CN113493453A - 稠合芳香环类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用 - Google Patents

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Abstract

本公开涉及稠合芳香环类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用。具体而言，本公开涉及多个具体结构的稠合芳香环类衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物，以及其作为ATX抑制剂的用途，和其在制备用于治疗癌症或纤维变性疾病或病症的药物中的用途。

Description

稠合芳香环类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
技术领域
本公开属于医药领域，涉及多个具体结构的稠合芳香环类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用。特别地，本公开涉及多个具体结构的稠合芳香环类衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物，以及其作为ATX抑制剂治疗癌症或纤维变性疾病或病症的用途。
背景技术
自分泌运动因子(Autotaxin，ATX)又称ENPP2，是一种分泌性的酶，主要是在癌细胞、肺部的支气管上皮细胞和肺泡巨噬细胞中高表达。ATX于1992年首次从黑色素瘤细胞中分离出来(Stracke,M.L.等人,J.Biol.Chem.1992,267,2524-2529)，属于ENPP家族七名成员之一，其中ENPP1和ENPP3最接近ATX(Albers,H.M.H.G.等人,Chem.Rev.2012,112,2593-2603)。ATX是ENPP酶中唯一具有溶血磷脂酶D(lysoPLD)活性，并且主要将溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidyl choline，LPC)转化为具有生物活性的脂质溶血磷脂酸(LPA)。LPA是一种脂类，在血浆中主要是LPA 16:0、LPA 18:1、LPA 18:2、LPA 20:4(Bandoh,K.等人,FEBSLett.2000,478,159-165)。LPA通过细胞表面的六个受体蛋白(LPA1-6)，也就是蛋白偶联受体(GPCR)发挥作用(Lin,M.E.等人,Prostaglandins Other Lipid Mediators 2010,91,130-138)。LPA受体家族可以进一步分为两大类：(1)EDG受体家族，包括LPA1-3；(2)非EDG受体家族LPA4-6。二者相似度低于40％(Zhao,Y.等人,Cell Signalling 2009,21,367-377)。每个LPA受体通过特定的G体蛋白介导一系列的细胞信号级联作用。主要的信号通路包括蛋白激酶(MAPK)活化、抑制腺苷酸环化酶通路、花生四烯酸释放、激活PI3K-AKT通路、调控细胞凋亡和存活；活化Rho、Rock、Rac和Ras信号通路(Mills,G.B.等人,Nat.Rev.Cancer2003,3,582-591)。ATX-LPA信号通路涉及到很多生理和病理过程，导致它与很多严重疾病有着重要联系，主要包括癌症、纤维化疾病、疼痛、免疫性疾病、炎症神经系统及心血管疾病(Nicolas,D.等人,US8993590B2)。实验证明ATX与肿瘤细胞的侵袭及转移过程有关，如在卵巢癌(Vidot,S.等人,Cell Signal,2010,22,926-935)、乳腺癌(Panupinthu,N.等人,British Journal of Cancer 2010,102,941-946)、前列腺癌(Nouh,M.A.等人,CancerSci.2009,100,1631-1638)、肝细胞癌(Wu,J.等人,Mol Cancer,2010,9,71)及肺癌(Xu,X.等人,Cancer,2010,116,1739-1750)的肿瘤组织都可以观察到ATX的过表达。而由其产生的LPA通过增加细胞运动性和侵袭性促进肿瘤形成。因此，ATX抑制剂可以阻止LPA的产生，有治疗多种疾病的潜力。
IPF(特发性肺纤维化)是ATX-LPA信号通路中一个很重要的研究领域，它是肺部的一种进行性、慢性的、纤维化性疾病。IPF的发病机制普遍认为是通过反复的刺激肺泡细胞，导致肺泡上皮细胞被激活，从而分泌一些促纤维化生长因子(TGFβ,PDGF,FGF...)和促纤维化的细胞因子，这些因子会将成纤维细胞募集到肺泡表面沉积和激活，进一步导致胶原的沉积和细胞外基质的沉淀，胶原的产生和基质的改变也会反过来促进这些因子的产生，而这些因子也会反过来进一步促进肺泡上皮细胞的激活，从而恶性循环，最终导致肺纤维化。与IPF相关的研究表明患者的支气管肺泡灌洗(BAL)液中ATX和LPA水平显著增加(Tager,A.M.等人,Nat.Med.2008,14,45-54)。通过对LPA1敲除和抑制剂研究，证明了LPA在肺纤维变性过程中的重要作用。进一步对敲除ATX的支气管上皮细胞和巨噬细胞的小鼠研究，显示这些小鼠对肺纤维变性模型敏感度降低(Oikonomo,N.等人,Am.J.Repir.CellMol.Biol.2012,47,566-574)。LPA在肺重塑中的作用与LPA对肺纤维母细胞(通过LPA1)和上皮细胞(通过LPA2)两者的作用有关，显示LPA2对上皮细胞TGFβ的活化与纤维变性病症有直接的关系(Xu,M.等人,Am.J.pathol.2009,174,1264-1279)。LPA在重塑和纤维变性中的作用与COPD、IPF和哮喘有关。
IPF主要症状是呼吸困难、干咳、急性期会有发热、类似流感状的症状。该病愈后很差，中位生存期为2-4年，5年存活率为20-30％，较许多恶性肿瘤还低。针对该病，目前没有好的治疗手段，主要是通过控制症状稳定病情。
目前在市场上针对IPF，仅有吡非尼酮(Pirfenidone)和尼达尼布(Nintedanib)2个药物被批准上市，吡非尼酮的作用机理尚不明确，而尼达尼布是酪氨酸激酶抑制剂，主要针对PDGFR、FGFR、VEGFR受体。这两个药物均不能提高肺功能，只能延缓病情进展，而且有一定的副作用，所以人们一直致力于寻找IPF治疗的有效药物。目前ATX抑制剂药物进展比较靠前的是GLGP-1690(临床三期)，用于特发性肺纤维化的治疗，其二期临床已显示良好的疗效。
与传统的激酶抑制剂相比，ATX抑制剂通过抑制LPA的形成，调控了细胞增殖、存活、凋亡和迁移相关的信号通路，可潜在用于对多种癌症的治疗，而且由于LPA的信号通路与多个器官的纤维化紧密相关，是研究新型纤维化疾病的一个重要靶点。
目前公开的相关专利有WO2014139882A1、WO2014202458A1、WO2019029620A1、WO2019108943A1、WO2019191504A1等。
发明内容
本公开的目的在于提供多个具体结构的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，其为如下表1结构：
表1化合物结构及命名
Figure BDA0003009408220000031
Figure BDA0003009408220000041
Figure BDA0003009408220000051
Figure BDA0003009408220000061
Figure BDA0003009408220000071
Figure BDA0003009408220000081
Figure BDA0003009408220000091
Figure BDA0003009408220000101
Figure BDA0003009408220000111
Figure BDA0003009408220000121
Figure BDA0003009408220000131
本公开的中间体化合物如下表2：
表2中间体结构及命名
Figure BDA0003009408220000141
Figure BDA0003009408220000151
Figure BDA0003009408220000161
Figure BDA0003009408220000171
Figure BDA0003009408220000181
Figure BDA0003009408220000191
Figure BDA0003009408220000201
本公开的另一方面涉及一种药物组合物，其含有表1所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
本公开还涉及一种制备上述药物组合物的方法，其包括将表1所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂相混合。
本公开另一方面涉及一种表1所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、或其可药用盐、或包含其的药物组合物在制备ATX抑制剂中的用途。本公开另一方面涉及一种表1所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、或其可药用盐、或包含其的药物组合物在制备预防和/或治疗纤维变性疾病、癌症、增殖性疾病、炎症性疾病、自身免疫性疾病、呼吸系统疾病、心血管疾病、神经变性疾病、皮肤学疾病、代谢疾病、骨髓增生异常综合症、异常血管生成相关疾病和疼痛的药物中的用途；优选为在制备预防和/或治疗纤维变性疾病和癌症的药物中的用途；所述纤维变性疾病更优选为肺纤维化、特发性肺纤维化、肝纤维化和硬皮病。
本公开另一方面涉及一种表1所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、或其可药用盐、或包含其的药物组合物在制备预防和/或治疗具有ATX表达增加的病理学特征的疾病的药物中的用途；其中所述具有ATX表达增加的病理学特征的疾病选自：纤维变性疾病、癌症、增殖性疾病、炎症性疾病、自身免疫性疾病、呼吸系统疾病、心血管疾病、神经变性疾病、皮肤学疾病、代谢疾病、骨髓增生异常综合症、异常血管生成相关疾病和疼痛；优选为纤维变性疾病和癌症；所述纤维变性疾病更优选为肺纤维化、特发性肺纤维化、肝纤维化和硬皮病。
本公开另一方面涉及一种抑制ATX的方法，该方法包括向需要其的受试者施用治疗有效剂量的本公开的表1所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐、或包含其的药物组合物。
本公开另一方面涉及一种预防和/或治疗纤维变性疾病、癌症、增殖性疾病、炎症性疾病、自身免疫性疾病、呼吸系统疾病、心血管疾病、神经变性疾病、皮肤学疾病、代谢疾病、骨髓增生异常综合症、异常血管生成相关疾病和疼痛的方法，该方法包括向需要其的受试者施用预防和/或治疗有效剂量的本公开的表1所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐、或包含其的药物组合物。
本公开另一方面涉及一种预防和/或治疗ATX表达增加的病理学特征的疾病的方法，该方法包括向需要其的受试者施用预防和/或治疗有效剂量的本公开的表1所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐、或包含其的药物组合物。具有ATX表达增加的病理学特征的疾病选自：纤维变性疾病、癌症、增殖性疾病、炎症性疾病、自身免疫性疾病、呼吸系统疾病、心血管疾病、神经变性疾病、皮肤学疾病、代谢疾病、骨髓增生异常综合症、异常血管生成相关疾病和疼痛；优选为纤维变性疾病和癌症；所述纤维变性疾病更优选为肺纤维化、特发性肺纤维化、肝纤维化和硬皮病。
本公开另一方面涉及一种本公开的表1所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式、或其可药用盐、或包含其的药物组合物，其作为药物。
本公开另一方面涉及一种本公开的表1所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式、或其可药用盐、或包含其的药物组合物，其作为ATX抑制剂。
本公开另一方面涉及一种本公开的表1所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式、或其可药用盐、或包含其的药物组合物，其作为预防和/或治疗纤维变性疾病、癌症、增殖性疾病、炎症性疾病、自身免疫性疾病、呼吸系统疾病、心血管疾病、神经变性疾病、皮肤学疾病、代谢疾病、骨髓增生异常综合症、异常血管生成相关疾病和疼痛的药物；优选为预防和/或治疗纤维变性疾病和癌症的药物；所述纤维变性疾病更优选为预防和/或治疗肺纤维化、肝纤维化和硬皮病。
本公开另一方面涉及一种本公开的表1所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式、或其可药用盐、或包含其的药物组合物，其作为治疗ATX表达增加的病理学特征的疾病的药物，其中所述的具有ATX表达增加的病理学特征的疾病选自：纤维变性疾病、癌症、增殖性疾病、炎症性疾病、自身免疫性疾病、呼吸系统疾病、心血管疾病、神经变性疾病、皮肤学疾病、代谢疾病、骨髓增生异常综合症、异常血管生成相关疾病和疼痛；优选为纤维变性疾病和癌症；所述纤维变性疾病更优选为肺纤维化、特发性肺纤维化、肝纤维化和硬皮病。
可将活性化合物制成适合于通过任何适当途径给药的形式，通过常规方法使用一种或多种药学上可接受的载体来配制本公开的组合物。因此，本公开的活性化合物可以配制成用于口服给药、注射(例如静脉内、肌肉内或皮下)给药，吸入或吹入给药的各种剂型。本公开的化合物也可以配制成持续释放剂型，例如片剂、硬或软胶囊、水性或油性混悬液、乳剂、注射液、可分散性粉末或颗粒、栓剂、锭剂或糖浆。本公开
本公开治疗方法中所用化合物或组合物的剂量通常将随疾病的严重性、患者的体重和化合物的相对功效而改变。不过，作为一般性指导，活性化合物优选是以单位剂量的方式，或者是以患者可以以单剂自我给药的方式。本公开化合物或组合物的单位剂量的表达方式可以是片剂、胶囊、扁囊剂、瓶装药水、药粉、颗粒剂、锭剂、栓剂、再生药粉或液体制剂。合适的单位剂量可以是0.1～1000mg。
本公开的药物组合物除活性化合物外，可含有一种或多种辅料，所述辅料选自以下成分：填充剂(稀释剂)、粘合剂、润湿剂、崩解剂或赋形剂等。根据给药方法的不同，组合物可含有0.1至99重量％的活性化合物。
片剂含有活性成分和用于混合的适宜制备片剂的无毒的可药用的赋形剂。这些赋形剂可以是惰性赋形剂、造粒剂、崩解剂、粘合剂和润滑剂。这些片剂可以不包衣或可通过掩盖药物的味道或在胃肠道中延迟崩解和吸收，因而在较长时间内提供缓释作用的已知技术将其包衣。
也可用其中活性成分与惰性固体稀释剂或其中活性成分与水溶性载体或油溶媒混合的软明胶胶囊提供口服制剂。
水混悬液含有活性物质和用于混合的适宜制备水悬浮液的赋形剂。此类赋形剂是悬浮剂、分散剂或湿润剂。水混悬液也可以含有一种或多种防腐剂、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂。
油混悬液可通过使活性成分悬浮于植物油，或矿物油配制而成。油悬浮液可含有增稠剂。可加入上述的甜味剂和矫味剂，以提供可口的制剂。可通过加入抗氧化剂保存这些组合物。
本公开的药物组合物也可以是水包油乳剂的形式。油相可以是植物油，或矿物油或其混合物。适宜的乳化剂可以是天然产生的磷脂，乳剂也可以含有甜味剂、矫味剂、防腐剂和抗氧剂。此类制剂也可含有缓和剂、防腐剂、着色剂和抗氧剂。
本公开的药物组合物可以是无菌注射水溶液形式。可以使用的可接受的溶媒或溶剂有水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。无菌注射制剂可以是其中活性成分溶于油相的无菌注射水包油微乳可通过局部大量注射，将注射液或微乳注入患者的血流中。或者，最好按可保持本公开化合物恒定循环浓度的方式给予溶液和微乳。为保持这种恒定浓度，可使用连续静脉内递药装置。这种装置的实例是Deltec CADD-PLUS.TM.5400型静脉注射泵。
本公开的药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌注射水或油混悬液的形式。可按已知技术，用上述那些适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬液。无菌注射制剂也可以是在肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中制备的无菌注射溶液或混悬液。此外，可方便地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。为此目的，可使用任何调和固定油。此外，脂肪酸也可以制备注射剂。
可按用于直肠给药的栓剂形式给予本公开化合物。可通过将药物与在普通温度下为固体但在直肠中为液体，因而在直肠中会溶化而释放药物的适宜的无刺激性赋形剂混合来制备这些药物组合物。
可通过加入水来制备水混悬的可分散粉末和颗粒给予本公开化合物。可通过将活性成分与分散剂或湿润剂、悬浮剂或一种或多种防腐剂混合来制备这些药物组合物。
如本领域技术人员所熟知的，药物的给药剂量依赖于多种因素，包括但并非限定于以下因素：所用具体化合物的活性、患者的年龄、患者的体重、患者的健康状况、患者的行为、患者的饮食、给药时间、给药方式、排泄的速率、药物的组合等；另外，最佳的治疗方式如治疗的模式、化合物的日用量或可药用盐的种类可以根据传统的治疗方案来验证。
术语说明
术语"纤维变性疾病"指的是特征在于因细胞外基质的过度产生、沉积和收缩所致的过度结癫的疾病，并且其与异常累积的细胞和/或纤连蛋白和/或胶原和/或增加的纤维母细胞募集相关，并且包括但不限于个别器官或组织(例如心脏、肾、肝关节、肺、胸膜组织、腹膜组织、皮肤、角膜、视网膜、肌肉骨髓和消化道)的纤维变性。优选选自特发性肺纤维变性(IPF，特发性肺纤维化)、囊性纤维变性、硬皮病、辐射诱导的纤维变性、慢性阻塞性肺部(COPD)、博来霉素诱导的肺纤维变性(bleomycin induced pulmonary fibrosis)、慢性哮喘、砂肺、石棉诱导的肺纤维变性、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)和不同病因学的其它弥漫性实质性肺疾病(包括医原性药物诱导的纤维变性、职业和/或环境诱导的纤维变性)、肉芽肿疾病(结节病、过敏性肺炎)、胶原血管病、肺泡蛋白沉积、朗格汉斯细胞肉芽肿(langerhanscell granulomatosis)、淋巴管平滑肌增多症、遗传疾病(赫曼斯基普德拉克综合征(Hermansky-Pudlak Syndrome)、结节性硬化症、神经纤维瘤、代谢蓄积障碍、家族性的问间质性肺病)；肾纤维变性、肝纤维变性、肝硬化、肠纤维变性、皮肤纤维变性、皮肤硬皮病、骨髓纤维变性、全身性硬化症、血管再狭窄和动脉粥样硬化；更优选选自特发性肺纤维变性(IPF)。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
“可药用盐”是指本公开化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。可以在化合物的最终分离和纯化过程中，或通过使合适的基团与合适的碱或酸反应来单独制备盐。通常用于形成药学上可接受的盐的碱包括无机碱，例如氢氧化钠和氢氧化钾，以及有机碱，例如氨。通常用于形成药学上可接受的盐的酸包括无机酸以及有机酸。
针对药物或药理学活性剂而言，术语“治疗有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。
本公开的化合物还可包含其同位素衍生物。术语“同位素衍生物”指结构不同仅在于存在一种或多种同位素富集原子的化合物。例如，具有本公开的结构，除了用“氘”或“氚”代替氢，或者用18F-氟标记(18F同位素)代替氟，或者用11C-，13C-，或者14C-富集的碳(11C-，13C-，或者14C-碳标记；11C-，13C-，或者14C-同位素)代替碳原子的化合物处于本公开的范围内。这样的化合物可用作例如生物学测定中的分析工具或探针，或者可以用作疾病的体内诊断成像示踪剂，或者作为药效学、药动学或受体研究的示踪剂。氘代物通常可以保留与未氘代的化合物相当的活性，并且当氘代在某些特定位点时可以取得更好的代谢稳定性，从而获得某些治疗优势(如体内半衰期增加或剂量需求减少)。
TBDPS为叔丁基二苯基硅基。
具体实施方式
以下结合实施例用于进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围。
实施例
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)、氘代氯仿(CDCl3)、氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
MS的测定用Agilent 1200/1290DAD-6110/6120Quadrupole MS液质联用仪(生产商：Agilent，MS型号：6110/6120Quadrupole MS)、waters ACQuity UPLC-QD/SQD(生产商：waters，MS型号：waters ACQuity Qda Detector/waters SQ Detector)、THERMO Ultimate3000-Q Exactive(生产商：THERMO，MS型号：THERMO Q Exactive)。
高效液相色谱法((HPLC))分析使用Agilent HPLC 1200DAD、Agilent HPLC1200VWD和Waters HPLC e2695-2489液相色谱仪。
手性HPLC分析测定使用Agilent 1260DAD高效液相色谱仪。
高效液相制备使用Waters 2767、Waters 2767-SQ Detecor2、Shimadzu LC-20AP和Gilson-281制备型色谱仪。
手性制备使用Shimadzu LC-20AP制备型色谱仪。
CombiFlash快速制备仪使用Combiflash Rf200(TELEDYNE ISCO)。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
硅胶柱色谱法一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
激酶平均抑制率及IC50值的测定用NovoStar酶标仪(德国BMG公司)。
本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自ABCR GmbH&Co.KG，Acros Organics，Aldrich Chemical Company，韶远化学科技(AccelaChemBio Inc)、达瑞化学品等公司。
实施例中无特殊说明，反应能够均在氩气氛或氮气氛下进行。
氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。
氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。
加压氢化反应使用Parr 3916EKX型氢化仪和清蓝QL-500型氢气发生器或HC2-SS型氢化仪。
氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。
微波反应使用CEM Discover-S 908860型微波反应器。
实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂，纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系包括：A：正己烷/乙酸乙酯体系，B：二氯甲烷/甲醇体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等碱性或酸性试剂进行调节。
实施例1
2-((6-(4-(2-(氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)-2-环丙基-8-氟喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈1
Figure BDA0003009408220000261
第一步
6-溴-2-环丙基-8-氟喹啉-4-酚1b
将化合物4-溴-2-氟苯胺1a(5g,26.3mmol)，3-环丙基-3-氧代丙酸乙酯(6g,38.4mmol)分散在多聚磷酸(40g,国药)中，反应液升温至130℃后继续搅拌过夜。LCMS显示大量原料剩余，并且有少量产物生成。将反应液降温至室温后，加水(100mL)稀释，向其中滴加饱和氢氧化钠溶液至pH约为8后用乙酸乙酯(100mL×3)萃取。合并后的有机相经饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物1b(320mg,产率：9％)。
MS m/z(ESI):282.2[M+1]。
第二步
6-溴-4-氯-2-环丙基-8-氟喹啉1c
将化合物1b(320mg,1.1mmol)分散在5mL三氯氧磷中，反应液升温至80℃后搅拌4小时。LC/MS显示反应完全。将反应液浓缩，所得残余物分散在50mL二氯甲烷中，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物1c(140mg,产率：53％)。
MS m/z(ESI):302.1[M+1]。
第三步
4-(4-氯-2-环丙基-8-氟喹啉-6-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯1d
将化合物1c(140mg,0.46mmol)，哌嗪-1-羧酸叔丁酯(87mg,0.46mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3,13mg,0.014mmol)，1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(BINAP,15mg,0.024mmol)和叔丁醇钠(75mg,0.78mmol)分散在无水甲苯(5mL,国药)中，反应在80℃并且氩气保护下搅拌过夜。LCMS显示反应基本完全。向冷却后的反应液中加入水(50mL)和乙酸乙酯(100mL)，有机相经饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物1d(130mg,产率：68％)。
MS m/z(ESI):406.3[M+1]。
第四步
4-(2-环丙基-8-氟-4-(甲基氨基)喹啉-6-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯1e
将化合物1d(140mg,0.35mmol)和甲胺乙醇溶液(20mL,30wt％)置于25mL金属闷罐中，密闭并且升温至140℃后搅拌过夜。LCMS显示有大约20％原料剩余。反应液减压浓缩后分散在50mL二氯甲烷和甲醇(V/V＝10/1)混合溶液中，依次用饱和碳酸氢钠水溶液，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物1e(55mg,产率：39％)。
MS m/z(ESI):401.4[M+1]。
第五步
4-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-环丙基-8-氟喹啉-6-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯1g
将化合物1e(55mg,0.13mmol)溶解在干燥四氢呋喃(5mL,国药)中，在冰浴条件下，将氢化钠(26mg,0.65mmol,60％纯度)加入到反应液中，然后将反应液升温至90℃搅拌30分钟。反应液冷却至40℃，将原料2-氯-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈1f(46mg,0.19mmol，采用公知的方法”J.Med.Chem.2017,60,3580-3590”制备而得)加入到反应液中，反应升温至90℃继续搅拌4小时。反应液冷却至室温后，加入饱和氯化铵水溶液(5mL)淬灭，乙酸乙酯(25mL×2)萃取。合并后的有机相经饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物1g(40mg,产率：48％)。
MS m/z(ESI):603.5[M+1]。
第六步
2-((2-环丙基-8-氟-6-(哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈1h
将化合物1g(40mg,0.066mmol)溶解在二氯甲烷(3mL,国药)和三氟乙酸(1.5mL,安耐吉化学)中，搅拌过夜。LCMS显示原料反应完全。反应液减压浓缩，所得残余物用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到标题产物1h(33mg,产率：99％)。
MS m/z(ESI):503.4[M+1]。
第七步
2-(4-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-环丙基-8-氟喹啉-6-基)哌嗪-1-基)乙酸乙酯1i
向化合物1h(450mg,447.69μmol)的N,N-二甲基甲酰胺(3.5mL,润捷)溶液中加入溴乙酸乙酯(105mg,628.74μmol)和无水碳酸钾(930mg,6.73mmol)。反应在40℃下搅拌2小时。LC-MS显示反应结束，反应液减压浓缩，除去大部分的N,N-二甲基甲酰胺。所得残余物分散在乙酸乙酯(20mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)中分液。分离有机相，水相用乙酸乙酯(20mL×2)萃取。合并有机相，用饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩，得到粗品1i(320mg,产率：100％)。
MS m/z(ESI):589.5[M+1]。
第八步
2-(4-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-环丙基-8-氟喹啉-6-基)哌嗪-1-基)乙酸1j
向化合物1i(320mg,447.93μmol)，四氢呋喃(6mL,国药)和水(2mL)的混合物中加入氢氧化锂一水合物(94mg,2.24mmol)。反应搅拌过夜。LC-MS显示反应结束。向反应液中缓慢加入稀盐酸(1M,2.2mL)进行中和。混合物在40℃下减压浓缩除去四氢呋喃，过滤。滤饼水洗，红外灯下烘干，得到产物1j(249mg,产率：99％)。
MS m/z(ESI):561.5[M+1]。
第九步
2-((6-(4-(2-(氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)-2-环丙基-8-氟喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈1
将化合物1j(32mg,0.0571mmol)和氮杂环丁烷盐酸盐(9mg,0.09mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(1.0mL,国药)中。冰浴条件下，将2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU,35mg,0.09mmol)和N,N-二异丙基乙胺(DIPEA,0.1mL)依次加入。反应液在室温条件下搅拌1个小时。LCMS显示原料反应完全。向反应液中加入水(50mL)和乙酸乙酯(50mL)，收集有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物得到标题产物1(25mg,收率：73％)。
MS m/z(ESI):600.6[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.20-8.07(m,2H),7.25-7.12(m,4H),6.63(d,1H),4.23(t,2H),4.06(t,2H),3.69(s,3H),3.31(s,4H),3.10(s,2H),2.75(s,4H),2.31-2.22(m,3H),1.17-1.12(m,4H)。
实施例2
(R)-2-((2-环丙基-8-氟-6-(4-(2-(3-羟基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈2
Figure BDA0003009408220000291
第一步
(R)-2-((2-环丙基-8-氟-6-(4-(2-(3-羟基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈2
将化合物1j(32mg,0.0571mmol)和(R)-吡咯烷-3-醇(9mg,0.10mmol,毕得医药)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(1.0mL,国药)中。冰浴条件下，向反应液中依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU,30mg,0.08mmol,泰坦)和N,N-二异丙基乙胺(DIPEA,0.1mL,苏州昊帆生物)。反应液在室温条件下搅拌1个小时。LCMS显示原料反应完全。向反应液中加入水(50mL)和乙酸乙酯(50mL)，收集有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化得到标题产物2(26mg,收率：72％)。MS m/z(ESI):630.6[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.14(dd,2H),7.26-7.14(m,4H),6.63(d,1H),4.55-4.50(m,1H),3.72(s,3H),3.69-3.49(m,4H),3.40-3.20(m,6H),2.83(s,4H),2.28-2.18(m,1H),2.08-1.91(m,3H),1.22-1.06(m,4H)。
实施例3
(S)-2-((2-环丙基-8-氟-6-(4-(2-(3-羟基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈3
Figure BDA0003009408220000301
采用实施例2的合成路线，将原料化合物(R)-吡咯烷-3-醇替换为原料化合物(S)-吡咯烷-3-醇(毕得医药)，制得标题化合物3(24mg)。
MS m/z(ESI):630.6[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.14(dd,2H),7.26-7.14(m,4H),6.63(d,1H),4.55-4.50(m,1H),3.72(s,3H),3.69-3.49(m,4H),3.40-3.20(m,6H),2.83(s,4H),2.28-2.18(m,1H),2.08-1.91(m,3H),1.22-1.06(m,4H)。
实施例4
2-((2-环丙基-8-氟-6-(4-(2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈4
Figure BDA0003009408220000302
采用实施例2的合成路线，将原料化合物(R)-吡咯烷-3-醇替换为原料化合物四氢吡咯(毕得医药)，制得标题化合物4(28mg)。
MS m/z(ESI):614.6[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.14(dd,2H),7.24-7.14(m,4H),6.63(d,1H),3.68(s,3H),3.48(t,4H),3.29(t,4H),3.18(s,2H),2.72(t,4H),2.28-2.20(m,1H),1.99-1.91(m,2H),1.89-1.81(m,2H),1.17-1.12(m,4H)。
实施例5
1-(2-(4-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-环丙基-8-氟喹啉-6-基)哌嗪-1-基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-羧酸5
Figure BDA0003009408220000311
第一步
1-(2-(4-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-环丙基-8-氟喹啉-6-基)哌嗪-1-基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-羧酸甲酯5a
室温下将化合物1j(60mg,0.10mmol)和氮杂环丁烷-3-羧酸甲酯盐酸盐(30mg,0.2mmol,毕得医药)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(3mL,国药)中。冰浴并且氩气保护下，依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU,70mg,0.18mmol,泰坦)和N,N-二异丙基乙胺(DIPEA,0.2mL,国药)。反应液在室温并且氩气保护下搅拌过夜。向反应液中加入水(50mL)和乙酸乙酯(50mL)，收集有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物5a(50mg,收率：72％)。
MS m/z(ESI):658.1[M+1]。
第二步
1-(2-(4-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-环丙基-8-氟喹啉-6-基)哌嗪-1-基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-羧酸5
将5a(50mg,0.07mmol)溶解在四氢呋喃(4mL,国药)和去离子水(2mL,屈臣氏)中，向反应体系中加入氢氧化锂一水合物(40mg,0.95mmol,国药)。反应液在室温下搅拌过夜。向反应液中加入稀盐酸(1.0M,0.9mL)和二氯甲烷/甲醇(V/V:10/1,100mL)。收集有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩，得到的粗品油状物经硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化得到淡黄色固体化合物5(12mg,收率：25％)。
MS m/z(ESI):644.1[M+1]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.62(s,1H),8.08-7.99(m,2H),7.73(s,1H),7.57(dd,1H),7.41(t,2H),6.70(d,1H),4.35(t,1H),4.24(dd,1H),4.00(t,1H),3.87(dd,1H),3.65(s,3H),3.26(s,4H),3.02(d,2H),2.53(s,4H),2.33-2.23(m,1H),2.04-1.95(m,1H),1.09-1.03(m,4H)。
实施例6
2-((2-环丙基-8-二氟-6-(4-(2-(6-羟基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈6
Figure BDA0003009408220000321
采用实施例2的合成路线，将原料化合物(R)-吡咯烷-3-醇替换为原料化合物2-氮杂螺[3.3]庚-6-醇甲酸盐(南京药石)，制得标题化合物6(12mg)。
MS m/z(ESI):656.5[M+1]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.03(s,2H),7.73(s,1H),7.56(d,1H),7.40(t,2H),6.70(s,1H),5.31(br,1H),5.02(d,1H),4.11(d,2H),3.97-3.89(m,1H),3.78(d,2H),3.65(s,3H),3.25(s,4H),2.97(s,2H),2.38(s,4H),2.29-2.25(m,1H),2.01-1.90(m,3H),0.86-0.83(m,4H)。
实施例7
2-((2-环丙基-8-二氟-6-(4-(2-(3-(羟甲基)氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈7
Figure BDA0003009408220000322
采用实施例2的合成路线，将原料化合物(R)-吡咯烷-3-醇替换为原料化合物氮杂环丁烷-3-甲醇盐酸盐(毕得医药)，制得标题化合物7(26mg)。
MS m/z(ESI):630.5[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.14(dd,2H),7.26-7.13(m,4H),6.64(s,1H),4.28(t,1H),4.08(t,2H),3.85-3.74(m,3H),3.69(s,3H),3.34(s,4H),3.17(dd,2H),2.81(s,5H),2.25-2.22(m,1H),1.17-1.13(m,4H)。
实施例8
2-((2-环丙基-8-氟-6-(4-(2-氧代-2-(7-氧代-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈8
Figure BDA0003009408220000331
采用实施例2的合成路线，将原料化合物(R)-吡咯烷-3-醇替换为原料化合物7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬烷盐酸盐(毕得医药)，制得标题化合物8(12mg)。
MS m/z(ESI):670.5[M+1]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.16-8.12(m,2H),7.25-7.15(m,4H),6.63(s,1H),3.92-3.91(m,2H),3.84-3.77(m,2H),3.74(s,3H),3.69-3.62(m,4H),3.29-3.26(m,4H),3.09(s,2H),2.70-2.62-(m,4H),2.25-2.22(m,1H),1.88-1.76(m,6H),1.15-1.13(m,2H)。
实施例9
2-((2-环丙基-8-氟-6-(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈9
Figure BDA0003009408220000332
Figure BDA0003009408220000341
第一步
2-((2-环丙基-8-氟-6-(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈9
室温下将化合物1h(70mg,113.71μmol)和2-溴乙醇(56.84mg,454.84μmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入碳酸钾(94.15mg,682.27μmol)，将反应液在80℃下搅拌过夜。冷却反应液，加入10mL水后用乙酸乙酯萃取(10mL×2)。合并后的有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，经硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化得到标题产物9(35.16mg,产率：64％)。
MS m/z(ESI):547.2[M+1]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.03(t,2H),7.73(s,1H),7.57(dd,1H),7.41(t,2H),6.68(d,1H),4.42(t,1H),3.65(s,3H),3.51(q,2H),3.26-3.22(m,4H),2.58-2.55(m,4H),2.40(t,2H),2.29-2.24(m,1H),1.08-1.05(m,4H)。
实施例10
2-((6-(4-(2-(3-氰基氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)-2-环丙基-8-氟喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈10
Figure BDA0003009408220000342
采用实施例2的合成路线，将原料化合物(R)-吡咯烷-3-醇替换为原料化合物3-氰基氮杂环丁烷盐酸盐(毕得医药)，制得标题化合物10(30mg)。
MS m/z(ESI):625.2[M+1]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.06-8.02(m,2H),7.74(s,1H),7.58(dd,1H),7.41(t,2H),6.70(d,1H),4.49(t,1H),4.40(dd,1H),4.13(t,1H),3.99(dd,1H),3.78-3.72(m,1H),3.65(s,3H),3.26(s,4H),3.04(d,2H),2.58-2.53(m,4H),2.29-2.25(m,1H),1.09-1.05(m,4H)。
实施例11
N-(1-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-环丙基-8-氟喹啉-6-基)氮杂环丁烷-3-基)-2-羟基乙烷-1-磺酰胺11
Figure BDA0003009408220000351
第一步
6-溴-2-环丙基-8-氟-N-甲基喹啉-4-胺11a
将化合物1c(240mg，0.8mmol)溶于甲胺乙醇溶液(15mL，30wt％，国药)，焖罐反应120℃过夜。反应液冷却至室温，减压浓缩，所得残余物溶于乙酸乙酯，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物11a(60mg，收率：25％)。MS m/z(ESI):294.9[M+1]。
第二步
2-((6-溴-2-环丙基-8-氟喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈11b
