CN113475629A - 蛔甙在制备提高S.carpocapsae All线虫产量制剂中的应用 - Google Patents

蛔甙在制备提高S.carpocapsae All线虫产量制剂中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113475629A
CN113475629A CN202110926292.1A CN202110926292A CN113475629A CN 113475629 A CN113475629 A CN 113475629A CN 202110926292 A CN202110926292 A CN 202110926292A CN 113475629 A CN113475629 A CN 113475629A
Authority
CN
China
Prior art keywords
ascr
nematodes
ascaroside
preparation
yield
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202110926292.1A
Other languages
English (en)
Inventor
曹莉
王杰
屈玲
孔祥鑫
戴康
徐成体
李玉玲
金永玲
韩日畴
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Zoology of Guangdong Academy of Sciences
Original Assignee
Institute of Zoology of Guangdong Academy of Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Zoology of Guangdong Academy of Sciences filed Critical Institute of Zoology of Guangdong Academy of Sciences
Priority to CN202110926292.1A priority Critical patent/CN113475629A/zh
Publication of CN113475629A publication Critical patent/CN113475629A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/116—Heterocyclic compounds
    • A23K20/121—Heterocyclic compounds containing oxygen or sulfur as hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New breeds of animals
    • A01K67/033—Rearing or breeding invertebrates; New breeds of invertebrates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals

Abstract

本发明公开了蛔甙在制备提高Steinernema carpocapsae All感染期线虫产量制剂中的应用。本发明发现，相比于作为对照的无菌PBS，蛔甙能够显著地提高S.carpocapsae All感染期线虫产量。因此，在线虫大量培养过程中，可以使用蛔甙大幅提升S.carpocapsae All感染期线虫产量，为商品化生产具有成本优势的S.carpocapsae All线虫提供核心技术。

