CN113484434B - 一种玫瑰多酚的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种玫瑰多酚的检测方法,所述检测方法包括选用高效液相色谱法和紫外检测器,以矢车菊素‑3‑O‑葡萄糖苷、槲皮素‑3‑O‑β‑D‑槐糖苷、山柰酚‑3‑O‑β‑D‑槐糖、鞣花酸、山奈酚‑3‑O‑(6″‑没食子酰基)‑β‑D‑葡萄糖苷等五种指标成分进行玫瑰多酚的特征谱分析;以鞣花酸、槲皮素、山奈酚等三种指标成分,采用样品酸水解处理法定量分析其中的玫瑰多酚总含量。本发明基于玫瑰花中的特征性指标成分,建立其专属性的定性和定量分析方法,具有操作使用简便、易于推广使用等显著优点,可应用于玫瑰花及其提取物等相关产品的质量分析和控制。
Description
技术领域
本发明涉及一种玫瑰多酚的检测方法,本发明同时涉及所述检测方法在玫瑰花属植物的花及其提取物质量控制方面的应用。
背景技术
玫瑰和月季是中国原产蔷薇科蔷薇属(Rosa)植物,在我国的栽培历史悠久,全国各地均有种植。在全球范围内,玫瑰花广泛作为观赏花卉,此外在国际上的工业用途主要是生产精油,保加利亚是目前世界上玫瑰油产量最高的国家。玫瑰花是我国是传统药食两用药材,花中富含氨基酸、蛋白质、多糖、淀粉、维生素等各种营养成分,在我国各地均有食用玫瑰鲜花(花瓣)食品、饮用花茶(花蕾)的习俗。中国药典2020版收载玫瑰花的药用部位为花蕾,性味甘温,具有行气解郁、和血、止痛功能,用于肝胃气痛,食少呕恶,月经不调;在新疆维药传统应用中,有玫瑰花糖膏、玫瑰花口服液、克孜力古丽油、玫瑰花露剂等多种单味药传统剂型产品,习用于肝郁津滞引起的肋闷腹胀、胃痛、心烦、健忘、便秘、食少及斯立(结核)等症。
现代化学成分研究表明,玫瑰花中的挥发油主要有香茅醇、香叶醇和芳樟醇等成分,以香茅醇为主。玫瑰花中的水溶性小分子成分主要是多酚类,包括黄酮醇苷类、花色苷类、可水解鞣质类等,组成十分复杂(Dongyu Gu,et al.A LC/QTOF–MS/MS application toinvestigate chemical compositions in a fraction with protein tyrosinephosphatase 1B inhibitory activity from Rosa Rugosa flowers.PhytochemistryAnalysis,2013,24,661–670)。在工业应用中,玫瑰多酚作为玫瑰精油生产过程中的废弃副产物,尚未得到资源综合利用。
为促进玫瑰多酚的资源充分利用,发明人对其药效物质基础进行了深入研究,发现其中的多酚类特征性成分主要包括矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-槐糖苷、山柰酚-3-O-β-D-槐糖、鞣花酸、山奈酚-3-O-(6”-没食子酰基)-β-D-葡萄糖苷等五种主成分(张健等,一种玫瑰多酚提取物及其制备方法和应用,专利申请号CN202110327662.X)。鉴于目前有关玫瑰花中多酚类成分的专属性定性定量分析方法少见,本项目通过对该玫瑰多酚成分的进一步定性定量分析和质量控制研究,从而完成了本发明。
发明内容
本发明的目的是提供一种玫瑰多酚的检测方法。
本发明提供的玫瑰多酚的检测方法由以下步骤组成:
(1)供试品溶液的制备:取玫瑰花或者玫瑰花提取物适量,精密称定,用含水甲醇提取,配制为供试品溶液,即得;
(2)对照品溶液的制备:取矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-槐糖苷、山柰酚-3-O-β-D-槐糖、鞣花酸、山奈酚-3-O-(6″-没食子酰基)-β-D-葡萄糖苷共五种对照品适量,精密称定,用含水甲醇配制为对照品混合溶液,即得;
(3)样品分析:采用高效液相色谱仪,紫外检测器检测波长360nm,碳十八改性硅胶色谱柱,乙腈—0.1%有机酸水为流动相进行洗脱梯度,流速1.0ml/min;分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20μL,注入液相色谱仪,测定,以对照品保留时间进行定性比较分析,即得。
