESI): C18H15Cl3N6Oの質量計算値400.06, m/z 実測値401.0 [M+H]+.
化合物１１０
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（ピリジン－３－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000158
手順により、所望の化合物（１３１．７ｍｇ、２８７．８５μｍｏｌ、収率３４．５０％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.77 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.28 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.05～7.89 (m, 2H), 7.67～7.56 (m, 3H), 7.37 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.79 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 4.58 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 3.36 (t, J = 6.4 Hz, 2H). HPLC: 98.74% (220 nm), 98.50% (215 nm), 99.11% (254 nm). MS (ESI): C19H17Cl3N6Oの質量計算値414.08, m/z 実測値415.0 [M+H]+.
化合物１１１
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（ピリジン－２－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000159
手順により、所望の化合物（６６．３ｍｇ、１５７．３９μｍｏｌ、収率４５．６８％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.76 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.43～8.36 (m, 1H), 7.87 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.64～7.56 (m, 2H), 7.52 (s, 1H), 7.37～7.34 (m, 1H), 4.90 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 4.57 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.57 (s, 2H). HPLC: 98.58% (220 nm), 98.30% (215 nm), 98.93% (254 nm). MS (ESI): C19H17Cl3N6Oの質量計算値, 414.08 m/z 実測値415.1 [M+H]+.
化合物１１２
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（ピラジン－２－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000160
手順により、所望の化合物（４３．３ｍｇ、９２．５７μｍｏｌ、収率３４．７４％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.56 (s, 2H), 8.49 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.65～7.58 (m, 2H), 7.46～7.30 (m, 2H), 5.83 (s, 2H), 4.54 (d, J = 4.8 Hz, 2H). HPLC: 93.80% (220 nm), 92.74% (215 nm), 99.63% (254 nm). MS (ESI): C17H14Cl3N7Oの質量計算値401.06, m/z 実測値402.0 [M+H]+.
化合物１１３
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（３－ピリジルメチル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000161
手順により、所望の化合物（８７．３ｍｇ、１９６．５１μｍｏｌ、収率５７．１３％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.80～8.75 (m, 2H), 8.19 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.88 (dd, J = 5.6 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.63～7.56 (m, 2H), 7.46～7.27 (m, 2H), 5.83 (s, 2H), 4.53 (d, J = 5.2 Hz, 2H). HPLC: 98.52% (220 nm), 91.50% (215 nm), 99.46% (254 nm). MS (ESI): C18H15Cl3N6Oの質量計算値400.06, m/z 実測値401.0 [M+H]+.
化合物１１４
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（ピリミジン－２－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000162
手順により、所望の化合物（５４．７ｍｇ、１２８．８４μｍｏｌ、収率４１．７８％）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.73 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 7.67 (d, J = 10.0 Hz, 2H), 7.62 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.45～7.35 (m, 2H), 5.85 (s, 2H), 4.57 (d, J = 4.0 Hz, 2H). HPLC: 94.74% (220 nm), 93.84% (215 nm), 98.88% (254 nm). MS (ESI): C17H13Cl2N7Oの質量計算値401.06, m/z 実測値402.0 [M+H]+.
化合物１１５
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000163
手順により、所望の化合物（４２０ｍｇ、９４７．３３μｍｏｌ、収率６８．２８％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.61～7.52 (m, 3H), 7.31 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.79 (t, J = 4.4 Hz, 1H), 4.55 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.46 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.77 (s, 2H), 3.47～3.43 (m, 4H), 3.41 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 3.34～3.30 (m, 2H). HPLC: 99.76 % (220 nm), 99.59% (215 nm), 99.72% (254 nm). MS (ESI): C18H21Cl2N5O4の質量計算値441.10, m/z 実測値442.1 [M+H]+.
化合物１１６
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000164
手順により、所望の化合物（１０６．３ｍｇ、２１４．９９μｍｏｌ、収率５３．２５％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.63～7.55 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 1.6 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.75 (s, 1H), 4.57 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.79 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.48～3.45 (m, 4H), 3.43 (s, 6H), 3.39～3.36 (m, 2H). HPLC: 98.36% (220 nm), 97.32% (215 nm), 98.29% (254 nm). MS (ESI): C20H25Cl2N5O5の質量計算値485.12, m/z 実測値486.1 [M+H]+.
化合物１１７
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（ピリミジン－２－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000165
手順により、所望の化合物（９．８ｍｇ、２１．８４μｍｏｌ、収率２０．１４％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.70 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 7.60～7.56 (m, 2H), 7.52～7.48 (m, 1H), 7.37～7.31 (m, 2H), 6.83 (s, 1H), 4.88 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 4.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.43～3.41 (m, 2H). HPLC: 92.75% (220 nm), 91.04% (215 nm), 98.20% (254 nm). MS (ESI): C18H15Cl2N7Oの質量計算値415.07, m/z 実測値416.0 [M+H]+.
化合物１１８
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（オキセタン－３－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000166
手順により、所望の化合物（８４．１ｍｇ、２０７．５５μｍｏｌ、収率２４．９７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.75 (s, 1H), 7.66～7.53 (m, 3H), 7.32 (dd, J = 1.6 Hz, 8.0 Hz, 1H), 6.59 (s, 1H), 4.72 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 4.60 (dd, J = 6.0 Hz, 7.6 Hz, 2H), 4.47 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.40 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.45～3.37 (m, 1H). HPLC: 93.84% (220 nm), 88.55% (215 nm), 98.29% (254 nm). MS (ESI): C16H15Cl2N5O2の質量計算値379.06, m/z 実測値380.0 [M+H]+.
化合物１１９
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（テトラヒドロフラン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000167
手順により、所望の化合物（７０．４ｍｇ、１７４．５９μｍｏｌ、収率２０．０１％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.60～7.57 (m, 3H), 7.32 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 5.65 (t, J = 4.4 Hz, 1H), 4.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.03～3.96 (m, 2H), 3.85～3.81 (m, 2H), 2.37～2.31 (m, 2H). HPLC: 94.30% (220 nm), 91.72% (215 nm), 90.52% (254 nm). MS (ESI): C16H15Cl2N5O2の質量計算値379.06, m/z 実測値380.1 [M+H]+.
化合物１２０
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（テトラヒドロフラン－３－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000168
手順により、所望の化合物（７２．６ｍｇ、１８１．６８μｍｏｌ、収率２１．０３％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.65～7.60 (m, 4H), 7.37 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.57 (s, 2H), 4.46～4.40 (m, 2H), 3.74～3.71 (m, 4H), 2.75～2.72 (m, 1H), 1.88～1.84 (m, 1H), 1.67～1.57 (m, 1H). HPLC: 98.66% (220 nm), 98.29% (215 nm), 98.84% (254 nm). MS (ESI): C17H17Cl2N5O2の質量計算値393.08, m/z 実測値394.0 [M+H]+.
化合物１２１
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000169
手順により、所望の化合物（１０２．６ｍｇ、２５７．２２μｍｏｌ、収率３６．３９％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.60～7.56 (m, 3H), 7.32 (dd, J = 1.6 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.65 (s, 1H), 5.13～4.96 (m, 1H), 4.47 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.97 (dd, J = 3.2 Hz, 11.2 Hz, 2H), 3.47～3.44 (m, 2H), 2.10～2.00 (m, 2H), 1.89～1.84 (m, 2H). HPLC: 98.84% (220 nm), 98.20% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C17H17Cl2N5O2の質量計算値393.08, m/z 実測値394.0 [M+H]+.
化合物１２２
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（オキセタン－２－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000170
手順により、所望の化合物（８．０ｍｇ、１９．８９μｍｏｌ、収率１１．９７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ7.65～7.53 (m, 3H), 7.32 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.60 (s, 1H), 5.02～4.95 (m, 1H), 4.76～4.69 (m, 1H), 4.65～4.56 (m, 1H), 4.51～4.41 (m, 3H), 4.36～4.29 (m, 1H), 2.65～2.57 (m, 2H). HPLC: 94.54% (220 nm), 93.72% (215 nm), 98.31% (254 nm). MS (ESI): C16H15Cl2N5O2の質量計算値379.06, m/z 実測値380.0 [M+H]+.
化合物１２３
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（３－ヒドロキシプロピル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000171
手順により、所望の化合物（２７．８ｍｇ、７５．５０μｍｏｌ、収率１９．１８％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.07 (s, 1H), 7.59～7.57 (m, 2H), 7.53 (s, 1H), 7.32 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.59～6.50 (m, 1H), 4.54～4.44 (m, 4H), 3.38 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.94～1.87 (m, 2H). HPLC: 100.00% (220 nm), 83.10% (215 nm), 98.33% (254 nm). MS (ESI): C15H15Cl2N5O2の質量計算値367.06, m/z 実測値368.0 [M+H]+.
化合物１２４
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（ピラジン－２－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000172
手順により、所望の化合物（２４．１ｍｇ、４９．９３μｍｏｌ、収率１９．１９％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.51 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.45 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.60～7.58 (m, 2H), 7.52 (s, 1H), 7.33 (dd, J = 8.4 Hz, J = 2.0 Hz, 1H), 7.01 (s, 1H), 4.81 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.49 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.31 (t, J = 7.2 Hz, 2H). HPLC: 93.79% (220 nm), 91.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C18H16Cl3N7Oの質量計算値415.07, m/z 実測値416.0 [M+H]+.
化合物１２５
５－（（３，４－ジフルオロベンジル）アミノ）－１－（オキセタン－２－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000173
手順により、所望の化合物（１８．３ｍｇ、５２．５８μｍｏｌ、収率５０．６２％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.00 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.42～7.33 (m, 2H), 7.18 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 5.03～4.93 (m, 1H), 4.79～4.69 (m, 1H), 4.66～4.57 (m, 1H), 4.48～4.42 (m, 3H), 4.36～4.30 (m, 1H), 2.63～2.58 (m, 1H), 2.42～2.37 (m, 1H). HPLC: 99.80% (220 nm), 99.76% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C16H15F2N5O2の質量計算値347.12, m/z 実測値348.2 [M+H]+.
化合物１２６
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－メトキシエチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
５－クロロ－７－メトキシ－１－（２－メトキシエチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジンの調製（スキームＣ－３中のステップ１）
Figure 2022515775000174
５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（１ｇ、５．４２ｍｍｏｌ、１当量）及び１－ブロモ－２－メトキシ－エタン（９７８．９０ｍｇ、７．０４ｍｍｏｌ、６６１．４２μＬ、１．３当量）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中混合物に、２０℃でＣｓ２ＣＯ３（３．５３ｇ、１０．８４ｍｍｏｌ、２当量）を加えた。次いで混合物を２０℃で３時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。混合物を氷水（２０ｍＬ）中にゆっくり注ぎ入れ、次いでＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ×４）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム１２ｇ、４０ｍＬ／分で０～３５％酢酸エチル／石油エーテル濃度勾配の溶出液）により精製した。溶出液を減圧下で除去した。化合物５－クロロ－７－メトキシ－２－（２－メトキシエチル）ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（０．６ｇ、２．４７ｍｍｏｌ、収率４５．６４％）を白色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.05 (s, 1H), 4.71 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.23 (s, 3H), 3.82 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.29 (s, 3H).化合物５－クロロ－７－メトキシ－１－（２－メトキシエチル）ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（０．５ｇ、２．０６ｍｍｏｌ、収率３８．０３３％）を白色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.09 (s, 1H), 4.58 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.23 (s, 3H), 3.85 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.32 (s, 3H).
５－クロロ－１－（２－メトキシエチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－３中のステップ２）
Figure 2022515775000175
５－クロロ－７－メトキシ－１－（２－メトキシエチル）ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（０．６ｇ、２．４７ｍｍｏｌ、１当量）及びＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（３１１．２５ｍｇ、７．４２ｍｍｏｌ、３当量）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）及びＨ２Ｏ（５ｍＬ）中溶液を、２０℃で３時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。有機溶媒を減圧下で除去した。水溶液を２Ｎ ＨＣｌでゆっくりｐＨ＝６～７にし、多少の固体が生成された。濾過した後に固体を集めた。次いで水溶液をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物５－クロロ－１－（２－メトキシエチル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．５ｇ、２．１９ｍｍｏｌ、収率８８．４５％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 13.30 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 4.68 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.75 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.19 (s, 3H).
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－メトキシエチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－３中のステップ３）
Figure 2022515775000176
５－クロロ－１－（２－メトキシエチル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（５００．００ｍｇ、２．１９ｍｍｏｌ、１当量）及び（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（７６９．９７ｍｇ、４．３７ｍｍｏｌ、５８３．３１μＬ、２当量）のｔ－ＢｕＯＨ（５ｍＬ）中溶液を、１００℃で３０時間加熱した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。溶媒を減圧下で除去した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ ２５０ｍｍ×５０ｍｍ １０μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２５％～５５％、１０分）により精製した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（２－メトキシエチル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（５１０．７ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ、収率６３．００％、純度９９．３４％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.63～7.59 (m, 3H), 7.35 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 4.59 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.54 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.72 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.19 (s, 3H). HPLC: 99.34% (220 nm), 99.77% (215 nm), 97.94 % (254 nm). MS (ESI): C15H15Cl2N5O2の質量計算値367.06, m/z 実測値368.0 [M+H]+.
化合物１２７
１－ベンジル－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000177
手順により、所望の化合物（１１９．５ｍｇ、２９４．９４μｍｏｌ、収率３８．４４％）を淡白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.62 (s, 1H), 7.60～7.57 (m, 2H), 7.34～7.24 (m, 4H), 7.21 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 6.90 (s, 1H), 5.62 (s, 2H), 4.49 (d, J = 5.6 Hz, 2H). HPLC: 98.79% (220 nm), 98.73% (215 nm), 99.28 % (254 nm). MS (ESI): C19H15Cl2N5Oの質量計算値399.07, m/z 実測値400.0 [M+H]+.
化合物１２８
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－２－（２－メトキシエチル）－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000178
手順により、所望の化合物（１６１．８ｍｇ、４３９．４１μｍｏｌ、収率６６．９８％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.85 (s, 1H), 7.61～7.59 (m, 2H), 7.33 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 7.10 (s, 1H), 4.49 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.38 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.80 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.22 (s, 3H). HPLC: 98.12% (220 nm), 98.18% (215 nm), 100.00 % (254 nm). MS (ESI): C15H15Cl2N5O2の質量計算値367.06, m/z 実測値368.1 [M+H]+.
化合物１２９
２－ベンジル－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000179
手順により、所望の化合物（４９．５ｍｇ、１２３．６７μｍｏｌ、収率２１．４９％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.99 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.60～7.58 (m, 2H), 7.36～7.33 (m, 2H), 7.32～7.28 (m, 4H), 6.91 (s, 1H), 5.43 (s, 2H), 4.48 (d, J=5.6 Hz, 2H). HPLC: 98.07% (220 nm), 97.98% (215 nm), 99.17 % (254 nm). MS (ESI): C19H15Cl2N5Oの質量計算値399.07, m/z 実測値400.1 [M+H]+.
化合物１３０
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－イソプロピル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000180
手順により、所望の化合物（７７．２ｍｇ、２１９．１８μｍｏｌ、収率５１．２７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.60～7.57 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 1.2 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.96 (s, 1H), 5.22～5.19 (m, 1H), 4.49 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 1.41 (s, 6H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C15H15Cl2N5Oの質量計算値351.07, m/z 実測値352.1 [M+H]+.
化合物１３１
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（５－メトキシペンチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000181
手順により、所望の化合物（７３．６ｍｇ、１７５．２０μｍｏｌ、収率１８．９７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.60～7.56 (m, 2H), 7.55 (s, 1H), 7.33 (dd, J = 2.0 Hz, 8.0 Hz, 1H), 6.71 (s, 1H), 4.48 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.41 (t, J=6.8 Hz, 2H), 3.25 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.17 (s, 3H), 1.79～1.75 (m, 2H), 1.50～1.44 (m, 2H), 1.24～1.18 (m, 2H). HPLC: 97.67% (220 nm), 97.65% (215 nm), 98.85 % (254 nm). MS (ESI): C18H21Cl2N5O2の質量計算値409.11, m/z 実測値410.0 [M+H]+.
化合物１３２
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－２－イソプロピル－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000182
手順により、所望の化合物（４８．０ｍｇ、１３６．２８μｍｏｌ、収率３１．８８％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.86 (s, 1H), 7.59～7.57 (m, 2H), 7.31 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.56～6.48 (m, 1H), 4.59～4.55 (m, 1H), 4.44 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 1.43 (d, J = 6.8 Hz, 6H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C15H15Cl2N5Oの質量計算値351.07, m/z 実測値352.1 [M+H]+.
化合物１３３
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－２－（５－メトキシペンチル）－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000183
手順により、所望の化合物（６８．３ｍｇ、１６６．４６μｍｏｌ、収率１８．０３％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.75 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.62～7.55 (m, 2H), 7.32 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.62 (s, 1H), 4.46 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.19 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.27 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.18 (s, 3H), 1.85～1.79 (m, 2H), 1.51～1.46 (m, 2H), 1.26～1.20 (m, 2H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00 % (254 nm). MS (ESI): C18H21Cl2N5O2の質量計算値409.11, m/z 実測値410.0 [M+H]+.
化合物１３４
１－（シクロブチルメチル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000184
手順により、所望の化合物（１５０ｍｇ、３９６．５６μｍｏｌ、収率５２．５８％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.63～7.59 (m, 3H), 7.35 (dd, J = 2.0 Hz, 8.0 Hz, 1H), 4.54 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 4.46 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 2.75 (td, J = 7.6 Hz, 15.2 Hz, 1H), 1.96～1.87 (m, 2H), 1.85～1.72 (m, 4H). HPLC: 96.51% (220 nm), 96.27% (215 nm), 93.88 % (254 nm). MS (ESI): C17H17Cl2N5Oの質量計算値377.08, m/z 実測値378.1 [M+H]+.
化合物１３５
２－（シクロブチルメチル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000185
手順により、所望の化合物（１４１．９ｍｇ、３７５．１４μｍｏｌ、収率５９．６９％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.12～10.37 (m, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.60～7.58 (m, 2H), 7.33 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.86 (s, 1H), 4.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.23 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 2.82～78 (m, 1H), 2.00～1.93 (m, 2H), 1.86～1.73 (m, 4H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00 % (254 nm). MS (ESI): C17H17Cl2N5Oの質量計算値377.08, m/z 実測値378.1 [M+H]+.
化合物１３６
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－メトキシエトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000186
手順により、所望の化合物（６１．５ｍｇ、１４９．１７μｍｏｌ、収率３０．３６％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.48 (s, 1H), 7.60～7.54 (m, 3H), 7.32 (dd, J = 2.0, 8.2 Hz, 1H), 6.76～6.59 (m, 1H), 4.56 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 4.47 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.78 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.46 (dd, J = 3.2 Hz, 4.4 Hz, 2H), 3.34 (dd, J = 3.8 Hz, 5.8 Hz, 2H), 3.16 (s, 3H). HPLC: 98.08% (220 nm),97.73 % (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C17H19Cl2N5O3の質量計算値411.09, m/z 実測値412.1 [M+H]+.
化合物１３７
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－２－（２－（２－メトキシエトキシ）エチル）－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000187
手順により、所望の化合物（１１７．３ｍｇ、２８４．５２μｍｏｌ、収率５４．２６％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.84 (s, 1H), 7.62～7.58 (m, 2H), 7.34 (dd, J = 2.0 Hz, 6.4 Hz, 1H), 4.49 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.37 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.81 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.52～3.48 (m, 2H), 3.38 (dd, J = 3.8, 5.8 Hz, 2H), 3.19 (s, 3H). HPLC: 99.87% (220 nm), 99.84% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C17H19Cl2N5O3の質量計算値411.09, m/z 実測値412.1 [M+H]+.
化合物１３８
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（２－メトキシエトキシ）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000188
手順により、所望の化合物（８３．７ｍｇ、２０９．２３μｍｏｌ、収率４１．６３％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.70 (s, 1H), 7.60～7.57 (m, 2H), 7.34～7.32 (m, 1H), 6.73 (s, 1H), 5.70 (s, 2H), 4.49 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.58 (t, J = 4.4 Hz, 2H), 3.36 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.18 (s, 3H). HPLC: 99.55% (220 nm), 99.51% (215 nm), 100% (254 nm). MS (ESI): C16H17Cl2N5O3の質量計算値397.07, m/z 実測値398.1 [M+H]+.
化合物１３９
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（ピリミジン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000189
手順により、所望の化合物（１０．９ｍｇ、２８．０８μｍｏｌ、収率３．８８％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.99 (s, 1H), 8.94 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 8.59 (s, 1H), 7.63～7.56 (m, 3H), 7.36 (dd, J = 2.0 Hz, 8.0 Hz, 1H), 6.74 (s, 1H), 4.52 (d, J = 5.6 Hz, 2H). HPLC: 96.85% (220 nm), 96.29% (215 nm), 99.83% (254 nm). MS (ESI): C16H11Cl2N7Oの質量計算値387.04, m/z 実測値388.1 [M+H]+.
化合物１４０
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－２－（ピリミジン－２－イル）－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000190
手順により、所望の化合物（８ｍｇ、１９．５６μｍｏｌ、収率１２．１６％）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.21 (s, 1H), 8.93 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 7.98 (s, 1H), 7.62～7.57 (m, 3H), 7.35 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.82～6.72 (m, 1H), 4.53 (d, J = 6.0 Hz, 2H). HPLC: 94.91% (220 nm), 94.48% (215 nm), 99.09% (254 nm). MS (ESI): C16H11Cl2N7Oの質量計算値387.04, m/z 実測値388.0 [M+H]+.
化合物１４１
２－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）エトキシ）酢酸を、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000191
手順により、所望の化合物（６．１ｍｇ、１４．０８μｍｏｌ、収率５．４８％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.14 (s, 1H), 10.99 (s, 1H), 8.24 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.24～7.14 (m, 1H), 4.61 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.25 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.89 (s, 2H), 3.85 (t, J = 5.6 Hz, 2H). HPLC: 95.12% (220 nm), 94.13% (215 nm), 87.14% (254 nm). MS (ESI): C16H15Cl2N5O4の質量計算値411.05, m/z 実測値412.0 [M+H]+.
化合物１４２
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000192
手順により、所望の化合物（１９．６ｍｇ、５０．１０μｍｏｌ、収率４５．４２％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.73 (s, 1H), 7.59～7.57 (m, 2H), 7.32 (dd, J = 8.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.64 (s, 1H), 6.11～6.04 (m, 1H), 4.95～4.89 (m, 4H), 4.47 (d, J = 6.0 Hz, 2H). HPLC: 93.61 % (220 nm), 91.82 % (215 nm), 97.14 % (254 nm). MS (ESI): C15H13Cl2N5O2の質量計算値365.04, m/z 実測値366.0 [M+H]+.
化合物１４３
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－２－（オキセタン－３－イル）－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000193
手順により、所望の化合物（１６ｍｇ、４１．９６μｍｏｌ、収率３６．５７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.00 (s, 1H), 7.60～7.58 (m, 2H), 7.33 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.88 (s, 1H), 5.70～5.63 (m, 1H), 4.97～4.93 (m, 2H), 4.91～4.88 (m, 2H), 4.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H). HPLC: 96.04 % (220 nm), 94.85 % (215 nm), 95.47 % (254 nm). MS (ESI): C15H13Cl2N5O2の質量計算値365.04, m/z 実測値366.0 [M+H]+.
化合物１４４
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（オキサゾール－２－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000194
手順により、所望の化合物（３４．８ｍｇ、８８．８１μｍｏｌ、収率３７．２４％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.06 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.63～7.56 (m, 2H), 7.33 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.16 (s, 1H), 6.83 (s, 1H), 5.79 (s, 2H), 4.49 (d, J = 4.6 Hz, 2H). HPLC: 99.83 % (220 nm), 99.77 % (215nm), 99.88% (254 nm). MS (ESI): C16H12Cl2N6O2の質量計算値390.04, m/z 実測値391.0 [M+H]+.
化合物１４５
４－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ブタン酸を、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000195
手順により、所望の化合物（９７．９ｍｇ、２２３．３８μｍｏｌ、収率３８．２２％、純度９０．４０７％）を白色固体として得た。生成物７．９ｍｇを次に使用した。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.10 (s, 1H), 7.62～7.51 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.62 (s, 1H), 4.52～4.39 (m, 4H), 2.15 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.02～1.95 (m, 2H). HPLC: 90.41 % (220 nm), 89.23 % (215 nm), 96.19% (254 nm). MS (ESI): C16H15Cl2N5O3の質量計算値396.06, m/z 実測値396.2 [M+H]+.
化合物１４６
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（４－（ジメチルホスホリル）ブチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000196
手順により、所望の化合物（４．４ｍｇ、９．５５μｍｏｌ、収率９．６４％、純度９６．０３７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.66～7.49 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 1.6 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.68 (s, 1H), 4.50～4.38 (m, 4H), 1.89～1.82 (m, 2H), 1.71～1.59 (m, 2H), 1.44～1.34 (m, 2H), 1.30 (d, J = 12.8 Hz, 6H).
化合物１４７
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（４－メチルモルホリン－２－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
化合物１４８
ｔｅｒｔ－ブチル２－（（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル）モルホリン－４－カルボキシラートの調製（スキームＣ－３中のステップ１～３）
Figure 2022515775000197
ｔｅｒｔ－ブチル２－［（５－クロロ－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル］モルホリン－４－カルボキシラート（１ｇ、１．０８ｍｍｏｌ、１当量）及び（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（３８０．８４ｍｇ、２．１６ｍｍｏｌ、２８８．５１μＬ、２当量）のｔ－ＢｕＯＨ（１０ｍＬ）中混合物を、１００℃で１２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ｔ－ＢｕＯＨを除去した。残渣をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈し、ＨＣｌ水溶液（２Ｎ、１０ｍＬ×６）で洗浄した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物ｔｅｒｔ－ブチル２－［［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］メチル］モルホリン－４－カルボキシラート（１ｇ、粗製物）を白色固体として得た。そして残渣（２００ｍｇ）を分取ＨＰＬＣ（中性条件カラム：Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １５０ｍｍ×２５ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：５０％～７０％、１０．５分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物ｔｅｒｔ－ブチル２－［［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］メチル］モルホリン－４－カルボキシラート（２３．４ｍｇ、４５．８８μｍｏｌ、収率４．２４％、純度９９．８７％）を白色固体として得、次に使用した。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.03 (s, 1H), 7.60～7.57 (m, 3H), 7.33 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.60 (s, 1H), 4.58～4.55 (m, 1H), 4.48～4.41 (m, 3H), 3.78～3.75 (m, 2H), 3.67～3.62 (m, 2H), 3.31～3.28 (m, 1H), 2.88 (s, 1H), 2.67 (s, 1H), 1.36 (s, 9H). HPLC: 99.87 % (220 nm), 99.88 % (215 nm), 100.00 % (254 nm). MS (ESI): C22H26Cl2N6O4の質量計算値508.14, m/z 実測値509.2 [M+H]+.
化合物１４９
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（モルホリン－２－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
Figure 2022515775000198
ｔｅｒｔ－ブチル２－［［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］メチル］モルホリン－４－カルボキシラート（２００ｍｇ、３９２．６３μｍｏｌ、１当量）のＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（２ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（１ｍＬ）中溶液を、２５℃で２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ＥｔＯＡｃを除去した。残渣を分取ＨＰＬＣ（ＨＣｌ条件カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１５％～５０％、８分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（モルホリン－２－イルメチル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（３５．４ｍｇ、７９．４２μｍｏｌ、収率２０．２３％、純度１００％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.33 (s, 2H), 7.67 (s, 1H), 7.63～7.59 (m, 2H), 7.36 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.67～4.62 (m, 1H), 4.55～4.48 (m, 3H), 4.18～4.17 (m, 1H), 3.92～3.89 (m, 1H), 3.65 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 3.21～3.12 (m, 2H), 2.90～2.87 (m, 2H). HPLC: 100.00 % (220 nm), 100.00 % (215 nm), 100.00 % (254 nm). MS (ESI): C17H19Cl3N6O2の質量計算値408.09, m/z 実測値409.1 [M+H]+.
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（４－メチルモルホリン－２－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
Figure 2022515775000199
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（モルホリン－２－イルメチル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（４００ｍｇ、８９７．４０μｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）中溶液に、０℃でＨＣＨＯ（２１８．４８ｍｇ、２．６９ｍｍｏｌ、２００．４４μＬ、純度３７％、３当量）を加えた。混合物を０℃で１０分間撹拌した。次いでＡｃＯＨ（５．３９ｍｇ、８９．７４μｍｏｌ、５．１３μＬ、０．１当量）及びＮａＢＨ３ＣＮ（４５１．１６ｍｇ、７．１８ｍｍｏｌ、８当量）を０℃で加えた。混合物を２５℃で１２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（ＨＣｌ条件カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１５％～４５％、１０分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［（４－メチルモルホリン－２－イル）メチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（４９．１ｍｇ、１０６．６９μｍｏｌ、収率１１．８９％、純度９９．９％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.33 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.68 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.40 (dd, J = 8.4 Hz, 1.2 Hz, 1H), 4.67～4.62 (m, 3H), 4.57～4.53 (m, 1H), 4.27～4.26 (m, 1H), 3.98～3.94 (m, 1H), 3.74 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 3.39 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.30 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 2.98～2.90 (m, 2H), 2.74 (m, 3H). HPLC: 99.90 % (220 nm), 99.85 % (215 nm), 99.57 % (254 nm). MS (ESI): C18H21Cl3N6O2の質量計算値422.10, m/z 実測値423.0 [M+H]+.
化合物１５０
４－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－１－イソニコチノイルピロリジン－２－カルボン酸塩酸塩の調製
１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピロリジン－２－カルボン酸の調製（スキームＣ－３中のステップ１～３）
Figure 2022515775000200
１－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－（５－クロロ－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピロリジン－２－カルボン酸（５２０ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ、１当量）及び（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（４７７．０５ｍｇ、２．７１ｍｍｏｌ、３６１．４０μＬ、２当量）の２－メチルブタン－２－オール（３ｍＬ）中溶液を、１３０℃で１０時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３０％～５０％、１２分）により精製した。混合物を凍結乾燥下で乾燥して、１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピロリジン－２－カルボン酸（１４０ｍｇ、２６７．５０μｍｏｌ、収率１９．７４％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.62 (s, 1H), 7.59～7.53 (m, 2H), 7.30 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.67～5.52 (m, 1H), 4.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.37～4.30 (m, 1H), 3.78～3.74 (m, 1H), 3.63～3.55 (m, 1H), 2.82～2.69 (m, 1H), 2.38～2.31 (m, 1H), 1.39～1.25 (m, 9H).
化合物１５１
４－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピロリジン－２－カルボン酸塩酸塩の調製（スキームＣ－３中のステップ１）
Figure 2022515775000201
１－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ピロリジン－２－カルボン酸（１４０ｍｇ、２６７．５０μｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＡｃ（３ｍＬ）中溶液に、０℃でＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、３ｍＬ）を加えた。混合物を２５℃で４時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１５％～５０％、１２分）により精製した。混合物を凍結乾燥下で乾燥して、４－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピロリジン－２－カルボン酸塩酸塩（１２０ｍｇ、２４９．４９μｍｏｌ、収率９３．２７％、純度９５．５７７％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.02 (s, 1H), 9.13 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.64～7.53 (m, 2H), 7.33 (dd, J = 2.0 Hz, J = 8.0 Hz, 1H), 6.95 (s, 1H), 5.79 (s, 1H), 4.60 (s, 1H), 4.50 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.83 (s, 1H), 3.63 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 2.65～2.63 (m, 1H), 2.62～2.58 (m, 1H). HPLC: 95.58% (220 nm), 94.08% (215 nm), 94.72% (254 nm). MS (ESI): C17H17Cl3N6O3の質量計算値422.07, m/z 実測値423.1 [M+H]+.
４－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－１－イソニコチノイルピロリジン－２－カルボン酸塩酸塩の調製（スキームＣ－３中のステップ２）
Figure 2022515775000202
４－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ピロリジン－２－カルボン酸（７０ｍｇ、１５２．２７μｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）のＤＣＭ（３ｍＬ）中溶液に、ＴＥＡ（６１．６３ｍｇ、６０９．０７μｍｏｌ、８４．７８μＬ、４当量）を加えた。次いでピリジン－４－カルボニルクロリド（７０．４８ｍｇ、３９５．９０μｍｏｌ、２．６当量、ＨＣｌ）を０℃で混合物中に少しずつ加えた。混合物を２５℃で３時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１５％～４０％、１２分）により精製した。混合物を凍結乾燥下で乾燥して、４－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－１－イソニコチノイルピロリジン－２－カルボン酸塩酸塩（２５．０ｍｇ、４３．６８μｍｏｌ、収率２８．６９％、純度９８．６８３％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.89 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 7.92 (s, 1H), 7.88～7.73 (m, 2H), 7.72～7.66 (m, 1H), 7.65～7.59 (m, 2H), 7.42～7.33 (m, 1H), 5.75～5.64 (m, 1H), 4.72 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 4.64～4.57 (m, 2H), 4.08 (s, 1H), 3.79～3.78 (m, 1H), 2.86～2.80 (m, 1H), 2.60 (d, J = 6.4 Hz, 1H). HPLC: 98.68% (220 nm), 98.30% (215 nm), 99.34% (254 nm). MS (ESI): C23H20Cl3N7O4の質量計算値527.09, m/z 実測値528.1 [M+H]+.
化合物１５２
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
化合物１５３
ｔｅｒｔ－ブチル４－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－カルボキシラートを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000203
手順により、所望の化合物ｔｅｒｔ－ブチル４－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－カルボキシラート（３３．７ｍｇ、６５．６８μｍｏｌ、収率４６．４８％、純度９６．１６３％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.59～7.57 (m, 3H), 7.32 (dd, J = 2.0 Hz, 8.0 Hz, 1H), 6.76 (s, 1H), 5.02～4.98 (m, 1H), 4.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.05 (br d, J = 13.2 Hz, 2H), 2.92～2.89 (m, 2H), 1.92～1.85 (m, 4H), 1.42 (s, 9H). HPLC: 96.16% (220 nm), 96.40% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C22H26Cl2N6O3の質量計算値492.14, m/z 実測値493.2 [M+H]+.
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
Figure 2022515775000204
化合物５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（１ｇ、２．３３ｍｍｏｌ、収率３９．６４％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.96 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.59 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.34 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.33～7.29 (m, 1H), 5.14 (s, 1H), 4.52 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.41-3.37 (m, 2H), 3.14～3.10 (m, 2H), 2.24～2.10 (m, 4H). HPLC: 96.39% (220 nm), 96.35% (215 nm), 96.48% (254 nm). MS (ESI): C17H18Cl2N6Oの質量計算値392.09, m/z 実測値393.1 [M+H]+.
化合物１５４
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（ピペリジン－３－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
ｔｅｒｔ－ブチル３－（（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル）ピペリジン－１－カルボキシラートを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000205
手順により、所望の化合物ｔｅｒｔ－ブチル３－（（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル）ピペリジン－１－カルボキシラート（４３０ｍｇ、粗製物）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.60 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 7.58 (s, 1H), 7.34 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.50 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.32 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 3.69 (s, 2H), 2.89～2.68 (m, 1H), 2.60～2.53 (m, 1H), 1.98 (s, 2H), 1.60 (d, J = 10.0 Hz, 3H), 1.30 (br s, 9H).
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（ピペリジン－３－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－３中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000206
手順により、所望の化合物５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（ピペリジン－３－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（５００ｍｇ、粗製物）を白色固体として得た。８０ｍｇ（粗製物）を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１５％～４５％、１０分）により精製して、純粋な生成物２０．９ｍｇを得、次に使用した。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.86 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.55 (br s, 1H), 7.62 (t, J = 13.2 Hz, 3H), 7.37 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.54 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.43～4.39 (m, 2H), 3.19～3.02 (m, 2H), 2.81～2.67 (m, 2H), 2.31～2.26 (m, 1H), 1.77 ( d, J = 12.8 Hz, 1H), 1.66～1.58 (m, 2H), 1.27～1.18 (m, 1H). HPLC: 99.10% (220 nm), 98.78% (215 nm), 98.43% (254 nm). MS (ESI): C18H21Cl3N6Oの質量計算値406.11, m/z 実測値407.11 [M+H]+.
化合物１５５
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（ピロリジン－３－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
ｔｅｒｔ－ブチル３－（（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル）ピロリジン－１－カルボキシラートを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000207
手順により、所望の化合物ｔｅｒｔ－ブチル３－［［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］メチル］ピロリジン－１－カルボキシラート（２２０ｍｇ、４４５．９０μｍｏｌ、収率４３．８２％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.10 (s, 1H), 7.63～7.50 (m, 3H), 7.33 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.56 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.51～4.38 (m, 4H), 3.31～3.28 (m, 2H), 3.28～3.23 (m, 1H), 3.19 (s, 1H), 3.04 (br s, 1H), 1.80 (br s, 1H), 1.58 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 1.37 (s, 9H).
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（ピロリジン－３－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
Figure 2022515775000208
ｔｅｒｔ－ブチル３－［［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］メチル］ピロリジン－１－カルボキシラート（化合物１６５）（２２０ｍｇ、４４５．９０μｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＡｃ（２ｍＬ）中溶液に、０℃でＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、２ｍＬ、１７．９４当量）を加えた。混合物を２５℃で４時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１５％～３５％、１２分）により精製した。混合物を凍結乾燥して、５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（ピロリジン－３－イルメチル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１８０ｍｇ、４１８．８７μｍｏｌ、収率９３．９４％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.06 (br s, 2H), 7.67～7.57 (m, 3H), 7.34 (dd, J = 2.4 Hz, 8.8 Hz, 1H), 4.60～4.41 (m, 4H), 3.18 (br s, 2H), 3.09～3.07 (m, 1H), 2.95～2.90 (m, 1H), 2.79～2.71 (m, 1H), 1.94～1.88 (m, 1H), 1.65～1.57 (m, 1H). HPLC: 99.50% (220 nm), 99.24% (215 nm), 99.65% (254 nm). MS (ESI): C17H19Cl3N6Oの質量計算値392.09, m/z 実測値393.1 [M+H]+.
化合物１５６
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（ピリジン－３－イルスルホニル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
Figure 2022515775000209
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（４－ピペリジル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（８０ｍｇ、１８６．１６μｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）及びＴＥＡ（７５．３５ｍｇ、７４４．６５μｍｏｌ、１０３．６５μＬ、４当量）のＤＣＭ（３ｍＬ）中混合物に、０℃でピリジン－３－スルホニルクロリド（３３．０６ｍｇ、１８６．１６μｍｏｌ、８．５３μＬ、１当量）を滴下添加した。次いで混合物を２０℃で１時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。混合物を氷水（５ｍＬ）でクエンチし、有機層を分離した。水溶液をＤＣＭ（５ｍＬ×４）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２ｍＬ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：４５％～７０％、１０分）により精製した。溶出液を凍結乾燥下で除去した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［１－（３－ピリジルスルホニル）－４－ピペリジル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（２６．７ｍｇ、４６．０７μｍｏｌ、収率２４．７５％、純度９８．５１％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.96 (s, 1H), 8.92 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 8.23～8.20 (m, 1H), 7.74～7.71 (m, 1H), 7.61～7.58 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 4.90～4.82 (m, 1H), 4.52 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.81～3.78 (m, 2H), 2.67～2.64 (m, 2H), 2.03～2.01 (m, 4H). HPLC: 98.51% (220 nm), 98.36% (215 nm), 95.74% (254 nm). MS (ESI): C22H22Cl3N7O3Sの質量計算値533.08 m/z 実測値354.2 [M+H]+.
化合物１５７
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（２－メトキシエチル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
Figure 2022515775000210
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（４－ピペリジル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン塩酸塩（６０ｍｇ、１３９．６２μｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）及び１－ブロモ－２－メトキシ－エタン（５８．２２ｍｇ、４１８．８７μｍｏｌ、３９．３４μＬ、３当量）のＣＨ３ＣＮ（１ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（５７．８９ｍｇ、４１８．８７μｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を８０℃で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。混合物を濾過した。濾液を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～４０％、１０分）により精製した。混合物を凍結乾燥して、５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［１－（２－メトキシエチル）－４－ピペリジル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１８．６ｍｇ、４０．５１μｍｏｌ、収率２９．０１％、純度９８．２９５％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.19 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.61～7.56 (m, 2H), 7.48 (s, 1H), 7.33 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 5.13～5.06 (m, 1H), 4.53 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.73～3.67 (m, 2H), 3.59 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 3.40 (s, 1H), 3.30 (s, 3H), 3.28 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.20 (s, 1H), 2.41～2.31 (m, 2H), 2.16～2.13 (m, 2H). HPLC: 98.30% (220 nm), 98.30% (215 nm), 98.14% (254 nm). MS (ESI): C20H25Cl3N6O2の質量計算値486.11, m/z 実測値451.2 [M+H]+.
化合物１５８
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－モルホリノ－２－オキソエチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000211
手順により、所望の化合物５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－モルホリノ－２－オキソエチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（１６．８ｍｇ、３７．６５μｍｏｌ、収率１７．２４％、純度９８．００５％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.64～7.59 (m, 4H), 7.36 (d, J = 6.8, 1H), 5.38 (s, 2H), 5.57 (s, 2H), 3.65～3.56 (m, 4H), 3.42 (s, 4H). HPLC: 98.01% (220 nm), 97.95% (215 nm), 98.09% (254 nm). MS (ESI): C18H18Cl2N6O3の質量計算値436.08, m/z 実測値437.1 [M+H]+.
化合物１５９
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（１－メチル－５－オキソピロリジン－３－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000212
手順により、所望の化合物５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（１－メチル－５－オキソピロリジン－３－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（５６．２ｍｇ、１３２．４５μｍｏｌ、収率３０．３３％、純度９９．２８５％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.13 (s, 1H), 7.72～7.66 (m, 2H), 7.63 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.40 (dd, J = 1.6 Hz, 8.0 Hz, 1H), 4.64 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 4.50 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 3.37～3.33 (m, 1H), 3.18～3.14 (m, 1H), 2.92～2.80 (m, 1H), 2.67 (s, 3H), 2.35～2.29 (m, 1H), 2.12～2.09 (m, 1H). HPLC: 99.29% (220 nm), 99.21% (215 nm), 98.28% (254 nm). MS (ESI): C18H18Cl2N6O2の質量計算値420.09, m/z 実測値421.1 [M+H]+.
化合物１６０
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－モルホリノエトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000213
手順により、所望の化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２－モルホリノエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（５４．９ｍｇ、１０５．６９μｍｏｌ、収率１７．３２％、純度９６．９９１％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.50 (s, 1H), 7.65～7.58 (m, 3H), 7.36 (dd, J = 1.6 Hz, 8.0 Hz, 1H), 4.63 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.56 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 3.87～3.81 (m, 4H), 3.75 (t, J = 4.4 Hz, 2H), 3.66 (t, J = 12.0 Hz, 2H), 3.27～3.20 (m, 4H), 3.01～2.92 (m, 2H). HPLC: 96.99% (220 nm), 94.02% (215 nm), 99.79% (254 nm). MS (ESI): C20H25Cl3N6O3の質量計算値466.13, m/z 実測値467.1 [M+H]+.
化合物１６１
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（ピリジン－２－イル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩を、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000214
手順により、所望の化合物５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（ピリジン－２－イル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩（４０．９ｍｇ、８５．６６μｍｏｌ、収率１４．１７％、純度９８．５１０％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.02 (s, 1H), 8.00～7.97 (m, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.60 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.34 (dd, J = 1.6 Hz, 8.0 Hz, 1H), 6.94 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 5.28～5.16 (m, 1H), 4.53 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.38 (d, J = 13.6 Hz, 2H), 3.50～3.37 (m, 2H), 2.15～2.04 (m, 4H). HPLC: 98.51% (220 nm), 98.10% (215 nm), 99.43% (254 nm). MS (ESI): C22H23Cl4N7Oの質量計算値469.12, m/z 実測値470.1 [M+H]+.
化合物１６２
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（ピリジン－４－イル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩を、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000215
手順により、所望の化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［１－（４－ピリジル）－４－ピペリジル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１７．６ｍｇ、３７．４２μｍｏｌ、収率１０．３１％、純度９５．０１％、ＨＣｌ）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 13.55 (s 1H), 8.26～8.25 (m, 2H), 7.63～7.59 (m, 3H), 7.50 (s 1H), 7.35 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 5.29～5.23 (m, 1H), 4.55 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.35 (d, J = 14.0 Hz, 2H), 3.48～3.39 (m, 2H), 2.14～2.02 (m, 4H). HPLC: 95.01 % (220 nm), 90.40 % (215 nm), 92.03 % (254 nm). MS (ESI): C22H23Cl4N7Oの質量計算値469.12, m/z 実測値470.1 [M+H]+.
化合物１６３
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（ピリジン－３－イル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩を、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000216
手順により、所望の化合物５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（ピリジン－３－イル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩（７０．０ｍｇ、１４４．４２μｍｏｌ、収率２５．０１％、純度９７．０３８％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.53 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.20～8.13 (m, 2H), 8.11～7.88 (m, 1H), 7.87～7.83 (m, 1H), 7.67 (s, 2H), 7.62 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.39 (dd, J = 1.8 Hz, 8.4 Hz, 1H), 5.20～5.12 (m, 1H), 4.62 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 4.14 (d, J = 12.8 Hz, 2H), 3.26～3.16 (m, 2H), 2.13～2.01 (m, 4H). HPLC: 97.04% (220 nm), 96.74% (215 nm), 98.80% (254 nm). MS (ESI): C22H23Cl4N7Oの質量計算値469.12, m/z 実測値470.1 [M+H]+.
化合物１６４
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（（２－ヒドロキシエチル）スルホニル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
Figure 2022515775000217
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２－ヒドロキシエチルスルファニル）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．１ｇ、２４１．３７μｍｏｌ、１当量）（スキームＣ－３中のステップ１～３）、過ヨウ素酸ナトリウム（２０６．５０ｍｇ、９６５．４６μｍｏｌ、５３．５０μＬ、４当量）及びトリクロロルテニウム（５．０１ｍｇ、２４．１４μｍｏｌ、１．６１μＬ、０．１当量）のＴＨＦ（２．５ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２．５ｍＬ）中混合物を、５０℃で３時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。水溶液をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １００ｍｍ×２５ｍｍ ３μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～５５％、１２分）により精製した。水性溶液を凍結乾燥して、５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２－ヒドロキシエチルスルホニル）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（４１ｍｇ、９１．０３μｍｏｌ、収率３７．７２％、純度９９．０９３％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.62 (s, 1H), 7.59～7.58 (m, 2H), 7.32 (dd, J = 1.6 Hz, 6.8 Hz, 1H), 6.75 (s, 1H), 4.86 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.76 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.69 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.24 (t, J = 5.6 Hz, 2H). HPLC: 99.09% (220 nm), 98.89% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C16H17Cl2N5O4Sの質量計算値445.04, m/z 実測値446.0 [M+H]+.
化合物１６５
２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－Ｎ－（メチルスルホニル）アセトアミドの調製
２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）酢酸の調製
Figure 2022515775000218
２－（５－クロロ－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）酢酸（０．３２ｇ、１．４０ｍｍｏｌ、１当量）のｔ－ＢｕＯＨ（３ｍＬ）中溶液に、（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（３６９．６６ｍｇ、２．１０ｍｍｏｌ、２８０．０４μＬ、１．５当量）を加えた。混合物を１００℃で２４時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～４５％、１２分）により精製した。ＭｅＣＮを３０℃で減圧下にて除去した。残渣を凍結乾燥で脱水した。化合物２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］酢酸（５０ｍｇ、１３５．８１μｍｏｌ、収率９．７０％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.62～7.58 (m, 3H), 7.35～7.33 (m, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.16 (s, 2H), 4.51 (d, J = 5.2 Hz, 2H).
２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－Ｎ－（メチルスルホニル）アセトアミドの調製
Figure 2022515775000219
２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］酢酸（４０ｍｇ、１０８．６４μｍｏｌ、１当量）（スキームＣ－３中のステップ１～３）のＤＣＭ（１ｍＬ）中溶液に、メタンスルホンアミド（２０．６７ｍｇ、２１７．２９μｍｏｌ、２当量）、ＤＭＡＰ（６．６４ｍｇ、５４．３２μｍｏｌ、０．５当量）及びＤＣＣ（２２．４２ｍｇ、１０８．６４μｍｏｌ、２１．９８μＬ、１当量）を加えた。混合物をＮ２下４０℃で１０時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ ３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～４５％、１２分）により精製した。ＭｅＣＮを３０℃で減圧下にて除去した。残渣を凍結乾燥で脱水した。化合物２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－Ｎ－（メチルスルホニル）アセトアミド（２１．１ｍｇ、４６．８９μｍｏｌ、収率４３．１６％、純度９８．９６０％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12.25 (s, 1H), 7.66～7.58 (m, 3H), 7.35 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.21 (s, 1H), 5.24 (s, 2H), 4.53 (s, 2H), 3.24 (s, 3H). HPLC: 98.96% (220 nm), 98.99% (215 nm), 98.78% (254 nm). MS (ESI): C15H14Cl2N6O4Sの質量計算値444.02, m/z 実測値445.0 [M+H]+.
化合物１６６
ｔｅｒｔ－ブチル４－［２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］エチル］ピペラジン－１－カルボキシラートを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000220
手順により、所望の化合物ｔｅｒｔ－ブチル４－［２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］エチル］ピペラジン－１－カルボキシラート（２０ｍｇ、３４．８０μｍｏｌ、収率９．２９％、純度９８．５８％）を白色固体として得、次に使用した。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.00 (s, 1H), 7.58～7.56 (m, 3H), 7.33～7.31 (m, 1H), 6.56 (s, 1H), 4.56 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.47 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.75 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.44 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.20 (s, 4H), 2.35 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 2.22 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 1.38 (s, 9H). HPLC: 98.58 % (220 nm), 98.17 % (215 nm), 98.39 % (254 nm). MS (ESI): C25H33Cl2N7O4の質量計算値565.20, m/z 実測値566.2 [M+H]+.
化合物１６７
ｔｅｒｔ－ブチル５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩の調製
Figure 2022515775000221
手順により、所望の化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２－ピペラジン－１－イルエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（４３．３ｍｇ、８６．１１μｍｏｌ、収率２４．３９％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.52 (s, 1H), 7.62～7.59 (m, 3H), 7.36～7.34 (m, 1H), 7.20 (s, 1H), 4.63 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.47 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.86 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.78 (t, J = 3.2 Hz, 2H), 3.64～3.53 (m, 8H), 3.24～3.17 (m, 2H). HPLC: 99.61 % (220 nm), 99.52 % (215 nm), 100.00 % (254 nm). MS (ESI): C20H27Cl4N7O2の質量計算値465.14, m/z 実測値466.1 [M+H]+.
化合物１６８
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（３－ヒドロキシプロポキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンの調製
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（３－テトラヒドロピラン－２－イルオキシプロポキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000222
手順により、所望の化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（３－テトラヒドロピラン－２－イルオキシプロポキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１８０ｍｇ、粗製物）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.02 (s, 1H), 7.59～7.56 (m, 3H), 7.32 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.74 (s, 1H), 4.55 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.47 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.41～4.40 (m, 1H), 3.75 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.66～3.60 (m, 2H), 3.54～3.49 (m, 2H), 3.24～3.18 (m, 2H), 1.65～1.60 (m, 2H), 1.59～1.50 (m, 2H), 1.45～1.34 (m, 4H).
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（３－ヒドロキシプロポキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンの調製
Figure 2022515775000223
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（３－テトラヒドロピラン－２－イルオキシプロポキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１８０ｍｇ、３６２．６２μｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（１ｍＬ）及びＨＣｌ／ＭｅＯＨ（５ｍＬ、４Ｍ）中混合物を、２５℃で１時間撹拌した。ＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮して、溶媒を除去した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ Ｃ１８ ７５ｍｍ×３０ｍｍ ３μｍ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＡＣＮ］；Ｂ％：２０％～５０％、１０．５分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（３－ヒドロキシプロポキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（４８．５ｍｇ、１１６．１６μｍｏｌ、収率３２．０３％、純度９８．７４％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.02 (s, 1H), 7.59～7.56 (m, 3H), 7.32 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.58 (s, 1H), 4.55 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.47 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.31 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 3.73 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.39 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.36～3.34 (m, 2H), 1.57～1.51 (m, 2H). HPLC: 98.74% (220 nm), 98.25% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C17H19Cl2N5O3の質量計算値411.09, m/z 実測値412.0 [M+H]+.
化合物１６９
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［３－（２－ヒドロキシエトキシ）プロピル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンの調製
１－［３－（２－ベンジルオキシエトキシ）プロピル］－５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000224
手順により、所望の化合物１－［３－（２－ベンジルオキシエトキシ）プロピル］－５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１８０ｍｇ、３５８．２９μｍｏｌ、収率４４．８２％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.62～7.54 (m, 4H), 7.33～7.29 (m, 5H), 6.63 (s, 1H), 4.49～4.46 (m, 4H), 3.53～3.49 (m, 2H), 3.39～3.36 (m, 6H), 2.01～1.98 (m, 2H).
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［３－（２－ヒドロキシエトキシ）プロピル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンの調製
Figure 2022515775000225
１－［３－（２－ベンジルオキシエトキシ）プロピル］－５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１５０ｍｇ、２９８．５７μｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）中溶液に、Ｎ２雰囲気下Ｐｄ／Ｃ（１０％、５ｍｇ）を加えた。懸濁液を脱気してＨ２で３回パージした。混合物をＨ２（１５ｐｓｉ）下２５℃で１２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を濾過して不溶物を除去し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ Ｃ１８ ７５ｍｍ×３０ｍｍ ３μｍ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＡＣＮ］；Ｂ％：２０％～５０％、１０．５分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［３－（２－ヒドロキシエトキシ）プロピル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（６．５ｍｇ、１５．４６μｍｏｌ、収率５．１８％、純度９８．０３％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.06 (s, 1H), 7.59～7.55 (m, 3H), 7.32 (dd, J = 8.4 Hz, 1.6 Hz, 1H), 6.56 (s, 1H), 4.54 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.49～4.45 (m, 4H), 3.48～3.44 (m, 2H), 3.34～3.30 (m, 4H), 2.01～1.97 (m, 2H). HPLC: 98.03% (220 nm), 97.71% (215 nm), 96.81% (254 nm). MS (ESI): C17H19Cl2N5O3の質量計算値411.09, m/z 実測値412.2 [M+H]+.
化合物１７０
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（ピリジン－３－イルオキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000226
手順により、所望の化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（３－ピリジルオキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（２０２ｍｇ、４３１．３２μｍｏｌ、収率６９．９０％、純度９９．８７３％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。５９．０ｍｇを次に使用した。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.65 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.49 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 8.12 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 7.92 (dd, J = 5.6 Hz, 8.8 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.68 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.40 (dd, J = 1.6 Hz, 8.4 Hz, 1H), 4.88 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 4.74～4.58 (m, 4H). HPLC: 99.87% (220 nm), 99.85% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C19H17Cl3N6O2の質量計算値430.07, m/z 実測値431.1 [M+H]+.
化合物１７１
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（２－（ヒドロキシメチル）オキサゾール－４－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
メチル４－（（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル）オキサゾール－２－カルボキシラート及びメチル４－（（５－クロロ－７－メトキシ－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）メチル）オキサゾール－２－カルボキシラートの調製（スキームＣ－３中のステップ１）
Figure 2022515775000227
５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（０．４ｇ、２．１７ｍｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（５ｍＬ）中溶液に、ＰＰｈ３（８５２．５９ｍｇ、３．２５ｍｍｏｌ、１．５当量）及びメチル４－（ヒドロキシメチル）オキサゾール－２－カルボキシラート（４０８．５９ｍｇ、２．６０ｍｍｏｌ、１．２当量）を加えた。次いでＤＩＡＤ（６５７．３０ｍｇ、３．２５ｍｍｏｌ、６３２．０２μＬ、１．５当量）を０℃で滴下添加した。混合物を２５℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１：１）は、反応が完結していることを示した。反応混合物をＨ２Ｏ（５ｍＬ）でクエンチし、多少の白色固体が生成された。濾過後固体を集めた。固体をＥｔＯＡｃ（２ｍＬ）で洗浄し、減圧下で濃縮した。化合物メチル４－（（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル）オキサゾール－２－カルボキシラート（０．４５ｇ、１．３９ｍｍｏｌ、収率６４．１５％）及びメチル４－（（５－クロロ－７－メトキシ－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）メチル）オキサゾール－２－カルボキシラートの混合物を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.40 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 5.71 (s, 2H), 4.16 (s, 3H), 3.84 (s, 3H). 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ8.73 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 5.72 (s, 2H), 4.11 (s, 3H), 3.86 (s, 3H).
４－（（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル）オキサゾール－２－イル）メタノール及び（４－（（５－クロロ－７－メトキシ－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）メチル）オキサゾール－２－イル）メタノールの調製
Figure 2022515775000228
メチル４－［（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル］オキサゾール－２－カルボキシラート（０．３６ｇ、１．１１ｍｍｏｌ、１当量）及びメチル４－［（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）メチル］オキサゾール－２－カルボキシラート（１．１１ｍｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）中混合物に、０℃でＮａＢＨ４（１６７．９７ｍｇ、４．４４ｍｍｏｌ、４当量）を少しずつ加えた。混合物を２５℃で１３時間撹拌した。次いでＮａＢＨ４（１６７．９７ｍｇ、４．４４ｍｍｏｌ、４当量）を０℃で再度少しずつ加えた。混合物を２５℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物（４－（（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル）オキサゾール－２－イル）メタノール（０．２７ｇ、９１３．１５μｍｏｌ、収率８２．２７％）及び（４－（（５－クロロ－７－メトキシ－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）メチル）オキサゾール－２－イル）メタノールの混合物を薄黄色油状物として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.26 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 5.60 (s, 2H), 5.40 (d, J=6.0 Hz, 2H), 4.17 (s, 3H). 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.18 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 5.64 (s, 2H), 5.44 (d, J=6.4 Hz, 2H), 4.11 (s, 3H).
５－クロロ－１－（（２－（ヒドロキシメチル）オキサゾール－４－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン及び５－クロロ－２－（（２－（ヒドロキシメチル）オキサゾール－４－イル）メチル）－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－３中のステップ２）
Figure 2022515775000229
［４－［（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル］オキサゾール－２－イル］メタノール（０．２７ｇ、９１３．１５μｍｏｌ、１当量）及び［４－［（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）メチル］オキサゾール－２－イル］メタノール（９１３．１５μｍｏｌ、１当量）のＨ２Ｏ（２ｍＬ）及びＭｅＯＨ（４ｍＬ）中混合物に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１１４．９５ｍｇ、２．７４ｍｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を２５℃で１０時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。水溶液をＨＣｌ（３Ｎ）でｐＨ＝６に調節した。次いで混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（６ｍＬ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物５－クロロ－１－（（２－（ヒドロキシメチル）オキサゾール－４－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（０．２５ｇ、粗製物）及び５－クロロ－２－（（２－（ヒドロキシメチル）オキサゾール－４－イル）メチル）－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの混合物を薄黄色油状物として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.96 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 5.62 (s, 2H), 4.41 (d, J=6.4 Hz, 2H).1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.38 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 5.45 (s, 2H), 4.44 (d, J=6.4 Hz, 2H).
（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（２－（ヒドロキシメチル）オキサゾール－４－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン）の調製（スキームＣ－３中のステップ３）
Figure 2022515775000230
５－クロロ－２－［［２－（ヒドロキシメチル）オキサゾール－４－イル］メチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（７８１．１０μｍｏｌ、１当量）及び５－クロロ－１－［［２－（ヒドロキシメチル）オキサゾール－４－イル］メチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．２２ｇ、７８１．１０μｍｏｌ、１当量）の２－メチルブタン－２－オール（５ｍＬ）中混合物に、（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（２７５．０１ｍｇ、１．５６ｍｍｏｌ、２０８．３４μＬ、２当量）を加えた。混合物を１３０℃で１０時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：２０％～３５％、１２分）により精製した。ＭｅＣＮを３０℃で減圧下にて除去した。残渣を凍結乾燥で脱水した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－２－［［２－（ヒドロキシメチル）オキサゾール－４－イル］メチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（３３．１ｍｇ、７８．５８μｍｏｌ、収率１０．０６％）を白色固体として得た。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［［２－（ヒドロキシメチル）オキサゾール－４－イル］メチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（３０．５ｍｇ、６８．９６μｍｏｌ、収率８．８３％、純度９５．２３６％）を薄黄色固体として得、２０．１ｍｇを次に使用した。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.90 (s, 1H), 7.59～7.57 (m, 3H), 7.32 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 6.70 (s, 2H), 5.51 (s, 2H), 4.47 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.41 (s, 2H). HPLC: 95.24% (220 nm), 94.04% (215 nm), 97.02% (254 nm). MS (ESI): C17H14Cl2N6O3の質量計算値420.05, m/z 実測値421.0 [M+H]+.
化合物１７２
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（２－（１－メチルピペリジン－３－イル）オキサゾール－４－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
ｔｅｒｔ－ブチル３－［４－［［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］メチル］オキサゾール－２－イル］ピペリジン－１－カルボキシラートを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000231
手順により、所望の化合物ｔｅｒｔ－ブチル３－［４－［［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］メチル］オキサゾール－２－イル］ピペリジン－１－カルボキシラート（２２０ｍｇ、３８２．９７μｍｏｌ、収率９７．９７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.82 (s, 1H), 7.61～7.54 (m, 4H), 7.34～7.30 (m, 1H), 6.66 (s, 1H), 5.50 (s, 2H), 4.47 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.90～3.72 (m, 2H), 2.91～2.85 (m, 3H), 2.03～1.99 (m, 1H), 1.70～1.66 (m, 2H), 1.46～1.40 (m, 1H), 1.35 (s, 9H).
化合物１７３
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（２－（ピペリジン－３－イル）オキサゾール－４－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
Figure 2022515775000232
ｔｅｒｔ－ブチル３－［４－［［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］メチル］オキサゾール－２－イル］ピペリジン－１－カルボキシラート（４０ｍｇ、６９．６３μｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＡｃ（１ｍＬ）及びＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、３ｍＬ）中混合物を、２５℃で２時間撹拌した。ＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。濾液を分取ＨＰＬＣ（ＨＣｌ条件カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１０％～４０％、１２分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［［２－（３－ピペリジル）オキサゾール－４－イル］メチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１７ｍｇ、３０．８６μｍｏｌ、収率４４．３３％、純度９２．７４％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.93 (s, 2H), 7.92 (s, 1H), 7.62～7.59 (m, 3H), 7.35 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 5.52 (s, 2H), 4.53 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.37～3.20 (m, 3H), 3.09～3.00 (m, 1H), 2.91～2.83 (m, 1H), 2.09～2.05 (m, 1H), 1.83～1.62 (m, 3H). HPLC: 92.74 % (220 nm), 88.05 % (215 nm), 90.43 % (254 nm). MS (ESI): C21H22Cl3N7O2の質量計算値473.11, m/z 実測値474.1 [M+H]+.
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（２－（１－メチルピペリジン－３－イル）オキサゾール－４－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
Figure 2022515775000233
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［［２－（３－ピペリジル）オキサゾール－４－イル］メチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１３０ｍｇ、２５４．５０μｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）中溶液に、０℃でホルムアルデヒド（６１．９７ｍｇ、７６３．５０μｍｏｌ、５６．８５μＬ、純度３７％、３当量）を加えた。混合物を０℃で１０分間撹拌した。次いでＡｃＯＨ（１．５３ｍｇ、２５．４５μｍｏｌ、１．４６μＬ、０．１当量）及びＮａＢＨ３ＣＮ（７９．９６ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ、５当量）を０℃で加えた。混合物を２５℃で１０時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を０℃でＨ２Ｏ（２ｍＬ）にてクエンチし、次いで減圧下で濃縮した。水溶液をＥｔＯＡｃ（２ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（ＨＣｌ条件カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１０％～４０％、１２分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［［２－（１－メチル－３－ピペリジル）オキサゾール－４－イル］メチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（５０．６ｍｇ、９３．６５μｍｏｌ、収率３６．８０％、純度９７．１４％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.54 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.66～7.64 (m, 2H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.36 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 5.53 (s, 2H), 4.57 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.40～3.33 (m, 3H), 3.13～3.04 (m, 1H), 2.91～2.87 (m, 1H), 2.75 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 2.11～2.08 (m, 1H), 1.89～1.83 (m, 2H), 1.54～1.49 (m, 1H). HPLC: 97.14 % (220 nm), 95.64 % (215 nm), 96.18 % (254 nm). MS (ESI): C22H24Cl3N7O2の質量計算値487.13, m/z 実測値488.1 [M+H]+.
化合物１７４
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（（６－（ヒドロキシメチル）ピリジン－３－イル）オキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
メチル５－［２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ］ピリジン－２－カルボキシラートの調製（スキームＣ－３中のステップ１）
Figure 2022515775000234
５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（４００ｍｇ、２．１７ｍｍｏｌ、１当量）、メチル５－（２－ヒドロキシエトキシ）ピリジン－２－カルボキシラート（５５５．５１ｍｇ、２．８２ｍｍｏｌ、１．３当量）及びＰＰｈ３（８５２．５９ｍｇ、３．２５ｍｍｏｌ、１．５当量）のＴＨＦ（５ｍＬ）中溶液に、０℃でＤＩＡＤ（６５７．３０ｍｇ、３．２５ｍｍｏｌ、６３２．０２μＬ、１．５当量）を滴下添加した。混合物を２５℃で５時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物をＨ２Ｏ（２ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム１２ｇ、４５ｍＬ／分で０～１００％酢酸エチル／メタノールの溶出液）により精製した。溶出液を減圧下で除去した。化合物メチル５－［２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ］ピリジン－２－カルボキシラート（５８０ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ、収率７３．５８％）を白色固体として得た。化合物メチル５－［２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）エトキシ］ピリジン－２－カルボキシラート（２８０ｍｇ、７６９．７５μｍｏｌ、収率３５．５２％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.30 (s, 1H), 8.25 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 8.8 Hz, 2.8 Hz, 1H), 4.93 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.63 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.07 (s, 3H), 3.83 (s, 3H).
５－［２－（５－クロロ－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ］ピリジン－２－カルボン酸の調製（スキームＣ－３中のステップ２）
Figure 2022515775000235
メチル５－［２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ］ピリジン－２－カルボキシラート（１００ｍｇ、２７４．９１μｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（１ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（３４．６１ｍｇ、８２４．７３μｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を２５℃で２時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。水溶液を３Ｎ ＨＣｌでｐＨ＝６にし、多少の白色固体が生成された。濾過した後に固体を集め、減圧下で濃縮した。化合物５－［２－（５－クロロ－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ］ピリジン－２－カルボン酸（９５ｍｇ、粗製物）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.25 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.00～7.96 (m, 2H), 7.47 (dd, J = 8.8 Hz, 2.8 Hz, 1H), 4.94 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.61 (t, J = 5.2 Hz, 2H).
化合物１７５
５－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）ピコリン酸塩酸塩の調製（スキームＣ－３中のステップ３）
Figure 2022515775000236
５－［２－（５－クロロ－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ］ピリジン－２－カルボン酸（９０ｍｇ、２６８．０９μｍｏｌ、１当量）及び（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（９４．３９ｍｇ、５３６．１９μｍｏｌ、７１．５１μＬ、２当量）の２－メチル－２－ブタノール（２ｍＬ）中混合物を、１４０℃で４時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１５％～４５％、１２分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物５－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］ピリジン－２－カルボン酸（４５．１ｍｇ、８６．７４μｍｏｌ、収率３２．３５％、純度９８．４２％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.26 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.62～7.59 (m, 2H), 7.48 (dd, J = 8.4 Hz, 2.8 Hz, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.35 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.85 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.58 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.54 (d, J = 4.4 Hz, 2H). HPLC: 98.42 % (220 nm), 97.74 % (215 nm), 99.67 % (254 nm). MS (ESI): C20H17Cl3N6O4の質量計算値474.06, m/z 実測値475.0 [M+H]+.
［５－［２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ］－２－ピリジル］メタノールの調製
Figure 2022515775000237
メチル５－［２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ］ピリジン－２－カルボキシラート（１５０ｍｇ、４１２．３７μｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（１ｍＬ）中溶液に、０℃でＤＩＢＡＬ－Ｈ（１Ｍ、２．０６ｍＬ、５当量）を滴下添加した。次いで混合物を２５℃で６時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物をＨ２Ｏ（２ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物［５－［２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ］－２－ピリジル］メタノール（１３０ｍｇ、３８７．２０μｍｏｌ、収率９３．９０％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.30 (s, 1H), 8.05～8.04 (m, 1H), 7.32～7.31 (m, 2H), 5.27 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.89 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.51 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.45 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.07 (s, 3H).
５－クロロ－１－［２－［［６－（ヒドロキシメチル）－３－ピリジル］オキシ］エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンの調製（スキームＣ－３中のステップ２）
Figure 2022515775000238
［５－［２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ］－２－ピリジル］メタノール（１３０ｍｇ、３８７．２０μｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（１ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（４８．７４ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を２５℃で２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。水溶液を３Ｎ ＨＣｌでｐＨ＝６にし、ＥｔＯＡｃ（３ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（３ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物５－クロロ－１－［２－［［６－（ヒドロキシメチル）－３－ピリジル］オキシ］エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１００ｍｇ、３１０．８３μｍｏｌ、収率８０．２８％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.08～8.07 (m, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.32 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 5.27 (s, 1H), 4.90 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.49 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.46 (d, J = 4.0 Hz, 2H).
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（（６－（ヒドロキシメチル）ピリジン－３－イル）オキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－３中のステップ３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000239
手順により、所望の化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－［［６－（ヒドロキシメチル）－３－ピリジル］オキシ］エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（８２．６ｍｇ、１６２．０１μｍｏｌ、収率５２．１２％、純度９７．６３％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.40 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.02 (dd, J = 8.0 Hz, 4.0 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.66～7.59 (m, 4H), 7.35 (dd, J = 8.0 Hz, 4.0 Hz, 1H), 4.86 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 4.73 (s, 2H), 4.63 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 4.55 (d, J = 5.2 Hz, 2H). HPLC: 97.63 % (220 nm), 96.85 % (215 nm), 97.96 % (254 nm). MS (ESI): C20H19Cl3N6O3の質量計算値460.08, m/z 実測値461.1 [M+H]+.
化合物１７６
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（１－（２－メトキシエチル）－５－オキソピロリジン－３－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000240
手順により、所望の化合物５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（１－（２－メトキシエチル）－５－オキソピロリジン－３－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（３０６ｍｇ、６４２．７５μｍｏｌ、収率５２．３４％、純度９７．７４３％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.62～7.59 (m, 3H), 7.34 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.70 (s, 1H), 4.50～4.46 (m, 4H), 3.39～3.36 (m, 3H), 3.30～3.29 (m, 2H), 3.28～3.19 (m, 4H), 2.75 (s, 1H), 2.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 2.11 (dd, J = 6.0 Hz, 16.8 Hz, 1H). HPLC: 97.74% (220 nm), 97.24% (215 nm), 99.81% (254 nm). MS (ESI): C20H22Cl2N6O3の質量計算値464.11, m/z 実測値465.1 [M+H]+.
化合物１７７
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（１－（２－ヒドロキシエチル）－５－オキソピロリジン－３－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
Figure 2022515775000241
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［［１－（２－メトキシエチル）－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］メチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（５０ｍｇ、１０７．４５μｍｏｌ、１当量）のＤＣＭ（２ｍＬ）中溶液に、０℃でＢＢｒ３（８０．７６ｍｇ、３２２．３５μｍｏｌ、３１．０６μＬ、３当量）を滴下添加した。混合物を０℃で１時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。氷水（２ｍＬ）を混合物中に加えた。混合物をＥｔＯＡｃ（５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～５０％、１２分）により精製した。混合物を凍結乾燥下で乾燥して、５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（１－（２－ヒドロキシエチル）－５－オキソピロリジン－３－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（１３．２ｍｇ、２９．２５μｍｏｌ、収率２７．２２％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.63～7.53 (m, 3H), 7.32 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 7.07～6.90 (m, 1H), 4.52～4.40 (m, 4H), 3.23～3.21 (m, 1H), 3.21～3.17 (m, 2H), 3.17～3.07 (m, 2H), 3.03～2.90 (m, 1H), 2.82 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 2.30～2.24 (m, 1H), 2.08 (dd, J = 6.0 Hz, 16.8 Hz, 1H). HPLC:97.85% (220 nm), 97.63% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C19H20Cl2N6O3の質量計算値, 450.10 m/z 実測値451.1 [M+H]+.
化合物１７８
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（オキセタン－３－イルオキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000242
手順により、所望の化合物５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（オキセタン－３－イルオキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（８３．６ｍｇ、１９２．４７μｍｏｌ、収率５２．１０％、純度９４．４５１％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.67～7.60 (m, 3H), 7.37 (dd, J = 2.0 Hz, J = 8.4 Hz, 1H), 4.60～4.54 (m, 6H), 4.54～4.49 (m, 1H), 4.28～4.25 (m, 2H), 3.76 (t, J = 5.6 Hz, 2H). HPLC: 94.45% (220 nm), 94.06% (215 nm), 95.57% (254 nm). MS (ESI): C17H17Cl2N5O3の質量計算値409.07, m/z 実測値410.0 [M+H]+.
化合物１７９
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（３－（３－ヒドロキシシクロブトキシ）プロピル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000243
手順により、所望の化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［３－（３－ヒドロキシシクロブトキシ）プロピル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（８８．５ｍｇ、２００．７４μｍｏｌ、収率３７．４８％、純度９９．４２％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.05 (s, 1H), 7.59～7.57 (m, 2H), 7.54 (s, 1H), 7.32 (dd, J = 8.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.61 (s, 1H), 4.97 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.48～4.43 (m, 4H), 3.69～3.60 (m, 1H), 3.42～3.37 (m, 1H), 3.21 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.48～2.43 (m, 2H), 1.99～1.93 (m, 2H), 1.70～1.62 (m, 2H). HPLC: 99.42% (220 nm), 99.21% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C19H21Cl2N5O3の質量計算値437.10, m/z 実測値438.1 [M+H]+.
化合物１８０
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（ピリジン－４－イル）ピロリジン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩を、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000244
手順により、所望の化合物５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（ピリジン－４－イル）ピロリジン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩（１２．５ｍｇ、２７．３０μｍｏｌ、収率１８．９１％、純度９９．６４７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ8.30～8.19 (m, 2H), 7.68～7.55 (m, 3H), 7.33 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.20 (s, 1H), 6.90 (dd, J = 6.4 Hz, J = 14.8 Hz, 2H), 5.85 (s, 1H), 4.51 (d, J=5.6 Hz, 2H), 4.07～3.97 (m, 1H), 3.96～3.89 (m, 1H), 3.72 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 2.62～2.55 (m, 2H). HPLC:99.65% (220 nm), 99.59% (215 nm), 99.68% (254 nm). MS (ESI): C21H21Cl4N7Oの質量計算値, 455.10 m/z 実測値456.1 [M+H]+.
化合物１８１
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（ピリジン－３－イルメトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000245
手順により、所望の化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（３－ピリジルメトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１８３．７ｍｇ、３７８．４９μｍｏｌ、収率５５．１０％、純度９９．２６％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ8.83 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.37 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.01～7.98 (m, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.68 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.39 (dd, J = 8.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 4.70～4.64 (m, 6H), 3.94 (t, J = 5.2 Hz, 2H). HPLC: 99.26 % (220 nm), 99.19 % (215 nm), 99.61 % (254 nm). MS (ESI): C20H19Cl3N6O2の質量計算値444.09, m/z 実測値445.1 [M+H]+.
化合物１８２
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（１－（ピリジン－２－イル）ピロリジン－２－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩の調製
ｔｅｒｔ－ブチル２－（（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル）ピロリジン－１－カルボキシラートを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000246
手順により、所望の化合物ｔｅｒｔ－ブチル２－［［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］メチル］ピロリジン－１－カルボキシラート（０．１３ｇ、２６３．４９μｍｏｌ、収率２３．３１％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.66～7.61 (m, 3H), 7.37 (s, 1H), 4.58 (s, 2H), 4.45～4.43 (m, 2H), 4.17～4.15 (m, 1H), 3.35～3.20 (m, 2H), 1.76～1.73 (m, 4H), 1.23 (m, 9H).
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（ピロリジン－２－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
Figure 2022515775000247
ｔｅｒｔ－ブチル２－［［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］メチル］ピロリジン－１－カルボキシラート（０．１３ｇ、２６３．４９μｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＡｃ（１ｍＬ）中溶液に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（２ｍＬ、４Ｎ）を加えた。混合物を２５℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（ピロリジン－２－イルメチル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．１ｇ、粗製物）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.35 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.62～7.60 (m, 3H), 7.37～7.34 (m, 1H), 4.83～4.78 (m, 1H), 4.73～4.59 (m, 1H), 4.55 (s, 2H), 3.94～3.90 (m, 1H), 3.31～3.14 (m, 2H), 1.99～1.86 (m, 4H).
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（１－（ピリジン－２－イル）ピロリジン－２－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩の調製
Figure 2022515775000248
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（ピロリジン－２－イルメチル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．１ｇ、２３２．７０μｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）中溶液に、２－フルオロピリジン（４５．１９ｍｇ、４６５．４１μｍｏｌ、３９．９９μＬ、２当量）及びＫ２ＣＯ３（９６．４９ｍｇ、６９８．１１μｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を１００℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（ＨＣｌ条件カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％～４０％、１２分）により精製した。ＭｅＣＮを３０℃で減圧下にて除去した。残渣を凍結乾燥で脱水した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［［１－（２－ピリジル）ピロリジン－２－イル］メチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（３７．０ｍｇ、７２．５５μｍｏｌ、収率３１．１８％、純度９９．３７４％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.07 (s, 3H), 7.69～7.63 (m, 3H), 7.37 (s, 1H), 7.23 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 4.59 (s, 5H), 3.64 (s, 1H), 3.43 (s, 1H), 1.97 (s, 3H), 1.76 (s, 1H). HPLC: 99.37% (220 nm), 99.41% (215 nm), 99.66% (254 nm). MS (ESI): C22H23Cl4N7Oの質量計算値469.12, m/z 実測値470.1 [M+H]+.
化合物１８３
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（（１－（ジメチルアミノ）－３－メトキシプロパン－２－イル）オキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
ｔｅｒｔ－ブチル（２－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）－３－メトキシプロピル）（メチル）カルバマートを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000249
手順により、所望の化合物ｔｅｒｔ－ブチル（２－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）－３－メトキシプロピル）（メチル）カルバマート（０．１３ｇ、２３４．０４μｍｏｌ、収率５４．０７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.60～7.58 (m, 3H), 7.34 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.55～4.52 (m, 4H), 3.90～3.77 (m, 1H), 3.56～3.51 (m, 1H), 3.25～3.22 (m, 3H), 3.21 (s, 3H), 3.18～3.00 (m, 2H), 2.64 (s, 3H), 1.34 (s, 9H).
化合物１８４
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（ピロリジン－２－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
Figure 2022515775000250
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］－３－メトキシ－プロピル］－Ｎ－メチル－カルバマート（０．１３ｇ、２３４．０４μｍｏｌ、１当量）のＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（２ｍＬ）中溶液を、２５℃で１０時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濾過した。多少の薄黄色固体が生成された。濾過した後に固体を集めた。化合物５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（（１－メトキシ－３－（メチルアミノ）プロパン－２－イル）オキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（２８．５ｍｇ、５５．７５μｍｏｌ、収率２３．８２％、純度９６．２０３％、ＨＣｌ）を薄黄色固体として得、次に使用した。化合物５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（（１－メトキシ－３－（メチルアミノ）プロパン－２－イル）オキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（８０ｍｇ、ＨＣｌ）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.68 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.63～7.59 (m, 3H), 7.40 (s, 1H), 7.34 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.67～4.59 (m, 2H), 4.53 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.96～3.92 (m, 2H), 3.80 (s, 1H), 3.32 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 3.19 (s, 3H), 3.04～3.02 (m, 1H), 3.93～3.90 (m, 1H), 2.55 (s, 3H). HPLC: 96.20% (220 nm), 96.13% (215 nm), 95.56% (254 nm). MS (ESI): C19H25Cl3N6O3の質量計算値454.13, m/z 実測値455.1 [M+H]+.
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（（１－（ジメチルアミノ）－３－メトキシプロパン－２－イル）オキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
Figure 2022515775000251
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－［１－（メトキシメチル）－２－（メチルアミノ）エトキシ］エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（８０ｍｇ、１７５．６９μｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（１ｍＬ）中溶液に、０℃でホルムアルデヒド（４２．７７ｍｇ、５２７．０８μｍｏｌ、３９．２４μＬ、３当量）及びＡｃＯＨ（１．０６ｍｇ、１７．５７μｍｏｌ、１．００μＬ、０．１当量）を加えた。次いでＮａＢＨ３ＣＮ（３３．１２ｍｇ、５２７．０８μｍｏｌ、３当量）を０℃で少しずつ加えた。混合物を２５℃で３時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。Ｈ２Ｏ（１ｍＬ）を反応混合物に加えた。混合物を減圧下で濾過した。濾液を分取ＨＰＬＣ（ＨＣｌ条件カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％～４５％、１２分）により精製した。ＭｅＣＮを３０℃で減圧下にて除去した。残渣を凍結乾燥で脱水した。化合物５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（（１－（ジメチルアミノ）－３－メトキシプロパン－２－イル）オキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（４０．１ｍｇ、７９．２８μｍｏｌ、収率４５．１２％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.54 (s, 1H), 7.61～7.59 (m, 3H), 7.33 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.18 (s, 1H), 4.62～4.60 (m, 2H), 4.50 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 4.00～3.93 (m, 1H), 3.92 (s, 2H), 3.34～3.29 (m, 2H), 3.20 (s, 3H), 3.14～3.13 (m, 2H), 3.71 (s, 6H). HPLC: 99.40% (220 nm), 99.24% (215 nm), 99.04% (254 nm). MS (ESI): C20H27Cl3N6O3の質量計算値468.14, m/z 実測値469.1 [M+H]+.
化合物１８５
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－メトキシ－１－（ピリジン－３－イル）エトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000252
手順により、所望の化合物５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－メトキシ－１－（ピリジン－３－イル）エトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（９８．１ｍｇ、１８５．０２μｍｏｌ、収率３８．０７％、純度９９．１７２％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.80 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.29 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.96～7.94 (m, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.65～7.63 (m, 3H), 7.39～7.37 (m, 1H), 4.78 (t, J = 4.0 Hz, 1H), 4.68～4.63 (m, 1H), 4.59～4.58 (m, 2H), 4.56～4.54 (m, 1H), 3.94～3.93 (m, 1H), 3.84～3.82 (m, 1H), 4.54～4.44 (m, 2H), 3.17 (s, 3H). HPLC: 99.17% (220 nm), 99.03% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C22H23Cl3N6O3の質量計算値488.11, m/z 実測値489.1 [M+H]+.
化合物１８６
メチル２－（２－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）エトキシ）アセタートの調製
２－（２－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）エトキシ）アセトアルデヒドの調製
Figure 2022515775000253
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エトキシ］エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．６ｇ、１．３６ｍｍｏｌ、１当量）（スキームＣ－３中のステップ１～３）のＤＣＭ（３０ｍＬ）中溶液に、０℃でＤＭＰ（２．３０ｇ、５．４３ｍｍｏｌ、１．６８ｍＬ、４当量）を少しずつ加えた。混合物を２５℃で３２時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：メタノール＝１０：１、Ｒｆ＝０．５８）は、反応が完結していることを示した。反応混合物を０℃でＨ２Ｏ（１０ｍＬ）にてクエンチした。有機層を分離し、次いで水溶液をＤＣＭ（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物２－［２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］エトキシ］アセトアルデヒド（２３０ｍｇ、粗製物）を黄色油状物として得た。
化合物１８７
２－（２－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）エトキシ）酢酸）の調製
Figure 2022515775000254
２－［２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］エトキシ］アセトアルデヒド（２３０ｍｇ、５２２．４０μｍｏｌ、１当量）及び２－メチルブタ－２－エン（７３２．７４ｍｇ、１０．４５ｍｍｏｌ、１．１１ｍＬ、２０当量）のＨ２Ｏ（１ｍＬ）、ＴＨＦ（１ｍＬ）及びｔ－ＢｕＯＨ（１ｍＬ）中溶液に、０℃で亜塩素酸ナトリウム（５１．９７ｍｇ、５７４．６３μｍｏｌ、１．１当量）を少しずつ加えた。混合物を２０℃で３時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応がほぼ完結していることを示した。反応混合物を２０℃でＨ２Ｏ（５ｍＬ）にてクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ８μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：２５％～４０％、１０分）により精製した。水性溶液を凍結乾燥した。化合物２－［２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］エトキシ］酢酸（３１ｍｇ、６５．５８μｍｏｌ、収率１２．５５％、純度９６．５２７％）を茶褐色固体として得た。１０．８ｍｇを次に使用した。所望の化合物（３１ｍｇ、６５．５８μｍｏｌ、収率１２．５５％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.66～7.61 (m, 3H), 7.46 (s, 1H), 7.37 (dd, J = 1.6 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.75 (s, 1H), 5.55 (s, 1H), 4.86 (s, 1H), 4.73 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 4.62 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.45 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 3.83 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.40 (t, J = 4.4 Hz, 4H). HPLC: 96.53% (220 nm), 95.61% (215 nm), 94.88% (254 nm). MS (ESI): C18H19Cl2N5O5の質量計算値455.08, m/z 実測値456.1 [M+H]+.
メチル２－（２－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）エトキシ）アセタートの調製
Figure 2022515775000255
２－［２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］エトキシ］酢酸（２０ｍｇ、４３．８３μｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中溶液に、０℃でＳＯＣｌ２（２６．０７ｍｇ、２１９．１６μｍｏｌ、１５．９０μＬ、５当量）を滴下添加した。混合物を２５℃で５時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ３μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２５％～５０％、１０分）により精製した。水性溶液を凍結乾燥して、メチル２－［２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］エトキシ］アセタート（３．６ｍｇ、７．３７μｍｏｌ、収率１６．８１％、純度９６．２４４％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.61～7.56 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 1.6 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.70 (s, 1H), 4.62～4.53 (m, 2H), 4.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.07 (s, 1H), 4.04 (s, 1H), 3.86 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 3.79 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 3.62 (s, 2H), 3.60 (s, 2H), 3.50 (s, 3H). HPLC: 96.24% (220 nm), 96.15% (215 nm), 96.33% (254 nm). MS (ESI): C19H21Cl2N5O5の質量計算値469.09, m/z 実測値470.1 [M+H]+.
化合物１８８
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（（１，１－ジオキシドテトラヒドロ－２Ｈ－チオピラン－４－イル）オキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－チオピラン－４－イル）オキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000256
手順により、所望の化合物５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－チオピラン－４－イル）オキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（７２ｍｇ、１５６．２３μｍｏｌ、収率２７．３２％、純度９８．５９１％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.60～7.56 (m, 3H), 7.33 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.68 (s, 1H), 4.55 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.78 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.27 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 2.61～2.55 (m, 2H), 2.40～2.37 (m, 2H), 1.93～1.86 (m, 2H), 1.54～1.46 (m, 2H). HPLC: 98.59% (220 nm), 98.28% (215 nm), 94.36% (254 nm). MS (ESI): C19H21Cl2N5O2Sの質量計算値, 453.08 m/z 実測値454.1 [M+H]+.
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（（１，１－ジオキシドテトラヒドロ－２Ｈ－チオピラン－４－イル）オキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
Figure 2022515775000257
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（２－テトラヒドロチオピラン－４－イルオキシエチル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（３０ｍｇ、６６．０３μｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（３ｍＬ）及びＨ２Ｏ（３ｍＬ）中混合物に、ＲｕＣｌ３（１．３７ｍｇ、６．６０μｍｏｌ、０．４４μＬ、０．１当量）を加え、次いでＮａＩＯ４（５６．４９ｍｇ、２６４．１０μｍｏｌ、１４．６３μＬ、４当量）を０℃で混合物中に加えた。混合物を５０℃で１６時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。混合物をＨ２Ｏ（５ｍＬ）中に注ぎ入れ、次いでＥｔＯＡｃ（５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ ８μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：２０％～５０％、１０分）により精製した。混合物を減圧下で濃縮して、５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（（１，１－ジオキシドテトラヒドロ－２Ｈ－チオピラン－４－イル）オキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（８．６ｍｇ、１６．８７μｍｏｌ、収率２５．５５％、純度９５．４２３％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ7.61～7.56 (m, 3H), 7.33 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.73 (s, 1H), 4.59 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.79 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.61～3.60 (m, 1H), 2.94～2.84 (m, 4H), 1.95 (d, J = 4.4 Hz, 4H). HPLC: 95.42% (220 nm), 93.82% (215 nm), 94.82% (254 nm). MS (ESI): C19H21Cl2N5O4Sの質量計算値, 485.07 m/z 実測値486.0 [M+H]+.
化合物１８９
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（３，４－ジヒドロキシベンジル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
化合物１９０
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（３，４－ジメトキシベンジル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000258
手順により、所望の化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［（３，４－ジメトキシフェニル）メチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（４０ｍｇ、８６．９０μｍｏｌ、収率３６．４４％、純度１００．００％）を白色固体として得た。５．８ｍｇを次に使用した。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.60～7.54 (m, 3H), 7.32 (dd, J = 2.0, 8.4 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.86 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.74 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 2H), 5.52 (s, 2H), 4.47 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.69 (d, J = 1.2 Hz, 6H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C21H19Cl2N5O3の質量計算値459.09, m/z 実測値460.0 [M+H]+.
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（３，４－ジヒドロキシベンジル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
Figure 2022515775000259
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［（３，４－ジメトキシフェニル）メチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（３０ｍｇ、６５．１７μｍｏｌ、１当量）のＤＣＭ（１ｍＬ）中溶液に、０℃でＢＢｒ３（６５．３１ｍｇ、２６０．６９μｍｏｌ、２５．１２μＬ、４当量）を滴下添加した。混合物を２５℃で１時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を０℃でＨ２Ｏ（０．１ｍＬ）にてクエンチし、次いで減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ８μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：２０％～４５％、１０分）により精製した。溶液を凍結乾燥して、５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［（３，４－ジヒドロキシフェニル）メチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（７．２ｍｇ、１５．４８μｍｏｌ、収率２３．７５％、純度９２．９０８％）を灰色固体として得た。所望の化合物（７．２ｍｇ、１５．４８μｍｏｌ、収率２３．７５％）を灰色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.88 (s, 1H), 7.58 (d, J = 7.6 Hz, 3H), 7.58 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.72～6.60 (m, 3H), 6.58～6.52 (m, 1H), 5.41 (s, 2H), 4.47 (d, J = 6.0 Hz, 2H). HPLC: 92.91% (220 nm), 91.72% (215 nm), 91.74% (254 nm). MS (ESI): C19H15Cl2N5O3の質量計算値431.06, m/z 実測値432.0 [M+H]+.
化合物１９１
（Ｅ）－２－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）アセトアルデヒドオキシムの調製
２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］アセトアルデヒドの調製
Figure 2022515775000260
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（７０ｍｇ、１７５．７７μｍｏｌ、１当量）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液に、０℃でＤＭＰ（１３４．１９ｍｇ、３１６．３９μｍｏｌ、９７．９５μＬ、１．８当量）を少しずつ加えた。混合物を２５℃で１５時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。混合物をＨ２Ｏ（５ｍＬ）でクエンチし、有機溶媒を減圧下で除去した。水溶液をＥｔＯＡｃ（５ｍＬ×５）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３（４ｍＬ×１）及びブライン（４ｍＬ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］アセトアルデヒド（６０ｍｇ、１５１．４３μｍｏｌ、収率８６．１５％）を白色固体として得た。
（Ｅ）－２－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）アセトアルデヒドオキシムの調製
Figure 2022515775000261
２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］アセトアルデヒド（５０ｍｇ、１２６．１９μｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＨ（２ｍＬ）中溶液に、０℃でＮＨ２ＯＨ・ＨＣｌ（１７．５４ｍｇ、２５２．３８μｍｏｌ、２当量）及びＴＥＡ（３１．９２ｍｇ、３１５．４８μｍｏｌ、４３．９１μＬ、２．５当量）を加えた。混合物を２５℃で１０時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（中性条件カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ Ｃ１８ ７５ｍｍ×３０ｍｍ ３μｍ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＡＣＮ］；Ｂ％：２５％～５０％、１０．５分）により精製した。ＭｅＣＮを３０℃で減圧下にて除去した。残渣を凍結乾燥で脱水した。化合物（１Ｅ）－２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］アセトアルデヒドオキシム（１５．０ｍｇ、３５．１０μｍｏｌ、収率２７．８１％、純度９６．２２３％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.09 (s, 0.5H), 11.01 (s, 1H), 10.91 (s, 0.5H), 7.59～7.57 (m, 3H), 7.32 (dd, J = 8.8 Hz, J = 2.4 Hz, 1H), 7.25 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.65 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.58 (s, 1H), 4.58 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 4.47 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.18 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 3.94 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 3.83～3.77 (m, 1H), 3.34 (s, 1H). HPLC: 96.22% (220 nm), 94.69% (215 nm), 93.56% (254 nm). MS (ESI): C16H16Cl2N6O3の質量計算値410.07, m/z 実測値411.0 [M+H]+.
化合物１９２
（Ｅ）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（４－メトキシブタ－２－エン－１－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
（Ｅ）－１－（４－ブロモブタ－２－エン－１－イル）－５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジンの調製（スキームＣ－３中のステップ１）
Figure 2022515775000262
（Ｅ）－１，４－ジブロモブタ－２－エン（２．９０ｇ、１３．５４ｍｍｏｌ、５当量）のＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（１．７７ｇ、５．４２ｍｍｏｌ、２当量）を加えた。次いでＤＭＦ中５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（０．５ｇ、２．７１ｍｍｏｌ、１当量）を０℃で滴下添加した。混合物を２５℃で１時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）を加えた。反応混合物をＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ×２）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム１２ｇ、５０ｍＬ／分で０～５０％酢酸エチル／石油エーテル濃度勾配の溶出液）により精製した。化合物（Ｅ）－１－（４－ブロモブタ－２－エン－１－イル）－５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（０．４ｇ、１．２６ｍｍｏｌ、収率４６．５０％）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.27 (s, 1H), 6.09-6.01 (m, 1H), 5.82-5.73 (m, 1H), 5.16 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.16 (s, 3H), 4.11 (d, J = 7.6 Hz, 2H).化合物２－［（Ｅ）－４－ブロモブタ－２－エニル］－５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（０．２８ｇ、８８１．７０μｍｏｌ、収率３２．５５％）を白色固体として得た。
（Ｅ）－５－クロロ－７－メトキシ－１－（４－メトキシブタ－２－エン－１－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジンの調製
Figure 2022515775000263
１－［（Ｅ）－４－ブロモブタ－２－エニル］－５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（０．１２ｇ、３７７．８７μｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（１．５ｍＬ）中溶液に、ＮａＯＭｅ（３０．６２ｍｇ、５６６．８１μｍｏｌ、１．５当量）を加えた。混合物を２５℃で１２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。化合物（Ｅ）－５－クロロ－７－メトキシ－１－（４－メトキシブタ－２－エン－１－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（０．１２ｇ、粗製物）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.26 (s, 1H), 5.90～5.84 (m, 1H), 5.63～5.56 (m, 1H), 5.14 (d, J=5.6Hz, 2H), 4.15 (s, 3H), 3.83 (d, J=4.0 Hz, 2H), 3.17 (s, 3H).
（Ｅ）－５－クロロ－１－（４－メトキシブタ－２－エン－１－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－３中のステップ２）
Figure 2022515775000264
５－クロロ－７－メトキシ－１－［（Ｅ）－４－メトキシブタ－２－エニル］ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（０．１２ｇ、４４６．６０μｍｏｌ、１当量）のＨ２Ｏ（１ｍＬ）及びＴＨＦ（１ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（５６．２２ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を２５℃で１０時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ＴＨＦを除去した。次いで混合物をＨＣｌ（２Ｎ）でｐＨ＝５に調節し、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×５）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物（Ｅ）－５－クロロ－１－（４－メトキシブタ－２－エン－１－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（７０ｍｇ、粗製物）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 13.30 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 5.88-5.82 (m, 1H), 5.61-5.55 (m, 1H), 5.13 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 3.82 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 3.18 (s, 3H).
（Ｅ）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（４－メトキシブタ－２－エン－１－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－３中のステップ３）
Figure 2022515775000265
５－クロロ－１－［（Ｅ）－４－メトキシブタ－２－エニル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（７０ｍｇ、２７４．８６μｍｏｌ、１当量）のｔ－ＢｕＯＨ（２ｍＬ）中溶液に、（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（９６．７８ｍｇ、５４９．７３μｍｏｌ、７３．３１μＬ、２当量）を加えた。混合物を１００℃で１２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３０％～４５％、１０分）により精製した。化合物（Ｅ）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（４－メトキシブタ－２－エン－１－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（５４．８ｍｇ、１３３．１２μｍｏｌ、収率４８．４３％、純度９５．７７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.07 (s, 1H), 7.59～7.57 (m, 3H), 7.32 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.60 (s, 1H), 5.85～5.80 (m, 1H), 5.55～5.51 (m, 1H), 5.03 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.47 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.81 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.17 (s, 3H). HPLC: 95.77% (220 nm), 95.00% (215 nm), 96.86% (254 nm). MS (ESI): C17H17Cl2N5O2の質量計算値393.08, m/z 実測値394.1 [M+H]+.
化合物１９３
（Ｅ）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（４－（２－メトキシエトキシ）ブタ－２－エン－１－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
ナトリウム２－メトキシエタノラートの調製
Figure 2022515775000266
ＮａＨ（６８３．３６ｍｇ、１７．０８ｍｍｏｌ、２．０５μＬ、純度６０％、１．３当量）のＣＨ３－ＴＨＦ（１０ｍＬ）中溶液に、０℃で２－メトキシエタノール（１ｇ、１３．１４ｍｍｏｌ、１．０４ｍＬ、１当量）を滴下添加した。混合物を０℃で２時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。化合物ナトリウム２－メトキシエタノラート（０．４ｇ、４．０８ｍｍｏｌ、収率３１．０３％）を白色固体として得た。
（Ｅ）－５－クロロ－７－（２－メトキシエトキシ）－１－（４－（２－メトキシエトキシ）ブタ－２－エン－１－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジンの調製
Figure 2022515775000267
２－メトキシエトキシナトリウム（７４．１２ｍｇ、７５５．７４μｍｏｌ、１．５当量）の２－メトキシエタノール（２ｍＬ）中溶液に、１－［（Ｅ）－４－ブロモブタ－２－エニル］－５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（０．１６ｇ、５０３．８３μｍｏｌ、１当量）を加えた。混合物を２５℃で１時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）を加えた。反応混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ×２）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム４ｇ、３６ｍＬ／分で０～６０％酢酸エチル／石油エーテル濃度勾配の溶出液）により精製した。次いで溶出液を減圧下で濃縮した。化合物（Ｅ）－５－クロロ－７－（２－メトキシエトキシ）－１－（４－（２－メトキシエトキシ）ブタ－２－エン－１－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（７０ｍｇ、１９６．１９μｍｏｌ、収率３８．９４％）を黄色油状物として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.26 (s, 1H), 5.90～5.85 (m, 1H), 5.72～5.67 (m, 1H), 5.13 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.68 (dd, J = 6.4 Hz, 4.4Hz, 2H), 3.91 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 3.78 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 3.44～3.40 (m, 4H), 3.39 (s, 3H), 3.20 (s, 3H).
（Ｅ）－５－クロロ－１－（４－（２－メトキシエトキシ）ブタ－２－エン－１－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－３中のステップ２）
Figure 2022515775000268
５－クロロ－７－（２－メトキシエトキシ）－１－［（Ｅ）－４－（２－メトキシエトキシ）ブタ－２－エニル］ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（７０ｍｇ、１９６．１９μｍｏｌ、１当量）のＨ２Ｏ（１ｍＬ）及びＴＨＦ（１ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（２４．７０ｍｇ、５８８．５６μｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を２５℃で１０時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ＴＨＦを除去した。混合物をＨＣｌ（２Ｎ）でｐＨ＝５に調節し、次いでＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×５）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物（Ｅ）－５－クロロ－１－（４－（２－メトキシエトキシ）ブタ－２－エン－１－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（６０ｍｇ、粗製物）を薄黄色油状物として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 13.30 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 5.89～5.83 (m, 1H), 5.61～5.54 (m, 1H), 4.13 (d, J = 5.6Hz, 2H), 3.90 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.46～3.41 (m, 4H), 3.21(s, 3H).
（Ｅ）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（４－（２－メトキシエトキシ）ブタ－２－エン－１－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－３中のステップ３）
Figure 2022515775000269
５－クロロ－１－［（Ｅ）－４－（２－メトキシエトキシ）ブタ－２－エニル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（６０ｍｇ、２００．８５μｍｏｌ、１当量）のｔ－ＢｕＯＨ（２ｍＬ）中溶液に、（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（７０．７２ｍｇ、４０１．７１μｍｏｌ、５３．５７μＬ、２当量）を加えた。混合物を１００℃で１２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件カラム：Ｂｏｓｔｏｎ Ｐｒｉｍｅ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３０％～５５％、１０分）により精製した。ＭｅＣＮを３０℃で減圧下にて除去した。残渣を凍結乾燥で脱水した。化合物（Ｅ）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（４－（２－メトキシエトキシ）ブタ－２－エン－１－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（５９．８ｍｇ、１３６．４３μｍｏｌ、収率６７．９３％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.60～7.57 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.74 (s, 1H), 5.87～5.79 (m, 1H), 5.56～5.50 (m, 1H), 4.03 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.88 (t, J = 4.0 Hz, 2H), 3.45～3.39 (m, 4H), 3.21 (s, 3H). HPLC: 99.52% (220 nm), 99.29% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C19H21Cl2N5O3の質量計算値437.10, m/z 実測値438.1 [M+H]+.
化合物１９４
エチル４－（（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル）ピペリジン－４－カルボキシラート塩酸塩の調製
１－ｔｅｒｔ－ブチル４－エチル４－（（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル）ピペリジン－１，４－ジカルボキシラートを、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000270
手順により、所望の化合物１－ｔｅｒｔ－ブチル４－エチル４－［［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］メチル］ピペリジン－１，４－ジカルボキシラート（０．２２ｇ、３７９．６５μｍｏｌ、収率６６．８０％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.59～7.57 (m, 3H), 7.32 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.82 (s, 1H), 4.61 (s, 2H), 4.46 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.04 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 3.76～3.73 (m, 2H), 2.78～2.74 (m, 2H). 1.85～1.81 (m, 2H), 1.45～1.37 (m, 11H), 1.12 (t, J = 6.8 Hz, 3H).
ｔｅｒｔ－ブチル４－（（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル）－４－（ヒドロキシメチル）ピペリジン－１－カルボキシラートの調製
Figure 2022515775000271
Ｏ１－ｔｅｒｔ－ブチルＯ４－エチル４－［［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］メチル］ピペリジン－１，４－ジカルボキシラート（０．１ｇ、１７２．５７μｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（３ｍＬ）中溶液に、０℃でＬｉＢＨ４（１５．０４ｍｇ、６９０．２８μｍｏｌ、４当量）を加えた。次いで混合物を５５℃で６時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＴＬＣは、反応が完結していることを示した。混合物を氷水（２ｍＬ）でクエンチし、有機溶媒を減圧下で除去した。水溶液をＥｔＯＡｃ（５ｍＬ×４）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、ｔｅｒｔ－ブチル４－［［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］メチル］－４－（ヒドロキシメチル）ピペリジン－１－カルボキシラート（９０ｍｇ、１６７．４６μｍｏｌ、収率９７．０４％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.61～7.30 (m, 3H), 7.30 (dd, J = 8.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 4.57 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.47 (s, 2H), 3.40～3.30 (m, 4H). 3.09 (s, 2H), 1.88～1.94 (m, 2H), 1.38～1.26 (m, 11H).
化合物１９５
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（４－（ヒドロキシメチル）ピペリジン－４－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
Figure 2022515775000272
ｔｅｒｔ－ブチル４－［［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］メチル］－４－（ヒドロキシメチル）ピペリジン－１－カルボキシラート（０．１３ｇ、２４１．８９μｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＡｃ（４ｍＬ）中混合物に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、６．０５ｍＬ、１００当量）を加え、混合物を２０℃で２時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。多少の白色固体が生成された。濾過した後、固体を集めた。固体を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１０％～３５％、１２分）により精製した。溶出液を減圧下で除去した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［［４－（ヒドロキシメチル）－４－ピペリジル］メチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１０２ｍｇ、２１０．８３μｍｏｌ、収率８７．１６％、純度９７．９３％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.70 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.66～7.61 (m, 2H), 7.38 (dd, J = 8.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 4.59 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 4.50 (s, 2H), 3.37 (s, 2H). 3.08～3.03 (m, 4H), 1.68～1.64 (m, 2H), 1.51～1.45 (m, 2H). HPLC: 97.93% (220 nm), 97.47% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C19H23Cl3N6O2の質量計算値436.12 m/z 実測値437.1 [M+H]+.
１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－（（５－クロロ－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル）ピペリジン－４－カルボン酸の調製（スキームＣ－３中のステップ２）
Figure 2022515775000273
Ｏ１－ｔｅｒｔ－ブチルＯ４－エチル４－［（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル］ピペリジン－１，４－ジカルボキシラート（０．１ｇ、２２０．３０μｍｏｌ、１当量）及びＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（４６．２２ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ、５当量）のＭｅＯＨ（１ｍＬ）、ＴＨＦ（１ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１ｍＬ）中溶液を、２０℃で３時間撹拌した。次いでＮａＯＨ（１７．６２ｍｇ、４４０．６１μｍｏｌ、２当量）を加え、混合物を７０℃で５時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。有機溶媒を減圧下で除去した。水溶液を２Ｎ ＨＣｌでゆっくりｐＨ＝６～７にし、多少の固体が生成された。濾過した後に固体を集めた。次いで水溶液をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、１－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－［（５－クロロ－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル］ピペリジン－４－カルボン酸（８０ｍｇ、１９４．２５μｍｏｌ、収率８８．１７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.94 (s, 1H), 4.71 (s, 2H), 3.76～3.72 (m, 2H), 2.80～2.79 (m, 2H), 1.91～1.84 (m, 2H), 1.40～1.35 (m, 11H).
１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－（（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル）ピペリジン－４－カルボン酸の調製（スキームＣ－３中のステップ３）
Figure 2022515775000274
（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（６８．３９ｍｇ、３８８．５０μｍｏｌ、５１．８１μＬ、２当量）及び１－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－［（５－クロロ－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル］ピペリジン－４－カルボン酸（８０ｍｇ、１９４．２５μｍｏｌ、１当量）のｔ－ＢｕＯＨ（２ｍＬ）中溶液を、１００℃で３０時間加熱した。ＬＣＭＳは、反応がほぼ完結していることを示した。溶媒を減圧下で除去した。化合物１－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－［［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］メチル］ピペリジン－４－カルボン酸（０．１３ｇ、粗製物）を灰白色固体として得た。MS (ESI): C24H28Cl2N6O5の質量計算値550.15 m/z 実測値495.0 [M+H-Boc]+.
化合物１９６
４－（（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル）ピペリジン－４－カルボン酸塩酸塩の調製
Figure 2022515775000275
１－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－［［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］メチル］ピペリジン－４－カルボン酸（０．１１ｇ、１９９．４８μｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）中混合物に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、４．９９ｍＬ、１００当量）を加え、混合物を２０℃で２時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。多少の固体が生成された。濾過した後、固体を集めた。固体を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１０％～４０％、１２分）により精製した。溶出液を凍結乾燥下で乾燥した。化合物４－［［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］メチル］ピペリジン－４－カルボン酸（４０．２ｍｇ、８１．００μｍｏｌ、収率４０．６０％、純度９８．２８％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.77～8.75 (m, 1H), 8.44～8.42 (m, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.61～7.59 (m, 2H), 7.25 (dd, J = 8.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 7.33～7.32 (m, 1H), 4.65 (s, 2H), 4.51 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.24～3.21 (m, 2H), 2.77～2.66 (m, 2H), 2.00～1.97 (m, 2H), 1.73～1.67 (m, 2H). HPLC: 98.28% (220 nm), 98.41% (215 nm), 95.91% (254 nm). MS (ESI): C19H21Cl3N6O3の質量計算値450.10 m/z 実測値451.0 [M+H]+.
エチル４－（（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル）ピペリジン－４－カルボキシラート塩酸塩の調製
Figure 2022515775000276
Ｏ１－ｔｅｒｔ－ブチルＯ４－エチル４－［［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］メチル］ピペリジン－１，４－ジカルボキシラート（３０ｍｇ、５１．７７μｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＡｃ（１ｍＬ）中混合物に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、１．２９ｍＬ、１００当量）を加え、混合物を２０℃で２時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。多少の白色固体が生成された。濾過した後、固体を集めた。固体を減圧下で濃縮して、エチル４－［［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］メチル］ピペリジン－４－カルボキシラート（１５．６ｍｇ、２９．４６μｍｏｌ、収率５６．９０％、純度９７．４１％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.77～8.74 (m, 1H), 8.52～8.48 (m, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.60～7.58 (m, 2H), 7.33 (dd, J = 8.4 Hz, 1.6 Hz, 1H), 7.09～7.07 (m, 1H), 4.65 (s, 2H), 4.49 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.07 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.27～3.23 (m, 2H), 2.77～2.67 (m, 2H), 2.02～1.99 (m, 2H), 1.79～1.76 (m, 2H), 1.15 (t, J = 7.2 Hz, 3H). HPLC: 97.41% (220 nm), 96.42% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C21H25Cl3N6O3の質量計算値478.13 m/z 実測値479.1 [M+H]+.
化合物１９７
２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－Ｎ－（（２－（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）アセトアミドの調製
２－（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）アセトアミドの調製（スキームＣ－３中のステップ１）
Figure 2022515775000277
５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（７００ｍｇ、３．７９ｍｍｏｌ、１当量）及び２－クロロアセトアミド（７０９．２６ｍｇ、７．５８ｍｍｏｌ、２当量）のＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１．０５ｇ、７．５８ｍｍｏｌ、２当量）を加えた。混合物を７０℃で１０時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。混合物をＨ２Ｏ（７ｍＬ）中に注ぎ入れ、混合物をＨＣｌ（２Ｍ）でｐＨ＝７に調節した。混合物をＤＣＭ及びｉ－ＰｒＯＨ（３：１、１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）アセトアミド（９００ｍｇ、３．７２ｍｍｏｌ、収率９８．２１％）及び２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）アセトアミドの混合物を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.26 (s, 1H), 5.12 (s, 2H), 4.11 (s, 3H).
２－（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－Ｎ－（（２－（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）アセトアミドの調製
Figure 2022515775000278
２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）アセトアミド（３９２ｍｇ、１．６２ｍｍｏｌ、１当量）及び２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）アセトアミド（１．００当量）のＤＭＦ（５ｍＬ）中混合物に、０℃でＤＩＥＡ（１．０５ｇ、８．１１ｍｍｏｌ、１．４１ｍＬ、５当量）及びＳＥＭ－Ｃｌ（１．０３ｇ、６．１６ｍｍｏｌ、１．０９ｍＬ、３．８当量）を滴下添加した。次いで混合物を４０℃で１０時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。混合物をＨ２Ｏ（５ｍＬ）中に注ぎ入れ、０℃でＨＣｌ（３Ｍ）にてｐＨ＝７に調節した。混合物をＥｔＯＡｃ（８ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム４ｇ、４０ｍＬ／分で０～５５％酢酸エチル／石油エーテル濃度勾配の溶出液）により精製した。溶出液を減圧下で濃縮して、２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－Ｎ－（２－トリメチルシリルエトキシメチル）アセトアミド（３０ｍｇ、８０．６７μｍｏｌ、収率４．９７％）及び２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）－Ｎ－（２－トリメチルシリルエトキシメチル）アセトアミド（６０ｍｇ、１６１．３４μｍｏｌ、収率９．９４％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.29 (s, 1H), 5.21 (s, 2H), 4.53 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 4.11 (s, 3H), 3.44 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 1.24 (s, 2H), -0.02 (s, 9H).
２－（５－クロロ－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－Ｎ－（（２－（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）アセトアミドの調製（スキームＣ－３中のステップ２）
Figure 2022515775000279
２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－Ｎ－（２－トリメチルシリルエトキシメチル）アセトアミド（７５ｍｇ、２０１．６７μｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（１ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（２５．３９ｍｇ、６０５．０１μｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を２５℃で１０時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。混合物を減圧下で濃縮し、次いで水溶液をＨＣｌ（２Ｍ）でｐＨ＝７に調節した。水溶液をＥｔＯＡｃ（３ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、２－（５－クロロ－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－Ｎ－（２－トリメチルシリルエトキシメチル）アセトアミド（７２ｍｇ、２０１．１９μｍｏｌ、収率９９．７６％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.99 (s, 1H), 5.19 (s, 2H), 4.52 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 3.49～3.41 (m, 2H), 0.84～0.82 (m, 2H), -0.02 (s, 9H).
２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－Ｎ－（（２－（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）アセトアミドの調製（スキームＣ－３中のステップ３）
Figure 2022515775000280
２－（５－クロロ－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－Ｎ－（２－トリメチルシリルエトキシメチル）アセトアミド（５０ｍｇ、１３９．７２μｍｏｌ、１当量）及び（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（４９．１９ｍｇ、２７９．４３μｍｏｌ、３７．２７μＬ、２当量）のｔ－ＢｕＯＨ（２ｍＬ）中溶液を、１１０℃で１０時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １００ｍｍ×２５ｍｍ ３μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：４０％～６０％、１２分）により精製した。混合物を凍結乾燥下で乾燥した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：４５％～６５％、１２分）により２回精製した。混合物を凍結乾燥下で乾燥して、２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］－Ｎ－（２－トリメチルシリルエトキシメチル）アセトアミド（５．４ｍｇ、１０．２０μｍｏｌ、収率７．３０％、純度９４．００％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.08 (s, 1H), 8.71 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 7.58～7.55 (m, 3H), 7.31 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.64 (s, 1H), 5.06 (s, 2H), 4.47 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 3.40 (s, 2H), 0.82～0.77 (m, 2H), -0.04 (s, 9H). HPLC: 94.00% (220 nm), 92.65% (215 nm), 76.77% (254 nm). MS (ESI): C20H26Cl2N6O3Siの質量計算値496.12, m/z 実測値497.1 [M+H]+.
化合物１９８
５－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－Ｎ，２，２－トリメチルペンタンアミドの調製
化合物１９９
５－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－２，２－ジメチルペンタン酸を、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000281
手順により、所望の化合物５－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］－２，２－ジメチル－ペンタン酸（９３．４ｍｇ、２１２．９９μｍｏｌ、収率４２．４２％、純度９９．９５３％）を白色固体として得た。２６．３ｍｇを次に使用した。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.65～7.51 (m, 3H), 7.33 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 4.48 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 4.39 (s, 2H), 1.72 (s, 2H), 1.44～1.33 (m, 2H), 1.03 (s, 6H). HPLC: 99.95% (220 nm), 99.94% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C19H21Cl2N5O3の質量計算値437.10, m/z 実測値438.1 [M+H]+.
５－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－Ｎ，２，２－トリメチルペンタンアミドの調製
Figure 2022515775000282
５－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］－２，２－ジメチル－ペンタン酸（３０ｍｇ、６８．４５μｍｏｌ、１当量）、メタンアミン塩酸塩（９．２４ｍｇ、１３６．８９μｍｏｌ、２当量）、ＥＤＣＩ（１５．７５ｍｇ、８２．１３μｍｏｌ、１．２当量）、ＨＯＢｔ（１．８５ｍｇ、１３．６９μｍｏｌ、０．２当量）及びＤＩＥＡ（２６．５４ｍｇ、２０５．３４μｍｏｌ、３５．７７μＬ、３当量）のＤＭＦ（１ｍＬ）中混合物を、２０℃で１６時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。濾過した後、濾液を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１５％～３５％、１２分）により精製した。水性溶液を凍結乾燥して、化合物５－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］－Ｎ，２，２－トリメチル－ペンタンアミド（１２．７ｍｇ、２７．８０μｍｏｌ、収率４０．６２％、純度９８．８００％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.64 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 3.6 Hz, 2H), 7.36 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 4.56 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 4.37 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.52 (s, 3H), 1.72～1.55 (m, 2H), 1.42～1.29 (m, 2H), 1.00 (s, 6H). HPLC: 98.80% (220 nm), 98.35% (215 nm), 98.34% (254 nm). MS (ESI): C20H24Cl2N6O2の質量計算値450.13, m/z 実測値451.1 [M+H]+.
化合物２００
５－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－Ｎ－メチル－２－フェニルペンタンアミドの調製
ジエチル２－（３－（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロピル）－２－フェニルマロナートの調製（スキームＣ－３中のステップ１）
Figure 2022515775000283
５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（３００ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ、１当量）、ジエチル２－（３－ブロモプロピル）－２－フェニル－プロパンジオアート（８７０．９２ｍｇ、２．４４ｍｍｏｌ、４７０．４７μＬ、１．５当量）及びＣｓ２ＣＯ３（１．０６ｇ、３．２５ｍｍｏｌ、２当量）のＤＭＦ（３ｍＬ）中混合物を、２５℃で５時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物をＨ２Ｏ（５ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ×３）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム４ｇ、６５ｍＬ／分で０～４０％酢酸エチル／石油エーテル濃度勾配の溶出液）により精製した。溶出液を減圧下で除去した。化合物ジエチル２－［３－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロピル］－２－フェニル－プロパンジオアート（４５０ｍｇ、９７６．３３μｍｏｌ、収率６０．０７％）を無色油状物として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.99 (s, 1H), 7.27 (s, 5H), 4.51 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.22～4.16 (m, 7H), 2.29～2.25 (m, 2H), 1.88～1.84 (m, 2H), 1.25～1.18 (m, 6H).化合物ジエチル２－［３－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）プロピル］－２－フェニル－プロパンジオアート（２７０ｍｇ、５８５．８０μｍｏｌ、収率３６．０４％）を無色油状物として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.94 (s, 1H), 7.32～7.27 (m, 5H), 4.40 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 4.24～4.20 (m, 7H), 2.29～2.24 (m, 2H), 2.00～1.96 (m, 2H), 1.23～1.20 (m, 6H).
５－（５－クロロ－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－２－フェニルペンタン酸の調製
Figure 2022515775000284
ジエチル２－［３－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロピル］－２－フェニル－プロパンジオアート（２００ｍｇ、４３３．９２μｍｏｌ、１当量）及びＮａＯＨ（１０４．１３ｍｇ、２．６０ｍｍｏｌ、６当量）のＭｅＯＨ（１ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１ｍＬ）中混合物を、８０℃で３時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。水溶液を３Ｎ ＨＣｌでｐＨ＝６にし、ＥｔＯＡｃ（６ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（６ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物５－（５－クロロ－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－２－フェニル－ペンタン酸（１７５ｍｇ、粗製物）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 13.27 (s, 1H), 12.25 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.29～7.20 (m, 5H), 4.51 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.49 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 1.90～1.58 (m, 4H).
化合物２０１
５－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－２－フェニルペンタン酸の調製（スキームＣ－３中のステップ３）
Figure 2022515775000285
５－（５－クロロ－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－２－フェニル－ペンタン酸（１７５ｍｇ、５０４．６６μｍｏｌ、１当量）及び（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（１７７．６８ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ、１３４．６１μＬ、２当量）の２－メチル－２－ブタノール（３ｍＬ）中混合物を、１４０℃で４時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ８μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：４５％～６０％、１０分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物５－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］－２－フェニル－ペンタン酸（１３１．２ｍｇ、２６４．９９μｍｏｌ、収率５２．５１％、純度９８．２３％）を白色固体として得た。３１．２ｍｇを次に使用した。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.60～7.56 (m, 3H), 7.34～7.20 (m, 6H), 6.82 (s, 1H), 4.48 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.42 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.49 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 1.87～1.82 (m, 1H), 1.76～1.70 (m, 1H), 1.68～1.62 (m, 1H), 1.60～1.51 (m, 1H). HPLC: 98.23 % (220 nm), 97.82 % (215 nm), 100.00 % (254 nm). MS (ESI): C23H21Cl2N5O3の質量計算値485.10, m/z 実測値486.1 [M+H]+.
５－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－Ｎ－メチル－２－フェニルペンタンアミドの調製
Figure 2022515775000286
５－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］－２－フェニル－ペンタン酸（３０ｍｇ、６１．６８μｍｏｌ、１当量）、メタンアミン塩酸塩（８．３３ｍｇ、１２３．３７μｍｏｌ、２当量）、ＤＩＥＡ（２３．９２ｍｇ、１８５．０５μｍｏｌ、３２．２３μＬ、３当量）、ＨＯＢｔ（１．６７ｍｇ、１２．３４μｍｏｌ、０．２当量）及びＥＤＣＩ（１４．１９ｍｇ、７４．０２μｍｏｌ、１．２当量）のＤＭＦ（０．５ｍＬ）中混合物を、２５℃で１２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を濾過して不溶物を除去した。濾液を分取ＨＰＬＣ（ＨＣｌ条件カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０４％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２５％～５０％、１２分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物５－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］－Ｎ－メチル－２－フェニル－ペンタンアミド（１３．８ｍｇ、２７．５９μｍｏｌ、収率４４．７３％、純度９９．８５％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.94 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.65～7.60 (m, 3H), 7.37 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.24～7.19 (m, 5H), 4.57 (s, 2H), 4.42 (s, 2H), 3.38 (s, 1H), 2.50 (s, 3H), 1.85～1.84 (m, 1H), 1.71～1.57 (m, 2H), 1.53～1.51 (m, 1H). HPLC: 99.85 % (220 nm), 99.93 % (215 nm), 99.21 % (254 nm). MS (ESI): C24H24Cl2N6O2の質量計算値498.13, m/z 実測値499.1 [M+H]+.
化合物２０２
５－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－２－メチルペンタン酸の調製
ジエチル２－（３－（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロピル）－２－メチルマロナートを、スキームＣ－３中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000287
５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（０．３ｇ、１．６３ｍｍｏｌ、１当量）、ジエチル２－（３－ブロモプロピル）－２－メチル－プロパンジオアート（６２３．６５ｍｇ、２．１１ｍｍｏｌ、２０１．２２μＬ、１．３当量）及びＣｓ２ＣＯ３（１．０６ｇ、３．２５ｍｍｏｌ、２当量）のＤＭＦ（２ｍＬ）中混合物を、２５℃で４時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を２０℃でＨ２Ｏ（１５ｍＬ）にてクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム１２ｇ、３５ｍＬ／分で０～３０％酢酸エチル／石油エーテル濃度勾配の溶出液）により精製した。溶出液を減圧下で除去した。化合物ジエチル２－［３－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロピル］－２－メチル－プロパンジオアート（４４０ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ、収率６７．８８％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.25 (s, 1H), 4.51 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.16 (s, 3H), 4.05 (q, J = 7.2 Hz, 4H), 1.73 (s, 4H), 1.27 (s, 3H), 1.09 (t, J = 6.8 Hz, 6H).
５－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－２－メチルペンタン酸の調製（スキームＣ－３中のステップ２）
Figure 2022515775000288
ジエチル２－［３－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロピル］－２－メチル－プロパンジオアート（３８０ｍｇ、９５２．７６μｍｏｌ、１当量）及びＮａＯＨ（２６６．７７ｍｇ、６．６７ｍｍｏｌ、７当量）のＨ２Ｏ（２ｍＬ）及びＭｅＯＨ（２ｍＬ）中混合物を、１００℃で３時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。水溶液をＨＣｌ（３Ｍ）でｐＨ＝５に調節し、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物２－［３－（５－クロロ－７－ヒドロキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）プロピル］－２－メチル－プロパン二酸（２３０ｍｇ、６９９．７１μｍｏｌ、収率７３．４４％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 13.27 (s, 1H), 12.66 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 4.50 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.80～1.69 (m, 2H), 1.68～1.60 (m, 2H), 1.20 (s, 3H).
５－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－２－メチルペンタン酸の調製
Figure 2022515775000289
２－［３－（５－クロロ－７－ヒドロキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）プロピル］－２－メチル－プロパン二酸（１７０ｍｇ、５１７．１８μｍｏｌ、１当量）及び（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（１８２．０９ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ、１３７．９５μＬ、２当量）の２－メチルブタン－２－オール（３ｍＬ）中混合物を、１４０℃で１６時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ８μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３０％～５０％、１０分）により精製した。水性溶液を凍結乾燥下で除去して、化合物５－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］－２－メチル－ペンタン酸（８０ｍｇ、１８７．６３μｍｏｌ、収率３６．２８％、純度９９．５１０％）を白色固体として得た。３０．０ｍｇを次に使用した。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.65～7.55 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.84 (s, 1H), 4.49 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.41 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.35～2.26 (m, 1H), 1.76 (m, 2H), 1.53～1.41 (m, 1H), 1.31～1.19 (m, 1H), 1.00 (d, J = 6.8 Hz, 3H). HPLC: 99.51% (220 nm), 99.27% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C18H19Cl2N5O3の質量計算値423.09, m/z 実測値424.1 [M+H]+.
化合物２０３
エチル５－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ペンタノアートの調製
Figure 2022515775000290
５－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ペンタン酸（６０ｍｇ、１４６．２５μｍｏｌ、１当量）（スキームＣ－３中のステップ１～３）のＥｔＯＨ（２ｍＬ）中溶液に、０℃でＳＯＣｌ２（８７．００ｍｇ、７３１．２５μｍｏｌ、５３．０５μＬ、５当量）を滴下添加した。次いで混合物を８０℃で１０時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。多少の白色固体が生成された。濾過した後に固体を集め、次いで減圧下で濃縮した。化合物エチル５－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ペンタノアート（５７．１ｍｇ、１２７．３７μｍｏｌ、収率８７．０９％、純度９７．７７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.62～7.59 (m, 3H), 7.35 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 7.26 (s, 1H), 4.52 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.43 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.02 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.28 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.80～1.76 (m, 2H), 1.44～1.41 (m, 2H), 1.14 (t, J = 7.2 Hz, 3H). HPLC: 97.77% (220 nm), 97.72% (215 nm), 98.01% (254 nm). MS (ESI): C19H21Cl2N5O3の質量計算値437.10 m/z 実測値438.0 [M+H]+.
化合物２０４
イソプロピル５－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ペンタノアートの調製
Figure 2022515775000291
５－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ペンタン酸（４０ｍｇ、９７．５０μｍｏｌ、１当量）（スキームＣ－３中のステップ１～３）のｉ－ＰｒＯＨ（１ｍＬ）中溶液に、０℃でＳＯＣｌ２（５８．００ｍｇ、４８７．５０μｍｏｌ、３５．３６μＬ、５当量）を滴下添加した。次いで混合物を８０℃で２０時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。多少の白色固体が生成された。濾過した後に固体を集め、次いで減圧下で濃縮した。化合物イソプロピル５－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ペンタノアート（２３．９ｍｇ、５１．１５μｍｏｌ、収率５２．４６％、純度９６．８１％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.61～7.59 (m, 3H), 7.33 (d, J = 2.0 Hz, 8.0 Hz, 1H), 4.85～4.82 (m, 1H), 4.51 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.42 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.24 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 1.79～1.75 (m, 2H), 1.43～1.40 (m, 2H), 1.13 (d, J = 6.0 Hz, 6H). HPLC: 96.81% (220 nm), 96.76% (215 nm), 94.56% (254 nm). MS (ESI): C20H23Cl2N5O3の質量計算値451.12 m/z 実測値452.1 [M+H]+.
化合物２０５
エチル４－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ブタノアートの調製
Figure 2022515775000292
４－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ブタン酸（４５ｍｇ、１１３．５７μｍｏｌ、１当量）（スキームＣ－３中のステップ１～３）のＥｔＯＨ（５ｍＬ）中溶液に、０℃でＳＯＣｌ２（６７．５６ｍｇ、５６７．８６μｍｏｌ、４１．１９μＬ、５当量）を加えた。混合物を８０℃で１６時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を濾過して不溶物を除去し、減圧下で濃縮して、溶媒を除去した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ８μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３０％～６０％、１０分）により精製した。水性溶液を凍結乾燥して、化合物を得た。化合物エチル４－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ブタノアート（１５．６ｍｇ、３６．６５μｍｏｌ、収率３２．２７％、純度９９．６７％）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.66～7.59 (m, 3H), 7.37 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 4.57 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 4.46 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.99 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 2.25 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.07～2.00 (m, 2H), 1.14 (t, J = 6.8 Hz, 3H). HPLC: 99.67 % (220 nm), 99.65 % (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C18H19Cl2N5O3の質量計算値423.09, m/z 実測値424.1 [M+H]+.
化合物２０６
イソプロピル４－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ブタノアートの調製
Figure 2022515775000293
４－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ブタン酸（スキームＣ－３中のステップ１～３）（４５ｍｇ、１１３．５７μｍｏｌ、１当量）のｉ－ＰｒＯＨ（５ｍＬ）中溶液に、０℃でＳＯＣｌ２（６７．５６ｍｇ、５６７．８６μｍｏｌ、４１．１９μＬ、５当量）を加えた。混合物を８０℃で１６時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を濾過して不溶物を除去し、減圧下で濃縮して、溶媒を除去した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ８μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３５％～５５％、１０分）により精製した。水性溶液を凍結乾燥して、化合物を得た。化合物イソプロピル４－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ブタノアート（１７．０ｍｇ、３８．７９μｍｏｌ、収率３４．１５％、純度１００．００％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.67～7.58 (m, 3H), 7.36 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 4.86～4.80 (m, 1H), 4.55 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.46 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.20 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.05～1.98 (m, 2H), 1.14 (d, J = 6.4 Hz, 6H). HPLC: 100.00 % (220 nm), 100.00 % (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C19H21Cl2N5O3の質量計算値437.10, m/z 実測値438.1 [M+H]+.
化合物２０７
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（（２Ｒ，５Ｒ）－５－（ヒドロキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
（（２Ｒ，５Ｒ）－５－（（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル）－１，４－ジオキサン－２－イル）メタノール及び（（２Ｓ，５Ｒ）－５－（（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル）－１，４－ジオキサン－２－イル）メタノールの調製（スキームＣ－３中のステップ１）
Figure 2022515775000294
（（２Ｓ，５Ｒ）－５－（ヨードメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル）メタノール（８３８．８２ｍｇ、３．２５ｍｍｏｌ、２当量）及び（（２Ｒ，５Ｒ）－５－（ヨードメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル）メタノール並びに５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（０．３ｇ、１．６３ｍｍｏｌ、１当量）のアセトン（１ｍＬ）中溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（１．５９ｇ、４．８８ｍｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を７０℃で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を濾過して不溶物を除去し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ８μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１０％～３０％、１０分）により精製した。水性溶液を凍結乾燥して、化合物［（２Ｓ，５Ｒ）－５－［（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル］－１，４－ジオキサン－２－イル］メタノール（４０ｍｇ、１２７．１０μｍｏｌ、収率７．８２％）を灰白色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.08 (s, 1H), 5.05 (dd, J = 8.4 Hz, 14.0 Hz, 1H), 4.62 (dd, J = 5.6 Hz, 14.4 Hz, 1H), 4.26～4.24 (m, 3H), 4.21～4.10 (m, 1H), 3.97～3.56 (m, 8H).化合物［（２Ｒ，５Ｒ）－５－［（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル］－１，４－ジオキサン－２－イル］メタノール（４０ｍｇ、１２７．１０μｍｏｌ、収率７．８２％）を灰白色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.03～8.01 (m, 1H), 4.60～4.55 (m, 1H), 4.49～4.44 (m, 1H), 4.23～4.18 (m, 3H), 3.95～3.93 (m, 1H), 3.81～3.72 (m, 2H), 3.56～3.35 (m, 6H).
５－クロロ－１－（（（２Ｒ，５Ｒ）－５－（ヒドロキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－３中のステップ２）
Figure 2022515775000295
［（２Ｒ，５Ｒ）－５－［（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル］－１，４－ジオキサン－２－イル］メタノール（４０ｍｇ、１２７．１０μｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１６．００ｍｇ、３８１．２９μｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を２５℃で３時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ＭｅＯＨを除去した。次いで混合物を０℃でＨＣｌ（３Ｍ）にてｐＨ＝４に調節し、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×４）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物５－クロロ－１－（（（２Ｒ，５Ｒ）－５－（ヒドロキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（５０ｍｇ、粗製物）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.99 (s, 1H), 4.81～4.64 (m, 1H), 4.64～4.54 (m, 1H), 4.52～4.44 (m, 1H), 4.09～3.98 (m, 1H), 3.96～3.85 (m, 2H), 3.79～3.72 (m, 2H), 3.29～3.25 (m, 3H), 3.24～3.17 (m, 1H).
化合物２０８
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（（２Ｒ，５Ｒ）－５－（ヒドロキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－３中のステップ３）
Figure 2022515775000296
５－クロロ－１－［［（２Ｒ，５Ｒ）－５－（ヒドロキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］メチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（５０ｍｇ、１６６．２８μｍｏｌ、１当量）及び（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（５８．５４ｍｇ、３３２．５６μｍｏｌ、４４．３５μＬ、２当量）のｔ－ＢｕＯＨ（１ｍＬ）及び２－メチルブタン－２－オール（１ｍＬ）中混合物を、１０５℃で３２時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮して、溶媒を除去した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ８μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～４０％、１０分）により精製した。水性溶液を凍結乾燥して、化合物５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（（２Ｒ，５Ｒ）－５－（ヒドロキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（１６．９ｍｇ、３７．６０μｍｏｌ、収率２２．６１％、純度９７．９６５％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.66～7.55 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.76 (s, 1H), 4.55～4.45 (m, 3H), 4.37 (dd, J = 14.0 Hz, 5.2 Hz, 1H), 3.89～3.83 (m, 1H), 3.76～3.69 (m, 2H), 3.36 (dd, J = 11.2 Hz, 3.6 Hz, 2H), 3.32～3.24 (m, 2H), 3.24～3.18 (m, 1H). HPLC: 97.97 % (220 nm), 97.83 % (215 nm), 98.59% (254 nm). MS (ESI): C18H19Cl2N5O4の質量計算値439.08, m/z 実測値440.1 [M+H]+.
５－クロロ－１－（（（２Ｒ，５Ｓ）－５－（ヒドロキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－３中のステップ２）
Figure 2022515775000297
［（２Ｓ，５Ｒ）－５－［（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル］－１，４－ジオキサン－２－イル］メタノール（４０ｍｇ、１２７．１０μｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１６．００ｍｇ、３８１．２９μｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を２５℃で４時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ＴＨＦを除去した。次いで混合物を０℃でＨＣｌ（３Ｍ）によりｐＨ＝３に調節し、ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ×５）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物５－クロロ－１－（（（２Ｒ，５Ｓ）－５－（ヒドロキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（３０ｍｇ、９９．７７μｍｏｌ、収率７８．５０％）を灰白色油状物として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 13.31 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 5.08 (dd, J = 14.0 Hz, 9.2 Hz, 1H), 4.51 (dd, J = 14.0 Hz, 4.4 Hz, 1H), 4.07～4.02 (m, 2H), 3.77～3.63 (m, 4H), 3.48 (s, 1H), 3.46 (d, J = 4.8 Hz, 1H).
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（（２Ｒ，５Ｓ）－５－（ヒドロキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－３中のステップ３）
Figure 2022515775000298
５－クロロ－１－［［（２Ｒ，５Ｓ）－５－（ヒドロキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］メチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（３０．００ｍｇ、９９．７７μｍｏｌ、１当量）及び（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（３５．１３ｍｇ、１９９．５４μｍｏｌ、２６．６１μＬ、２当量）の２－メチルブタン－２－オール（１ｍＬ）及びｔ－ＢｕＯＨ（１ｍＬ）中混合物を、１０５℃で３２時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮して、溶媒を除去した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ８μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～４０％、１０分）により精製した。水性溶液を凍結乾燥して、化合物５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（（２Ｒ，５Ｓ）－５－（ヒドロキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（２１．０ｍｇ、４７．０６μｍｏｌ、収率４７．１７％、純度９８．６７５％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.60～.57 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 4.98 (dd, J = 13.6 Hz, 8.8 Hz, 1H), 4.48 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.41 (dd, J = 14.0 Hz, 4.8 Hz, 1H), 4.05～3.98 (m, 1H), 3.80～3.67 (m, 3H), 3.67～3.57 (m, 4H). HPLC: 98.68% (220 nm), 98.32 % (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C18H19Cl2N5O4の質量計算値439.08, m/z 実測値440.0 [M+H]+.
化合物２０９
５－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ペンタン酸の調製
エチル５－（５－クロロ－３－フルオロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ペンタノアートの調製（スキームＣ－３中のステップ１）
Figure 2022515775000299
エチル５－ブロモペンタノアート（５３６．７１ｍｇ、２．５７ｍｍｏｌ、４０９．７０μＬ、１．３当量）、５－クロロ－３－フルオロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（０．４ｇ、１．９７ｍｍｏｌ、１当量）及び３，５－ジクロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（１．９７ｍｍｏｌ、１当量）のＤＭＦ（３ｍＬ）中溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（１．２９ｇ、３．９５ｍｍｏｌ、２当量）を加えた。混合物を２５℃で３時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。濾過した後、濾液を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３５％～６５％、１０分）により精製した。水性溶液を飽和ＮａＨＣＯ３でｐＨ＝８に調節し、ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物エチル５－（５－クロロ－３－フルオロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ペンタノアート（１３０ｍｇ、３９３．０６μｍｏｌ、収率１９．９１％）を灰白色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 4.42 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.24 (s, 3H), 4.12 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.34 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.97～1.87 (m, 2H), 1.65～1.59 (m, 2H), 1.25 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
５－（５－クロロ－３－フルオロ－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ペンタン酸の調製（スキームＣ－３中のステップ２）
Figure 2022515775000300
エチル５－（５－クロロ－３－フルオロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ペンタノアート（１３０ｍｇ、３９３．０６μｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（１ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（４９．４８ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を２５℃で２時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。水溶液を３Ｎ ＨＣｌでｐＨ＝６にし、ＥｔＯＡｃ（３ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（３ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物５－（５－クロロ－３－フルオロ－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ペンタン酸（１１４ｍｇ、粗製物）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 13.49 (s, 1H), 12.02 (s, 1H), 4.41 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.22 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.82～1.75 (m, 2H), 1.46～1.40 (m, 2H).
５－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ペンタン酸の調製（スキームＣ－３中のステップ２）
Figure 2022515775000301
５－（５－クロロ－３－フルオロ－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ペンタン酸（２０ｍｇ、６９．２９μｍｏｌ、１当量）及び（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（２４．３９ｍｇ、１３８．５７μｍｏｌ、２当量）のｔ－ＢｕＯＨ（２ｍＬ）中溶液を、１００℃で２０時間撹拌した。ＴＬＣは、反応がほぼ完結していることを示した。有機溶媒を減圧下で除去した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ８μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３０％～６０％、１０分）により精製した。溶出液を減圧下で除去した。化合物５－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－３－フルオロ－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ペンタン酸（１３．５ｍｇ、３１．４２μｍｏｌ、収率４５．３５％、純度９９．６７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.29 (s, 1H), 7.60～7.58 (m, 2H), 7.34 (dd, J = 2.0 Hz, 8.0 Hz, 1H), 6.69 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.46 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.31 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.21 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.75～1.72 (m, 2H), 1.41～1.38 (m, 2H). HPLC: 99.67% (220 nm), 99.67% (215 nm), 99.02% (254 nm). MS (ESI): C17H16Cl2FN5O3の質量計算値427.06 m/z 実測値428.0 [M+H]+.
化合物２１０
５－（５－（（３，４－ジフルオロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ペンタン酸を、スキームＣ－３中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000302
手順により、所望の化合物（１３．３ｍｇ、３３．５２μｍｏｌ、収率４８．３７％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.23 (s, 1H), 7.45～7.33 (m, 2H), 7.20～7.19 (m, 1H), 6.65 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.45 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.31 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.21 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.77～1.70 (m, 2H), 1.43～1.36 (m, 2H). HPLC: 99.62 % (220 nm), 99.31 % (215 nm), 99.65% (254 nm). MS (ESI): C17H16F3N5O3の質量計算値395.12, m/z 実測値396.0 [M+H]+.
化合物２１１
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－（ジメチルアミノ）エトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
Figure 2022515775000303
１－［２－（２－アミノエトキシ）エチル］－５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．１ｇ、２５１．７３μｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）（スキームＣ－３中のステップ１～３）のＭｅＯＨ（３ｍＬ）中溶液に、ホルムアルデヒド（１６３．４２ｍｇ、２．０１ｍｍｏｌ、１４９．９３μＬ、純度３７％、８当量）及びＡｃＯＨ（１．５１ｍｇ、２５．１７μｍｏｌ、１．４４μＬ、０．１当量）を加えた。混合物を２０℃で１０分間撹拌した。次いでＮａＢＨ３ＣＮ（１２６．５５ｍｇ、２．０１ｍｍｏｌ、８当量）を０℃で少しずつ加えた。得られた混合物を２０℃で１６時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物をＨ２Ｏ（５ｍＬ）でクエンチし、次いで減圧下で濃縮した。水溶液をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１５％～４５％、１０分）により精製した。水性溶液を凍結乾燥して、５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－［２－（ジメチルアミノ）エトキシ］エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン塩酸塩（２９．３ｍｇ、６８．８９μｍｏｌ、収率２７．３７％、純度１００．００％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.99 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.78～7.50 (m, 3H), 7.38 (s, 1H), 4.62 (d, J = 11.6 Hz, 4H), 3.86 (s, 2H), 3.71 (s, 2H), 3.21 (s, 2H), 2.67 (s, 6H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C18H23Cl3N6O2の質量計算値424.12, m/z 実測値425.1 [M+H]+.
スキームＣ－４
Figure 2022515775000304
スキームＣ－４中の化合物を調製するための一般的手順
スキームＣ－４中の化合物の調製（スキームＣ－４中のステップ１）
Figure 2022515775000305
５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（３．７９ｍｍｏｌ、１．０当量）、Ｒ’（Ａｒ）ＣＨＢ（ＯＨ）２（４．５５ｍｍｏｌ、１．２当量）、ピリジン（７．５８ｍｍｏｌ、２．０当量）及びＣｕ（ＯＡｃ）２（７．５８ｍｍｏｌ、２．０当量）のトルエン（２．５ｍＬ／ｍｍｏｌ）中混合物を、脱気してＯ２で３回パージし、次いで混合物をＯ２雰囲気下１１０℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＴＬＣは、反応が完結していることを示した。濾過した後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル：酢酸エチル＝１５：１から１：１）により精製して、所望の生成物を得た。
スキームＣ－４中の化合物の調製（スキームＣ－４中のステップ２）
Figure 2022515775000306
１－（Ｒ’（Ａｒ）メチル）－５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（８０６μｍｏｌ、１．０当量）、（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（１．２１ｍｍｏｌ、１．５当量）、ＢＩＮＡＰ（７５．２ｍｇ、１２１μｍｏｌ、０．１５当量）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（４０．３μｍｏｌ、０．０５当量）及びｔ－ＢｕＯＮａ（１．６１ｍｍｏｌ、２．０当量）のトルエン（４ｍＬ／ｍｍｏｌ～６ｍＬ／ｍｍｏｌ）中混合物を、脱気してＮ２で３回パージし、次いで混合物をＮ２雰囲気下９０℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル：酢酸エチル＝１５：１から１：１）により精製して、所望の生成物を得た。
スキームＣ－４中の化合物の調製（スキームＣ－４中のステップ３）
Figure 2022515775000307
１－（Ｒ’（Ａｒ）メチル）－Ｎ－（３，４－ジクロロベンジル）－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－５－アミン（４５０μｍｏｌ、１．０当量）、ＴＭＳＣｌ（８９９μｍｏｌ、２．０当量）及びＮａＩ（８９９μｍｏｌ、２．０当量）のＭｅＣＮ（３ｍＬ／ｍｍｏｌ～７ｍＬ／ｍｍｏｌ）中混合物を、脱気してＮ２で３回パージし、次いで混合物をＮ２雰囲気下７０℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を水でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル：酢酸エチル＝４：１から１：１）により精製して、所望の生成物を得た。
化合物２１２
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－フェニル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンの調製