将化合物11a(60mg，0.2mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，冰水浴并且氩气保护下加入氢化钠(16mg，0.4mmol，纯度60％)，搅拌30分钟。加入化合物1f(57mg，0.24mmol)，氩气保护下室温反应1小时。冰水浴下加入饱和氯化铵溶液(10mL)，淬灭反应，用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(40mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物11b(75mg，产率：75％)。
MS m/z(ESI):497.1[M+1]。
第三步
1-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-环丙基-8-氟喹啉-6-基)氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯11c
将化合物11b(75mg，0.15mmol)溶于甲苯(5mL)中，加入化合物N-氮杂环丁烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(31mg，0.18mmol)和叔丁醇钠(23mg，0.24mmol)，氩气置换3次。加入三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3,4mg，0.0045mmol，冶金研究院)和1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(BINAP,4mg，0.0075mmol)，氩气置换3次。将反应液加热到80℃，氩气保护下搅拌4小时。冷却反应液，加入水(20mL)，用乙酸乙酯萃取(20mL×2)。合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物11c(60mg，产率：67％)。MS m/z(ESI):589.2[M+1]。
第四步
2-((6-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-2-环丙基-8-氟喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈11d
将化合物11c(60mg，0.1mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，将反应液加热到35℃搅拌2小时。反应液减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(10mL)，用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗产品标题产物11d(48mg，产率：96％)。
MS m/z(ESI):489.2[M+1]。
第五步
2-(N-(1-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-环丙基-8-氟喹啉-6-基)氮杂环丁烷-3-基)氨基磺酰基)乙酸甲酯11e
将化合物11d(100mg,0.2mmol)溶解于二氯甲烷(5mL,润捷)中，0℃下依次加入三乙胺(204mg，泰坦)和2-氯磺酰乙酸甲酯(42mg,0.24mmol,韶远)。反应液在室温下搅拌3小时。向反应液中加入水(30mL)，用二氯甲烷(30mL×2)萃取。合并后的有机相经饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤。滤液浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物得到标题产物11e(19mg,产率：15％)。
MS m/z(ESI):624.9[M+1]。
第六步
N-(1-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-环丙基-8-氟喹啉-6-基)氮杂环丁烷-3-基)-2-羟基乙烷-1-磺酰胺11
将化合物11e(19mg,0.03mmol,8064294-A1)溶于干燥的四氢呋喃(5mL,安耐吉)中，冰水浴并且搅拌下加入硼氢化锂(11.56mg,0.3mmol)。反应液在室温下搅拌2小时。LC/MS显示原料反应完全。向反应中加入冰水(20mL)，乙酸乙酯萃取(30mL×3)。合并后的有机相经饱和氯化钠溶液(20mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤。滤液浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物得到标题产物11(9mg,产率：49％)。
MS m/z(ESI):596.9[M+1]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.05(dd,2H),7.85(d,1H),7.71(s,1H),7.41(t,2H),7.01(dd,1H),6.24(d,1H),4.97(t,1H),4.38-4.28(m,1H),4.24(t,2H),3.83-3.69(m,4H),3.63(s,3H),3.17(t,2H),2.29-2.22(m,1H),1.06(d,4H)。
实施例12
2-((2-环丙基-6-(4-(2-(7,7-二氧化-7-硫杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)-8-氟喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈12
Figure BDA0003009408220000371
Figure BDA0003009408220000381
第一步
6-溴-2-环丙基-N-乙基-8-氟喹啉-4-胺12a
将化合物1c(240mg，0.8mmol)溶于乙胺乙醇溶液(15mL，30wt％)，焖罐120℃搅拌过夜。反应液冷却至室温，减压浓缩，加入乙酸乙酯，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物12a(55mg，收率：23％)。
MS m/z(ESI):309.0[M+1]。
第二步
2-((6-溴-2-环丙基-8-氟喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈12b
将化合物12a(55mg，0.2mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，冰水浴并且氩气保护下加入氢化钠(16mg，0.4mmol，纯度60％)，搅拌30分钟。加入化合物1f(57mg，0.24mmol)，氩气保护下室温搅拌1小时。冰水浴下加入饱和氯化铵溶液，淬灭反应，乙酸乙酯萃取(30mL×2)。合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(50mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物12b(80mg，产率：81％)。
MS m/z(ESI):511.1[M+1]。
第三步
4-(-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-2-环丙基-8-氟喹啉-6-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯12c
将化合物12b(500mg，0.97mmol)，哌嗪-1-羧酸叔丁酯(346mg，1.41mmol，韶远)，三(二亚苄基丙酮)二钯(90mg，0.1mmol)，1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(122mg，0.19mmol)和碳酸铯(956mg，2.9mmol)溶于20mL甲苯中，氮气置换3次，反应在80℃下搅拌14小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物12c(340mg，产率：51.7％)。
MS m/z(ESI):617.5[M+1]。
第四步
2-((2-环丙基-8-氟-6-(哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈12d
室温下将12c(382mg,0.45mmol)溶解于二氯甲烷(5mL,国药)中，加入三氟乙酸(2mL,泰坦)。将反应液加热到35℃搅拌2小时。LC/MS检测反应完全。将反应液减压浓缩后，加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，二氯甲烷萃取3次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到标题产物12d(232mg)。MS m/z(ESI):517.1[M+1]
第五步
2-(4-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-2-环丙基-8-氟喹啉-6-基)哌嗪-1-基)乙酸乙酯12e
室温下将化合物12d(232mg,0.45mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(10mL,国药)中，加入碳酸钾(1.24g,9mmol,国药)和溴乙酸乙酯(75mg,0.45mmol,国药)，室温搅拌过夜。LC/MS检测反应完全。向反应液中加入水，乙酸乙酯萃取(40mL×2)。合并后的有机相经饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物12d(230mg，产率：85％)。
MS m/z(ESI):603.5[M+1]
第六步
2-(4-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-2-环丙基-8-氟喹啉-6-基)哌嗪-1-基)乙酸12f
室温下将化合物12d(230mg,0.40mmol)溶解于四氢呋喃(3mL)和水(1.5mL,)中，加入氢氧化锂一水合物(164mg,4mmol)，室温搅拌过夜。LC/MS检测反应完全。反应液加水稀释，加入稀盐酸调节pH至约5，乙酸乙酯萃取(40mL×2)。合并后的有机相经饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩得到粗产品12f(190mg，产率：85％)。
MS m/z(ESI):575.2[M+1]。
第七步
2-((2-环丙基-6-(4-(2-(7,7-二氧化-7-硫杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)-8-氟喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈12
室温下将化合物12f(50mg,0.09mmol)和7,7-二氧代-7-硫杂-2-氮杂螺[3.5]壬烷盐酸盐(22mg,0.18mmol,Enamine)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(DIPEA,337mg,2.7mmol)和2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU,32mg,0.27mmol)，反应液室温搅拌过夜。LC/MS检测反应完全。向反应液中加入水(20mL)，乙酸乙酯萃取(20mL×2)。合并后的有机相经饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩，残用薄层层析以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物12(23mg，产率：35％)。MS m/z(ESI):732.5[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.14(dd,2H),7.22-7.14(m,4H),6.66(s,1H),4.40-4.06(brs,2H),4.05(s,2H),3.83(s,2H),3.35(s,4H),3.19(s,2H),2.99(s,4H),2.85(s,4H),2.35(s,4H),2.26-2.22(m,1H),1.36(t,3H),1.23-1.11(m,4H)。
实施例13
1-(2-(4-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-2-环丙基-8-氟喹啉-6-基)哌嗪-1-基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-羧酸13
Figure BDA0003009408220000401
第一步
1-(2-(4-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-2-环丙基-8-氟喹啉-6-基)哌嗪-1-基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-羧酸甲酯13a
室温下将化合物12f(60mg,0.09mmol)和氮杂环丁烷-3-羧酸甲酯盐酸盐(19mg,0.18mmol,毕得医药)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU,119mg,0.12mmol)和N,N-二异丙基乙胺(DIPEA,135mg,1.05mmol)，反应液室温搅拌过夜。LC/MS检测反应完全。向反应液中加入水(20mL)，乙酸乙酯(20mL×2)萃取。合并后的有机相经饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥后过滤。滤液减压浓缩，用硅胶柱层析以洗脱体系A纯化所得残余物，得到标题产物13a(70mg，产率：99％)。
MS m/z(ESI):672.3[M+1]。
第二步
1-(2-(4-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-2-环丙基-8-氟喹啉-6-基)哌嗪-1-基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-羧酸13
室温下将化合物13a(70mg,0.09mmol)溶解于四氢呋喃(3mL)和水(1.5mL)中，加入氢氧化锂一水合物(21.39mg,521.79μmol)。室温搅拌过夜。LC/MS检测反应完全。减压浓缩除去四氢呋喃，用1M稀盐酸调节pH约为5，乙酸乙酯萃取(30mL×2)。合并后的有机相经饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥后过滤。滤液减压浓缩得到粗品，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物13(29mg，产率：42％)。
MS m/z(ESI):658.2[M+1]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.70(brs,1H),8.05-8.02(m,2H),7.71(s,1H),7.57(dd,1H),7.41(t,2H),6.68(d,1H),4.36-3.84(m,6H),3.31-3.17(m,6H),3.01(d,2H),2.53-2.49(m,3H),2.32-2.25(m,1H),1.28-1.22(m,3H),1.08-1.06(m,4H)。
实施例14
2-((6-(4-(2-(6-氨基-2-氮杂螺[3.3]庚烷--2-基]-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)-2-环丙基-8-氟喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈14
Figure BDA0003009408220000411
第一步
(2-(2-(4-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-2-环丙基-8-氟喹啉-6-基)哌嗪-1-基)乙酰基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基甲酸叔丁酯14a
将化合物12f(60mg,0.09mmol)和2-氮杂螺[3.3]庚烷-6基)氨基甲酸叔丁酯盐酸盐(44mg,0.18mmol,南京药石)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU,119mg,0.12mmol)和N,N-二异丙基乙胺(DIPEA,135mg,1.05mmol)，反应液室温搅拌过夜。LC/MS检测反应完全。向反应液中加入水(20mL)，乙酸乙酯(20mL×2)萃取。合并后的有机相经饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥后过滤。滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱体系B纯化所得残余物，得到标题产物14a(52mg，产率：75％)。MS m/z(ESI):769.3[M+1]。
第二步
2-((6-(4-(2-(6-氨基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基]-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)-2-环丙基-8-氟喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈14
室温下将化合物14a(52mg,0.07mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(2mL)。将反应液加热到35℃搅拌2小时。LC/MS检测反应完全。将反应液减压浓缩后，加入10mL饱和碳酸氢钠溶液，二氯甲烷萃取3次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱体系B纯化所得残余物，得到标题产物14(36mg，产率：80％)。
MS m/z(ESI):669.3[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.16-8.12(m,2H),7.22-7.15(m,4H),6.65(s,1H),4.40-3.94(m,6H),3.38-3.24(m,1H),3.27(s,4H),3.04(s,2H),2.65(s,4H),2.64-2.49(m,2H),2.21-2.12(m,1H),1.92-1.77(m,4H),1.28(t,3H),1.13-1.03(m,4H)。
实施例15
2-((2-环丙基-8-氟-6-(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈15
Figure BDA0003009408220000421
第一步
2-((2-环丙基-8-氟-6-(哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈15a
将化合物12c(110mg,0.178mmol)溶解于二氯甲烷(3mL)中，室温并且搅拌下加入三氟乙酸(1mL)，35℃下搅拌1小时。LC/MS显示原料反应完全。减压浓缩，向反应液残留物中加入饱和碳酸氢钠水溶液(15mL)，乙酸乙酯萃取(30mL×2)。合并后的有机相经饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤。滤液减压浓缩得标题产物15a(91mg,产率：99％)。
MS m/z(ESI):517.3[M+1]。
第二步
2-((2-环丙基-8-氟-6-(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈15
将化合物15a(91mg,0.178mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，依次加入2-溴乙醇(72.57mg,580.71μmol,国药)和碳酸钾(160.52mg,1.16mmol)，80℃下搅拌16小时。向冷却后的反应液中加入冰水(15mL)，乙酸乙酯萃取(30mL×3)。合并后的有机相经饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤。滤液浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱体系B纯化所得残余物，得到标题产物15(28.6mg,产率：25％)。
MS m/z(ESI):561.3[M+1]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.05(dd,2H),7.71(s,1H),7.57(dd,1H),7.41(t,2H),6.67(d,1H),4.40(s,1H),4.15(brs,2H),3.51(dd,2H),3.23(s,4H),2.52(s,4H),2.41(t,2H),2.34-2.24(m,1H),1.27(d,3H),1.08(d,J＝6.8Hz,4H)。
实施例16
(S)-2-((2-环丙基-8-氟-6-(3-(羟甲基)-4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈16
Figure BDA0003009408220000431
第一步
(S)-4-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-2-环丙基-8-氟喹啉-6-基)-2-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯16a
将化合物12b(500mg，0.97mmol)，(S)-2-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(318mg，1.41mmol，韶远)，三(二亚苄基丙酮)二钯(90mg，0.1mmol)，1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(122mg，0.19mmol)和碳酸铯(956mg，2.9mmol)溶于20mL甲苯中，氮气置换3次，反应在80℃下搅拌16小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物16a(340mg，产率：53.7％)。MS m/z(ESI):647.3[M+1]。
第二步
(S)-2-((2-环丙基-8-氟-6-(3-(羟甲基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈16b
将化合物16a(340mg，0.52mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(5mL)，反应搅拌1小时。反应液减压浓缩，所得残留物用二氯甲烷(40mL)稀释，依次用饱和碳酸氢钠溶液(20ml×2)、水(20ml×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到标题产物16b(280mg，产率：97.4％)。
MS m/z(ESI):547.2[M+1]。
第三步
(S)-2-((6-(3-(((叔丁基二苯基硅基)氧基)甲基)哌嗪-1-基)-2-环丙基-8-氟喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4–(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈16c
将化合物16b(280mg，0.51mmol)溶于四氢呋喃(40ml)中，加入钠氢(111mg，2.56mmol，纯度60％)，反应搅拌1小时，随后加入叔丁基二苯基氯硅烷(704mg，2.56mmol)，反应继续搅拌3小时。向反应液中加入饱和氯化铵溶液(40ml)，淬灭反应，随后用乙酸乙酯(80ml×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物16c(234mg，产率58.2％)。
MS m/z(ESI):785.3[M+1]。
第四步
(S)-2-((6-(3-(((叔丁基二苯基硅基)氧基)甲基)-4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)-2-环丙基-8-氟喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈16d
将化合物16c(234mg，0.30mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，加入三乙胺(91mg，90mmol)，随后滴加甲磺酰氯(53mg，0.46mmol)，反应搅拌1小时。反应液用二氯甲烷(30mL)稀释，用水(20mL×2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物16d(210mg，产率81.6％)。
MS m/z(ESI):863.3[M+1]。
第五步
(S)-2-((2-环丙基-8-氟-6-(3-(羟甲基)-4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈16
将化合物16d(210mg，0.24mmol)溶于四氢呋喃(20ml)中，滴加四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(191mg，0.73mmol，1M，0.36mL)，反应搅拌1小时。反应液用二氯甲烷(30mL)稀释，用水(20mL×2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物16(90mg，产率59.2％)。
MS m/z(ESI):625.3[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.07-8.05(m,2H),7.74(s,1H),7.54-7.51(d,1H),7.44-7.40(t,2H),6.71(s,1H),5.05-5.02(t,1H),4.35-4.20(br,1H),4.06-4.01(m,1H),3.89-3.80(m,3H),3.70-3.67(d,1H),3.63-3.51(m,3H),3.05-2.96(m,4H),2.95-2.86(m,1H),2.33-2.26(m,1H),1.30-1.24(t,3H),1.13-1.03(m,4H)。
实施例17
N-(1-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-2-环丙基-8-氟喹啉-6-基)氮杂环丁烷-3-基)-2-羟基乙烷-1-磺酰胺17
Figure BDA0003009408220000451
第一步
1-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-2-环丙基-8-氟喹啉-6-基)氮杂环丁烷-3-氨基甲酸叔丁酯17a
将化合物12b(80mg，0.16mmol)溶于甲苯(5mL)，加入化合物氮杂环丁烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(31mg，0.18mmol，韶远)和叔丁醇钠(23mg，0.24mmol)，氩气置换3次。加入三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3,(4mg，0.0045mmol)和1,1’-联萘-2,2’-双二苯膦(BINAP,4mg，0.0075mmol)，氩气置换3次。将反应液加热到80℃并且氩气保护下搅拌4小时。冷却反应液，加入水(20mL)，用乙酸乙酯萃取(20mL×2)。合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物17a(66mg，产率：64％)。MS m/z(ESI):603.2[M+1]。
第二步
2-((6-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-2-环丙基-8-氟喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈17b
将化合物17a(66mg,0.1mmol)溶于二氯甲烷(3mL)，加入三氟乙酸(1mL)，将反应液加热到35℃搅拌2小时。反应液减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(10mL)，用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗产品标题产物17b(52mg，产率：96％)。
MS m/z(ESI):503.2[M+1]。
第三步
2-(N-(1-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-2-环丙基-8-氟喹啉-6-基)氮杂环丁烷-3-基)氨基磺酰基)乙酸甲酯17c
室温下将化合物17b(142mg,0.282mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)中，0℃下依次加入三乙胺(285mg,2.82mmol)和2-氯磺酰乙酸甲酯(63.3mg,0.367mmol,韶远)，室温下搅拌3小时。向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液(15mL)，乙酸乙酯萃取(30mL×3)。合并后的有机相经饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤。滤液浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物17c(105mg,产率：58％)。
MS m/z(ESI):639.1[M+1]。
第四步
N-(1-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-2-环丙基-8-氟喹啉-6-基)氮杂环丁烷-3-基)-2-羟基乙基-1-磺酰胺17
室温并且氩气保护下将化合物17c(105mg,0.164mmol)溶解于无水四氢呋喃(10mL)中，搅拌下加入硼氢化锂(43mg,1.968mmol)。反应液搅拌2小时。LC/MS显示原料反应完全。向反应液中加入冰水(20mL)，乙酸乙酯萃取(30mL×3)。合并后的有机相经饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤。滤液浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物17(47.4mg,产率：47％)。
MS m/z(ESI):611.1[M+1]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.06(dd,2H),7.81(d,1H),7.70(s,1H),7.42(t,2H),7.02(dd,1H),6.23(d,1H),4.92(t,1H),4.35-3.95(m,5H),3.76-3.69(m,4H),3.16(t,2H),2.36-2.18(m,1H),1.27(t,J＝7.0Hz,3H),1.07(d,J＝6.8Hz,4H)。
实施例18
2-((2-环丙基-8-氟-6-(4-(2-(6-羟基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈18
Figure BDA0003009408220000471
第一步
2-((2-环丙基-8-氟-6-(4-(2-(6-羟基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈18
室温下将化合物12f(50mg,0.09mmol)和2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-醇甲酸盐(20mg,0.18mmol,南京药石)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(DIPEA,337mg,2.7mmol)和2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU,32mg,0.27mmol)，反应液室温搅拌过夜。LC/MS检测反应完全。反应液加水(20mL)，乙酸乙酯萃取(20mL×2)。合并后的有机相经饱和氯化钠溶液洗涤(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物18(23mg，产率：40％)。
MS m/z(ESI):670.6[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.14(dd,2H),7.21-7.15(m,4H),6.67(s,1H),4.25-4.19(m,1H),4.18(d,2H),4.00(s,2H),3.67-3.63(m,1H),3.50-3.00(m,8H),2.60-2.55(m,2H),2.26-2.22(m,1H),2.17-2.09(m,2H),1.55(dd,2H),1.45(d,1H),1.36(t,3H),1.21-1.12(m,4H)。
实施例19-1,19-2
(S)-2-((2-环丙基-8-氟-6-(4-(2-羟丙基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈19-1
(R)-2-((2-环丙基-8-氟-6-(4-(2-羟丙基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈19-2
Figure BDA0003009408220000481
第一步
2-((2-环丙基-8-氟-6-(4-(2-羟丙基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈19
将化合物15a(450mg,0.89mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，依次加入1-溴丙-2-醇(805mg,5.8mmol,韶远)和碳酸钾(800mg,5.8mmol)，80℃下搅拌48小时。向冷却后的反应液中加入冰水(15mL)，乙酸乙酯萃取(30mL×3)。合并后的有机相经饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤。滤液浓缩，用硅胶色谱法以洗脱体系B纯化所得残余物，得到标题产物19(106mg,产率：20％)。
MS m/z(ESI):575.6[M+1]。
将化合物19(106mg，0.18mmol)进行手性制备(分离条件：手性制备柱CHIRALPAKOZ,2.5cm I.D.*25cm,10μm；流动相：正己烷：乙醇＝60：40(v/v)，流速：60mL/min)，收集其相应组分，减压浓缩，得到标题化合物(34mg、38mg)。
单一构型化合物(较短保留时间)：
MS m/z(ESI):575.6[M+1]。
手性HPLC分析：保留时间4.94分钟，手性纯度：100％(色谱柱：CHIRALPAK IE-3，0.46cm I.D.*15cm,5μm；流动相：正己烷：乙醇60：40(v/v))
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.16-8.12(m,2H),7.23-7.14(m,4H),6.65(s,1H),4.41-3.98(m,2H),3.92-3.85(m,1H),3.35-3.21(m,4H),2.84-.80(m,2H),2.58-2.5514(m,2H),2.40-2.37(m,2H),2.31-2.24(m,1H),1.36(t,3H),1.18-1.04(m,7H)。
单一构型化合物(较长保留时间)：
MS m/z(ESI):575.6[M+1]。
手性HPLC分析：保留时间5.13分钟，手性纯度：100％(色谱柱：CHIRALPAK IE-3，0.46cm I.D.*15cm,5μm；流动相：正己烷：乙醇60：40(v/v))
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.16-8.12(m,2H),7.23-7.14(m,4H),6.65(s,1H),4.41-3.98(m,2H),3.92-3.85(m,1H),3.35-3.21(m,4H),2.84-.80(m,2H),2.58-2.5514(m,2H),2.40-2.37(m,2H),2.31-2.24(m,1H),1.36(t,3H),1.18-1.04(m,7H)。
实施例20
2-((2-环丙基-8-氟-6-(4-(2-羟基-2-甲基丙基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈20
Figure BDA0003009408220000491
第一步
2-((2-环丙基-8-氟-6-(4-(2-氧代丙基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈20a
将化合物15a(250mg,0.45mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，依次加入1-溴丙酮(46mg,1.8mmol,韶远)和碳酸钾(276mg,2mmol)，80℃下搅拌12小时。向冷却后的反应液中加入冰水(15mL)，乙酸乙酯萃取(30mL×3)。合并后的有机相经饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤。滤液浓缩，用硅胶色谱法以洗脱体系A纯化所得残余物，得到标题产物20a(132mg,产率：51％)。MS m/z(ESI):573.2[M+1]。
第二步
2-((2-环丙基-8-氟-6-(4-(2-羟基-2-甲基丙基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈20
干冰丙酮浴下向化合物20a(257mg,0.45mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液缓慢滴加甲基溴化镁格式试剂(0.9mL,2M,1.8mmol,安耐吉)，滴加完毕后自然升至室温反应3个小时。冰浴下向反应液中加入10mL水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取(30mL×3)。合并后的有机相经饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤。滤液浓缩，用硅胶色谱法以洗脱体系B纯化所得残余物，得到标题产物20(112mg,产率：42％)。
MS m/z(ESI):589.2[M+1]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.06-8.03(m,2H),7.71(s,1H),7.56(d,1H),7.41(t,2H),6.67(s,1H),4.20-4.04(m,2H),3.30(m,1H),3.23-3.20(m,4H),2.65-2.52(m,4H),2.30-2.27(m,1H),2.26-2.21(m,2H),1.29-1.25(m,4H),1.09-1.07(m,9H)。
实施例21
2-((6-(4-(2-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)-8-氟-2-异丙基喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈21
Figure BDA0003009408220000501
Figure BDA0003009408220000511
第一步
(1-(2-氯乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯21b
将氮杂环丁烷-3-基氨基甲酸叔丁酯21a(500mg，2.9mmol，南京药石)，三乙胺(881mg，8.7mmol)加入到10mL二氯甲烷中，控温0-5℃，滴加氯乙酰氯(426mg，3.8mmol)，滴毕，升至室温，搅拌反应2小时。加入水和二氯甲烷各20mL萃取，分出有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到标题产物21b(700mg，产率：96.9％)。
MS m/z(ESI):249.2[M+1]。
第二步
6-溴-8-氟-2-异丙基喹啉-4-酚21e
将4-溴-2-氟苯胺21c(8.0g，33.33mmol，毕得医药)，异丁酰乙酸乙酯21d(9.6g，66.67mmol，毕得医药)以及多聚磷酸(33g)依次加入到反应瓶中。反应体系逐渐升温至130℃，搅拌过夜。将反应液冷却，用冰水(250mL)稀释，缓慢滴加饱和氢氧化钠溶液调节反应液pH约为8，悬浊液过滤，将滤饼分散在乙醚(200mL)中，搅拌30分钟，过滤，得到标题产物23e(1g，收率：13％)。
MS m/z(ESI):284.1[M+1]。
第三步
6-溴-4-氯-8-氟-2-异丙基喹啉21f
将化合物21e(3.0g，9.37mmol)分散在三氯氧磷(30mL)，反应体系逐渐升温至80℃，搅拌过夜。反应液减压浓缩除去大部分的三氯氧磷。向所得油状物中缓慢加入饱和碳酸氢钠溶液调节pH约为8，用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物21f(3.0g，产率：94％)。
MS m/z(ESI):302.0[M+1]。
第四步
2-(甲基氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈21g
将化合物1f(9.7g，33.5mmol)溶于2M乙胺的四氢呋喃溶液(50mL)，封管，加热至80℃，搅拌反应10小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物21g(6.8g，产率：81％)。
MS m/z(ESI):234.1[M+1]。
第五步
2-((6-溴-8-氟-2-异丙基喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈21h
将化合物21g(300mg，1.01mmol)溶于四氢呋喃(8mL)中，加入氢化钠(160mg，4.0mmol，纯度60％)，将反应液加热到90℃搅拌30分钟。反应液冷却到室温后加入化合物21f(361mg,1.46mmol)，随后将反应液再次加热至90℃，搅拌过夜。冷却反应液，加入饱和氯化铵溶液，用乙酸乙酯萃取(100mL×2)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物21h(390mg，产率：79％)。MS m/z(ESI):499.0[M+1]。
第六步
4-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-8-氟-2-异丙基喹啉-6-基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯21i
将化合物21h(100mg,0.19mmol)和1-叔丁氧羰基哌嗪(55mg,0.3mmol)溶于甲苯(10mL)中，加入叔丁醇钠(38mg，0.4mmol)，氩气置换3次。加入三(二亚苄基丙酮)二钯(18mg，0.02mmol)和1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(19mg，0.04mmol)，氩气置换3次。将反应液加热至110℃，氩气保护下搅拌12小时。冷却反应液，加入水(40mL)，乙酸乙酯(30mL×2)萃取。合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物21i(100mg，产率：82.9％)。
MS m/z(ESI):605.2[M+1]。
第七步
2-(甲基(8-氟-2-异丙基-6-(哌嗪-1-基)喹啉-4-基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈21j
将化合物21i(100mg，0.16mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，反应液在室温下搅拌2小时。反应液减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)，用二氯甲烷萃取(20mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到标题产物21j(82mg，产率：97.8％)。
MS m/z(ESI):505.0[M+1]。
第八步
(1-(2-(4-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-8-氟-2-异丙基喹啉-6-基)哌嗪-1-基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯21k
将化合物21j(30mg，0.059mmol)，化合物21b(23mg，0.092mmol)，碳酸钾(25mg，0.18mmol)，加入到5mL乙腈中，80℃，搅拌反应3小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物21k(10mg，产率：23.4％)。
MS m/z(ESI):717.3[M+1]。
第九步
2-((6-(4-(2-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)-8-氟-2-异丙基喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈21
将化合物21g(10mg，0.02mmol)加入到10mL 4M氯化氢的1,4二氧六环溶液中，搅拌反应3小时，减压浓缩后加入二氯甲烷(10mL)稀释，用饱和碳酸氢钠溶液(20mL)洗涤，分出有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物21(7mg，产率：81.3％)。
MS m/z(ESI):617.2[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.11-8.09(m,2H),7.40(s,1H),7.16-7.14(m,3H),6.53(s,1H),3.77-3.71(m,7H),3.32-3.28(m,5H),3.10-3.12(m,3H),2.69-2.62(m,4H),1.39(s,6H)。
实施例22
2-((2-环丙基-8-氟-6-(4-(2-(7-羟基-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈22
Figure BDA0003009408220000541
采用实施例2的合成路线，将原料化合物(R)-吡咯烷-3-醇替换为原料化合物2-氮杂螺[3.5]壬-7-醇盐酸盐(毕得医药)，制得标题化合物22(18mg)。
MS m/z(ESI):684.2[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.15-8.12(m,2H),7.19-7.14(m,4H),6.65(s,1H),3.93-3.87(m,4H),3.77-3.69(m,7H),3.48-3.32(m,4H),3.32-3.20(m,2H),2.99-2.90(m,2H),2.24-2.22(m,1H),1.98-1.81(m,4H),1.61-1.50(m,4H),1.33-1.29(m,4H)。
实施例23
2-(乙基(8-氟-6-(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)-2-异丙基喹啉-4-基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈23
Figure BDA0003009408220000542
第一步
2-(乙基氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈23a
将化合物1i(10g，33.5mmol)溶于2M乙胺的四氢呋喃溶液(50mL)，封管，加热至80℃，搅拌反应10小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物23a(7g，产率：84％)。
MS m/z(ESI):248.1[M+1]。
第二步
2-((6-溴-8-氟-2-异丙基喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈23b
将化合物23a(300mg，1.01mmol)溶于四氢呋喃(8mL)中，加入氢化钠(160mg，4.0mmol，纯度60％)，将反应液加热到90℃搅拌30分钟。反应液冷却到室温后加入化合物21f(361mg,1.46mmol)，随后将反应液再次加热至90℃，搅拌过夜。冷却反应液，加入饱和氯化铵溶液，用乙酸乙酯萃取(100mL×2)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物23b(400mg，产率：79％)。MS m/z(ESI):513.0[M+1]。
第三步
4-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟-2-异丙基喹啉-6-基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯23c
将化合物23b(100mg,0.19mmol)和1-叔丁氧羰基哌嗪(55mg,0.3mmol)溶于甲苯(10mL)中，加入叔丁醇钠(38mg，0.4mmol)，氩气置换3次。加入三(二亚苄基丙酮)二钯(18mg，0.02mmol)和1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(19mg，0.04mmol)，氩气置换3次。将反应液加热至110℃，氩气保护下搅拌12小时。冷却反应液，加入水(40mL)，乙酸乙酯(30mL×2)萃取。合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物23c(100mg，产率：82.9％)。
MS m/z(ESI):619.2[M+1]。
第四步
2-(乙基(8-氟-2-异丙基-6-(哌嗪-1-基)喹啉-4-基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈23d
将化合物23c(100mg，0.16mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，反应液在室温下搅拌2小时。反应液减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)，用二氯甲烷萃取(20mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到标题产物23d(82mg，产率：97.8％)。
MS m/z(ESI):519.0[M+1]。
第五步
2-(乙基(8-氟-6-(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)-2-异丙基喹啉-4-基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈23
将化合物23(60mg，0.11mmol)和碳酸钾(95mg，0.69mmol)溶于乙腈(4mL)中，加入2-溴乙醇(72mg，0.58mmol)，将反应液加热至80℃，搅拌过夜。反应液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物23(35mg，产率：53.7％)。
MS m/z(ESI):562.5[M+1]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.07-8.03(m,2H),7.78(s,1H),7.63-7.58(m,1H),7.44-7.40(m,2H),6.72-6.71(m,1H),4.46-4.40(m,1H),4.30-4.05(m,3H),3.53-3.49(m,2H),3.28-3.23(m,4H),2.58-2.54(m,4H),2.44-2.42(m,2H),1.34-1.32(m,6H),1.29-1.23(m,3H)。
实施例24
2-(乙基(8-氟-6-(4-((2-羟乙基)磺酰基)哌嗪-1-基)-2-异丙基喹啉-4-基)氨基)-4-(-氟苯基)噻唑-5-甲腈24
Figure BDA0003009408220000561
第一步
2-((4-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟-2-异丙基喹啉-6-基)哌嗪-1-基)磺酰基)乙酸甲酯24b
将化合物23d(84mg，0.14mmol)和三乙胺(166mg,1.64mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，0℃下加入2-(氯磺酰基)乙酸甲酯24a(35mg,0.2mmol)，室温下搅拌16小时。向反应液中加入水(20mL)，用乙酸乙酯萃取(20mL×2)。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物24b(67mg，产率：75％)。
MS m/z(ESI):655.3[M+1]。
第二步
2-(乙基(8-氟-6-(4-((2-羟乙基)磺酰基)哌嗪-1-基)-2-异丙基喹啉-4-基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈24
将化合物24b(60mg，0.09mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，加入硼氢化锂(20mg，0.92mmol)，反应在室温下搅拌2小时。向反应液中加入冰水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(20mL×2)。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物24(25mg，产率：43％)。
MS m/z(ESI):627.2[M+1]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.09-8.02(m,2H),7.82(s,1H),7.65(d,1H),7.42(t,2H),6.80(s,1H),5.05(s,1H),4.50-3.90(br,2H),3.78-3.72(m,2H),3.35-3.27(m,8H),3.25-3.20(m,3H),1.33(d,6H),1.27(t,3H)。
实施例25
2-(乙基(8-氟-2-异丙基-6-(((1S,4S)-5-(甲基磺酰基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-基)喹啉-4-基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈25
Figure BDA0003009408220000571
Figure BDA0003009408220000581
第一步
(1S,4S)-5-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟-2-异丙基喹啉-6-基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸叔丁酯25b
将(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸叔丁酯25a(34mg,0.17mmol)和化合物23f(60mg,0.12mmol)溶于甲苯(5mL)中，加入叔丁醇钠(33mg，0.34mmol)，氩气置换3次。加入三(二亚苄基丙酮)二钯(10mg，0.01mmol)和2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(11mg，0.02mmol)，氩气置换3次。将反应液加热至110℃，氩气保护下搅拌3小时。冷却反应液，加入水(20mL)，二氯甲烷(30mL×2)萃取。合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物25b(68mg，产率：92.2％)。MS m/z(ESI):631.2[M+1]。
第二步
2-((6-((1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-基)-8-氟-2-异丙基喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈25c
将化合物25b(90mg，0.14mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(5mL)，反应液在室温下搅拌1小时。反应液减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)，用二氯甲烷萃取(20mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到标题产物25c(75mg，产率：99.0％)。
MS m/z(ESI):531.1[M+1]。
第三步
2-(乙基(8-氟-2-异丙基-6-(((1S,4S)-5-(甲基磺酰基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-基)喹啉-4-基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈25
将化合物25c(75mg,0.14mmol)溶于5mL四氢呋喃，加入N,N-二异丙基乙胺(55mg，0.43mmol)，室温下缓慢滴加甲烷磺酰氯(33mg，0.29mmol)，室温搅拌30分钟。向反应液中加入水(20mL)，用乙酸乙酯萃取(30mL×2)。合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物25(51mg，产率：59.3％)。MS m/z(ESI):609.1[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.16-8.13(m,2H),7.34(s,1H),7.19-7.15(m,2H),6.95-6.92(m,1H),6.23(s,1H),4.60-4.54(m,2H),3.63-3.61(m,1H),3.49-3.43(m,2H),3.40-3.34(m,1H),3.32-3.26(m,1H),2.87(s,3H),2.14-2.11(m,1H),2.02-1.99(m,1H),1.64-1.60(m,2H),1.40-1.35(m,9H)。
实施例26
2-((6-(4-(2-(7,7-二氧化-7-硫代-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)-8-氟-2-异丙基喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈26
Figure BDA0003009408220000591
第一步
2-氯-1-(7,7-二氧化-7-硫代-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙酮26b
将化合物26a(100mg,0.57mmol)和三乙胺(231mg，2.28mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，0℃下加入化合物1b(77mg,0.68mmol)，室温下搅拌2小时。向反应液中加入水(20mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(20mL×2)。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到标题产物26b(140mg，产率：97.5％)。MS m/z(ESI):252.1[M+1]。
第二步
2-((6-(4-(2-(7,7-二氧化-7-硫代-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)-8-氟-2-异丙基喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈26
将化合物23d(30mg，0.06mmol)和碳酸钾(24mg，0.17mmol)溶于乙腈(10mL)中，加入化合物26b(15mg，0.06mmol)，将反应液加热至80℃，搅拌过夜。反应液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物26(20mg，产率：47.1％)。
MS m/z(ESI):734.2[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.17-8.13(m,2H),7.36(s,1H),7.27-7.16(m,3H),6.69(s,1H),4.40-4.01(m,4H),3.86-3.82(m,2H),3.36-3.30(m,5H),3.13-3.11(m,2H),3.04-2.98(m,4H),2.71-2.68(m,4H),2.36-2.26(m,4H),1.42-1.35(m,9H)。
实施例27
N-(1-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟-2-异丙基喹啉-6-基)氮杂环丁烷-3-基)-2-羟基乙烷磺酰胺27
Figure BDA0003009408220000601
第一步
(1-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟-2-异丙基喹啉-6-基)氮杂环丁烷-3-基)氨甲酸叔丁酯27b
将化合物23b(60mg,0.12mmol)和化合物21a(41mg,0.24mmol)溶于甲苯(10mL)中，加入叔丁醇钠(34mg，0.35mmol)，氩气置换3次。加入三(二亚苄基丙酮)二钯(11mg，0.01mmol)和2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(12mg，0.02mmol)，氩气置换3次。将反应液加热至110℃，氩气保护下搅拌12小时。冷却反应液，减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物27b(25mg，产率：25.4％)。
MS m/z(ESI):605.1[M+1]。
第二步
2-((6-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-8-氟-2-异丙基喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈27c
将化合物27b(60mg，0.1mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(5mL)，反应液在室温下搅拌1小时。反应液减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)，用二氯甲烷萃取(20mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到标题产物27c(50mg，产率：99.8％)。
MS m/z(ESI):505.1[M+1]。
第三步
2-(N-(1-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟-2-异丙基喹啉-6-基)氮杂环丁烷-3-基)氨基磺酰基)乙酸甲酯27d
将化合物27c(117mg,0.23mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)中，0℃下依次加入三乙胺(282mg,2.78mmol)和化合物24a(60mg,0.35mmol)，室温下搅拌3小时。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液(15mL)，用乙酸乙酯萃取(30mL×3)。合并有机相，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物27d(68mg，产率：46％)。
MS m/z(ESI):641.3[M+1]。
第四步
N-(1-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟-2-异丙基喹啉-6-基)氮杂环丁烷-3-基)-2-羟基乙烷-1-磺酰胺27
室温下将化合物27d(68mg,0.11mmol)溶解于无水四氢呋喃(10mL)中，加入硼氢化锂(23.12mg,1.06mmol)，室温搅拌2小时。向反应液中加入冰水(20mL)淬灭，乙酸乙酯萃取(30mL×3)。合并有机相，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物27(38mg，产率：59％)。
MS m/z(ESI):613.3[M+1]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.06(m,2H),7.84(m,1H),7.77(s,1H),7.42(m,2H),7.05(m,1H),6.26(m,1H),4.94(m,1H),4.50-3.90(m,5H),3.78-3.70(m,4H),3.24-3.15(m,3H),1.32(m,6H),1.26(m,3H)。
实施例28-1 28-2
(R)-2-(乙基(8-氟-6-(4-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代乙基)-2-(羟甲基)哌嗪-1-基)-2-异丙基喹啉-4-基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈28-1
(S)-2-(乙基(8-氟-6-(4-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代乙基)-2-(羟甲基)哌嗪-1-基)-2-异丙基喹啉-4-基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈28-2
Figure BDA0003009408220000621
第一步
1-(叔丁基)3-甲基(S)-4-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟-2-异丙基喹啉-6-基)哌嗪-1,3-二羧酸酯28b
将化合物23b(100mg,0.19mmol)溶于甲苯(8mL)中，加入(S)-1-叔丁基3-甲基哌嗪-1,3-二羧酸酯28a(62mg,0.25mmol)，置换氩气3次，加入碳酸铯(190mg,0.58mmol)。置换氩气3次，加入甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(24mg,0.03mmol)，置换氩气3次，将反应液加热至110℃，氩气保护下搅拌16小时。冷却反应液，加入饱和氯化钠水溶液(50mL)，用乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，有机相经饱和氯化钠水溶液(50mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物28b(88mg，产率：66％)。
MS m/z(ESI):677.7[M+1]。
第二步
(S)-1-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟-2-异丙基喹啉-6-基)哌嗪-2-羧酸甲酯三氟乙酸盐28c
将化合物28b(177mg,0.26mmol)溶解于二氯甲烷(6mL)中，0℃下加入三氟乙酸(2mL)，反应液在40℃搅拌4小时。减压浓缩得到标题产物28c(粗品185mg)。
第三步
(S)-1-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟-2-异丙基喹啉-6-基)-4-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代乙基)哌嗪-2-羧酸甲酯28e
将化合物28c(184mg,0.26mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，加入碳酸钾(882mg,6.38mmol)，搅拌10分钟后加入2-氯-1-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)乙酮28d(72mg,0.48mmol,采用公知的方法”J.Med.Chem.2017,60,3580-3590”制备而得)，反应液在40℃搅拌4小时。反应液冷却至室温，向反应液中加入水(30mL)，用乙酸乙酯萃取(50mL×2)。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物28e(170mg，ee＝51％，产率：77％)。
MS m/z(ESI):690.2[M+1]。
第四步
2-(乙基(8-氟-6-(4-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代乙基)-2-(羟甲基)哌嗪-1-基)-2-异丙基喹啉-4-基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈28
将化合物28e(95mg,0.14mmol)溶解于无水四氢呋喃(6mL)中，室温下加入硼氢化锂(6mg,0.27mmol)，反应液在室温下搅拌3小时。向反应液中加入冰水(30mL)淬灭，乙酸乙酯萃取(30mL×3)。合并有机相，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物28(72mg，产率：75.7％)。
MS m/z(ESI):662.4[M+1]。
第五步
(R)-2-(乙基(8-氟-6-(4-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代乙基)-2-(羟甲基)哌嗪-1-基)-2-异丙基喹啉-4-基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈28-1
(S)-2-(乙基(8-氟-6-(4-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代乙基)-2-(羟甲基)哌嗪-1-基)-2-异丙基喹啉-4-基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈28-2
将化合物28(130mg,0.2mmol)进行超临界流体色谱手性拆分(分离条件：手性制备柱:Daicel CHIRALPAK IC；柱型号:250*25mm 10μm；进样量:2毫升；流动相:超临界二氧化碳:乙醇＝55:45；流速:70g/min；波长:紫外214nm；温度:25℃；仪器型号：Waters SFC 80)，收集其相应组分，减压浓缩，得到标题化合物28-1(22mg)和化合物28-2(3mg)。
实施例28-1：
MS m/z(ESI):662.2[M+1]。
手性HPLC分析：保留时间2.807分钟，手性纯度：100％
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.05(dd,2H),7.74(s,1H),7.56(d,1H),7.41(t,2H),6.64(s,1H),5.66(dd,1H),4.61(t,1H),4.41-4.34(m,2H),4.05-3.91(m,4H),3.72-3.65(m,1H),3.58-3.55(s,1H),3.50-3.44(m,1H),3.37-3.33(m,2H),3.30-3.19(m,1H),3.07-2.98(m,3H),2.92-2.85(m,2H),2.34-2.14(m,2H),1.32(d,6H),1.28(t,3H)。
实施例28-2：
MS m/z(ESI):662.3[M+1]。
手性HPLC分析：保留时间3.797分钟，手性纯度：89％
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.05(dd,2H),7.74(s,1H),7.56(d,1H),7.41(t,2H),6.64(s,1H),5.67(d,1H),4.61(t,1H),4.41-4.34(m,2H),4.05-3.91(m,4H),3.72-3.65(m,1H),3.58-3.55(s,1H),3.50-3.44(m,1H),3.37-3.33(m,2H),3.30-3.19(m,1H),3.07-2.98(m,3H),2.92-2.85(m,2H),2.34-2.14(m,2H),1.32(d,6H),1.28(t,3H)。
实施例29
N-(1-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟-2-(2-羟基丙烷-2-基)喹啉-6-基)氮杂环丁烷-3-基)甲磺酰胺29
Figure BDA0003009408220000641
Figure BDA0003009408220000651
第一步
6-溴-8-氟-2-甲基喹啉-4-酚29b
将化合物21c(30g，157.88mmol，安耐吉)，乙酰乙酸乙酯(41g，315.04mmol，毕得)以及多聚磷酸(300g)依次加入到反应瓶中，反应逐渐升温至130℃，搅拌过夜。冷却反应液，用冰水(1L)稀释，缓慢滴加饱和氢氧化钠溶液调节pH约为8。悬浊液过滤，将所得滤饼分散在乙醚(1L)中，搅拌30分钟，过滤，滤饼干燥，得到标题化合物29b(22g，收率：54％)。
MS m/z(ESI):256.0[M+1]。
第二步
6-溴-4-氯-8-氟-2-甲基喹啉29c
将化合物29b(22g，85.91mmol)分散在三氯氧磷(300mL)中，反应体系逐渐升温至80℃，搅拌16小时。反应液减压浓缩除去大部分的三氯氧磷。向所得油状物中缓慢滴加饱和碳酸氢钠溶液调节pH约为7，过滤，得到标题产物29c(20g，产率：84％)。
MS m/z(ESI):274.1[M+1]。
第三步
6-溴-N-乙基-8-氟-2-甲基喹啉-4-胺29d
将化合物29c(6g，21.86mmol)，乙胺水溶液(120mL，65wt％)和无水乙醇(20mL)加入到闷罐反应器中，密封后加热至100℃搅拌16小时。冷却反应液，加入饱和碳酸氢钠溶液(120mL)，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物29d(2g，产率：32％)。
MS m/z(ESI):283.2[M+1]。
第四步
2-((6-溴-8-氟-2-甲基喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈29e
氩气保护下，将化合物29d(1g，3.53mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)，冰水浴下加入氢化钠(183mg，4.58mmol，纯度60％)，反应在室温下搅拌30分钟。冰水浴下加入化合物1f(1.26g,5.3mmol)，反应液在室温下搅拌2小时。冰水浴下，将反应液加入到饱和的氯化铵溶液中，用乙酸乙酯萃取(80mL×2)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(150mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物29e(900mg，产率：43％)。
MS m/z(ESI):485.1[M+1]。
第五步
6-溴-4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟喹啉-2-羧酸29f
将化合物29e(400mg，0.83mmol)溶于吡啶(10mL)，室温下向反应液中加入二氧化硒(318mg，2.89mmol)，加毕，反应升温至90℃，搅拌6小时。冷却反应液，过滤，滤饼用二氯甲烷洗涤，合并滤液，减压浓缩，得到粗产物29f(450mg)。MS m/z(ESI):515.2[M+1]。
第六步
6-溴-4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟喹啉-2-羧酸甲酯29g
将化合物29f(粗品，450mg，0.87mmol)溶于甲醇(10mL)，冰水浴下滴加氯化亚砜(1mL)。滴毕，反应加热至89℃，搅拌3小时。减压浓缩，所得残余物用乙酸乙酯溶解，缓慢加入饱和碳酸钠溶液调节pH至8左右。静置分层，有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物29g(200mg，产率：34％)。MS m/z(ESI):528.8[M+1]。
第七步
6-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)氮杂环丁烷-1-基)-4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟喹啉-2-羧酸甲酯29h
将化合物29g(160mg,0.3mmol)和氮杂环丁烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(67mg,3.9mmol)溶解于甲苯(10mL)中，氩气置换，再依次加入碳酸铯(197mg,0.6mmol，韶远)，三(二亚苄基丙酮)二钯(100mg,0.01mmol)和(±)-2,2'-双-(二苯膦基)-1,1'-联萘(10mg,0.015mmol,恒森博源)，置换氩气3次，反应液在80℃搅拌4小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物29h(210mg，产率：113％)。
MS m/z(ESI):621.2[M+1]。
第八步
6-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟喹啉-2-羧酸甲酯三氟乙酸盐29i
将化合物29h(粗品，210mg，0.3mmol)溶解于二氯甲烷(3mL)中，室温下加入三氟乙酸(1mL)，反应液在35℃下搅拌2小时。反应液减压浓缩得到标题化合物29i(180mg,产率：95％)。
MS m/z(ESI):521.1[M+1]。
第九步
4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟-6-(3-(甲基磺酰胺基)氮杂环丁烷-1-基)喹啉-2-羧酸甲酯29j
将化合物29i(180mg，0.19mmol)和甲烷磺酰氯(41mg，0.28mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，室温下加入三乙胺(191mg，1.9mmol)。反应液在40℃下搅拌2小时。冷却反应液，加入水(20mL)，用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物29j(7mg，产率：6％)。MS m/z(ESI):599.1[M+1]。
第十步
N-(1-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟-2-(2-羟基丙烷-2-基)喹啉-6-基)氮杂环丁烷-3-基)甲磺酰胺29
将化合物29j(42mg，0.07mmol)溶于干燥四氢呋喃(5mL)中，氩气置换，-70℃下加入甲基溴化镁(1.0M四氢呋喃溶液,0.7mL,0.7mmol,泰坦)，反应液在室温下搅拌2小时。加入冰水(15mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(30mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物29(13mg，产率：31％)。MS m/z(ESI):599.0[M+1]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.16(dd,2H),7.96(s,1H),7.84(d,1H),7.42(t,2H),7.07(dd,1H),6.28(d,1H),5.45(s,1H),4.46-3.94(m,5H),3.76(dd,2H),2.92(s,3H),1.54(s,6H),1.28(t,3H)。
实施例30
N-(1-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟-2-(2-羟乙基)喹啉-6-基)氮杂环丁烷-3-基)甲磺酰胺30
Figure BDA0003009408220000681
第一步
2-(6-溴-4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟喹啉-2-基)乙酸甲酯30a
将化合物29e(1.6g，3.21mmol)溶于四氢呋喃(25.7mL)中，氩气置换，在-40℃下缓慢滴加六甲基二硅基胺基锂(LiHMDS)的四氢呋喃溶液(1M,9.6mL,9.6mmol)，在-40℃下搅拌2小时，加入碳酸二甲酯(867mg，9.63mmol)，反应液缓慢升至室温继续搅拌16小时。加入水(30mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(30mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物30a(870mg，产率：50％)。
MS m/z(ESI):543.0[M+1]。
第二步
2-(6-(3-((叔丁氧羰基)氨基)氮杂环丁烷-1-基)-4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟喹啉-2-基)乙酸甲酯30b
将化合物30a(300mg，0.55mmol)和氮杂环丁烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(191mg，1.1mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(51mg,0.06mmol)，1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(69mg,0.11mmol)和碳酸铯(540mg,1.7mmol)，加入到二氧六环(10mL)中，氩气保护下，80℃，搅拌反应3.5小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物30b(230mg，产率：65.6％)。MS m/z(ESI):635.1[M+1]。
第三步
2-(6-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟喹啉-2-基)乙酸甲酯30c
将化合物30b(230mg,0.36mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，随后加入三氟乙酸(5mL)，搅拌反应0.5小时。反应液减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)，用二氯甲烷萃取(20mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗产品标题产物30c(193mg，产率：99.6％)。
MS m/z(ESI):535.1[M+1]。
第四步
2-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟-6-(3-(甲基磺酰氨基)氮杂环丁烷-1-基)喹啉-2-基)乙酸甲酯30d
将化合物30c(193mg，0.36mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，加入三乙胺(110mg，1.09mmol)，室温下缓慢加入甲烷磺酰氯(63mg，0.55mmol)，反应在室温下搅拌5分钟。反应液加入乙酸乙酯(50mL)，用饱和氯化钠溶液洗涤(20mL×2)，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物30d(150mg，产率：67.8％)。
MS m/z(ESI):613.0[M+1]。
第五步
N-(1-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟-2-(2-羟乙基)喹啉-6-基)氮杂环丁烷-3-基)甲磺酰胺30
将化合物30d(120mg，0.2mmol)溶于四氢呋喃(5mL)中，室温下加入硼氢化锂(30mg,1.38mmol)，反应液在室温下搅拌过夜。加入水(15mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(30mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物30(68mg，产率：34.9％)。
MS m/z(ESI):585.0[M+1]。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.14-8.11(m,2H),7.26(s,1H),7.17-7.13(m,2H),6.71-6.68(m,1H),6.19-6.16(m,1H),5.42-5.30(m,1H),4.46-4.43(m,1H),4.39-4.37(m,1H),4.34-4.31(m,2H),4.17-4.14(m,2H),3.83-3.81(m,2H),3.20-3.17(m,2H),2.99(s,3H),1.35-1.32(m,3H)。
实施例31
2-((6-(4-(2-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)乙酰基)哌嗪-1-基)-8-氟-2-异丙基喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈31
Figure BDA0003009408220000701
第一步
2-(4-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-8-氟-2-异丙基喹啉-6-基)哌嗪-1-基)乙酸乙酯31a
室温下将化合物21j(232mg，0.45mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(10mL，国药)中，加入碳酸钾(1.24g，9mmol，国药)和溴乙酸乙酯(75mg，0.45mmol，国药)后室温搅拌过夜。LCMS检测反应完全。反应液加水后乙酸乙酯萃取(40mL×2)。合并后的有机相经饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物31a(203mg，产率：77％)。
MS m/z(ESI):591.2[M+1]。
第二步
2-(4-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-8-氟-2-异丙基喹啉-6-基)哌嗪-1-基)乙酸31b
室温下将化合物31a(203mg，0.34mmol)溶解于四氢呋喃(3mL，国药)和水(1.5mL，屈臣氏)中，加入氢氧化锂一水合物(164mg，4mmol，国药)后室温搅拌过夜。LCMS检测反应完全。反应液加水稀释后加入稀盐酸调节pH至约5，乙酸乙酯萃取(40mL×2)。合并后的有机相经饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩，得到粗产品31b(178mg，产率：85％)。
MS m/z(ESI):563.2[M+1]。
第三步
2-((6-(4-(2-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)乙酰基)哌嗪-1-基)-8-氟-2-异丙基喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈31
将化合物31b(80mg，0.142mmol)和7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬烷盐酸盐(35mg，0.21mmol，毕得医药)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(3mL，国药)中，冰浴条件下加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU，80mg，0.21mmol，泰坦)和N,N-二异丙基乙胺(100mg，0.77mmol，苏州昊帆生物股份有限公司)。反应液在室温下搅拌过夜。LCMS显示反应完全。向反应液加入乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)，分离后的有机相经饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物31(50mg，收率：52％)。
MS m/z(ESI):672.6[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.14(dd,2H),7.41(s,1H),7.25(s,1H),7.17(t,2H),6.67(d,1H),3.93(s,2H),3.78(s,2H),3.71(s,3H),3.62-3.56(m,4H),3.35-3.27(m,5H),3.16(brs,2H),2.80(m,4H),1.77(t,4H),1.40(d,6H)。
实施例32
2-((8-氟-2-异丙基-6-(4-(2-氧-2-(1,4,6,7-四氢-5H-[1,2,3]三唑[4,5-c]吡啶-5-基)乙基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈32
Figure BDA0003009408220000711
采用实施例31的合成路线，将原料化合物7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬烷盐酸盐替换为化合物4,5,6,7-四氢-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶盐酸盐(90mg，0.56mmol，采用专利申请”WO 2018212534A1,第53页中间体im-7公开方法”制备而得)，制得标题化合物32(21mg)。
MS m/z(ESI):669.6[M+1]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.6(br,1H),8.04(s,2H),7.82(s,1H),7.62-7.58(m,1H),7.43-7.39(m,2H),6.74-6.72(m,1H),4.8(s,1H),4.63(s,1H),3.83-3.78(m,2H),3.07(s,3H),3.25-3.16(m,4H),2.85-2.82(m,2H),2.69-2.56(m,1H),2.53(m,6H),1.32(d,6H)。
实施例33
2-(乙基(8-氟-6-(4-(2-羟基乙酰基)哌嗪-1-基)-2-异丙基喹啉-4-基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈33
Figure BDA0003009408220000721
第一步
2-(乙基(8-氟-6-(4-(2-羟基乙酰基)哌嗪-1-基)-2-异丙基喹啉-4-基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈33
将化合物23d(35mg，0.067mmol)和羟基乙酸(6mg，0.079mmol，毕得医药)溶解于二氯甲烷(5.0mL，国药)中。冰浴条件下，将2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU，39mg，0.1mmol，泰坦)和N,N-二异丙基乙胺(DIPEA，0.1mL，苏州昊帆生物)依次加入。反应液在室温条件下搅拌2小时。LCMS显示原料反应完全。向反应液中加入水(50mL)和乙酸乙酯(50mL)，分离后的有机相经饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩，经硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化得到标题产物33(20mg，收率:51.4％)。
MS m/z(ESI):577.1[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.16-8.13(m,2H),7.38(s,1H),7.20-7.15(m,3H),6.73(s,1H),4.22-4.20(m,2H),3.85-3.83(m,2H),3.78-3.76(m,1H),3.65-3.64(m,1H),3.47-3.46(m,1H),3.33-3.32(m,2H),3.31-3.27(m,4H),1.42-1.37(m,9H)。
实施例34
2-((2-环丙基-8-氟-6-((1-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代乙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈34
Figure BDA0003009408220000722
Figure BDA0003009408220000731
第一步
3-((4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-环丙基-8-氟喹啉-6-基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯34a
室温下将化合物11b(75mg，0.15mmol)溶于甲苯(5mL，国药)中，加入3-氨基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(31mg，0.18mmol，毕得)和叔丁醇钠(23mg，0.24mmol，TCI)后氩气置换3次。加入三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3,4mg，0.0045mmol，冶金研究院)和1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(BINAP,4mg，0.0075mmol)后氩气置换3次。将反应液加热到80℃并且氩气保护下搅拌4小时。LCMS检测反应完全。冷却后的反应液加水(20mL)后乙酸乙酯萃取(20mL×2)。合并后的有机相经无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物34a(60mg，产率：67％)。
MS m/z(ESI):589.2[M+1]。
第二步
2-((6-(氮杂环丁烷-3-基氨基)-2-环丙基-8-氟喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈34b
室温下将化合物34a(60mg，0.1mmol)溶解于二氯甲烷(3mL，国药)中，加入三氟乙酸(1mL，泰坦)后将反应液加热到35℃搅拌2小时。反应液减压浓缩后加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，二氯甲烷萃取(15mL×2)，干燥过滤减压浓缩，得到标题产物34b(49mg，产率：92％))。
MS m/z(ESI):489.2[M+1]。
第三步
2-((2-环丙基-8-氟-6-((1-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代乙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈34
室温下将化合物34b(49mg，0.1mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(5mL，国药)中，加入碳酸钾(414mg，3mmol，润捷)和化合物28d(27mg，0.18mmol)后将反应液加热到45℃搅拌3小时。冷却后的反应液加水后乙酸乙酯萃取。合并后的有机相经饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物34(23mg，产率：38％)。MS m/z(ESI):602.5[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.10(dd,2H),7.17-7.11(m,3H),6.87(d,1H),6.20(s,1H),5.22(s,1H),4.60(s,1H),4.31-4.15(m,3H),4.04-4.00(m,3H),3.85(d,1H),3.65(s,3H),3.51-3.41(m,4H),2.22-2.18(m,2H),1.12-1.09(m,4H)。
实施例35
2-((2-环丙基-6-(4-(2-(6,7-二氢-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-5(4H)-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)-8-氟喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈35
Figure BDA0003009408220000741
采用实施例12的合成路线，将原料化合物7,7-二氧代-7-硫杂-2-氮杂螺[3.5]壬烷盐酸盐替换为化合物4,5,6,7-四氢-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶盐酸盐(90mg，0.56mmol，采用专利申请”WO 2018212534A1，第53页中间体im-7公开方法”制备而得)，制得标题化合物35(14mg)。
MS m/z(ESI):680.8[M+1]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.5(br,1H),8.05-8.03(m,2H),7.72(s,1H),7.58-7.55(m,1H),7.43-7.39(m,2H),6.69-6.67(m,1H),4.79(s,1H),4.62(s,1H),3.83-3.75(m,2H),3.12-3.09(m,6H),2.85-2.82(m,4H),2.69-2.59(m,1H),2.24-2.20(m,2H),2.03-1.98(m,2H),1.32(t,3H)1.14-1.09(m,4H)。
实施例36
2-((6-(4-(2-(6-(6-氨基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)-2-环丙基喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈36
Figure BDA0003009408220000742
Figure BDA0003009408220000751
第一步
(2-(2-氯乙酰基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基甲酸叔丁酯36j
将化合物2-氮杂螺[3.3]庚烷-6基)氨基甲酸叔丁酯36i(80mg，0.38mmol,南京药石)，三乙胺(76mg，0.75mmol)加入到10mL二氯甲烷中，控温0-5℃，滴加氯乙酰氯(43mg，0.38mmol)，滴毕，升至室温，搅拌反应2小时。加入水和二氯甲烷各20mL萃取，分出有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到标题产物36j(100mg，产率：91.9％)。
MS m/z(ESI):289.1[M+1]。
第二步
6-溴-2-环丙基喹啉-4-醇36b
将化合物36a(28g，179.28mmol，上海隆盛化工)，4-溴苯胺(30g，174.40mmol,毕得)和多聚磷酸(100mL，国药)的混合物加热至110℃搅拌2小时。冷却反应液，加冰水(500mL)稀释，用饱和氢氧化钠水溶液调节pH至7左右，用二氯甲烷/甲醇(10/1，v/v，1L×5)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(500mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物36b(800mg，产率：1.74％)。
MS m/z(ESI):266.3[M+1]。
第三步
6-溴-4-氯-2-环丙基喹啉36c
将化合物36b(800mg，3.03mmol)的三氯氧磷(10mL，国药)悬浊液加热至80℃，反应液搅拌4小时。反应液冷却，减压浓缩除去大部分三氯氧磷，所得残留物溶解在二氯甲烷(100mL)中，饱和碳酸氢钠水溶液(25mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物36c(800mg，产率：93％)。
MS m/z(ESI):284.0[M+1]。
第四步
6-溴-2-环丙基-N-乙基喹啉-4-胺36d
将化合物36c(900mg，3.19mmol)，乙胺水溶液(65wt％)(5mL，国药)和无水乙醇(4mL，国药)加入到闷罐反应器中，密封后加热至140℃搅拌过夜。反应液冷却至室温，加二氯甲烷/甲醇(10/1，v/v，100mL)稀释，饱和氯化钠溶液(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物36d(898mg，产率：97％)。
MS m/z(ESI):291.3[M+1]。
第五步
2-((6-溴-2-环丙基喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈36e
将化合物36d(1.7g，5.84mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL，国药)中，氩气置换，冷却至0℃后加入氢化钠(700mg，17.50mmol，60％purity，TCI)，反应液在室温下搅拌30分钟，冷却至0℃，加入化合物1i(1.7g，7.12mmol)，反应在室温下搅拌2小时。反应液冷却至0℃后加饱和氯化铵水溶液(50mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(100mL×2)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物36e(2.8g，产率：97％)
MS m/z(ESI):493.1[M+1]。
第六步
4-(4-(((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-2-环丙基喹啉-6-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯36f
将化合物36e(200mg，0.41mmol)，1-叔丁氧羰基哌嗪(115mg，0.62mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(38mg，0.04mmol)，2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(39mg，0.08mmol)和叔丁醇钠(80mg，0.83mmol)，加入到10mL甲苯中，氩气保护下，110℃，搅拌反应4小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物36f(220mg，产率：90.6％)。MS m/z(ESI):599.2[M+1]。
第七步
2-((2-环丙基-6-(哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈36g
将化合物36f(220mg，0.37mmol)溶于氯化氢的二氧六环溶液(4M，10mL)中，室温搅拌反应2小时。反应液减压浓缩得到粗产品标题产物36g(180mg，产率：98.2％)。
MS m/z(ESI):499.1[M+1]。
第八步
(2-(2-(4-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-2-环丙基喹啉-6-基)哌嗪-1-基)乙酰基)-2-氮杂螺[3.3]庚基-6-基)氨基甲酸叔丁酯36h
将化合物36g(40mg，0.08mmol)，化合物36j(35mg，0.12mmol)和碳酸钾(34mg，0.25mmol)加入到乙腈(20mL)中，80℃搅拌反应16小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物36h(15mg，产率：24.9％)。
MS m/z(ESI):751.3[M+1]。
第九步
2-((6-(4-(2-(6-(6-氨基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)-2-环丙基喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈36
将化合物36h(15mg，0.02mmol)溶于氯化氢的二氧六环溶液(4M，10mL)中，室温搅拌反应2小时。反应液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物36(10mg，产率：76.9％)。
MS m/z(ESI):651.2[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.08-7.95(m,2H),7.92-7.88(m,1H),7.52-7.40(m,1H),7.15-7.10(m,3H),6.96-6.85(m,1H),4.19-3.88(m,6H),3.68-3.52(m,2H),3.40-3.28(m,4H),3.15-3.05(m,1H),2.76-2.67(m,4H),2.59-2.49(m,4H),2.18-2.03(m,1H),1.38-1.30(m,3H),1.28-1.25(m,4H)。
实施例37-1 37-2
(R)-2-((2-环丙基-6-(2-(羟甲基)-4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈(单一构型化合物)37-1
(S)-2-((2-环丙基-6-(2-(羟甲基)-4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈(单一构型化合物)37-2
Figure BDA0003009408220000771
Figure BDA0003009408220000781
第一步
(S)-4-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-2-环丙基喹啉-6-基)哌嗪-1,3-二羧酸-1-叔丁酯-3-甲酯37a
将化合物36e(150mg，0.30mmol)和化合物28a(97mg，0.40mmol，毕得)溶于甲苯(6mL，国药)中，氩气置换，然后依次加入碳酸铯(297mg，0.912mmol,东鹏新材料)和RuPhos-Pd-G3(CAS:1445085-77-7，38mg，0.05mmol,格林凯默)，置换六次氩气，100℃搅拌反应16小时。反应液冷却至室温，反应液过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物37a(120mg，产率：70％)。
MS m/z(ESI):657.4[M+1]。
第二步
(S)-1-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-2-环丙基喹啉-6-基)哌嗪-2-羧酸甲酯37b
将化合物37a(120mg，0.18mmol)溶解于二氯甲烷(3mL)中，室温下加入三氟乙酸(1mL，泰坦)，35℃搅拌反应2小时。反应液减压浓缩得到粗品标题产物37b(122mg，三氟乙酸盐，产率：99％)。
MS m/z(ESI):557.4[M+1]。
第三步
(S)-1-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-2-环丙基喹啉-6-基)-4-(甲磺酰基)哌嗪-2-羧酸甲酯37c
将化合物37b(122mg，0.18mmol)溶解于二氯甲烷(3mL)中，0℃下依次加入三乙胺(0.3mL，2.18mmol)和甲基磺酰氯(32mg，0.27mmol)，室温搅拌反应2小时。加入饱和碳酸氢钠水溶液(15mL)，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(20mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物37c(110mg，产率：95％)。MS m/z(ESI):635.3[M+1]。
第四步
(S)-2-((2-环丙基-6-(2-(羟甲基)-4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈37
将化合物37c(110mg，0.17mmol)溶解于无水四氢呋喃(5mL)中，室温下加入硼氢化锂(38mg，1.74mmol,润捷)，室温下搅拌反应3小时。加入冰水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物37(84mg，产率：81％)。
第五步
(R)-2-((2-环丙基-6-(2-(羟甲基)-4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈(单一构型化合物)37-1
(S)-2-((2-环丙基-6-(2-(羟甲基)-4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈(单一构型化合物)37-2
将化合物37(84mg)经超临界流体色谱手性拆分(分离条件：手性制备柱:DaicelCHIRALPAK ID；柱型号:250*25mm 10μm；进样量:2毫升；流动相:超临界二氧化碳:异丙醇＝60:40；流速:70克/分钟；波长:紫外254纳米；温度:25℃；仪器型号：Waters SFC 80)，收集其相应组分，减压浓缩，得到标题化合物37-1(8mg)和化合物37-2(34mg)。
实施例37-1：
MS m/z(ESI):607.3[M+1]。
手性HPLC分析：保留时间2.829分钟，手性纯度：99％
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.06(dd,2H),7.85(d,1H),7.67(dd,1H),7.63(s,1H),7.42(t,2H),6.89(d,1H),4.80(s,1H),4.50-3.90(m,3H),3.74(d,1H),3.63-3.52(m,3H),3.13-3.05(m,1H),2.99(dd,1H),2.93-2.89(m,4H),2.29-2.22(m,1H),1.28(t,3H),1.08-1.03(m,4H)。
实施例37-2：
MS m/z(ESI):607.3[M+1]。
手性HPLC分析：保留时间3.399分钟，手性纯度：99％
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.06(dd,2H),7.85(d,1H),7.67(dd,1H),7.63(s,1H),7.42(t,2H),6.89(d,1H),4.80(s,1H),4.50-3.90(m,3H),3.74(d,1H),3.65-3.52(m,3H),3.12-3.06(m,1H),2.99(dd,1H),2.94-2.84(m,4H),2.27(t,1H),1.28(t,3H),1.08-1.03(m,4H)。
实施例38
2-((6-(4-(2-(6,6-二氟-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)-2-乙基喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈38
Figure BDA0003009408220000801
第一步
6,6-二氟-2-氮杂螺[3.3]庚烷盐酸盐38b
将6,6-二氟-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯38a(50mg，0.21mmol，南京药石)加入到10mL 4M氯化氢的1,4二氧六环溶液中，搅拌反应2小时，减压浓缩，得到标题产物38b(28mg，产率：98.1％)。
MS m/z(ESI):134.1[M+1]。
第二步
2-氯-1-(6,6-二氟-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)乙酮38c
将化合物38b(28mg，0.17mmol)，三乙胺(51mg，0.5mmol)加入到10mL二氯甲烷中，控温0-5℃，滴加氯乙酰氯(23mg，0.20mmol)，滴毕，升至室温，搅拌反应2小时。加入水和二氯甲烷各20mL萃取，分出有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到标题产物38c(30mg，产率：86.7％)。
MS m/z(ESI):210.0[M+1]。
第三步
4-(4-氯-2-乙基喹啉-6-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯38e
将6-溴-4-氯-2-乙基喹啉38d(200mg，0.73mmol，毕得医药)，哌嗪-1-羧酸叔丁酯(135mg，0.72mmol)，叔丁醇钠(142mg，1.5mmol)，2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(70mg，0.15mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(68mg，0.074mmol)加入到10mL甲苯中，氩气保护，加热到110℃，搅拌反应3小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物38e(240mg，产率：86.3％)。
MS m/z(ESI):376.2[M+1]。
第四步
4-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基喹啉-6-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯38f
将化合物38e(80mg，0.21mmol)，化合物21c(50mg，0.21mmol)，叔丁醇钠(41mg，0.43mmol)，甲磺酸(2-二环己基膦-3,6-二甲氧基-2'，4'，6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2'-氨基-1,1'-联苯基-2-基)钯(II)(BrettPhos Pd G3)(20mg，0.02mmol)，加入到10mL甲苯中，氩气保护，加热到110℃，搅拌反应12小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物38f(60mg，产率：49.2％)。
MS m/z(ESI):573.3[M+1]。
第五步
2-((2-乙基-6-(哌嗪-1-基)喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈盐酸盐38g
将化合物38f(60mg，0.10mmol)加入到10mL 4M氯化氢的1,4二氧六环溶液中，搅拌反应3小时，减压浓缩，得到标题产物38g(49mg，产率：99.0％)。MS m/z(ESI):473.1[M+1]。
第六步
2-((6-(4-(2-(6,6-二氟-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)-2-乙基喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈38
将化合物38g(40mg，0.08mmol)，化合物38c(30mg，0.14mmol)，碳酸钾(35mg，0.25mmol)，加入到10mL乙腈中，80℃搅拌反应3小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物38(20mg，产率：36.6％)。
MS m/z(ESI):646.3[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.17-8.15(m,2H),8.04-8.02(d,1H),7.55-7.52(d,1H),7.32(s,1H),7.19-7.15(m,2H),6.88(s,1H),4.32-4.30(m,2H),4.11-4.09(m,2H),3.72(s,3H),3.31-3.27(m,4H),3.09-3.07(m,2H),3.01-2.99(m,2H),2.79-2.74(m,4H),2.69-2.68(m,4H),1.42-1.39(m,3H)。
实施例39
2-((6-(4-(2-(6-氨基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)-2-乙基喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈39
Figure BDA0003009408220000821
第一步
(2-(2-(4-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基喹啉-6-基)哌嗪-1-基)乙酰基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基甲酸叔丁酯39a
将化合物38g(30mg，0.06mmol)，化合物36j(20mg，0.07mmol)，碳酸钾(18mg，0.13mmol)，加入到10mL乙腈中，80℃搅拌反应3小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物39a(20mg，产率：43.5％)。
MS m/z(ESI):725.3[M+1]。
第二步
2-((6-(4-(2-(6-氨基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)-2-乙基喹啉-4-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-腈39
将化合物39a(620mg，0.28mmol)加入到10mL 4M氯化氢的1,4二氧六环溶液中，搅拌反应3小时，减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物39(5mg，产率：29.0％)。
MS m/z(ESI):625.1[M+1]。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.11-8.09(m,2H),7.98-7.95(d,1H),7.69-7.67(d,1H),7.58(s,1H),7.24-7.20(m,2H),6.95(s,1H),4.35-4.27(m,2H),4.06-3.97(m,2H),3.74(s,3H),3.72-3.70(m,1H),3.33-3.31(m,4H),3.11-3.09(m,2H),2.99-2.95(m,2H),2.76-2.62(m,6H),2.39-2.34(m,2H),1.40-1.36(m,3H)。
实施例40
(S)-2-(乙基(8-氟-6-(3-(羟甲基)-4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)-2-(2-羟基丙-2-基)喹啉-4-基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈40
Figure BDA0003009408220000831
Figure BDA0003009408220000841
第一步
6-溴-8-氟-2-甲基喹啉-4-酚40a
将化合物1a(30g，157.88mmol，安耐吉)，乙酰乙酸乙酯(41g，315.04mmol，毕得)以及多聚磷酸(300g)依次加入到反应瓶中，反应逐渐升温至130℃，搅拌过夜。冷却反应液，用冰水(1L)稀释，缓慢滴加饱和氢氧化钠溶液调节反应液pH约为8。悬浊液过滤，将所得滤饼分散在乙醚(1L)中，搅拌30分钟，过滤，滤饼干燥，得到标题化合物40a(22g，收率：54％)。
MS m/z(ESI):256.0[M+1]。
第二步
6-溴-4-氯-8-氟-2-甲基喹啉40b
将化合物40a(22g，85.91mmol)分散在三氯氧磷(300mL)中，反应体系逐渐升温至80℃，搅拌16小时。反应液减压浓缩除去大部分的三氯氧磷。向所得油状物中缓慢滴加饱和碳酸氢钠溶液调节反应液pH约为7，过滤，收集滤饼，真空干燥，得到标题产物40b(20g，产率：84％)。
MS m/z(ESI):274.1[M+1]。
第三步
6-溴-N-乙基-8-氟-2-甲基喹啉-4-胺40c
将化合物40b(6g，21.86mmol)，乙胺水溶液(120mL，65wt％)和无水乙醇(20mL)加入到闷罐反应器中，密封后加热至100℃搅拌16小时。冷却反应液，加入饱和碳酸氢钠溶液(120mL)，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物40c(2g，产率：32％)。
MS m/z(ESI):283.2[M+1]。
第四步
2-((6-溴-8-氟-2-甲基喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈40d
氩气保护下，将化合物40c(1g，3.53mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)，冰水浴下加入氢化钠(183mg，4.58mmol，纯度60％)，反应在室温护下搅拌30分钟。冰水浴下加入化合物1f(1.26g,5.3mmol)，反应液在室温下搅拌2小时。冰水浴下，将反应液加入到饱和的氯化铵溶液中，用乙酸乙酯萃取(80mL×2)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(150mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物40d(900mg，产率：43％)。
MS m/z(ESI):485.1[M+1]。
第五步
6-溴-4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟喹啉-2-羧酸40e
将化合物40d(400mg，0.83mmol)溶于吡啶(10mL)，室温下向反应液中加入二氧化硒(318mg，2.89mmol)，加毕，反应升温至90℃，搅拌6小时。冷却反应液，过滤，滤饼用二氯甲烷洗涤，合并滤液，减压浓缩，得到粗产物40e(450mg)。MS m/z(ESI):515.2[M+1]。
第六步
6-溴-4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟喹啉-2-羧酸甲酯40f
将化合物40e(粗品，450mg，0.87mmol)溶于甲醇(10mL)，冰水浴下滴加氯化亚砜(1mL)。滴毕，反应加热至89℃，搅拌3小时。减压浓缩，所得残余物用乙酸乙酯溶解，缓慢加入饱和碳酸钠溶液调节反应液pH至8左右。静置分层，有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物40f(200mg，产率：34％)。
MS m/z(ESI):528.8[M+1]。
第七步
(S)-6-(4-(叔丁氧基羰基)-3-(羟甲基)哌嗪-1-基)-4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟喹啉-2-羧酸甲酯40g
将化合物40f(500mg，0.94mmol)，(S)-2-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(296mg，1.37mmol，韶远)，三(二亚苄基丙酮)二钯(92mg，0.1mmol)，1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(118mg，0.19mmol)和碳酸铯(923mg，2.8mmol)溶于20mL甲苯中，氮气置换3次，反应在80℃下搅拌16小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物40g(337mg，产率：53.7％)。MS m/z(ESI):665.1[M+1]。
第八步
(S)-4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟-6-(3-(羟甲基)哌嗪-1-基)喹啉-2-羧酸甲酯40h
将化合物40g(337mg，0.51mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(5mL)，反应搅拌1小时。反应液减压浓缩，所得残留物用二氯甲烷(40mL)稀释，依次用饱和碳酸氢钠溶液(20ml×2)、水(20ml×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到标题产物40h(280mg，产率：97.9％)。
MS m/z(ESI):565.1[M+1]。
第九步
(S)-6-(3-(((叔丁基二苯基硅基)氧基)甲基)哌嗪-1-基)-4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟喹啉-2-羧酸甲酯40i
将化合物40h(280mg，0.50mmol)溶于四氢呋喃(40ml)中，加入钠氢(111mg，2.56mmol，纯度60％)，反应搅拌1小时，随后加入叔丁基二苯基氯硅烷(704mg，2.56mmol)，反应继续搅拌3小时。向反应液中加入饱和氯化铵溶液(40ml)，淬灭反应，随后用乙酸乙酯(80ml×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物40i(230mg，产率57.8％)。
MS m/z(ESI):803.3[M+1]。
第十步
(S)-6-(3-(((叔丁基二苯基硅基)氧基)甲基)-4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)-4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟喹啉-2-羧酸甲酯40j
将化合物40i(230mg，0.29mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，加入三乙胺(91mg，90mmol)，随后滴加甲磺酰氯(53mg，0.46mmol)，反应搅拌1小时。反应液用二氯甲烷(30mL)稀释，用水(20mL×2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物40j(200mg，产率79.2％)。
MS m/z(ESI):881.0[M+1]。
第十一步
(S)-2-((6-(3-(((叔丁基二苯基硅基)氧基)甲基)-4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)-8-氟-2-(2-羟基丙-2-基)喹啉-4-基)(乙基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈40k
将化合物40j(140mg，0.16mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，氮气置换，反应在-78℃下滴加甲基溴化镁的2-甲基四氢呋喃溶液(190mg，1.59mmol，3M，0.53mL)，反应升温至室温下搅拌16小时。反应液加水(20mL)淬灭，随后用乙酸乙酯(30ml×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物40k(32mg，产率22.8％)。MS m/z(ESI):880.7[M+1]。
第十二步
(S)-2-(乙基(8-氟-6-(3-(羟甲基)-4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)-2-(2-羟基丙-2-基)喹啉-4-基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈40
将化合物40k(32mg，0.04mmol)溶于四氢呋喃(5mL)中，滴加四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(25mg，0.11mmol，1M，0.11mL)，反应在室温下搅拌1小时。反应液用乙酸乙酯(30mL)稀释，用饱和氯化钠水溶液(20mL×2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物40(12mg，产率51.4％)。
MS m/z(ESI):643.0[M+1]。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.15-8.11(m,2H),7.55(s,1H),7.26-7.23(m,1H),7.19-7.15(m,2H),6.74-6.72(m,1H),5.03(s,1H),4.35-4.10(m,3H),4.01-3.97(m,1H),3.87-3.81(m,1H),3.80-3.78(m,2H),3.74-3.70(m,1H),3.60-3.58(m,1H),3.46-3.40(m,1H),3.15-3.12(m,1H),3.06-3.01(m,1H),2.99(s,3H),1.64(s,6H),1.38-1.35(m,3H)。
实施例41
N-(1-(4-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(乙基)氨基)-8-氟-2-(2-羟基-2-甲基丙基)喹啉-6-基)氮杂环丁烷-3-基)甲磺酰胺41
Figure BDA0003009408220000871
根据上述路线合成标题产物41。
生物学评价
以下结合测试例进一步描述解释本公开，但这些实施例并非意味着限制本公开的范围。
测试例1本公开化合物的酶学实验
ATX(自分泌运动因子)催化底物溶血磷脂酰胆碱(LPC)产生胆碱，胆碱被胆碱氧化酶氧化后生成甜菜碱和过氧化氢，过氧化物酶在过氧化氢存在的条件下，催化底物2-羟基-3-间甲苯胺丙磺酸钠(TOOS)和4-氨基安替比林反应显色，在555nm有吸收。测定的吸光值与第一步酶催化反应释放的胆碱量正相关，从而反映化合物对ATX酶活性的抑制作用。
1、实验目的
利用化合物能抑制ATX酶活性的特点，对化合物进行体外筛选。
2、实验方法
缓冲液A：50mM三羟甲基氨基甲烷-盐酸pH8.5(北京天恩泽生物，101207-250)、500mM氯化钠(国药集团，10019318)、5mM氯化钾(国药集团，10016318)、10mM氯化钙(国药集团，10005861)和0.1％牛血清白蛋白(Sigma，B2064)；
缓冲液B：50mM三羟甲基氨基甲烷-盐酸pH8.5、500mM氯化钠、5mM氯化钾、10mM氯化钙、0.1％牛血清白蛋白和20mM EGTA(乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸，Sigma，E3889)；
用二甲基亚砜(Sigma，D2650)配制化合物，初始浓度为500μM，7倍稀释，共8个剂量。用缓冲液A将ATX(R&D，5255-EN)配制成终浓度0.5ng/μL，将LPC 16:0(Sigma，855675P)配制成终浓度150μM。按每孔20μL ATX、1μl化合物及30μL LPC依次加入96孔板(Corning，3799)中，37℃孵育3小时。
用缓冲液B配制含有0.6U/ml胆碱氧化酶(Sigma，C5896)、0.6U/ml过氧化物酶(Sigma，P8375)、1.8mM TOOS(Sigma，04340)及1.2mM 4-氨基安替比林(Sigma，A4382)的检测液。将检测液以50μL/孔加到孵育3小时后的96孔板中，室温振荡15分钟后，用酶标仪(Molecular Devices，Flexstation 3)读取OD555nm的值。
3、测试结果
本公开中化合物对ATX酶活性的抑制作用的IC50值如下表3所示。
表3本公开中化合物对ATX酶活性的抑制作用的IC50
Figure BDA0003009408220000881
Figure BDA0003009408220000891
结论：本公开化合物对ATX酶活性有明显的抑制作用。
测试例2本公开化合物对TGF-β(转化生长因子β)诱导分泌IL-6的实验
1、实验目的
测试化合物对TGF-β(转化生长因子β)诱导人皮肤成纤维细胞分泌IL-6(白细胞介素6)的抑制作用。
2、实验方法
将原代人皮肤成纤维细胞(NHDF，PromoCell，C-12303)以8000细胞/孔铺于96孔板(Corning，3799)内，37℃，5％CO2培养箱(thermo scientific，STERI-CYCLEi160)中培养48小时。用细胞培养基Fibroblast Growth Medium2(PromoCell，C-23020)将重组人TGF-β(Cell Signaling Technology，8915LC)配置成10ng/ml。将待测化合物配制成初始浓度为100Μm，10倍稀释，共8个剂量。去除细胞板中的培养基，分别加入80μL新鲜培养基及10μL不同浓度的待测化合物溶液，放于37℃，5％CO2培养箱中孵育1.5小时。再加入10μl TGF-β溶液，置于37℃，5％CO2培养箱中继续培养。24小时后收集细胞上清，用ELISA(欣博盛生物，EHC007.96)检测上清中IL-6含量并计算其IC50值。
3、数据分析
本公开化合物对TGF-β(转化生长因子β)诱导人皮肤成纤维细胞分泌IL-6的IC50值如下表4所示。
表4.本公开化合物对TGF-β(转化生长因子β)诱导人皮肤成纤维细胞分泌IL-6的IC50值
实施例编号 IC<sub>50</sub>(nM) 最大抑制(％)
5 21.0 113.6
11 62.0 108.9
12 1.9 106
16 2.4 112.0
18 3.1 100.1
22 1.7 93.6
29 13.6 104.4
30 4.7 106.3
31 1.3 98.8
32 21.4 120.8
38 21.4 94.0
39 4.5 109.5
结论：本公开化合物对TGF-β(转化生长因子β)诱导产生IL-6有明显的抑制作用。
测试例3本公开化合物的Ex vivo人血浆实验
1、实验目的
测试化合物通过抑制ATX酶活性对健康人血浆中LPA 18:2水平的抑制作用。
2、实验方法
收集健康志愿者血液至肝素采血管(BD，367886)中，4℃，3000rpm离心15分钟，取上清。将血浆按99μL/孔分配至96孔板(Corning，3788)中。用二甲基亚砜(Sigma，D2650)将化合物配制成初始浓度为100Μm，10倍稀释，共7个剂量。取1μL分别加入血浆板中，37℃孵育2小时。用Xevo TQ-S三重四极杆串联质谱仪及ACQUITY UPLC超高效液相色谱系统(Waters)检测血浆中LPA 18:2含量。以LPA 17:0(Sigma，857127P)作为内标，基于LPA 18:2的峰面积评价相对量。
3、测试结果
本公开化合物对健康人血浆中LPA 18:2水平的抑制作用IC50值如下表5所示。
表5.本公开化合物对健康人血浆中LPA 18:2水平的抑制作用IC50值
Figure BDA0003009408220000911
Figure BDA0003009408220000921
结论：本公开化合物对健康人血浆中LPA 18:2水平有明显的抑制作用。

Claims (8)

1.一种化合物，或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，其选自以下任一化合物：
Figure FDA0003009408210000011
Figure FDA0003009408210000021
Figure FDA0003009408210000031
Figure FDA0003009408210000041
Figure FDA0003009408210000051
2.一种化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，其选自以下任一化合物：
Figure FDA0003009408210000061
Figure FDA0003009408210000071
3.一种药物组合物，其含有根据权利要求1所述的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
4.根据权利要求1所述的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐、或根据权利要求3所述的药物组合物在制备ATX抑制剂中的用途。
5.根据权利要求1所述的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐、或根据权利要求3所述的药物组合物在制备预防和/或治疗纤维变性疾病、癌症、增殖性疾病、炎症性疾病、自身免疫性疾病、呼吸系统疾病、心血管疾病、神经变性疾病、皮肤学疾病、代谢疾病、骨髓增生异常综合症、异常血管生成相关疾病和疼痛的药物中的用途。
6.根据权利要求1所述的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐、或根据权利要求3所述的药物组合物在制备预防和/或治疗具有ATX表达增加的病理学特征的疾病的药物中的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，其中所述具有ATX表达增加的病理学特征的疾病选自：纤维变性疾病、癌症、增殖性疾病、炎症性疾病、自身免疫性疾病、呼吸系统疾病、心血管疾病、神经变性疾病、皮肤学疾病、代谢疾病、骨髓增生异常综合症、异常血管生成相关疾病和疼痛；优选为纤维变性疾病和癌症。
8.根据权利要求5或7所述的用途，其中所述的纤维变性疾病选自肺纤维化、特发性肺纤维化、肝纤维化和硬皮病。
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