Description

蛔甙在制备提高S.carpocapsae All线虫产量制剂中的应用
技术领域：
本发明属于生物农药研发领域，具体涉及蛔甙在制备提高S.carpocapsae All线虫产量制剂中的应用。
背景技术：
昆虫病原斯氏线虫属Steinernema和异小杆线虫属Heterorhabditis线虫是具有巨大应用潜力的天敌类杀虫制剂，已广泛用于防治农林、牧草、花卉和卫生等领域的害虫。这类线虫以3龄感染期虫态主动搜索寄主昆虫，对非靶标生物和环境安全，可规模化生产。昆虫病原线虫以感染期虫态随寄主食物或从昆虫的自然开口(如肛门、气门)、节间膜进入昆虫体内，随后释放肠腔中携带的Xenorhabdus属(与斯氏线虫Steinernema共生)或Photorhabdus属(与异小杆线虫Heterorhabditis共生)共生细菌。线虫以及共生细菌分泌的毒素(毒性因子)导致昆虫死亡，然后线虫利用共生细菌转化寄主体内的营养物质繁殖后代。
昆虫病原线虫培养方法主要有活体培养(In vivo)和离体培养(In vitro)。活体培养技术是利用敏感且容易饲养的昆虫寄主来培养昆虫病原线虫，目前主要使用的是大蜡螟幼虫Galleria mellonella。离体培养主要包括固体培养和液体培养。固体培养是在含有海绵填充剂的培养基中加入单一共生细菌和无菌线虫构建的；这一培养方法适应性广，设备和培养基成本低廉，但耗费人工，适用于人力成本不高的商业模式。液体培养主要是应用发酵罐系统进行，可大批量获得昆虫病原线虫；这一培养系统设备、培养基成本和自动化程度高，适用于人力成本较高的商业模式。不论是使用固体还是液体培养方法，昆虫病原线虫商业化培养的技术关键是如何获得高产量的线虫和降低线虫成本。
线形动物普遍存在的蛔甙类Ascarosides信息物质在调节线虫的聚集、趋避、交配、多尔态(Dauer)形成及扩散传播等行为中发挥了重要作用。本发明发现，蛔甙可提高S.carpocapsae All线虫的产量。
发明内容：
本发明的第一个目的是提供蛔甙在提高S.carpocapsae All线虫产量中的应用。
本发明通过实验发现，蛔甙能提高昆虫病原S.carpocapsae All线虫的产量。
因此，本发明提供蛔甙在制备提高昆虫病原S.carpocapsae All线虫产量制剂中的应用(即蛔甙在提高S.carpocapsae All线虫产量中的应用)，所述的蛔甙，其结构式如式1任一所示：
Figure BDA0003209400790000021
Figure BDA0003209400790000031
本发明的第二个目的是提供一种提高S.carpocapsae All线虫产量的方法，是将蛔甙添加到加入相应共生细菌的S.carpocapsae All线虫培养基中，促进线虫繁殖从而获得更高的线虫产量；
所述的蛔甙，其结构式如式1中任一所示。
优选，所述的蛔甙为ascr#1、ascr#2、ascr#3、ascr#5、ascr#6、ascr#8、ascr#9、ascr#10、ascr#11、ascr#12，其在培养基中的浓度是0.02nM-0.02μM。
进一步优选，所述的蛔甙为ascr#3、ascr#5、ascr#7、ascr#10或ascr#11时，其在培养基中的浓度是0.02nM。
本发明发现，相比于无菌PBS对照组，蛔甙能够显著地提高S.carpocapsae All感染期线虫产量。因此，可以将蛔甙用于培养系统中提高S.carpocapsae All感染期线虫产量，为商品化生产具有成本优势的S.carpocapsae All线虫提供核心技术。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：
一、实验材料
1、蛔甙：包括11种人工合成蛔甙，代号分别为ascr#1、ascr#2、ascr#3、ascr#5、ascr#6、ascr#7、ascr#8、ascr#9、ascr#10、ascr#11、ascr#12，其结构式分列如下：
Figure BDA0003209400790000041
Figure BDA0003209400790000051
分别将11种蛔甙以无菌PBS溶解至0.5μM、0.5nM、0.5pM，然后再稀释至一定的浓度，以一定的量加入线虫培养基中，使培养基中的浓度分别为0.02μM、0.02nM、0.02pM。
二、实验方法：
1、共生菌单菌培养的S.carpocapsae All：将常规固体培养基培养的S.carpocapsae All线虫经清洗后，用无菌PBS缓冲液清洗三次后，以无菌PBS配制成10μl含50感染期线虫的浓度(5000IJs/mL)，装入250ml三角瓶中(装50ml线虫悬液)，置于9-13℃备用。
2、Xenorhabdus nematophila All共生菌液的培养：以LB培养基(121℃灭菌30min)于25℃，120rpm摇床中培养S.carpocapsae All线虫的共生细菌(X.nematophilaAll)至菌液浓度OD600值为0.2。以3％的过氧化氢测定共生细菌培养液是否被污染(在超净工作台下，取1ml培养液加入到无菌培养皿中，于培养皿中滴加0.2ml 3％的过氧化氢，约3min后，培养液如果未出现气泡，则表示培养液未发现明显污染；同时划LB平板鉴定培养基是否出现杂菌污染)。
3、线虫培养基制备：于无菌48孔板中，每个孔中加入0.3ml高压灭菌的强化营养肉汤培养基(LA：1.6％营养肉汤，1％玉米油和1.2％琼脂，其余为纯净水)，冷却后使用。
4、共生细菌接种：于加入LA培养基的培养板中每孔加入20μL已培养好且无污染的共生菌溶液，于28℃条件下培养3天。
5、感染期线虫接种和蛔甙加入：于LA培养基且添加共生菌的情况下，以10μl的量加入约50条感染期线虫到孔中。再分别加入10μl不同浓度的蛔甙(均匀喷洒在整个孔中)，使培养基中的浓度分别为0.02μM、0.02nM、0.02pM。以加入等体积无菌PBS为对照。每个处理设置4个孔的重复。
6、线虫产量计数：将平板以封口膜封口后，放置25℃下黑暗培养。15d后，于平板中分批加入5ml无菌PBS，清洗其中的线虫到新的无菌平板中(直径＝9cm)，转移到15ml的离心管中进行定容和取样，混匀后取样计数感染期线虫数量和其它龄期线虫(如母虫、非感染期线虫)数量。
结果如表1所示：
表1：蛔甙对S.carpocapsae All感染期线虫产量(条数/孔)的影响(15天)
Figure BDA0003209400790000061
Figure BDA0003209400790000071
注：表中数据经过方差分析(Turkey)后可知：0.02μM:F＝75.837,df＝11,24,p＝0.000；0.02nM:F＝70.153,df＝11,24,p＝0.000；0.02pM:F＝102.683,df＝11,24,p＝0.000。表中大写字母表示同一处理下不同浓度之间的显著性差异；小写字母表示同一浓度下不同处理之间的显著性差异。
从表1可以看出，与无菌PBS对照组相比，11种蛔甙都显著提升了S.carpocapsaeAll线虫的产量。线虫产量因不同的蛔甙以及不同的浓度而异，例如最高产量是浓度为0.02nM的ascr#5、ascr#7和ascr#11获得。

Claims (4)