所述检测方法步骤(1)中,所述玫瑰花为蔷薇属植物的花蕾或者花瓣,例如大马士革玫瑰、重瓣玫瑰、平阴玫瑰、苦水玫瑰、月季等植物的花蕾或者花瓣;所述玫瑰花提取物为上述玫瑰花原料经水汽蒸馏、含水醇类溶剂提取等方法加工获得,其提取方法为文献中公开的溶剂提取法。所述检测方法步骤(1)中,玫瑰花供试品溶液的优选制备方法为:取玫瑰花干花粉末约1g,精密称定,置于100ml具塞三角瓶中,精密加入50ml 80%甲醇,超声提取30min,提取液配制为供试品溶液。所述检测方法步骤(2)中,五种混合对照品为玫瑰多酚的主要特征性成分,不同的具体品种、产地、采收期和加工方法所得的玫瑰花样品中,一般均含有该五种成分的3种以上,可据此区分和鉴别不同产地的玫瑰花品种和加工产品。所述检测方法步骤(3)中,样品分析的色谱方法优选为:采用碳十八改性硅胶色谱柱(内径4.6mm×250mm),乙腈(B)—0.1%甲酸水(A)为流动相进行洗脱梯度,梯度条件为0~5min,5%B;5~20min,5%~20%B;20~30min,20%B;30~45min,20%~35%B;45~50min,35%~80%B。
本发明提供的玫瑰多酚的又一检测方法,由以下步骤组成:
(1)供试品溶液的制备:取玫瑰花或者玫瑰花提取物适量,精密称定,用含水甲醇提取,浓缩至干,用无机酸水解,水解液用乙酸乙酯萃取,萃取液浓缩,用甲醇配制为供试品溶液,即得;
(2)对照品溶液的制备:取鞣花酸、槲皮素、山奈酚共三种对照品适量,精密称定,用含水甲醇配制为对照品混合溶液,即得;
(3)样品分析:采用高效液相色谱仪,紫外检测器检测波长360nm,碳十八改性硅胶色谱柱,甲醇—0.1%有机酸水为流动相进行等度洗脱,流速1.0ml/min;分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20μL,注入液相色谱仪,测定,以对照品峰面积进行比较和定量计算分析,即得。
所述检测方法步骤(1)中,所述玫瑰花多酚经酸水解,获得相应的二种黄酮苷元和鞣花酸水解产物,从而可对玫瑰多酚的总含量进行定量比较分析。所述玫瑰花供试品溶液的优选制备方法为:取玫瑰花干花粉末约1.0g,精密称定,置于100ml具塞三角瓶中,精密加入50ml 80%甲醇,超声提取30min,精密量取提取液25ml,浓缩至干,分别用2~3ml石油醚洗涤两次,浓缩物再用25ml 5%盐酸溶解,沸水浴反应1.5h,放冷至室温,分别用25ml乙酸乙酯萃取两次,萃取液合并、浓缩,用50ml 80%甲醇配制为供试品溶液,即得。所述检测方法步骤(3)中,样品分析的色谱方法优选为:采用碳十八改性硅胶色谱柱(内径4.6mm×250mm),甲醇—0.1%甲酸水(57:43)为流动相进行等度洗脱。
本发明的又一目的是提供一种所述检测方法在蔷薇属植物的花及其提取物质量控制方面的应用。已有的公开文献,一般仅采用紫外法测定总酚含量,或者测定花色苷等单一成分含量,缺乏针对玫瑰多酚的专属性质量分析方法。本发明采用高效液相色谱法和紫外检测器,针对玫瑰花中的五种特征性主成分特征谱进行定性鉴别,可区分和鉴别不同产地的玫瑰花品种和加工产品;采用酸水解法定量分析玫瑰多酚的总含量,从而达到专属性的定性和定量分析效果,可满足相关原料和提取物产品及其组合物的质量控制要求。
本发明基于前期发现的玫瑰花五种特征性成分进行创新应用开发,新建立的方法具有操作使用简便、易于推广使用等显著优点,可应用于玫瑰花相关产品的质量分析和控制。以下述具体实施例进行说明。
附图说明
图1为实施例1中混合对照品1-5液相色谱图。图中色谱峰1-5依次为矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(1);槲皮素-3-O-β-D-槐糖苷(2);山柰酚-3-O-β-D-槐糖(3);鞣花酸(4);山奈酚-3-O-(6″-没食子酰基)-β-D-葡萄糖苷(5)。
图2为实施例1中玫瑰多酚S1样品的代表性HPLC谱图。图中色谱峰1-5含义同图1。
图3为实施例2中对照品4液相色谱图。图中色谱峰6为鞣花酸(4)。
图4为实施例2中混合对照品6-7液相色谱图。图中色谱峰7-8依次为槲皮素(6)、山柰酚(7)。
图5为实施例2中玫瑰多酚S1样品的代表性HPLC谱图。图中色谱峰6为鞣花酸(4),7-8含义同图4。
具体实施方式
本发明所述的玫瑰多酚的检测方法是按以下实施例所表示的方法进行,所涉及到的方法是本领域的技术人员能够掌握和运用的技术手段。但以下实施例不得理解为任何意义上的对本领域发明权利要求的限制。
实施例1:玫瑰多酚指标成分的HPLC特征谱分析
五种玫瑰花药材,分别购自新疆和田(S1,重瓣玫瑰花花瓣;批次MG20180901);山东(S2,山东平阴玫瑰花蕾;批次MG20180902);云南(S3,重瓣玫瑰花花瓣;批次MG20180903);安徽(S4,重瓣玫瑰花花瓣;批次MG20180904)和甘肃(S5,苦水玫瑰花瓣;批次MG20180905)。鞣花酸、山奈酚、槲皮素对照品,购自大连美仑生物技术有限公司,纯度≥98%;氯化矢车菊素-3-葡萄糖苷对照品,购自成都埃法生物科技有限公司,纯度≥98%。
(1)供试品溶液的制备:取五种产地玫瑰干花粉末(过30目筛)各约1g,精密称定,分别置于100ml具塞三角瓶中,各精密加入50ml 80%甲醇,称定并记录重量,超声提取30min(功率250W,频率40kHz),取出,放冷,称定重量。用80%甲醇补足减失的重量,摇匀,微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液作为供试品溶液。
(2)对照品溶液的制备:取矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(1);槲皮素-3-O-β-D-槐糖苷(2);山柰酚-3-O-β-D-槐糖(3);鞣花酸(4);山奈酚-3-O-(6”-没食子酰基)-β-D-葡萄糖苷(5),共五种对照品适量(约0.05~0.5mg/ml),精密称定,用含水甲醇配制为对照品混合溶液,即得。
(3)样品分析:采用Agilent 1260高效液相色谱仪,DAD检测器检测波长360nm;Cosmosil 5C18-PAQ色谱柱(内径4.6mm×250mm,5μm),乙腈(B)—0.1%甲酸水(A)为流动相进行洗脱梯度,梯度条件为0~5min,5%B;5~20min,5%~20%B;20~30min,20%B;30~45min,20%~35%B;45~50min,35%~80%B;柱温30℃;流速1ml/min;进样体积20μL。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20μL,注入液相色谱仪,测定,以对照品保留时间进行定性比较分析,即得。
(4)结果:代表性的混合对照品、新疆和田的玫瑰多酚S1样品色谱图分别见附图1、2。在该色谱条件下,各相邻色谱峰之间分离度良好。五种成分中,矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(1)和山奈酚-3-O-(6”-没食子酰基)-β-D-葡萄糖苷(5)在五种产地的药材中都有;槲皮素-3-O-β-D-槐糖苷(2)、山柰酚-3-O-β-D-槐糖(3)仅在云南药材中没有;鞣花酸(4)仅在山东药材中没有。
需要注意的是,矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(1)在所述360nm检测时灵敏度相对较低(参见附图2),可采用紫外多波长检测器、进一步在520nm处进行补充定性和定量检测分析(参见表1)。
检测结果表明,基于该五种指标成分的特征谱分析方法,可有效鉴定不同产地药材中玫瑰多酚类成分的异同。
实施例2:玫瑰多酚指标成分的HPLC含量分析
针对玫瑰多酚及五种指标成分的结构特征,本发明首次采用酸水解法,建立玫瑰多酚的总含量的定量分析方法。
(1)供试品溶液的制备:取五种产地玫瑰干花粉末(过30目筛)各约1g,精密称定,分别置于100ml具塞三角瓶中,各精密加入50ml 80%甲醇,称定并记录重量,超声提取30min(功率250W,频率40kHz),取出,放冷,称定并补足重量;精密量取提取液25ml,浓缩至干,分别用2~3ml石油醚洗涤两次,浓缩物再用25ml 5%盐酸溶解,沸水浴反应1.5h,放冷至室温,分别用25ml乙酸乙酯萃取两次,萃取液合并、浓缩,用50ml 80%甲醇配制为供试品溶液,即得。
(2)对照品溶液的制备:取鞣花酸(4)对照品,槲皮素(6)、山柰酚(7)对照品适量,精密称定,用80%甲醇配制为相应对照品溶液(约0.025~0.25mg/ml),即得。
(3)样品分析:采用Agilent 1260高效液相色谱仪,DAD检测器检测波长360nm;Cosmosil 5C18-PAQ色谱柱(内径4.6mm×250mm,5μm),甲醇-0.1%甲酸水溶液(57:43)等度洗脱20min;柱温30℃;流速1ml/min;进样体积20μL。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20μL,注入液相色谱仪,测定,以对照品峰面积进行比较和定量计算分析,即得。
(4)结果:代表性的鞣花酸(4)对照品,槲皮素(6)、山柰酚(7)混合对照品,新疆和田的玫瑰多酚S1样品色谱图分别见附图3、4、5。在该色谱条件下,各相邻色谱峰之间分离度良好。三种成分测定结果见表1。检测结果表明,基于该三种指标成分的定量分析方法,可有效测定不同产地药材中玫瑰多酚类成分的含量。
表1玫瑰花样品中玫瑰多酚含量测定结果(mg/g药材)
此外,以矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(1)为对照品,参考相关文献液相分析方法(吴飞,HPLC法测定杨梅中两种黄酮的含量研究,中国民族民间医药,2017,26(10):24-26),对玫瑰多酚中的花色苷类成分进行了定量分析,结果参见表1。
综上所述,本发明公开了一种玫瑰多酚的检测方法,所述检测方法包括选用高效液相色谱法,以矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-槐糖苷、山柰酚-3-O-β-D-槐糖、鞣花酸、山奈酚-3-O-(6″-没食子酰基)-β-D-葡萄糖苷等五种指标成分进行玫瑰多酚的特征谱分析;以鞣花酸、槲皮素、山奈酚等三种指标成分,采用样品酸水解处理法定量分析其中的玫瑰多酚总含量。本发明基于玫瑰花中的特征性指标成分,建立其专属性的定性和定量分析方法,具有操作使用简便、易于推广使用等显著优点,可应用于玫瑰花及其提取物等相关产品的质量分析和控制。
应说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制,尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的精神和范围,其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (5)
1.一种玫瑰多酚的检测方法,其特征在于,由以下步骤组成:
(1)供试品溶液的制备:取玫瑰花或者玫瑰花提取物适量,精密称定,用含水甲醇提取,配制为供试品溶液,即得;
(2)对照品溶液的制备:取矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-槐糖苷、山柰酚-3-O-β-D-槐糖、鞣花酸、山奈酚-3-O-(6〞没食子酰基)-β-D-葡萄糖苷共五种对照品适量,精密称定,用含水甲醇配制为对照品混合溶液,即得;
(3)样品分析:采用高效液相色谱仪,紫外检测器检测波长360 nm,内径4.6 mm × 250mm的碳十八改性硅胶色谱柱,B相乙腈—A相0.1%甲酸水为流动相进行洗脱梯度,梯度条件为0 ~ 5 min,5% B;5~20 min,5%~20% B;20 ~ 30 min,20% B;30~45 min,20%~35% B;45~50 min,35%~80% B;流速1.0 ml/min;分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20 μL,注入液相色谱仪,测定,以对照品保留时间进行定性比较分析,即得。
2.根据权利要求1的玫瑰多酚的检测方法,特征在于所属方法还包括由以下步骤组成:
(1)供试品溶液的制备:取玫瑰花或者玫瑰花提取物适量,精密称定,用含水甲醇提取,浓缩至干,用无机酸水解,水解液用乙酸乙酯萃取,萃取液浓缩,用甲醇配制为供试品溶液,即得;
(2)对照品溶液的制备:取鞣花酸、槲皮素、山奈酚共三种对照品适量,精密称定,用含水甲醇配制为对照品混合溶液,即得;
(3)样品分析:采用高效液相色谱仪,紫外检测器检测波长360 nm,碳十八改性硅胶色谱柱,甲醇—0.1%有机酸水为流动相进行等度洗脱,流速1.0 ml/min;分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20 μL,注入液相色谱仪,测定,以对照品峰面积进行比较和定量计算分析,即得。
3.根据权利要求1或2的玫瑰多酚的检测方法,特征在于所述检测方法步骤(1)中玫瑰花为花蕾或者花瓣。
4.根据权利要求1的玫瑰多酚的检测方法,在玫瑰花及其组合物中质量控制方面的应用。
5.根据权利要求1的玫瑰多酚的检测方法,在玫瑰花提取物及其组合提取物中质量控制方面的应用。
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GR01 | Patent grant | ||
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