５－クロロ－７－メトキシ－１－フェニル－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジンの調製（スキームＣ－４中のステップ１）
Figure 2022515775000308
５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（７００ｍｇ、３．７９ｍｍｏｌ、１．０当量）、フェニルボロン酸（５５５ｍｇ、４．５５ｍｍｏｌ、１．２当量）、ピリジン（６００ｍｇ、７．５８ｍｍｏｌ、６１２μＬ、２．０当量）及びＣｕ（ＯＡｃ）２（１．３８ｇ、７．５８ｍｍｏｌ、２．０当量）のトルエン（１．０ｍＬ）中混合物を、脱気してＯ２で３回パージし、次いで混合物をＯ２雰囲気下１１０℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＴＬＣは、反応が完結していることを示した。濾過した後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル：酢酸エチル＝１５：１から１：１）により精製した。化合物５－クロロ－７－メトキシ－１－フェニル－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（２１０ｍｇ、８０６μｍｏｌ、収率２１．２％）を白色固体として得た。
Ｎ－［（３，４－ジクロロフェニル）メチル］－７－メトキシ－１－フェニル－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－５－アミンの調製（スキームＣ－４中のステップ２）
Figure 2022515775000309
５－クロロ－７－メトキシ－１－フェニル－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（２１０ｍｇ、８０６μｍｏｌ、１．０当量）、（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（２１３ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ、１６１μＬ、１．５当量）、［１－（２－ジフェニルホスファニル－１－ナフチル）－２－ナフチル］－ジフェニル－ホスファン（７５．２ｍｇ、１２１μｍｏｌ、０．１５当量）、（１Ｅ，４Ｅ）－１，５－ジフェニルペンタ－１，４－ジエン－３－オンパラジウム（３６．９ｍｇ、４０．３μｍｏｌ、０．０５当量）及びナトリウム２－メチルプロパン－２－オラート（１５５ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ、２．０当量）のトルエン（５．０ｍＬ）中混合物を、脱気してＮ２で３回パージし、次いで混合物をＮ２雰囲気下９０℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル：酢酸エチル＝１５：１から１：１）により精製して、化合物Ｎ－［（３，４－ジクロロフェニル）メチル］－７－メトキシ－１－フェニル－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－５－アミン（１８０ｍｇ、粗製物）を白色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.90 (s, 1H), 7.50 (d, J=8.0 Hz, 2H), 7.40～7.42 (m, 3H), 7.30～7.38 (m, 2H), 7.16 (s, 1 H), 5.24 (s, 1H), 4.59 (d, J = 8 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H).
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－フェニル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンの調製（スキームＣ－４中のステップ３）
Figure 2022515775000310
Ｎ－［（３，４－ジクロロフェニル）メチル］－７－メトキシ－１－フェニル－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－５－アミン（１８０ｍｇ、４５０μｍｏｌ、１．０当量）、ＴＭＳＣｌ（９７．７ｍｇ、８９９μｍｏｌ、１１４μＬ、２．０当量）及びＮａＩ（１３５ｍｇ、８９９μｍｏｌ、２．０当量）のＭｅＣＮ（１．０ｍＬ）中混合物を、脱気してＮ２で３回パージし、次いで混合物をＮ２雰囲気下７０℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を水（２．０ｍＬ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（５．０ｍＬ、３．０）で抽出した。合わせた有機層をブライン（３．０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル：酢酸エチル＝６：１から１：１）により精製した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－フェニル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（５０．０ｍｇ、１２９μｍｏｌ、収率２８．８％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.22 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.67 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.55～7.62 (m, 2H), 7.47 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.30～7.40 (m, 2H), 6.67 (s, 1H), 4.51 (d, J = 6.0 Hz, 2H). HPLC: 97.5% (220 nm), 97.3% (215 nm), 97.1% (254 nm). LCMS: C18H13Cl2N5Oに対して, 385.05, m/z 実測値386.0 [M+H]+.
化合物２１３
１－シクロプロピル－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－４中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000311
手順により、所望の化合物（８０．０ｍｇ、２２８μｍｏｌ、収率４８．９％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.0 (s, 1H), 7.56 (d, J = 8.0 Hz 2H), 7.47 (s, 1H), 7.31 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.54 (s, 1H), 4.45 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 4.19 (br s, 1H), 1.08～1.13 (m, 2H), 0.96～0.99 (m, 2H). HPLC: 95.4% (220 nm), 92.0% (215 nm), 93.7% (254 nm). LCMS: C15H13Cl2N5Oに対して, 349.05, m/z 実測値350.0 [M+H]+.
化合物２１４
１－シクロペンチル－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
５－クロロ－１－シクロペンチル－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジンの調製（スキームＣ－４中のステップ１）
Figure 2022515775000312
化合物５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（１ｇ、５．４２ｍｍｏｌ、１当量）、ブロモシクロペンタン（９６８．８６ｍｇ、６．５０ｍｍｏｌ、６９７．０２μＬ、１．２当量）、Ｃｓ２ＣＯ３（３．５３ｇ、１０．８４ｍｍｏｌ、２当量）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中混合物を、脱気してＮ２で３回パージし、次いで混合物をＮ２雰囲気下５０℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。混合物をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２０ｍＬ×３）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム長：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、シリカゲル１００～２００メッシュ、石油エーテル／酢酸エチル＝１／１）により精製して、化合物５－クロロ－１－シクロペンチル－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（５００ｍｇ、１．９８ｍｍｏｌ、収率３６．５５％）を白色固体として得た。化合物５－クロロ－２－シクロペンチル－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（５００ｍｇ、１．９８ｍｍｏｌ、収率３６．５２％）を白色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.94 (s, 1H), 5.23～5.30 (m, 1H), 4.15 (s, 3H), 2.04～2.09 (m, 4H), 1.88～1.89 (m, 2H), 1.65～1.68 (m,2 H).
１－シクロペンチル－Ｎ－（３，４－ジクロロベンジル）－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－５－アミンの調製（スキームＣ－４中のステップ２）
Figure 2022515775000313
化合物５－クロロ－１－シクロペンチル－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（０．５ｇ、１．９８ｍｍｏｌ、１当量）、（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（４５２．８２ｍｇ、２．５７ｍｍｏｌ、３４３．０５μＬ、１．３当量）、ｔ－ＢｕＯＮａ（２８５．２３ｍｇ、２．９７ｍｍｏｌ、１．５当量）、ＢＩＮＡＰ（１２３．２０ｍｇ、１９７．８μｍｏｌ、０．１当量）及びＰｄ２（ｄｂａ）３（１１３．７７ｍｇ、１９７．８６μｍｏｌ、０．１当量）のトルエン（５ｍＬ）中混合物を、脱気してＮ２で３回パージし、次いで混合物をＮ２雰囲気下８０℃で１５時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム長：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、シリカゲル３００～４００メッシュ、石油エーテル／酢酸エチル＝３０／１、１５／１）により精製して、化合物１－シクロペンチル－Ｎ－（３，４－ジクロロベンジル）－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－５－アミン（３００ｍｇ、７６４．７６μｍｏｌ、収率３８．６５％）を黄色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.66 (s, 1H), 7.30 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.28～7.30 (m, 1H), 7.12～7.14 (m, 1H), 5.23～5.28 (m, 1H), 5.15～5.18 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.52～4.54 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 1.99～2.04 (m, 4H), 1.84～1.85 (m, 2H), 1.60～1.62 (m, 2H).
１－シクロペンチル－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－４中のステップ３）
Figure 2022515775000314
１－シクロペンチル－Ｎ－（３，４－ジクロロベンジル）－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－５－アミン（２００ｍｇ、５０９．８４μｍｏｌ、１．００当量）のＭｅＣＮ（２ｍＬ）中溶液に、ＴＭＳＣｌ（１１０．７８ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ、１２９．４２μＬ、２．００当量）及びＮａＩ（１５２．８４ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ、２．００当量）を加えた。混合物を７０℃で１５時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。混合物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ ２００ｍｍ×４０ｍｍ １０μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：４０％～６０％、１０分）により更に精製して、化合物１－シクロペンチル－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（２４ｍｇ、６３．４５μｍｏｌ、収率１２．４４％）を白色固体として得た。1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.52～7.56 (m, 2H), 7.50～7.52 (m, 1H), 7.30～7.32 (m, 1H), 5.47～5.55 (m, 1H), 4.56～4.57 (d, J=6.8 Hz, 2H), 2.07～2.12 (m, 4H), 2.03～2.07 (m, 2H), 1.65～1.92 (m, 2H). HPLC:98.7% (215 nm), 98.8% (220 nm), 98.5% (254 nm). MS (ESI): C17H17Cl2N5Oの質量計算値377.10, m/z 実測値378.1 [M+H]+.
化合物２１５
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（ピロリジン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンＴＦＡ塩の調製
ｔｅｒｔ－ブチル３－（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピロリジン－１－カルボキシラート及びｔｅｒｔ－ブチル３－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）ピロリジン－１－カルボキシラートの調製（スキームＣ－４中のステップ１）
Figure 2022515775000315
５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（２．００ｇ、１０．８ｍｍｏｌ、１当量）のＤＭＦ（２０．０ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（３．００ｇ、２１．７ｍｍｏｌ、２．００当量）及びｔｅｒｔ－ブチル３－ブロモピロリジン－１－カルボキシラート（３．５２ｇ、１４．０ｍｍｏｌ、１．３０当量）を加えた。混合物を５０℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１、Ｒｆ１＝０．６５、Ｒｆ２＝０．４７）は、化合物Ｉｎｔ－Ｂが完全に消費され、多数の新規スポットが生成されることを示した。反応混合物を２５℃でＨ２Ｏ（１００ｍＬ）を加えることによりクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（５０．０ｍＬ、３０．０ｍＬ、２０．０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１から１：１）により精製した。化合物ｔｅｒｔ－ブチル３－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピロリジン－１－カルボキシラート（１．２０ｇ、３．３９ｍｍｏｌ、収率３１．３％）を白色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.03 (d, J = 16.40, 1H), 5.51～5.54 (m, 1H), 4.24 (br s, 3H), 3.68～3.91 (m, 3H), 3.55～3.57 (m, 1H), 2.34～2.63 (m, 2H), 1.48 (s, 9H).化合物ｔｅｒｔ－ブチル３－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）ピロリジン－１－カルボキシラート（５００ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ、収率１３．０％）を白色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.04 (s, 1H), 5.18～5.21 (m, 1H), 4.25 (s, 3H), 3.97～4.02 (m, 2H), 3.59～3.61 (m, 2H), 2.52～2.59 (m, 2H), 1.49 (s, 9H).
ｔｅｒｔ－ブチル３－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピロリジン－１－カルボキシラートの調製（スキームＣ－４中のステップ２）
Figure 2022515775000316
ｔｅｒｔ－ブチル３－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピロリジン－１－カルボキシラート（４００ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ、１．００当量）、（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（２３９ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ、１８０μＬ、１．２０当量）、ｔ－ＢｕＯＮａ（１６２ｍｇ、１．７０ｍｍｏｌ、１．５０当量）、ＢＩＮＡＰ（７０．４ｍｇ、１１３μｍｏｌ、０．１０当量）及びＰｄ２（ｄｂａ）３（１０３ｍｇ、１１３μｍｏｌ、０．１０当量）を、マイクロ波管中で１，４－ジオキサン（８．００ｍＬ）に溶解した。密封した管をマイクロ波下１２０℃で２０分間加熱した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝１：２、Ｒｆ＝０．５４）は、ｔｅｒｔ－ブチル３－（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピロリジン－１－カルボキシラートが完全に消費され、多くの新規スポットが生成されることを示した。２つの反応物を合わせて後処理した。ノートブックページＥＴ２３８２８－１０上の粗生成物（１００ｍｇ）をＥＴ２３８２８－１１に合わせて、更に後処理した。合わせた反応混合物を減圧下で濃縮して、溶媒を除去した。残渣をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１から１：１）により精製した。化合物ｔｅｒｔ－ブチル３－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ピロリジン－１－カルボキシラート（４５０ｍｇ、９１２μｍｏｌ、収率３５．９％）を黄色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.77 (d, J = 5.60 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 1.60 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 8.40 Hz, 1H), 7.23 (dd, J = 8.40, 2.00 Hz, 1H), 5.38～5.45 (m, 1H), 4.63 (d, J = 6.40 Hz, 2H), 4.07 (d, J = 4.80 Hz, 3H), 3.68～3.83 (m, 3H), 3.51～3.54 (m, 1H), 2.49～2.62 (m, 1H), 2.30～2.37 (m, 1H), 1.47 (s, 9H).
化合物２１６
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（ピロリジン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンＴＦＡ塩の調製（スキームＣ－４中のステップ３）
Figure 2022515775000317
ｔｅｒｔ－ブチル３－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ピロリジン－１－カルボキシラート（２６０ｍｇ、５２７μｍｏｌ、１．００当量）のＭｅＣＮ（２．００ｍＬ）中溶液に、ＴＭＳＣｌ（１７１ｍｇ、１．５８ｍｍｏｌ、２００μＬ、３．００当量）及びＮａＩ（２３７ｍｇ、１．５８ｍｍｏｌ、３．００当量）を加えた。混合物を７０℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳは、ｔｅｒｔ－ブチル３－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピロリジン－１－カルボキシラートが完全に消費され、所望の質量を有する１つの主要なピークが検出されていることを示した。反応混合物を２５℃でＨ２Ｏ（２０．０ｍＬ）を加えることによりクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１０．０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。ノートブックページＥＴ２３８２８－１３上の粗生成物（１００ｍｇ）をＥＴ２３８２８－１４に合わせて、更に精製した。合わせた粗生成物を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ ２００ｍｍ×４０ｍｍ １０μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～４０％、１０分）により精製して、所望の化合物を得た。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－ピロリジン－３－イル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（８０ｍｇ、１６０．５６μｍｏｌ、収率２２．０％、純度９９％、ＴＦＡ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.30 (s, 1H), 8.99～9.03 (m, 2H), 7.69 (s, 1H), 7.57～7.59 (m, 2H), 7.30～7.32 (m, 1H), 6.75～6.79 (m, 1H), 5.75～5.78 (m, 1H), 4.48 (d, J = 5.60 Hz, 2H), 3.60～3.65 (m, 2H), 3.35～3.38 (m, 2H), 2.37～2.42 (m, 1H), 2.32～2.33 (m, 1H). HPLC: 99.05% (220 nm), 98.82% (215 nm), 98.60% (254 nm). MS (ESI): C16H16Cl2N6Oの質量計算値378, m/z 実測値379.0 [M+H]+.
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－２－（ピロリジン－３－イル）－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンＴＦＡ塩を、スキームＣ－４中のステップ２～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000318
手順により、所望の化合物（２５．４ｍｇ、６７．０μｍｏｌ、収率２２．０％、ＴＦＡ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.78～10.80 (m, 1H), 8.92～9.05 (m, 2H), 7.98 (s, 1H), 7.54～7.59 (m, 2H), 7.32 (dd, J = 8.40 Hz, 2.00 Hz, 1H), 6.59～6.61 (m, 1H), 5.25 (m, 1H), 4.45 (d, J = 6.00 Hz, 2H), 3.37～3.42 (m, 4H), 2.31～2.32 (m, 2H). HPLC: 97.01% (220 nm), 97.25% (215 nm), 95.78% (254 nm). LCMS: C16H16Cl2N6Oに対して, 378.03, m/z 実測値379.0 [M+H]+.
化合物２１７
５－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ペンタンヒドロキサム酸の調製
化合物２１８
メチル５－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ペンタノアートを、スキームＣ－４中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000319
手順により、所望の化合物メチル５－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ペンタノアート（１１０ｍｇ、２５９．２６μｍｏｌ、収率４５．４５％）を白色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 11.30 (d, J = 1.2 Hz 1H), 7.57 (s, 1H), 7.39 (m, 1H), 7.34 (m, 1H), 7.17 (m, 1H), 5.38 (s, 1H), 4.54 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.43 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.55 (s, 3H), 2.26 (m, 2H), 1.85 (m, 2H), 1.53 (m, 2H). MS (ESI): C18H19Cl2N5O3の質量計算値423.1, m/z 実測値424.1 [M+H]+. HPLC: 94.32% (220 nm), 92.49% (215 nm), 93.91% (254 nm).
化合物２１９
５－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ペンタン酸の調製
Figure 2022515775000320
エチル５－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ペンタノアート（１００ｍｇ、２３５．６９μｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（１ｍＬ）、ＴＨＦ（１ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（９．８９ｍｇ、２３５．６９μｍｏｌ、１当量）を加えた。混合物を２５℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を水（５ｍＬ）で希釈し、２Ｎ ＨＣｌでｐＨ＝２に調節した。混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×２）で抽出した。濾過した後、濾液を濃縮して、５－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ペンタン酸（６５ｍｇ、１５８．４４μｍｏｌ、収率６７．２２％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.97 (s, 1H), 11.04 (s, 1H), 7.56 (m, 3H), 7.30 (m, 1H), 6.53 (s, 1H), 4.44 (m, 2H), 4.40 (m, 2H), 2.17 (m, 2H), 1.73 (m, 2H), 1.37 (m, 2H). MS (ESI): C17H17Cl2N5O3の質量計算値409.1, m/z 実測値410.1 [M+H]+. HPLC: 97.79% (220 nm), 99.35% (215 nm), 98.41% (254 nm).
５－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ペンタンヒドロキサム酸の調製
Figure 2022515775000321
５－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ペンタン酸（４０ｍｇ、９７．５０μｍｏｌ、１当量）のＤＭＦ（０．４ｍＬ）中溶液に、２５℃でＤＩＰＥＡ（５０．４１ｍｇ、３９０．００μｍｏｌ、６７．９３μＬ、４当量）及びＨＡＴＵ（４０．７８ｍｇ、１０７．２５μｍｏｌ、１．１当量）を加えた。添加後、混合物をこの温度で１０分間撹拌し、次いでＮＨ２ＯＨ・ＨＣｌ（１３．５５ｍｇ、１９５．００μｍｏｌ、２当量）を２５℃で加えた。得られた混合物を２５℃で１２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、５－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ペンタン酸の２０％以上が残っていることを示した。数種の新規ピークがＬＣ－ＭＳ上で示され、所望の化合物約７０％が検出された。混合物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×４０ｍｍ １０μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～５０％、１０分）により精製した。化合物５－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ペンタンヒドロキサム酸（２７ｍｇ、６３．４９μｍｏｌ、収率６５．１２％）を黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.31 (d, J = 5.6 Hz 1H), 7.57 (m, 2H), 7.32 (m, 1H), 6.63 (m, 1H), 4.45 (m, 2H), 4.38 (m, 2H), 1.91 (m, 2H), 1.74 (m, 2H), 1.35 (m, 2H). MS (ESI): C17H18Cl2N6O3の質量計算値424.1, m/z 実測値425.1 [M+H]+. HPLC: 99.36% (220 nm), 98.61% (215 nm), 99.45% (254 nm).
化合物２２０
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－（メチルスルホニル）エトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
１－（２－（２－ブロモエトキシ）エチル）－５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジンを、スキームＣ－４中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000322
手順により、所望の化合物１－［２－（２－ブロモエトキシ）エチル］－５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（３７０ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ、収率４０．７０％）を白色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.06 (s, 1H), 4.75 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.24 (s, 3H), 3.95 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.68 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.31 (t, J = 6.0 Hz, 2H).化合物２－［２－（２－ブロモエトキシ）エチル］－５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（４００ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ、収率４４．００％）を白色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz)δ8.17 (s, 1H), 4.63 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 4.25 (s, 3H), 3.95 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.74 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.39 (t, J = 6.4 Hz, 2H).
５－クロロ－７－メトキシ－１－（２－（２－（メチルスルホニル）エトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジンの調製
Figure 2022515775000323
１－［２－（２－ブロモエトキシ）エチル］－５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（３７０ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ、１当量）及びメタンスルフィン酸ナトリウム（２２５．１２ｍｇ、２．２１ｍｍｏｌ、２当量）のＤＭＳＯ（４ｍＬ）中混合物を、２５℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。残渣をＨ２Ｏ（４ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（４ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２ｍＬ×２）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物５－クロロ－７－メトキシ－１－［２－（２－メチルスルホニルエトキシ）エチル］ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（２８０ｍｇ、８３６．３７μｍｏｌ、収率７５．８６％）を白色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.04 (s, 1H), 4.75 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.24 (s, 3H), 3.97 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.86 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.12 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 2.75 (s, 3H).
５－クロロ－１－（２－（２－（メチルスルホニル）エトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
Figure 2022515775000324
５－クロロ－７－メトキシ－１－［２－（２－メチルスルホニルエトキシ）エチル］ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（１３０ｍｇ、３８８．３２μｍｏｌ、１当量）及びＮａＩ（１７４．６１ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ、３当量）のＭｅＣＮ（３ｍＬ）中混合物に、０℃でＴＭＳＣｌ（１２６．５６ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ、１４７．８５μＬ、３当量）を滴下添加した。次いで混合物を２５℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物をＨ２Ｏ（３ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（３ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物５－ヨード－１－［２－（２－メチルスルホニルエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（２２０ｍｇ、粗製物）を茶褐色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.02 (s, 1H), 4.73～4.68 (m, 2H), 3.88～3.84 (m, 2H), 3.77～3.68 (m, 2H), 3.27～3.24 (m, 2H), 2.78～2.77 (m, 3H).
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－（メチルスルホニル）エトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
Figure 2022515775000325
５－ヨード－１－［２－（２－メチルスルホニルエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１６０ｍｇ、３８８．１６μｍｏｌ、１当量）及び（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（１３６．６６ｍｇ、７７６．３２μｍｏｌ、１０３．５３μＬ、２当量）のＮＭＰ（２ｍＬ）中混合物を、１６０℃で２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。濾過した後、濾液を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３０％～５０％、１０分）により精製した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２－メチルスルホニルエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（３９．５ｍｇ、８５．４６μｍｏｌ、収率２２．０２％、純度９９．６％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.07 (s, 1H), 7.59～7.57 (m, 3H), 7.33～7.31 (m, 1H), 6.56 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.60 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.47 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.83 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.71 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.27 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.80 ( s, 3H). HPLC: 99.57% (220 nm), 99.37% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C17H19Cl2N5O4Sの質量計算値459.05, m/z 実測値460.1 [M+H]+.
化合物２２１
（１－（３－（１Ｈ－テトラゾール－５－イル）プロピル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン）の調製
１－（３－（１Ｈ－テトラゾール－５－イル）プロピル）－Ｎ－（３，４－ジクロロベンジル）－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－５－アミンの調製
Figure 2022515775000326
４－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ブタンニトリル（０．６００ｇ、１．５３ｍｍｏｌ、１．００当量）のトルエン（１０．０ｍＬ）中溶液に、ＴＭＳＮ３（１．１０ｇ、９．５１ｍｍｏｌ、１．２５ｍＬ、６．２０当量）及びジブチル（オキソ）スズ（４５８ｍｇ、１．８４ｍｍｏｌ、１．２０当量）を加えた。混合物を１１０℃で１５時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を水（１０．０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（５．００ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０．０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物を更には精製せずに次のステップに使用した。化合物Ｎ－［（３，４－ジクロロフェニル）メチル］－７－メトキシ－１－［３－（１Ｈ－テトラゾール－５－イル）プロピル］ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－５－アミン（０．３００ｇ、６９１μｍｏｌ、収率４５．１％）を黄色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.67 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.31 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.55～4.17 (m, 4H), 4.00 (s, 3H), 2.79～2.76 (m, 2H), 2.25 (s, 2H).
（１－（３－（１Ｈ－テトラゾール－５－イル）プロピル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン）の調製（スキームＣ－４中のステップ３）
Figure 2022515775000327
Ｎ－［（３，４－ジクロロフェニル）メチル］－７－メトキシ－１－［３－（１Ｈ－テトラゾール－５－イル）プロピル］ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－５－アミン（０．３００ｇ、６９１μｍｏｌ、１．００当量）のＭｅＣＮ（１０．０ｍＬ）中溶液に、ＴＭＳＣｌ（１５０ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ、１７５μＬ、２．００当量）及びＮａＩ（２０７ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ、２．００当量）を加えた。混合物を７０℃で１２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を水（１０．０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（１０．０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５．００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×４０ｍｍ １０μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３３％～５３％、１０分）により精製した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［３－（１Ｈ－テトラゾール－５－イル）プロピル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．１００ｇ、２３８μｍｏｌ、収率３４．５％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.25 (s, 1H), 7.58 (d, J = 5.2 Hz, 3H), 7.31 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.79 (s, 1H), 4.52～4.46 (m, 4H), 2.82～2.78 (m, 2H), 2.25～2.18 (m, 2H). HPLC: 98.61% (220 nm), 98.07% (254 nm), 98.98% (215 nm). LCMS (ESI): C18H15Cl2N9Oの質量計算値419.08, m/z 実測値420.0 [M+H]+.
化合物２２２
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（４－ピリジル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンの調製
Ｎ－［（３，４－ジクロロフェニル）メチル］－７－メトキシ－１－（４－ピリジル）ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－５－アミンの調製（スキームＣ－４中のステップ２）
Figure 2022515775000328
Ｎ－［（３，４－ジクロロフェニル）メチル］－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－５－アミン（２１０ｍｇ、４４４μｍｏｌ、１．００当量）、４－ピリジルボロン酸（６５．５ｍｇ、５３３μｍｏｌ、１．２０当量）、Ｃｕ（ＯＡｃ）２（１６１ｍｇ、８８８μｍｏｌ、２．００当量）及びピリジン（７０．２ｍｇ、８８８μｍｏｌ、７１．６μＬ、２．００当量）のトルエン（１０．０ｍＬ）中混合物を、脱気してＯ２で３回パージし、次いで混合物をＯ２雰囲気下１１０℃で１２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（ＳｉＯ２、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１、Ｒｆ＝０．５５）により精製した。化合物Ｎ－［（３，４－ジクロロフェニル）メチル］－７－メトキシ－１－（４－ピリジル）ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－５－アミン（４０．０ｍｇ、９９．７μｍｏｌ、収率２２．５％）を黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.66 (d, J = 6.00 Hz, 2H), 8.20 (s, 1H), 7.71～7.78 (m, 3H), 7.56～.60 (m, 2H), 7.34～7.36 (m, 1H), 4.53 (d, J = 6.00 Hz, 2H), 4.00～4.03 (m, 3H).
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（４－ピリジル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンの調製（スキームＣ－４中のステップ３）
Figure 2022515775000329
Ｎ－［（３，４－ジクロロフェニル）メチル］－７－メトキシ－１－（４－ピリジル）ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－５－アミン（４０．０ｍｇ、９９．７μｍｏｌ、１．００当量）のＭｅＣＮ（２．００ｍＬ）中溶液に、ＴＭＳＣｌ（３２．５ｍｇ、２９９μｍｏｌ、３８．０μＬ、３．００当量）及びＮａＩ（４４．８ｍｇ、２９９μｍｏｌ、３．００当量）を加えた。混合物を７０℃で３時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を２５℃でＨ２Ｏ（２０．０ｍＬ）にてクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１０．０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件：カラム：Ｗｅｌｃｈ Ｕｌｔｉｍａｔｅ ＡＱ－Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２５％～５５％、１２分）により精製した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（４－ピリジル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１０．０ｍｇ、２０．０μｍｏｌ、収率２０．０％、ＴＦＡ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.60～11.63 (m, 1H), 8.77 (d, J = 4.80 Hz, 2H), 8.27～8.32 (m, 2H), 8.21 (s, 1H), 7.60～7.61 (m, 2H), 7.36 (dd, J = 8.40 Hz, 2.00 Hz, 1 H), 6.94～6.95 (m, 1H), 4.53～4.54 (d, J = 6.00 Hz, 2H). LCMS: C17H12Cl2N6Oに対して, 386, m/z 実測値387.0 [M+H]+. HPLC: 99.18% (220 nm), 99.13% (215 nm), 98.62% (254 nm).
化合物２２３
２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）プロパン酸の調製
化合物２２４
メチル２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）プロパノアートを、スキームＣ－４中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000330
手順により、所望の化合物メチル２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）プロパノアート（２０．０ｍｇ、５０．２２μｍｏｌ、収率１９．４２％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.98 (s, 1H), 7.61～7.59 (m, 2H), 7.35～7.33 (m, 1H), 7.14 ( s, 1H), 5.45 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 4.50 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.66 (s, 3H), 1.70 (d, J = 7.2 Hz, 3H). HPLC: 96.94 % (220 nm), 96.74 % (215 nm), 100.00 % (254 nm). MS (ESI): C16H15Cl2N5O3の質量計算値395.06, m/z 実測値396.1 [M+H]+.
化合物２２５
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－２－（１－ヒドロキシプロパン－２－イル）－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
Figure 2022515775000331
メチル２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル］プロパノアート（１００ｍｇ、２５２．３８μｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（２ｍＬ）中溶液に、０℃でＤＩＢＡＬ－Ｈ（１Ｍ、１．２６ｍＬ、５当量）を加えた。次いで混合物を２５℃で６時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を０℃でＨ２Ｏ（２ｍＬ）にてクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～３５％、１０分）により精製して、５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－２－（２－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（２９．５ｍｇ、７９．８０μｍｏｌ、収率３１．６２％、純度９９．６％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.87 (s, 1H), 7.61～7.59 (m, 2H), 7.35～7.33 (m, 1H), 7.21 (s, 1H), 4.51～4.45 (m, 3H), 3.69～3.65 (m, 2H), 1.39 (d, J = 6.8 Hz, 3H). HPLC: 99.60 % (220 nm), 99.44 % (215 nm), 100.00 % (254 nm). MS (ESI): C15H15Cl2N5O2の質量計算値367.06, m/z 実測値368.1 [M+H]+.
２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）プロパン酸の調製
Figure 2022515775000332
メチル２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル］プロパノアート（１００ｍｇ、２５２．３８μｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（１ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（３１．７７ｍｇ、７５７．１４μｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を２５℃で３時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ＭｅＯＨを除去した。水溶液を２Ｎ ＨＣｌでｐＨ＝４にした。固体が生成され、これを濾取した。残渣を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件カラム：Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５ｕ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～５０％、１０分）により精製した。化合物２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル］プロパン酸（１９．１ｍｇ、４９．９７μｍｏｌ、収率１９．８０％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.04 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.61～7.59 (m, 2H), 7.35～7.33 (m, 1H), 7.03 ( s, 1H), 5.29 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.50 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 1.69 (d, J = 6.8 Hz, 3H). HPLC: 100.00 % (220 nm), 100.00 % (215 nm), 100.00 % (254 nm). MS (ESI): C15H13Cl2N5O3の質量計算値381.04, m/z 実測値382.0 [M+H]+.
化合物２２６
２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパン酸の調製
化合物２２７
メチル２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパノアートを、スキームＣ－４中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000333
手順により、所望の化合物メチル２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパノアート（２２．１ｍｇ、５５．７８μｍｏｌ、収率１９．４２％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.63 (s, 1H), 7.60～7.58 (m, 2H), 7.34～7.32 (m, 1H), 6.73 ( s, 1H), 5.73 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 4.49 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.62 (s, 3H), 1.69 (d, J = 7.6 Hz, 3H). HPLC: 99.27 % (220 nm), 99.09 % (215 nm), 99.58 % (254 nm). MS (ESI): C16H15Cl2N5O3の質量計算値395.06, m/z 実測値396.1 [M+H]+.
化合物２２８
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－ヒドロキシプロパン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
Figure 2022515775000334
メチル２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］プロパノアート（９０ｍｇ、２２７．１４μｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（１ｍＬ）中溶液に、０℃でＤＩＢＡＬ－Ｈ（１Ｍ、１．３６ｍＬ、６当量）を加えた。次いで混合物を２５℃で６時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を０℃でＨ２Ｏ（２ｍＬ）にてクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２５％～４５％、１０分）により精製した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（２－ヒドロキシ－１－メチル－エチル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１４．３ｍｇ、３８．８４μｍｏｌ、収率１７．１０％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.60～7.58 (m, 3H), 7.34～7.32 (m, 1H), 6.85 (s, 1H), 5.10 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 4.49 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.62～3.58 (m, 2H), 1.36 (d, J = 6.8 Hz, 3H). HPLC: 99.23 % (220 nm), 98.64 % (215 nm), 100.00 % (254 nm). MS (ESI): C15H15Cl2N5O2の質量計算値367.06, m/z 実測値368.1 [M+H]+.
２－（５－クロロ－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパン酸の調製
Figure 2022515775000335
メチル２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパノアート（１６０ｍｇ、５９１．１２μｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（１ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（７４．４２ｍｇ、１．７７ｍｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を２５℃で２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ＭｅＯＨを除去した。水溶液を３Ｎ ＨＣｌでｐＨ＝４にし、ＥｔＯＡｃ（２ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物２－（５－クロロ－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパン酸（２００ｍｇ、粗製物）を白色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.62～7.61 (m, 1H), 5.67～5.65 (m, 1H), 1.03～1.04 (m, 3H).
２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパン酸の調製
Figure 2022515775000336
２－（５－クロロ－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパン酸（１００ｍｇ、４１２．１７μｍｏｌ、１当量）及び（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（１４５．１２ｍｇ、８２４．３４μｍｏｌ、１０９．９４μＬ、２当量）のｔ－ＢｕＯＨ（３ｍＬ）中混合物を、１００℃で１２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ｔ－ＢｕＯＨを除去した。残渣を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０ｍｍ×２５ｍｍ ５ｕ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～４０％、２０分）により精製した。化合物２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］プロパン酸（２６ｍｇ、６８．０３μｍｏｌ、収率１６．５０％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.60～7.57 (m, 3H), 7.34～7.32 (m, 1H), 6.67 ( s, 1H), 5.62 (q, J = 7.6 Hz, 1H), 4.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 1.69 (d, J = 7.6 Hz, 3H). HPLC: 99.16% (220 nm), 99.07% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C15H13Cl2N5O3の質量計算値381.04, m/z 実測値382.0 [M+H]+.
スキームＣ－５
Figure 2022515775000337
スキームＣ－５中の化合物を調製するための一般的手順
スキームＣ－５中の化合物の調製（スキームＣ－５中のステップ１）
Figure 2022515775000338
５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（３．７９ｍｍｏｌ、１当量）及びアルケン（４．９３ｍｍｏｌ、１．３当量）のジオキサン（４ｍＬ／ｍｍｏｌ）中混合物に、２５℃でＣｓ２ＣＯ３（１８９．６２μｍｏｌ、０．０５当量）を加えた。次いで混合物を１００℃で１０時間撹拌した。ＴＬＣ及びＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。溶媒を減圧下で除去した。残渣をＥｔＯＡｃに溶解し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム１２ｇ、３０ｍＬ／分で０～２５％酢酸エチル／石油エーテル濃度勾配の溶出液）により精製した。溶出液を減圧下で除去して、所望の化合物を得た。
スキームＣ－５中の化合物の調製（スキームＣ－５中のステップ２）
Figure 2022515775000339
３－（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパノイル－Ｒ’（Ｘ）（５５４．１８μｍｏｌ、１当量）及びＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１．６６ｍｍｏｌ、３当量）のＭｅＯＨ（３ｍＬ／ｍｍｏｌ～５ｍＬ／ｍｍｏｌ）又はＴＨＦ（３ｍＬ／ｍｍｏｌ～５ｍＬ／ｍｍｏｌ）及びＨ２Ｏ（３ｍＬ／ｍｍｏｌ～５ｍＬ／ｍｍｏｌ）中溶液を、２５℃で３時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。有機溶媒を減圧下で除去した。水溶液を２Ｎ ＨＣｌでゆっくりｐＨ＝５にし、多少の固体が生成された。濾過した後、固体を集め、減圧下で濃縮した。
スキームＣ－５中の化合物の調製（スキームＣ－５中のステップ３）
Figure 2022515775000340
３－（５－クロロ－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパノイル－Ｒ’（Ｘ）（４１２．１７μｍｏｌ、１当量）及び（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（６１８．２６μｍｏｌ～１．２４ｍｍｏｌ、１．５当量～３当量）のｔ－ＢｕＯＨ（３ｍＬ／ｍｍｏｌ～１０ｍＬ／ｍｍｏｌ）中混合物を、１００℃～１４０℃で１０時間～２０時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製した。カラム：ａ）Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｂ）Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｃ）Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １５０ｍｍ×２５ｍｍ ５μｍ。移動相：ａ）［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～５０％、１０分；ｂ）［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＡＣＮ］；Ｂ％：３２％～５２％、１０．５分。溶媒を凍結乾燥下で除去して、所望の生成物を得た。
化合物２２９
３－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパン酸の調製
メチル３－（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパノアートの調製（スキームＣ－５中のステップ１）
Figure 2022515775000341
５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（０．７ｇ、３．７９ｍｍｏｌ、１当量）及びメチルプロパ－２－エノアート（４２４．４２ｍｇ、４．９３ｍｍｏｌ、４４３．９６μＬ、１．３当量）のジオキサン（１５ｍＬ）中混合物に、２５℃でＣｓ２ＣＯ３（６１．７８ｍｇ、１８９．６２μｍｏｌ、０．０５当量）を加えた。次いで混合物を１００℃で１０時間撹拌した。ＴＬＣ及びＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。溶媒を減圧下で除去した。残渣をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に溶解し、ブライン（１０ｍＬ×２）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム１２ｇ、３０ｍＬ／分で０～２５％酢酸エチル／石油エーテル濃度勾配の溶出液）により精製した。溶出液を減圧下で除去した。化合物メチル３－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）プロパノアート（０．４ｇ、１．４８ｍｍｏｌ、収率３８．９７％）を白色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.02 (s, 1H), 4.84 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.24 (s, 3H), 3.67 (s, 3H), 2.98 (t, J = 6.8 Hz, 2H).化合物メチル３－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパノアート（０．３ｇ、１．１１ｍｍｏｌ、収率２９．２３％）を白色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.09 (s, 1H), 4.72 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.23 (s, 3H), 3.68 (s, 3H), 3.07 (t, J = 6.8 Hz, 2H).
３－（５－クロロ－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパン酸の調製（スキームＣ－５中のステップ２）
Figure 2022515775000342
メチル３－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパノアート（０．１５ｇ、５５４．１８μｍｏｌ、１当量）及びＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（６９．７６ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ、３当量）のＭｅＯＨ（１ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１ｍＬ）及びＴＨＦ（１ｍＬ）中溶液を、２５℃で３時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。有機溶媒を減圧下で除去した。水溶液を２Ｎ ＨＣｌでゆっくりｐＨ＝５にし、多少の固体が生成された。濾過した後、固体を集め、減圧下で濃縮した。残渣を更には精製せずに次のステップに使用した。化合物３－（５－クロロ－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパン酸（０．１１ｇ、４５３．３９μｍｏｌ、収率８１．８１％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 13.28 (s, 1H), 12.37 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 4.72 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.85 (t, J = 6.8 Hz, 2H).
３－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパン酸の調製（スキームＣ－５中のステップ３）
Figure 2022515775000343
（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（２１７．６８ｍｇ、１．２４ｍｍｏｌ、１６４．９１μＬ、３当量）及び３－（５－クロロ－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパン酸（０．１ｇ、４１２．１７μｍｏｌ、１当量）のｔ－ＢｕＯＨ（３ｍＬ）中溶液を、１００℃で１０時間加熱した。ＬＣ－ＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。溶媒を減圧下で除去した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２５％～５０％、１０分）により精製した。化合物３－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］プロパン酸（８８．８ｍｇ、２３２．３４μｍｏｌ、収率５６．３７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12.34 (s, 1H), 11.11 (s, 1H), 7.59～7.57 (m, 2H), 7.55 (s, 1H), 7.33 (dd, J = 2.8 Hz, 8.0 Hz, 1H), 6.59 (s, 1H), 4.62 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.47 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 2.79 (t, J = 6.8 Hz, 2H). HPLC: 98.91% (220 nm), 98.72% (215 nm), 100.00 % (254 nm). MS (ESI): C15H13Cl2N5O3の質量計算値381.04, m/z 実測値382.0 [M+H]+.
化合物２３０
３－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）プロパン酸を、スキームＣ－５中のステップ２～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000344
手順により、所望の化合物（２２．４ｍｇ、５８．６１μｍｏｌ、収率２０．３１％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12.47 (s, 1H), 10.80 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.60～7.58 (m, 2H), 7.32 (dd, J = 2.0 Hz, 8.0 Hz, 1H), 6.67～6.63 (m, 1H), 4.45 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.40 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.86 (t, J = 6.8 Hz, 2H). HPLC: 99.06% (220 nm), 98.84% (215 nm), 95.66% (254 nm). MS (ESI): C15H13Cl2N5O3の質量計算値381.04, m/z 実測値382.0 [M+H]+.
化合物２３１
メチル３－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパノアートを、スキームＣ－５中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000345
手順により、所望の化合物（５３．３ｍｇ、１３４．５２μｍｏｌ、収率２８．７７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.59～7.57 (m, 2H), 7.56 (s, 1H), 7.32 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 4.65 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 4.47 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.56 (s, 3H), 2.88 (t, J = 6.8 Hz, 2H). HPLC: 97.26% (220 nm), 97.07% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C16H15Cl2N5O3の質量計算値395.06, m/z 実測値396.1 [M+H]+.
化合物２３２
メチル３－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）プロパノアートを、スキームＣ－５中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000346
手順により、所望の化合物（１１４．１ｍｇ、２８７．９７μｍｏｌ、収率４９．２７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.88 (s, 1H), 7.61～7.59 (m, 2H), 7..33 (dd, J = 2.0 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.15 (s, 1H), 4.50～4.45 (m, 4H), 3.59 (s, 3H), 2.97 (t, J = 6.8 Hz, 2H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00 % (254 nm). MS (ESI): C16H15Cl2N5O3の質量計算値395.06, m/z 実測値396.1 [M+H]+.
化合物２３３
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
ｔｅｒｔ－ブチル３－（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパノアートの調製（スキームＣ－５中のステップ１）
Figure 2022515775000347
５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（０．５ｇ、２．７１ｍｍｏｌ、１当量）及びｔｅｒｔ－ブチルプロパ－２－エノアート（４５１．３４ｍｇ、３．５２ｍｍｏｌ、５１１．１４μＬ、１．３当量）のジオキサン（１０ｍＬ）中混合物に、２５℃でＣｓ２ＣＯ３（４４．１３ｍｇ、１３５．４４μｍｏｌ、０．０５当量）を加えた。次いで混合物を１００℃で１０時間撹拌した。ＴＬＣ及びＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。溶媒を減圧下で除去した。残渣をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に溶解し、ブライン（１０ｍＬ×２）で洗浄した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム１２ｇ、３０ｍＬ／分で０～２５％酢酸エチル／石油エーテル濃度勾配の溶出液）により精製した。溶出液を減圧下で除去した。化合物ｔｅｒｔ－ブチル３－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパノアート（０．１４ｇ、４４７．６４μｍｏｌ、収率１６．５３％）を白色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.01 (s, 1H), 4.79 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.23 (s, 3H), 2.88 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.38 (s, 9H).
３－（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパン酸の調製（スキームＣ－５中のステップ２）
Figure 2022515775000348
ｔｅｒｔ－ブチル３－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパノアート（０．２ｇ、６３９．４９μｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）中溶液に、２５℃でＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、４．００ｍＬ、２５当量）を加えた。次いで混合物を２５℃で１０時間撹拌した。ＴＬＣ及びＬＣＭＳは、反応がほぼ完結していることを示した。溶媒を減圧下で除去した。残渣を更には精製せずに次のステップに使用した。化合物３－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパン酸（０．１６ｇ、６２３．４３μｍｏｌ、収率９７．４９％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.24 (s, 1H), 4.72 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.16 (s, 3H), 2.88 (t, J = 6.8 Hz, 2H).
Ｎ’－アセチル－３－（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパンヒドラジドの調製
Figure 2022515775000349
アセトヒドラジド（８６．６０ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ、１当量）、３－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパン酸（０．３ｇ、１．１７ｍｍｏｌ、１当量）及びＤＩＥＡ（４５３．２２ｍｇ、３．５１ｍｍｏｌ、６１０．８０μＬ、３当量）のＣＨ３ＣＮ（５ｍＬ）中混合物に、ＨＡＴＵ（４８８．９１ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ、１．１当量）を加えた。次いで混合物を２０℃で３時間撹拌した。ＴＬＣ及びＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。混合物を氷水（４ｍＬ）でゆっくりクエンチし、多少の固体が生成された。濾過した後に固体を集めた。残渣を更には精製せずに次のステップに使用した。化合物Ｎ’－アセチル－３－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパンヒドラジド（０．１７ｇ、５４３．６３μｍｏｌ、収率４６．５１％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.82 (s, 1H), 9.72 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 4.74 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.17 (s, 3H), 2.80 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.81 (s, 3H).
２－（２－（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エチル）－５－メチル－１，３，４－オキサジアゾールの調製
Figure 2022515775000350
Ｎ’－アセチル－３－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパンヒドラジド（０．１７ｇ、５４３．６３μｍｏｌ、１当量）のＰＯＣｌ３（４．１７ｇ、２７．１８ｍｍｏｌ、２．５３ｍＬ、５０当量）中溶液を、Ｎ２下１００℃で３０分間撹拌した。ＴＬＣ及びＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。溶媒を減圧下で除去した。残渣をＤＣＭ（３０ｍＬ）に溶解し、ブライン（５ｍＬ×６）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、２－［２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エチル］－５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール（０．１５ｇ、５０９．００μｍｏｌ、収率９３．６３％）を黄色油状物として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.05 (s, 1H), 4.99 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.22 (s, 3H), 3.46 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.47 (s, 3H).
５－クロロ－１－（２－（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－５中のステップ２）
Figure 2022515775000351
２－［２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エチル］－５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール（０．１５ｇ、５０９．００μｍｏｌ、１当量）及びＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（６４．０７ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ、３当量）のＴＨＦ（２ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２ｍＬ）中溶液を、２５℃で３時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。有機溶媒を減圧下で除去した。水溶液を２Ｎ ＨＣｌでゆっくりｐＨ＝５にし、次いでＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×５）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を更には精製せずに次のステップに使用した。化合物５－クロロ－１－［２－（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．１３ｇ、４６３．１８μｍｏｌ、収率９１．００％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 13.36 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 4.88 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.42 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.37 (s, 3H).
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－５中のステップ３）
Figure 2022515775000352
（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（１６３．０８ｍｇ、９２６．３５μｍｏｌ、１２３．５４μＬ、２当量）及び５－クロロ－１－［２－（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．１３ｇ、４６３．１８μｍｏｌ、１当量）のｔ－ＢｕＯＨ（３ｍＬ）中溶液を、１００℃で１０時間加熱した。ＬＣ－ＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。溶媒を減圧下で除去した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２５％～４０％、１０分）により精製し、次いで分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １５０ｍｍ×２５ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３２％～５２％、１０．５分）により精製した。溶出液を凍結乾燥下で除去した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（２８．６ｍｇ、６８．０５μｍｏｌ、収率１４．６９％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.59～7.57 (m, 2H), 7.53 (s, 1H), 7.32 (dd, J = 2.0 Hz, 8.8 Hz, 1H), 6.74 (s, 1H), 4.77 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.46 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.35 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.50 (s, 3H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C17H15Cl2N7O2の質量計算値419.07, m/z 実測値420.1 [M+H]+.
化合物２３４
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（５－（ヒドロキシメチル）－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
ｔｅｒｔ－ブチル３－（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパノアートの調製（スキームＣ－５中のステップ１）
Figure 2022515775000353
５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（２ｇ、１０．８４ｍｍｏｌ、１当量）のジオキサン（２０ｍＬ）中溶液に、ｔｅｒｔ－ブチルプロパ－２－エノアート（１．８１ｇ、１４．０９ｍｍｏｌ、２．０４ｍＬ、１．３当量）及びＣｓ２ＣＯ３（２８２．４３ｍｇ、８６６．８２μｍｏｌ、０．０８当量）を加えた。混合物を１００℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣは、５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジンが完全に消費され、新規スポットが生成されていることを示した。Ｈ２Ｏ（１５ｍＬ）を反応混合物に加えた。次いで混合物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２０ｍＬ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム４０ｇ、４５ｍＬ／分で０～２５％酢酸エチル／石油エーテル濃度勾配の溶出液）により精製した。次いで溶出液を減圧下で濃縮した。化合物ｔｅｒｔ－ブチル３－（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパノアート（０．５９ｇ、１．８９ｍｍｏｌ、収率１７．４１％）を薄黄色固体として得、化合物ｔｅｒｔ－ブチル３－（５－クロロ－７－メトキシ－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）プロパノアート（２ｇ、６．３９ｍｍｏｌ、収率５９．０２％）を白色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.03 (s, 1H), 4.81 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.24 (s, 3H), 2.89 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.39 (s, 9H).
３－（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパン酸の調製
Figure 2022515775000354
ｔｅｒｔ－ブチル３－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパノアート（０．５９ｇ、１．８９ｍｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＡｃ（２ｍＬ）中溶液に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ、４Ｎ）を加えた。混合物を２５℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。化合物３－（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパン酸（０．４５ｇ、粗製物）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.24 (s, 1H), 4.72 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.16 (s, 3H), 2.88 (t, J = 7.2 Hz, 2H).
３－（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－Ｎ’－（２－メトキシアセチル）プロパンヒドラジドの調製
Figure 2022515775000355
３－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパン酸（０．３ｇ、１．１７ｍｍｏｌ、１当量）、２－メトキシアセトヒドラジド（１２１．６９ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ、１当量）、ＤＩＥＡ（４５３．２３ｍｇ、３．５１ｍｍｏｌ、６１０．８２μＬ、３当量）の溶液に、ＭｅＣＮ（４ｍＬ）中のＨＡＴＵ（４８８．９１ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ、１．１当量）を加え、２５℃で１２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳ及びＴＬＣは、反応が完結していることを示した。Ｈ２Ｏ（７ｍＬ）を反応混合物に加えた。反応混合物を減圧下で濃縮して、ＭｅＣＮを除去した。次いで混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（６ｍＬ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム１２ｇ、４０ｍＬ／分で０～８％ ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ濃度勾配の溶出液）により精製した。次いで溶出液を減圧下で濃縮した。化合物３－（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－Ｎ’－（２－メトキシアセチル）プロパンヒドラジド（０．３９ｇ、１．１４ｍｍｏｌ、収率９７．３５％）を淡黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.88 (s, 1H), 9.72 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 4.74 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.16 (s, 3H), 3.86 (s, 2H), 3.32 (s, 3H), 2.82 (d, J = 7.2 Hz, 2H).
２－（２－（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エチル）－５－（メトキシメチル）－１，３，４－オキサジアゾールの調製
Figure 2022515775000356
３－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－Ｎ’－（２－メトキシアセチル）プロパンヒドラジド（０．３８ｇ、１．１１ｍｍｏｌ、１当量）のＰＯＣｌ３（４ｍＬ）中溶液を、１００℃で０．５時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮して、２－（２－（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エチル）－５－（メトキシメチル）－１，３，４－オキサジアゾール（０．３７ｇ、粗製物）を茶褐色油状物として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.79 (s, 1H), 4.79 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.34 (s, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.24 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 3.21 (s, 3H).
５－クロロ－１－（２－（５－（メトキシメチル）－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－５中のステップ２）
Figure 2022515775000357
２－［２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エチル］－５－（メトキシメチル）－１，３，４－オキサジアゾール（０．１ｇ、３０７．９６μｍｏｌ、１当量）のＨ２Ｏ（２ｍＬ）及びＭｅＯＨ（２ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（３８．７７ｍｇ、９２３．８７μｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を２５℃で２時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。Ｈ２Ｏ（４ｍＬ）を反応混合物に加えた。反応混合物を減圧下で濃縮して、ＭｅＯＨを除去した。水溶液をＨＣｌ（３Ｎ）でｐＨ＝６に調節した。次いで混合物をＥｔＯＡｃ（７ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（６ｍＬ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム１２ｇ、４０ｍＬ／分で０～９％ ＭｅＯＨ／酢酸エチル濃度勾配の溶出液）により精製した。次いで溶出液を減圧下で濃縮した。化合物５－クロロ－１－（２－（５－メトキシメチル）－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（３０ｍｇ、９６．５６μｍｏｌ、収率３１．３５％）を淡黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.97 (s, 1H), 4.91 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 4.56 (s, 2H), 3.47 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 3.28 (s, 3H).
化合物２３５
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（５－（メトキシメチル）－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製（スキームＣ－５中のステップ３）
Figure 2022515775000358
５－クロロ－１－［２－［５－（メトキシメチル）－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル］エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（２５ｍｇ、８０．４６μｍｏｌ、１当量）のｔ－ＢｕＯＨ（１ｍＬ）中溶液に、（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（２１．２５ｍｇ、１２０．７０μｍｏｌ、１６．１０μＬ、１．５当量）を加えた。混合物を１００℃で１０時間撹拌した。ＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０４％ ＨＣｌ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：２５％～４５％、１０分）により精製した。ＭｅＣＮを３０℃で減圧下にて除去した。残渣を凍結乾燥で脱水した。化合物５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（５－（メトキシメチル）－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩（３．６ｍｇ、７．５６μｍｏｌ、収率９．３９％、純度９４．５４２％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.61～7.58 (m, 4H), 7.33 (dd, J = 8.8 Hz, 1.2 Hz, 1H), 7.18 (s, 1H), 4.81 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 4.56 (s, 2H), 4.51 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.42 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.27 (s, 3H). HPLC: 94.54% (220 nm), 93.28% (215 nm), 94.36% (254 nm). MS (ESI): C18H18Cl3N7O3の質量計算値449.08, m/z 実測値450.0 [M+H]+.
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（５－（ヒドロキシメチル）－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
Figure 2022515775000359
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－［５－（メトキシメチル）－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル］エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（２０ｍｇ、４４．４２μｍｏｌ、１当量）のＤＣＭ（０．５ｍＬ）中溶液に、－７８℃でＢＢｒ３（５５．６４ｍｇ、２２２．０９μｍｏｌ、２１．４０μＬ、５当量）のＤＣＭ（０．２ｍＬ）中溶液を加えた。次いで混合物を２５℃に加温した。混合物を２５℃で３時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を０℃で飽和ＮａＨＣＯ３（２ｍＬ）に滴下添加した。混合物を飽和Ｎａ２ＣＯ３でｐＨ＝７に調節した。次いで混合物をＤＣＭ及びｉ－ＰｒＯＨ（容量：容量＝３：１、５ｍＬ×６）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（ＨＣｌ条件カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０４％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１５％～４５％、１０分）により精製した。ＭｅＣＮを３０℃で減圧下にて除去した。残渣を凍結乾燥で脱水した。化合物５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（５－（ヒドロキシメチル）－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩（２．９ｍｇ、５．２７μｍｏｌ、収率１１．８６％、純度８５．８６２％、ＨＣｌ）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.60～7.58 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.99 (s, 1H), 4.81 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 4.56 (s, 2H), 4.50 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.41～3.36 (m, 2H). HPLC: 85.86% (220 nm), 84.13% (215 nm), 85.12% (254 nm). MS (ESI): C17H16Cl3N7O3の質量計算値435.06, m/z 実測値436.0 [M+H]+.
化合物２３６
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（３－ヒドロキシキヌクリジン－２－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－５中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
２－［（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル］キヌクリジン－３－オンの調製（スキームＣ－５中のステップ１）
Figure 2022515775000360
５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（０．４２ｇ、２．２８ｍｍｏｌ、１当量）、２－メチレンキヌクリジン－３－オン（４０５．７８ｍｇ、２．９６ｍｍｏｌ、１．３当量）及びＣｓ２ＣＯ３（３７０．６８ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ、０．５当量）のＭｅＣＮ（５ｍＬ）中混合物を、２０℃で２４時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物をＨ２Ｏ（５ｍＬ）でクエンチし、次いで減圧下で濃縮した。水溶液をＤＣＭ及びｉ－ＰｒＯＨ（３：１、１２ｍＬ×５）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ×２）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、２－［（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル］キヌクリジン－３－オン（０．７ｇ、粗製物）及び２－［（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）メチル］キヌクリジン－３－オン（粗製物）の混合物を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.74～8.12 (m, 1H), 4.81～4.72 (m, 2H), 4.18～4.10 (m, 3H), 3.92～3.70 (m, 1H), 3.25～3.14 (m, 1H), 2.91～2.63 (m, 3H), 2.39～2.30 (m, 1H), 2.04～1.87 (m, 4H).
２－［（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル］キヌクリジン－３－オールの調製
Figure 2022515775000361
２－［（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル］キヌクリジン－３－オン（０．７ｇ、２．１８ｍｍｏｌ、１当量）及び２－［（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）メチル］キヌクリジン－３－オンのＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中混合物に、０℃でＮａＢＨ４（１６４．９４ｍｇ、４．３６ｍｍｏｌ、２当量）を加えた。混合物を２０℃で１時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を２０℃でＨ２Ｏ（１０ｍＬ）にてクエンチし、次いでＤＣＭ及びｉ－ＰｒＯＨ（３：１、２４ｍＬ×４）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、２－［（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル］キヌクリジン－３－オール（０．７ｇ、粗製物）及び２－［（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）メチル］キヌクリジン－３－オール（粗製物）の混合物を黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.63～8.13 (m, 1H), 5.02～4.88 (m, 1H), 4.72～4.42 (m, 2H), 4.17～4.08 (m, 3H), 3.95～3.81 (m, 1H), 3.18～3.04 (m, 1H), 3.01～2.53 (m, 4H), 1.89～1.63 (m, 4H).
５－クロロ－２－［（３－ヒドロキシキヌクリジン－２－イル）メチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンの調製（スキームＣ－５中のステップ２）
Figure 2022515775000362
２－［（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）メチル］キヌクリジン－３－オール及び２－［（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）メチル］キヌクリジン－３－オール（０．７ｇ、２．１６ｍｍｏｌ、１当量）の混合物並びにＨ２Ｏ（５ｍＬ）及びＴＨＦ（５ｍＬ）中のＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（２７２．１５ｍｇ、６．４８ｍｍｏｌ、３当量）を、２０℃で３時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。水溶液を３Ｎ ＨＣｌでｐＨ＝５に調節した。水溶液を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ３μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１％～２０％、１０分）により直接精製した。溶出液を凍結乾燥して、５－クロロ－２－［（３－ヒドロキシキヌクリジン－２－イル）メチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１７０ｍｇ、５４８．８３μｍｏｌ、収率２５．４１％）及び５－クロロ－１－［（３－ヒドロキシキヌクリジン－２－イル）メチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンの混合物を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.41 (s, 2H), 8.06 (s, 1H), 5.98～5.67 (m, 2H), 5.07～5.01 (m, 1H), 4.88～4.71 (m, 4H), 4.37～4.23 (m, 2H), 4.16 (s, 2H), 3.80 (s, 1H), 3.65～3.58 (m, 2H), 3.26～3.10 (m, 9H), 2.12～2.02 (m, 4H), 1.85 (s, 4H), 1.66 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（３－ヒドロキシキヌクリジン－２－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－５中のステップ３）
Figure 2022515775000363
手順により、所望の化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［（３－ヒドロキシキヌクリジン－２－イル）メチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（５０ｍｇ、１０２．９２μｍｏｌ、収率２５．６６％、純度１００％、ＨＣｌ）を薄黄色固体として、及び５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－２－［（３－ヒドロキシキヌクリジン－２－イル）メチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（７０．３ｍｇ、１４４．７１μｍｏｌ、収率３６．０７％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.39 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.63～7.58 (m, 2H), 7.36 (dd, J = 1.6, 8.0 Hz, 1H), 4.97～4.91 (m, 1H), 4.71 (dd, J = 5.6 Hz, 15.2 Hz, 1H), 4.56 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.78 (s, 1H), 3.61～3.57 (m, 1H), 3.50～3.43 (m, 1H), 3.20～3.07 (m, 3H), 2.10～2.00 (m, 2H), 1.85 (d, J = 1.2 Hz, 2H), 1.66 (d, J = 4.8 Hz, 1H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C20H23Cl3N6O2の質量計算値448.12, m/z 実測値449.1 [M+H]+.
スキームＣ－６
Figure 2022515775000364
化合物２３７
２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エタンスルホンアミドの調製
Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エタンスルホンアミドの調製（スキームＣ－６中のステップ１）
Figure 2022515775000365
５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（５００ｍｇ、２．７１ｍｍｏｌ、１当量）、Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチルエテンスルホンアミド（５１７．３５ｍｇ、３．１７ｍｍｏｌ、１．１７当量）及びＣｓ２ＣＯ３（４４１．２９ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ、０．５当量）のＭｅＣＮ（１０ｍＬ）中混合物を、２５℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム１０ｇ、６０ｍＬ／分で０～５０％酢酸エチル／石油エーテル濃度勾配の溶出液）により精製した。溶出液を圧力下で除去した。化合物Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エタンスルホンアミド（７０ｍｇ、２０１．２５μｍｏｌ、収率７．４３％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.30 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 4.88 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 4.16 (s, 3H), 3.58 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.22 (s, 9H).化合物Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）エタンスルホンアミド（３８０ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ、収率４０．３３％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.73 (s, 1H), 7.10 (s, 1H), 4.83 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.13 (s, 3H), 3.70 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.212 (s, 9H).
Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（５－クロロ－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エタンスルホンアミドの調製（スキームＣ－６中のステップ２）
Figure 2022515775000366
Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エタンスルホンアミド（７０ｍｇ、２０１．２５μｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（０．５ｍＬ）及びＨ２Ｏ（０．５ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（５０．６７ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ、６当量）を加えた。混合物を２５℃で１０時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。水溶液を３Ｎ ＨＣｌでｐＨ＝６にし、ＥｔＯＡｃ（２ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（５－クロロ－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エタンスルホンアミド（５０ｍｇ、１４９．７９μｍｏｌ、収率７４．４３％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.01 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 4.88 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.56 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.25 (s, 9H).
化合物２３８
Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エタンスルホンアミドの調製（スキームＣ－６中のステップ３）
Figure 2022515775000367
Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（５－クロロ－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エタンスルホンアミド（５０ｍｇ、１４９．７９μｍｏｌ、１当量）及び（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（５２．７４ｍｇ、２９９．５９μｍｏｌ、３９．９５μＬ、２当量）のｔ－ＢｕＯＨ（１ｍＬ）中混合物を、１００℃で１２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｂｏｓｔｏｎ Ｐｒｉｍｅ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３５％～６５％、１０分）により精製した。化合物Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－ｌ］エタンスルホンアミド（２５．７ｍｇ、５４．２９μｍｏｌ、収率３６．２４％、純度９８．６３％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.61～7.58 (m, 3H), 7.33～7.31 (m, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.73 (s, 1H), 4.77 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 4.47 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.50 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.24 (s, 9H). HPLC: 98.63% (220 nm), 98.11% (215 nm), 99.23% (254 nm). MS (ESI): C18H22Cl2N6O3Sの質量計算値472.09, m/z 実測値473.1 [M+H]+.
２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エタンスルホンアミドの調製（スキームＣ－６中のステップ４）
Figure 2022515775000368
Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エタンスルホンアミド（１５０ｍｇ、３１６．８７μｍｏｌ、１当量）のＴＦＡ（２ｍＬ）中混合物を、２５℃で８時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｂｏｓｔｏｎ Ｐｒｉｍｅ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３０％～４５％、１０分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エタンスルホンアミド（４０．２ｍｇ、９６．３４μｍｏｌ、収率３０．４０％、純度９６．７７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.25 (s, 1H), 7.61～7.58 (m, 3H), 7.33～7.31 (m, 1H), 7.04 (s, 2H), 6.70 (s, 1H), 4.79 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 4.47 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.51 (t, J = 7.2 Hz, 2H). HPLC: 96.77% (220 nm), 95.58% (215 nm), 94.88% (254 nm). MS (ESI): C14H14Cl2N6O3Sの質量計算値416.02, m/z 実測値417.0 [M+H]+.
スキームＣ－７
Figure 2022515775000369
スキームＣ－７中の化合物を調製するための一般的手順
化合物の調製（スキームＣ－７中のステップ１）
Figure 2022515775000370
５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（９２１．００μｍｏｌ、１当量）のＤＭＦ（２ｍＬ／ｍｍｏｌ～３ｍＬ／ｍｍｏｌ）中溶液に、異なるオキシランＲ’Ｒ’’ＣＯＣＨ２（１．８４ｍｍｏｌ～３．６８ｍｍｏｌ、２当量～４当量）及びＮａ２ＣＯ３（２．７６ｍｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を４５℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。Ｈ２Ｏを反応混合物に加えた。反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム４ｇ、５０ｍＬ／分で０～１００％酢酸エチル／石油エーテル濃度勾配の溶出液）により精製した。次いで溶出液を減圧下で濃縮して、所望の化合物を得た。
化合物の調製（スキームＣ－７中のステップ２）
Figure 2022515775000371
２－（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－１－Ｒ’、１’－Ｒ”－エタノール（４．３６ｍｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（３ｍＬ／ｍｍｏｌ～５ｍＬ／ｍｍｏｌ）又はＴＨＦ（３ｍＬ／ｍｍｏｌ～５ｍＬ／ｍｍｏｌ）及びＨ２Ｏ（３ｍＬ／ｍｍｏｌ～５ｍＬ／ｍｍｏｌ）中溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１３．０８ｍｍｏｌ～２１．８０ｍｍｏｌ、３当量～５当量）を加えた。混合物を２０℃～２５℃で２時間～１６時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。水溶液を３Ｎ ＨＣｌでｐＨ＝６にし、次いでＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、所望の生成物を得た。
化合物の調製（スキームＣ－７中のステップ３）
Figure 2022515775000372
１－（２－Ｒ’－２Ｒ”Ｒ－２－ヒドロキシエチル）－５－クロロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（３９３．６４μｍｏｌ、１当量）、（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（５９０．４６ｍｍｏｌ～７８７．２８ｍｍｏｌ、１．５当量～２当量）のｔ－ＢｕＯＨ（６ｍＬ／ｍｍｏｌ～８ｍＬ／ｍｍｏｌ）中溶液を、１００℃～１１０℃で１０時間～３０時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製した。カラム：ａ）Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｂ）Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １５０ｍｍ×２５ｍｍ ５μｍ。移動相：ａ）［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］、Ｂ％：３０％～５０％、１２分；ｂ）［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］、Ｂ％：１５％～４５％、１２分）。溶媒を凍結乾燥下で除去して、所望の生成物を得た。
化合物２３９
（Ｒ）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－ヒドロキシプロピル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
（Ｒ）－１－（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパン－２－オールの調製（スキームＣ－７中のステップ１）
Figure 2022515775000373
５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（０．１７ｇ、９２１．００μｍｏｌ、１当量）のＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液に、（２Ｒ）－２－メチルオキシラン（２１３．９６ｍｇ、３．６８ｍｍｏｌ、２５８．１０μＬ、４当量）及びＮａ２ＣＯ３（２９２．８５ｍｇ、２．７６ｍｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を４５℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。Ｈ２Ｏ（６ｍＬ）を反応混合物に加えた。反応混合物をＥｔＯＡｃ（８ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ×５）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム４ｇ、５０ｍＬ／分で０～１００％酢酸エチル／石油エーテル濃度勾配の溶出液）により精製した。次いで溶出液を減圧下で濃縮した。化合物（Ｒ）－１－（５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパン－２－オール（９０ｍｇ、３７０．８９μｍｏｌ、収率４０．２７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.25 (s, 1H), 4.87 (d, J=5.2 Hz, 1H), 4.46～4.38 (m, 2H), 4.20 (s, 3H), 4.15～4.03 (m, 1H), 1.05 (d, J=6.0 Hz, 3H).化合物（Ｒ）－１－（５－クロロ－７－メトキシ－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）プロパン－２－オール（４０ｍｇ、１６４．８４μｍｏｌ、収率１７．９０％）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.56 (s, 1H), 5.03 (d, J=4.8 Hz, 1H), 4.43～4.39 (m, 1H), 4.34～4.28 (m, 1H), 4.12 (s, 3H), 4.32～4.30 (m, 1H), 1.09 (d, J=6.0 Hz, 3H).
（Ｒ）－５－クロロ－１－（２－ヒドロキシプロピル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－７中のステップ２）
Figure 2022515775000374
（２Ｒ）－１－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパン－２－オール（９０ｍｇ、３７０．８９μｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（１ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（４６．６９ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を２５℃で４時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ＭｅＯＨを除去した。Ｈ２Ｏ（３ｍＬ）を反応混合物に加えた。次いで水溶液をＨＣｌ（２Ｎ）でｐＨ＝５に調節し、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×５）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物（Ｒ）－５－クロロ－１－（２－ヒドロキシプロピル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（９０ｍｇ、粗製物）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.95 (s, 1H), 4.46～4.44 (m, 1H), 4.38～4.36 (m, 1H), 4.06～4.04 (m, 1H), 1.01 (d, J=6.4 Hz, 3H).
（Ｒ）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－ヒドロキシプロピル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－７中のステップ３）
Figure 2022515775000375
５－クロロ－１－［（２Ｒ）－２－ヒドロキシプロピル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．０９ｇ、３９３．６４μｍｏｌ、１当量）のｔ－ＢｕＯＨ（６ｍＬ）中溶液に、（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（１３８．６０ｍｇ、７８７．２８μｍｏｌ、１０５．００μＬ、２当量）を加えた。混合物を１０５℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１５％～４５％、１２分）により精製した。ＭｅＣＮを３０℃で減圧下にて除去した。残渣を凍結乾燥で脱水した。化合物（Ｒ）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－ヒドロキシプロピル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（２２．８ｍｇ、６１．６６μｍｏｌ、収率１５．６６％、純度９９．５８６％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.64～7.60 (m, 3H), 7.37 (s, 1H), 7.37～7.35 (m, 1H), 4.55 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.40～4.37 (m, 1H), 4.31～4.26 (m, 1H), 4.04～4.02 (m, 1H), 1.00 (d, J = 6.0 Hz, 3H). HPLC: 99.59% (220 nm), 99.50% (215 nm), 99.90% (254 nm). MS (ESI): C15H15Cl2N5O2の質量計算値367.06, m/z 実測値368.0 [M+H]+.
化合物２４０
（Ｓ）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－ヒドロキシプロピル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－７中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000376
手順により、所望の化合物（６９．５ｍｇ、１８６．０３μｍｏｌ、収率３８．６７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.63～7.54 (m, 3H), 7.34 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.77 (s, 1H), 4.49 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.42～4.35 (m, 1H), 4.32～4.24 (m, 1H), 4.06～4.00 (m, 1H), 0.99 (d, J = 6.0 Hz, 3H). HPLC: 98.56% (220 nm), 98.50%(215 nm), 97.26% (254 nm). MS (ESI): C15H15Cl2N5O2の質量計算値367.06, m/z 実測値368.0 [M+H]+.
化合物２４１
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（４－ヒドロキシ－１－メチルピペリジン－４－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（４－ヒドロキシピペリジン－４－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－７中のステップ１～３として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000377
手順により、所望の化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［（４－ヒドロキシ－４－ピペリジル）メチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンを白色固体として得、次に使用した。残った固体（０．１５ｇ）を更には精製せずに次のステップに使用した。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.74 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.63～7.50 (m, 3H), 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.54 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 4.47 (s, 2H), 3.09～3.07 (m, 2H), 3.01～2.95 (m, 2H), 1.70～1.57 (m, 4H). HPLC: 99.31% (220 nm), 98.62% (215 nm), 98.46% (254 nm). MS (ESI): C18H21Cl3N6O2の質量計算値422.12 m/z 実測値423.1 [M+H]+.
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（４－ヒドロキシ－１－メチルピペリジン－４－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
Figure 2022515775000378
４－［［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン１－イル］メチル］ピペリジン－４－オール（０．１５ｇ、３１６．６０μｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）及びＨＣＨＯ（１２８．４８ｍｇ、１．５８ｍｍｏｌ、１１７．８７μＬ、純度３７％、５当量）のＭｅＯＨ（１ｍＬ）中溶液に、０℃でＮａＢＨ３ＣＮ（５９．６９ｍｇ、９４９．８０μｍｏｌ、３当量）を少しずつ加えた。次いで混合物を２５℃で２時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。混合物を氷水（１ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１０％～３０％、１２分）により精製した。溶出液を減圧下で除去した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［（４－ヒドロキシ－１－メチル－４－ピペリジル）メチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（５５．９ｍｇ、１１７．４４μｍｏｌ、収率３７．１０％、純度９９．５４％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.98 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.62 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.63 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 4.47 (s, 2H), 3.21～3.19 (m, 2H), 3.06～3.03 (m, 2H), 2.67 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 1.86～1.80 (m, 2H), 1.64～1.61 (m, 2H). HPLC: 99.54% (220 nm), 99.50% (215 nm), 98.86% (254 nm). MS (ESI): C19H23Cl3N6O2の質量計算値436.12 m/z 実測値437.1 [M+H]+.
スキームＣ－８
Figure 2022515775000379
スキームＣ－８中の化合物を調製するための一般的手順
スキームＣ－８中の化合物の調製（スキームＣ－８中のステップ１）
Figure 2022515775000380
アミン（１０１．７１μｍｏｌ、１当量）及びＲ’ＣＯＲ’’（１２２．０５～９１５．３９μｍｏｌ、１．２～９当量）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ／ｍｍｏｌ）中溶液に、０℃でＮａＢＨ３ＣＮ（１５２．５６～８１３．６８μｍｏｌ、３～８当量）を少しずつ加えた。混合物を０～２５℃で一定時間（２～１６時間）撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。濾過した後、濾液を分取ＨＰＬＣにより精製した。カラム：ａ）Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｂ）Ｂｏｓｔｏｎ Ｐｒｉｍｅ Ｃ１８ １５０×３０ｍｍ ５μｍ；ｃ）Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｄ）Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０ｍｍ×３０ｍｍ １０μｍ。移動相：ａ）［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］、Ｂ％：２５％～５５％、１０分；ｂ）［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］、Ｂ％：５％～５５％、８分又は１０分又は１２分。アセトニトリルを３０℃で減圧下にて除去した。水溶液を凍結乾燥で脱水して、所望の生成物を得た。
化合物２４２
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製（スキームＣ－８中のステップ１）
Figure 2022515775000381
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（４－ピペリジル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（４０ｍｇ、１０１．７１μｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（１ｍＬ）中溶液に、テトラヒドロピラン－４－オン（９１．６５ｍｇ、９１５．４０μｍｏｌ、８４．０８μＬ、９当量）を加えた。混合物を２５℃で２時間撹拌した。次いでＮａＢＨ３ＣＮ（１９．１８ｍｇ、３０５．１３μｍｏｌ、３当量）を０℃で少しずつ加えた。混合物を０℃で１時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濾過した。濾液を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０×３０ｍｍ×５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～３５％、１０分）により精製した。ＭｅＣＮを３０℃で減圧下にて除去した。水溶液を凍結乾燥で脱水して、化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（１－テトラヒドロピラン－４－イル－４－ピペリジル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（２０．４ｍｇ、３８．７６μｍｏｌ、収率３８．１０％、純度９７．６２０％、ＨＣｌ）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.29 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.61～7.59 (m, 2H), 7.34 (dd, J = 8.4 Hz, 1.2 Hz, 1H), 5.20～5.13 (m, 1H), 4.53 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 3.99～3.96 (m, 2H), 3.63～3.60 (m, 2H), 3.41 (s, 1H), 3.40～3.34 (m, 2H), 3.32～3.29 (m, 2H), 2.33～2.27 (m, 2H), 2.24～2.21 (m, 2H), 2.20～2.04 (m, 2H), 2.01～1.75 (m, 2H). HPLC: 97.62% (220 nm), 97.65% (215 nm), 98.71% (254 nm). MS (ESI): C22H27Cl3N6O2の質量計算値476.15, m/z 実測値477.1 [M+H]+.
化合物２４３
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－メチルピロリジン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンＴＦＡ塩を、スキームＣ－８中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000382
手順により、所望の化合物（１２．５ｍｇ、２４．６μｍｏｌ、収率３０．４％、ＴＦＡ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.42～11.45 (m, 1H), 10.04～10.61 (m, 1H), 7.68～7.71 (m, 1H), 7.57～7.59 (m, 2H), 7.31 (dd, J = 8.00 Hz, 1.60 Hz, 1H), 6.94～7.08 (m, 1H), 5.82 (s, 1H), 4.48 (d, J = 5.60 Hz, 2H), 4.08 (s, 1 H), 3.74 (s, 3H), 3.27～3.31 (m, 1H), 2.91 (s, 3H). HPLC: 98.84% (220 nm), 98.98% (215 nm), 99.33% (254 nm). MS (ESI): C17H18Cl2N6Oの質量計算値392.0, m/z 実測値393.1 [M+H]+.
化合物２４４
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（ピリジン－２－イルメチル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩を、スキームＣ－８中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000383
手順により、所望の化合物（１１．８ｍｇ、２０．９０μｍｏｌ、収率２９．９３％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.51 (s, 1H), 8.70 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.95 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.67～7.59 (m, 4H), 7.52～7.49 (m, 1H), 7.35～7.34 (m, 1H), 5.17～5.13 (m, 1H), 4.62～4.52 (m, 4H), 3.56～3.53 (m, 2H), 3.37～3.33 (m, 2H), 2.42～2.39 (m, 2H), 2.20～2.17 (m, 2H). HPLC: 98.69% (220 nm), 98.74% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C23H25Cl4N7O1の質量計算値483.13 m/z 実測値484.2 [M+H]+.
化合物２４５
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（ピリジン－３－イルメチル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩を、スキームＣ－８中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000384
手順により、所望の化合物（２２．３ｍｇ、３９．７６μｍｏｌ、収率５６．９６％）を淡黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.25 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.86 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.47 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.86 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.62～7.59 (m, 2H), 7.53 (s, 1H), 7.34 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 5.16～5.10 (m, 1H), 4.55～4.48 (m, 4H), 3.54～3.51 (m, 2H), 3.26～3.24 (m, 2H), 2.43～2.40 (m, 2H), 2.33～2.18 (m, 2H). HPLC: 99.37% (220 nm), 99.47% (215 nm), 97.96% (254 nm). MS (ESI): C23H25Cl4N7O1の質量計算値483.13 m/z 実測値484.2 [M+H]+.
化合物２４６
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（ピリジン－４－イルメチル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩を、スキームＣ－８中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000385
手順により、所望の化合物（２０ｍｇ、３５．７９μｍｏｌ、収率５１．２７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.56 (s, 1H), 8.91 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 8.12～8.08 (m, 2H), 7.67 (s, 1H), 7.61～7.59 (m, 2H), 7.34 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 5.16～5.12 (m, 1H), 4.55～4.53 (m, 4H), 3.52～3.49 (m, 2H), 3.26～3.22 (m, 2H), 2.43～2.40 (m, 2H), 2.17～2.14 (m, 2H). HPLC: 99.73% (220 nm), 99.73% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C23H25Cl4N7O1の質量計算値483.13 m/z 実測値484.2 [M+H]+.
化合物２４７
（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（ピペリジン－４－イルメチル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩）の調製（スキームＣ－８中のステップ１）
化合物２４８
ｔｅｒｔ－ブチル４－（（４－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）メチル）ピペリジン－１－カルボキシラート２，２，２－トリフルオロアセタートを、スキームＣ－８中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000386
手順により、所望の化合物（１７．１ｍｇ、２２．７０μｍｏｌ、収率２４．３９％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.17～9.92 (m, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.60 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.42 (s, 1H), 7.34 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.16～5.11 (m, 1H), 4.53 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 3.94～3.91 (m, 2H), 3.64～3.61 (m, 1H), 3.19～3.12 (m, 2H), 2.98 (s, 2H), 2.73 (s, 2H), 2.39～2.33 (m, 3H), 2.16～2.13 (m, 2H), 2.01 (s, 1H), 1.80～1.77 (m, 2H), 1.39 (s, 9H), 1.13～1.03 (m, 2H). HPLC: 93.54 % (220 nm), 93.45 % (215 nm), 96.13 % (254 nm). MS (ESI): C30H38Cl2F3N7O5の質量計算値589.23, m/z 実測値590.3 [M+H]+.
（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（ピペリジン－４－イルメチル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩）の調製（スキームＣ－８中のステップ１）
Figure 2022515775000387
ｔｅｒｔ－ブチル４－［［４－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］－１－ピペリジル］メチル］ピペリジン－１－カルボキシラート（１５０ｍｇ、２５４．００μｍｏｌ、１当量）のＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（３ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（１ｍＬ）中溶液を、２５℃で２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、ｔｅｒｔ－ブチル４－［［４－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］－１－ピペリジル］メチル］ピペリジン－１－カルボキシラートが完全に消費され、所望の質量を有する１つの主要なピークが検出されていることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（ＨＣｌ条件カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１５％～４５％、１０分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［１－（４－ピペリジルメチル）－４－ピペリジル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（２３．３ｍｇ、４４．０９μｍｏｌ、収率１７．３６％、純度９９．７％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.74～10.60 (m, 1H), 9.08 (s, 1H), 8.95～8.93 (m, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.16～5.10 (m, 1H), 4.62 (s 2H), 3.64 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 3.27～3.24 (m, 2H), 3.18～3.13 (m, 2H), 3.01 (s, 2H), 2.88～2.80 (m, 2H), 2.67～2.57 (m, 1H), 2.36～2.33 (m, 1H), 2.16～2.13 (m, 3H), 2.03～1.99 (m, 2H), 1.50～1.41 (m, 2H). HPLC: 99.70 % (220 nm), 99.62 % (215 nm), 99.81 % (254 nm). MS (ESI): C23H31Cl4N7Oの質量計算値489.18, m/z 実測値490.2 [M+H]+.
化合物２４９
（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（ピペリジン－２－イルメチル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩）の調製（スキームＣ－８中のステップ１）
化合物２５０
ｔｅｒｔ－ブチル３－（（４－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）メチル）ピペリジン－１－カルボキシラート塩酸塩）を、スキームＣ－８中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000388
手順により、所望の化合物（２２．２ｍｇ、３３．６０μｍｏｌ、収率１３．２１％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.11～9.86 (m, 1H), 7.67 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.62～7.59 (m, 2H), 7.52～7.48(m, 1H), 7.35 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.14 (s, 1H), 4.55 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 4.00～3.86 (m, 2H), 3.74～3.71 (m, 2H), 3.62～3.59 (m, 1H), 3.22～3.19 (m, 2H), 3.98～3.97 (m, 2H), 2.70 (s, 1H), 2.43～2.33 (m, 2H), 2.30～2.25 (m, 2H), 2.18～1.94 (m, 2H), 1.60～1.55 (m, 1H), 1.40 (s, 9H), 1.35 (s, 1H), 1.24 (m, 1H). HPLC: 94.89% (220 nm), 95.03% (215 nm), 94.11% (254 nm). MS (ESI): C28H38Cl3N7O3の質量計算値589.23, m/z 実測値590.3 [M+H]+.
化合物２５１
（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（ピペリジン－３－イルメチル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩）の調製（スキームＣ－８中のステップ１）
Figure 2022515775000389
ｔｅｒｔ－ブチル３－［［４－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］－１－ピペリジル］メチル］ピペリジン－１－カルボキシラート（０．１ｇ、１６９．３４μｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＡｃ（１ｍＬ）中溶液に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（８ｍＬ、４Ｎ）を加えた。混合物を２５℃で１２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１０％～５０％、８分）により精製した。ＭｅＣＮを３０℃で減圧下にて除去した。残渣を凍結乾燥で脱水した。化合物５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（ピペリジン－３－イルメチル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（４１．１ｍｇ、７１．９６μｍｏｌ、収率４２．５０％、純度９８．６３５％、２ＨＣｌ）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.78～10.63 (m, 1H), 9.28～9.25 (m, 1H), 8.84～8.82 (m, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.69～7.60 (m, 3H), 7.36 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.12～5.15 (m, 1H), 4.57 (s, 2H), 3.61～3.57 (m, 2H), 3.53 (s, 1H), 3.18～3.12 (m, 4H), 3.00～2.97 (m, 1H), 2.76～2.67 (m, 2H), 2.36 (d, J = 2.8 Hz, 2H), 2.33～2.17 (m, 2H), 2.14～1.70 (m, 4H), 1.30～1.27 (m, 1H). HPLC: 98.64% (220 nm), 98.39% (215 nm), 98.48% (254 nm). MS (ESI): C23H31Cl4N7Oの質量計算値489.18, m/z 実測値490.2 [M+H]+.
（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（ピペリジン－２－イルメチル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩）の調製（スキームＣ－８中のステップ１）
Figure 2022515775000390
ｔｅｒｔ－ブチル２－［［４－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］－１－ピペリジル］メチル］ピペリジン－１－カルボキシラート（１５０ｍｇ、２５４．００μｍｏｌ、１当量）（スキームＣ－８中のステップ１）のＥｔＯＡｃ（１ｍＬ）及びＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、３ｍＬ）中混合物を、２５℃で２時間撹拌した。ＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を濾過して不溶物を除去した。濾液を濃縮し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：５％～５０％、１２分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［１－（２－ピペリジルメチル）－４－ピペリジル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（３３．５ｍｇ、６５．８８μｍｏｌ、収率２５．９４％、純度９６．４５％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.77 (s, 1H), 9.53～9.46 (m, 2H), 7.84 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.64～7.60 (m, 2H), 7.37 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.20～5.14 (m, 1H), 4.58 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 3.91 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 3.81～3.79 (m, 1H), 3.65 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 3.49～3.45 (m, 1H), 3.34～3.29 (m, 4H), 2.93～2.91 (m, 1H), 2.43～2.38 (m, 2H), 2.21 (d, J = 12.8 Hz, 2H), 1.92 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 1.77～1.48 (m, 5H). HPLC: 96.45 % (220 nm), 95.99 % (215 nm), 99.39 % (254 nm). MS (ESI): C23H31Cl4N7Oの質量計算値489.18, m/z 実測値490.2 [M+H]+.
スキームＣ－９
Figure 2022515775000391
スキームＣ－９中の化合物を調製するための一般的手順
化合物の調製（スキームＣ－９中のステップ１）
Figure 2022515775000392
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（ピロリジン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン又は５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（２８３．１２μｍｏｌ、１当量）、Ｒ’ＣＯＯＨ（２８３．１２μｍｏｌ～３６８．０６μｍｏｌ、１当量～１．３当量）、ＥＤＣＩ（３３９．７４μｍｏｌ、１．２当量）、ＨＯＢｔ（５６．６２μｍｏｌ、０．２当量）及びＤＩＥＡ（８４９．３６μｍｏｌ、１４７．９４μＬ、３当量）のＤＭＦ（３ｍＬ／ｍｍｏｌ）中混合物を、２０℃～２５℃で一定時間（１０時間～３２時間）撹拌した。反応混合物を０℃～２５℃で一定時間（１時間～３時間）撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物をＨ２Ｏでクエンチし、次いでＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製した。カラム：ａ）Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ ２５０ｍｍ×５０ｍｍ １０μｍ；ｂ）Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｃ）Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｄ）Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｅ）Ｂｏｓｔｏｎ Ｐｒｉｍｅ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｆ）Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｇ）Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １００ｍｍ×２５ｍｍ ３μｍ。移動相：ａ）［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］、Ｂ％：３０％～６５％、１０分又は２０分；ｂ）［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］、Ｂ％：１０％～５５％、１０分又は９分；ｃ）［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＭｅＣＮ］、Ｂ％：２０％～５０％、２０分。水性溶液を凍結乾燥して、所望の化合物を得た。
化合物２５２
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－イソニコチノイルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製（スキームＣ－９中のステップ１）
Figure 2022515775000393
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（４－ピペリジル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．７ｇ、１．６３ｍｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）、イソニコチン酸（２００．５４ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ、１当量）、ＨＯＢｔ（４４．０２ｍｇ、３２５．７９μｍｏｌ、０．２当量）、ＥＤＣＩ（３７４．７２ｍｇ、１．９５ｍｍｏｌ、１．２当量）及びＤＩＥＡ（６３１．５７ｍｇ、４．８９ｍｍｏｌ、８５１．１７μＬ、３当量）のＤＭＦ（５ｍＬ）中混合物を、２５℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濾過した。濾液を分取ＨＰＬＣ（ＨＣｌ条件カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘｌｕｎａ Ｃ１８ ２５０ｍｍ×５０ｍｍ １０μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～５０％、１０分）により精製した。ＭｅＣＮを３０℃で減圧下にて除去した。残渣を凍結乾燥で脱水した。化合物５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－イソニコチノイルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（４５６．１ｍｇ、９０３．３４μｍｏｌ、収率５５．４６％、純度９８．７０５％、ＨＣｌ）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.92 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 7.93 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 7.85 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.65～7.60 (m, 2H), 7.38 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.17～5.12 (m, 1H), 4.59 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 4.54 (s, 1H), 3.55～3.51 (m, 1H), 3.33～3.27 (m, 1H), 3.12～3.05 (m, 1H), 2.09～1.90 (m, 4H). HPLC: 98.71% (220 nm), 98.68% (215 nm), 98.91% (254 nm). MS (ESI): C23H22Cl3N7O2の質量計算値497.11, m/z 実測値498.1 [M+H]+.
化合物２５３
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［１－（オキサゾール－４－カルボニル）－４－ピペリジル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンを、スキームＣ－９中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000394
手順により、所望の化合物（５２．６ｍｇ、１０７．７１μｍｏｌ、収率６０．５２％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.60 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.60～7.58 (m, 3H), 7.34～7.32 (m, 1H), 6.82 (s, 1H), 5.20～5.13 (m, 1H), 4.65～4.55 (m, 2H), 4.50～4.48 (m, 2H), 3.33～3.32 (m, 1H), 2.97～2.96 (m, 1H), 2.02～2.01 (m, 4H). HPLC: 99.67% (220 nm), 99.67% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C21H19Cl2N7O3の質量計算値487.09, m/z 実測値488.1 [M+H]+.
化合物２５４
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［１－（チアゾール－２－カルボニル）－４－ピペリジル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンを、スキームＣ－９中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000395
手順により、所望の化合物（３３．１ｍｇ、６５．６２μｍｏｌ、収率３６．８７％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.05～8.02 (m, 2H), 7.60～7.58 (m, 3H), 7.34～7.32 (m, 1H), 6.75 (s, 1H), 5.39～5.36 (m, 1H), 5.21～5.19 (m, 1H), 4.58～4.55 (m, 1H), 4.49 (d, J =5.6 Hz, 2H), 3.46～3.44 (m, 1H), 3.12～3.06 (m, 1H), 2.07～2.06 (m, 4H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C21H19Cl2N7O2Sの質量計算値503.07, m/z 実測値504.1 [M+H]+.
化合物２５５
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－ピコリノイルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－９中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000396
手順により、所望の化合物（４１．５ｍｇ、７７．６０μｍｏｌ、収率４１．６８％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.61 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.97 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.66～7.60 (m, 3H), 7.53～7.49 (m, 1H), 7.38 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 5.17～5.15 (m, 1H), 4.62 (s, 2H), 4.61 (s, 1H), 3.82～3.78 (m, 1H), 3.30～3.23 (m, 1H), 3.07～3.01 (m, 1H), 2.07～1.91 (m, 4H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 95.43% (254 nm). MS (ESI): C23H22Cl3N7O2の質量計算値497.11 m/z 実測値498.2 [M+H]+.
化合物２５６
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－ニコチノイルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－９中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000397
手順により、所望の化合物（５４．４ｍｇ、１０１．２２μｍｏｌ、収率５４．３７％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.85 (s, 1H), 8.81～8.80 (m, 1H), 8.21 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.79～7.75 (m, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.64～7.59 (m, 2H), 7.36 (dd, J = 7.6 Hz, 2.0 Hz, 1H), 5.14 (s, 1H), 4.57～4.56 (m, 3H), 3.95 (s, 1H), 3.07～3.05 (m, 2H), 2.05～1.94 (m, 4H). HPLC: 99.51% (220 nm), 99.24% (215 nm), 99.54% (254 nm). MS (ESI): C23H22Cl3N7O2の質量計算値497.11, m/z 実測値498.1 [M+H]+.
化合物２５７
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－ピコリノイルピロリジン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－９中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000398
手順により、所望の化合物（２８．２ｍｇ、５４．１５μｍｏｌ、収率２５．６７％、ＨＣｌ）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.60 (dd, J = 8.4 Hz, 2.4 Hz, 1H), 7.95 (q, J = 7.6 Hz, 1H), 7.80～7.76 (m, 1H), 7.71～7.59 (m, 3H), 7.55～7.49 (m, 1H), 7.39～7.34 (m, 1H), 5.68～5.63 (m, 1H), 4.58 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 4.19～4.04 (m, 1H), 4.03～4.00 (m, 1H), 3.96～3.89 (m, 1H), 3.76～3.73 (m, 1H), 2.40～2.32 (m, 2H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C22H20Cl3N7O2の質量計算値483.10, m/z 実測値484.2 [M+H]+.
化合物２５８
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－ニコチノイルピロリジン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－９中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000399
手順により、所望の化合物（３５．２ｍｇ、６７．５９μｍｏｌ、収率３２．０４％、ＨＣｌ）を黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.95～8.84 (m, 2H), 8.40～8.34 (m, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.86～7.82 (m, 1H), 7.43～7.60(m, 3H), 7.40～7.35 (m, 1H), 5.73～5.60 (m, 1H), 4.62 (d, J = 12.8 Hz, 2H), 4.03～3.99 (m, 1H), 3.92～3.85 (m, 1H), 3.78～3.76 (m, 1H), 3.70～3.67 (m, 1H), 2.32～2.38 (m, 2H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C22H20Cl3N7O2の質量計算値483.10 m/z 実測値484.2 [M+H]+.
化合物２５９
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［１－（ピリジン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンを、スキームＣ－９中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000400
手順により、所望の化合物（３４．１ｍｇ、６５．４８μｍｏｌ、収率３１．０４％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.91～8.88 (m, 2H), 7.88～7.87 (m, 2H), 7.71～7.59 (m, 4H), 7.36～7.35 (m, 1H), 5.73～5.60 (m, 1H), 4.56 (dd, J = 13.2 Hz, 4.8 Hz, 2H), 3.92～3.55 (m, 4H), 2.44～2.38 (m, 2H). HPLC: 99.11% (220 nm), 99.33% (215 nm), 98.46% (254 nm). MS (ESI): C22H20Cl3N7O2の質量計算値483.10, m/z 実測値484.2 [M+H]+.
化合物２６０
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（５－メトキシニコチノイル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－９中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000401
手順により、所望の化合物（２３．４ｍｇ、４１．３６μｍｏｌ、収率２５．３９％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.03 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.66～7.59 (m, 4H), 7.36 (dd, J = 9.6 Hz, 2.0 Hz, 1H), 5.13 (s, 1H), 4.61 (s, 1H), 4.56 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.67 (s, 1H), 3.72 (s, 1H), 3.05 (s, 1H), 2.08～1.94 (m, 4H). HPLC: 99.84% (220 nm), 99.51% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C24H23Cl2N7O3の質量計算値527.12 m/z 実測値528.2 [M+H]+.
化合物２６１
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（５－メチルニコチノイル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－９中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000402
手順により、所望の化合物（２４．２ｍｇ、４４．０９μｍｏｌ、収率２７．０７％、ＨＣｌ）を黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.75 (s, 2H), 8.22 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.61 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.14 (s, 1H), 4.58 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 4.54 (s, 1H), 3.67 (s, 1H), 3.33 (s, 1H), 3.12 (s, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.08～1.94 (m, 4H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C24H23Cl2N7O2の質量計算値511.03, m/z 実測値512.2 [M+H]+.
化合物２６２
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（３－メチルピコリノイル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－９中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000403
手順により、所望の化合物（３０．８ｍｇ、６０．１１μｍｏｌ、収率３６．９０％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.45 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.64 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.43 (q, J = 4.0 Hz, 1H), 7.37 (dd, J = 8.0 Hz, 4.0 Hz, 1H), 5.17～5.12 (m, 1H), 4.63 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.58 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 3.34～3.31 (m, 1H), 3.25～3.22 (m, 1H), 3.05～3.02 (m, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.11～1.89 (m, 4H). HPLC: 98.99% (220 nm), 98.83% (215 nm), 99.29% (254 nm). MS (ESI): C24H24Cl3N7O2の質量計算値511.13, m/z 実測値512.2 [M+H]+.
化合物２６３
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（４－メトキシピコリノイル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－９中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000404
手順により、所望の化合物（２８．４ｍｇ、５０．２８μｍｏｌ、収率３０．８７％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.57 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.63～7.58 (m, 2H), 7.40 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.35 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 7.27 (dd, J = 2.4 Hz, 8.4 Hz, 1H), 5.16 (t, J = 4.4 Hz, 1H), 4.60～4.51 (m, 3H), 3.97 (s, 3H), 3.73 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 3.28 (t, J = 13.2 Hz, 1H), 3.06 (t, J = 10.4 Hz, 1H), 2.12～1.99 (m, 3H), 1.95～1.89 (m, 1H). HPLC: 99.44% (220 nm), 99.43% (215 nm), 99.31% (254 nm). MS (ESI): C24H24Cl3N7O3の質量計算値527.12, m/z 実測値528.2 [M+H]+.
化合物２６４
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（４－メチルピコリノイル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－９中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000405
手順により、所望の化合物（２２．１ｍｇ、４０．２７μｍｏｌ、収率２４．７２％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.49 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.64～7.58 (m, 2H), 7.50 (s, 1H), 7.40～7.33 (m, 2H), 5.20～5.12 (m, 1H), 4.60 (s, 1H), 4.55 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 3.78 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.25 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 3.02 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 2.40 (s, 3H), 2.11～1.96 (m, 3H), 1.94～1.88 (m, 1H). HPLC: 100.00% (220 nm), 100.00% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C24H24Cl3N7O2の質量計算値511.13, m/z 実測値512.2 [M+H]+.
化合物２６５
１－（１－（４Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－カルボニル）ピペリジン－４－イル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－９中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000406
手順により、所望の化合物（２４．０ｍｇ、４４．２７μｍｏｌ、収率２７．１８％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.48～8.47 (m, 1H), 7.62～7.58 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 8.4 Hz, 2.4 Hz, 1H), 6.84 (s, 1H), 5.21～5.15 (m, 1H), 4.62～4.56 (m, 1H), 4.48 (d, J = 3.6 Hz, 3H), 3.30～3.29 (m, 1H), 3.00～2.88 (m, 1H), 2.05～1.97 (m, 4H). HPLC: 96.80% (220 nm), 96.70% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C20H20Cl3N9O2の質量計算値487.10 m/z 実測値488.2 [M+H]+.
化合物２６６
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（４－メトキシニコチノイル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－９中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000407
手順により、所望の化合物（３６．２ｍｇ、６３．９２μｍｏｌ、収率３９．２４％、ＨＣｌ）を黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.86～8.76 (m, 2H), 7.68 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.62～7.58 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 9.6 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.95 (m, 1H), 5.11 (s, 1H), 5.59～5.56 (m, 1H), 4.50 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.11 (s, 3H), 3.51～3.48 (m, 1H), 3.26～3.22 (m, 1H), 3.08～3.04 (m, 1H), 2.07～1.89 (m, 4H). HPLC: 99.73% (220 nm), 99.76% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C24H24Cl3N7O3の質量計算値527.12, m/z 実測値528.2 [M+H]+.
化合物２６７
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（４－メチルニコチノイル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－９中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000408
手順により、所望の化合物（３８．１ｍｇ、６９．２４μｍｏｌ、収率４２．５０％、ＨＣｌ）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.77～8.68 (m, 2H), 7.72 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.62～5.58 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 8.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 5.15～5.09 (m, 1H), 4.65～5.60 (m, 1H), 4.50 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.43～3.32 (m, 1H), 3.32～3.29 (m, 1H), 3.28～3.07 (m, 1H), 2.49～2.46 (m, 3H), 2.33～1.87 (m, 4H). HPLC: 99.74% (220 nm), 99.43% (215 nm), 97.66% (254 nm). MS (ESI): C24H24Cl3N7O2の質量計算値511.13, m/z 実測値512.2 [M+H]+.
化合物２６８
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（３－メトキシピコリノイル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－９中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000409
手順により、所望の化合物（２９．２ｍｇ、５５．２６μｍｏｌ、収率２９．６８％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.34 (s, 1H), 8.18 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.62 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.49～7.46 (m, 1H), 7.39 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.18～5.12 (m, 1H), 4.65 (s, 2H), 4.59 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.31 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.20 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 3.01 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 2.06～1.87 (m, 4H). HPLC: 99.10% (220 nm), 99.06% (215 nm), 97.83% (254 nm). MS (ESI): C24H24Cl3N7O3の質量計算値527.12, m/z 実測値528.2 [M+H]+.
化合物２６９
１－（１－（１Ｈ－イミダゾール－２－カルボニル）ピペリジン－４－イル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－９中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000410
手順により、所望の化合物（３１．９ｍｇ、６３．８１μｍｏｌ、収率３９．１８％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.68 (s, 1H), 7.64 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.56 (s, 2H), 5.23～5.18 (m, 1H), 4.60～4.54 (m, 4H), 3.45～3.44 (m, 1H), 3.14～3.11 (m, 1H), 2.09～2.03 (m, 4H). HPLC: 97.49% (220 nm), 95.89% (215 nm), 98.22% (254 nm). MS (ESI): C21H21Cl3N8O2の質量計算値486.11 m/z 実測値487.2 [M+H]+.
化合物２７０
１－（１－（１Ｈ－イミダゾール－５－カルボニル）ピペリジン－４－イル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－９中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000411
手順により、所望の化合物（２６．９ｍｇ、５４．８０μｍｏｌ、収率２９．４４％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.22 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.69～7.60 (m, 3H), 7.38 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.19 (s, 1H), 4.63 (s, 2H), 4.51 (s, 1H), 4.03 (s, 1H), 3.54 (s, 1H), 3.10 (s, 1H), 2.07 (s, 4H). HPLC: 99.28% (220 nm), 98.88% (215 nm), 97.87% (254 nm). MS (ESI): C21H21Cl3N8O2の質量計算値486.11, m/z 実測値487.2 [M+H]+.
化合物２７１
１－（１－（１Ｈ－ピラゾール－３－カルボニル）ピペリジン－４－イル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－９中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000412
手順により、所望の化合物（２２．８ｍｇ、４５．０１μｍｏｌ、収率２７．６３％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.78 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.67 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.21～5.13 (m, 1H), 4.77～4.73 (m, 1H), 4.59 (s, 3H), 3.31～3.28 (m, 1H), 2.99～2.93 (m, 1H), 2.04～2.00 (m, 4H). HPLC: 96.19% (220 nm), 92.51% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C21H21Cl3N8O2の質量計算値486.11, m/z 実測値487.2 [M+H]+.
化合物２７２
１－（１－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－カルボニル）ピペリジン－４－イル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－９中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000413
手順により、所望の化合物（２６．８ｍｇ、５０．３９μｍｏｌ、収率２７．０７％、ＨＣｌ）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.32 (s, 1H), 7.64～7.59 (m, 3H), 7.35 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 5.21～5.17 (m, 1H), 4.71～4.65 (m, 1H), 4.61～4.54 (m, 1H), 4.51 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.39～3.35 (m, 1H), 3.03～2.98 (m, 1H), 2.07～1.94 (m, 4H). HPLC: 98.67% (220 nm), 97.49% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C20H20Cl3N9O2の質量計算値487.10, m/z 実測値488.2 [M+H]+.
化合物２７３
４－（４－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）－４－オキソブタン酸の調製
Figure 2022515775000414
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（４－ピペリジル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン塩酸塩（８０ｍｇ、２０３．４２μｍｏｌ、１当量）及びテトラヒドロフラン－２，５－ジオン（２０．３６ｍｇ、２０３．４２μｍｏｌ、１当量）のＣＨ３ＣＮ（３ｍＬ）中溶液に、ＴＥＡ（３０．８８ｍｇ、３０５．１３μｍｏｌ、４２．４７μＬ、１．５当量）及びＤＭＡＰ（４．９７ｍｇ、４０．６８μｍｏｌ、０．２当量）を加えた。混合物を２５℃で１０時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。混合物を濾過し、濾液を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８ １００ｍｍ×２５ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～５０％、２０分）により精製した。混合物を凍結乾燥下で乾燥して、４－［４－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］－１－ピペリジル］－４－オキソ－ブタン酸（２４．９ｍｇ、５０．０７μｍｏｌ、収率２４．６１％、純度９９．１９７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.59～7.56 (m, 2H), 7.55 (s, 1H), 7.32 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.14 (s, 1H), 5.09 (s, 1H), 4.46 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.02 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.26～3.23 (m, 1H), 2.60～2.55 (m, 2H), 2.47～2.43 (m, 2H), 2.42～2.37 (m, 2H), 2.00～1.89 (m, 3H), 1.81 (d, J = 12.8 Hz, 1H). HPLC: 99.20% (220 nm), 99.18% (215 nm), 98.21% (254 nm). MS (ESI): C21H22Cl2N6O4の質量計算値492.1, m/z 実測値493.1 [M+H]+.
化合物２７４
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボニル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
化合物２７５
（２Ｓ，４Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル２－（４－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－カルボニル）－４－ヒドロキシピロリジン－１－カルボキシラートを、スキームＣ－９中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000415
手順により、所望の化合物（１４．０ｍｇ、２２．１４μｍｏｌ、収率２９．０２％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.62～7.59 (m, 3H), 7.34 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.10 (s, 1H), 4.72 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 4.51 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.21 (br s, 1H), 4.04 (d, J = 17.6 Hz, 2H), 3.30 (s, 2H), 3.19～3.09 (m, 1H), 2.80～2.71 (m, 1H), 2.14～2.02 (m, 2H), 2.00 (br s, 2H), 1.84 (br d, J = 7.8 Hz, 2H), 1.36 (t, J = 14.4 Hz, 9H). HPLC: 95.90% (220 nm), 95.94% (215 nm), 95.95% (254 nm). MS (ESI): C27H33Cl2N7O5の質量計算値605.19, m/z 実測値606.2 [M+H]+.
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボニル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
Figure 2022515775000416
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｒ）－２－［４－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ピペリジン－１－カルボニル］－４－ヒドロキシ－ピロリジン－１－カルボキシラート（１２０ｍｇ、１９７．８６μｍｏｌ、１当量）（スキームＣ－９中のステップ１）のＥｔＯＡｃ（２ｍＬ）中溶液に、０℃でＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、２ｍＬ）を加えた。混合物を２５℃で１０時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１５％～４０％、１０分）により精製した。混合物を凍結乾燥下で乾燥して、５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボニル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩（２０．６ｍｇ、４０．１３μｍｏｌ、収率２０．２８％、純度９８．６５１％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.64～7.52 (m, 3H), 7.32 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 5.47 (br s, 1H), 5.12 (s, 1H), 4.83～4.65 (m, 1H), 4.47 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 4.45～4.42 (m, 1H), 3.92 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 3.30～3.24 (m, 2H), 3.06 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 2.98～2.89 (m, 1H), 2.18～2.02 (m, 2H), 2.00 (br s, 2H), 1.95～1.85 (m, 2H). HPLC: 98.65% (220 nm), 97.98% (215 nm), 98.52% (254 nm). MS (ESI): C22H26Cl3N7O3の質量計算値505.14, m/z 実測値506.1 [M+H]+.
化合物２７６
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（（２Ｓ，３Ｒ）－２，３，４－トリヒドロキシブタノイル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
Figure 2022515775000417
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（４－ピペリジル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（６０ｍｇ、１３９．６２μｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）、（３Ｒ，４Ｒ）－３，４－ジヒドロキシテトラヒドロフラン－２－オン（４９．４６ｍｇ、４１８．８７μｍｏｌ、３当量）及びＮａＯＭｅ（２２．６３ｍｇ、４１８．８７μｍｏｌ、３当量）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）中混合物を、５０℃で１６時間撹拌した。ＨＰＬＣ及びＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を室温に冷却し、Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）でクエンチした。混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１５％～３５％、１２分）により精製した。水性溶液を凍結乾燥して、５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［１－［（２Ｓ，３Ｒ）－２，３，４－トリヒドロキシブタノイル］－４－ピペリジル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（２５．９ｍｇ、５０．３０μｍｏｌ、収率３６．０２％、純度９９．３０７％）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.67～7.58 (m, 3H), 7.36 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.11 (s, 1H), 4.57 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 4.59 (s, 1H), 4.30 (s, 1H), 4.20 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 3.61 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 3.57～3.50 (m, 1H), 3.46～3.42 (m, 1H), 3.30 (dd, J = 10.4 Hz, 5.6 Hz, 1H), 3.18 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 2.80 (t, J = 11.2 Hz, 1H), 2.07～1.74 (m, 4H). HPLC: 99.31% (220 nm), 99.16% (215 nm), 98.79% (254 nm). MS (ESI): C21H24Cl2N6O5の質量計算値510.12, m/z 実測値511.1 [M+H]+.
化合物２７７
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（４－（ジメチルアミノ）－２，３－ジヒドロキシブタノイル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
（Ｅ）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（４－（ジメチルアミノ）ブタ－２－エノイル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－９中のステップ１）
Figure 2022515775000418
（Ｅ）－４－（ジメチルアミノ）ブタ－２－エン酸；塩酸塩（８４．７９ｍｇ、５１１．９５μｍｏｌ、１．１当量）、５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（４－ピペリジル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．２ｇ、４６５．４１μｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）、ＤＩＥＡ（１８０．４５ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ、２４３．１９μＬ、３当量）、ＨＯＢｔ（１２．５８ｍｇ、９３．０８μｍｏｌ、０．２当量）及びＥＤＣＩ（１０７．０６ｍｇ、５５８．４９μｍｏｌ、１．２当量）のＤＭＦ（２ｍＬ）中混合物を、２５℃で６時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳ及びＨＰＬＣは、５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩が完全に消費され、所望の質量を有する１つの主要なピークが検出されていることを示した。反応混合物を２５℃でＨ２Ｏ（５ｍＬ）にてクエンチし、次いでＤＣＭ及びｉ－ＰｒＯＨ（容量：容量＝３：１、１２ｍＬ×６）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［１－［（Ｅ）－４－（ジメチルアミノ）ブタ－２－エノイル］－４－ピペリジル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．３ｇ、粗製物）を黒茶褐色油状物として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.18 (s, 1H), 7.57 (t, J = 5.2 Hz, 3H), 7.32 (dd, J = 1.6 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.67～6.56 (m, 2H), 5.16～5.03 (m, 1H), 4.47 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.23～4.10 (m, 1H), 3.42～3.20 (m, 4H), 3.17 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 2.25 (s, 6H), 2.01～1.82 (m, 4H).
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（４－（ジメチルアミノ）－２，３－ジヒドロキシブタノイル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
Figure 2022515775000419
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［１－［（Ｅ）－４－（ジメチルアミノ）ブタ－２－エノイル］－４－ピペリジル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．３ｇ、５９４．７５μｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（２．５ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２．５ｍＬ）中溶液に、ＯｓＯ４（３０．２４ｍｇ、１１８．９５μｍｏｌ、０．２当量）を加えた。３０分後、ＮＭＯ（２０９．０２ｍｇ、１．７８ｍｍｏｌ、１８８．３１μＬ、３当量）を加えた。混合物を２５℃で３時間撹拌した。ＨＰＬＣは、（Ｅ）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（４－（ジメチルアミノ）ブタ－２－エノイル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンが完全に消費されていることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。水溶液をＥｔＯＡｃ（５ｍＬ×４）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１５％～５５％、１２分）により精製した。水性溶液を凍結乾燥して、化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［１－［４－（ジメチルアミノ）－２，３－ジヒドロキシ－ブタノイル］－４－ピペリジル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１０ｍｇ、１７．０９μｍｏｌ、収率２．８７％、純度９８．２２％、ＨＣｌ）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.42 (s, 1H), 7.68～7.57 (m, 3H), 7.44～7.30 (m, 1H), 7.13 (s, 1H), 5.32～5.01 (m, 1H), 4.54～4.42 (m, 3H), 4.31～4.20 (m, 1H), 4.17～3.99 (m, 2H), 3.27～3.20 (m, 4H), 2.86～2.79 (m, 6H), 2.09～1.97 (m, 4H). HPLC: 98.22% (220 nm), 97.59% (215 nm), 98.12% (254 nm). MS (ESI): C23H30Cl3N7O4の質量計算値537.17, m/z 実測値538.2 [M+H]+.
化合物２７８
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（（２Ｓ，４Ｓ）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボニル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
（２Ｓ，４Ｓ）－ｔｅｒｔ－ブチル２－（４－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－カルボニル）－４－ヒドロキシピロリジン－１－カルボキシラートの調製（スキームＣ－９中のステップ１）
Figure 2022515775000420
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（４－ピペリジル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（６０ｍｇ、１３９．６２μｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）、（２Ｓ，４Ｓ）－１－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－ヒドロキシ－ピロリジン－２－カルボン酸（４１．９７ｍｇ、１８１．５１μｍｏｌ、１．３当量）及びＤＩＥＡ（１０８．２７ｍｇ、８３７．７３μｍｏｌ、１４５．９１μＬ、６当量）のＴＨＦ（２ｍＬ）中溶液に、０℃でＴ３Ｐ（２６６．５５ｍｇ、４１８．８７μｍｏｌ、２４９．１１μＬ、純度５０％、３当量）を滴下添加した。混合物を２５℃で３時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、約２０％の５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩が残っていることを示した。数種の新規ピークがＬＣ－ＭＳ上で示され、所望の化合物約７０％が検出された。反応混合物を２０℃でＨ２Ｏ（５ｍＬ）にてクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－［４－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ピペリジン－１－カルボニル］－４－ヒドロキシ－ピロリジン－１－カルボキシラート（２７０ｍｇ、粗製物）を灰白色固体として得た。
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（（２Ｓ，４Ｓ）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボニル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
Figure 2022515775000421
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－［４－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］ピペリジン－１－カルボニル］－４－ヒドロキシ－ピロリジン－１－カルボキシラート（２７０ｍｇ、４４５．１８μｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＡｃ（２ｍＬ）及びＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（８ｍＬ、４Ｍ）中混合物を、２０℃で２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１０％～２５％、１２分）により精製した。水性溶液を凍結乾燥して、化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［１－［（２Ｓ，４Ｓ）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボニル］－４－ピペリジル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１７．５ｍｇ、３１．５０μｍｏｌ、収率７．０８％、純度９７．７１１％、ＨＣｌ）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.20～9.79 (m, 1H), 8.57～8.43 (m, 1H), 7.66～7.53 (m, 3H), 7.39～7.18 (m, 2H), 5.19～5.07 (m, 1H), 4.69～4.54 (m, 1H), 4.53～4.37 (m, 4H), 3.96～3.79 (m, 2H), 3.18 (s, 2H), 3.02～2.89 (m, 1H), 2.64～2.57 (m, 1H), 2.05～1.73 (m, 5H). HPLC: 97.71% (220 nm), 95.90% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C22H26Cl3N7O3の質量計算値505.14, m/z 実測値506.1 [M+H]+.
化合物２７９
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（２－（ジメチルアミノ）－３－ヒドロキシプロパノイル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
ｔｅｒｔ－ブチル（１－（４－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）－３－ヒドロキシ－１－オキソプロパン－２－イル）カルバマートの調製（スキームＣ－９中のステップ１）
Figure 2022515775000422
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（４－ピペリジル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（３００ｍｇ、６９８．１１μｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）、２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－３－ヒドロキシ－プロパン酸（２１４．８９ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ、１．５当量）、ＥＤＣＩ（１６０．５９ｍｇ、８３７．７３μｍｏｌ、１．２当量）、ＨＯＢｔ（１８．８７ｍｇ、１３９．６２μｍｏｌ、０．２当量）及びＤＩＥＡ（２７０．６７ｍｇ、２．０９ｍｍｏｌ、３６４．７９μＬ、３当量）のＤＭＦ（３ｍＬ）中混合物を、２５℃で１２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（４－ピペリジル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（ＨＣｌ）が完全に消費され、所望の質量を有する１つのピークが検出されていることを示した。反応混合物をＨ２Ｏ（２ｍＬ）でクエンチした。次いで混合物をＥｔＯＡｃ（４ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（４ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－［４－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］－１－ピペリジル］－１－（ヒドロキシメチル）－２－オキソ－エチル］カルバマート（８００ｍｇ、粗製物）を茶褐色油状物として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.17 (s, 1H), 7.58～7.56 (m, 2H), 7.32 (dd, J = 8.4 Hz, 1.6 Hz, 1H), 7.61～7.59 (m, 1H), 5.10 (s, 1H), 4.47 (d, J = 5.6 Hz, 3H), 3.61～3.55 (m, 1H), 3.50～3.42 (m, 1H), 3.32 (s, 2H), 3.25～3.17 (m, 1H), 3.01～2.98 (m, 1H), 2.03～1.95 (m, 3H), 1.87～1.80 (m, 1H), 1.37 (s, 9H).
１－（１－（２－アミノ－３－ヒドロキシプロパノイル）ピペリジン－４－イル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
Figure 2022515775000423
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－［４－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］－１－ピペリジル］－１－（ヒドロキシメチル）－２－オキソ－エチル］カルバマート（７００ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＡｃ（３ｍＬ）及びＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、７ｍＬ）中混合物を、２５℃で１時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮して、１－（１－（２－アミノ－３－ヒドロキシプロパノイル）ピペリジン－４－イル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（６５０ｍｇ、粗製物）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.95 (s, 1H), 8.19 (s, 2H), 7.74 (d, J = 14.0 Hz, 2H), 7.64 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.14～5.10 (m, 1H), 4.75 (s, 1H), 4.48～4.46 (m, 2H), 3.74～3.70 (m, 1H), 3.68～3.58 (m, 1H), 3.09～3.03 (m, 1H), 3.00～2.93 (m, 1H), 2.70～2.67 (m, 2H), 2.06～1.98 (m, 4H).
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（２－（ジメチルアミノ）－３－ヒドロキシプロパノイル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
Figure 2022515775000424
１－［１－（２－アミノ－３－ヒドロキシ－プロパノイル）－４－ピペリジル］－５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（６４０ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）中溶液に、０℃でホルムアルデヒド（３２４．４１ｍｇ、４．００ｍｍｏｌ、２９７．６３μＬ、純度３７％、３当量）を加えた。混合物を０℃で１０分間撹拌した。次いでＡｃＯＨ（８．００ｍｇ、１３３．２４μｍｏｌ、７．６２μＬ、０．１当量）及びＮａＢＨ３ＣＮ（６６９．８１ｍｇ、１０．６６ｍｍｏｌ、８当量）を０℃で加えた。混合物を２５℃で２時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物をＨ２Ｏ（２ｍＬ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（４ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（４ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（ＨＣｌ条件カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～３０％、１２分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［１－［２－（ジメチルアミノ）－３－ヒドロキシ－プロパノイル］－４－ピペリジル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（９０ｍｇ、１７６．０２μｍｏｌ、収率１３．２１％、純度９９．４３％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.64 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.67 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.61 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.16～5.11 (m, 1H), 4.71～4.70 (m, 1H), 4.64～4.59 (m, 2H), 4.52～4.45 (m, 1H), 4.04～3.98 (m, 1H), 3.89～3.79 (m, 2H), 3.36～3.30 (m, 1H), 3.00～2.91 (m, 1H), 2.86～2.75 (m, 6H), 2.09～2.03 (m, 3H), 1.96～1.88 (m, 1H). HPLC: 99.43% (220 nm), 99.28% (215 nm), 99.19% (254 nm). MS (ESI): C22H28Cl3N7O3の質量計算値507.16, m/z 実測値508.1 [M+H]+.
スキームＣ－１０
Figure 2022515775000425
スキームＣ－１０中の化合物を調製するための一般的手順
化合物の調製（スキームＣ－１０中のステップ１）
Figure 2022515775000426
Ｒ’ＣＯＯＨ（３０６．９０μｍｏｌ、１当量）のＤＭＦ又はＤＣＭ（１０ｍＬ／ｍｍｏｌ）中溶液に、０℃でＥＤＣＩ（６１３．８０μｍｏｌ、２当量）、ＨＯＢｔ（９２．０７μｍｏｌ、０．３当量）及びＤＩＥＡ（９２０．７１μｍｏｌ、３当量）を加えた。３０分後、５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（ピロリジン－３－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン又は５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（ピペリジン－３－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（３０６．９０μｍｏｌ、１当量）を混合物中に加えた。混合物を２５℃で１０時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物をＨ２Ｏでクエンチし、次いでＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製した。カラム：ａ）Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｂ）Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ。移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～５０％、１２分又は１０分。水性溶液を凍結乾燥して、所望の化合物を得た。
化合物２８０
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（１－ニコチノイルピペリジン－３－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製（スキームＣ－１０中のステップ１）
Figure 2022515775000427
ニコチン酸（３７．７８ｍｇ、３０６．９０μｍｏｌ、２５．７０μＬ、１当量）のＤＣＭ（３ｍＬ）中溶液に、０℃でＥＤＣＩ（１１７．６７ｍｇ、６１３．８０μｍｏｌ、２当量）、ＨＯＢｔ（１２．４４ｍｇ、９２．０７μｍｏｌ、０．３当量）及びＤＩＥＡ（１１８．９９ｍｇ、９２０．７１μｍｏｌ、１６０．３７μＬ、３当量）を加えた。３０分後、５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（ピペリジン－３－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（１２５ｍｇ、３０６．９０μｍｏｌ、１当量）を混合物中に加えた。混合物を２５℃で１０時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～５０％、１０分）により精製した。混合物を凍結乾燥して、５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（１－ニコチノイルピペリジン－３－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（４２．７ｍｇ、７４．９７μｍｏｌ、収率２４．４３％、純度９６．３６２％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.94～8.79 (m, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.13～7.89 (m, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.40 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.63 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 4.26～4.14 (m, 3H), 3.39 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.27 (d, J = 14.0 Hz, 1 H), 3.12～3.09 (m, 0.5 H), 2.92～2.85 (m, 1.5H), 2.20 (br s, 1H), 1.80～1.58 (m, 2H), 1.45 (br s, 1H), 1.34～1.26 (m, 1H). HPLC: 96.36% (220 nm), 95.85% (215 nm), 95.29% (254 nm). MS (ESI): C24H24Cl3N7O2の質量計算値511.13, m/z 実測値512.1 [M+H]+.
化合物２８１
１－（（１－アセチルピロリジン－３－イル）メチル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＣ－１０中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000428
手順により、所望の化合物（３７．０ｍｇ、８４．３２μｍｏｌ、収率４１．４５％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.73～7.59 (m, 3H), 7.59～7.38 (m, 1H), 7.37 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.56 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 4.53～4.42 (m, 2H), 3.51～3.22 (m, 4H), 3.08～3.03 (m, 1H), 2.80～2.69 (m, 1H), 1.90 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.89～1.76 (m, 1H), 1.71～1.53 (m, 1H). HPLC: 99.21% (220 nm), 98.93% (215 nm), 98.52% (254 nm). MS (ESI): C19H20Cl2N6O2の質量計算値434.10, m/z 実測値435.1 [M+H]+.
スキームＣ－１１
Figure 2022515775000429
化合物２８２
１－（２－（（２Ｈ－テトラゾール－５－イル）メトキシ）エチル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製（スキームＣ－１１）
ｔｅｒｔ－ブチル２－［２－［ｔｅｒｔ－ブチル（ジメチル）シリル］オキシエトキシ］アセタートの調製（スキームＣ－１１中のステップ１）
Figure 2022515775000430
ＮａＨ（７．３７ｇ、１８４．３２ｍｍｏｌ、純度６０％、１．３当量）のＴＨＦ（５００ｍＬ）中混合物に、０℃で２－［ｔｅｒｔ－ブチル（ジメチル）シリル］オキシエタノール（２５ｇ、１４１．７８ｍｍｏｌ、１当量）を滴下添加した。３０分後、ｔｅｒｔ－ブチル２－ブロモアセタート（３５．９５ｇ、１８４．３２ｍｍｏｌ、２７．２４ｍＬ、１．３当量）を０℃で滴下添加した。混合物を２５℃で１時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。混合物を氷水（５００ｍＬ）中に注ぎ入れ、減圧下で濃縮してＴＨＦを除去し、次いでＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５００ｍＬ×３）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物ｔｅｒｔ－ブチル２－［２－［ｔｅｒｔ－ブチル（ジメチル）シリル］オキシエトキシ］アセタート（４０ｇ、粗製物）を茶褐色油状物として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 4.04 (s, 2H), 3.81 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.63 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 1.48 (s, 9H), 0.90 (s, 9H), 0.08 (s, 6H).
ｔｅｒｔ－ブチル２－（２－ヒドロキシエトキシ）アセタートの調製（スキームＣ－１１中のステップ２）
Figure 2022515775000431
ｔｅｒｔ－ブチル２－［２－［ｔｅｒｔ－ブチル（ジメチル）シリル］オキシエトキシ］アセタート（４０ｇ、１３７．７１ｍｍｏｌ、１当量）のテトラブチルアンモニウムフルオリド（ＴＨＦ中１Ｍ、２０６．５６ｍＬ、１．５当量）中混合物を、２５℃で４時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を０℃でＨ２Ｏ（１００ｍＬ）にてクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２００ｍＬ×３）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム２２０ｇ、１００ｍＬ／分で０～６０％石油エーテル／酢酸エチルの溶出液）により精製した。溶出液を減圧下で除去した。化合物ｔｅｒｔ－ブチル２－（２－ヒドロキシエトキシ）アセタート（３．１ｇ、１７．５９ｍｍｏｌ、収率１２．７８％）を茶褐色油状物として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 4.02 (s, 2H), 3.75～3.73 (m, 2H), 3.68～3.66 (m, 2H), 1.49 (s, 9H).
ｔｅｒｔ－ブチル２－［２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ］アセタートの調製（スキームＣ－１１中のステップ３）
Figure 2022515775000432
５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（８００ｍｇ、４．３３ｍｍｏｌ、１当量）、ｔｅｒｔ－ブチル２－（２－ヒドロキシエトキシ）アセタート（９９２．８２ｍｇ、５．６３ｍｍｏｌ、１．３当量）及びＰＰｈ３（１．７１ｇ、６．５０ｍｍｏｌ、１．５当量）のＴＨＦ（１０ｍＬ）中溶液に、０℃でＤＩＡＤ（１．３１ｇ、６．５０ｍｍｏｌ、１．２６ｍＬ、１．５当量）を滴下添加した。混合物を２５℃で５時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）でクエンチし、減圧下で濃縮した。次いで水溶液をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム１２ｇ、６０ｍＬ／分で０～６０％石油エーテル／酢酸エチルの溶出液）により精製した。溶出液を減圧下で除去した。化合物ｔｅｒｔ－ブチル２－［２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ］アセタート（１．７ｇ、粗製物）を白色固体として得た。化合物ｔｅｒｔ－ブチル２－［２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）エトキシ］アセタート（０．７４ｇ、粗製物）を白色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.05 (s, 1H), 4.76 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.23 (s, 3H), 4.00 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.88 (s, 2H), 1.43 (s, 9H).
２－［２－（５－クロロ－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ］酢酸の調製（スキームＣ－１１中のステップ４）
Figure 2022515775000433
ｔｅｒｔ－ブチル２－［２－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ］アセタート（１．７ｇ、４．９６ｍｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１０ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（６２４．３０ｍｇ、１４．８８ｍｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を２５℃で２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。水溶液を３Ｎ ＨＣｌでｐＨ＝６にし、多少の白色固体が生成された。濾過した後に固体を集め、減圧下で濃縮した。化合物２－［２－（５－クロロ－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ］酢酸（７５０ｍｇ、２．７５ｍｍｏｌ、収率５５．４７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.59 (s, 1H), 4.65 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.73 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.61 (s, 2H).
化合物２８３
２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］酢酸の調製（スキームＣ－１１中のステップ５）
Figure 2022515775000434
２－［２－（５－クロロ－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ］酢酸（５０ｍｇ、１８３．３９μｍｏｌ、１当量）及び（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（６４．５７ｍｇ、３６６．７８μｍｏｌ、４８．９２μＬ、２当量）の２－メチル－２－ブタノール（２ｍＬ）中混合物を、１３０℃で１０時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １００ｍｍ×２５ｍｍ ３μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１５％～４５％、１２分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］酢酸（３１．８ｍｇ、７６．８３μｍｏｌ、収率４１．８９％、純度９９．５９％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.60～7.58 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 4.59 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.96 (s, 2H), 3.86 (t, J = 5.2 Hz, 2H). HPLC: 99.59 % (220 nm), 99.30 % (215 nm), 100.00 % (254 nm). MS (ESI): C16H15Cl2N5O4の質量計算値411.05, m/z 実測値412.0 [M+H]+.
化合物２８４
２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］アセトアミドの調製（スキームＣ－１１中のステップ６）
Figure 2022515775000435
２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］酢酸（５０ｍｇ、１２１．２９μｍｏｌ、１当量）、ＨＡＴＵ（５９．９５ｍｇ、１５７．６８μｍｏｌ、１．３当量）、ＤＩＥＡ（４７．０３ｍｇ、３６３．８８μｍｏｌ、６３．３８μＬ、３当量）及びＮＨ４Ｃｌ（６４．８８ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ、１０当量）のＤＭＦ（１ｍＬ）中混合物を、２５℃で４時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を濾過して、不溶物を除去した。濾液を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～４０％、１２分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］アセトアミド（２１．８ｍｇ、５１．８３μｍｏｌ、収率４２．７３％、純度９７．７７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.60～7.58 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 8.4 Hz, 1.6 Hz, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.79 (s, 1H), 4.62 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.83 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.75 (s, 2H). HPLC: 97.77 % (220 nm), 96.38 % (215 nm), 97.03 % (254 nm). MS (ESI): C16H16Cl2N6O3の質量計算値410.07, m/z 実測値411.0 [M+H]+.
化合物２８５
２－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）アセトニトリルの調製（スキームＣ－１１中のステップ７）
Figure 2022515775000436
２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］アセトアミド（４５ｍｇ、１０９．４２μｍｏｌ、１当量）及びＴＥＡ（４４．２９ｍｇ、４３７．７０μｍｏｌ、６０．９２μＬ、４当量）のＤＣＭ（１ｍＬ）中溶液に、０℃でＤＣＭ（１ｍＬ）中のＴＦＡＡ（９１．９３ｍｇ、４３７．７０μｍｏｌ、６０．８８μＬ、４当量）を加えた。混合物を２５℃で２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を０℃でＨ２Ｏ（２ｍＬ）にてクエンチし、次いでＤＣＭ（２ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ８μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２５％～５０％、１０分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］アセトニトリル（１０．１ｍｇ、２５．１８μｍｏｌ、収率２３．０１％、純度９８．０２％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.60～7.58 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 8.4 Hz, 1.6 Hz, 1H), 6.75 (s, 1H), 4.63 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.43 (s, 2H), 3.91 (t, J = 5.2 Hz, 2H). HPLC: 98.02 % (220 nm), 96.58 % (215 nm), 97.87 % (254 nm). MS (ESI): C16H14Cl2N6O2の質量計算値392.06, m/z 実測値393.0 [M+H]+.
１－（２－（（２Ｈ－テトラゾール－５－イル）メトキシ）エチル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製（スキームＣ－１１中のステップ８）
Figure 2022515775000437
２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］アセトニトリル（３０ｍｇ、７６．２９μｍｏｌ、１当量）のトルエン（１ｍＬ）中溶液に、ＴＢＡＦ（１Ｍ、９１．５５μＬ、１．２当量）及びＴＭＳＮ３（１７．５８ｍｇ、１５２．５８μｍｏｌ、２０．０７μＬ、２当量）を滴下添加した。混合物を１２０℃で１２時間撹拌した。ＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物をＨ２Ｏ（１ｍＬ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（１ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～５０％、１２分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２Ｈ－テトラゾール－５－イルメトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１９．１ｍｇ、３９．３６μｍｏｌ、収率５１．５９％、純度９７．４２％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.62～7.59 (m, 3H), 7.35 (dd, J = 8.0 Hz, 1.6 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 4.80 (s, 2H), 4.64 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.53 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.92 (t, J = 5.2 Hz, 2H). HPLC: 97.42 % (220 nm), 95.83 % (215 nm), 96.97 % (254 nm). MS (ESI): C16H16Cl3N9O2の質量計算値435.07, m/z 実測値436.0 [M+H]+.
化合物２８６
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２，２－二重水素化－２－ヒドロキシル－エトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンの調製（スキームＣ－１１）
化合物２８７
メチル２－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）アセタートの調製（スキームＣ－１１中のステップ９）
Figure 2022515775000438
２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］酢酸（４０ｍｇ、９７．０３μｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（１ｍＬ）中溶液に、０℃でＳＯＣｌ２（５７．７２ｍｇ、４８５．１７μｍｏｌ、３５．２０μＬ、５当量）を滴下添加した。混合物を２５℃で１時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。多少の固体が生成された。濾過した後、固体をＭｅＯＨ（２ｍＬ×３）で洗浄し、集めた。化合物メチル２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］アセタート（３９．５ｍｇ、８７．６６μｍｏｌ、収率９０．３４％、純度９４．６％）を白色固体として得、１５．２ｍｇを次に使用した。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.61～7.59 (m, 3H), 7.34 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 4.60 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.50 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.08 (s, 2H), 3.87 (t, J = 5.26 Hz, 2H), 3.60 (s, 3H). HPLC: 94.60 % (220 nm), 92.18 % (215 nm), 95.05 % (254 nm). MS (ESI): C17H17Cl2N5O4の質量計算値425.07, m/z 実測値426.1 [M+H]+.
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２，２－二重水素化－２－ヒドロキシル－エトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンの調製（スキームＣ－１１中のステップ１０）
Figure 2022515775000439
メチル２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］アセタート（３０ｍｇ、７０．３８μｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（１ｍＬ）中溶液に、０℃でＬｉＡｌＤ４（４．１２ｍｇ、１０５．５７μｍｏｌ、１．５当量）を少しずつ加えた。混合物を０℃で１時間撹拌した。ＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物をＤ２Ｏ（１ｍＬ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（１ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ８μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～４０％、１０分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２，２－二重水素化－２－ヒドロキシル－エトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１０．８ｍｇ、２５．４２μｍｏｌ、収率３６．１２％、純度９４．２２％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.60～7.56 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.81 (s, 1H), 4.57 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.79 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.37 (s, 2H). HPLC: 94.22 % (220 nm), 94.05 % (215 nm), 94.77 % (254 nm). MS (ESI): C16H15D2Cl2N5O3の質量計算値399.08, m/z 実測値400.2 [M+H]+.
スキームＣ－１２
Figure 2022515775000440
化合物２８８及び化合物２８９
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（３－ヒドロキシ－２－モルホリノプロピル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩及び５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－ヒドロキシ－３－モルホリノプロピル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
化合物２９０
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（３－ヒドロキシ－２－オキソプロピル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＣ－１２中のステップ１）
Figure 2022515775000441
オゾンを－７８℃で１５分間５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（ヒドロキシメチル）アリル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（８０ｍｇ、２１０．４０μｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）中溶液中に吹き込んだ。過剰のＯ３をＯ２によりパージした後、Ｍｅ２Ｓ（２６．１４ｍｇ、４２０．８０μｍｏｌ、３０．９０μＬ、２当量）を２０℃で加えた。混合物を２０℃で１時間撹拌した。ＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～４０％、１２分）により精製した。水性溶液を凍結乾燥して、化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（３－ヒドロキシ－２－オキソ－プロピル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（６．８ｍｇ、１７．０１μｍｏｌ、収率８．０８％、純度９５．５９８％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.71～7.53 (m, 3H), 7.36 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 5.43 (s, 2H), 4.54 (s, 2H), 4.21 (s, 2H). HPLC: 95.60% (220 nm), 94.95% (215 nm), 97.53% (254 nm). MS (ESI): C15H13Cl2N5O3の質量計算値381.04, m/z 実測値382.1 [M+H]+.
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（３－ヒドロキシ－２－モルホリノプロピル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩及び５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－ヒドロキシ－３－モルホリノプロピル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製（スキームＣ－１２中のステップ２）
Figure 2022515775000442
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（３－ヒドロキシ－２－オキソ－プロピル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（５０ｍｇ、１３０．８２μｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中溶液に、０℃でモルホリン（５６．９９ｍｇ、６５４．１１μｍｏｌ、５７．５６μＬ、５当量）及びＮａＢＨ３ＣＮ（２４．６６ｍｇ、３９２．４６μｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を２０℃で１６時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を０℃でＨ２Ｏ（５ｍＬ）にてクエンチし、次いで減圧下で濃縮した。水溶液をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１５％～３０％、１２分）により精製した。水性溶液を凍結乾燥して、５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（３－ヒドロキシ－２－モルホリノ－プロピル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（化合物２８８）（９．５ｍｇ、１９．０２μｍｏｌ、収率１４．５４％、純度９８．０６０％、ＨＣｌ）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.22 (s, 1H), 7.86～7.69 (m, 1H), 7.68～7.59 (m, 3H), 7.36 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.57 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.53～4.45 (m, 2H), 3.90 (t, J = 11.6 Hz, 2H), 3.80～3.75 (m, 2H), 3.70 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.36 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 3.16～3.06 (m, 4H). HPLC: 98.06% (220 nm), 97.40 % (215 nm), 98.35% (254 nm). MS (ESI): C19H23Cl3N6O3の質量計算値452.11, m/z 実測値453.1 [M+H]+.５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（２－ヒドロキシ－３－モルホリノ－プロピル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（化合物２８９）（１３．１ｍｇ、２５．２８μｍｏｌ、収率１９．３２％、純度９４．５０７％、ＨＣｌ）を赤茶褐色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.77～10.38 (m, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.64～7.56 (m, 3H), 7.35 (dd, J = 1.6, 8.4 Hz, 1H), 4.99 (dd, J = 5.2, 14.8 Hz, 1H), 4.82 (dd, J = 6.8, 14.4 Hz, 1H), 4.55 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.95～3.79 (m, 6H), 3.34～3.06 (m, 5H). HPLC: 94.51% (220 nm), 93.99 % (215 nm), 94.51% (254 nm). MS (ESI): C19H23Cl3N6O3の質量計算値452.11, m/z 実測値453.1 [M+H]+.
スキームＣ－１３
Figure 2022515775000443
化合物２９１
５－［［二重水素化－（３，４－ジクロロフェニル）メチル］アミノ］－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンの調製
３，４－ジクロロベンズアミドの調製（スキームＣ－１３中のステップ１）
Figure 2022515775000444
３，４－ジクロロ安息香酸（２ｇ、１０．４７ｍｍｏｌ、１当量）の二塩化オキサリル（６．６５ｇ、５２．３５ｍｍｏｌ、４．５８ｍＬ、５当量）中溶液に、０℃でＤＭＦ（３８．２６ｍｇ、５２３．５３μｍｏｌ、４０．２８μＬ、０．０５当量）を滴下添加した。混合物を２５℃で１２時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。残渣をＤＣＭ（２ｍＬ）で希釈し、０℃でＮＨ３・Ｈ２Ｏ（７．３４ｇ、５２．３５ｍｍｏｌ、８．０７ｍＬ、純度２５％、５当量）に滴下添加した。次いで混合物を０℃で１時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。多少の白色固体が生成された。濾過した後、固体をＨ２Ｏ（１０ｍＬ×３）で洗浄し、集めた。化合物３，４－ジクロロベンズアミド（１．７ｇ、８．９５ｍｍｏｌ、収率８５．４４％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.15 (s, 1H), 8.09 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.84 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.61 (s, 1H).
二重水素化－（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン）の調製（スキームＣ－１３中のステップ２）
Figure 2022515775000445
ＬｉＡｌＤ４（２０５．２３ｍｇ、５．２６ｍｍｏｌ、２当量）のＴＨＦ（５ｍＬ）中混合物に、０℃で３，４－ジクロロベンズアミド（５００ｍｇ、２．６３ｍｍｏｌ、１当量）を少しずつ加えた。混合物を０℃で２時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を０℃でＤ２Ｏ（２ｍＬ）にてクエンチし、Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）で希釈した。有機溶媒を減圧下で除去した。水溶液をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム１２ｇ、６０ｍＬ／分で０～１０％酢酸エチル／ＭｅＯＨの溶出液）により精製した。溶出液を減圧下で除去した。化合物二重水素化－（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（２８０ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ、収率５９．７７％）を黄色油状物として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.44 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.16 (dd, J = 8.0 Hz, 2.0 Hz, 1H).
５－［［二重水素化－（３，４－ジクロロフェニル）メチル］アミノ］－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンの調製（スキームＣ－１３中のステップ３）
Figure 2022515775000446
５－クロロ－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（８０ｍｇ、３０９．２８μｍｏｌ、１当量）及び二重水素化－（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（８２．６０ｍｇ、４６３．９３μｍｏｌ、１．５当量）の２－メチル－２－ブタノール（１ｍＬ）中混合物を、１００℃で１２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ８μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：２０％～４０％、１０分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物５－［［二重水素化－（３，４－ジクロロフェニル）メチル］アミノ］－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１０．８ｍｇ、２５．５４μｍｏｌ、収率８．２６％、純度９４．６７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.60～7.58 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 4.57 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.79 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.42～3.38 (m, 4H). HPLC: 94.67% (220 nm), 91.25% (215 nm), 97.10% (254 nm). MS (ESI): C16H15D2Cl2N5O3の質量計算値399.08, m/z 実測値400.1 [M+H]+.
スキームＣ－１４
Figure 2022515775000447
スキームＣ－１４中の化合物を調製するための一般的手順
化合物の調製（スキームＣ－１４中のステップ１）
Figure 2022515775000448
１－（２－アミノ－Ａ）－５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１６９．８７μｍｏｌ、ＨＣｌ塩、１当量）、ピラゾール－１－カルボキサミジン又は（Ｚ）－メチルＮ－Ｒ１－Ｎ’－Ｒ１’カルバムイミドチオアート（１６９．８７μｍｏｌ～３３９．７４μｍｏｌ、１当量～１．５当量）及びＤＩＥＡ（３３９．７５μｍｏｌ、２当量）のＭｅＣＮ（３ｍＬ／ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（３ｍＬ／ｍｍｏｌ）又はピリジン（５ｍＬ／ｍｍｏｌ）中混合物を、２０℃～１２０℃で一定時間（１０時間～１６時間）撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製した。カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ。移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：５％～４５％、１２分。水性溶液を凍結乾燥して、所望の生成物を得た。
化合物２９２
１－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エチル）グアニジン塩酸塩の調製（スキームＣ－１４中のステップ１）
Figure 2022515775000449
１－（２－アミノエチル）－５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（６０ｍｇ、１６９．８７μｍｏｌ、ＨＣｌ塩、１当量）、ピラゾール－１－カルボキサミジン（２４．９０ｍｇ、１６９．８７μｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）及びＤＩＥＡ（４３．９１ｍｇ、３３９．７５μｍｏｌ、５９．１８μＬ、２当量）のＭｅＣＮ（０．５ｍＬ）及びＤＭＦ（０．５ｍＬ）中混合物を、２０℃で１６時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ＭｅＣＮを除去した。濾過した後、濾液を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～４５％、１２分）により精製した。水性溶液を凍結乾燥して、１－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エチル］グアニジン（４０．６ｍｇ、８８．１０μｍｏｌ、収率５１．８６％、純度９３．６７９％、ＨＣｌ）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.03 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.71～7.60 (m, 3H), 7.46 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 7.38 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 7.34～6.84 (m, 2H), 4.61 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 4.54 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.59 (q, J = 6.0 Hz, 2H). HPLC: 93.68% (220 nm), 93.40% (215 nm), 96.08% (254 nm). MS (ESI): C15H17Cl3N8Oの質量計算値394.08, m/z 実測値395.1 [M+H]+.
化合物２９３
１－（２－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）エチル）グアニジン塩酸塩を、スキームＣ－１４中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000450
手順により、所望の化合物（３６．２ｍｇ、８１．９６μｍｏｌ、収率８１．４０％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.67～7.58 (m, 3H), 7.49 (s, 1H), 7.37 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.11 (s, 3H), 4.67～.51 (m, 4H), 3.83 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.47 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.21 (d, J = 4.8 Hz, 2H). HPLC: 99.46% (220 nm), 99.37% (215 nm), 99.54% (254 nm). MS (ESI): C17H21Cl3N8O2の質量計算値438.11, m/z 実測値439.1 [M+H]+.
化合物２９４
１－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エチル）－３－メチルグアニジン塩酸塩を、スキームＣ－１４中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000451
手順により、所望の化合物（３０．２ｍｇ、６７．７５μｍｏｌ、収率３４．１９％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.25 (s, 1H), 7.77～7.52 (m, 4H), 7.42 (d, J = 12.0 Hz, 4H), 4.68～4.50 (m, 4H), 3.60 (s, 2H), 2.67 (s, 3H). HPLC: 98.66% (220 nm), 98.75% (215 nm), 98.55% (254 nm). MS (ESI): C16H19Cl3N8Oの質量計算値408.10, m/z 実測値409.1 [M+H]+.
化合物２９５
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（（４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－２－イル）アミノ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩を、スキームＣ－１４中のステップ１として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000452
手順により、所望の化合物（３０．２ｍｇ、６５．６５μｍｏｌ、収率５１．１６％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.54～8.43 (m, 1H), 8.16 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.67～7.60 (m, 3H), 7.37 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.58～4.56 (m, 4H), 3.85～3.55 (m, 6H). HPLC: 99.50% (220 nm), 99.55% (215 nm), 99.61% (254 nm). MS (ESI): C17H19Cl3N8Oの質量計算値420.10 m/z 実測値421.0 [M+H]+.
スキームＣ－１５
Figure 2022515775000453
化合物２９６
２－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）エチル二水素ホスファートの調製
化合物２９７及び化合物２９８
２－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）エチルジメチルホスファート及び２－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）エチルメチル水素ホスファートの調製（スキームＣ－１５中のステップ１）
Figure 2022515775000454
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．１５ｇ、３７６．６５μｍｏｌ、１当量）及びｔ－ＢｕＯＫ（２１１．３２ｍｇ、１．８８ｍｍｏｌ、５当量）のＤＣＭ（５ｍＬ）中混合物に、０℃で［クロロ（メトキシ）ホスホリル］オキシメタン（８１．６４ｍｇ、５６４．９８μｍｏｌ、６０．９２μＬ、１．５当量）を滴下添加した。混合物を０℃で３０分間撹拌した。ＴＬＣ、ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を氷水（１０ｍＬ）中にゆっくり注ぎ入れ、有機層を減圧下で除去した。水溶液をＥｔＯＡｃ（５ｍＬ×４）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、粗製の２－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）エチルジメチルホスファートを得た。水性相は主に２－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）エチルメチル水素ホスファートであった。残渣（４０ｍｇ）を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １５０ｍｍ×２５ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３０％～６０％、１０．５分）により精製して、２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］エチルジメチルホスファート（１６．１ｍｇ、３１．１０μｍｏｌ、収率８．２６％、純度９７．８０％）を淡黄色固体として得た。残った残渣（０．１ｇ）を更には精製せずに次のステップに使用した。水性相を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １００ｍｍ×２５ｍｍ ３μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～４０％、１２分）により精製して、２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］エチルメチル水素ホスファート（化合物２９７）（２４．５ｍｇ、４７．２３μｍｏｌ、収率１２．５４％、純度９４．８９％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.09 (s, 1H), 7.59～7.57 (m, 3H), 7.32 (dd, J = 8.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.58 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.57 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.46 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.97 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 3.83 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.60 (s, 3H), 3.56 (s, 3H), 3.35 (t, J = 4.8 Hz, 2H). HPLC: 97.80% (220 nm), 97.61% (215 nm), 97.57% (254 nm). MS (ESI): C18H22Cl2N5O6Pの質量計算値505.07 m/z 実測値506.0 [M+H]+.２－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）エチルメチル水素ホスファート（化合物２９８）も単離した：1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.59～7.57 (m, 3H), 7.32 (dd, J = 8.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.66 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.58 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.47 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.87 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 3.81 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.55～3.47 (m, 5H). HPLC: 94.86% (220 nm), 92.75% (215 nm), 96.17% (254 nm). MS (ESI): C17H20Cl2N5O6Pの質量計算値491.05 m/z 実測値492.0 [M+H]+.
２－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）エチル二水素ホスファートの調製（スキームＣ－１５中のステップ２）
Figure 2022515775000455
２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］エチルジメチルホスファート（０．１ｇ、１９７．５２μｍｏｌ、１当量）のＤＣＭ（５ｍＬ）中溶液に、０℃でＴＭＳＢｒ（３０２．３９ｍｇ、１．９８ｍｍｏｌ、２５６．２６μＬ、１０当量）を滴下添加した。次いで混合物を２５℃で３時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。混合物を氷水（５ｍＬ）中に注ぎ入れ、有機層を分離した。水性相をＤＣＭ（５ｍＬ×５）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄してｐＨ＝７にし、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１５％～３５％、１２分）により精製した。溶出液を減圧下で除去して、２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］エチル二水素ホスファート（１４．２ｍｇ、２７．６７μｍｏｌ、収率１４．０１％、純度９３．１７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.60～7.58 (m, 3H), 7.33 (dd, J = 8.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 4.58 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.50 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.89～3.80 (m, 4H), 3.53 (t, J = 4.8 Hz, 2H). HPLC: 93.17% (220 nm), 88.83% (215 nm), 87.24% (254 nm). MS (ESI): C16H18Cl2N5O6Pの質量計算値477.04 m/z 実測値478.0 [M+H]+.
スキームＣ－１６
Figure 2022515775000456
化合物２９９
アンモニウム（２－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）エトキシ）メチルホスファートの調製
２－［２－（メチルスルファニルメトキシ）エトキシ］エタノールの調製（スキームＣ－１６中のステップ１）
Figure 2022515775000457
２－（２－ヒドロキシエトキシ）エタノール（３．３０ｇ、３１．０６ｍｍｏｌ、２．９４ｍＬ、３当量）及びＤＩＥＡ（４．０１ｇ、３１．０６ｍｍｏｌ、５．４１ｍＬ、３当量）のＤＣＭ（２０ｍＬ）中溶液に、０℃でクロロ（メチルスルファニル）メタン（１ｇ、１０．３５ｍｍｏｌ、８６９．５７μＬ、１当量）を滴下添加した。混合物を２５℃で４時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物をＨ２Ｏ（２０ｍＬ）でクエンチし、次いでＤＣＭ及びｉ－ＰｒＯＨ（３：１、２０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム４０ｇ、１００ｍＬ／分で０～１００％石油エーテル／酢酸エチルの溶出液）により精製した。溶出液を減圧下で除去した。化合物２－［２－（メチルスルファニルメトキシ）エトキシ］エタノール（１．２５ｇ、７．５２ｍｍｏｌ、収率７２．６２％）を無色油状物として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 4.69 (s, 2H), 3.75～3.70 (m, 6H), 3.62～3.60 (m, 2H), 2.15 (s, 3H).
５－クロロ－７－メトキシ－１－［２－［２－（メチルスルファニルメトキシ）エトキシ］エチル］ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジンの調製（スキームＣ－１６中のステップ２）
Figure 2022515775000458
５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（３００ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ、１当量）、２－［２－（メチルスルファニルメトキシ）エトキシ］エタノール（３２４．２２ｍｇ、１．９５ｍｍｏｌ、１．２当量）及びＰＰｈ３（６３９．４４ｍｇ、２．４４ｍｍｏｌ、１．５当量）のＴＨＦ（５ｍＬ）中溶液に、０℃でＤＩＡＤ（４９２．９７ｍｇ、２．４４ｍｍｏｌ、４７４．０１μＬ、１．５当量）を滴下添加した。混合物を２５℃で５時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物をＨ２Ｏ（５ｍＬ）でクエンチし、減圧下で濃縮した。水溶液をＥｔＯＡｃ（５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム１２ｇ、６０ｍＬ／分で０～１００％石油エーテル／酢酸エチルの溶出液）により精製した。溶出液を減圧下で除去した。化合物５－クロロ－７－メトキシ－１－［２－［２－（メチルスルファニルメトキシ）エトキシ］エチル］ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（７９０ｍｇ、粗製物）を白色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.05 (s, 1H), 4.74 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.57 (s, 2H), 4.23 (s, 3H), 3.93 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.57 (s, 4H), 2.08 (s, 3H).
５－クロロ－１－［２－［２－（メチルスルファニルメトキシ）エトキシ］エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンの調製（スキームＣ－１６中のステップ３）
Figure 2022515775000459
５－クロロ－７－メトキシ－１－［２－［２－（メチルスルファニルメトキシ）エトキシ］エチル］ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（３００ｍｇ、９０１．４３μｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（１ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１１３．４７ｍｇ、２．７０ｍｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を２５℃で２時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。水溶液を３Ｎ ＨＣｌでｐＨ＝６にし、ＥｔＯＡｃ（３ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（３ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物５－クロロ－１－［２－［２－（メチルスルファニルメトキシ）エトキシ］エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（２１５ｍｇ、６７４．４５μｍｏｌ、収率７４．８２％）を白色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.88 (s, 1H), 6.44 (s, 1H), 4.81 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.59 (s, 2H), 3.97 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.62 (s, 4H), 2.09 (s, 3H).
化合物３００
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－［２－（メチルスルファニルメトキシ）エトキシ］エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンの調製（スキームＣ－１６中のステップ４）
Figure 2022515775000460
５－クロロ－１－［２－［２－（メチルスルファニルメトキシ）エトキシ］エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（３０ｍｇ、９４．１１μｍｏｌ、１当量）及び（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（３３．１３ｍｇ、１８８．２２μｍｏｌ、２５．１０μＬ、２当量）のｔ－ＢｕＯＨ（２ｍＬ）中混合物を、１００℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １００ｍｍ×２５ｍｍ ３μｍ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３５％～６５％、１０．５分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－［２－（メチルスルファニルメトキシ）エトキシ］エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１３．８ｍｇ、３０．１１μｍｏｌ、収率３１．９９％、純度１００％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.06 (s, 1H), 7.59～7.56 (m, 3H), 7.32 (dd, J = 8.4 Hz, 1.6 Hz, 1H), 6.55 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.58～4.56 (m, 4H), 4.47 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.79 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.49 (s, 4H), 2.00 (s, 3H). HPLC: 100.00% (220 nm), 99.80% (215 nm), 99.12% (254 nm). MS (ESI): C18H21Cl2N5O3Sの質量計算値457.07, m/z 実測値458.0 [M+H]+.
アンモニウム（２－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）エトキシ）メチルホスファートの調製（スキームＣ－１６中のステップ５）
Figure 2022515775000461
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－［２－（メチルスルファニルメトキシ）エトキシ］エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．１ｇ、２１８．１７μｍｏｌ、１当量）、Ｈ３ＰＯ４（２１３．７９ｍｇ、２．１８ｍｍｏｌ、１２７．２６μＬ、１０当量）及び４Ａ ＭＳ（０．２ｇ、２．１８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２ｍＬ）中混合物に、Ｎ２下０℃でＮＩＳ（７３．６３ｍｇ、３２７．２５μｍｏｌ、１．５当量）を少しずつ加えた。次いで混合物を２５℃で１５分間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ３（３ｍＬ）でクエンチし、０℃で飽和Ｎａ２ＣＯ３にてゆっくりｐＨ＝７にした。水性相を分離し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １００ｍｍ×２５ｍｍ ３μｍ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１２％～４２％、１０．５分）により直接精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。得られたもの（８０ｍｇ）を２回目として分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １００ｍｍ×２５ｍｍ ３μｍ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１２％～４２％、１０．５分）により更に精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物［アザニウミルオキシ－［２－［２－［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－７－オキソ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル］エトキシ］エトキシメトキシ］ホスホリル］オキシアンモニウム（３０ｍｇ、５４．５４μｍｏｌ、収率２５．００％、純度９８．２３％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.58 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.35 (dd, J = 8.0 Hz, 2.0 Hz, 2H), 4.77 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.57 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 4.45 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.71 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.52～3.50 (m, 2H), 3.46～3.44 (m, 2H). HPLC: 98.23% (220 nm), 97.71% (215 nm), 99.09% (254 nm). MS (ESI): C17H26Cl2N7O7Pの質量計算値507.05, m/z 実測値508.1 [M+H]+.
スキームＤ
Figure 2022515775000462
スキームＤ中の化合物を調製するための一般的手順
化合物の調製（スキームＤ中のステップ１）
Figure 2022515775000463
５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（２．７１ｍｍｏｌ、１当量）及びＳｅｌｅｃｔ Ｆ（４．０６ｍｍｏｌ、１．５当量）のＭｅＣＮ（２．５ｍＬ／ｍｍｏｌ）中混合物を、８０℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物をＨ２Ｏでクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム１０ｇ、６５ｍＬ／分で０～５０％酢酸エチル／石油エーテル濃度勾配の溶出液）により精製して、５－クロロ－３－フルオロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン及び３，５－ジクロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジンの混合物を得た。
化合物の調製（スキームＤ中のステップ２）
Figure 2022515775000464
５－クロロ－３－Ｘ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（１．４８ｍｍｏｌ、１当量）、Ｒ１ＯＨ（１．４８ｍｍｏｌ～４．４４ｍｍｏｌ、１当量～３当量）及びＰＰｈ３（１．６３ｍｍｏｌ～２．９６ｍｍｏｌ、１．１当量～２当量）のＴＨＦ（５ｍＬ／ｍｍｏｌ）中混合物に、０℃でＤＩＡＤ（１．６３ｍｍｏｌ～２．９６ｍｍｏｌ、１．１当量～２当量）を滴下添加した。次いで混合物を０℃～２５℃で一定時間（２時間～１６時間）撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。混合物を氷水でクエンチし、有機層を分離した。水溶液をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製した。カラム：ａ）Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｂ）Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ ２５０ｍｍ×５０ｍｍ １０μｍ；ｃ）Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｄ）Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １００ｍｍ×２５ｍｍ ３μｍ；ｅ）Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０ｍｍ×３０ｍｍ １０μｍ。移動相：ａ）［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］、Ｂ％：１５％～４５％、１０分又は１２分；ｂ）［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１％～２５％、１０分。溶出液を凍結乾燥で脱水して、所望の生成物を得た。
化合物の調製（スキームＤ中のステップ３）
Figure 2022515775000465
５－クロロ－３－Ｘ－７－メトキシ－１－Ｒ１－Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（１３７．６１μｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（３ｍＬ／ｍｍｏｌ～５ｍＬ／ｍｍｏｌ）又はＴＨＦ（３ｍＬ／ｍｍｏｌ～５ｍＬ／ｍｍｏｌ）及びＨ２Ｏ（３ｍＬ／ｍｍｏｌ～５ｍＬ／ｍｍｏｌ）中溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（４１２．８３μｍｏｌ～６８８．０５μｍｏｌ、３当量～５当量）を加えた。混合物を２０℃～２５℃で一定時間（２時間～１６時間）撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。水溶液を３Ｎ ＨＣｌでｐＨ＝６にし、次いでＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、所望の生成物を得た。
化合物の調製（スキームＤ中のステップ４）
Figure 2022515775000466
５－クロロ－３－Ｘ－１－Ｒ１－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（１０８．４４μｍｏｌ、１当量）、Ｒ３ＮＨ２（１６２．６６μｍｏｌ～２１６．８８μｍｏｌ、１．５当量～２当量）及びＤＩＥＡ（４３３．７６μｍｏｌ、４当量、Ｒ３ＮＨ２がＨＣｌ塩の場合のみＤＩＥＡを加えた）のｔ－ＢｕＯＨ又はｔ－ＡｍＯＨ又はＮＭＰ（３ｍＬ／ｍｍｏｌ～１０ｍＬ／ｍｍｏｌ）中混合物を、１００℃～１６０℃で一定時間（２時間～１６時間）撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製した。カラム：ａ）Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ３μｍ；ｂ）Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；ｃ）Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８ １００ｍｍ×２５ｍｍ ５μｍ；ｄ）Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １５０ｍｍ×２５ｍｍ ５μｍ；ｅ）Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ １５０ ３０ｍｍ ５μｍ；ｆ）Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ ２５０ｍｍ×５０ｍｍ １０μｍ）。移動相：ａ）［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］、Ｂ％：２５％～５５％、７分、１０分；ｂ）［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］、Ｂ％：２０％～４５％、１０分；ｃ）［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＭｅＣＮ］、Ｂ％：２０％～５０％、１０分；ｄ）［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＭｅＣＮ］、Ｂ％：１５％～７０％、８分又は１０分又は１０．５分。溶媒を凍結乾燥下で除去して、所望の生成物を得た。
化合物３０１
５－（（３，４－ジフルオロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－１－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製
５－クロロ－３－フルオロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン及び３，５－ジクロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジンの調製（スキームＤ中のステップ１）
Figure 2022515775000467
５－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（３ｇ、１６．２５ｍｍｏｌ、１当量）及びＳｅｌｅｃｔ Ｆ（８．６４ｇ、２４．３８ｍｍｏｌ、１．５当量）のＭｅＣＮ（４０ｍＬ）中混合物を、９０℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物をＨ２Ｏ（２０ｍＬ）でクエンチし、減圧下で濃縮した。水溶液をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）；ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム４０ｇ、１００ｍＬ／分で０～５０％酢酸エチル／石油エーテル濃度勾配の溶出液）により精製した。溶出液を減圧下で除去した。化合物５－クロロ－３－フルオロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（１．５４ｇ、７．６０ｍｍｏｌ、収率４６．７７％）及び３，５－ジクロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジンの混合物を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 14.62 (s, 1H), 13.99 (s, 1H), 4.16 (s, 6H).
２－（２－（５－クロロ－３－フルオロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）エタノールの調製（スキームＤ中のステップ２）
Figure 2022515775000468
５－クロロ－３－フルオロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（３００ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ、１当量）及び３，５－ジクロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（１．４８ｍｍｏｌ、１当量）、２－（２－ヒドロキシエトキシ）エタノール（３１４．３２ｍｇ、２．９６ｍｍｏｌ、２８０．６４μＬ、２当量）並びにＰＰｈ３（５８２．６６ｍｇ、２．２２ｍｍｏｌ、１．５当量）のＴＨＦ（４ｍＬ）中混合物に、Ｎ２下０℃でＤＩＡＤ（４４９．１９ｍｇ、２．２２ｍｍｏｌ、４３１．９２μＬ、１．５当量）を滴下添加した。混合物を２５℃で５時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物をＨ２Ｏ（３ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ８μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２５％～４０％、１０分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物２－［２－（５－クロロ－３－フルオロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ］エタノール（４０ｍｇ、１３７．６１μｍｏｌ、収率９．２９％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 4.54 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.17 (s, 3H), 3.79 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.36 (s, 4H).化合物２－［２－（３，５－ジクロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ］エタノール（７０ｍｇ、２２７．９１μｍｏｌ、収率１５．３９％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 4.63 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.17 (s, 3H), 3.83 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.37 (s, 4H).
５－クロロ－３－フルオロ－１－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＤ中のステップ３）
Figure 2022515775000469
２－［２－（５－クロロ－３－フルオロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ］エタノール（４０ｍｇ、１３７．６１μｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（１ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１７．３２ｍｇ、４１２．８３μｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を２５℃で２時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。水溶液を３Ｎ ＨＣｌでｐＨ＝６にし、次いでＥｔＯＡｃ（３ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（３ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物５－クロロ－３－フルオロ－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（３０ｍｇ、１０８．４４μｍｏｌ、収率７８．８０％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 4.56 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.79 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.38 (s, 4H).
５－（（３，４－ジフルオロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－１－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＤ中のステップ４）
Figure 2022515775000470
５－クロロ－３－フルオロ－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（３０ｍｇ、１０８．４４μｍｏｌ、１当量）及び（３，４－ジフルオロフェニル）メタンアミン（３１．０４ｍｇ、２１６．８８μｍｏｌ、２５．６６μＬ、２当量）のｔ－ＢｕＯＨ（２ｍＬ）中混合物を、１００℃で１２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８ １００ｍｍ×２５ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～５０％、１０分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物５－［（３，４－ジフルオロフェニル）メチルアミノ］－３－フルオロ－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（１４ｍｇ、３６．５２μｍｏｌ、収率３３．６８％、純度１００％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.21 (s, 1H), 7.42～7.35 (m, 2H), 7.19 (s, 1H), 6.66 (s, 1H), 4.53 (s, 1H), 4.46～4.45 (m, 4H), 3.76～3.73 (m, 2H), 3.40～3.37 (m, 4H). HPLC: 100.00 % (220 nm), 99.87 % (215 nm), 100.00 % (254 nm). MS (ESI): C16H16F3N5O3の質量計算値383.12, m/z 実測値384.1 [M+H]+.
化合物３０２
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－３－フルオロ－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンを、スキームＤ中のステップ２～４として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000471
手順により、所望の化合物（２６２．６ｍｇ、６１２．８５μｍｏｌ、収率６０．５５％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.29 (m, 1H), 7.60～7.58 (m, 2H), 7.33 (dd, J = 8.0 Hz, 1.6 Hz, 1H), 6.70 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.47～4.44 (m, 4H), 3.75 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.42～3.37 (m, 4H). HPLC: 98.68 % (220 nm), 98.69 % (215 nm), 98.46 % (254 nm). MS (ESI): C16H16Cl2FN5O3の質量計算値415.06, m/z 実測値416.0 [M+H]+.
化合物３０３
３－クロロ－５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンを、スキームＤ中のステップ２～４として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000472
手順により、所望の化合物（１０５．６ｍｇ、２３７．４２μｍｏｌ、収率５３．５３％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.29 (m, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.59 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.35 (dd, J = 8.0 Hz, 1.6 Hz, 1H), 6.76 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.54 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.48 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.78 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.42～3.38 (m, 4H). HPLC: 97.28 % (220 nm), 97.27 % (215 nm), 97.07 % (254 nm).MS (ESI): C16H16Cl3N5O3の質量計算値431.03, m/z 実測値432.0 [M+H]+.
化合物３０４
３－クロロ－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－メトキシエチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン）を、スキームＤ中のステップ２～４として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000473
手順により、所望の化合物（１２３．９ｍｇ、３０４．０８μｍｏｌ、収率３１．２５％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.28 (s, 1H), δ 7.65 (s, 1H), 7.64～7.58 (m, 1H), 7.37～7.35 (m, 1H), 6.76～6.73 (m, 1H), 4.55 (t, J = 5.6 Hz, 2H),4.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.70 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.19 (s, 3H). HPLC: 98.82% (220 nm), 99.12% (215 nm), 99.50% (254 nm). MS (ESI): C15H14Cl3N5O2の質量計算値401.02, m/z 実測値402.0 [M+H]+.
化合物３０５
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－１－（２－メトキシエチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＤ中のステップ２～４として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000474
手順により、所望の化合物（４７．９ｍｇ、１１９．５１μｍｏｌ、収率１２．２８％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.59～7.57 (m, 2H), 7.33 (s, 1H), 7.72 (m, 2H), 4.64 (s, 4H), 3.66 (s, 2H), 3.18 (s, 3H). HPLC: 96.36% (220 nm), 94.86% (215 nm), 94.63% (254 nm). MS (ESI): C15H14Cl2FN5O2の質量計算値385.05, m/z 実測値386.0 [M+H]+.
化合物３０６
５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－１－（オキサゾール－４－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＤ中のステップ２～４として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000475
手順により、所望の化合物（２０．０ｍｇ、４８．４９μｍｏｌ、収率８．７２％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.30 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.59 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.33 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 6.75 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 5.44 (s, 2H), 4.47 (d, J = 6.0 Hz, 2H). HPLC: 99.22 % (220 nm), 99.28 % (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C16H11Cl2FN6O2の質量計算値408.03, m/z 実測値409.1 [M+H]+.
化合物３０７
３－クロロ－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（オキサゾール－４－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＤ中のステップ２～４として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000476
手順により、所望の化合物（１６．８ｍｇ、３６．１９μｍｏｌ、収率７．９６％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.29 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.59 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.79 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 5.52 (s, 2H), 4.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H). HPLC: 91.69 % (220 nm), 88.44 % (215 nm), 93.54% (254 nm). S (ESI): C16H11Cl3N6O2の質量計算値424.00, m/z 実測値425.0 [M+H]+.
化合物３０８
５－（（３，４－ジフルオロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－１－（２－メトキシエチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＤ中のステップ２～４として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000477
手順により、所望の化合物（２８．５ｍｇ、８０．０５μｍｏｌ、収率３９．４８％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.26 (s, 1H), 7.39 (t, J = 8.0 Hz,, 2H), 7.19 (s, 1H), 6.66 (s, 1H), 4.46 (s, 4H), 3.58 (s, 2H), 3.19 (s, 3H). HPLC: 99.23 % (220 nm), 92.78 % (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C15H14F3N5O2の質量計算値353.11, m/z 実測値354.1 [M+H]+.
化合物３０９
３－クロロ－５－［（３，４－ジフルオロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンを、スキームＤ中のステップ２～４として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000478
手順により、所望の化合物（４８．８ｍｇ、１２１．６９μｍｏｌ、収率５４．８７％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.21 (s, 1H), 7.45～7.35 (m, 2H), 7.22 (s, 1H), 6.70 (s, 1H), 4.54～4.46 (m, 5H), 3.78 (s, 2H), 3.397 (s, 4H). HPLC: 99.69 % (220 nm), 99.72 % (215 nm), 99.75 % (254 nm). MS (ESI): C16H16ClF2N5O3の質量計算値399.09, m/z 実測値400.0 [M+H]+.
化合物３１０
５－［（４－クロロ－３－メチル－フェニル）メチルアミノ］－３－フルオロ－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンを、スキームＤ中のステップ２～４として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000479
手順により、所望の化合物（７．２ｍｇ、１７．６７μｍｏｌ、収率２４．４４％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.92 (s, 1H), 7.36 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.18 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.64 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.53 (s, 1H), 4.47～4.42 (m, 4H), 3.75 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.39～3.36 (m, 4H), 2.31 (m, 3H). HPLC: 97.15 % (220 nm), 96.73 % (215 nm), 96.78 % (254 nm). MS (ESI): C17H19ClFN5O3の質量計算値395.12, m/z 実測値396.1 [M+H]+.
化合物３１１
３－フルオロ－５－（（４－フルオロ－３－メチルベンジル）アミノ）－１－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＤ中のステップ２～４として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000480
手順により、所望の化合物（８．５ｍｇ、２１．８２μｍｏｌ、収率３５．５１％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ11.12 (s, 1H), 7.25 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.21～7.15 (m, 1H), 7.14～7.05 (m, 1H), 6.55 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.46 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.40 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.75 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.41～3.37 (m, 4H), 2.21 (d, J = 1.2 Hz, 3H). HPLC: 97.38 % (220 nm), 97.37 % (215 nm), 97.86% (254 nm). MS (ESI): C17H19F2N5O3の質量計算値379.15, m/z 実測値380.1 [M+H]+.
化合物３１２
５－［（３－クロロ－４－メチル－フェニル）メチルアミノ］－３－フルオロ－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンを、スキームＤ中のステップ２～４として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000481
手順により、所望の化合物（１０．３ｍｇ、２５．９７μｍｏｌ、収率３５．９２％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.12 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.30 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.62 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.53 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 4.47～4.42 (m, 4H), 3.75 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.41～3.37 (m, 4H), 2.29 (m, 3H). HPLC: 99.78 % (220 nm), 99.73 % (215 nm), 99.71 % (254 nm). MS (ESI): C17H19ClFN5O3の質量計算値395.12, m/z 実測値396.1 [M+H]+.
化合物３１３
３－フルオロ－５－（（３－フルオロ－４－メチルベンジル）アミノ）－１－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンを、スキームＤ中のステップ２～４として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000482
手順により、所望の化合物（６．１ｍｇ、１５．０８μｍｏｌ、収率２０．８６％）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.18 (s, 1H), 7.23 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.11～7.06 (m, 2H), 6.61～6.58 (m, 1H), 4.47～4.43 (m, 4H), 3.75 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.29～3.25 (m, 4H), 2.20 (s, 3H). HPLC: 93.77% (220 nm), 93.53% (215 nm), 94.33% (254 nm). MS (ESI): C17H19F2N5O3の質量計算値379.15, m/z 実測値380.1 [M+H]+.
化合物３１４
５－［（３，４－ジフルオロフェニル）メチルアミノ］－１－（４－ジメチルホスホリルブチル）－３－フルオロ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン）を、スキームＤ中のステップ３～４として本明細書に記載した手順に従って調製した。
（４－（５－クロロ－３－フルオロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ブチル）ジメチルホスフィンオキシドの調製
Figure 2022515775000483
５－クロロ－３－フルオロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（４００ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ、１当量）、１－クロロ－４－ジメチルホスホリル－ブタン（４９８．２２ｍｇ、２．９６ｍｍｏｌ、１．５当量）及びＣｓ２ＣＯ３（１．２８ｇ、３．９４ｍｍｏｌ、２当量）のアセトン（２ｍＬ）中混合物を、６０℃で１２時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：１５％～４５％、１０分）により精製した。溶媒を凍結乾燥下で除去した。化合物５－クロロ－１－（４－ジメチルホスホリルブチル）－３－フルオロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（３０ｍｇ、８９．６３μｍｏｌ、収率４．５５％）を白色固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 4.54 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.25 (d, J = 3.2 Hz, 3H), 2.06～2.03 (m, 2H), 1.81～1.77 (m, 2H), 1.67～1.63 (m, 2H), 1.52 (d, J = 12.4 Hz, 6H).
（５－［（３，４－ジフルオロフェニル）メチルアミノ］－１－（４－ジメチルホスホリルブチル）－３－フルオロ－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン）
Figure 2022515775000484
手順により、所望の化合物（１３ｍｇ、２９．６０μｍｏｌ、収率６３．２８％）を灰白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.42～7.37 (m, 2H), 7.20～7.17 (m, 1H), 6.66 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 7.20 (t, J = 4.4 Hz, 2H), 4.34 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.84～1.81 (m, 2H), 1.68～1.63 (m, 2H), 1.41～1.39 (m, 2H), 1.34 (s, 3H), 1.31 (s, 3H). HPLC: 97.30 % (220 nm), 96.48 % (215 nm), 98.01 % (254 nm). MS (ESI): C18H21F3N5O2Pの質量計算値427.14, m/z 実測値428.1 [M+H]+.
化合物３１５
５－［（３，４－ジフルオロフェニル）メチルアミノ］－３－フルオロ－１－（オキセタン－２－イルメチル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンを、スキームＤ中のステップ２～４として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000485
手順により、所望の化合物（１２．４ｍｇ、３３．３４μｍｏｌ、収率２８．７５％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.24 (s, 1H), 7.42～7.35 (m, 2H), 7.17 (dd, J = 10.8 Hz, J = 5.6 Hz, 1H), 6.64 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.95～4.92 (m, 1H), 4.66～4.61 (m, 1H), 4.50～4.44 (m, 4H), 4.34～4.31 (m, 1H), 2.63～2.52 (m, 1H), 2.43～2.42 (s, 1H). HPLC: 98.23% (220 nm), 98.16% (215 nm), 93.65% (254 nm). MS (ESI): C16H14F3N5O2の質量計算値365.11, m/z 実測値366.2 [M+H]+.
化合物３１６
５－（（３，４－ジフルオロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－１－（オキサゾール－４－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン）を、スキームＤ中のステップ２～４として本明細書に記載した手順に従って調製した。
Figure 2022515775000486
手順により、所望の化合物（９．９ｍｇ、２６．２７μｍｏｌ、収率１１．８０％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.23 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.43～7.33 (m, 2H), 7.19 (s, 1H), 6.69 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 5.44 (s, 2H), 4.46 (d, J = 6.0 Hz, 2H). HPLC: 99.84 % (220 nm), 100.00 % (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C16H11F3N6O2の質量計算値376.09, m/z 実測値377.2 [M+H]+.
化合物３１７及び化合物３１８
（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－１－（１－ニコチノイルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩）及び３－クロロ－５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［１－（ピリジン－３－カルボニル）－４－ピペリジル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンの調製
４－（５－クロロ－３－フルオロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）（ピリジン－３－イル）メタノン及び（４－（３，５－ジクロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）（ピリジン－３－イル）メタノンの調製（スキームＤ中のステップ２）
Figure 2022515775000487
５－クロロ－３－フルオロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン及び５－クロロ－３－クロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（０．４ｇ、１．９７ｍｍｏｌ、１当量）、（４－ヒドロキシ－１－ピペリジル）－（３－ピリジル）メタノン（３６６．５２ｍｇ、１．７８ｍｍｏｌ、０．９当量）並びにＰＰｈ３（７７６．８６ｍｇ、２．９６ｍｍｏｌ、１．５当量）のＴＨＦ（１０ｍＬ）中混合物に、０℃でＤＩＡＤ（５９８．９２ｍｇ、２．９６ｍｍｏｌ、５７５．８８μＬ、１．５当量）を滴下添加した。次いで混合物を２０℃で３時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。混合物を氷水（１０ｍＬ）でクエンチし、有機層を分離した。水溶液をＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ×５）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２５％～４０％、１０分）により精製した。溶出液を飽和ＮａＨＣＯ３でｐＨ＝６にし、次いでＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×４）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物［４－（５－クロロ－３－フルオロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－１－ピペリジル］－（３－ピリジル）メタノン（４５ｍｇ、１１５．１５μｍｏｌ、収率５．８３％）を白色固体として得た。化合物［４－（３，５－ジクロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－１－ピペリジル］－（３－ピリジル）メタノン（７０ｍｇ、１７１．８８μｍｏｌ、収率８．７０％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.76～8.73 (m, 2H), 8.08～8.06 (m, 1H), 7.65～7.62 (m, 1H), 5.01～5.00 (m, 1H), 4.61～4.58 (m, 1H), 4.19 (s, 3H), 3.69～3.66 (m, 1H), 3.35～3.28 (m, 1H), 3.09～3.07 (m, 1H), 2.14～1.95 (m, 4H).1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.73～8.70 (m, 2H), 8.02～8.00 (m, 1H), 7.60～7.57 (m, 1H), 5.10～5.06 (m, 1H), 4.60～4.59 (m, 1H), 4.19 (s, 3H), 3.69～3.67 (m, 1H), 3.35～3.28 (m, 1H), 3.09～3.07 (m, 1H), 2.18～2.00 (m, 4H).
５－クロロ－３－フルオロ－１－（１－ニコチノイルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＤ中のステップ３）
Figure 2022515775000488
［４－（５－クロロ－３－フルオロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－１－ピペリジル］－（３－ピリジル）メタノン（４５ｍｇ、１１５．１５μｍｏｌ、１当量）及びＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１４．４９ｍｇ、３４５．４５μｍｏｌ、３当量）のＭｅＯＨ（１ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１ｍＬ）中溶液を、２５℃で３時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。有機溶媒を減圧下で除去した。水溶液を２Ｎ ＨＣｌでゆっくりｐＨ＝６～７にし、次いでＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×５）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を更には精製せずに次のステップに使用した。化合物５－クロロ－３－フルオロ－１－［１－（ピリジン－３－カルボニル）－４－ピペリジル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（４２ｍｇ、１１１．４７μｍｏｌ、収率９６．８１％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.07 (s, 1H), 8.79～8.78 (m, 1H), 7.89 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.56～7.50 (m, 1H), 5.19～5.16 (m, 1H), 4.58～4.56 (m, 1H), 3.47～3.36 (m, 1H), 3.26～2.93 (m, 2H), 2.32～1.90 (m, 4H).
（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－１－（１－ニコチノイルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩）の調製（スキームＤ中のステップ４）
Figure 2022515775000489
５－クロロ－３－フルオロ－１－［１－（ピリジン－３－カルボニル）－４－ピペリジル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（３８ｍｇ、１００．８６μｍｏｌ、１当量）及び（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（３５．５１ｍｇ、２０１．７１μｍｏｌ、２６．９０μＬ、２当量）のｔ－ＢｕＯＨ（２ｍＬ）中混合物を、Ｎ２下１００℃で１０時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。溶媒を減圧下で除去した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３０％～４５％、１０分）により精製した。溶出液を凍結乾燥下で除去した。５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－３－フルオロ－１－［１－（ピリジン－３－カルボニル）－４－ピペリジル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（化合物３１７）（２０．６ｍｇ、３７．０５μｍｏｌ、収率３６．７３％、純度９９．４２％、ＨＣｌ）を淡黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.95～8.88 (m, 2H), 8.35 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.90～7.89 (m, 1H), 7.60～7.58 (m, 2H), 7.34～7.32 (m, 1H), 7.12 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 5.12～5.06 (m, 1H), 4.58～4.54 (m, 1H), 4.47 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.67～3.62 (m, 1H), 3.30～3.27 (m, 1H), 3.02～2.99 (m, 1H), 2.07～1.90 (m, 4H). HPLC: 99.42% (220 nm), 99.53% (215 nm), 100.00% (254 nm). MS (ESI): C23H21Cl3FN7O2の質量計算値515.10 m/z 実測値516.2 [M+H]+.
３，５－ジクロロ－１－（１－ニコチノイルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＤ中のステップ２）
Figure 2022515775000490
［４－（３，５－ジクロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－１－ピペリジル］－（３－ピリジル）メタノン（６０ｍｇ、１４７．３３μｍｏｌ、１当量）及びＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１８．５５ｍｇ、４４１．９９μｍｏｌ、３当量）のＭｅＯＨ（１ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１ｍＬ）中溶液を、２０℃で３時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。有機溶媒を減圧下で除去した。水溶液をＮ ＨＣｌでゆっくりｐＨ＝６～７にし、次いでＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×５）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を更には精製せずに次のステップに使用した。化合物３，５－ジクロロ－１－［１－（ピリジン－３－カルボニル）－４－ピペリジル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（５０ｍｇ、１２７．１５μｍｏｌ、収率８６．３１％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.07 (s, 1H), 8.79 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.90～7.88 (m, 1H), 7.50～7.49 (m, 1H), 5.25～5.23 (m, 1H), 4.61～4.58 (m, 1H), 3.68～3.66 (m, 1H), 3.20～2.94 (m, 2H), 2.33～2.03 (m, 4H).
（３－クロロ－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－ニコチノイルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩）の調製（スキームＤ中のステップ３）
Figure 2022515775000491
３，５－ジクロロ－１－［１－（ピリジン－３－カルボニル）－４－ピペリジル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（５０ｍｇ、１２７．１５μｍｏｌ、１当量）及び（３，４－ジクロロフェニル）メタンアミン（４４．７７ｍｇ、２５４．３１μｍｏｌ、３３．９２μＬ、２当量）のｔ－ＢｕＯＨ（２ｍＬ）中混合物を、Ｎ２下１００℃で１０時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。溶媒を減圧下で除去した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００ｍｍ ３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：３０％～６０％、１０分）により精製した。溶出液を凍結乾燥下で除去した。３－クロロ－５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［１－（ピリジン－３－カルボニル）－４－ピペリジル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（化合物３１８）（７．５ｍｇ、１２．８６μｍｏｌ、収率１０．１２％、純度９７．６４％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.93～8.85 (m, 2H), 8.36～8.35 (m, 1H), 7.89～7.85 (m, 1H), 7.68～7.62 (m, 2H), 7.7.38～7.34 (m, 1H), 7.11 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 5.15～5.10 (m, 1H), 4.48～4.44 (m, 1H), 4.43 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.67～3.64 (m, 1H), 3.32～3.27 (m, 1H), 3.05～2.99 (m, 1H), 2.07～2.00 (m, 4H). HPLC: 97.64% (220 nm), 97.97% (215 nm), 99.39% (254 nm). MS (ESI): C23H21Cl4N7O2の質量計算値531.07 m/z 実測値532.1 [M+H]+.
化合物３１９
（５－（（３，４－ジフルオロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－１－（１－イソニコチノイルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩の調製
（４－ヒドロキシピペリジン－１－イル）（ピリジン－４－イル）メタノンの調製（スキームＤ中のステップ１）
（４－（５－クロロ－３－フルオロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）（ピリジン－４－イル）メタノン及び（４－（３，５－ジクロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）（ピリジン－４－イル）メタノンの調製（スキームＤ中のステップ１）
Figure 2022515775000492
５－クロロ－３－フルオロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（０．３ｇ、１．４８ｍｍｏｌ、１当量）及び３，５－ジクロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン（１．４８ｍｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（３ｍＬ）中溶液に、（４－ヒドロキシ－１－ピペリジル）－（４－ピリジル）メタノン（４５８．１５ｍｇ、２．２２ｍｍｏｌ、１．５当量）、ＰＰｈ３（５８２．６６ｍｇ、２．２２ｍｍｏｌ、１．５当量）を加えた。次いでＤＩＡＤ（４４９．１９ｍｇ、２．２２ｍｍｏｌ、４３１．９２μＬ、１．５当量）を０℃で滴下添加した。混合物を２５℃で１０時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。Ｈ２Ｏ（６ｍＬ）を加えた。反応混合物をＥｔＯＡｃ（８ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５ｍＬ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ×５μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２５％～４０％、１０分）により精製した。ＭｅＣＮを３０℃で減圧下にて除去した。次いで水性相をＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１５ｍＬ×２）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。化合物（４－（５－クロロ－３－フルオロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）（ピリジン－４－イル）メタノン（０．１９ｇ、２１８．７８μｍｏｌ、収率１４．７７％、純度４５％）を茶褐色油状物として得た。化合物（４－（３，５－ジクロロ－７－メトキシ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）（ピリジン－４－イル）メタノン（０．３５ｇ、３００．８０μｍｏｌ、収率２０．３１％、純度３５％）を薄黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.69～8.67 (m, 2H), 7.45～7.43 (m, 2H), 5.00 (s, 1H), 4.60～4.56 (m, 2H), 4.18 (s, 3H), 3.59～3.55 (m, 2H), 3.09～3.01 (m, 2H), 1.99～1.97 (m, 2H). 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.78～8.77 (m, 2H), 7.41～7.39 (m, 2H), 4.96～4.95 (m, 1H), 4.27 (s, 3H), 3.76～3.78 (m, 1H), 3.25～3.27 (m, 1H), 3.02～3.04 (m, 1H), 2.27～2.24 (m, 4H), 2.05～2.02 (m, 1H).
５－クロロ－３－フルオロ－１－（１－イソニコチノイルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製（スキームＤ中のステップ２）
Figure 2022515775000493
［４－（５－クロロ－３－フルオロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）－１－ピペリジル］－（４－ピリジル）メタノン（０．１９ｇ、２９１．７１μｍｏｌ、１当量）のＨ２Ｏ（２ｍＬ）及びＭｅＯＨ（２ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（３６．７２ｍｇ、８７５．１３μｍｏｌ、３当量）を加えた。混合物を２５℃で１０時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完結していることを示した。Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）を反応混合物に加えた。反応混合物を減圧下で濃縮して、ＭｅＯＨを除去した。混合物をＨＣｌ（３Ｎ）でｐＨ＝６に調節した。次いで混合物をＥｔＯＡｃ（８ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（６ｍＬ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物５－クロロ－３－フルオロ－１－（１－イソニコチノイルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（０．１７ｇ、１５７．９２μｍｏｌ、収率５４．１４％、純度３５％）を黄色油状物として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.68 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 7.44～7.43 (m, 3H), 5.18 (m, 1H), 4.59～4.55 (m, 2H), 4.04～4.02 (m, 2H), 3.02 (d, J = 11.6 Hz, 2H), 1.98～1.94 (m, 2H).
（５－（（３，４－ジフルオロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－１－（１－イソニコチノイルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩）の調製（スキームＤ中のステップ３）
Figure 2022515775000494
５－クロロ－３－フルオロ－１－［１－（ピリジン－４－カルボニル）－４－ピペリジル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（０．１２ｇ、１１１．４７μｍｏｌ、１当量）のｔ－ＢｕＯＨ（２ｍＬ）中溶液に、（３，４－ジフルオロフェニル）メタンアミン（３１．９１ｍｇ、２２２．９５μｍｏｌ、２６．３７μＬ、２当量）を加えた。混合物を１００℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣは、反応が完結していることを示した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣を分取ＨＰＬＣ（ＨＣｌ条件カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ×５μｍ；移動相：［水（０．０４％ ＨＣｌ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～４５％、１０分）により精製した。ＭｅＣＮを３０℃で減圧下にて除去した。残渣を凍結乾燥で脱水した。化合物５－（（３，４－ジフルオロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－１－（１－イソニコチノイルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩（２６．７ｍｇ、５４．１５μｍｏｌ、収率４８．５８％、純度９８．０４９％）を白色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.95～8.93 (m, 2H), 7.99～7.97 (m, 2H), 7.42～7.34 (m, 2H), 7.20～7.10 (m, 2H), 5.10～5.07 (m, 1H), 4.56～4.53 (m, 1H), 4.46 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 3.54～3.52 (m, 1H), 3.28～3.26 (m, 1H), 3.05～3.03 (m, 1H), 2.06～1.89 (m, 4H). HPLC: 98.05% (220 nm), 97.14% (215 nm), 98.68% (254 nm). MS (ESI): C23H21ClF3N7O2の質量計算値483.16, m/z 実測値484.1 [M+H]+.
スキームＥ
Figure 2022515775000495
化合物３２０
（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）－７－オキソ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－６（７Ｈ）－イル）メチル二水素ホスファートの調製
（（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）－７－オキソ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－６（７Ｈ）－イル）メチル）水素ホスファートの調製（スキームＥ中のステップ１）
Figure 2022515775000496
５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（５００ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ、１当量）及びジｔｅｒｔ－ブチルクロロメチルホスファート（９７４．３２ｍｇ、３．７７ｍｍｏｌ、３当量）のジオキサン（２０ｍＬ）中溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（１．６４ｇ、５．０２ｍｍｏｌ、４．５６μＬ、４当量）及びＮａＩ（２８．２３ｍｇ、１８８．３３μｍｏｌ、１．５当量）を加えた。混合物を１００℃で２０時間撹拌した。ＬＣＭＳは、５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オンがほぼ消費され、１つの所望のピークが検出されていることを示した。濾過した後、濾液を減圧下で濃縮した。化合物ｔｅｒｔ－ブチル［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－７－オキソ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－６－イル］メチル水素ホスファート（１．３ｇ、粗製物）を白色固体として得た。MS (ESI): C21H28Cl2N5O7Pの質量計算値563.11 m/z 実測値564.1 [M+H]+.
（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）－７－オキソ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－６（７Ｈ）－イル）メチル二水素ホスファートの調製（スキームＥ中のステップ２）
Figure 2022515775000497
ｔｅｒｔ－ブチル［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－７－オキソ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－６－イル］メチル水素ホスファート（１．３ｇ、９２１．４１μｍｏｌ、１当量）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液に、０℃でＴＦＡ（１ｍＬ）を滴下添加した。次いで混合物を２５℃で１時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完結していることを示した。混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １００ｍｍ×２５ｍｍ ３μｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＭｅＣＮ］；Ｂ％：２０％～５０％、１０分）により精製した。溶出液を減圧下で除去した。化合物［５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－７－オキソ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－６－イル］メチル二水素ホスファート（９７．１ｍｇ、１８７．５１μｍｏｌ、収率２０．３５％、純度９８．１５％）を黄色固体として得た。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.95 (s, 1H), 7.64 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.37 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 5.84 (d, J = 10.0 Hz, 2H), 4.59 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.53 (s, 2H), 3.80 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.42～3.37 (m, 4H). HPLC: 98.15% (220 nm), 97.83% (215 nm), 96.75% (254 nm). MS (ESI): C17H20Cl2N5O7Pの質量計算値507.05 m/z 実測値508.1 [M+H]+.
化合物有効性
ＤＮＡ ｐｏｌ ＩＩＩＣ酵素の活性を阻害する化合物の能力を、例えばＢａｒｎｅｓ及びＢｒｏｗｎ、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９７９年、６巻、１２０３～１２１９頁；Ｔｒａｎｔｏｌｏ ｅｔ ａｌ．、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９８６年、２９巻、６７６～６８１頁；Ｍｉｌｌｓ ｅｔ ａｌ．、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉａｌ．１９７７年、１３２巻、６４１～６４９頁；Ｌｏｗ ｅｔ ａｌ．、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９７６年、２５１巻、１３１１～１３２５頁に記載されているＤＮＡポリメラーゼアッセイを使用することにより試験できる。この迅速なスクリーニング方法は、標準のＤＮＡポリメラーゼ活性アッセイにおいて天然型又は組換え型ＤＮＡ ｐｏｌ ＩＩＩ酵素を使用できる。対照を用いる並行アッセイに試験化合物を包含することにより、ポリメラーゼ活性に対する試験化合物の効果を評価できる。天然型又は組換え型バクテリアＤＮＡポリメラーゼＩＩＩにおいて適切な阻害レベル（Ｋｉ＜５μＭ）を有する化合物が好ましい。
抗微生物効果は、成長培地中で、又は適切な成長培地を補充した寒天プレート上で、標準的な微生物培養方法により判定され得る。例えば、微生物は、適切なビヒクル中における化合物の段階希釈液の存在下で成長し、好適な成長期間後、微生物の密度は、視覚的又は機器的手段により測定される。成長が発生しない化合物の濃度は、化合物の最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）である。適切な成長阻害のレベル（ＭＩＣ＜４μｇ／ｍｌ）を有する化合物が好ましい。
毒性
本発明の化合物は、動物に対する低毒性を実証する。化合物は、以前は、市場に出ていたいかなる抗生物質の標的でもなかった、ＤＮＡ複製の必須酵素を標的とするため、薬物耐性の発現は最小限になる。化合物を使用して、感染した動物に対する有害な効果なしで、病原性グラム陽性菌の、従来の抗微生物剤に対する自然及び獲得抵抗性を避けることができる。
哺乳類細胞に対する化合物の毒性は、当業者に公知である標準的方法に従って評価できる（例えば、Ｇｏｏｔｚ、Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ．Ｒｅｖ．１９９０年、３、１３～３１頁を参照されたい）。毒性濃度（又は「ＩＣ５０」）は、薬理学分野で周知のプロトコールを使用することにより判定できる。さらなる治療評価のために考慮すべき化合物に好適なＩＣ５０値の範囲は、細菌培養物におけるＭＩＣを超える、すなわち治療指数は１０超にすべきである。
化合物の治療的投与
本明細書に記載されている化合物は、普通の抗生物質薬に耐性である株を包含するグラム陽性菌によって引き起こされる、ヒトにおける微生物感染症の処置に有用である。これらは、動物、例えばブタ、ウシ、ウマ、ヤギ、ニワトリ、シチメンチョウ、ヒツジ、ラット、マウス及びウサギにおける、関連したグラム陽性菌感染症の処置、並びに真核細胞培養物又は他の生息環境、例えば、食品、化粧品、医療デバイス及び病院用品の細菌又はマイコプラズマ感染症の排除若しくは回避にも有用である。
本発明の化合物は、薬学的な、獣医学的な及び組織培養物の使用のために、任意に許容できる希釈剤、担体又は賦形剤と共に、且つ／又は単位剤形で製剤化できる。本発明の化合物を使用する際、従来の薬学的な、獣医学的な又は培養の慣習を用いて、好適な製剤又は組成物を得ることができ、それらはすべて本発明の薬学的組成物により網羅される。
ヒト又は動物の使用では、本発明の製剤は、非経口投与、例えば、静脈内、皮下、筋肉内、眼窩内、眼内、心室内、頭蓋内、嚢内、髄腔内、大槽内若しくは腹腔内投与により、又は鼻腔内、エーロゾル、乱切、経口、バッカル、直腸、膣若しくは局所投与により投与され得る。本発明の製剤は、本発明の化合物を、ボーラスとして、又は予め選択された時間にわたってゆっくり放出する手術インプラントの使用によっても投与され得る。
限定されないが、非経口製剤は、例えば、経口投与用の液体溶液又は懸濁液の形態であり得、製剤は、例えば、錠剤、カプセル剤、液体溶液剤及び懸濁液剤の形態であり得（そのような液剤及び懸濁液剤は、特に小児への使用を意図されている製剤用である）；鼻腔内投与では、製剤は、例えば、散剤、経鼻ドロップ剤又はエーロゾル剤の形態であり得る。本発明の化合物の非経口、経口又は鼻腔内送達に好適な他の製剤は、当業者に周知である。製剤を作るための当技術分野で周知の方法は、例えば「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎの薬科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）」で見出せ得る。非経口投与用の製剤は、賦形剤として、無菌水又は生理食塩水、エタノール、プロピレングリコール、ポリアルキレングリコール、例えばポリエチレングリコール、植物由来油、水素化ナフタレン又は生体適合性がある生分解性ラクチドポリマーを含有し得る。本化合物の放出をコントロールするために、ポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレンコポリマーを使用してよい。本発明のポンドに対して潜在的に有用な他の非経口送達系は、エチレン－酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透圧ポンプ、インプラント可能な注射系及びリポソームを包含する。吸入用の製剤は、ラクトースを賦形剤として含有し得、又は例えば、ポリオキシエチレン－９－ラウリルエーテル、グリココール酸及びデオキシコール酸を含有する水性液剤であり得、又は経鼻ドロップ剤の形態での投与用の油性液剤であり得、又は鼻腔内に適用されるゲル剤であり得る。非経口投与用の製剤は、バッカル投与用のグリココール酸、直腸投与用のメトキシサリチラート、又は膣投与用のクエン酸も包含し得る。
本発明の製剤における化合物の濃度は、投与される投与量及び投与経路を包含するいくつかの要因に応じて変動する。一般に、本発明の化合物は、非経口投与用の化合物を約０．１から１０％ ｗ／ｖ含有する生理学的緩衝水溶液中で提供され得る。一般的な用量の範囲は、１日につき体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇから体重１ｋｇ当たり約１ｇ、例えば、１日につき体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇから体重１ｋｇ当たり１００ｍｇである。投与される投与量は、対処される感染症のタイプ及び進展規模、患者の全般的健康、並びに投与経路に依存する。局所及び経口投与では、製剤及び投与量は、他の抗生物質薬に使用されるものと同様であり得る。
一態様では、本発明の化合物又は組成物は、グラム陽性菌感染症と診断されている動物、例えばヒト、患者に投与される。特にグラム陽性菌感染症に影響を受けやすい動物又はヒトにおける、そのような感染症を阻害する又はその可能性を低下させる化合物は、動物又はヒトにも投与され得る（免疫不全若しくは免疫障害を持つヒト患者、又は、最近医療手技を受けた者を包含するが、それに限定されない）。他の態様では、培養した真核細胞は、新たな組成物で処置される、又は組成物は、そのような感染症を阻害する、若しくはその可能性を低下させるために添加される（例えば、予防的処置）。本発明の化合物は、食品製品、化粧品及び医療用品中、並びに表面における細菌の成長を防止するためにも使用され得る。
化合物は、予防的に、また感染症の発生後の両方で投与され得る。予防は、免疫障害を持つヒト患者及び動物、並びに手術又は歯科手技後の患者及び動物に最も適切であり得る。本発明の方法の適用に関連性がある状態のこのリストは、限定することを意図するものではなく、化合物に反応するあらゆる妥当な感染症は、本明細書に記載されている２５例の方法及び／又は化合物を使用して処置できる。
化合物は、生息環境又は表面を処理又はコーティングして、微生物成長を防ぐ又はその成長規模を低下させるためにも使用され得る。例えば、本発明の化合物は、グラム陽性菌の成長を防止するために、真核細胞の培養培地（例えば、固体又は液体培地）と混合され得る。更に、本発明の化合物は、クリーニング用液体製剤のような表面を処理するための、例えば、キッチン、バスルーム、病院、又は医療処置又は潜在的な微生物の成長の他の領域においての表面を消毒するための消毒製剤に使用され得る。医療デバイス及び他の表面も、微生物の成長をコントロールするために、本発明の化合物を用いて処理又はコーティングできる。医療デバイスは、動物において全身又は部分的にインプラントされているもの、及び動物の体外のものを包含する。医療デバイスの例は、カテーテル、透析ポンプ、血液採取設備、ステント及び薬物送達デバイスを包含するが、それらに限定されない。表面処理用の、又はコーティングにおける本発明の化合物の使用に関する標準的な製剤は、当業者に公知である。
ＤＮＡポリメラーゼＩＩＩＣ生成
ＤＮＡポリメラーゼＩＩＩＣコード遺伝子を、ゲノムＤＮＡから増幅した。プライマーは、５’－末端及び３’－末端がＢａｍＨＩ及びＸｈｏＩ切断部位をそれぞれ含有するように設計された。断片を、ＢａｍＨＩ及びＸｈｏＩ部位の間の発現プラスミドｐＥＴ－２８ａ（＋）に直接挿入した。組換えタンパク質は、元のタンパク質の全長及びＨｉｓタグ、トロンビン部位及びＮ－末端におけるＴ７タグを有していた。組換えタンパク質のコード配列は、全体のコーディング領域をカバーするプライマー８種を使用して、Ｓａｎｇｅｒシーケンシングにより確認された。
プラスミドを、ＢＬ２１（ＤＥ３）コンピテント大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞に導入した。陽性コロニーを１Ｌ ＬＢ培地に接種し、ＯＤ６００＝０．６に達するように２００ｒｐｍで回転させながら、３７℃にてインキュベーションした。誘発物質ＩＰＴＧ １ｍＭを、次いで添加して、発現を１６℃にて１８時間誘導した。細胞を採取し、溶解緩衝液（２５ｍＭトリス－ＨＣｌ ｐＨ＝７．５、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、２０ｍＭイミダゾール、２ｍＭ β－メルカプトエタノール及び１×Ｒｏｃｈｅプロテイナーゼ阻害剤カクテル）中に懸濁した。細胞を音波処理により溶解させ、残骸を５００００ｇで１時間遠沈させた。
タンパク質はまず、溶解物にＮｉカラムを通過させることにより単離した。カラムを５０カラム体積（ＣＶ）の結合緩衝液（プロテイナーゼ阻害剤なしの溶解緩衝液）、次いで１０ＣＶの洗浄緩衝液（合計４０ｍＭイミダゾールを有する結合緩衝液）で洗浄した。溶出緩衝液（合計３００ｍＭイミダゾールを有する結合緩衝液）を用いてタンパク質を溶出させた。
粗抽出物を、次いで、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００カラムと、２５ｍＭ トリス－ＨＣｌ ｐＨ ７．５、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、５％グリセロール及び１ｍＭ ＤＴＴを使用してサイズ排除クロマトグラフィーにより更に精製した。最終生成物を、－８０℃にて５０～１００μＬアリコートとして保存した。
ＤＮＡポリメラーゼＩＩＩＣに対するＫｉアッセイ
化合物を、化合物作業溶液として、ＤＭＳＯ中に１ｍｇ／ｍｌ（又は１０ｍｇ／ｍｌ）まで溶解した。テスト当日、丸底９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ－３７８８）において、１８０μＬのＤＭＳＯをウェルＡ中に添加し、１００μＬのＤＭＳＯをウェルＢからウェルＨ中に添加した。２０μＬ化合物作業溶液のアリコートをウェルＡ中に添加し、ピペッティングにより混合した。ウェルＡから、５０μＬ溶液をウェルＢに移し、ピペッティングにより混合して、３×希釈液を作った。手順をウェルＢからウェルＣ、以下同様にウェルＧまで繰り返した。ウェルＨはＤＭＳＯのみを含有していた。これにより、純粋ＤＭＳＯ中の濃度が１００、３３．３、１１．１、３．７、１．２、０．４、０．１４及び０μｇ／ｍｌの一連の化合物作業溶液が生成された。これを「マザープレート」とみなした。
９６－ヘッドピペットステーション（ＣｙＢｉｏ）を使用して、１μＬの化合物作業溶液を、マザープレートから同９６ウェルプレート中に移した。これを「テスティングプレート」とした。テスティングプレートを室温にて保持した。
酵素（ＤＮＡポリメラーゼＩＩＩＣ）試料を－８０℃の冷凍庫から取り出した。これを解凍し、氷上で保持した。酵素を、希釈緩衝液（２５ｍＭ トリス－ＨＣｌ、ｐＨ＝７．５、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、５％グリセロール、１ｍＭ ＤＴＴ）で０．０２５～０．０６Ｕ／μＬに希釈した。酵素１単位は、同一の系での標準アッセイ（ｄＧＴＰが省略された「不完全アッセイ」と対照的に、すべてのヌクレオチドが基質として存在する）において３０分で２５０ｐモルのｄＴＴＰを組み込むことができる量の酵素と定義される。希釈した酵素を新たな９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ－３７８８）中に、ウェル当たり２０μＬ添加した。このプレートを氷上で保持した。これを「酵素プレート」とした。
マスター反応ミックスを作るために、以下の試薬を添加し、順に適切な管中で混合した（マスターミックスは常に氷上で維持する）：
ａ）５００μＬ／ｍｌ ４０％グリセロール
ｂ）３０μＬ／ｍｌ １Ｍトリス－ＨＣｌ（ｐＨ＝７．５）（Ａｌｄｒｉｃｈ－１５４５６３）
ｃ）２０μＬ／ｍｌ ０．５Ｍ ＭｇＡｃ（Ｈｕｓｈｉ ３０１１０５１８）
ｄ）４μＬ／ｍｌ １Ｍ ＤＴＴ（Ａｌａｄｄｉｎ Ｄ１０４８５９）
ｅ）２５μＬ／ｍｌ １ｍＭ ｄＡＴＰ（Ｓａｎｇｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）
ｆ）２５μＬ／ｍｌ １ｍＭ ｄＣＴＰ（Ｓａｎｇｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）
ｇ）１０μｌ／ｍｌ １ｍＭ ｄＴＴＰ（Ｓａｎｇｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）
ｈ）４００μｌ／ｍｌ １ｍｇ／ｍｌ 活性化仔ウシ胸腺ＤＮＡ（Ｓｉｇｍａ Ｄ４５２２）
マスターミックスを軽く混合し、５μＬ／ｍｌ ２’－ｄＴＴＰテトラＮａ塩［メチ－３Ｈ］２．５ｍＣｉ／ｍｌ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）でスパイクした。これを最終マスターミックスとした。最終マスターミックスをリザーバー中に注ぎ、２５μＬを、１μＬ化合物を既に含有するテスティングプレートの各ウェル中に添加した。次いで１μＬ希釈酵素のアリコートを、酵素プレートからテスティングプレートの対応するウェル中に添加した。
テスティングプレートは、０．０２５Ｕの酵素、各ウェルに対する一連の濃度の化合物を含有しており、合計体積は２７μＬであった。プレートを３１℃のインキュベーターに直ちに入れ、かき混ぜながら３０分インキュベーションした。
プレートをインキュベーターから取り出し、直ちに１００μＬの４℃ １０％ ＴＣＡ（Ｓａ Ｅｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ １００００２５３）を各ウェル中に添加して、反応を止めた。プレートを４℃にて３０分インキュベーションして、高分子を沈殿させた。Ｕｎｉｆｉｌｔｅｒ ＧＦ／Ｂフィルタープレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を、５０μｌ／ウェルの１Ｍ ＨＣｌ＋１００ｍＭピロリン酸ナトリウム（Ａｌｆａ Ａｅｓａｒ Ａ１７５４６）で予め湿らせた。試料は、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒセルハーベスターを使用して、フィルタープレート上で採取した。フィルタープレートを、セルハーベスターにて、約２００μＬの冷１Ｍ ＨＣｌ＋１００ｍＭピロリン酸ナトリウムで４回、次いで約２００μＬの冷９０％エタノールで２回洗浄した。フィルタープレートを５０℃のオーブン中で２０分乾燥させた。
フィルタープレートの底を適合可能なステッカー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で密封し、５０μＬのシンチレーションカクテル（ＭｉｃｒｏＳｃｉｎｔ－Ｏ）を各ウェル中に添加し、プレート上面を透明なフィルムで密封した。プレートは、ＭｉｃｒｏＢｅｔａカウンターを使用して分析した。従来の３Ｈプロトコールを使用して、各ウェルでシンチレーションを３０秒測定した。データを１分当たりの計数（ＣＰＭ）として読み取った。
生データは、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍで、組み込まれている非線形回帰等式、ｌｏｇ（阻害剤）ｖｓ．標準化された反応－可変傾斜を使用して分析した。使用されたアッセイにより、多基質酵素に対するＫｉ値が直接得られた（所定の阻害剤のＫｉは、対照活性の５０％阻害が得られる濃度と定義される）（Ｗｒｉｇｈｔ，ｅｔ ａｌ．；Ｃｅｒ，ｅｔ ａｌ．；Ｔｏｒｔｉ，ｅｔ ａｌ．）。
最小発育阻止濃度の判定
材料及び方法
テスト物品：
レボフロキサシン（Ｓｉｇｍａ－２８２６６－１Ｇ－Ｆ）及びバンコマイシン（Ｓｉｇｍａ－９４７４７－１Ｇ）は、ＳＩＧＭＡから購入した。
細菌単離株：
テストされる細菌は、黄色ブドウ球菌ＮＲＳ３８４（メチシリン耐性黄色ブドウ球菌、ＭＲＳＡ）、黄色ブドウ球菌ＡＴＣＣ ２９２１３（メチシリン感受性黄色ブドウ球菌、ＭＳＳＡ）、肺炎レンサ球菌ＡＴＣＣ ４９６１９、エンテロコッカス・ファエカリスＡＴＣＣ ２９２１２、エンテロコッカス・ファエシウムＡＴＣＣ ７００２２１（バンコマイシン耐性腸球菌、ＶＲＥ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＴＣＣ ６６３３及び大腸菌ＡＴＣＣ ２５９２２である。詳細は、表１に列挙されている。
黄色ブドウ球菌ＮＲＳ３８４は、ＮＡＲＳＡ（Ｎｅｔｗｏｒｋ ｏｎ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、ここでの株コレクションはＢＥＩ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓにおけるものである）から得た。他の細菌単離株は、ＡＴＣＣ（Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）からであった。細菌試料を前述の協会から受け取り、供給業者から付与されたマニュアルに従って細菌を培養した。細菌を、－８０℃にて２５％グリセロール（最終濃度）中で保存した。
Figure 2022515775000498
ＭＨＡ：Ｍｕｅｌｌｅｒ－Ｈｉｎｔｏｎ ＩＩ寒天（ＢＤ－２１１４３８）
ＭＨＩＩＢ：Ｍｕｅｌｌｅｒ－Ｈｉｎｔｏｎ ＩＩブロス（ＢＤ－２１２３２２）
ＬＨＢ：ウマ溶血（Ｓｈａｎｇｈａｉ ＹｕａｎＭｕ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．Ｌｔｄ．ＹＭ－Ｕ１６１）
ＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＡＭ９２６０Ｇ）
ブロス微量希釈に基づく最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）の判定
テスト当日、化合物を、ストックとして２０ｍｇまで純粋ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ ２７６８５５－１Ｌ）に溶解した。ｖ底９６ウェルプレート（Ａｘｙｇｅｎ－ｗｉｐｐ０２２８０）中、２０μｌ ＤＭＳＯを、手作業でのピペッティングでウェル２からウェル１２中に添加した。ウェル１中に、１２．８μＬの化合物ＤＭＳＯストック（２０ｍｇ／ｍｌ）を添加し、ピペッティングにより２７．２μｌのＤＭＳＯと混合した。２倍段階希釈を、２０μｌの溶液をウェル１からウェル２に、次いでウェル２からウェル３、以下同様にウェル１１まで移し、混合することにより行った。ウェル１２に、化合物なしで２０μｌのＤＭＳＯを入れた。これを薬物の「マザープレート」とした。ウェル１からウェル１２まで、マザープレート中の薬物濃度はＤＭＳＯ中６．４、３．２、１．６、０．８、０．４、０．２、０．１、０．０５、０．０２５、０．０１２５及び０．００６２５μｇ／ｍｌであった。マルチピペットを使用して、段階希釈を行った。濃度は、化合物の効力に従って調整できる。Ｅｃｈｏ（登録商標）Ａｃｏｕｓｔｉｃ液体ハンドリングシステムを手作業でのピペッティングに置き換えて使用して、ドータープレートを作ってよい。
ＭＩＣテストの１日前に、菌株を、－８０℃のグリセロールストックからＭＨＡプレート上に画線し、３７℃にて２０時間インキュベーションした。肺炎レンサ球菌を血液寒天に画線し、３７℃にて５％ ＣＯ２中でインキュベーションした。単一のコロニーを、白金耳（Ｇｒｅｉｎｅｒ－７３１１７５）を使用することにより採集し、５ｍｌ無菌生理食塩水中で懸濁した。懸濁液の濁度を、約１．０×１０８ｃｆｕ／ｍｌに等しい０．１０に調整した（Ｓｉｅｍｅｎｓ ＭｉｃｒｏＳｃａｎ濁度計）。細菌懸濁液を対応するテスト培地（表１）中で２００×に希釈した。これを使用してドータープレートに播種した。
ｕ底９６ウェル「ドータープレート」（Ｃｏｓｔａｒ ３７８８）を調製する場合、マザープレートからの１μｌ溶液のアリコート、次いで複製を、マルチピペットを使用してドータープレート中に移した。
９９μｌの細菌懸濁液のアリコートを、ドータープレートの各ウェル中に、マルチピペットを使用して播種した。各ウェルは、約５．０×１０５ｃｆｕ／ｍｌ細菌、１％ ＤＭＳＯ及び段階希釈化合物を、ウェル１からウェル１２において、１００μｌの対応するテスト培地中にそれぞれ６４、３２、１６、８、４、２、１、０．５、０．２５、０．１２５、０．０６２５及び０μｇ／ｍｌで含有していた。
プレートを、周囲雰囲気、及び３７℃のインキュベーターにおいて２０時間インキュベーションした。
ＭＩＣ値は、目視検査によりテスト培地において、細菌の成長を完全に又は著しく阻害する化合物の最低濃度と判定した。本発明の化合物を、枯草菌、黄色ブドウ球菌、エンテロコッカス・ファエカリス、エンテロコッカス・ファエシウム、肺炎レンサ球菌及び大腸菌を包含する多彩な細菌生物に対する抗菌活性についてテストした。例２、４４、５６、７７、１２６、１４９、１６７、２１１、２１２、２１３、２１４、２１８、２４２、２７３及び２７６に記載されている化合物は、黄色ブドウ球菌ＤＮＡ ｐｏｌ ＩＩＩＣ酵素に対して、０．０５３～１．００μＭのＫｉを有していた。例２、４４、５３、５６、９０、１３４、２１２、２１３、２１４、２１８、２２２、３０４、３０５及び３０７に記載されている化合物は、黄色ブドウ球菌ＮＲＳ ３８４（ＭＲＳＡ）（μｇ／ｍｌ）及びＥ．ファエシウムＡＴＣＣ ７００２２１（ＶＲＥ）（μｇ／ｍｌ）に対して≦１μｇ／ｍｌのＭＩＣを有していた。
化合物は、大腸菌に対して１６μｇ／ｍｌから＞６４μｇ／ｍｌのＭＩＣの弱いグラム陰性活性を示した。３２０種の化合物のＭＩＣデータを表２に示す。
Figure 2022515775000499
Figure 2022515775000500
Figure 2022515775000501
Figure 2022515775000502
Figure 2022515775000503
Figure 2022515775000504
Figure 2022515775000505
Figure 2022515775000506
Figure 2022515775000507
（参考文献）
Figure 2022515775000508

Figure 2022515775000509

Figure 2022515775000510

Figure 2022515775000511
当業者は、単なる日常的実験を使用して、本明細書に記載されている特定の手順に対する多くの等価物を認識する、又は確かめることができる。そのような等価物は、本発明の範囲内と考えられる。様々な置換、変化及び改変は、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、本発明に対して行うことができる。他の側面、利点及び改変は、本発明の範囲内である。本出願全体で引用されているすべての参考文献、発行済みの特許及び公開された特許出願の内容は、参照により本明細書によって組み込まれる。そのような特許、出願及び他の文書の適切な成分、プロセス及び方法は、本発明及びその態様に対して選択できる。

Claims (17)

  1. 式Ｉ
    Figure 2022515775000512
    （式中、Ａ及びＢは、独立して、Ｎ又はＣＨであり、
    ｎは、０～３であり、
    Ｒ１は、（ＣＨ２）ｍ－｛（Ｖ）ｏ－（ＣＨ２）ｐ｝ｑ－Ｗであり、
    Ｖは、ＣＨ２、ＣＨ＝ＣＨ、Ｃ≡Ｃ、ＣＯ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、ＮＲ４、ＣＨＲ５、ＯＣ（Ｏ）、（Ｏ）ＣＯ、ＣＯＮＲ６、ＮＲ７ＣＯ、ＳＯ２ＮＨ、ＮＨＳＯ２；Ｃ３～８シクロアルキルであり、
    Ｒ４、Ｒ６及びＲ７のそれぞれは、独立して、Ｈ又はＣ１～６アルキルであり、
    Ｒ５は、ＯＨ又はＣ１～６アルキル、ＣＨ（Ｒ８Ｒ９）であり、
    Ｒ８及びＲ９のそれぞれは、独立して、Ｈ、ハロ又はＣ１～６アルキルであり、
    Ｗは、Ｈ、ハロ、置換若しくは非置換Ｃ１～６アルキル、置換若しくは非置換Ｃ３～８シクロアルキル、置換若しくは非置換Ｃ２～８ヘテロシクリル、置換若しくは非置換Ｃ６～１４アリール、置換若しくは非置換Ｃ１～１０ヘテロアリール、ＮＨ２、ＣＮ、ＯＲ１０、ＳＲ１１、ＣＯＲ１２、ＯＣＯＲ１３、ＮＲ１４ＣＯＲ１５、ＮＲ１６Ｒ１７、ＮＲ１８（ＣＯ）ＮＨＲ１９、ＣＨ（ＣＯ２Ｒ２０）２、ＣＯ２Ｒ２１、ＮＨＳＯ２Ｒ２２、ＣＯＮＲ２３Ｒ２４、ＣＨ２ＣＯ２Ｒ２５、Ｓ（Ｏ）Ｒ２６又はＳ（Ｏ２）Ｒ２７であり、
    Ｒ１０～Ｒ２７のそれぞれは、独立して、Ｈ、置換若しくは非置換Ｃ１～６アルキル、置換若しくは非置換Ｃ３～８シクロアルキル、置換若しくは非置換Ｃ２～８ヘテロシクリル、置換若しくは非置換Ｃ６～１４アリール、置換若しくは非置換Ｃ１～１０ヘテロアリールであり、
    ｍが１～５であり、ｏが０～４であり、ｐが０～４であり、ｑが０～４であり、
    Ｒ２は、Ｈ、ハロ、ＣＮ、置換若しくは非置換Ｃ１～６アルキル、ＣＯ２Ｒ２１、ＣＯＮＲ２３Ｒ２４、置換若しくは非置換Ｃ２～８ヘテロシクリル又は置換若しくは非置換Ｃ１～１０ヘテロアリールであり、
    Ｒ３は、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、Ｃ１～６アルキル、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＦ３ＣＨ２及びＯＣＦ３の群から選択される１個又は２個以上の置換基により置換されているＣ６～１４アリール又はＣ１～１０ヘテロアリールであり、
    Ｒ０は、Ｈ、ＣＨ２ＯＰＯ（ＯＨ）２、ＣＨ２ＯＣＯＮＨＣＨ２（ＣＨ２）ｔＯＰＯ（ＯＨ）２、ＣＨ２ＯＣＯＣＨ２（ＣＨ２）ｔＯＰＯ（ＯＨ）２、ＣＯＯ（ＣＨ２）ｔＯＰＯ（ＯＨ）２、ＣＨ２ＯＰＯ（ＯＨ）ＯＰＯ（ＯＨ）２又は（ＣＲ３０Ｒ３１Ｏ）ｓ－Ｘ－Ｙ－（ＣＲ３０Ｒ３１）ｔ－ＯＰＯ（ＯＲ２８）（ＯＲ２９）であり、
    Ｘは、直接結合又は（Ｃ＝Ｏ）であり、Ｙは、直接結合又は酸素であり、
    ｓは、０又は１であり、
    ｔは、１、２又は３であり、
    Ｒ２８及びＲ２９は、それぞれ独立して、水素又は加水分解性エステル基であり、Ｒ２８が水素である場合、Ｒ２９が－Ｐ（Ｏ）ＯＲ３２ＯＲ３３であり得、
    Ｒ３０及びＲ３１は、それぞれ独立して、水素又はＣ１～４アルキルであり、
    Ｒ３２及びＲ３３は、それぞれ独立して、水素又は加水分解性エステル基である）に対応する化合物、又はその光学異性体、その同位体異性体、プロドラッグ若しくはその薬学的に許容される塩。
  2. Ａ及びＢが、独立して、Ｎ又はＣＨであり、
    ｎが０～３であり、
    Ｒ１が、（ＣＨ２）ｍ－｛（Ｖ）ｏ－（ＣＨ２）ｐ｝ｑ－Ｗであり、
    Ｖが、ＣＨ２、ＣＯ、Ｏ、ＯＣ（Ｏ）又は（Ｏ）ＣＯであり、
    Ｗが、Ｈ、ハロ、置換若しくは非置換Ｃ１～６アルキル、ＮＨ２、ＣＮ又はＯＲ１０であり、
    Ｒ１０が、Ｈ又は置換若しくは非置換Ｃ１～６アルキルであり、
    ｍが１～５であり、ｏが０～４であり、ｐが０～４であり、ｑが０～４であり、
    Ｒ２が、Ｈ、ハロ、ＣＮ、置換若しくは非置換Ｃ１～６アルキル、ＣＯ２Ｒ２１、ＣＯＮＲ２３Ｒ２４、置換若しくは非置換Ｃ２～８ヘテロシクリル又は置換若しくは非置換Ｃ１～１０ヘテロアリールであり、
    Ｒ３が、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、Ｃ１～６アルキル、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＦ３ＣＨ２及びＯＣＦ３の群から選択される１個又は２個以上の置換基により置換されているＣ６～１４アリール又はＣ１～１０ヘテロアリールであり、
    Ｒ０がＨである、請求項１に記載の化合物、又はその光学異性体、その同位体異性体、プロドラッグ若しくはその薬学的に許容される塩。
  3. Ａ及びＢがＮであり、
    ｎが０～１であり、
    Ｒ１が、（ＣＨ２）ｍ－｛（Ｖ）ｏ－（ＣＨ２）ｐ｝ｑ－Ｗであり、
    Ｖが、ＣＯ、Ｏ、ＯＣ（Ｏ）又は（Ｏ）ＣＯであり、
    Ｗが、Ｈ、ハロ、ＮＨ２、ＣＮ又はＯＲ１０であり、
    Ｒ１０が、Ｈ又は置換若しくは非置換Ｃ１～６アルキルであり、
    ｍが１～５であり、ｏが０～１であり、ｐが０～４であり、ｑが０～４であり、
    Ｒ２が、Ｈ又はハロ又はＣＮであり、
    Ｒ３が、Ｃｌ、Ｆ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＦ３ＣＨ２及びＯＣＦ３の群から選択される１個又は２個以上の置換基により置換されているＣ６～１４アリール又はＣ１～１０ヘテロアリールであり、
    Ｒ０がＨである、
    請求項２に記載の化合物、又はその光学異性体、その同位体異性体、プロドラッグ若しくはその薬学的に許容される塩。
  4. Ａ及びＢがＮであり、
    ｎが１であり、
    Ｒ１が、（ＣＨ２）ｍ－｛（Ｖ）ｏ－（ＣＨ２）ｐ｝ｑ－Ｗであり、
    Ｖが、ＣＯ、Ｏ、ＯＣ（Ｏ）又は（Ｏ）ＣＯであり、
    Ｗが、Ｈ、ハロ、ＮＨ２、ＣＮ又はＯＲ１０であり、
    Ｒ１０が、Ｈ又は置換若しくは非置換Ｃ１～６アルキルであり、
    ｍが１～２であり、ｏが１であり、ｐが１～２であり、ｑが０～１であり、
    Ｒ２が、Ｈ又はハロ又はＣＮであり、
    Ｒ３が、Ｃｌ、Ｆ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＦ３ＣＨ２及びＯＣＦ３の群から選択される１個又は２個以上の置換基により置換されているＣ６～１４アリール又はＣ１～１０ヘテロアリールであり、
    Ｒ０がＨである、
    請求項３に記載の化合物、又はその光学異性体、その同位体異性体、プロドラッグ若しくはその薬学的に許容される塩。
  5. Ａ及びＢがＮであり、
    ｎが１であり、
    Ｒ１が、（ＣＨ２）ｍ－｛（Ｖ）ｏ－（ＣＨ２）ｐ｝ｑ－Ｗであり、
    Ｖが、Ｏ、ＯＣ（Ｏ）又は（Ｏ）ＣＯであり、
    Ｗが、Ｈ、ハロ、ＮＨ２又はＯＲ１０であり、
    Ｒ１０が、Ｈ又は置換若しくは非置換Ｃ１～６アルキルであり、
    ｍが１～２であり、ｏが１であり、ｐが１～２であり、ｑが０～１であり、
    Ｒ２が、Ｈ又はハロ又はＣＮであり、
    Ｒ３が、Ｃｌ、Ｆ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＦ３ＣＨ２及びＯＣＦ３の群から選択される１個又は２個以上の置換基により置換されているＣ６～１４アリール又はＣ１～１０ヘテロアリールであり、
    Ｒ０がＨである、
    請求項４に記載の化合物、又はその光学異性体、その同位体異性体、プロドラッグ若しくはその薬学的に許容される塩。
  6. Ａ及びＢがＮであり、
    ｎが１であり、
    Ｒ１が、（ＣＨ２）ｍ－｛（Ｖ）ｏ－（ＣＨ２）ｐ｝ｑ－Ｗであり、
    ＶがＯであり、
    ＷがＨ、ハロ、ＮＨ２又はＯＲ１０であり、
    Ｒ１０がＨであり、
    ｍが２であり、ｏが１であり、ｐが２であり、ｑが１であり、
    Ｒ２が、Ｈ又はハロ又はＣＮであり、
    Ｒ３が、Ｃｌ、Ｆ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＦ３ＣＨ２及びＯＣＦ３の群から選択される１個又は２個以上の置換基により置換されているＣ６～１４アリール又はＣ１～１０ヘテロアリールであり、
    Ｒ０がＨである、
    請求項５に記載の化合物又はその光学異性体、その同位体異性体、プロドラッグ若しくはその薬学的に許容される塩。
  7. 請求項１に記載の化合物、及び少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
  8. グラム陽性菌の成長を阻害する方法であって、生息環境と有効量の請求項１に記載の化合物を接触させるステップを含む、上記方法。
  9. 表面が、医療デバイスの表面である、請求項８に記載の方法。
  10. グラム陽性菌感染症の処置を必要とする対象において、それを処置する方法であって、前記対象に、治療有効量の請求項１に記載の化合物を投与するステップを含む、上記方法。
  11. 請求項１に記載の化合物、及びコーティング剤を含む表面コーティングであって、前記コーティング剤が、前記化合物を生息環境に付着させることが可能である、上記表面コーティング。
  12. ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、

    ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、

    １－アリル－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、

    ４－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ブチルアセタート、

    １－（シクロブチルメチル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、

    ５－［（３，４－シクロロフェニル）メチルアミノ］－１－フェニル－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン、

    １－シクロプロピル－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、

    シクロペンチル－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、

    セチル５－（５－クロロ－７－メトキシ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ペンタノアート、

    ５－［（３，４－シクロロフェニル）メチルアミノ］－１－（４－ピリジル）－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン、

    ３－クロロ－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－メトキシエチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、

    ５－（（３，４－シクロロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－１－（２－メトキシエチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、

    ３－クロロ－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（オキサゾール－４－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、

    １－（２－（４－アセチルピペラジン－１－イル）エチル）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩、

    ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、

    ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－メトキシエチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、

    ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（４－メチルモルホリン－２－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩、

    ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（３－メチルピコリノイル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩、

    ５－（（３，４－ジフルオロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－１－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、
    ５－（（４－クロロ－３－メチルベンジル）アミノ）－１－メチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、

    ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１，３－ジメチル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、

    ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－モルホリノエチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩、

    ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（４－ヒドロキシブチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン）、

    ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（チアゾール－２－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、

    ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（オキセタン－３－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、

    ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（テトラヒドロフラン－３－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、


    ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、

    ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（オキセタン－２－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、

    ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（３－ヒドロキシプロピル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、

    ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（ピラジン－２－イル）エチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩、

    ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－イソプロピル－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、

    ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（５－メトキシペンチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、

    ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（（２－メトキシエトキシ）メチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、

    ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（オキセタン－３－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、

    ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（ピリジン－３－イルスルホニル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩、

    （Ｅ）－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（４－メトキシブタ－２－エン－１－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、

    エチル５－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ペンタノアート、

    イソプロピル５－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ペンタノアート、

    エチル４－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）ブタノアート、

    メチル３－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）プロパノアート、

    ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（ピリジン－２－イルメチル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩、

    ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（ピリジン－３－イルメチル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩、

    ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（ピリジン－４－イルメチル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン二塩酸塩、

    ５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［１－（オキサゾール－４－カルボニル）－４－ピペリジル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン、

    ５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［１－（チアゾール－２－カルボニル）－４－ピペリジル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン、

    ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（４－メトキシピコリノイル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩、

    ５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－（４－メチルピコリノイル）ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩、


    ５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－３－フルオロ－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン、

    ３－クロロ－５－［（３，４－ジクロロフェニル）メチルアミノ］－１－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル］－６Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン、

    ５－（（３，４－ジフルオロベンジル）アミノ）－３－フルオロ－１－（オキサゾール－４－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン、

    ３－クロロ－５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（１－ニコチノイルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩、

    アンモニウム（２－（２－（５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－７－オキソ－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－１－イル）エトキシ）エトキシ）メチルホスファート、

    （５－（（３，４－ジクロロベンジル）アミノ）－１－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）－７－オキソ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－６（７Ｈ）－イル）リン酸二水素メチル
    からなる群から選択される化合物、及びその薬学的に許容される塩。
  13. 請求項１２に記載の化合物、及び少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
  14. グラム陽性菌の成長を阻害する方法であって、生息環境と有効量の請求項１２に記載の化合物を接触させるステップを含む、上記方法。
  15. 表面が、医療デバイスの表面である、請求項１４に記載の方法。
  16. グラム陽性菌感染症の処置を必要とする対象において、それを処置する方法であって、前記対象に、治療有効量の請求項１２に記載の化合物を投与するステップを含む、上記方法。
  17. 請求項１２に記載の化合物、及びコーティング剤を含む表面コーティングであって、前記コーティング剤が、前記化合物を生息環境に付着させることが可能である、上記表面コーティング。
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