1.蛔甙在制备提高Steinernama carpocapsae All线虫产量制剂中的应用，所述的蛔甙，其结构式如式1中任一所示：
Figure FDA0003209400780000011
Figure FDA0003209400780000021
2.一种提高S.carpocapsae All线虫产量的方法，其特征在于，将蛔甙添加到加入相应共生细菌的S.carpocapsae All线虫培养基中，线虫繁殖后获得更高的感染期线虫产量；
所述的蛔甙，其结构式如式1中任一所示；
Figure FDA0003209400780000022
Figure FDA0003209400780000031
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的蛔甙为ascr#1、ascr#2、ascr#3、ascr#5、ascr#6、ascr#8、ascr#9、ascr#10、ascr#11或ascr#12时，其在培养基中的浓度是0.02nM-0.02μM。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的蛔甙为ascr#3、ascr#5、ascr#7、ascr#10或ascr#11时，其在培养基中的浓度是0.02nM。
CN202110926292.1A 2021-08-12 2021-08-12 蛔甙在制备提高S.carpocapsae All线虫产量制剂中的应用 Pending CN113475629A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110926292.1A CN113475629A (zh) 2021-08-12 2021-08-12 蛔甙在制备提高S.carpocapsae All线虫产量制剂中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110926292.1A CN113475629A (zh) 2021-08-12 2021-08-12 蛔甙在制备提高S.carpocapsae All线虫产量制剂中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113475629A true CN113475629A (zh) 2021-10-08

Family

ID=77945213

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110926292.1A Pending CN113475629A (zh) 2021-08-12 2021-08-12 蛔甙在制备提高S.carpocapsae All线虫产量制剂中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113475629A (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109843309A (zh) * 2016-08-25 2019-06-04 加利福尼亚技术学院 自身免疫性和炎性疾病的蛔甙治疗

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109843309A (zh) * 2016-08-25 2019-06-04 加利福尼亚技术学院 自身免疫性和炎性疾病的蛔甙治疗

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Drews The roots of microbiology and the influence of Ferdinand Cohn on microbiology of the 19th century
Inman et al. Mass production of the beneficial nematode Heterorhabditis bacteriophora and its bacterial symbiont Photorhabdus luminescens
CN109423463A (zh) 防治根结线虫病的假单胞菌菌株Jdn1及其菌剂
CN1115408C (zh) 一种昆虫病原线虫的液体培养方法
Muskat et al. Fermentation of the psyllid-pathogenic fungus Pandora sp. nov. inedit.(Entomophthorales: Entomophthoraceae)
CN113475629A (zh) 蛔甙在制备提高S.carpocapsae All线虫产量制剂中的应用
Kerwin Oomycetes: lagenidium giganteum
CN113826585B (zh) 蛔甙在制备H.bacteriophora H06线虫产量制剂中的应用
CN113796463B (zh) 二甲基亚砜在制备提高昆虫病原线虫产量制剂中的应用
CN103141425A (zh) 无菌斑马鱼的生产方法
RU2168893C1 (ru) Способ получения биомассы энтомопатогенных нематод
US2230130A (en) Method of obtaining microbian enzymes
CN113796460B (zh) 蛔甙在制备促进H.indica LN2感染期线虫恢复发育制剂中的应用
Mustafayeva BRIEF HISTORICAL SUMMARY OF THE CAUSANT OF LISTERIOSIS AND ITS PROPERTIES
O'Campo et al. Photorhabdus luminescens Phase II cells growth kinetic study using a 2L A plus sartorius stedim biostat® fermentation system
CN1876807A (zh) 一种抗蝗虫的苏云金芽孢杆菌及Bt杀蝗剂的制备方法
RU2748023C1 (ru) Способ получения массовой культуры симбиотических бактерий Xenorhabdus энтомопатогенных нематод Rhabditida: Steinernematidae
CN113575770A (zh) 蛔甙在制备促进S.carpocapsae All感染期线虫恢复发育制剂中的应用
Hamid et al. Potential of endophytic bacteria from corn as biopesticide: A biological control of insect pests
CN114009451B (zh) 深海放线菌11791在制备防治农牧业鳞翅目害虫药物中的应用
WO2001091559A2 (en) Bacillus thuringiensis as insect repellent
Twort et al. An Investigagtion on Influenza
KR20120067717A (ko) 곤충병원성 선충 랍디티스 블루미의 배양 방법
Kumar et al. Growth rate in media and pathogenicity of two species of entomopathogens found in Fiji
Vlak Professor Shang yin Gao (1909–1989): His legacy in insect cell culture and insect virology

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination